IT202000031544A1 - Composizioni di pesticidi comprendenti cardol triene - Google Patents
Composizioni di pesticidi comprendenti cardol triene Download PDFInfo
- Publication number
- IT202000031544A1 IT202000031544A1 IT102020000031544A IT202000031544A IT202000031544A1 IT 202000031544 A1 IT202000031544 A1 IT 202000031544A1 IT 102020000031544 A IT102020000031544 A IT 102020000031544A IT 202000031544 A IT202000031544 A IT 202000031544A IT 202000031544 A1 IT202000031544 A1 IT 202000031544A1
- Authority
- IT
- Italy
- Prior art keywords
- plant
- suspension
- pathogen
- microplate
- plate
- Prior art date
Links
- OOXBEOHCOCMKAC-AOSYACOCSA-N 5-(8,11,14-pentadecatrienyl)resorcinol Chemical compound OC1=CC(O)=CC(CCCCCCC\C=C\C\C=C\CC=C)=C1 OOXBEOHCOCMKAC-AOSYACOCSA-N 0.000 title claims description 84
- OOXBEOHCOCMKAC-UHFFFAOYSA-N cardol triene Natural products OC1=CC(O)=CC(CCCCCCCC=CCC=CCC=C)=C1 OOXBEOHCOCMKAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 84
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 49
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 title claims description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 38
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 33
- 244000000003 plant pathogen Species 0.000 claims description 28
- 241000918585 Pythium aphanidermatum Species 0.000 claims description 16
- 241001361634 Rhizoctonia Species 0.000 claims description 14
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims description 14
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims description 13
- 241000233639 Pythium Species 0.000 claims description 11
- 241000813090 Rhizoctonia solani Species 0.000 claims description 11
- 241001248479 Pseudomonadales Species 0.000 claims description 9
- 241000009794 Agaricomycetes Species 0.000 claims description 8
- 241000233612 Pythiaceae Species 0.000 claims description 8
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 8
- 241000589615 Pseudomonas syringae Species 0.000 claims description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 241001489107 Cantharellales Species 0.000 claims description 4
- 241000221543 Ceratobasidiaceae Species 0.000 claims description 4
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 claims description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 241000947836 Pseudomonadaceae Species 0.000 claims description 2
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 claims description 2
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 claims description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 118
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 104
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 77
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 52
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 39
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 38
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 38
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 37
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 32
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 32
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 26
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 26
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 24
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 22
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 22
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 21
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 description 20
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 description 18
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 18
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 18
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 16
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 16
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 16
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 15
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 15
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 14
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 13
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 12
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 11
- 239000001965 potato dextrose agar Substances 0.000 description 10
- 239000000565 sealant Substances 0.000 description 10
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 10
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 8
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 241000221696 Sclerotinia sclerotiorum Species 0.000 description 7
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 7
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 7
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 7
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 7
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 7
- 241000531155 Pectobacterium Species 0.000 description 6
- 241000221300 Puccinia Species 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 6
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 6
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 6
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 6
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 6
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 6
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- -1 8-cis,11-cis-pentadeca-8,11,14-trien-1-yl substituent Chemical group 0.000 description 5
- 240000006162 Chenopodium quinoa Species 0.000 description 5
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 5
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 5
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 5
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 5
- 230000005080 plant death Effects 0.000 description 5
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 5
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 5
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 5
- 230000004763 spore germination Effects 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001465180 Botrytis Species 0.000 description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 4
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 4
- 241000233614 Phytophthora Species 0.000 description 4
- 241000233622 Phytophthora infestans Species 0.000 description 4
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 4
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 4
- WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N hypochlorite Chemical compound Cl[O-] WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 4
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 4
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 4
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 4
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 4
- 150000005671 trienes Chemical class 0.000 description 4
- 241000235349 Ascomycota Species 0.000 description 3
- 241000123650 Botrytis cinerea Species 0.000 description 3
- 241001085757 Ceratobasidium ramicola Species 0.000 description 3
- 241000223642 Helicobasidium purpureum Species 0.000 description 3
- 241000588701 Pectobacterium carotovorum Species 0.000 description 3
- 101710133727 Phospholipid:diacylglycerol acyltransferase Proteins 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 description 3
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 3
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 3
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 3
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 3
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 3
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 3
- 239000000230 xanthan gum Substances 0.000 description 3
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 3
- 229940082509 xanthan gum Drugs 0.000 description 3
- 235000010493 xanthan gum Nutrition 0.000 description 3
- 150000005207 1,3-dihydroxybenzenes Chemical class 0.000 description 2
- LPZOCVVDSHQFST-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-3-ethylpyrazol-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C=1C(=NN(C=1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2)CC LPZOCVVDSHQFST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000144725 Amygdalus communis Species 0.000 description 2
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 description 2
- 244000056139 Brassica cretica Species 0.000 description 2
- 235000003351 Brassica cretica Nutrition 0.000 description 2
- 235000003343 Brassica rupestris Nutrition 0.000 description 2
- 240000008574 Capsicum frutescens Species 0.000 description 2
- 241001290235 Ceratobasidium cereale Species 0.000 description 2
- 244000060011 Cocos nucifera Species 0.000 description 2
- 235000013162 Cocos nucifera Nutrition 0.000 description 2
- 241000556606 Fibularhizoctonia carotae Species 0.000 description 2
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 description 2
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 2
- 241001495426 Macrophomina phaseolina Species 0.000 description 2
- 235000017879 Nasturtium officinale Nutrition 0.000 description 2
- 240000005407 Nasturtium officinale Species 0.000 description 2
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 2
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 2
- 241000207836 Olea <angiosperm> Species 0.000 description 2
- 241000233654 Oomycetes Species 0.000 description 2
- 240000004370 Pastinaca sativa Species 0.000 description 2
- 235000017769 Pastinaca sativa subsp sativa Nutrition 0.000 description 2
- 241001395385 Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi Species 0.000 description 2
- 241001123567 Puccinia sorghi Species 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 244000000022 airborne pathogen Species 0.000 description 2
- 235000020224 almond Nutrition 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 2
- QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N bis(2-chloroethyl) sulfide Chemical compound ClCCSCCCl QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004490 capsule suspension Substances 0.000 description 2
- KVVSCMOUFCNCGX-UHFFFAOYSA-N cardol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC1=CC(O)=CC(O)=C1 KVVSCMOUFCNCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 2
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 2
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 2
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 description 2
- 238000011173 large scale experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 235000010460 mustard Nutrition 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010451 perlite Substances 0.000 description 2
- 235000019362 perlite Nutrition 0.000 description 2
- 239000003090 pesticide formulation Substances 0.000 description 2
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 2
- 238000011172 small scale experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 150000003462 sulfoxides Chemical class 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 239000004546 suspension concentrate Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N trioxidane Chemical compound OOO JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000004563 wettable powder Substances 0.000 description 2
- 241000223602 Alternaria alternata Species 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- 244000153158 Ammi visnaga Species 0.000 description 1
- 235000010585 Ammi visnaga Nutrition 0.000 description 1
- 235000008534 Capsicum annuum var annuum Nutrition 0.000 description 1
- 241000221544 Ceratobasidium Species 0.000 description 1
- 241000221545 Ceratobasidium cornigerum Species 0.000 description 1
- 241000132536 Cirsium Species 0.000 description 1
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 241001057636 Dracaena deremensis Species 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 241000219146 Gossypium Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 229920001732 Lignosulfonate Polymers 0.000 description 1
- 240000006240 Linum usitatissimum Species 0.000 description 1
- 206010024774 Localised infection Diseases 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000918584 Pythium ultimum Species 0.000 description 1
- 241000612182 Rexea solandri Species 0.000 description 1
- 241000873910 Rhizoctonia fragariae Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000893178 Waitea Species 0.000 description 1
- 241000845449 [Rhizoctonia] oryzae Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 229960000892 attapulgite Drugs 0.000 description 1
- CSGLCWIAEFNDIL-UHFFFAOYSA-O azanium;urea;nitrate Chemical compound [NH4+].NC(N)=O.[O-][N+]([O-])=O CSGLCWIAEFNDIL-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 150000007514 bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- UFMJCOLGRWKUKO-UHFFFAOYSA-N cardol diene Natural products CCCC=CCC=CCCCCCCCC1=CC(O)=CC(O)=C1 UFMJCOLGRWKUKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000008119 colloidal silica Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- CETRZFQIITUQQL-UHFFFAOYSA-N dmso dimethylsulfoxide Chemical compound CS(C)=O.CS(C)=O CETRZFQIITUQQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 239000004495 emulsifiable concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000028644 hyphal growth Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 235000021388 linseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000000944 linseed oil Substances 0.000 description 1
- 238000002803 maceration Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- PSZYNBSKGUBXEH-UHFFFAOYSA-M naphthalene-1-sulfonate Chemical compound C1=CC=C2C(S(=O)(=O)[O-])=CC=CC2=C1 PSZYNBSKGUBXEH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- URXNVXOMQQCBHS-UHFFFAOYSA-N naphthalene;sodium Chemical compound [Na].C1=CC=CC2=CC=CC=C21 URXNVXOMQQCBHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002420 orchard Substances 0.000 description 1
- 229910052625 palygorskite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000000361 pesticidal effect Effects 0.000 description 1
- 229920000371 poly(diallyldimethylammonium chloride) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920005646 polycarboxylate Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004382 potting Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000009528 severe injury Effects 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- RUQIYMSRQQCKIK-UHFFFAOYSA-M sodium;2,3-di(propan-2-yl)naphthalene-1-sulfonate Chemical compound [Na+].C1=CC=C2C(S([O-])(=O)=O)=C(C(C)C)C(C(C)C)=CC2=C1 RUQIYMSRQQCKIK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 229920001909 styrene-acrylic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 150000008054 sulfonate salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000012418 validation experiment Methods 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N31/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic oxygen or sulfur compounds
- A01N31/08—Oxygen or sulfur directly attached to an aromatic ring system
- A01N31/16—Oxygen or sulfur directly attached to an aromatic ring system with two or more oxygen or sulfur atoms directly attached to the same aromatic ring system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
- A01N25/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests containing liquids as carriers, diluents or solvents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
- A01N25/30—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests characterised by the surfactants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
- A01P1/00—Disinfectants; Antimicrobial compounds or mixtures thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
- A01P3/00—Fungicides
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
DESCRIZIONE
CAMPO DELL'INVENZIONE
La presente invenzione si riferisce in generale a composti aventi propriet? fungicide e battericide per usi agricoli.
BACKGROUND DELL'INVENZIONE
Parassiti delle piante e le malattie rappresentano un'importante sfida s per la produttivit? in agricoltura moderna. Gli agenti patogeni delle piante presenti nel suolo causano danni cruciali alle colture agricole. Il fungo fitopatogeno Rhizoctonia spp. appartiene alla stirpe filogenetica dei Basidiomiceti. Si provoca una vasta gamma di malattie delle piante commercialmente significativi, come cerotto marrone, smorzamento off in piantine, marciume radicale e marciume pancia nelle colture orticole e guaina batterico in riso. Tutte le malattie da Rhizoctonia e le successive infezioni secondarie nelle piante sono difficili da controllare ( Erlacher et al., 2014).
Pythium spp. ? un organismo fungo fitopatogeno che appartiene alla stirpe filogenetica di microrganismi eucarioti chiamati Oomycetes che causa la diffusa malattia di "smorzamento" delle piantine di tabacco, pomodoro, musta rd, peperoncini e crescione (Martin & Loper , 2010 ).
Pseudomonas spp. ? una pianta patogeni batterici genere che ? virulento nelle diverse matrici di piante coltivate e cause a foglia significativa e stelo lesioni. Pseudomonas spp. causa le seguenti malattie in piante e frutteti di colture economicamente significative come: necrosi del midollo nella pastinaca e nel pomodoro, macchia marrone e marciume bruno nel riso, cancro batterico nelle mandorle e malattia del nodo dell'olivo nelle olive (Moore LW, 1988; Hofte M. e De Vos P., 2006). Sono stati testati diversi metodi per la gestione di Pseudomonas spp. nelle piante coltivate. Includono la gestione culturale, la resistenza dell'ospite, il controllo biologico con antagonisti microbici e il controllo chimico. Nessuno di loro d? il pieno controllo.
Il numero di ingredienti attivi disponibili per la protezione delle colture contro queste malattie sta diminuendo di anno in anno a causa della crescente resistenza ai parassiti, delle condizioni climatiche irregolari e della crescente pressione normativa. Sono urgentemente necessari nuovi ingredienti attivi per lo sviluppo di nuove soluzioni per la protezione delle colture sostenibili dal punto di vista ambientale.
