IT202100011006A1 - Nuovo ceppo isolato di lactobacillus e suoi impieghi - Google Patents
Nuovo ceppo isolato di lactobacillus e suoi impieghi Download PDFInfo
- Publication number
- IT202100011006A1 IT202100011006A1 IT102021000011006A IT202100011006A IT202100011006A1 IT 202100011006 A1 IT202100011006 A1 IT 202100011006A1 IT 102021000011006 A IT102021000011006 A IT 102021000011006A IT 202100011006 A IT202100011006 A IT 202100011006A IT 202100011006 A1 IT202100011006 A1 IT 202100011006A1
- Authority
- IT
- Italy
- Prior art keywords
- skin
- nucleotide sequence
- whey
- sequence seq
- protein
- Prior art date
Links
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 title description 10
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 title description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 56
- 239000005862 Whey Substances 0.000 claims description 50
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 claims description 50
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 claims description 50
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 37
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 claims description 29
- 239000012223 aqueous fraction Substances 0.000 claims description 27
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 25
- 241000186673 Lactobacillus delbrueckii Species 0.000 claims description 23
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 19
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 17
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 claims description 16
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims description 16
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 claims description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 13
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 13
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 11
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 10
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 8
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 8
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 8
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 claims description 8
- 235000021255 galacto-oligosaccharides Nutrition 0.000 claims description 7
- 150000003271 galactooligosaccharides Chemical class 0.000 claims description 7
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 7
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 claims description 7
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 claims description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 4
- 102000002798 Phenylalanine-tRNA Ligase Human genes 0.000 claims description 4
- 108010004478 Phenylalanine-tRNA Ligase Proteins 0.000 claims description 4
- 101150096566 clpX gene Proteins 0.000 claims description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000008030 elimination Effects 0.000 claims description 4
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 claims description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 4
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 claims description 3
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 claims description 3
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 claims description 3
- 206010000496 acne Diseases 0.000 claims description 3
- 230000032683 aging Effects 0.000 claims description 3
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 claims description 3
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 3
- 230000037380 skin damage Effects 0.000 claims description 3
- HTCSFFGLRQDZDE-SECBINFHSA-N (2r)-2-azaniumyl-2-phenylpropanoate Chemical compound OC(=O)[C@@](N)(C)C1=CC=CC=C1 HTCSFFGLRQDZDE-SECBINFHSA-N 0.000 claims description 2
- 102000007566 ATP-Dependent Proteases Human genes 0.000 claims description 2
- 108010071550 ATP-Dependent Proteases Proteins 0.000 claims description 2
- 108010018956 CTP synthetase Proteins 0.000 claims description 2
- 102000006303 Chaperonin 60 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010058432 Chaperonin 60 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 claims description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 2
- 102000001218 Rec A Recombinases Human genes 0.000 claims description 2
- 108010055016 Rec A Recombinases Proteins 0.000 claims description 2
- 108700043532 RpoB Proteins 0.000 claims description 2
- 108030002870 UDP-N-acetylmuramoyl-L-alanyl-D-glutamate-L-lysine ligases Proteins 0.000 claims description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 2
- 101710113306 Chromosomal replication initiator protein DnaA Proteins 0.000 claims 1
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 claims 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 23
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 17
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 16
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 15
- 208000019585 progressive encephalomyelitis with rigidity and myoclonus Diseases 0.000 description 15
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 8
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 8
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 8
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 7
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 7
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 7
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 7
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 7
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 7
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 7
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 6
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 6
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 description 6
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 230000037307 sensitive skin Effects 0.000 description 6
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 6
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 6
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 6
- 206010006784 Burning sensation Diseases 0.000 description 5
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 5
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 5
- 102000013127 Vimentin Human genes 0.000 description 5
- 108010065472 Vimentin Proteins 0.000 description 5
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 4
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 4
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 4
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 4
- 210000005048 vimentin Anatomy 0.000 description 4
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 4
- 102100021921 ATP synthase subunit a Human genes 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000753741 Homo sapiens ATP synthase subunit a Proteins 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000037365 barrier function of the epidermis Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 108010067454 caseinomacropeptide Proteins 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 3
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 3
- 230000006540 mitochondrial respiration Effects 0.000 description 3
- 239000011505 plaster Substances 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 3
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150071146 COX2 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150086475 COXII gene Proteins 0.000 description 2
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 2
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 2
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 102100027456 Cytochrome c oxidase subunit 2 Human genes 0.000 description 2
- 102000009561 Forkhead Box Protein O1 Human genes 0.000 description 2
- 108010009306 Forkhead Box Protein O1 Proteins 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150021539 MT-CO2 gene Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 2
- 108020005196 Mitochondrial DNA Proteins 0.000 description 2
- 108010058682 Mitochondrial Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000006404 Mitochondrial Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 2
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 230000009087 cell motility Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 2
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 2
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 2
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 2
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000008591 skin barrier function Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- CZPRKINNVBONSF-UHFFFAOYSA-M zinc;dioxido(oxo)phosphanium Chemical compound [Zn+2].[O-][P+]([O-])=O CZPRKINNVBONSF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108700003860 Bacterial Genes Proteins 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108090000746 Chymosin Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102100023970 Keratin, type I cytoskeletal 10 Human genes 0.000 description 1
- 102100022905 Keratin, type II cytoskeletal 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010070514 Keratin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010065038 Keratin-10 Proteins 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 101710195674 Replication initiator protein Proteins 0.000 description 1
- 206010040880 Skin irritation Diseases 0.000 description 1
- 206010040914 Skin reaction Diseases 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000037429 base substitution Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 229940021722 caseins Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- -1 compound sodium dodecyl sulfate Chemical class 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 1
- 235000013870 dimethyl polysiloxane Nutrition 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 230000009786 epithelial differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000007705 epithelial mesenchymal transition Effects 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 210000000245 forearm Anatomy 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000011617 hard cheese Nutrition 0.000 description 1
- 230000000774 hypoallergenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003295 industrial effluent Substances 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 108090000237 interleukin-24 Proteins 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 102000007236 involucrin Human genes 0.000 description 1
- 108010033564 involucrin Proteins 0.000 description 1
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 1
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 1
- 208000001875 irritant dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 1
- 108010087599 lactate dehydrogenase 1 Proteins 0.000 description 1
- 238000002843 lactate dehydrogenase assay Methods 0.000 description 1
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 238000012543 microbiological analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004898 mitochondrial function Effects 0.000 description 1
- 238000011392 neighbor-joining method Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021140 nondigestible carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- CXQXSVUQTKDNFP-UHFFFAOYSA-N octamethyltrisiloxane Chemical compound C[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)C CXQXSVUQTKDNFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000010627 oxidative phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000035824 paresthesia Diseases 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000004987 plasma desorption mass spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000003236 psychic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 239000012521 purified sample Substances 0.000 description 1
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940108461 rennet Drugs 0.000 description 1
- 108010058314 rennet Proteins 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 150000004671 saturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036556 skin irritation Effects 0.000 description 1
- 231100000475 skin irritation Toxicity 0.000 description 1
- 230000035483 skin reaction Effects 0.000 description 1
- 231100000430 skin reaction Toxicity 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002470 solid-phase micro-extraction Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical class [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 1
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
- 210000000216 zygoma Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/20—Milk; Whey; Colostrum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/98—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin
- A61K8/981—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin of mammals or bird
- A61K8/986—Milk; Derivatives thereof, e.g. butter
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
- A61K2800/85—Products or compounds obtained by fermentation, e.g. yoghurt, beer, wine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Birds (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Descrizione dell?invenzione industriale dal titolo: ?Nuovo ceppo isolato di Lactobacillus e suoi impieghi?
DESCRIZIONE
La presente invenzione ? relativa ad un nuovo ceppo di Lactobacillus delbrueckii e al suo impiego nella preparazione di una composizione dermatologica.
Quale mediatore tra l'organismo e il mondo esterno, la cute rappresenta un?eccellente barriera protettiva nei confronti di sostanze dannose diverse, prevenendo al contempo la perdita non controllata di acqua e soluti.
