IT201900017555A1

IT201900017555A1 - Association for use in the treatment and prevention of inflammatory disorders of the intestinal tract

Info

Publication number: IT201900017555A1
Application number: IT102019000017555A
Authority: IT
Inventors: Antonella Gargiulo
Original assignee: Dymalife Res S R L
Priority date: 2019-09-30
Filing date: 2019-09-30
Publication date: 2021-03-30

Description

ASSOCIAZIONE PER USO NEL TRATTAMENTO E PREVENZIONE DI DISTURBI INFIAMMATORI DEL TRATTO INTESTINALE. ASSOCIATION FOR USE IN THE TREATMENT AND PREVENTION OF INFLAMMATORY DISORDERS OF THE INTESTINAL TRACT.

CAMPO DELL’INVENZIONE FIELD OF THE INVENTION

La presente invenzione riguarda un’associazione di Andrographis paniculata, estratto di Silybum marianum e Zinco per uso nel trattamento e prevenzione di disturbi infiammatori del tratto intestinale ed in particolare di IBD. The present invention relates to an association of Andrographis paniculata, Silybum marianum extract and Zinc for use in the treatment and prevention of inflammatory disorders of the intestinal tract and in particular of IBD.

STATO DELL’ARTE STATE OF THE ART

Malattia infiammatoria intestinale Inflammatory bowel disease

La malattia infiammatoria intestinale rappresenta un gruppo di disturbi intestinali che causano l'infiammazione prolungata del tratto digestivo che comprende, la bocca, l'esofago, lo stomaco, l'intestino tenue e l'intestino crasso. Il sistema digerente ha come scopo la disgregazione del cibo, l'estrazione delle sostanze nutritive e la rimozione di materiale inutilizzabile e di prodotti di scarto. L'infiammazione lungo il tubo digerente sconvolge questo normale processo, riducendo gli apporti nutritivi necessari per un corretto stato di salute, tramite sia un’alterazione dell’assorbimento attraverso la mucosa gastrica ed intestinale, e sia causando un’alterazione dei fisiologici processi di evacuazione che qualora abbiano una frequenza eccessiva ne abbassano sostanzialmente le quantità di nutrienti a disposizione. La malattia infiammatoria intestinale può essere molto dolorosa e dirompente e, in alcuni casi, può addirittura mettere in pericolo la vita. Inflammatory bowel disease represents a group of intestinal disorders that cause prolonged inflammation of the digestive tract which includes the mouth, esophagus, stomach, small intestine and large intestine. The digestive system has as its purpose the breakdown of food, the extraction of nutrients and the removal of unusable material and waste products. Inflammation along the digestive tract upsets this normal process, reducing the nutrient supplies necessary for a correct state of health, through both an alteration of absorption through the gastric and intestinal mucosa, and by causing an alteration of the physiological processes of evacuation that if they are too frequent, they substantially lower the amount of nutrients available. Inflammatory bowel disease can be very painful and disruptive and, in some cases, can even be life threatening.

Nell’ombrello della IBD sono incluse diverse malattie intestinali ad eziologia infiammatoria, le quali prevedono per la risoluzione un’azione anti-infiammatoria locale per il ripristino della funzionalità intestinale, in associazione anche ad un riequilibrio della flora batterica la quale è nota essere un indice di protezione all’innesco di infezioni e fornisce anche un miglioramento del profilo immunitario. In questo ampio quadro patologico, possono essere prese come esempio il morbo di Crohn e la rettocolite ulcerosa, entrambe malattie infiammatorie intestinali: la malattia di Crohn può causare infiammazione in qualsiasi parte del tubo digerente ma, tuttavia, colpisce soprattutto la coda dell'intestino tenue; la colite ulcerosa coinvolge l'infiammazione dell'intestino crasso. The IBD umbrella includes various intestinal diseases with inflammatory aetiology, which provide for the resolution of a local anti-inflammatory action for the restoration of intestinal function, in association also with a rebalancing of the bacterial flora which is known to be an index protection against triggering infections and also provides an improvement in the immune profile. In this broad pathological picture, Crohn's disease and ulcerative colitis, both inflammatory bowel diseases, can be taken as examples: Crohn's disease can cause inflammation in any part of the digestive tract but, however, mainly affects the tail of the small intestine. ; ulcerative colitis involves inflammation of the large intestine.