SOMMARIO DELL'INVENZIONE
In un aspetto, la presente invenzione ? diretta a una composizione pesticida comprendente il composto 5-8Z, 11Z, 14-pentadecatrien-1-il-1,3-benzenediolo ( C ardol triene , CAS n. 79473-24- 8 ) o un suo sale accettabile dal punto di vista agricolo come ingrediente pesticida attivo. Cardol triene ? un derivato del resorcinolo avente un sostituente 8-cis, 11-cis-pentadeca-8,11,14-trien-1-ile nella posizione 5 della seguente formula (I):
In un altro aspetto, la presente invenzione fornisce un metodo per controllare, prevenire, ridurre o sradicare l'infestazione da patogeni vegetali o casi di essa, su una pianta, un organo vegetale, una parte di pianta o un materiale di propagazione della pianta, il metodo comprendendo: applicare a una pianta, organo vegetale o materiale di propagazione della pianta, o al suolo che circonda detta pianta, una quantit? efficace di pesticida di un agente attivo comprendente C ardol triene o la formulazione di pesticidi di una qualsiasi delle forme di realizzazione sotto menzionate , in cui detto patogeno vegetale ? un membro selezionato da : un membro della famiglia Pythiaceae , un membro della classe Agaricomycetes e un membro dell'ordine Pseudomonadales.
BREVE DESCRIZIONE DEI DISEGNI
Figg. 1- 9 spettacolo effetto di Cardol triene ( CART ) sulla sopravvivenza cetriolo piantine utilizzando approccio preventivo in 9 esperimenti indipendenti determinato come percentuale della gravit? della malattia 7d dopo l'inoculazione con Pythium aphanidermatum.
Figg. 10-18 mostrano l'effetto di Cardol triene (CART) sull'approccio preventivo di sopravvivenza delle piantine di cetriolo in 8 esperimenti indipendenti determinati come percentuale della gravit? della malattia 7d dopo l'inoculazione con Rhizocotnia solani. * Mezzi valore p <0,05, ** mezzi che il valore p ? <0,01, # significa che valore p <0,1 Per la formulazione s descrizione usato per Cardol triene vedere esame ple 11. Cardol triene ha dimostrato un'eccellente efficacia a prevenire la morte piante a seguito di infezione da Pythium aphanidermatum : u p al 97,6% di efficacia a 100ppm ; fino al 100% di efficacia a 200 ppm e fino al 71,4 % di efficacia a 4 00 ppm. Cardol triene ha mostrato un'eccellente efficacia nel prevenire la morte delle piante a seguito di infezione da Rhizoctonia solani : fino all'81,2 % di efficacia a 100 ppm; fino al 100% di efficacia a 200ppm e fino al 98.4% efficacia a 400ppm.
DESCRIZIONE DETTAGLIATA DELL'INVENZIONE
? stato trovato in conformit? con la presente invenzione che il Cardol triene ? un potente pesticida contro il Pythium aphanidermatum , un membro della famiglia delle Pythiaceae ; Rhizoctonia solani , un membro della classe Agaricomycetes ; e Pseudomonas syringae , un membro dell'ordine Pseudomonadales.
Il registro CAS identifica il C ardol triene come 5-8Z, 11Z, 14-pentadecatrien-1-il-1,3- benzenediol. Il numero di registro CAS ?: 79473-24-8. ? un derivato del resorcinolo avente un sostituente 8-cis, 11-cis-pentadeca-8,11,14-trien-1-ile nella posizione 5 della seguente formula (I)
(I)
In alcune forme di realizzazione, la composizione antiparassitaria comprende inoltre un solvente o agente solubilizzante adatto o accettabile per l'agricoltura.
In alcune forme di realizzazione, il solvente o l'agente solubilizzante accettabile dal punto di vista agricolo ? un solvente miscibile in acqua in grado di sciogliere o solubilizzare il C ardolo triene.
In alcune forme di realizzazione, il solvente miscibile in acqua in grado di sciogliere o solubilizzare C ardol triene ? un solvente polare, come un alcol, un chetone, un lattone, un cheto-alcol, un glicole, un glicoetere , un'ammide, un solfossido e un pirolidone.
In forme di realizzazione particolari, la composizione comprende un solvente scelto tra dimetilsolfossido o etanolo e un tensioattivo non ionico di tipo polisorbato che ? polisorbato 20.
In un altro aspetto, la presente invenzione fornisce un metodo per controllare, prevenire, ridurre o sradicare l'infestazione da patogeni vegetali o casi di essa, su una pianta, un organo vegetale, una parte di pianta o materiale di propagazione della pianta, il metodo comprendendo: applicare a una pianta, organo vegetale o materiale di propagazione della pianta, o al suolo che circonda detta pianta, una quantit? efficace dal punto di vista pesticida di un agente attivo comprendente un cardol triene o suoi sali pesticidi attivi come ingrediente pesticida attivo , o la composizione pesticida di una qualsiasi delle forme di realizzazione di cui sopra , in cui detto patogeno vegetale ? un membro scelto tra: un membro della famiglia Pythiaceae , un membro della classe Agaricomycetes , e un membro dell'ordine Pseudomonadales.
Il metodo di trattamento della presente invenzione ? utile ad esempio contro le seguenti malattie : Rhizoctonia spp. causando macchie marroni, smorzamento nelle piantine, marciume radicale e addominale nelle verdure e ruggine della guaina nel riso ; Malattia di "smorzamento" causata da Pythium spp. in piantine di tabacco, pomodori, cetrioli, senape, peperoncini e crescione ; Pseudomonas spp. necrosi del midollo nella pastinaca e nel pomodoro, macchia marrone e guaina fogliare marciume bruno nel riso, cancro batterico nelle mandorle e malattia del nodo dell'olivo nelle olive.
In alcune forme di realizzazione, il patogeno vegetale ? un membro della famiglia delle Pythiaceae.
In alcune forme di realizzazione, il patogeno vegetale Pythiaceae ? un membro del genere Pythium , come Pythium aphanidermatum e Pythium ultimum.
In alcune forme di realizzazione, l' agente patogeno delle piante ? la specie Pythium aphanidermatum.
In alcune forme di realizzazione, il patogeno delle piante ? un membro della classe Agaricomycetes.
In alcune forme di realizzazione, il patogeno vegetale Agaricomycetes ? un membro dell'ordine Cantharellales.
In alcune forme di realizzazione, il patogeno vegetale Cantharellales ? un membro della famiglia delle Ceratobasidiaceae.
In certe realizzazioni, il Ceratobasidiaceae pianta-patogeno ? un membro del genere Rhizoctonia , come Rhizoctonia solani , Rhizoctonia bataticola noto anche come Macrophomina phaseolina , Rhizoctonia carotae noto anche come Fibulorhizoctonia carotae , Rhizoctonia cerealis - forma asessuata di Ceratobasidium cereale, Rhizoctonia crocorum anche noto come Thanatophytum crocorum (forma asessuata di Helicobasidium purpureum ), Rhizoctonia fragariae che forma asessuata di Ceratobasidium cornigeru m , Rhizoctonia goodyerae-Repentis noto anche come Ceratobasidium cornigerum , Rhizoctonia oryzae noto anche come Waitea circinate, e Rhizoctonia ramicola noto anche come Ceratorhiza ramicola ( forma asessuata di Ceratobasidium ramicola ).
In alcune forme di realizzazione, l' agente patogeno delle piante ? Rhizoctonia solani.
In alcune forme di realizzazione, il patogeno vegetale ? un membro dell'ordine Pseudomonadales.
In alcune forme di realizzazione, il patogeno vegetale Pseudomonadales ? un membro della famiglia Pseudomonadaceae.
In alcune forme di realizzazione, il patogeno vegetale Pseudomonadales ? un membro del genere Pseudomonas , come Pseudomonas aeroginosa e Pseudomonas syringae.
In alcune forme di realizzazione, l' agente patogeno delle piante ? la specie Pseudomonas syringae.
La composizione pesticida della presente invenzione pu? essere formulata in una formulazione per facilitare l'applicazione dell'ingrediente pesticida attivo.
La formulazione pu? essere una formulazione miscibile con acqua, come ad esempio una sospensione concentrat e (SC), una sospensione di capsule (CS), impermeabile dispersi granulato (WG), un emulsionabile concentrato (CE), una polvere bagnabile (WP), un solubile (liquido) concentrat e (SL), e una polvere solubile (SP).
Questa formulazione pu? inoltre comprendere almeno un solvente o agente solubilizzante, adiuvante, veicolo, diluente e / o tensioattivo.
Esempi non limitativi di adiuvanti sono gli adiuvanti attivatori, come tensioattivi cationici, anionici o non ionici, oli e fertilizzanti a base di azoto in grado di migliorare l'attivit? del prodotto antiparassitario. Oli possono essere oli colture, come paraffina o nafta olio sede petrolio, concentrati oleosi basato su emulsionabile olio a base di petrolio e concentrati olio vegetale derivati da olio di semi, di solito di cotone, lino, soia o olio di girasole, usati per il controllo erbacce erbose. I fertilizzanti a base di azoto possono essere solfato di ammonio o nitrato di ureaammonio.
Esempi non limitativi di agenti o solventi solubilizzanti sono i solventi a base di petrolio, i suddetti oli, miscele liquide di acidi grassi, etanolo, glicerolo e dimetilsolfossido. Il solvente o l'agente solubilizzante accettabile dal punto di vista agricolo pu? essere un solvente miscibile in acqua in grado di sciogliere o solubilizzare Cardol triene , come un solvente polare, ad esempio un alcol, un chetone, un lattone, un chetoalcol, un glicole, un glycoether , un ammide, un alcanolammina, un solfossido e un pirolidone.
Esempi non limitativi di veicoli sono silice precipitata, silice colloidale, attapulgite, argilla cinese, talco, caolino e loro combinazioni.
La formulazione pesticida pu? inoltre comprendere un diluente, come lattosio, amido, urea, sali inorganici solubili in acqua e loro combinazioni.
La formulazione di pesticidi pu? inoltre comprendere uno o pi? tensioattivi, come tensioattivo non ionico di tipo polisorbato, polimeri disperdenti acrilici stirene, agenti disperdenti a base di copolimeri di resina acida, policarbossilato di potassio, miscela di sodio alchil naftalensolfonato, sodio diisopropilnaftalensolfonato , sale di sodio di naftalene sali di lignina solfonato e loro combinazioni.
T si attiva agente , composizione o formulazione comprendente esso, viene applicato nel metodo secondo una qualsiasi delle precedenti forme di realizzazione per la pianta o parte, organo , terreno circostante l'impianto o materiale di propagazione della stessa mediante spruzzatura, immersione, medicazione, rivestimento, pellet , irrigazione a goccia o ammollo.
Definizioni
Il termine " Cardol triene " include il composto basico C ardol triene in una forma neutra e anche suoi sali accettabili dal punto di vista agricolo.
Il termine " p lant organo" come qui utilizzato si riferisce alla foglia, gambo, radice, e strutture riproduttive.
Il termine " parte di pianta " come qui utilizzato si riferisce a un materiale vegetale vegetativo come un taglio o un tubero , una foglia, un fiore, una corteccia o uno stelo.
Il termine "materiale di propagazione vegetale" come qui usato si riferisce a un seme, radice, frutto, tubero, bulbo, rizoma o parte di una pianta.
Il termine " quantit? efficace di pesticida" come qui usato si riferisce a una quantit? di pesticida che ? in grado di provocare la morte di almeno un parassita, o di ridurre notevolmente la crescita, l'alimentazione, l' infestazione o il normale sviluppo fisiologico di parassiti.
I termini "classe", "ordine", "famiglia", "genere" e "specie" sono usati nel presente documento secondo l'Art 3.1 del Codice Internazionale di Nomenclatura per alghe, funghi e piante.
Il termine "comprendente", utilizzato nelle rivendicazioni, ? "aperto" e indica gli elementi recitati, o il loro equivalente in struttura o funzione, pi? qualsiasi altro elemento o elementi non recitati. Non dovrebbe essere interpretato come limitato ai mezzi elencati di seguito; non esclude altri elementi o passaggi. Deve essere interpretato come una specifica della presenza delle caratteristiche, dei numeri interi, dei passaggi o dei componenti dichiarati a cui ci si riferisce, ma non preclude la presenza o l'aggiunta di una o pi? altre caratteristiche, numeri interi, passaggi o componenti o gruppi di essi. Pertanto, la portata dell'espressione "una composizione comprendente xez" non deve essere limitata a composizioni contengano esclusivamente compo unds xe z. Inoltre, l'ambito dell'espressione "un metodo comprendente i passaggi x e z" non dovrebbe essere limitato ai metodi costituiti solo da questi passaggi.
Come qui utilizzato, il termine "e / o" include qualsiasi e tutte le combinazioni di uno o pi? degli elementi elencati associati. Salvo diversa definizione, tutti i termini (compresi i termini tecnici e scientifici) utilizzati nel presente documento hanno lo stesso significato comunemente inteso da una persona di ordinaria competenza nell'arte a cui appartiene questa invenzione. Si comprender? inoltre che i termini, come quelli definiti nei dizionari di uso comune, dovrebbero essere interpretati come aventi un significato coerente con il loro significato nel contesto della specifica e della relativa arte e non dovrebbero essere interpretati in modo idealizzato o eccessivamente formale senso se non espressamente cos? definito nel presente documento. Funzioni o costruzioni ben note potrebbero non essere descritte in dettaglio per brevit? e / o chiarezza.