La cute ? normalmente popolata da milioni di microrganismi tra i quali, ad esempio, batteri, funghi e virus, che ne costituiscono il microbiota. Come accade nell?intestino, questi microrganismi simbiotici occupano diverse nicchie ed esplicano un?azione benefica di contrasto all?invasione di molte specie patogene. Inoltre, il microbiota cutaneo svolge anche un ruolo importante nell?educare il sistema immunitario, in particolare le cellule T che si ritrovano sulla pelle, inducendone la risposta contro l?invasione degli organismi patogeni.
In condizioni di rottura della barriera cutanea, o in presenza di uno squilibrio tra microrganismi commensali e microrganismi patogeni, si assiste all?insorgenza di patologie della pelle e, in alcuni casi, addirittura alla comparsa di patologie sistemiche.
In tale contesto si pone pertanto la necessit? di mettere a disposizione trattamenti dermatologici che siano efficaci nel preservare l?integrit? e la funzionalit? della barriera epidermica consentendone in tal modo un impiego efficace, sicuro e semplice nel campo clinico e/o cosmetologico.
Queste ed altre necessit? sono soddisfatte dalla presente invenzione che mette a disposizione un nuovo ceppo isolato di Lactobacillus delbruekii, un procedimento per la preparazione di una composizione dermatologica che fa impiego di detto lattobacillo, e la composizione ottenibile mediante detto procedimento, come definiti nelle annesse rivendicazioni indipendenti.
Ulteriori caratteristiche e vantaggi dell?invenzione sono identificati nelle annesse rivendicazioni dipendenti e illustrati in dettaglio nella descrizione che segue.
Le annesse rivendicazioni indipendenti e dipendenti formano parte integrante della presente descrizione.
Come verr? illustrato pi? in dettaglio nella parte sperimentale che segue, i presenti inventori hanno isolato per la prima volta un nuovo ceppo batterico autoctono della Valle d?Aosta, qui designato come MF-20/7A/24, e ne hanno definito l?appartenenza alla specie Lactobacillus delbrueckii mediante amplificazione e sequenziamento di una porzione della regione genomica codificante per l?RNA ribosomiale batterico 16S (16SrDNA).
Inoltre, l?analisi filogenetica basata sul sequenziamento di ulteriori otto geni batterici come illustrata nella Figura 1 ha rivelato l?unicit? dell?aplotipo II corrispondente all?isolato MF-20/7A/24 rispetto ad altri lattobacilli autoctoni valdostani (aplotipo I) e lattobacilli commerciali (aplotipo III) nonch? la sua vicinanza filogenetica alla sottospecie indicus di Lactobacillus dulbreckei.
Forma quindi oggetto della presente invenzione un ceppo isolato di Lactobacillus delbruekii, caratterizzato dal comprendere una sequenza genomica di acido nucleico codificante l?RNA ribosomiale 16S comprendente la sequenza nucleotidica SEQ ID NO. 1.
Preferibilmente, il ceppo isolato di Lactobacillus delbruekii oggetto dell?invenzione comprende inoltre una sequenza genomica di acido nucleico scelta dal gruppo che consiste di sequenza codificante la subunit? legante l'ATP ClpX della proteasi ATP-dipendente Clp (ClpX) comprendente la sequenza nucleotidica SEQ ID NO. 2, sequenza codificante la proteina DnaA iniziatrice della replicazione cromosomica comprendente la sequenza nucleotidica SEQ ID NO. 3, sequenza codificante la proteina GroEL comprendente la sequenza nucleotidica SEQ ID NO. 4, sequenza codificante la proteina UDP-N-acetilmuramoil-L-alanil-D-glutammato-L-lisina ligasi (MurE) comprendente la sequenza nucleotidica SEQ ID NO. 5, sequenza codificante la subunit? alfa della fenilalanina-tRNA ligasi (PheS) comprendente la sequenza nucleotidica SEQ ID NO. 6, sequenza codificante la CTP sintetasi (PyrG) comprendente la sequenza nucleotidica SEQ ID NO. 7, sequenza codificante la proteina ricombinasi RecA comprendente la sequenza nucleotidica SEQ ID NO. 8, sequenza codificante la subunit? beta della RNA polimerasi DNA-dipendente (RpoB) comprendente la sequenza nucleotidica SEQ ID NO. 9, e qualsiasi loro combinazione.
Ai sensi del Trattato di Budapest sul riconoscimento internazionale del deposito dei microrganismi ai fini della procedura in materia di brevetti, il nuovo ceppo di Lactobacillus delbruekii isolato dai presenti inventori ? stato depositato in data 12 Marzo 2020 presso l?ente di deposito internazionale Belgian Coordinated Collections of Microorganisms (BCCM) Laboratorium voor Microbiologie ?
con numero di registrazione LMG P-31789.
Caratteristiche microbiologiche e fisiologiche del ceppo isolato di Lactobacillus delbrueckii che forma oggetto della presente invenzione sono illustrate nella Tabella 1 che segue.
Tabella 1
Le metodiche di analisi microbiologica sono consolidate e la selezione delle tecniche pi? adeguate ad essere impiegate nell?ambito della presente invenzione rientra ampiamente nelle capacit? del tecnico medio del settore.
Sorprendentemente i presenti inventori hanno trovato che l?impiego del suddetto ceppo di lattobacillo in un procedimento di lavorazione del siero caseario, in particolare del siero dolce, consente di ottenere una composizione dermatologica dotata di benefiche attivit? sulla pelle, capace di esplicare un?azione di ripristino e mantenimento della barriera epidermica nonch? di accelerazione dei processi di riparazione a livello cutaneo.
Pertanto, rientra altres? nell?ambito dell?invenzione un procedimento per la preparazione di una composizione dermatologica per applicazione topica sulla pelle, impiegante siero dolce di caseificazione come materiale di partenza, il procedimento comprendendo le fasi di:
(i) eliminare la componente lipidica e la componente proteica dal suddetto siero, ottenendo in tal modo una frazione acquosa del siero dolce di caseificazione; e
(ii) sottoporre detta frazione acquosa a fermentazione mediante impiego del ceppo isolato di Lactobacillus delbruekii come precedentemente definito,
ottenendo cos? la composizione dermatologica per applicazione topica sulla pelle.
Con l?espressione ?siero dolce di caseificazione?, come qui utilizzata, si intende un sottoprodotto liquido della produzione di formaggi a pasta molle, semidura o dura, che risulta dalla coagulazione enzimatica della caseina e presenta un valore di pH compreso tra 6 e 7.
Tipicamente, il siero dolce di caseificazione presenta una colorazione giallastra ed ? composto dal 93-94% d?acqua, con una sostanza secca pari a circa il 6-7% i cui costituenti sono sostanzialmente: lattosio (70%), proteine (10%), sali minerali (15% tra cui NaCl, KCl e principalmente fosfati di calcio) e altri costituenti come lattato e citrato, grassi, composti azotati (urea e acido urico) e vitamine del gruppo B.
Composti bioattivi comunemente presenti nel siero dolce di caseificazione sono i galattooligosaccaridi (GOS), carboidrati non digeribili costituiti da unit? di galattosio, noti per la loro propriet? di favorire la crescita della flora microbica, in particolare quella intestinale, ( Compr. Rev. Food Sci. Food Saf. 2010, 9, 438?454; The Microbes 2013. Vol: 5, ISSN: 2321-3728 (Online)) nonch? l?acido butirrico. Questo acido grasso rappresenta un?importante fonte energetica per i sistemi cellulari eucarioti, ? un noto modulatore dei recettori trans-membrana e alla sua supplementazione consegue un miglioramento della funzione mitocondriale (
Diabetes. 2017, 66: 1405-1418; McNabney S.M. and Henagan T.M., Nutrients, 2017; 9(12):1348).
Come ? noto nella tecnica, nel corso della produzione del formaggio l?espulsione del siero (sineresi) dalla cagliata avviene a 36?C, in seguito alla coagulazione enzimatica e precipitazione delle caseine, indotta dall?aggiunta di caglio di vitello, contenente l?enzima chimosina. Tale enzima ? in grado di idrolizzare l?estremit? carica negativamente della k-caseina, a livello del legame peptidico tra l?amminoacido fenilalanina in posizione 105 e l?aminoacido metionina in posizione 106, portando alla formazione della para-k-caseina e al rilascio nel siero del glicomacropeptide (GMP) o caseinomacropeptide (CMP). La k-caseina idrolizzata, situata sulla superficie delle micelle, ne induce l?aggregazione attraverso l?interazione con i minerali liberi presenti nel latte.