Il Morbo di Crohn (Crohn Disease, CD) è una malattia cronica che provoca infiammazione e irritazione dell’apparato digerente. Insieme alla rettocolite ulcerosa, rientra nelle patologie infiammatorie intestinali (IBD) le quali sono caratterizzate da infiammazione cronica, incontrollata e recidivante del tratto gastrointestinale. Più comunemente, il morbo di Crohn interessa l'ileo terminale (porzione finale dell'intestino tenue) o il colon (intestino crasso), ma di fatto può colpire qualunque porzione dell’apparato digerente, dalla bocca fino all’ano. Crohn's disease (Crohn Disease, CD) is a chronic disease that causes inflammation and irritation of the digestive system. Together with ulcerative colitis, it is part of inflammatory bowel diseases (IBD) which are characterized by chronic, uncontrolled and relapsing inflammation of the gastrointestinal tract. Most commonly, Crohn's disease affects the terminal ileum (final portion of the small intestine) or the colon (large intestine), but in fact it can affect any portion of the digestive system, from the mouth to the anus.

La malattia in genere insorge gradualmente e tende a peggiorare nel tempo. Essa si presenta prevalentemente in età giovanile (20/25 anni) ed in terza età (65 anni) ma non sono rari casi anche nei bambini e negli adolescenti. I sintomi più comuni del morbo di Crohn sono diarrea, crampi e dolori addominali, che in genere peggiorano a stomaco pieno, sangue e muco nelle feci, perdita inspiegabile di peso. Altri sintomi possono comprendere anemia, febbre, nausea o perdita dell’appetito. I sintomi variano secondo le sedi e la gravità dell’infiammazione, inoltre possono verificarsi lunghi periodi, che durano settimane o mesi, in cui i sintomi regrediscono fino a diventare molto lievi o addirittura sparire del tutto (remissione), seguiti da periodi in cui i sintomi si riacutizzano. The disease usually begins gradually and tends to get worse over time. It occurs mainly in the young age (20/25 years) and in the elderly (65 years) but they are not rare cases also in children and adolescents. The most common symptoms of Crohn's disease are diarrhea, cramps and abdominal pain, which typically worsen on a full stomach, blood and mucus in the stool, unexplained weight loss. Other symptoms may include anemia, fever, nausea or loss of appetite. Symptoms vary according to the location and severity of the inflammation, and there may be long periods, lasting weeks or months, in which symptoms regress to become very mild or even disappear altogether (remission), followed by periods in which symptoms flare up.

Attualmente non esiste una cura per il Morbo di Crohn; il trattamento mira al controllo dei sintomi e alla prevenzione delle complicazioni che includono ostruzione intestinale, ulcere, fistole e ascessi. There is currently no cure for Crohn's disease; treatment aims at controlling symptoms and preventing complications including intestinal obstruction, ulcers, fistulas and abscesses.