Salvo diversa indicazione, tutti i numeri usati in questa specifica devono essere intesi come modificati in tutti i casi dal termine "circa". A meno che non sia specificatamente indicato, come qui utilizzato, il termine "circa" ? inteso come all'interno di un intervallo di tolleranza normale nella tecnica, per esempio entro due deviazioni standard della media. In una forma di realizzazione, il termine "circa" significa entro il 10% del valore numerico riportato del numero con cui viene utilizzato, preferibilmente entro il 5% del valore numerico riportato. Ad esempio, il termine " un incontro " pu? essere immediatamente compreso come compreso tra 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5%, 0,1% , 0,05% o 0,01% del valore dichiarato. In altre forme di realizzazione , il termine "circa" pu? significare una tolleranza di variazione pi? elevata a seconda, ad esempio, della tecnica sperimentale utilizzata. Dette variazioni di un valore specificato sono comprese dalla persona esperta e rientrano nel contesto della presente invenzione. A titolo illustrativo, un intervallo numerico da " circa 1 a circa 5 " dovrebbe essere interpretato in modo da includere non solo i valori esplicitamente recitati da circa 1 a circa 5, ma includere anche valori individuali e sotto-intervalli entro l'intervallo indicato. Pertanto, in questo intervallo numerico sono inclusi valori individuali come 2, 3 e 4 e sottointervalli , ad esempio 1-3, 2-4 e 3-5, nonch? 1, 2, 3, 4, 5 o 6, individualmente. Lo stesso principio si applica agli intervalli che recitano un solo valore numerico come minimo o massimo. Salvo diversamente chiaro dal contesto, tutti i valori numerici qui forniti sono modificati dal termine " circa ". Altri termini simili, come "sostanzialmente", "generalmente", "fino a" e simili devono essere interpretati come una modifica di un termine o di un valore in modo tale che non sia un assoluto. Tali termini saranno definiti dalle circostanze e dai termini che modificano in quanto tali termini sono intesi dagli esperti del ramo. Ci? include, almeno, il grado di errore sperimentale atteso , errore tecnico ed errore strumentale per un dato esperimento, tecnica o strumento utilizzato per misurare un valore.
L'invenzione verr? ora illustrata dai seguenti esempi non limitativi.
ESEMPI
Elenco delle abbreviazioni:
RPM - Giri al minuto
RCF - Forza centrifuga relativa
CFU - Unit? formante colonie
PDBC - Brodo di destrosio di patate con 20 ug / ml di cloramfenicolo
PDAC - Agar destrosio di patate con 20 ug / ml di cloramfenicolo
PDAT - Agar destrosio di patate con 12 ug / ml di tetraciclina
DMSO - Dimetilsolfossido
Brodo LB - LB
LBA - Agar LB
SCH - Schmittner medio
2: PDBC - PDBC diluito 2 volte con acqua distillata sterile PDA - Agar destrosio di patate
PDBT - Brodo di destrosio di patate con 12 ug / ml di tetraciclina
Esempio 1. Analisi su micropiastra di screening della bioattivit? di composti contro Rhizoctonia Solani
Sommario:
Diluito in DMSO Cardol triene ? stato aggiunto ai pozzetti della micropiastra e miscelato con 50 ?l di sospensione di ife e la crescita del fungo, a partire dalle ife miscelate, ? stata monitorata mediante lettore di piastre e ispezione visiva.
Sono stati utilizzati i seguenti materiali, metodi e attrezzature:
Materiali: PDAC, PDBC, DMSO
Attrezzatura: lettore di piastre, centrifuga, agitatore, incubatrice
Metodo:
Preparazione dell'inoculo di Rhizoctonia solani ife:
Coltivare Rhizoctonia su PDAC in piastre di Petri da 90 mm per ottenere ife in crescita entro 1-4 giorni.
Aggiungere 50 ml di terreno PDBC in una beuta sterile da 250 ml di Erlenmeyer.
Tagliare il terreno solido con un bisturi in diversi piccoli pezzi e inserirli nel matraccio di Erlenmeyer.
Coltivare la coltura per 2-4 giorni utilizzando l'agitatore a 27 <o >C e 150 giri / min.
Eliminare il liquido e versare le ife su una capsula di Petri vuota.
Tagliare molti piccoli pezzi dalle ife usando un bisturi e inserirli in una beuta sterile da 250 ml con 50 ml di terreno PDBC.
Preparare 4 bottiglie con la coltura e far crescere per 3 giorni a 27 <o >C agitando a 150 RPM.
Raffredda la coltura in frigorifero per 1 ora.
Versare la coltura fredda in un becher da 250 ml.
Aggiungere 20 ml di PDBC freddo, in modo che il composto copra il coltello del frullatore.
Frullare la coltura con un frullatore per 2 minuti su ghiaccio alla massima velocit?, spostare il frullatore su e gi? pi? volte.
Mantieni la miscela in ghiaccio.
Trasferire circa 5 ml della miscela miscelata in una provetta da 15 ml su ghiaccio.
Omogeneizzare la cultura nella provetta da 15 ml per 2 minuti su ghiaccio, spostare la provetta su e gi? secondo necessit?.
Omogeneizzare diversi lotti di 5 ml come sopra per preparare la quantit? necessaria (5 ml di coltura omogeneizzata farebbero circa 100 ml di inoculo).
Diluire 10 volte una porzione dell'omogenato per controllare la concentrazione dell'omogeneizzato. La concentrazione della sospensione dovrebbe essere 4X10 <4 >CFU / ml (la concentrazione diluita 10 volte dovrebbe essere 4000 CFU / ml).
Diluire lo stock di inoculo 1:20 in PDBC - 1 ml in 20 ml, oppure calcolare la diluizione necessaria, per preparare la concentrazione finale di 2000 CFU / ml. La quantit? in ogni pozzetto dovrebbe essere di circa 100 CFU.
La preparazione di micropiastre per composti bio attivit? esperimento :
1) Prendi una soluzione stock di Cardol triene purificato all'1% in DMSO dal congelatore -20 e scongelalo sul banco.
2) Prendere 1ul di soluzione stock di Cardol triene all'1 % e diluire fino a 250 ppm con 39ul di acqua.
3) Prendere 10ul del diluito (250ppm) Cardol triene soluzione nei pozzetti della micropiastra con un multi-pipetta.
4) Aggiungere 40 ?l di inoculo in sospensione di spore miscelato vigorosamente nei pozzetti della micropiastra utilizzando una pipetta multipla.
5 ) Sigillare la piastra con sigillante trasparente
6 ) Agitare la piastra per 10 minuti a 2000 giri / min per miscelare il Cardol triene con la sospensione di ife
7) Centrifugare la piastra a 1000RCF per 1 secondo e fermarsi per raccogliere il liquido sul fondo della piastra
8 ) Tenere la micropiastra sul banco fino a quando non viene letta dal lettore di piastre
9 ) Leggere la targa utilizzando il lettore di targhe
10 ) Raccogliere i piatti sul banco
11 ) Inserire le piastre raccolte in una scatola di plastica con copertura in tessuto e mettere la scatola nell'incubatore a 27 <o >C
Screening delle lastre:
1) Schermare la piastra in altre 3 date: 3d, 7d, 14d e 21g dopo l'inizio dell'analisi
2) Calcola la differenza di assorbanza tra ogni schermo e la lettura a tempo zero
3) Calcolare la percentuale di inibizione della crescita di ogni pozzetto in ogni momento. Utilizzare i risultati del trattamento DMSO della piastra di controllo come crescita del 100%.
Risultati: vedi esempio 10
Esempio 2. Screening su micropiastra di composti con potenziale bioattivit? contro Pythium aphanidermatum
Sommario:
Diluito in DMSO Cardol triene w da aggiungere ai pozzetti e mescolato con 50ul di zoospore in sospensione PDBC e la crescita del fungo, partendo da zoospore, ? stato monitorato dal lettore di piastra e ispezione visiva.
Sono stati utilizzati i seguenti materiali, metodi e attrezzature: Materiali:
SCH, PDBC, DMSO
Dotazione:
Lettore di piastre, Centrifuga, Agitatore, Incubatrice Metodo:
Preparazione dell'inoculo di ife di Pythium:
Coltivare Pythium aphanidermatum su SCH in piastre di Petri da 90 mm per ottenere ife sporulanti. Ogni piastra produrr? 50 ml di sospensione di zoospore che sar? sufficiente per lo screening della bioattivit? per dieci piastre da 96 pozzetti.
Aggiungere 60 ml di H 2 O sterile in una beuta sterile da 250 ml.
Tagliare il terreno solido di 2 piatti con un bisturi a 12 pezzi (ogni piatto) e inserirli nella beuta (i pezzi solidi devono essere coperti dall'acqua).
Lascia che le ife sporulino per una notte a 17 <o >C.
Agitare a mano la beuta di Erlenmeyer per sospendere le zoospore.
Filtrare la sospensione in un tubo da 50 ml attraverso una garza a 16 strati.
Trasferire la sospensione in un flacone sterile da 500 ml.
Eliminare i solidi e disinfettare la beuta di Erlenmeyer con ipoclorito.
Raffredda la sospensione di zoospora sul ghiaccio.
Valutare la concentrazione di zoospore nella sospensione (la concentrazione dovrebbe essere 1000 - 4000 spore / ml).
Diluire la sospensione in frigorifero sterile H 2 O distillata a freddo in una bottiglia sterile da 500 ml.
Aggiungere lo stesso volume (della sospensione) in frigorifero sterile 2: PDBC per ottenere 500-2000 spore / ml di inoculo. Questa diluizione dar? come risultato una quantit? di 25-100 zoospore in ogni pozzetto.
Tenere l'inoculo in sospensione di zoospore su ghiaccio.
Preparazione della micropiastra per l' esperimento di bioattivit? di Cardol triene :
1) Prendere una soluzione stock di C ardol triene purificato all'1% in DMSO dal congelatore -20 e scongelarlo sul banco.
2) Prendere 1ul di soluzione madre di Cardol triene all'1 % e diluire fino a 250 ppm con 39 ul di acqua.
3) Prendere 10ul del diluito (250ppm) Cardol triene soluzione nei pozzetti della micropiastra con un multi-pipetta.
4) Aggiungere 40 ?l di inoculo in sospensione di spore miscelato vigorosamente nei pozzetti della micropiastra utilizzando una pipetta multipla.
5 ) Sigillare la piastra con sigillante trasparente
6 ) Agitare la piastra per 10 minuti a 2000 giri / min per miscelare il Cardol triene con la sospensione di ife
7 ) Centrifugare la piastra a 1000RCF per 1 secondo e fermarsi per raccogliere il liquido sul fondo della piastra
8 ) Tenere la micropiastra sul banco fino a quando non viene letta dal lettore di piastre
9 ) Leggere la targa utilizzando il lettore di targhe
10 ) Raccogliere i piatti sul banco
11 ) Inserire le piastre raccolte in una scatola di plastica con copertura in tessuto e mettere la scatola nell'incubatore a 27 <o >C Screening delle lastre:
1) Leggere la piastra in altre 3 date: 3d, 7d, 14d e 21g dopo l'inizio del test
2) Calcola la differenza di assorbanza tra ogni lettura e la lettura a tempo zero
3) Calcolare la percentuale di inibizione della crescita di ogni pozzetto in ogni momento. Utilizzare i risultati del trattamento DMSO della piastra di controllo come crescita del 100%
Risultati: vedi esempio 10
Esempio 3. Screening su micropiastra di composti per la potenziale bioattivit? contro Pseudomonas syringae
Sfondo:
Pseudomonas ? un batterio Gram-negativo a forma di bastoncello. Lo stock batterico congelato in glicerolo al 60% ? stato utilizzato come inoculo per gli esperimenti di screening della bioattivit?.
Sommario:
Diluito in DMSO Cardol triene w da aggiungere ai pozzetti e mescolato con 100 ul di batteri sospensione e la crescita del congelate Pseudomonas stata monitorata mediante ispezione visiva.