In una forma di attuazione del procedimento secondo l?invenzione, l?eliminazione della componente lipidica del siero dolce di caseificazione usato come materiale di partenza ? effettuata mediante precipitazione termocalcica.
Nell?ambito della presente descrizione, con il termine ?precipitazione termocalcica? si intende un procedimento di trattamento termico di un siero di caseificazione addizionato di ioni calcio e in presenza di un innalzamento del pH, ad esempio mediante aggiunta di idrossido di sodio. Tipicamente il siero di caseificazione viene riscaldato ad una temperatura comprese fra 50?C e 55?C.
Nella forma di attuazione precedentemente descritta, alla precipitazione termocalcica segue preferibilmente un passaggio di microfiltrazione al fine di rimuovere dal siero dolce di caseificazione gli aggregati lipidici precipitati.
Preferibilmente, nel procedimento secondo l?invenzione la componente proteica del siero dolce di caseificazione viene eliminata mediante ultrafiltrazione attraverso membrana, pi? preferibilmente mediante ultrafiltrazione a flusso tangenziale.
La selezione del materiale e della geometria della membrana di ultrafiltrazione pi? adeguata ad essere impiegata nell?ambito della presente invenzione nonch? dei parametri operativi della metodica rientra ampiamente nelle capacit? del tecnico medio del settore.
Come precedentemente indicato, il procedimento secondo l?invenzione ? caratterizzato dal fatto di impiegare il ceppo di Lactobacillus delbrueckii isolato per la prima volta dai presenti inventori, denominato MF-20/7A/24. Detto ceppo di lattobacillo viene utilizzato al fine di operare il passaggio di fermentazione della frazione acquosa del siero dolce di caseificazione, che ? ottenuta a seguito della eliminazione delle componenti lipidica e proteica del siero.
Le cellule del ceppo MF-20/7A/24 impiegate nel procedimento secondo l?invenzione possono essere vive o non replicanti, ad esempio inattivate, per esempio mediante trattamento termico. In alternativa, le cellule del ceppo MF-20/7A/24 possono essere impiegate in forma di liofilizzato, preferibilmente in condizioni che preservano la vitalit? cellulare. Le tecniche di liofilizzazione sono consolidate e di per s? note al tecnico medio del settore.
Secondo l?invenzione, la fase di fermentazione ? preferibilmente condotta ad una temperatura di 37?C, e/o per un intervallo di tempo preferibilmente compreso fra 22 ore e 26 ore, pi? preferibilmente per 24 ore.
La composizione del siero dolce di caseificazione varia a seconda della specie animale di origine, quali ad esempio vacca, pecora, capra o bufala, l?alimentazione e la fase di lattazione dell?animale.
Preferibilmente, ma non a titolo limitativo, il siero dolce di caseificazione impiegato come materiale di partenza nel procedimento secondo l?invenzione ? ottenuto da latte bovino, pi? preferibilmente da latte di razza bovina autoctona valdostana, ad esempio razza bovina Valdostana Pezzata Rossa, razza bovina Valdostana Pezzata Nera e/o razza bovina Valdostana Castana.
Nonostante le propriet? nutrizionali, il siero dolce di caseificazione rappresenta comunque un prodotto di scarto della filiera lattiero-casearia e il suo smaltimento richiede procedure complesse.
Pi? specificamente, con una richiesta biochimica di ossigeno compresa tra 30 e 60 g/l (BOD, parametro utilizzato per stimare il carico inquinante attraverso una misura indiretta della quantit? di O2 necessaria per l?ossidazione biologica del contenuto di materia organica presente in una soluzione acquosa, in 5 giorni), il siero di caseificazione ha un significativo apporto inquinante. L?indice di biodegradabilit? di detto composto ? stato stimato fra 0,4 e 0,8, attribuibile al contenuto in lattosio e proteine. Considerando pertanto che per la produzione di 1 kg di formaggio sono necessari 10 kg di latte, da cui derivano 9 kg di siero, si pu? affermare che l?industria lattiero-casearia ? una delle principali fonti di produzione di effluenti industriali in Europa.
Alla luce di quanto sopra esposto, il procedimento secondo l?invenzione presenta dunque l?innegabile vantaggio di consentire la riutilizzazione del siero dolce di caseificazione come materia prima per la produzione di una composizione dermatologica, in particolare di una composizione dermatologica altamente funzionale per il benessere della cute.
Come sar? illustrato in dettaglio negli esempi sperimentali che seguono, il procedimento secondo l?invenzione consente di preservare nella composizione dermatologica cos? prodotta le componenti bioattive originariamente presenti nel siero dolce di caseificazione, in particolare la componente dei galatto-oligosaccaridi e l?acido butirrico. Di nota, gli studi condotti dai presenti inventori hanno addirittura rivelato un incremento significativo di questo acido organico nella composizione dermatologica ottenuta con il procedimento secondo l?invenzione rispetto alla frazione acquosa del siero dolce di caseificazione deprivata della componente lipidica e proteica.
Ulteriori studi condotti dai presenti inventori hanno inoltre dimostrato che la composizione ottenuta con il procedimento secondo l?invenzione ? sorprendentemente dotata di un elevato potere rigenerante sulle cellule della pelle e riequilibrante della barriera protettiva cutanea, senza alcun effetto citotossico, esplicando pertanto una sensibile azione cicatrizzante, riparatrice e lenitiva.
Forma pertanto ulteriore oggetto della presente invenzione una composizione dermatologica per applicazione topica sulla pelle comprendente uno o pi? galatto-oligosaccaridi e acido butirrico, caratterizzata dal fatto di essere ottenibile mediante il procedimento come sopra definito.
Secondo forme di realizzazione preferite, la composizione dermatologica della presente invenzione contiene altres? uno o pi? dei seguenti componenti aggiuntivi: agenti addensanti, agenti umettanti, agenti solubilizzanti, agenti chelanti, agenti regolatori di pH e agenti conservanti.
La composizione dermatologica secondo l?invenzione si ? rivelata idonea per l?applicazione topica sulla pelle. Le forme farmaceutiche di dosaggio preferite a questo scopo sono crema, unguento, gel, emulsione, cerotto e garza.
Alla luce delle vantaggiose propriet? sopramenzionate, la composizione dermatologica secondo l?invenzione risulta particolarmente idonea ad essere impiegata in ambito clinico. Con riferimento alle patologie cutanee si citano, ad esempio, ma non esclusivamente, la patologia acneica, la dermatite atopica, le ferite, le ustioni e i danni cutanei da invecchiamento.
In alternativa, la composizione dermatologica secondo l?invenzione trova applicazione nel campo puramente cosmetologico, al fine di modificare o risolvere aspetti antiestetici della pelle causati unicamente da processi fisiologici nei soggetti non affetti da patologie dermatologiche, ad esempio nei soggetti che non sono affetti da patologia acneica, dermatite atopica, ferite, ustioni, e da danni cutanei da invecchiamento.