La rettocolite ulcerosa (Ulcerative Colitis, UC) provoca infiammazione e ferite, dette ulcere, sulla superficie interna del retto e del colon. Le ulcere si formano perché l’infiammazione uccide le cellule che rivestono la parete del colon, che quindi inizia a sanguinare e a produrre pus. Se c’è un’infiammazione, il colon tende a svuotarsi con maggiore frequenza e questo causa la comparsa di diarrea. La rettocolite ulcerosa può colpire persone di qualsiasi età, ma in genere si presenta per la prima volta tra i 15 e i 30 anni oppure, meno frequentemente, tra i 50 e i 70 anni. Colpisce con uguale probabilità uomini e donne e mostra una significativa familiarità: le ricerche dimostrano che fino al 20% delle persone affette ha un membro della famiglia od un parente colpito dalla stessa malattia, oppure dal morbo di Crohn. I sintomi sono simili ad altri disturbi intestinali come il morbo di Crohn, ma a differenza di quest’ultimo, la colite ulcerosa interessa soltanto gli strati più superficiali del lume intestinale, senza estendersi a quelli sottostanti; inoltre le manifestazioni rimangono localizzate a livello dell'intestino crasso, mentre nel morbo di Crohn possono interessare anche altri tratti del tubo digerente come bocca, esofago e stomaco. Ulcerative colitis (UC) causes inflammation and wounds, called ulcers, on the inner surface of the rectum and colon. Ulcers form because inflammation kills the cells that line the colon wall, which then begins to bleed and produce pus. If there is inflammation, the colon tends to empty more frequently and this causes the appearance of diarrhea. Ulcerative colitis can affect people of any age, but it typically first occurs between the ages of 15 and 30 or, less frequently, between the ages of 50 and 70. It affects men and women with equal probability and shows significant familiarity: research shows that up to 20% of affected people have a family member or relative affected by the same disease, or by Crohn's disease. The symptoms are similar to other intestinal disorders such as Crohn's disease, but unlike the latter, ulcerative colitis affects only the most superficial layers of the intestinal lumen, without extending to the underlying ones; furthermore, the manifestations remain localized in the large intestine, while in Crohn's disease they can also affect other tracts of the digestive tract such as the mouth, esophagus and stomach.

I sintomi più frequenti della rettocolite ulcerosa sono il dolore addominale e la presenza di sangue nella diarrea. I pazienti possono anche soffrire di anemia, affaticamento e stanchezza, perdita di peso, diminuzione dell’appetito, sanguinamento rettale. The most frequent symptoms of ulcerative colitis are abdominal pain and the presence of blood in the diarrhea. Patients may also suffer from anemia, fatigue and tiredness, weight loss, decreased appetite, rectal bleeding.

Cause e meccanismi annessi alla patologia Causes and mechanisms related to the pathology

Le cause esatte alla base della comparsa del Morbo di Crohn e della rettocolite ulcerosa non sono ad oggi note, ma l’opinione più diffusa è che possano essere il risultato di una combinazione di numerosi fattori. La ricerca ha dimostrato che le probabilità di sviluppare una malattia infiammatoria intestinale sono maggiori con un consanguineo (fratello o genitore) affetto dalla stessa patologia, anche se il legame tra geni e morbo di Crohn o rettocolite ulcerosa è tuttora oggetto di studi. Altri fattori che possono innescare l’insorgenza della patologia comprendono fumo di sigaretta e consumo eccessivo di alcuni farmaci tra cui FANS, anticoncezionali e antibiotici. The exact causes underlying the onset of Crohn's disease and ulcerative colitis are not known to date, but the most widespread opinion is that they may be the result of a combination of numerous factors. Research has shown that the chances of developing inflammatory bowel disease are greater with a relative (sibling or parent) suffering from the same disease, although the link between genes and Crohn's disease or ulcerative colitis is still being studied. Other factors that can trigger the onset of the disease include cigarette smoking and excessive consumption of some drugs including NSAIDs, contraceptives and antibiotics.

Alla base dei fattori genetici, ambientali e abitudinari, è consolidato il ruolo centrale del sistema At the base of genetic, environmental and habitual factors, the central role of the system is consolidated

immunitario della mucosa dell’intestino nella patogenesi delle malattie infiammatorie intestinali immune system of the intestinal mucosa in the pathogenesis of inflammatory bowel diseases

(IBD). Nell’intestino sano, il sistema immunitario della mucosa assicura equilibrio tra i mediatori pro- ed anti-infiammatori e permette così una difesa efficace contro i patogeni e allo stesso tempo previene una reazione immunitaria diretta contro l’enorme quantità di antigeni luminali innocui tra cui batteri non patogeni. Inoltre, una flora batterica solida previene la colonizzazione di microrganismi patogeni per competizione al legame con la mucosa stessa e conseguente loro eliminazione. (IBD). In the healthy intestine, the mucosal immune system ensures balance between pro and anti-inflammatory mediators and thus allows an effective defense against pathogens and at the same time prevents a direct immune reaction against the huge amount of harmless luminal antigens including non-pathogenic bacteria. In addition, a solid bacterial flora prevents the colonization of pathogenic microorganisms by competition for binding with the mucosa itself and consequent elimination of them.