Sono stati utilizzati i seguenti materiali , metodi e attrezzature:
Materiali: LB, LBA, DMSO
Attrezzatura: Centrifuga, Agitatore, Incubatrice
Metodo
Preparazione della sospensione di Pseudomonas:
1) Coltivare Pseudomonas su piastre LBA a 28 <o >C per 2 giorni per ottenere una singola colonia
2) Trasferire una singola colonia utilizzando uno stuzzicadenti sterile in una provetta sterile da 50 ml contenente 5 ml di LB e crescere per 24 a 28 <o >C e 150 RPM
3) Raffredda la provetta in frigo per 1 ora
4) Aggiungere 7,5 ml di soluzione di glicerina fredda e sterile nel tubo per ottenere una soluzione di glicerolo al 60%
5) Mescolare bene ma delicatamente per ottenere una miscelazione perfetta - utilizzare il vortex a 1000 giri / min
6) Aliquota 100 ul di sospensione batterica in glicerolo al 60% in provette da 1,5 ml - ciascuna aliquota dovrebbe essere sufficiente per lo screening di 10 micropiastre
7) Conservare la sospensione batterica nel 60% di glicerolo a -20 <? >C
Preparazione della sospensione di Pseudomonas per l' esperimento di screening della bioattivit? :
1) Prendere una provetta da 1,5 ml con 100 ul di sospensione di Pseudomonas congelata dal congelatore e scongelarla in ghiaccio 2) Preparare nella cappa tubi da 50 ml con 40 ml di frigorifero LB freddo
3) Mescolare 40 ul di sospensione batterica con 40 ml di LB freddo da frigorifero in un tubo da 50 ml. Questa quantit? ? sufficiente per lo screening dell'attivit? di 10 micropiastre
4) Utilizzare questa sospensione per esperimenti di screening della bioattivit?
Microplate s ' preparazione per bio attivit? di screening esperimento:
1) Prendere una soluzione stock di Cardol triene purificato all'1% in DMSO dal congelatore a -20 <? >C e scongelarlo sul banco.
2) Prendere 1ul di soluzione stock di Cardol triene all'1 % e diluire fino a 250 ppm con 39ul di acqua.
3) Prendere 10ul del diluito (250ppm) Cardol triene soluzione nei pozzetti della micropiastra con un multi-pipetta.
4) Aggiungere 40 ?l di inoculo di sospensione batterica mescolato vigorosamente ai pozzetti della micropiastra utilizzando una pipetta multipla.
5) Sigillare la piastra con un sigillante trasparente
6) Agitare la piastra per 10 minuti a 2000 giri / min mescolare il Cardol triene con la sospensione batterica
7) Centrifugare la piastra a 1000RCF per 1s e fermarsi per raccogliere il liquido sul fondo della piastra
8) Inserire le piastre in una scatola di plastica con coperchio e collocare la scatola nell'incubatore a 28 <o >C
Screening della bioattivit? delle micropiastre:
1) Effettuare lo screening della micropiastra in 5 date: 3, 5, 7, 14 e 21 giorni dopo l'inoculazione
2) Utilizzare una lampada per valutare visivamente la crescita batterica
3) Preparare le piastre per lo screening: agitare la piastra a 2000 RPM per 2 minuti per sospendere i batteri e quindi centrifugare la piastra a 1000RCF per alcuni secondi
4) Schermare le micropiastre dopo aver rimosso il loro coperchio, se c'? del liquido sul coperchio (dall'interno) evaporare il liquido usando un blocco riscaldato a 60 <o >C
5) Confrontare la trasparenza di ciascun pozzetto con la trasparenza dei pozzetti di controllo (pozzetti contenenti battericida di controllo o soluzione DMSO allo 0,5%)
Registrare i risultati utilizzando la seguente interpretazione : chiaro = 3 (nessuna crescita di batteri), torbido = 1 (normale crescita batterica), inconcludente = 2 (torbidit? molto bassa rispetto alla crescita in una soluzione di DMSO allo 0,5% ).
Risultati: vedi esempio 10
Esempio 4. Test su micropiastra della bioattivit? dei composti contro Puccinia sorghi
Sfondo: Puccinia ? un fungo appartenente ai Basidiomiceti, ed ? un patogeno trasportato dall'aria. Le spore di Puccinia sono state coltivate su piante di mais, in una stanza di crescita, e per ogni esperimento ? stata preparata una sospensione di spore fresche dalle foglie di mais infette. Poich? Puccinia ? un patogeno obbligatorio e non cresce su terreno sintetico, ? stata monitorata solo la germinazione delle spore come indicazione della bioattivit? dei composti.
Riepilogo: Diluito in DMSO Cardol triene ? stato aggiunto ai pozzetti della micropiastra e miscelato con una sospensione di spore preparata di fresco e la germinazione delle spore ? stata monitorata mediante ispezione visiva al microscopio.
Materiali: detergente non ionico Tween20 ( Tidea Company INC), solvente DMSO - dimetilsolfossido (JT Baker - Polonia)
Attrezzatura: Centrifuga, Agitatore, Incubatrice, Microscopio Metodo
Preparazione delle spore di Puccinia
Preparazione di mais piantina s per l'inoculazione:
1) Usa pentole 120X80X80mm
2) Utilizzare un terreno da giardino standard con fertilizzante 3) Usa semi di mais di una variet? sensibile
4) Mettere le pentole in un piccolo vassoio
5) Riempi i vasi con la terra fino in cima
6) Crea un piccolo boschetto rotondo per i semi
7) Pianta circa 10 semi di mais in ogni vaso
8) Copri i semi con altro terriccio
9) Aggiungere l'acqua nella teglia - circa 100 ml per ogni pentola. Il terreno deve essere umido e l'acqua non deve essere lasciata nel vassoio dopo 24 ore
10) Coltivare il mais per 7 giorni, in camera di crescita a 22 <o >C (fino a quando non ? emersa la seconda foglia)
Preparazione della sospensione di spore [da foglie di mais] per l'inoculazione e per lo studio della germinazione:
1) Inserisci 2 0 foglie di mais con spore, in un tubo sterile da 50 ml
2) Aggiungere 50 ml di soluzione di Tween 20 allo 0,05% in frigorifero
3) Inserire il tubo in una scatola di plastica sigillata, raffreddata con ghiaccio
4) Agitare la scatola utilizzando uno shaker a 300 RPM per 15 min
5) Trasferire la sospensione (senza le foglie) in un tubo sterile pulito da 50 ml
6) Tenere la provetta con la sospensione di spore sul ghiaccio Inocul um preparazione:
1) Diluire la sospensione di spore per ottenere 300 ml utilizzando una soluzione fredda di Tween 20 allo 0,05%
2) Controllare la concentrazione di spore nella sospensione - la concentrazione dovrebbe essere di circa 600 spore / ml e la sospensione dovrebbe avere un colore marrone chiaro
3) Tenere la sospensione di spore sul ghiaccio Valutazione della germinazione:
1) Preparare il sistema di filtrazione con membrana da 5 micron e lavare la membrana con acqua fredda sterile
2) Sospendere e decantare lentamente la sospensione di spore dal tubo da 50 ml nel sistema di filtrazione al centro della membrana le spore dovrebbero accumularsi sulla membrana
3) Lavare le spore per eliminare batteri e altre spore di funghi - interrompere l'aspirazione e spruzzare acqua sterile fredda per sospendere e lavare le spore, riprendere l'aspirazione
4) Ripetere il lavaggio con le spore altre 2 volte
5) Inserire la membrana con le spore nella provetta con 30 ml di Tween 20 sterile freddo 0,05% e agitare la provetta a mano
6) Rimuovere la membrana e gettarla
7) Decantare il liquido filtrato nel lavello e lavare il sistema di filtrazione con acqua di rubinetto e asciugarlo
8) Aggiungere 30 ?l di soluzione madre di cloramfenicolo (20 mg / ml) fino a una concentrazione finale di 20 ?g / ml
9) Filtrare la sospensione di spore attraverso 8 strati di garza in un tubo da 50 ml.
10) Controllare la concentrazione di spore nella sospensione -la concentrazione dovrebbe essere di circa 7,5X10 <3 >spore / ml e dovrebbe avere un colore marrone. Trenta ml di sospensione di spore dovrebbero essere sufficienti per lo screening di 20 micropiastre
11) Tenere la sospensione di spore sul ghiaccio
Infezione da piantine:
1) Trasferire la sospensione di spore in un becher da 250 ml 2) Gira lentamente un agitatore da 20 mm (500 RPM) per mantenere le spore in sospensione e aggiungi ghiaccio intorno al becher 3) Immergere le foglie di tutte le piantine nel vaso nella sospensione di spore per 10 min
4) Mettere i vasi con le piantine inoculate in una camera umida con acqua riscaldata a 22 ? C e 99% di umidit? per 24 ore (riscaldare l'acqua a 32 ? C)
5) Dopo 24 h, trasferire i vasi nella stanza di crescita e coprire le piantine con i sacchetti di plastica
6) Coltivare il mais nella stanza di crescita a 22 ? C
7) Dopo 7 giorni dall'inoculo, dovrebbero essere visibili macchie marroni sulle foglie
8) Dopo 11 giorni dall'inoculo rimuovere i sacchetti di plastica per evitare contaminazioni fungine e utilizzare un elastico per tenere insieme le piantine
9) Dopo 12 giorni dall'inoculo le foglie con le spore possono essere raccolte per le spore preparazione della sospensione
Preparazione della micropiastra per lo screening delle spore di Puccinia germinate :
1) Prendere una soluzione stock di Cardol triene purificato all'1% in DMSO dal congelatore a -20 ? C e scongelarlo sul banco.
2) Prendere 1ul di soluzione stock di Cardol triene all'1 % e diluire fino a 250 ppm con 39ul di acqua.
3) Prendere 10ul del diluito (250ppm) Cardol triene soluzione nei pozzetti della micropiastra con un multi-pipetta.
4) Aggiungere 9 0 ?l di inoculo di sospensione di spore di Puccinia miscelato vigorosamente ai pozzetti della micropiastra utilizzando una pipetta multipla.
5) Sigillare tutte le piastre con un sigillante trasparente 6) Centrifugare tutte le piastre di prova a 1000RCF per 1 secondo e fermarsi per raccogliere il liquido sul fondo della piastra 7) Agitare tutte le piastre a 1000 RPM per 10 secondi e controllare la dispersione delle spore nel pozzetto
8) Inserire tutte le piastre in una scatola di plastica e mettere la scatola nell'incubatore a 25oC per tutta la notte
Screening delle lastre:
1) Schermo piatto 12-24 ore dopo la preparazione della sospensione utilizzando il microscopio con ingrandimento 10X10
2) Confrontare la germinazione delle spore di ciascun pozzetto con la germinazione delle spore dei pozzetti della piastra di controllo (pozzetti contenenti fungicidi attivi o soluzione DMSO allo 0,5%)
3) Segnala la germinazione delle spore nel foglio Excel: tipo - 1 se le spore hanno germogliato correttamente (allungamento del tubo normale)
tipo - 2 se le spore hanno germogliato male o non sono in alcun modo normali (tubi di germinazione molto corti, bassa frequenza di germinazione delle spore, tubi danneggiati)
tipo - 3 se le spore non sono germinate affatto (spore sane, nessun tubo)
4) Calcola il numero di ripetizioni dei punteggi 2 o 3 per ogni materiale
5) Calcola la somma dei punteggi di 2 e 3 per ogni materiale 6) Miglior punteggio: numero di ripetizioni = 4, somma dei punteggi = 12
Risultati: vedere l'esempio 10
Esempio 5. Screening su micropiastra della potenziale bioattivit? dei composti contro Sclerotinia sclerotiorum Sommario:
Diluito in DMSO Cardol triene ? stato aggiunto ai pozzetti della micropiastra e miscelato con 50 ?l di sospensione di ife e la crescita del fungo a partire da ife miscelate ? stata monitorata mediante ispezione visiva.
Sfondo:
La Sclerotinia sclerotiorum ? un fungo appartenente agli Ascomiceti ed ? un patogeno del suolo. ? difficile produrre grandi quantit? di spore di Sclerotinia sclerotiorum , che ha portato alla decisione di utilizzare ife in questo screening piuttosto che spore per l'inoculazione.
I seguenti m ateriali, i metodi e le attrezzature sono stati utilizzati:
Materiali: PDAC
, PDBC , DMSO
PDBC (PDB proviene da
il cloramfenicolo proviene da parte di
, PDA , PDAT (PDA , ; la tetraciclina proviene da , parte di ) , PDBT (PDB
tetraciclina proviene da , parte , DMSO ( di JT , parte
Attrezzatura: Centrifuga, Agitatore, Incubatrice
Metodi:
Preparazione dell'inoculo di Sclerotinia sclerotiorum ife:
1) Coltivare Sclerotinia sclerotiorum su PDA in provetta a 21 ? C per 4 giorni.
2) Trasferire il blocco di agar e coltivare Sclerotinia sclerotiorum su PDAT in piastre Petri da 90 mm a 21 ? C per ottenere ife in crescita entro 3 giorni.
3) Aggiungere 50 ml di terreno PDBT in un matraccio quadrato sterile da 250 ml.
4) Tagliare il terreno solido con un bisturi in 15 pezzi molto piccoli (1X5 mm) e inserirli nel pallone quadrato.
5) Coltivare la coltura per 2 giorni utilizzando l'agitatore a 21 ? C e 130 giri / min.
6) Eliminare il liquido e versare le ife su una capsula di Petri vuota.
7) Tagliare molti piccoli pezzi dalle ife (evitare di usare i pezzi di agar) usando un bisturi e inserirli in un pallone quadrato sterile da 250 ml contenente 50 ml di terreno PDBT.