L?invenzione ? ulteriormente descritta negli esempi che seguono, facendo riferimento ai disegni allegati in cui:
la Figura 1 mostra il dendrogramma dei ceppi di L. delbrueckiii basato su matrice di distanza ottenuta dall?analisi delle sequenze concatenate di nove loci batterici ed usando il metodo Neighbor-Joining. Il bootstrap test (1.000 replicati) ? riportato a fianco di ogni ramificazione. Le distanze evolutive sono state calcolate tramite il metodo Kimura 2-parameter ed hanno come unit? il numero di sostituzione di basi a sito. L?aplotipo II corrisponde all?isolato MF-20/7A/24; l?aplotipo I ? comune ai rimanenti ceppi autoctoni valdostani; l?aplotipo III corrisponde ai lattobacilli commerciali;
la Figura 2 mostra i livelli di acido butirrico nella frazione acquosa del siero dopo ultrafiltrazione (permeato, P) e dopo fermentazione con il microorganismo dell?invenzione (permeato fermentato, PF)
la Figura 3 mostra grafici illustrativi dell?assenza di tossicit? della composizione dell?invenzione (FERM), alle concentrazioni 3% (FERM 3%) e 5% (FERM 5%) nel mezzo di coltura, e diluizione 3% (FERM DIL 3%) nel mezzo di coltura, determinata con i saggi MTT (A), neutral red uptake (NRU) (B) e rilascio di LDH (C). I grafici riportano anche i valori di tossicit? della frazione acquosa del siero dopo precipitazione termocalcica e ultrafiltrazione (indicata di seguito come ?frazione acquosa del siero?; PERM) alle concentrazioni 3% (PERM 3%) e 5% (PERM 5%) nel mezzo di coltura, e diluizioni 3% (PERM DIL 3%) e 5% (PERM DIL 5%) nel mezzo di coltura. Nei saggi MTT e NRU il composto Sodio dodici solfato (SDS) ? stato usato come controllo positivo di tossicit?;
la Figura 4 mostra grafici illustrativi dell?assenza di stimolo proliferativo cellulare della composizione dell?invenzione (FERM) e della ?frazione acquosa del siero? (PERM), alle concentrazioni 3% (FERM 3% e PERM 3%) e 5% (FERM 5% e PERM 5%) nel mezzo di coltura, e diluizione 3% (PERM 3%) e 5% (PERM 5%) nel mezzo di coltura, dimostrata con i saggi di cristal violetto (A) e misura dell?attivit? LDH intracellulare (B);
la Figura 5 mostra i risultati del saggio ?wound healing?. (A) microfotografie rappresentative di una ferita a tempo 0 (T0) e ad avvenuta chiusura (T24H), in assenza di trattamento (CTRL) e dopo trattamento con la composizione dell?invenzione (FERM) per 24 ore (T24H) o per 7 giorni e poi sottoposta al saggio per 24 ore (FERMG). (B) Grafico che riporta la percentuale di chiusura di una ferita dopo i seguenti trattamenti: ?frazione acquosa del siero? (perm), composizione dell?invenzione (ferm) per 24 ore (T24H) o per 7 giorni e poi sottoposta al saggio per 24 ore (FERM 7g). La ferita trattata con la composizione dell?invenzione, in entrambe le condizioni (ferm e FERM7g), si chiude pi? rapidamente della ferita non trattata (ctrl) e in modo marcatamente superiore rispetto alla ?frazione acquosa del siero? (PERM). Il trattamento con TGF beta rappresenta il controllo positivo degli esperimenti (trattamento che stimola la chiusura della ferita);
la Figura 6 mostra grafici rappresentativi dei livelli di espressione nelle cellule epiteliali di E-Caderina (A), una proteina necessaria nel contatto cellula-cellula, e della Vimentina (B), una proteina della trasformazione tumorale, dopo trattamento con la composizione dell?invenzione (FERM e FERM7g) e con la ?frazione acquosa del siero? (PERM). La composizione dell?invenzione (FERM), al contrario della ?frazione acquosa del siero? (PERM), diminuisce l?espressione di E-Caderina (A) mentre non induce aumento della Vimentina (B). Il TGF beta ? stato usato come controllo positivo;
la Figura 7 mostra grafici rappresentativi dell?induzione nelle cellule epiteliali dell?attivit? del fattore trascrizionale NF-kB (A) e produzione della citochina infiammatoria interleukina 8 (IL-8) (B) da parte della composizione dell?invenzione dopo 24 ore (FERM) o 7 giorni di trattamento (FERM 7g) e da parte della frazione acquosa del siero (PERM). I dati dimostrano l?attivit? della composizione dell?invenzione gi? dopo 24 ore di trattamento. Le cellule sono state trattate anche con LPS e PIC, due sostanze che attivano i recettori TLR, per dimostrare che l?effetto della composizione dell?invenzione ? probabilmente mediato da questi recettori. Il trattamento per 7 giorni con il fermentato (FERM 7 g) non induce pi? la citochina infiammatoria IL-8, quindi si tratta di un?infiammazione momentanea e reversibile che pu? essere considerata benefica; la Figura 8 mostra grafici illustrativi dell?espressione cellulare del fattore trascrizionale FOXO1 (A) e delle proteine della respirazione mitocondriale COXII (B) e MT-ATP6 (C) in assenza di trattamento (CTRL) e dopo i seguenti trattamenti: composizione dell?invenzione per 24 ore (FERM) o per 7 giorni (FERM 7g); frazione acquosa del siero (PERM); LPS e PIC, due sostanze che attivano i recettori TLR; TGF beta. La composizione dell?invenzione (FERM), gi? dopo 24h di trattamento, riduce la presenza del fattore trascrizionale FOXO1 (A) nel mitocondrio e aumenta l?espressione delle proteine della respirazione mitocondriale COXII (B) e MT-ATP6 (C). Il trattamento per 7 giorni con il preparato (FERM 7 g) ne amplifica gli effetti;
la Figura 9 mostra un grafico illustrativo dell?indice medio di irritazione cutanea provocata dopo applicazione della composizione dell?invenzione per 15 minuti o 24 ore, rispetto alla risposta eritematosa leggera riscontrata. La linea tratteggiata indica il limite oltre il quale il prodotto analizzato ? lievemente irritante.
Sezione sperimentale
I presenti inventori dichiarano di aver ottemperato agli adempimenti previsti in materia di invenzioni biotecnologiche ai sensi dell?art. 170 bis, commi 2, 3 e 4 del D.Lgs. n. 30/05 (Codice della Propriet? Industriale).
Esempio 1: Caratterizzazione microbiologica del ceppo isolato MF-20/7A/24
Il ceppo isolato di Lactobacillus delbrueckii oggetto dell?invenzione appartiene alla collezione di batteri lattici dell?Institut Agricole R?gional (IAR; Regione La Roch?re 1/A, Aosta, Italia) selezionati presso alpeggi e piccoli caseifici di produttori valdostani che lavorano il latte seguendo l?antica tradizione di famiglia e senza l?uso di fermenti commerciali, nella zona di produzione del formaggio Fontina DOP.
Per la caratterizzazione microbiologica del lattobacillo dell?invenzione sono stati valutati la temperatura di crescita, il terreno e le condizioni di crescita, l?antibiotico-resistenza tramite antibiogramma, la morfologia batterica tramite analisi microscopica, la capacit? di produrre l?enzima catalasi attraverso il test della catalasi e di fermentare il lattosio su terreno selettivo Esempio 2: Caratterizzazione genetica del ceppo isolato MF-20/7A/24
I presenti inventori hanno svolto uno studio filogenetico del nuovo ceppo isolato di Lactobacillus delbrueckii mediante analisi Multi Locus Sequence Tagging (MLST) impiegando 14 isolati autoctoni valdostani di L. delbrueckii (collezione IAR; Regione La Roch?re 1/A, Aosta, Italia) provenienti da latte in lavorazione per la produzione di formaggio fontina e tre fermenti commerciali non autoctoni (Lyofast, Sacco S.r.l., Cadorago, Como, Italia) comunemente impiegati per la produzione di yogurt.
L?estrazione del DNA genomico batterico ? stata eseguita utilizzando il kit kit DNeasy Blood and Tissue Kit (QIAGEN), seguendo la procedura per i batteri Gram positivi. Tutti i campioni di DNA dopo estrazione sono stati sottoposti ad analisi MLST, usando i primer riportati nella Tabella 1, tramite amplificazione PCR e sequenziamento di nove loci idonei all?identificazione e caratterizzazione dei batteri lattici ( Annals of Agricultural Science (2016)61: 65-75;
Scientific Reports (2016) 6: 22704).
Tabella 2
Le analisi PCR sono state effettuate impiegando il termociclatore VERITI (Thermo Fisher Scientific) e seguendo i parametri e le condizioni indicati in schede operative preparate ad hoc. I frammenti di DNA amplificati sono stati sottoposti a corsa elettroforetica su gel di agarosio, visualizzati tramite transilluminatore a UV e quantificati tramite software GelAnalyzer v. 2010a dopo confronto con frammenti di DNA a lunghezza e concentrazione note (100bp DNA Ladder, Promega). I campioni amplificati sono quindi stati sottoposti a purificazione enzimatica tramite kit Exosap-IT (Affymetrix Inc.) per eliminare i primer e i nucleotidi in eccesso.