Il sistema immunitario della parete intestinale contiene una quantità notevole di cellule immunitarie responsabili del mantenimento dell'omeostasi, tra cui cellule epiteliali, cellule dendritiche e macrofagi, responsabili della risposta immunitaria innata (1). Fisiologicamente, l’organismo non risponde con reazioni sistemiche contro batteri innocui ed antigeni nutrizionali. Si parla pertanto della cosiddetta infiammazione controllata: in questo caso infatti l’infiammazione è inibita dalle cellule T-CD4+ che promuovono la cancellazione dell’antigene tramite il rilascio di citochine proapoptotiche IL-10, TGF-β, IL-4 (2-3). Al contrario, proprio nella UC e nella CD, il livello di apoptosi risulta essere significativamente ridotto (4). Nei pazienti affetti da IBD il livello di proteine ad attività anti-apoptotica Bcl-2 e Bcl-xl è aumentato nelle cellule T, mentre il meccanismo apoptotico mediato da Bax diminuito (5). Tutto ciò si traduce in una minore tolleranza immunitaria nella malattia infiammatoria intestinale, sia UC che CD, in quanto, in tali condizioni patologiche, le cellule immunitarie della mucosa intestinale perdono la capacità di differenziare tra antigeni patogeni e nonpatogeni, spostando quindi totalmente l’equilibrio verso il versante pro-infiammatorio. Le cellule del sistema immunitario innato riconoscono l’antigene tramite strutture denominate PRR, pattern recognition receptor. L’interazione degli antigeni con questi recettori rappresenta il primo processo che induce alla cascata di eventi infiammatori che caratterizzano l’IBD (1). Sulla superficie dei macrofagi, cellule dendritiche e cellule epiteliale che caratterizzano l’immunità innata della mucosa intestinale, tali recettori PRR, prendono il nome di Toll-like receptor (TLR) (6). A seguito del loro contatto con l’antigene, essi innescano la sintesi e quindi l’espressione della citochina pro- infiammatoria, l' NF-κB, mediatore di collegamento dell’immunità innata ed acquisita. Carenza o malfunzionamento di questi sensori può portare alla perdita di un adeguato controllo dei processi infiammatori e allo sviluppo di IBD. In particolar modo, questo è confermato anche dall’evidenza di molti studi che hanno dimostrato un aumento dell’espressione dei TLR nella mucosa dell'IBD rispetto ai controlli sani (7). The intestinal wall immune system contains a substantial amount of immune cells responsible for maintaining homeostasis, including epithelial cells, dendritic cells, and macrophages, which are responsible for the innate immune response (1). Physiologically, the body does not respond with systemic reactions against harmless bacteria and nutritional antigens. We therefore speak of the so-called controlled inflammation: in this case, in fact, the inflammation is inhibited by the T-CD4 + cells which promote the cancellation of the antigen through the release of proapoptotic cytokines IL-10, TGF-β, IL-4 (2-3 ). On the contrary, precisely in UC and CD, the level of apoptosis is significantly reduced (4). In IBD patients the level of Bcl-2 and Bcl-xl anti-apoptotic proteins is increased in T cells, while the Bax-mediated apoptotic mechanism decreased (5). All this results in a lower immune tolerance in inflammatory bowel disease, both UC and CD, as, in such pathological conditions, the immune cells of the intestinal mucosa lose the ability to differentiate between pathogenic and non-pathogenic antigens, thus totally shifting the balance. towards the pro-inflammatory side. The cells of the innate immune system recognize the antigen through structures called PRR, pattern recognition receptor. The interaction of antigens with these receptors represents the first process that induces the cascade of inflammatory events that characterize IBD (1). On the surface of macrophages, dendritic cells and epithelial cells that characterize the innate immunity of the intestinal mucosa, these PRR receptors are called Toll-like receptor (TLR) (6). Following their contact with the antigen, they trigger the synthesis and therefore the expression of the pro-inflammatory cytokine, NF-κB, the link mediator of innate and acquired immunity. Deficiency or malfunction of these sensors can lead to the loss of adequate control of inflammatory processes and the development of IBD. In particular, this is also confirmed by the evidence of many studies that have shown an increase in the expression of TLRs in the IBD mucosa compared to healthy controls (7).