8) Crescere per 2 giorni a 21 ? C, agitando a 130 RPM per ottenere ife disperse a crescita rapida.
9) Raffredda la coltura in frigorifero per 1 ora.
10) Versare la coltura fredda in una provetta da 50 ml. 11) Mantenere la miscela in ghiaccio.
12) Trasferire circa 5 ml della miscela miscelata in una provetta da 15 ml su ghiaccio.
13) Omogeneizzare la coltura nella provetta da 15 ml per 2 min su ghiaccio.
14) Omogeneizzare diversi lotti di 5 ml come sopra per preparare la quantit? necessaria (5 ml di coltura omogeneizzata farebbero circa 50 ml di inoculo).
15) Diluire 10 volte una porzione dell'omogeneizzato per controllare la concentrazione dell'omogeneizzato. la concentrazione della sospensione dovrebbe essere 2 X10 <4 >CFU / ml (la concentrazione diluita 10 volte dovrebbe essere2000 CFU / ml).
16) Diluire l'inoculo magazzino 1: 10 in PDBC - 2ml in 20 ml, oppure calcolare la diluizione necessaria per preparare la concentrazione finale di 2000 CFU / ml. Il numero finale di ife dovrebbe essere100 CFU in ogni pozzetto.
Preparazione della micropiastra per esperimento di attivit?:
1) Prendere una soluzione stock di Cardol triene purificato all'1% in DMSO dal congelatore e scongelarlo sul banco.
2) Prendere 1ul di soluzione stock di Cardol triene all'1 % e diluire fino a 250 ppm con 39ul di acqua.
3) Trasferire 10 ?l della soluzione diluita di Cardol triene (250 ppm) nei pozzetti della micropiastra utilizzando una pipetta multipla.
4) Aggiungere 40 ?l di inoculo in sospensione di spore miscelato vigorosamente nei pozzetti della micropiastra utilizzando una pipetta multipla.
5) Sigillare la piastra con un sigillante trasparente.
6) Agitare la piastra per 10 minuti a 2000 giri / min mescolare il Cardol triene con la sospensione di ife.
7) Centrifugare la piastra a 1000RCF per 1 secondo e fermarsi per raccogliere il liquido sul fondo della piastra.
8) Raccogliere le piastre sul banco fino a quando tutte le micropiastre sono pronte per l'incubazione.
9) Inserire micropiastre in una scatola di plastica e mettere la scatola in incubatore a 21 <o >C.
Screening delle lastre:
1) Schermo piatto a 5 date: 4, 7, 14 e 21 giorni dopo l'inoculo.
2) Utilizzare una lampada per la valutazione visiva dell'effetto dei composti sulla crescita dei funghi nel tempo.
3) piastre di schermo dopo aver rimosso il coperchio, se c'? liquido sul coperchio (dall'interno) evaporare il liquido da un blocco riscaldato a 60 <o >C.
4) Confrontare la crescita delle ife di ciascun pozzetto alla crescita ifale dei pozzetti della piastra di controllo ( w ell contenenti fungicidi attivi o soluzione di DMSO 0,5%).
5) Scrivi i risultati su un modulo speciale: pozzetto chiaro = 3 (nessuna crescita di ife), struttura ifale normale = 1 (crescita normale), inconcludente = 2 (struttura solida di tipo inaspettato o copertura parziale dell'area).
Risultati: vedi esempio 10
Esempio 6. Test basato su micropiastra della bioattivit? dei composti contro Fusarium oxysporum
Sommario:
Diluito in DMSO Cardol triene ? stato aggiunto ai pozzetti della micropiastra e miscelato con una sospensione di spore appena preparata e la crescita del fungo, a partire dalle spore congelate, ? stata monitorata mediante lettore di piastre e ispezione visiva.
Sfondo:
Il Fusarium ? un fungo appartenente agli Ascomiceti ed ? un agente patogeno del suolo. E 'abbastanza facile da produrre grandi quantit? di spore di Fusarium , e sopravvivono in un liquido il 60% glicerolo a -20 <o >C, che ha portato alla decisione di utilizzare stock spore congelati in questo screening piuttosto che p Repare spore fresche per ogni esperimento.
Scopo:
Per determinare l'effetto di diversi composti sulla sopravvivenza e la crescita di Fusarium.
Sono stati utilizzati i seguenti materiali, metodi e attrezzature:
Materiali: PDAC ( Becton, Dickinson and Company , NJ, US), PDBC ( Becton, Dickinson and Company , NJ, US), DMSO ( JT Baker , Part of Fisher Scientific, US).
Attrezzatura : lettore di piastre , centrifuga , agitatore , incubatrice
Metodo :
Preparazione della sospensione di spore di Fusarium:
1) Mettere un blocco di agar di fusarium in crescita su PDAC al centro di una piastra PDAC e crescere per 9 giorni a 25 <o >C.
2) Lasciare raffreddare la piastra in frigorifero per almeno 1 ora.
3) Aggiungere 30 ml di soluzione di glicerolo sterile al 60% in frigorifero al tubo da 50 ml.
4) Tagliare l'agar con le ife e le spore, da una piastra, in piccoli pezzi, con un bisturi, e inserirli nella provetta da 50 ml con 30 ml di glicerolo al 60%.
5) Agitare per 1 minuto a 3000 RPM.
6) Tenere le spore sul ghiaccio durante l'intero processo.
7) Trasferire il liquido in una nuova provetta sterile da 50 ml -circa 25 ml dovrebbero essere recuperati.
8) Filtrare la sospensione di spore attraverso 16 strati di garza direttamente in una provetta sterile pulita da 50 ml per scartare le ife.
9) Calcolare la concentrazione di spore (contare X10 diluizione a 40X10 ingrandimento) e diluire con soluzione sterile fredda di glicerolo al 60% per ottenere 2X10 <5 >spore / ml.
10) Aliquota 1 ml di sospensione di spore in provette da 1,5 ml - ciascuna aliquota dovrebbe produrre 20 piastre per lo screening.
11) Conservare la sospensione di spore a -20 <o >C.
Preparazione della sospensione di spore per lo screening:
1) Prendi 1 ml di sospensione di spore congelata dal congelatore e scongelala su ghiaccio.
2) Mescolare 200 ul di sospensione di spore con 20 ml di PDBC freddo in frigorifero in una provetta da 50 ml per ottenere 2000 spore / ml di sospensione.
3) Utilizzare questa quantit? per lo screening di 4 micropiastre con 100 spore per pozzetto.
Preparazione della micropiastra per l'esperimento di screening:
1) Prendere una soluzione stock di Cardol triene purificato all'1% in DMSO dal congelatore e scongelarlo sul banco.
2) Prendere 1ul della soluzione stock di Cardol triene all'1 % e diluire fino a 250 ppm con 39ul di acqua.
3) Prelevare 10 ?l della soluzione di Cardol triene diluita (250 ppm) nei pozzetti della micropiastra utilizzando una pipetta multipla.
4) Aggiungere 4 0 ?l di inoculo di sospensione di spore miscelato vigorosamente nei pozzetti della micropiastra utilizzando una pipetta multipla.
5) Sigillare la piastra con un sigillante trasparente.
6) Agitare la piastra per 10 minuti a 2000 giri / min mescolare i materiali con la sospensione di ife.
7) Centrifugare la piastra a 1000RCF per 1 secondo e fermarsi per raccogliere il liquido sul fondo della piastra.
8) Tenere la micropiastra sul banco fino a quando non viene letta dal lettore di piastre.
9) Leggere la targa utilizzando il lettore di targhe.
10) Raccogliere i piatti sul banco.
11) Inserire collezionati piastre per una scatola di plastica con la copertura del panno e mettere la scatola in incubatore a 25 ? C.
Lettura delle piastre:
1) Raccogliere la lettura della piastra in altre 3 date: 3d, 7d, 14d e 21g dopo l' inizio del dosaggio.
2) Calcola la differenza di assorbanza tra ogni lettura e la lettura a tempo zero.
3) Calcolare la percentuale di inibizione della crescita di ciascun pozzetto ad ogni ciclo temporale. U SE i risultati del trattamento DMSO, della piastra di controllo come 100% di crescita.
Risultati: vedere l'esempio 10.
Esempio 7. Test basato su micropiastra della bioattivit? dei composti contro Pectobacterium carotovorum
Sommario:
Diluito in DMSO Cardol triene stato aggiunto a pozzetti e miscelati con 5 0ul di batteri sospensione e la crescita dei batteri congelato ? stato monitorato mediante ispezione visiva.
Sfondo:
Il Pectobacterium carotovorum , un batterio Gram-negativo a forma di bastoncello , ? un importante agente patogeno delle piante e causa gravi danni a molte colture agricole. Lo stock di batteri congelati in glicerolo al 60% ? stato utilizzato come inoculo per l'esperimento di screening.
Scopo:
Determinare l'effetto di diversi composti sulla sopravvivenza e la crescita di Pectobacterium carotovorum.
Materiali : LB ( da Becton, , LBA ( da Becton, , DMSO ( da JT Baker ,
Attrezzatura : Centrifuga , Agitatore , Incubatrice Metodo :
Preparazione della sospensione di Pectobacterium :
1) Coltivare Pectobacterium su piastre LBA a 28 <o >C per 2 giorni, per ottenere una singola colonia.
2) Trasferire una singola colonia, utilizzando una zecca di un dente sterile , in una provetta sterile da 50 ml contenente 5 ml di LB e far crescere per 24 a 28 <o >C, 150 RPM.
3) Raffreddare la provetta in frigorifero per pi? di 1 ora.
4) Aggiungere 7,5 ml di soluzione di glicerina fredda e sterile alla provetta per ottenere una soluzione di glicerolo al 60%.
5) Mescolare bene, ma delicatamente.
6) Aliquotare 100 ul di sospensione di batteri in glicerolo al 60% in provette da 1,5 ml - ciascuna aliquota dovrebbe fornire una quantit? sufficiente per lo screening di 10 micropiastre.
7) Conservare la sospensione batteri in 60% glicerolo a -20 <o >C.
Preparazione della sospensione di Pectobacterium per lo screening:
1) Prendi un tubo da 1,5 ml di (con 100 ul) sospensione di Pectobacterium congelata dal congelatore e scongelalo in ghiaccio.
2) Preparare nella cappa provette da 50 ml con 40 ml di brodo LB freddo da frigorifero diluito 8 volte con acqua sterile.
3) Miscela 8 ul di sospensione batteri con 40 ml frigo freddo diluito brodo LB in un tubo da 50 ml di prepararsi - di - uso Pectobacterium sospensione con mezzo di crescita.
4) Tenere in ghiaccio.
5) Utilizzare questa sospensione per esperimenti di scrematura.
Preparazione della micropiastra per l'esperimento di screening:
1) Prendere una soluzione stock di Cardol triene purificato all'1% in DMSO dal congelatore e scongelarlo sul banco.
2) Prendere 1ul di soluzione stock di Cardol triene all'1 % e diluire fino a 250 ppm con 39ul di acqua.
3) Trasferire 10 ?l della soluzione diluita di Cardol triene (250 ppm) nei pozzetti della micropiastra utilizzando una pipetta multipla.
4) Aggiungere 40 ?l di inoculo di sospensione batterica mescolato vigorosamente ai pozzetti della micropiastra utilizzando una pipetta multipla.
5) Sigillare la piastra con un sigillante trasparente.
6) Agitare la piastra per 10 minuti a 2000 giri / min mescolare i materiali con la sospensione batterica.
7) Centrifugare la piastra a 1000 RCF per 1s e fermarsi per raccogliere il liquido sul fondo della piastra.
8) Inserire le piastre ad una scatola di plastica, con coperchio e mettere la scatola in incubatore a 28 <o >C.
Screening di micropiastre:
1) Sc reen la micropiastra a 5 date: 3, 5, 7, 14 e 21 giorni dopo l'inoculo.
2) Utilizzare una lampada per valutare visivamente la crescita batterica.
3) Preparare le piastre per lo screening: s piastra di nasello a 2000 RPM per 2 min per sospendere i batteri e quindi c entrifugare la piastra a 1000RCF per 1 s.
4) Eseguire una valutazione visiva della crescita batterica nelle micropiastre dopo aver rimosso la copertura.
5) Confrontare la trasparenza di ogni pozzetto per la trasparenza dei pozzetti di controllo ( w ell contenenti attiva batterica ide o soluzione di DMSO 0,5% ).
6) Scrivere i risultati su un modulo speciale : chiaro = 3 (nessuna crescita di batteri), torbido = 1 (normale crescita batterica), inconcludente = 2 (torbidit? molto bassa rispetto alla crescita in soluzione di DMSO allo 0,5%).
Risultati: vedere l'esempio 10.
Esempio 8. Screening su micropiastra di composti con potenziale bioattivit? contro Botrytis cinerea
Sommario:
Composti di screening per la tossicit? dei patogeni.