I campioni purificati sono stati successivamente sottoposti a reazione di Cycle sequencing impiegando il ?BigDyeTM Terminator v.3.1 Cycle Sequencing kit? (Thermo Fisher Scientific). I prodotti del Cycle sequencing sono stati purificati per eliminare l?eccesso di dideossinucleosidi trifosfato marcati non incorporati, che potrebbero causare problemi nella successiva lettura della sequenza. La purificazione ? stata eseguita tramite reazione di precipitazione con etanolo impiegando EDTA come stabilizzante per i frammenti di DNA marcati. I prodotti purificati sono quindi stati risospesi nella soluzione Hi-DiTM Formammide (Thermo Fisher Scientific) e denaturati. I campioni sono poi stati caricati sul Sequenziatore AB3500 Genetic Analyzer (Thermo Fisher Scientific) e sottoposti ad elettroforesi a capillari.
Le sequenze ottenute sono state analizzate tramite software SeqA 6 (Thermo Fisher Scientific) che permette di selezionare le porzioni con un?elevata percentuale di basi aventi Quality Value (QV)>20 (i.e., probabilit? che quella base sia attribuita al caso <1%).
Le sequenze ripulite sono quindi state analizzate con il software BioEdit v.7.2.5 che permette di confrontare le sequenze dirette (forward) e inverse (reverse) di ciascun campione e gli elettroferogrammi corrispondenti, allineandole con la funzione ClustalW, per un ulteriore controllo della qualit? delle sequenze e per ottenere, grazie alla loro combinazione, una sequenza consenso. Tale sequenza ? stata quindi salvata come file di testo nel formato FASTA.
Al fine di valutare o confermare la specie di appartenenza e per effettuare un ulteriore controllo, tutte le sequenze ottenute sono state sottoposte ad analisi tramite BLASTn in GenBank (www.blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi).
Per ogni locus, le sequenze ottenute da ciascuna delle due specie sono state allineate tramite il software MEGA 7 v.7.0.26 per evidenziare gli eventuali polimorfismi a livello intraspecifico ed individuare gli aplotipi presenti. Le sequenze di ciascun locus sono state concatenate ed allineate con altre sequenze conspecifiche presenti in GenBank. Sono cos? state calcolate le matrici di distanza che hanno permesso di ottenere dendrogrammi utili a valutare visivamente gli aplotipi individuati e la loro relativa distanza filogenetica.
L?analisi dei nove loci sequenziati ha permesso di evidenziare tre differenti aplotipi, di cui uno caratteristico dell?isolato MF-20/7A/24 oggetto dell?invenzione (aplotipo II), uno comune a tutti gli altri isolati autoctoni valdostani (aplotipo I) e uno comune ai ceppi commerciali (aplotipo III).
Allineando le sequenze concatenate dei diversi aplotipi (per un totale di 5.362 basi confrontate) con quelle di altri ceppi appartenenti alle diverse sottospecie di L. delbrueckii presenti in GenBank ? stato creato un albero filogenetico (Figura 1) che ha rivelato l?unicit? dell?aplotipo II corrispondente all?isolato MF-20/7A/24 e la sua vicinanza filogenetica ad un ceppo di L. delbrueckii ssp. indicus (n. registrazione GenBank CP018614). L?analisi filogenetica ha inoltre evidenziato l?unicit? dell?aplotipo I comune agli altri isolati autoctoni valdostani e la sua vicinanza filogenetica ad un ceppo di L. delbrueckii ssp. lactis (n. registrazione GenBank CP018215) e L. delbrueckii ssp. delbrueckii (n. registrazione GenBank CP018615) nonch? il fatto che l?aplotipo III, comprendente i ceppi commerciali, rientra pienamente all?interno del gruppo che contiene tutti i ceppi appartenenti alla sottospecie bulgaricus.
Il nuovo ceppo isolato di Lactobacillus delbrueckii (qui designato come MF-20/7A/24) ? stato depositato in data 12 Marzo 2020 presso l?ente di deposito
con numero di registrazione LMG P-31789.
Esempio 3: Procedimento per la preparazione della composizione dermatologica dell?invenzione
I presenti inventori hanno allestito un protocollo di preparazione che segue il metodo di Fauquant et al. 1985, ( Le Lait (1985), 65(1), 1-20) come modificato da
(Pereira C.D. et al., International Dairy Journal, 2002 12(9): 773-783).
Chiarificazione del siero
Allo scopo di eliminare la componente lipidica da un siero dolce di caseificazione, gli inventori hanno impiegato un procedimento di precipitazione termocalcica dei lipidi non centrifugabili. Pi? specificamente, il valore di Ca<2+ >del siero dolce di caseificazione ? stato incrementato a 1,2 g/l con aggiunta di CaCl2, quindi il valore di pH di detto siero ? stato innalzato ad un valore compreso nell?intervallo fra 7,3 e 7,5 con NaOH 10N e si ? proceduto rapidamente con l?incubazione a caldo alla temperatura di 55?C per 30 minuti. Al termine del trattamento termico, il siero dolce di caseificazione ? stato lasciato a raffreddare a temperatura ambiente e successivamente ? stato lasciato a 4-6?C per 72 ore evitando movimenti che potessero disturbare la formazione del precipitato. Trascorso questo tempo, ? stato prelevato il surnatante e sottoposto a centrifugazione a 1600 x g a 4?C per 15 minuti; questa operazione ? stata ripetuta due volte, prelevando ogni volta la parte inferiore.
Il siero di caseificazione cos? chiarificato ? stato sottoposto a ultrafiltrazione.
Ultrafiltrazione del siero
I presenti inventori hanno condotto un passaggio di ultrafiltrazione allo scopo di eliminare la componente proteica dal siero dolce di caseificazione.
Per il procedimento di ultrafiltrazione ? stato utilizzato un dispositivo di filtrazione a flusso tangenziale Cogent ?Scale (Merck Millipore) con cassetta Pellicon XL in polietersulfene (PES), con superficie di 0,005m2 e cut-off di 10 kDa. Il flusso di scorrimento ? stato fissato a 25 ml/min, con pressione transmembrana di 20 psi e temperatura compresa tra 23,6 e 24,4?C. La parte di siero che ha attraversato la membrana (permeato) ? stata raccolta e utilizzata per i successivi passaggi.
Fermentazione del permeato
Il protocollo di fermentazione ha previsto l'utilizzo del ceppo di Lactobacillus delbruekii isolato per la prima volta dai presenti inventori, qui designato come MF-20/7A/24 e depositato in data 12 Marzo 2020 presso l?ente di deposito internazionale BCCM/LMG (
Belgio), con numero di deposito LMG P-31789.
Il ceppo di Lactobacillus delbruekii oggetto dell?invenzione ? stato impiegato in forma liofilizzata, inoculato in terreno di coltura MRS broth ed incubato a 37?C per 24 ore. La coltura batterica cos? ottenuta ? stata diluita 1:100 ed utilizzata per fermentare la frazione acquosa del siero dolce di caseificazione (permeato sierico) ottenuta a seguito dei passaggi di precipitazione termocalcica ed ultrafiltrazione condotti come descritto sopra. Detta frazione acquosa del siero dolce di caseificazione ? stata precedentemente filtrata e pastorizzata in autoclave alla temperatura di 90 ?C per 20 minuti.
Il passaggio di fermentazione del procedimento secondo l?invenzione ? stato condotto per 24 ore a 37 ?C, al termine del quale, al fine di bloccare il processo, il permeato ? stato posto in autoclave a 100 ?C per 15 minuti. Infine il fermentato ? stato sottoposto a microfiltrazione (0,22 ?m) per eliminare il residuo microbico.
Esempio 4: Caratterizzazione delle componenti bioattive nella composizione dermatologica dell?invenzione
I presenti inventori hanno condotto un esame sulla composizione dermatologica dell?invenzione al fine di determinare e confermare la presenza di componenti potenzialmente bioattivi. ?E noto dalla letteratura scientifica che il siero dolce di caseificazione ? composto principalmente da acqua, sali minerali, zuccheri (semplici e complessi) e residui amminoacidici con peso molecolare inferiore a 10 kDa.