L’NF-kB innesca il processo di infiammazione della mucosa. Nell’ IBD, l’espressione e l’attivazione di questo fattore di trascrizione nei macrofagi, nelle cellule dendritiche e nelle cellule epiteliali della mucosa intestinale è fortemente indotta, e la quantità di NF-κB prodotta è legata al grado di infiammazione. L’espressione aumentata dell’NF-κB nelle cellule dell’immunità innata determina una maggiore capacità di queste cellule di produrre e secernere citochine quali TNF-alfa, IFN-gamma IL-1 e IL-6. Oltre a queste citochine, NF-κB regola anche l’espressione di IL-12 e IL-23. Queste sono tutte citochine ad azione pro-infiammatoria e sono direttamente coinvolte nel danno tissutale tipico dell’IBD. Per esempio, TNF alfa e IL-1 mediano l’upregolazione delle metalloproteinasi della matrice portando a danno della matrice extracellulare e a degradazione della mucosa (8). Il Tumor necrosis factor (TNF) è una citochina ampiamente coinvolta nel processo infiammatorio alla base del Morbo di Crohn. Diversi fattori determinano il suo rilascio come virus, batteri, immunocomplessi, superantigeni, stress. Questa citochina pro-infiammatoria interagisce con due recettori diversi: TNF- R1, espresso su tutte le cellule nucleate, e TNF-R2, espresso preferenzialmente sulle cellule endoteliali ed ematopoietiche. L’interazione con questi recettori porta ad effetti pro-infiammatori che includono aumento della produzione di citochine pro-infiammatorie come IL-1B e IL-6, espressione di molecole di adesione, reclutamento di componenti cellulari (linfociti T, monociti e macrofagi) e inibizione dell’apoptosi di cellule infiammatorie. NF-kB triggers the inflammation process of the mucosa. In IBD, the expression and activation of this transcription factor in macrophages, dendritic cells and epithelial cells of the intestinal mucosa is strongly induced, and the amount of NF-κB produced is linked to the degree of inflammation. The increased expression of NF-κB in innate immunity cells determines a greater ability of these cells to produce and secrete cytokines such as TNF-alpha, IFN-gamma IL-1 and IL-6. In addition to these cytokines, NF-κB also regulates the expression of IL-12 and IL-23. These are all pro-inflammatory cytokines and are directly involved in tissue damage typical of IBD. For example, TNF alpha and IL-1 mediate the upregulation of matrix metalloproteinases leading to damage to the extracellular matrix and degradation of the mucosa (8). Tumor necrosis factor (TNF) is a cytokine widely involved in the inflammatory process underlying Crohn's disease. Several factors determine its release such as viruses, bacteria, immune complexes, superantigens, stress. This pro-inflammatory cytokine interacts with two different receptors: TNF-R1, expressed on all nucleated cells, and TNF-R2, preferentially expressed on endothelial and hematopoietic cells. Interaction with these receptors leads to pro-inflammatory effects which include increased production of pro-inflammatory cytokines such as IL-1B and IL-6, expression of adhesion molecules, recruitment of cellular components (T lymphocytes, monocytes and macrophages) and inhibition of apoptosis of inflammatory cells.