Micropiastre con diluito in DMSO C ardol triene sono state miscelate con 40 ?l di sospensione di spore congelate e la crescita del fungo ? stata monitorata, a partire dalle spore congelate mediante ispezione visiva.
Sfondo:
La Botrytis cinerea ? un fungo appartenente agli Ascomiceti ed ? un agente patogeno aerodisperso. ? abbastanza facile produrre grandi quantit? di spore di Botrytis, che sopravvivono in glicerolo liquido al 60% a -20 <? >C.Cos?, abbiamo usato gli stock di spore congelate negli esperimenti di screening della bioattivit? piuttosto che preparare spore fresche per ogni esperimento.
Scopo:
Determinare l'effetto di diversi composti sulla sopravvivenza e la crescita della Botrytis.
Sono stati utilizzati i seguenti materiali, metodi e attrezzature: Materiali
PDAC PDBC DMSO
Attrezzature
Centrifuga - Eppendorf 58 10 R
Agitatore - Scientific Industries, Multi Microplate Genie Incubatrice - Pol-Eco Aparatura
Lettore di targhe
Metodo
Preparazione della sospensione di spore di Botrytis:
1) Mettere un blocco PDAC di Botrytis al centro di una piastra PDAC e far crescere 12 giorni a 22 ? C.
2) Lasciare raffreddare la piastra in frigorifero per almeno 1 ora.
3) Aggiungere 25 ml di soluzione di glicerolo fredda sterile al 60% nel tubo.
4) Tagliare l'agar con le ife e le spore in 8 pezzi e inserirli in una provetta sterile da 50 ml.
5) Agitare per 1 minuto a 3000 RPM.
6) Tenere le spore sul ghiaccio durante l'intero processo.
7) Trasferire il liquido in una nuova provetta sterile da 50 ml -circa 25 ml dovrebbero essere recuperati.
8) Filtrare la sospensione di spore attraverso 16 strati di garza direttamente in una provetta sterile pulita da 50 ml per eliminare le ife: si dovrebbero recuperare circa 20 ml.
9) Calcolare la concentrazione di spore e diluire con una soluzione sterile fredda di glicerolo al 60% per ottenere 2X10 <5 >spore / ml.
10) Dispensare un'aliquota da 1 ml di sospensione di spore in provette da 1,5 ml - ciascuna aliquota dovrebbe essere sufficiente per 20 piastre per lo screening.
11) Conservare la sospensione di spore a -20 ? C.
Preparazione della sospensione di spore per lo screening: 1) Prendi 200ul di sospensione di spore congelate dal congelatore e scongelala su ghiaccio.
2) Mescolare la sospensione di spore con 20 ml di PDBC ghiacciato in una provetta da 50 ml, per ottenere una concentrazione di 2X10 <5 >spore per ml per 4 micropiastre.
3) Utilizzare questa sospensione per lo screening degli esperimenti.
Sterilizzare i seguenti articoli utilizzando l'autoclave:
1) Tubi da 50 ml X36
2) Serbatoio X 4
3) 400 ml PDBC
Preparazione della micropiastra per l' esperimento di bioattivit? di cardol triene :
1) Prendere una soluzione stock di Cardol triene purificato all'1% in DMSO dal congelatore e scongelarlo sul banco.
2) Prendere 1ul della soluzione stock di Cardol triene all'1 % e diluire fino a 250 ppm con 39ul di acqua.
3) Prelevare 10 ?l della soluzione di Cardol triene diluita (250 ppm) nei pozzetti della micropiastra utilizzando una pipetta multipla.
4) Aggiungere 4 0 ?l di inoculo di sospensione di spore miscelato vigorosamente nei pozzetti della micropiastra utilizzando una pipetta multipla.
5) Sigillare la piastra con un sigillante trasparente.
6) Agitare la piastra per 10 minuti a 2000 giri / min mescolare i materiali con la sospensione di ife.
7) Centrifugare la piastra a 1000RCF per 1s e fermare, per raccogliere il liquido sul fondo della piastra.
8) Tenere la micropiastra sul banco fino a quando non viene letta dal lettore di piastre.
9) Valutare la crescita fungina della piastra utilizzando il lettore di piastre e l'ispezione visiva.
10) Raccogliere i piatti sul banco.
11) Inserire le piastre raccolte in una scatola di plastica, con copertura in tessuto e mettere la scatola nell'incubatrice a 22 <o >C.
Lettura delle piastre:
1) Raccogliere le letture della piastra in altre 3 date: 3d, 7d, 14d e 21g dopo l'inizio del dosaggio.
2) Calcola la differenza di assorbanza tra ogni lettura e la lettura a tempo zero.
3) Calcolare la percentuale di inibizione della crescita di ciascun pozzetto in ogni intervallo di tempo, utilizzare i risultati del trattamento DMSO della piastra di controllo come crescita del 100%.
4) "Hits" sono quei composti che hanno 4 ripetizioni con "clear well" o hanno mostrato una crescita patogena inferiore al 20% rispetto alla soluzione DMSO allo 0,5%.
Risultati: vedi esempio 10
Esempio 9. Screening su micropiastra di composti con potenziale bioattivit? contro Phytophthora infestans
Sfondo:
La Phytophthora infestans ? un patogeno obbligatorio degli Oomycetes che ? molto difficile da coltivare su terreno sintetico. Pertanto, ? stato utilizzato il sistema di screening della bioattivit? basato su dischi fogliari preparati da foglie di pomodoro staccate.
Sommario:
Diluito in DMSO Cardol triene ? stato aggiunto a dischi di foglie di pomodoro infettati da Phytophthora e il progresso della malattia ? stato monitorato mediante ispezione visiva.
Descrizione generale: inoculo e mantenimento su foglie di pomodoro, preparazione di sospensioni di spore, loro crescita su dischi fogliari in micropiastre e ispezione mediante lente d'ingrandimento della gravit? dell'infezione da Phytophthora infestans.
Sono stati utilizzati i seguenti materiali, metodi e attrezzature:
Metodo:
Preparazione della piantina di pomodoro per la produzione di foglie da inoculo
1) Utilizzare vasi per piantine di dimensioni 120X80X80 2) Usa terra da giardino standard con fertilizzante
3) Usa piantine di pomodoro di 4 settimane
4) Mettere 6 pentole in un piccolo vassoio
5) Metti una piantina in ogni pentola
6) Aggiungere l'acqua nella teglia - circa 100 ml per ogni pentola. La terra dovrebbe essere bagnata e l'acqua non dovrebbe essere lasciata nel bosco dopo 24 ore.
7) Coltivare le piante di pomodoro in una stanza di crescita a 22 <o >C e 16 ore di luce / oscurit?.
8) Quando le piante sono cresciute (4 settimane dopo la semina) trasferirle in un vaso da 5 litri e concimare ogni settimana con.
Preparazione delle foglie di pomodoro per l'inoculo 1) Mettere due pezzi di carta sterile in una piastra di Petri quadrata
2) Lavorare in condizioni sterili
3) Utilizzare foglie di piante di pomodoro vecchie di 5 settimane o pi? vecchie
4) Tagliate le foglie con un bisturi sterile
5) Aggiungere 20 ml di acqua distillata sterile per inumidire la carta (la carta deve essere bagnata al massimo, ma senza gocciolare acqua aggiuntiva)
6) Mettere circa 6 lobi di foglie in una piastra Petri quadrata, sulla carta bagnata) lato inferiore delle foglie in alto)
7) Coprire il piatto con il suo coperchio
Preparazione dell'inoculo e dell'infezione dei dischi fogliari
Preparazione della sospensione di sporangio
1) Mettere 10 lobi di foglia di pomodoro infetta da Phytophthora (4-6 giorni dopo l'infezione), in un tubo sterile da 50 ml, riempire 40 ml di acqua fredda distillata sterile.
2) Mescolare delicatamente il tubo a mano, per trasferire lo sporangio nell'acqua, ma evitare la disintegrazione della foglia
3) Filtrare la sospensione di spore attraverso 16 strati di garza in un tubo da 50 ml.
4) Calcola la concentrazione di spore - usa il microscopio con ingrandimento 200X. ? prevista una concentrazione di 6000 sporangio / ml.
5) Raffreddare la provetta con ghiaccio
Lavaggio e concentrazione di sporangium per filtrazione 1) Preparare il sistema di filtrazione con membrana (0,65 micron - 5 micron) e lavare la membrana con acqua fredda sterile 2) Sospendere e decantare lentamente la sospensione di spore dalla provetta da 50 ml nel sistema di filtrazione. Utilizzare un vuoto basso, non lasciare asciugare la membrana - lasciare 4 ml di sospensione non filtrata sul filtro.
3) Lavare le spore per eliminare batteri e altre spore di funghi (utilizzare 40 ml di acqua per lavare) - spruzzare acqua sterile fredda per sospendere e lavare le spore.
4) Ripetere il lavaggio con le spore altre 5 volte. Non lasciare asciugare la membrana. Lasciare 4 ml di sospensione non filtrata.
5) Raccogliere la sospensione di spore utilizzando un pipettatore da 1000 ul in una provetta pulita da 50 ml.
6) Inserire la membrana nel tubo da 50 ml mescolare delicatamente per sospendere lo sporangio, che aderisce alla membrana.
7) Gettare la membrana da autoclavare
8) Eliminare il liquido e disinfettare il sistema di filtrazione utilizzando ipoclorito per 30 min
- lavare il sistema di filtrazione con acqua di rubinetto.
- asciugare il sistema di filtrazione su carta in un cestello di plastica.
9) Calcola la concentrazione di sporangio - usa il microscopio con ingrandimento 200X - ? prevista una concentrazione di 10.000 -50.000 sporangio / ml.
10) Tenere la sospensione di sporangio su ghiaccio
Inoculo di spore su foglie staccate per il mantenimento di Phytophthora
1) Spruzzare 1000 ul di sospensione di spore di Phytophthora su tutti i lobi delle foglie in un piatto quadrato
2) Copri il piatto
3) Infettare le foglie con il fungo e tenere le foglie nell'incubatrice a 17 <o >C al buio per 24 ore
4) Trasferire le piastre per ulteriori 3-5 giorni nell'incubatore a 22 <o >C con un regime di illuminazione di 12 ore per la crescita dello sporangio
5) I sintomi della malattia sono visibili dopo 4 giorni
Preparazione della micropiastra per dischi di foglie di pomodoro per lo screening:
1) Prendere la piastra da 48 pozzetti
2) Preparare acqua sterile agar 0,5%, usarlo preriscaldato, ma freddo
3) Aggiungere 100 ?l di agar con acqua sterile allo 0,5% nei pozzetti della micropiastra
4) Mettere pomodoro dischi fogliari preparati dal 3 <? >, 4 <? >o 5 <? >foglia, in pozzetti. Premere delicatamente i dischi per garantire il massimo contatto con la soluzione di agar liquido
Inoculo di spore su dischi di foglie di micropiastre per Cardol triene efficacia evalua zione
1) Inoculo di spore su micropiastra dischi fogliari per vagliatura materiali
2) Inserire la sospensione di spore nella micropiastra con una soluzione madre di C ardol triene di 250 ppm per diluirla a 50 ppm. La miscela finale C ardol triene magazzino e spore sospensione sar? in rapporto 1: 4.
3) Sigillare la micropiastra di test con un sigillante trasparente 4) Agitare la micropiastra per 10 minuti a 2000 giri / min mescolare il Cardol triene con la sospensione di spore aggiunta.
5) Centrifugare la micropiastra a 1000RCF per 1 secondo e fermarsi per raccogliere il liquido sul fondo della piastra
6) Aggiungere 5ul di sospensione di spore al centro di ogni disco della micropiastra
7) Sigillare la piastra dei dischi fogliari con sigillante trasparente
8) Inserire le piastre con dischi fogliari sigillate nell'incubatrice a 17 <o >C per 24 h al buio e poi a 22 <o >C, con 12 h di luce, per 3-5 giorni 9) Eseguire la valutazione della bioattivit?
Valutazione della bioattivit?:
1) Schermo piatto in un punto temporale: 5 giorni dopo la preparazione della sospensione utilizzando un vetro di ingrandimento X5
2) Segnala i dischi infetti nel foglio Excel:
tipo - 1 se i dischi sono completamente infetti
tipo 2 - inconcludente
digitare - 3 se i dischi non sono affatto infetti
3) Calcola il numero di ripetizioni di punteggi di 3 per ogni materiale
4) Calcola la somma dei punteggi di 3 per ogni materiale 5) Calcolo del punteggio migliore: numero di ripetizioni = 4, somma dei punteggi = 12
6) "Hit" sono quei materiali che hanno 4 o 3 ripetizioni e somma di 6-12
Risultati : vedi esempio 10
Esempio 10. I risultati di in vitro esperimenti basati su protocolli di esempi 1- 9.