Per l?esame di caratterizzazione, sono state inizialmente quantificate le componenti solide non grasse (MSNF, milksolids non-fat) attraverso i protocolli ufficiali AOAC per il latte, adattati alla matrice siero:
- il solido totale ? stato quantificato con il metodo AOAC 990.20;
- l?analisi del residuo amminoacidico ? stata effettuata con il metodo ufficiale Kjeldhal AOAC 991.21 per l?azoto non proteico;
- i sali minerali sono stati quantificati con il metodo ufficiale AOAC 945.546;
- per le componenti glucidiche sono stati utilizzati i kit Megazyme specifici per lattosio, galattosio e glucosio (cod. K-LOLAC, K-ARGA, GLUHK).
Dalla differenza tra il solido totale e tutte le componenti sopra elencate, ? stato possibile rilevare indirettamente e confermare la presenza di galatto-oligosaccaridi (GOS) nel campione.
Infine ? stata eseguita una determinazione qualitativa e quantitativa della frazione volatile al fine di determinare e confermare la presenza di ulteriori componenti bioattive quali ad esempio l?acido butirrico, un acido grasso saturo a 4 atomi di carbonio. Il suddetto passaggio ha previsto l?uso di una metodica cromatografica SPME-GC/MS con utilizzo di una fibra 85 ?m SPME Carboxen/PDMS StableFlexTM e di una colonna DB-Waxcolumn (30 m x 0,25 mm x 0,25 ?m spessore film).
Dall?analisi precedentemente descritta ? emerso che, mentre nella frazione acquosa del siero dopo ultrafiltrazione (permeato) sono presenti 0,00153 g/l di acido butirrico (0,52 ?M), nella composizione dermatologica dell?invenzione viene raggiunto un valore pari 0,00514 g/l (1,75 ?M) di questo acido organico, e tale incremento ? statisticamente significativo (p<0.05) (Figura 2).
Esempio 5: Saggi in vitro su modelli cellulari Allo scopo di analizzare le propriet? della composizione dermatologica secondo l?invenzione e i suoi effetti sulla cute, i presenti inventori hanno saggiato le caratteristiche di detta composizione e della frazione acquosa del siero dolce di caseificazione ottenuta dopo precipitazione termocalcica e ultrafiltrazione (indicata di seguito come ?frazione acquosa del siero?) su linee cellulari commerciali di cheratinociti umani HaCat (American Type Culture Collection (ATCC) (USA)). Questa linea cellulare deriva da pelle adulta e mantiene completa capacit? di differenziazione epidermica, essendo pertanto rappresentativa del tessuto cutaneo. Su tutti i campioni sono stati eseguiti saggi in vitro idonei alla valutazione della tossicit? e dell?attivit? biologica della composizione dermatologica secondo l?invenzione. Valutazione della tossicit?
Allo scopo di verificare l?eventuale tossicit? della composizione dermatologica secondo l?invenzione sono stati eseguiti i saggi MTT, Neutral Red Uptake (NRU), Cristal Violetto e rilascio di LDH, come illustrati nella Tabella 3 di seguito. Nei saggi sono state impiegate opportune diluizioni della composizione dell?invenzione e della frazione acquosa del siero corrispondenti alla concentrazione finale del 3% o 5% nel mezzo (MEDIUM) di crescita cellulare. Il composto sodio dodecil solfato (SDS) ? stato usato come controllo positivo di tossicit? (Figura 3).
Tabella 3
I saggi cellulari effettuati come descritto precedentemente hanno dimostrato che la composizione dermatologica oggetto dell?invenzione e la frazione acquosa del siero non sono citotossici a breve e lungo termine, e non interferiscono con la crescita e il metabolismo energetico citoplasmatico dei cheratinociti umani (Figura 4).
Valutazione dell?attivit? biologica
Allo scopo di esaminare l?attivit? biologica della composizione dermatologica secondo l?invenzione sono stati eseguiti il test di Wound healing, utilizzando come controllo positivo il TGF ?, e saggi di analisi dell?espressione genica e dell?espressione proteica, come illustrati nella Tabella 4 di seguito.
Tabella 4
VALUTAZIONE DELL?ATTIVITA? BIOLOGICA
Saggio Scopo dell?analisi
WOUND Dopo la creazione di una ferita (spazio vuoto), HEALING su cellule in monostrato a confluenza, si misura la capacit? di movimento cellulare con conseguente chiusura del taglio creato: vengono scattate fotografie dal tempo 0 fino alle 24 ore successive, per calcolare la percentuale di chiusura della ferita per mezzo di un software
ESPRESSIONE Analisi trascrizionale (RT-qPCR) per indagare GENICA i meccanismi molecolari responsabili della chiusura della ferita:
? Produzione di energia (l'amplificazione dei trascritti delle subunit? proteiche COX II e MT-ATP6, derivanti dal DNA mitocondriale, rappresenta un indice dell'espressione delle proteine mitocondriali coinvolte nella produzione di energia necessaria al movimento) ? Variazioni nella trascrizione dei geni coinvolti nell' adesione cellulare (la E-caderina ? la proteina responsabile delle giunzioni cellula-cellula nell'epitelio, mentre la Vimentina ? una proteina tipica delle cellule non differenziate)
? Produzione di citochine infiammatorie che hanno un effetto positivo sulla guarigione delle ferite (interleuchine IL-6, IL-8, IL-24 e TNF-?)
? Trascrizione dei geni marker del differenziamento cellulare (involucrina, cheratina 1 e cheratina 10)
ESPRESSIONE Dopo aver separato le frazioni citosol, PROTEICA mitocondrio e nucleo, viene utilizzata la tecnica del western blotting per analizzare la via di segnalazione molecolare che media l'effetto del fermentato. Si valuta, nello specifico, la traslocazione del fattore trascrizionale NFkB dal citosol al nucleo e del fattore trascrizionale FOXO-1 dal mitocondrio al nucleo, dove inducono, rispettivamente, la produzione di IL-8 (promozione della risposta infiammatoria) e un aumento della respirazione mitocondriale
Nei saggi la composizione dell?invenzione e la
frazione acquosa del siero sono state impiegate alle concentrazioni precedentemente descritte in riferimento alla valutazione della tossicit?.
Come illustrato nella Figura 5, i risultati del test ?wound healing? indicano inequivocabilmente che la composizione dermatologica secondo l?invenzione esplica un effetto cicatrizzante promuovendo la chiusura delle ferite, e che questo effetto ? marcatamente superiore rispetto alla frazione acquosa del siero.
Con gli studi di espressione genica i presenti inventori hanno approfondito l?azione esercitata dalla composizione dermatologica secondo l?invenzione sui meccanismi molecolari alla base della chiusura di una ferita. In particolare, quando una ferita si chiude le cellule dell?epitelio si muovono e partecipano allo stimolo infiammatorio.
Gli esperimenti di analisi della trascrizione genica hanno rivelato un sensibile aumento della trascrizione cellulare dei geni mitocondriali che codificano per la produzione di energia e per le proteine della fosforilazione ossidativa ad opera della composizione dermatologica secondo l?invenzione. Questo dato pu? essere spiegato con la necessit? di un maggior apporto di energia da parte delle cellule per muoversi. Inoltre, i suddetti esperimenti hanno dimostrato nelle cellule trattate con la composizione dermatologica dell?invenzione una significativa riduzione nei livelli trascrizionali della E-Caderina, la proteina responsabile dell?adesione tra le cellule nell?epitelio (Figura 6A). Da ci? consegue che le cellule sono pi? libere di muoversi. Di nota, le variazioni trascrizionali precedentemente descritte non sono state riscontrate nelle cellule poste a contatto con la sola frazione acquosa del siero (Figura 6A).
Nel saggio di analisi dell?espressione genica ? stato valutato come controllo positivo anche l?effetto sulle cellule del TGF-?, una citochina che modifica le caratteristiche dell?epitelio e promuove la perdita del differenziamento (transizione epitelio-mesenchimale). Come si evince dai grafici della Figura 6, il fattore TGF-? riduce infatti l?espressione della E-Caderina, ma induce la trascrizione del gene codificante la proteina Vimentina.