La cronicità dell’infiammazione della mucosa nell’IBD è causata dall’ incremento della migrazione ed infiltrazione e iper-attivazione delle cellule effettrici che producono alti livelli di citochine pro- infiammatorie come TNF, IL-6, IFN-gamma da parte di cellule epiteliali intestinali, linfociti, macrofagi e cellule dendritiche previamente attivate e responsabili della patogenesi dell’IBD. Infatti, le citochine indotte da NF-κB sono responsabili di un'ulteriore stimolazione, attivazione e differenziazione delle cellule immunitarie della lamina propria, con conseguente amplificazione dell'infiammazione della mucosa (8). In particolare, IL-12, IL-23 e TNF-α mediano la differenziazione ed infiltrazione delle cellule T-helper-Th1 nella mucosa intestinale, le quali sono responsabili di un una maggiore produzione di mediatori dell’infiammazione e di un richiamo di cellule immunitarie dall’ambiente sistemico tramite anche la produzione di molecole di adesione ed integrine, ICAM-1, ICAM-2, VCAM-1 e MAdCAM-1. Come caratteristica aggiuntiva, il TNF-α indotto da NF-κB è a sua volta in grado di potenziare l'attivazione di NF-κB, fornendo così un tipo di feedback positivo (8-9). The chronicity of mucosal inflammation in IBD is caused by the increased migration and infiltration and hyper-activation of effector cells that produce high levels of pro-inflammatory cytokines such as TNF, IL-6, IFN-gamma by epithelial cells intestinal, lymphocytes, macrophages and dendritic cells previously activated and responsible for the pathogenesis of IBD. Indeed, the cytokines induced by NF-κB are responsible for further stimulation, activation and differentiation of the immune cells of the lamina propria, with consequent amplification of mucosal inflammation (8). In particular, IL-12, IL-23 and TNF-α mediate the differentiation and infiltration of T-helper-Th1 cells in the intestinal mucosa, which are responsible for a greater production of inflammatory mediators and a recall of cells. immune systems from the systemic environment through the production of adhesion molecules and integrins, ICAM-1, ICAM-2, VCAM-1 and MAdCAM-1. As an additional feature, NF-ÎºB-induced TNF-α is in turn capable of potentiating NF-ÎºB activation, thus providing a type of positive feedback (8-9).

Terapie convenzionali Conventional therapies

Attualmente non esiste ancora una cura efficace e definitiva; i vari trattamenti disponibili sono utili per smorzare l'infiammazione ed attenuare sintomi e disturbi correlati e vanno personalizzati in base al singolo paziente, dato che la risposta varia spesso da individuo a individuo. Currently there is still no effective and definitive cure; the various treatments available are useful to dampen inflammation and alleviate related symptoms and disorders and must be customized according to the individual patient, since the response often varies from individual to individual.