Matrice di screening in vitro
Cardol triene w come verificato contro parassiti agricoli selezionati (come indicato nelle tabelle sottostanti). I valori di bioattivit? sono in% e riflettono il potenziale di eradicazione dei parassiti bersaglio.
Regole per il calcolo del valore relativo di bioattivit? (espresso in% dal valore massimo)
a. Puccinia sorghi , Phytophthora infestans - grado di attivit? (1/2/3) X ripetizioni # / 12 (valore massimo 3X4 = 12) * 100
b. Alternaria alternata , Botrytis cinerea, Rhizoctonia solani , Sclerotinia sclerotiorum , Fusarium oxysporum , Pythium aphanidermatum - grado di attivit? (1/2/3) X ripetizioni # X giorni di attivit? / 252 (valore massimo 3X4X21 = 252) * 100
c. Pseudomonas syringae , Pectobacterium caratovorum -grado di attivit? (1/2/3) X ripetizioni # X giorni di attivit? / 168 (valore massimo 3X4X14 = 168) * 100
In sintesi, Cardol triene ? pesticida efficace contro i seguenti parassiti: Pythium aphanidermatum (risultati positivi sono di seguito riportate in in- vivo sezione risultati), Rhizoctonia solani (risultati positivi sono di seguito riportate in in- vivo sezione risultati) , e Pseudomonas syringae.
Esempio 11. Formulazione s preparazione in vivo (sotto serra condizioni) convalida.
Formulazione 3 - Tre tipi di soluzioni stock sono stati utilizzati per la preparazione finale della formulazione CART a 400 ppm:
(A) Soluzione CART allo 0,1% in acqua base (CART sciolto in acqua allo 0,1% e sonicato per 10 minuti a temperatura ambiente, quindi ? stato aggiunto uno stock di Na 2 CO 3 al 25% al volume del 4% della soluzione. La soluzione dovrebbe essere arancione chiaro e pH = 8,0 La soluzione ? stata sonicata per 20 minuti);
(B) 0,4% di gomma xantana in acqua (p / p) ;
(C) 0,6% di Silwet in acqua (p / p).
La formulazione finale che ? stata applicata alle piantine di cetriolo composta da: 40% di soluzione madre A, 10% di soluzioni madre B e C e 40% di acqua. La formulazione finale 3 ? stata applicata come 400 ppm di diluito alle concentrazioni richieste e applicata alle piantine di cetriolo.
Formulazione 4 - Tre tipi di soluzioni stock sono stati utilizzati per la preparazione finale della formulazione CART a 400 ppm:
(A) CARRELLO al 10% in DMSO (CARRELLO sciolto in DMSO al 10% (p / p) e sonicato per 5 minuti a temperatura ambiente);
(B) 0,4% di gomma xantana in acqua (p / p) ;
(C) 0,6% di Silwet in acqua (p / p).
La formulazione finale che ? stata applicata alle piantine di cetriolo composta da: 4% di soluzione madre A, 10% di soluzioni madre B e C e 76% di acqua. La formulazione finale 4 ? stata applicata come 400 ppm di diluito alle concentrazioni richieste e applicata alle piantine di cetriolo.
Formulazione 10 - Tre tipi di soluzioni stock sono stati utilizzati per la preparazione finale della formulazione CART a 400 ppm:
(A) 25% CART in acqua DL8 / 2 (CART deve essere sciolto in DL8 / 2 a 50% (w / w), mescolare es bene da vortex, e ultrasuoni d per 5 minuti a temperatura ambiente. Diluire v / v la CART50% in acqua distillata a 25%, mix ED bene da vortice, ultrasuoni d per 5 min quindi centrifugare d per 1 min);
(B) 0,4% di gomma xantana in acqua (p / p) ;
(C) 0,6% di Silwet in acqua (p / p).
La formulazione finale che ? stato applicato ad piantine di cetriolo composti: 0,16% di soluzione A, 10% delle soluzioni madri B e C e 7 9.84% di acqua. La formulazione finale 4 ? stata applicata come 400 ppm di diluito alle concentrazioni richieste e applicata alle piantine di cetriolo.
Analisi statistica per esperimenti di validazione in vivo. Per valutare l'effetto di un Cardol triene nelle piante infette rispetto alle piante di controllo (infette ma non trattate) i dati sono stati analizzati dal test t di Student e il valore p ? stato calcolato. Il numero minimo di ripetizioni in ogni esperimento era 3. I risultati sono stati considerati significativi se p <0,05. I dati presentati come media con media dell'errore standard da repliche biologiche. * significa che il valore p <0,05, ** significa che il valore p ? <0,01, # significa che il valore p <0,1 ; ns. significa non significativo rispetto agli impianti di controllo.
Esempio 12. Validazione in vivo in condizioni di serra in piantine di cetriolo infettate da Pythium aphanidermatum Descrizione generale: lo sviluppo della gravit? della malattia da Pythium aphanidermatum ? stato valutato in seguito a trattamento preventivo con C ardol triene (CART)
Preparazione dell'inoculo di Pythium:
1) Inserire 10 ml di semi di quinoa in una bottiglia da 100 ml.
2) Aggiungere 10 ml di acqua distillata sterile.
3) Lasciate che i semi assorbano l'acqua per 24 h in frigorifero.
4) Dopo 24 ore mettere un panno traspirante sulla parte superiore della bottiglia e chiudere il coperchio senza stringere sopra.
5) Autoclave per 40 min (a121oC) [ciclo liquido]
6) Lasciate raffreddare nella cappa e togliete il coperchio.
7) Inoculare i semi di quinoa con un piccolo blocco di Pythium coltivato su piastra PDAC.
8) Riposizionare il panno traspirante e il coperchio.
9) Mettere la bottiglia di crescita Pythium in fase solida nell'incubatore, a 27oC.
11) Dopo 5 giorni il Pythium dovrebbe essere pronto per inoculare le piante.
12) Omogeneizzare le ife Pythium nel volume desiderato:
A. Utilizzare un bicchiere da 250 ml e un frullatore a immersione per preparare la miscela.
B. Aggiungere 100 ml di acqua
C. Aggiungere 1 g di coltura in fase solida di Pythium , per ottenere una sospensione di ife all'1%.
D. Omogeneizzare ad alta velocit? per 2 minuti su ghiaccio. E. Diluire la sospensione di ife omogeneizzate con acqua sterile per ottenere una sospensione di ife allo 0,5%.
F. Utilizzare immediatamente la sospensione di ife omogeneizzate diluita per inoculare il terreno / conservare a 4?c per un uso successivo.
Condizioni di germinazione delle piantine.
1) Utilizzare piantine di cetriolo di 6 giorni fa germogliare un vassoio per piantine. Utilizzare cultivar di cetriolo appropriate, per consentire lo sviluppo della malattia. Le piantine dovrebbero avere 6 giorni. La composizione del substrato di piantagione ? a base di cocco di qualit? e perlite (50-50%), con caratteristiche di elevata conducibilit? idraulica, altamente ventilato e completamente inerte
2) Le piantine vengono germinate in serra in condizioni di vivaio, con 40 ppm di fertilizzante N: P: K, annaffiato due volte al giorno.
3) Prima esperimento condotto, il vassoio con piantine, con piena y aperto cotiledoni , senza prima foglia vera, viene estratto dal sistema di abbeveraggio, per consentire macerazione del trattamento 4) Il 6 ? giorno dalla semina ? stato applicato il trattamento. Al 7 ? giorno l'inoculo viene aggiunto in ogni cellula della piantina.
Applicazione del trattamento
1) Cardol triene ? stato formulato secondo l' Esempio 11 2) In caso di d applicazione renching, 5-6 ml di formulato C ardol triene stato applicato specificamente a ciascuna cella piantina 3) In caso di applicazione a spruzzo, ? stato applicato un confine tra le diverse condizioni di trattamento. 5 ml di Cardol triene formulato nella concentrazione appropriata sono stati applicati per ogni 8 piantine. Spruzzato con spruzzatore di plastica, fino al completo drenaggio delle foglie delle piantine.
4) In esperimenti su piccola scala, il numero di piantine testate era n = 8 per ciascuna condizione ( es. 177, 187a, 187b, 187c, 184a, 184b e 206). In esperimenti su larga scala ( 246, 247) il numero di piantine testate era n = 24 per ogni condizione, inoltre per non trattate, quale numero di piantine testate, n = 16.
Inoculazione del suolo:
1) Le piantine sono state inoculate 24 ore dopo il trattamento con C ardol triene (approccio preventivo).
2) Utilizzare una pipetta per distribuire 5-6 ml di inoculato sulla superficie del terreno, in modo specifico su ciascuna cellula della piantina. Il terreno in ogni cellula delle piantine dovrebbe assorbire tutto il volume dell'inoculo. Il trattamento e l'inoculo dovrebbero distribuirsi uniformemente nella rizosfera.
Crescita e analisi:
1) Coltiva le piante di cetriolo per altri 7 giorni sotto il normale regime di irrigazione
2) Al 7 ? giorno (14 giorni dalla semina) ? stata eseguita la valutazione della gravit? della malattia
3) Sintomi della malattia: le piantine dovrebbero iniziare a cadere a causa del marciume radicale e il colore marrone dovrebbe essere visto sulle riprese appena sopra il terreno.
4) Contare le piantine malate e morte al 7 ? giorno dall'inoculazione
5) Calcola la percentuale di morte per ogni trattamento.
Risultati: come mostrato nelle Figg. 1-9 , C ardol triene ha mostrato un'eccellente efficacia nel prevenire la morte delle piante a seguito di infezione da Pythium aphanidermatum : fino al 97,6% di efficacia a 100 ppm; fino al 100% di efficacia a 200 ppm e fino al 71,4% di efficacia a 400 ppm.
Esempio 13. Validazione in vivo in condizioni di serra in piantine di cetriolo infettate da Rhizoctonia solani
Descrizione generale: la gravit? della malattia da Rhizoctonia ? stata valutata a seguito di trattamento preventivo con CART ( Cardol triene). Le ife sono stati usate per infettare 6 giorni piantine di cetriolo con il trattamento concomitante con CARRELLO
Preparazione dell'inoculo di Rhizoctonia:
1) Inserisci 10 ml di semi di quinoa in una bottiglia da 100 ml.
2) Aggiungi 1 0 ml di acqua distillata sterile.
3) Lasciate che i semi di Quinoa assorbano l'acqua per 24 h in frigo a 4 ? C.
4) Dopo 24 ore mettere un panno traspirante sulla parte superiore della bottiglia e chiudere senza stringere il coperchio sopra. 5) Autoclave per 40 min (a 121 ? C) [ciclo liquido]
6) Lasciate raffreddare nella cappa e togliete il coperchio 7) Inoculare i semi di quinoa con un piccolo blocco di R hizoctonia coltivato su piastra PDAC (Potato dextrose agar with 20 ug / ml chloramphenicol?).
8) Riposizionare il panno traspirante e il coperchio.
9) Mettere il flacone di crescita di Rhizoctonia in fase solida nell'incubatore, a 27 <o >C.
10) Dopo 8-10 giorni la Rhizoctonia dovrebbe essere pronta per l'inoculazione delle piantine di cetriolo.
11) Omogeneizzare le ife di Rhizoctonia nel volume desiderato: Utilizzare un becher da 250 ml e un frullatore a immersione per preparare la miscela.
Aggiungere 100 ml di acqua
Aggiungere 1 g di coltura in fase solida di rhizoctonia per ottenere una sospensione di ife all'1%.
Omogeneizzare ad alta velocit? per 2 minuti su ghiaccio.
12) Diluire la sospensione di ife omogeneizzate con acqua sterile per ottenere una sospensione di ife allo 0,5%.
13) Utilizzare immediatamente la sospensione di ife omogeneizzate diluita per inoculare il terreno (conservare a 4?c per un uso successivo).
Protocollo di germinazione delle piantine di cetriolo 1) Utilizzare un vassoio di 136 piantine germogliato di 6 giorni di cetriolo vecchio. Utilizzare cultivar di cetriolo sensibili appropriate , per consentire lo sviluppo della malattia. Le piantine dovrebbero avere 6 giorni. La composizione del substrato di piantagione ? a base di cocco di qualit? e perlite (50-50%), con caratteristiche di elevata conducibilit? idraulica, altamente ventilato e completamente inerte
2) Le piantine vengono germinate in serra, in vivaio, con 40 ppm di fertilizzante N: P: K, annaffiato due volte al giorno (estate). In condizioni invernali sar? richiesto un regime di irrigazione diverso 3) Prima esperimento condotto, il vassoio con piantine, con cotiledone piena di dimensioni s , senza prima foglia vera, viene estratta dal sistema di abbeveraggio, per allo w trattamento incorporazione nel terreno.
4) Il 6 ? giorno dalla semina verr? applicato il trattamento. Al 7 giorno l'inoculo viene aggiunto in ogni cellula della piantina.