Al contrario, la composizione dermatologica e la frazione acquosa del siero non agiscono sulla trascrizione della Vimentina (Figura 6B), e pertanto il loro effetto non ? mediato da questo tipo di transizione tipica della trasformazione tumorale. Questo dato ? molto importante poich? implica che l?effetto della composizione dermatologica oggetto dell?invenzione ? quello di aumentare il movimento cellulare senza modificare il differenziamento epiteliale.
Il trattamento delle cellule epiteliali con la composizione dermatologica dell?invenzione stimola inoltre l?espressione dell?interleuchina 8 (IL-8), una citochina con effetti benefici sulla chiusura delle ferite (Figura 7B) e delle proteine coinvolte nel differenziamento dei cheratinociti, favorendo in tal modo la formazione e il mantenimento di una barriera epidermica integra e funzionale.
I risultati degli studi di espressione genica precedentemente illustrati sono stati poi confermati dai presenti inventori anche a livello dell?espressione proteica. In particolare, in seguito a trattamento dei cheratinociti con la composizione dermatologica dell?invenzione, ? stata dimostrata l?attivazione del fattore trascrizionale NF-kb, responsabile della produzione di IL-8 (Figura 7A), con conseguente promozione della risposta infiammatoria, e la migrazione di FOXO-1 dal mitocondrio, in cui si localizza per reprimere la respirazione, al nucleo (Figura 8), cui consegue l'aumento della respirazione mitocondriale.
Valutazione del potere irritante in soggetti con pelle sensibile
L'obiettivo dello studio condotto dai presenti inventori ? stato la valutazione del potere irritante della composizione dermatologica secondo l?invenzione in soggetti (volontari adulti maggiorenni di entrambi i sessi) con cute sensibile, tramite test epicutanei a lettura ritardata (patch test).
Si definisce cute sensibile, reattiva o iperreattiva una cute soggetta a sensazioni sgradevoli quali pizzicore, bruciore, dolore, prurito, o formicolio in risposta a stimoli che normalmente non dovrebbero provocare tali sensazioni, per esempio raggi UV, aria calda e secca, aria fredda ed umida, vento, smog/inquinanti, contatto con acqua, utilizzo di saponi o cosmetici, stress psichico. Non si pu? parlare di cute sensibile quando queste sensazioni sgradevoli sono attribuibili alla presenza di una patologia cutanea.
Oltre alle sensazioni sgradevoli, la cute pu? apparire eritematosa, anche se spesso mantiene un aspetto normale. In qualsiasi sede corporea pu? essere presente cute sensibile, ma la localizzazione al volto ? la pi? frequente.
La selezione dei volontari per lo studio ? stata condotta utilizzando due approcci combinati:
? test di autovalutazione (Misery modificato); ? test all?acido lattico o test di Ramette (?stinging test?).
Il test all?acido lattico o test di Ramette consiste nell?applicare con cotone idrofilo, in regione zigomatica, una soluzione acquosa di acido lattico al 15%, ed in sede controlaterale, come controllo, acqua distillata. La comparsa di senso di bruciore (stinging) indica presenza di irritazione soggettiva, pur in assenza di qualsiasi tipo di reazione cutanea visibile. Dopo 2 e 5 minuti dall?applicazione dell?acido lattico, il soggetto in esame assegner? un punteggio da 0 a 3 al bruciore avvertito sulla base dell?intensit?, secondo quanto indicato di seguito:
0 = assenza di sensazioni anomale;
1 = sensazione di calore-bruciore leggera;
2 = sensazione di calore-bruciore moderata;
3 = sensazione di calore-bruciore intensa.
Sono considerati ?STINGER? i volontari che presentano un punteggio cumulativo (dopo 2 e 5 minuti) ?3.
Viene posta diagnosi di cute sensibile/iperreattiva nei soggetti che si considerino soggettivamente affetti da cute sensibile rispondendo in maniera affermativa alla domanda ?ritiene che la sua cute sia sensibile?? e che riportino un punteggio cumulativo ?3 al questionario di autovalutazione ed un punteggio ?3 al test dell?acido lattico.
La composizione dermatologica secondo l?invenzione ? stata testata in singola dose (10 ?l) su 20 volontari. I campioni sono stati posti in Finn chambers di alluminio (Bracco), che sono state applicate alla cute della superficie volare dell'avambraccio con cerotto poroso, protette da cerotto adesivo ipoallergenico Fixomul.
I cerotti con il campione sono stati lasciati in situ per 48 ore, ricordando al paziente di non lavare/bagnare la zona per l'intera durata del test.
La rimozione ? stata eseguita dallo sperimentatore, che provvede a ripulire le aree di applicazione da eventuali residui di prodotto. La lettura dei risultati viene fatta 15 minuti e 24 ore dopo la rimozione dei prodotti, ovvero dopo 48 e 72 ore dalla loro applicazione.
Per l?analisi dei risultati ? stata impiegata la seguente scala di valutazione delle dermatiti irritative da contatto:
Assente ? 0
Lieve ? 1
Moderata? 2
Severa ? 3
?E stata eseguita la media matematica degli indici di irritazione ottenuti nei 20 test.
Il prodotto viene quindi classificato secondo la modalit? seguente:
Indice medio di irritazione: <0.5 NON irritante; Indice medio di irritazione: 0.5-20 LEGGERMENTE irritante;
Indice medio di irritazione: 20-50 MODERATAMENTE irritante;
Indice medio di irritazione: 50-80 FORTEMENTE irritante.
Dagli studi condotti come precedentemente illustrato ? emerso che la composizione dermatologica secondo l?invenzione non ? irritante e risulta inoltre essere idonea ad essere impiegata sulle pelli sensibili (Figura 9).
Claims (10)
1. Ceppo isolato di Lactobacillus delbruekii, caratterizzato dal comprendere una sequenza genomica di acido nucleico codificante l?RNA ribosomiale 16S comprendente la sequenza nucleotidica SEQ ID NO. 1.
2. Ceppo isolato di Lactobacillus delbruekii secondo la rivendicazione 1, che comprende inoltre una sequenza genomica di acido nucleico scelta dal gruppo che consiste di una sequenza codificante la subunit? legante l'ATP ClpX della proteasi ATP-dipendente Clp (ClpX) comprendente la sequenza nucleotidica SEQ ID NO. 2, una sequenza codificante la proteina DnaA iniziatrice della replicazione cromosomica comprendente la sequenza nucleotidica SEQ ID NO. 3, una sequenza codificante la proteina GroEL comprendente la sequenza nucleotidica SEQ ID NO. 4, una sequenza codificante la proteina UDP-N-acetilmuramoil-L-alanil-D-glutammato-L-lisina ligasi (MurE) comprendente la sequenza nucleotidica SEQ ID NO. 5, una sequenza codificante la subunit? alfa della fenilalanina-tRNA ligasi (PheS) comprendente la sequenza nucleotidica SEQ ID NO. 6, una sequenza codificante la CTP sintetasi (PyrG) comprendente la sequenza nucleotidica SEQ ID NO. 7, una sequenza codificante la proteina ricombinasi RecA comprendente la sequenza nucleotidica SEQ ID NO. 8, una sequenza codificante la subunit? beta della RNA polimerasi DNA-dipendente (RpoB) comprendente la sequenza nucleotidica SEQ ID NO. 9, e qualsiasi loro combinazione.
3. Ceppo isolato di Lactobacillus delbruekii secondo la rivendicazione 1 o 2, che ? depositato presso l?ente di deposito internazionale Belgian Coordinated Collections of Microorganisms (BCCM) Laboratorium voor Microbiologie ? Bacteri?nverzameling (LMG), Gent, Belgio, con numero di registrazione LMG P-31789.
4. Procedimento per la preparazione di una composizione dermatologica per applicazione topica sulla pelle, impiegante siero dolce di caseificazione come materiale di partenza, il procedimento comprendendo le fasi di:
(i) eliminare la componente lipidica e la componente proteica dal suddetto siero, ottenendo in tal modo una frazione acquosa del siero dolce di caseificazione;
(ii) sottoporre detta frazione acquosa a fermentazione mediante impiego del ceppo isolato di Lactobacillus delbruekii come definito in una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 3.
5. Procedimento secondo la rivendicazione 4, in cui il siero dolce di caseificazione ? ottenuto da latte bovino.
6. Procedimento secondo la rivendicazione 4 o 5, in cui l?eliminazione della componente lipidica dal siero dolce di caseificazione ? effettuata mediante precipitazione termocalcica.
7. Procedimento secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 4 a 6, in cui l?eliminazione della componente proteica dal siero dolce di caseificazione ? effettuata mediante ultrafiltrazione.
8. Composizione dermatologica per applicazione topica sulla pelle comprendente uno o pi? galattooligosaccaridi e acido butirrico caratterizzata dal fatto di essere ottenibile mediante il procedimento secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 4 a 7.
9. Composizione dermatologica per applicazione topica sulla pelle come definita nella rivendicazione 8, per l?uso nel trattamento di una patologia cutanea scelta dal gruppo che consiste di acne, dermatite atopica, ferite, ustioni e danni cutanei da invecchiamento
10. Uso cosmetico della composizione dermatologica come definita nella rivendicazione 8 per applicazione topica sulla pelle.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT102021000011006A IT202100011006A1 (it) | 2021-04-30 | 2021-04-30 | Nuovo ceppo isolato di lactobacillus e suoi impieghi |
| EP22170751.6A EP4083189A1 (en) | 2021-04-30 | 2022-04-29 | New isolated strain of lactobacillus and uses thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT102021000011006A IT202100011006A1 (it) | 2021-04-30 | 2021-04-30 | Nuovo ceppo isolato di lactobacillus e suoi impieghi |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| IT202100011006A1 true IT202100011006A1 (it) | 2022-10-30 |
Family
ID=77519456
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| IT102021000011006A IT202100011006A1 (it) | 2021-04-30 | 2021-04-30 | Nuovo ceppo isolato di lactobacillus e suoi impieghi |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP4083189A1 (it) |
| IT (1) | IT202100011006A1 (it) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0046326A2 (en) * | 1980-08-19 | 1982-02-24 | The Kroger Co. | Whey protein containing cosmetic formulations, process of preparing the same and a method for setting hair by using a non-hydrolyzed whey product |
-
2021
- 2021-04-30 IT IT102021000011006A patent/IT202100011006A1/it unknown
-
2022
- 2022-04-29 EP EP22170751.6A patent/EP4083189A1/en active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0046326A2 (en) * | 1980-08-19 | 1982-02-24 | The Kroger Co. | Whey protein containing cosmetic formulations, process of preparing the same and a method for setting hair by using a non-hydrolyzed whey product |
Non-Patent Citations (10)
| Title |
|---|
| "GenBank", Database accession no. CP018615 |
| DATABASE CAS [online] 13 March 2018 (2018-03-13), KLICHE T: "DNA (Lactobacillus delbrueckii lactis strain 92202 16S rRNA gene)", XP055877893, Database accession no. 2017_1152016_2190593190_1 * |
| HINGU M.N.SHAH H.S, THE MICROBES, vol. 5, 2013 |
| KLICHE T ET AL: "Screening for proteolytically active lactic acid bacteria and bioactivity of peptide hydrolysates obtained with selected strains", APPLIED MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY, SPRINGER BERLIN HEIDELBERG, BERLIN/HEIDELBERG, vol. 101, no. 20, 10 July 2017 (2017-07-10), pages 7621 - 7633, XP036331475, ISSN: 0175-7598, [retrieved on 20170710], DOI: 10.1007/S00253-017-8369-3 * |
| MCNABNEY S.MHENAGAN T.M., NUTRIENTS, vol. 9, no. 12, 2017, pages 1348 |
| MOLLICA M.P. ET AL., DIABETES, vol. 66, 2017, pages 1405 - 1418 |
| SAHOO TRIDWEEP K ET AL: "Co-culture ofLactobacillus delbrueckiiand engineeredLactococcus lactisenhances stoichiometric yield ofd-lactic acid from whey permeate", APPLIED MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY, SPRINGER BERLIN HEIDELBERG, BERLIN/HEIDELBERG, vol. 103, no. 14, 21 May 2019 (2019-05-21), pages 5653 - 5662, XP036820269, ISSN: 0175-7598, [retrieved on 20190521], DOI: 10.1007/S00253-019-09819-7 * |
| SHEHATA ET AL., ANNALS OF AGRICULTURAL SCIENCE, vol. 61, 2016, pages 65 - 75 |
| SONG ET AL., SCIENTIFIC REPORTS, vol. 6, 2016, pages 22704 |
| TORRES D.P.M. ET AL., C. REV. SKI FOOD. FOOD SAF., vol. 9, 2010, pages 438 - 454 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP4083189A1 (en) | 2022-11-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Al Atya et al. | Probiotic potential of Enterococcus faecalis strains isolated from meconium | |
| JP5401733B2 (ja) | プロバイオティクス及びシンバイオティックとしてのラクトバチルス・ケフィラノファシエンス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｋｅｆｉｒａｎｏｆａｃｉｅｎｓ）の使用 | |
| Yang et al. | Identification of antioxidant peptides from cheddar cheese made with Lactobacillus helveticus | |
| Lee et al. | Effects of Streptococcus thermophilus on volatile sulfur compounds produced by Porphyromonas gingivalis | |
| Isobe et al. | Reduction of overall Helicobacter pylori colonization levels in the stomach of Mongolian gerbil by Lactobacillus johnsonii La1 (LC1) and its in vitro activities against H. pylori motility and adherence | |
| KR101728895B1 (ko) | 비피도박테리움 속 GFC-epi70 균주, 이를 이용한 발효물 및 이의 제조방법 | |
| Fiedorowicz et al. | The influence of breast milk and infant formulae hydrolysates on bacterial adhesion and Caco-2 cells functioning | |
| Anukam et al. | 16S rRNA gene sequence and phylogenetic tree of Lactobacillus species from the vagina of healthy Nigerian women | |
| Orrù et al. | Usefulness of real time PCR for the differentiation and quantification of 652 and JP2 Actinobacillus actinomycetemcomitans genotypes in dental plaque and saliva | |
| Hati et al. | Impact of proteolytic Lactobacillus helveticus MTCC5463 on production of bioactive peptides derived from honey based fermented milk | |
| Zago et al. | Functional characterization and immunomodulatory properties of Lactobacillus helveticus strains isolated from Italian hard cheeses | |
| Li et al. | Somatic cell recovery by microfiltration technologies: A novel strategy to study the actual impact of somatic cells on cheese matrix | |
| IT202100011006A1 (it) | Nuovo ceppo isolato di lactobacillus e suoi impieghi | |
| Bagheri et al. | Production of functional fermented milk by Lactobacilli isolated from traditional iranian dairy products | |
| KR102585934B1 (ko) | 피부 병변의 치료에 사용되는 박테리아성 세크레톰 | |
| Mahmoud et al. | Antimicrobial activity of whey milk and their fractions against Staphylococcus pasteuri clinical strain | |
| Ai et al. | Protective effect of Streptococcus thermophilus CCFM218 against house dust mite allergy in a mouse model | |
| Belkaaloul et al. | Protective effect of Enterococcus faecalis DAPTO 512 on the intestinal tract and gut mucosa: milk allergy application | |
| Ghane et al. | Identification of the Propionibacterium acnes using Polymerase Chain Reaction (PCR) in the Acne vulgaris lesions | |
| Choudhari et al. | Screening, isolation and characterization of probiotically safe lactic acid bacteria from human faecesfor biofilm formation | |
| TW201431565A (zh) | 口腔用組成物 | |
| JP2021526373A (ja) | 敏感肌の処置のための抽出物および該抽出物を含む皮膚科用組成物 | |
| RU2736645C1 (ru) | Способ получения бактериологически чистого протеинового продукта с повышенным содержанием минорных белков | |
| JP2014068545A (ja) | ビフィズス菌の検出方法 | |
| RU2738745C1 (ru) | Бактериологически чистый протеиновый продукт с повышенным содержанием минорных белков |