Applicazione del trattamento
1) Cardol triene ? stato formulato secondo l'Esempio 11 2) In caso di d applicazione renching 5-6 ml di trattamento, nella rispettiva concentrazione ? stato applicato specificamente a ciascuna cella piantina
3) Nel caso di s in preghiera applicazione , un bordo verr? applicato tra diverse condizioni di trattamento. 5 ml di Cardol triene formulato nella concentrazione appropriata sono stati applicati per ogni 8 piantine. Spruzzato con un semplice spruzzatore manuale di plastica, fino al completo drenaggio delle foglie delle piantine.
4) In esperimenti su piccola scala, il numero di piantine testate era n = 8 per trattamento. In esperimenti su larga scala , il numero di piantine testate era n = 24 per trattamento , oltre a per non trattate, dove n = 16.
Inoculazione del suolo:
1) L' inoculazione ? stata effettuata 24 ore dopo il trattamento con Cardol triene (approccio preventivo). Dopo il trattamento e fino all'inoculo, le piantine sono state mantenute non annaffiate, per evitare il lavaggio con Cardol triene.
2) Utilizzare una pipetta da 10 ml per distribuire 5-6 ml di inoculo sulla superficie del terreno, in modo specifico su ciascuna cellula della piantina. Il terreno in ogni cellula delle piantine dovrebbe assorbire tutto il volume dell'inoculo. Il trattamento e l'inoculo dovrebbero distribuirsi uniformemente nella rizosfera.
3) Crescita e analisi:
4) Coltiva le piante di cetriolo per altri 7 giorni sotto il normale regime di irrigazione
5) Al 7 giorno (14 giorni dalla semina) eseguire la valutazione finale della malattia
6) Fenotipo dello sviluppo della malattia: i germogli dovrebbero iniziare a cadere a causa del marciume radicale e il colore marrone dovrebbe essere visto sul germoglio appena sopra il terreno.
7) Conta le piantine malate e morte
8) Calcola la percentuale di morte delle piante per ogni trattamento.
Risultati: come mostrato nelle Figg. 10-17, C ardol triene ha mostrato un'eccellente efficacia nel prevenire la morte delle piante a seguito di infezione da Rhizoctonia solani : fino all'81,2% di efficacia a 100 ppm; fino al 100% di efficacia a 200 ppm e fino al 98,4% di efficacia a 400 ppm.
Claims (10)
- RIVENDICAZIONI 1. Una composizione di pesticidi comprendente il composto 5-8Z, 11Z, 14-pentadecatrien-1-il-1,3-benzenediolo della seguente formula (I):(I), o un suo sale accettabile dal punto di vista agricolo come ingrediente pesticida attivo.
- 2. Un metodo per controllare, prevenire, ridurre o eliminare i casi di infestazione da patogeni vegetali su una pianta, un organo vegetale, una parte di pianta o un materiale di propagazione vegetale, il metodo comprendendo: applicare a una pianta, parte di pianta, organo vegetale o materiale di propagazione della pianta , o al suolo che circonda detta pianta, una quantit? efficace di pesticida di un agente attivo comprendente Cardol triene o la composizione di pesticidi della rivendicazione 1, in cui detta pianta-patogeno ? scelto tra: un membro della famiglia pythiaceae, un membro della classe agaricomycetes, e un membro dell?ordine pseudomonadales.
- 3. Procedimento secondo la rivendicazione 2, in cui detta pianta-patogeno ? un membro della famiglia pythiaceae.
- 4. Metodo secondo la rivendicazione 3, in cui detto agente patogeno per piante Pythiaceae ? un membro del genere Pythium , come Pythium aphanidermatum.
- 5. Metodo secondo la rivendicazione 2, in cui detto agente patogeno vegetale ? un membro della classe Agaricomycetes.
- 6. Il metodo della rivendicazione 5, in cui detto agente patogeno delle piante di Agaricomycetes ? un membro dell'ordine Cantharellales.
- 7. Metodo secondo la rivendicazione 6, in cui detto patogeno vegetale di Cantharellales ? un membro della famiglia delle Ceratobasidiaceae.
- 8. Metodo secondo la rivendicazione 7, in cui detto patogeno vegetale Ceratobasidiaceae ? un membro del genere Rhizoctonia , come Rhizoctonia solani.
- 9. Metodo secondo la rivendicazione 2, in cui detto patogeno vegetale ? un membro dell'ordine Pseudomonadales.
- 10. Metodo secondo la rivendicazione 9, in cui detto patogeno vegetale Pseudomonadales ? un membro della famiglia Pseudomonadaceae, ad esempio del genere Pseudomonas, come Pseudomonas syringae.
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT102020000031544A IT202000031544A1 (it) | 2020-12-18 | 2020-12-18 | Composizioni di pesticidi comprendenti cardol triene |
| PCT/IL2021/051316 WO2022130367A1 (en) | 2020-12-18 | 2021-11-07 | Pesticide compositions of phenol and resorcinol dienes and trienes |
| EP21905981.3A EP4262389A1 (en) | 2020-12-18 | 2021-11-07 | Pesticide compositions of phenol and resorcinol dienes and trienes |
| IL303692A IL303692A (en) | 2020-12-18 | 2021-11-07 | Pesticide preparations of diene and terine derivatives of phenol and resorcinol |
| US18/267,620 US20240057592A1 (en) | 2020-12-18 | 2021-11-07 | Pesticide compositions of phenol and resorcinol dienes and trienes |
| CN202180088772.3A CN116685201A (zh) | 2020-12-18 | 2021-11-07 | 苯酚及间苯二酚的二烯及三烯农药组合物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT102020000031544A IT202000031544A1 (it) | 2020-12-18 | 2020-12-18 | Composizioni di pesticidi comprendenti cardol triene |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| IT202000031544A1 true IT202000031544A1 (it) | 2022-06-18 |
Family
ID=74592641
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| IT102020000031544A IT202000031544A1 (it) | 2020-12-18 | 2020-12-18 | Composizioni di pesticidi comprendenti cardol triene |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20240057592A1 (it) |
| EP (1) | EP4262389A1 (it) |
| CN (1) | CN116685201A (it) |
| IL (1) | IL303692A (it) |
| IT (1) | IT202000031544A1 (it) |
| WO (1) | WO2022130367A1 (it) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6077521A (en) * | 1998-04-07 | 2000-06-20 | The Regents Of The University Of California | Methods for mosquito abatement |
| US20090186942A1 (en) * | 2006-02-16 | 2009-07-23 | Daniel Raederstorff | Novel nutraceutical and pharmaceutical compositions and use thereof for the treatment, co-treatment or prevention of inflammatory disorders |
| CN109452315A (zh) * | 2018-12-20 | 2019-03-12 | 厦门大学 | 腰果壳油活性物质作为酪氨酸酶抑制剂和植物源抗菌剂的应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005122670A2 (en) * | 2004-06-18 | 2005-12-29 | Kardol Indústria Química Ltda. | Biomonitored synthesis route for large scale preparation of cardol (bilobol) and 11δ-cardol |
| IN2015MU03680A (it) * | 2015-09-28 | 2017-03-31 | Tata Chemicals Limited |
-
2020
- 2020-12-18 IT IT102020000031544A patent/IT202000031544A1/it unknown
-
2021
- 2021-11-07 US US18/267,620 patent/US20240057592A1/en active Pending
- 2021-11-07 EP EP21905981.3A patent/EP4262389A1/en active Pending
- 2021-11-07 CN CN202180088772.3A patent/CN116685201A/zh active Pending
- 2021-11-07 IL IL303692A patent/IL303692A/en unknown
- 2021-11-07 WO PCT/IL2021/051316 patent/WO2022130367A1/en active Application Filing
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6077521A (en) * | 1998-04-07 | 2000-06-20 | The Regents Of The University Of California | Methods for mosquito abatement |
| US20090186942A1 (en) * | 2006-02-16 | 2009-07-23 | Daniel Raederstorff | Novel nutraceutical and pharmaceutical compositions and use thereof for the treatment, co-treatment or prevention of inflammatory disorders |
| CN109452315A (zh) * | 2018-12-20 | 2019-03-12 | 厦门大学 | 腰果壳油活性物质作为酪氨酸酶抑制剂和植物源抗菌剂的应用 |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| CAS , no. 79473-24-8 |
| ERLACHER A.CARDINALE M.GROSCH R.GRUBE M.BERG G: "The impact of the pathogen Rhizoctonia solani and its beneficial counterpart Bacillus amyloliquefaciens on the indigenous lettuce microbiome", FRONT MICROBIOL, vol. 5, 21 April 2014 (2014-04-21), pages 175 |
| FRANK N. MARTINJOYCE E. LOPER: "Soilborne Plant Diseases Caused by Pythium spp.: Ecology, Epidemiology, and Prospects for Biological Control", CRITICAL REVIEWS IN PLANT SCIENCES, vol. 18, 1999, pages 111 - 181 |
| HIMEJIMA M ET AL: "ANTIBACTERIAL AGENTS FROM THE CASHEW ANACARDIUM-OCCIDENTALE ANACARDIACEAE NUT SHELL OIL", JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, US, vol. 39, no. 2, 1 January 1991 (1991-01-01), pages 418 - 421, XP002419513, ISSN: 0021-8561, DOI: 10.1021/JF00002A039 * |
| HOFTE M.DE VOS P: "Plant pathogenic pseudomonas species", PLANT-ASSOCIATED BACTERIA, 2006, pages 507 - 533 |
| KUBO ISAO ET AL: "Molluscicides from the cashew Anacardium occidentale and their large-scale isolation", JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY, vol. 34, no. 6, 1 November 1986 (1986-11-01), US, pages 970 - 973, XP055835216, ISSN: 0021-8561, DOI: 10.1021/jf00072a010 * |
| MOORE. L.W.: "Pseudomonas syringae: disease and ice nucleation activity", ORNAMENTALS NORTHWEST NEWSLETTER, vol. 12, 1988, pages 4 - 16 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2022130367A1 (en) | 2022-06-23 |
| EP4262389A1 (en) | 2023-10-25 |
| CN116685201A (zh) | 2023-09-01 |
| US20240057592A1 (en) | 2024-02-22 |
| IL303692A (en) | 2023-08-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11286458B2 (en) | Methods and compositions for the biological control of plant pathogens | |
| US20220354115A1 (en) | Pinocembrin dihydrochalcone and compositions thereof and their use as pesticides | |
| NL8301075A (nl) | Fungistatische werkwijze. | |
| KR102389735B1 (ko) | 프테로카르야 톤키넨시스(Pterocaryatonkinensis) 추출물 또는 이의 분확물을 포함하는 식물병 방제용 조성물 및 상기 조성물을 사용한 식물병 방제 방법 | |
| EP4057820A1 (en) | Sunflower bark extract and uses thereof | |
| IT202000031544A1 (it) | Composizioni di pesticidi comprendenti cardol triene | |
| KR20210019721A (ko) | 측백나무 추출물에서 유래한 다이터페노이드 화합물을 유효성분으로 함유하는 식물병 방제용 조성물 및 상기 조성물을 사용한 식물병 방제 방법 | |
| US20240049707A1 (en) | Pesticide compositions of licochalcone c | |
| KR20220120955A (ko) | 폴리알티아 롱지폴리아 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 식물병 방제용 조성물 | |
| KR20220120954A (ko) | 폴리알티아 롱지폴리아로부터 유래된 화합물을 포함하는 식물병 방제용 조성물 | |
| IT201900014181A1 (it) | Neo-bavaisoflavone, composizioni dello stesso e loro uso come pesticidi | |
| JP2022523034A (ja) | 光増感剤化合物、製造の方法及び植物への適用 | |
| US20230098202A1 (en) | Pesticide compositions of 1-phenyl-tetralin derivatives | |
| KR102240972B1 (ko) | 측백나무 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 식물병 방제용 조성물 및 상기 조성물을 사용한 식물병 방제 방법 | |
| KR102598551B1 (ko) | 아스퍼질러스 몬테네그로이 sfc20200425-m27 균주로부터 유래된 화합물을 포함하는 식물병 방제용 조성물 및 이의 제조방법 | |
| Grabowski | Exploring the host range of Sclerotinia sclerotiorum in herbaceous ornamental plants | |
| CN118805781A (zh) | 松属素二氢查耳酮及其组合物和它们作为农药的用途 | |
| IT202100022448A1 (it) | Metodo di trattamento di piante con 8-geranil-7-idrossicumarina e relative composizioni di antiparassitari | |
| KR20240003399A (ko) | 고수 추출물을 포함하는 식물병 및 해충 방제용 조성물 | |
| KR20240003400A (ko) | 레시넘 벌시펠레를 포함하는 식물병 및 해충 방제용 조성물 | |
| IT202200001031A1 (it) | Metodo di trattamento di piante con alcaloidi chinolinici e relative composizioni di pesticidi | |
| CN114144064A (zh) | 用于防治寄生线虫的植物提取物 | |
| CN117119886A (zh) | 山梨酸及其盐作为杀线虫剂的用途 | |
| JP2013043876A (ja) | 植物病原菌に対する抗菌剤 |