L'armamentario terapeutico per IBD può essere diviso in 6 classi di farmaci. Nonostante il fatto che gli aminosalicilati, come la sulfasalazina e la mesalazina, siano stati usati per gestire l'IBD per decenni, il loro meccanismo d'azione in questo contesto rimane oscuro. Essi rappresentano farmaci anti-infiammatori non steroidei (FANS) della classe dei salicilati con azione limitata al tratto gastrointestinale. Allo stesso tempo, nel trattamento dell’IBD possono essere utilizzati gli antibiotici, come ciprofloxacina e metronidazolo, per controllare la colonizzazione dei batteri luminali. Inoltre, possono essere utilizzati anche i corticosteroidi che prendono di mira i recettori dei glucocorticoidi tramite cui hanno un effetto anti-infiammatorio mediato da un’inibizione della trascrizione genica di fattori e mediatori dell’infiammazione, oppure può subentrare anche la terapia con immunomodulatori e/o immunosoppressori, che modulano e/o sopprimono la risposta immunitaria. Tuttavia, dal momento che quest’ultima terapia ha un’incidenza sistemica e non locale, tale trattamento si associa all’innesco di ulteriori patologie associate ad un indebolimento sistemico delle difese immunitarie. Molti dei farmaci utilizzati nell’IBD come corticosteroidi, sulfasalazina e metotressato mediano i loro effetti antinfiammatori mediante inibizione dell’attività di NF-κB. Per esempio, i corticosteroidi sono in grado di indurre un aumento dell’espressione dell’IκB-alfa, proteina inibitoria che riporta il fattore di trascrizione in uno stato inattivato, legandosi direttamente ad esso ed impedendone la trans-attivazione. Le cellule epiteliali ed endoteliali del colon dei pazienti con IBD trattati con glucocorticoidi hanno mostrato livelli più bassi di NF-kB rispetto a quelli delle cellule dei pazienti non trattati con alcun farmaco. Il blocco dell’espressione e dell’attività di NF-κB si traduce in una notevole riduzione del processo infiammatorio. The therapeutic armamentarium for IBD can be divided into 6 drug classes. Despite the fact that aminosalicylates, such as sulfasalazine and mesalazine, have been used to manage IBD for decades, their mechanism of action in this context remains obscure. They represent non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) of the class of salicylates with limited action to the gastrointestinal tract. At the same time, antibiotics, such as ciprofloxacin and metronidazole, can be used in the treatment of IBD to control the colonization of luminal bacteria. In addition, corticosteroids that target glucocorticoid receptors can also be used through which they have an anti-inflammatory effect mediated by an inhibition of the gene transcription of inflammation factors and mediators, or therapy with immunomodulators and / or o immunosuppressants, which modulate and / or suppress the immune response. However, since the latter therapy has a systemic and non-local incidence, this treatment is associated with the triggering of further pathologies associated with a systemic weakening of the immune defenses. Many of the drugs used in IBD such as corticosteroids, sulfasalazine and methotrexate mediate their anti-inflammatory effects by inhibiting the activity of NF-κB. For example, corticosteroids are able to induce an increase in the expression of IκB-alpha, an inhibitory protein that returns the transcription factor to an inactivated state, binding directly to it and preventing its trans-activation. Colon epithelial and endothelial cells of IBD patients treated with glucocorticoids showed lower levels of NF-kB than those of cells of patients not treated with any drug. Blocking the expression and activity of NF-κB results in a significant reduction in the inflammatory process.

Sono inoltre disponibili per il trattamento IBD anche un numero di terapie biologiche che hanno come obiettivo NF-κB, TNF-α, o anche integrine. Questi farmaci sono anticorpi monoclonali (MAB) che agiscono mediante meccanismi di azione che includono neutralizzazione di mediatori dell’infiammazione specifici, con inibizione del loro signaling intracellulare. Una tipica terapia con MAB nel trattamento dell’IBD è in grado di diminuire l’overespressione del TNF-α, legando sia il TNF-α solubile, sia il TNF-α transmembrana, inibendo il legame della citochina ai suoi recettori: si bloccano così tutti i segnali pro-infiammatori da essa mediati e gli effetti dei mediatori la cui sintesi dipende dal TNF-α. Il trattamento con anticorpi anti-TNF-α ha dimostrato in-vivo di indurre la soppressione delle citochine mediante attivazione del suo signaling. Questi farmaci inoltre inducono apoptosi dei linfociti T attivati della lamina propria contrastando un meccanismo patologico osservato nel morbo di Crohn, dove la proliferazione delle cellule T della mucosa supera l’apoptosi di tali cellule (9). A number of biological therapies that target NF-κB, TNF-α, or even integrins are also available for IBD treatment. These drugs are monoclonal antibodies (MABs) which act through mechanisms of action that include neutralization of specific inflammatory mediators, with inhibition of their intracellular signaling. A typical therapy with MAB in the treatment of IBD is able to decrease the overexpression of TNF-α, by binding both soluble TNF-α and transmembrane TNF-α, inhibiting the binding of the cytokine to its receptors: they are thus blocked all the pro-inflammatory signals mediated by it and the effects of the mediators whose synthesis depends on TNF-α. Treatment with anti-TNF-α antibodies has been shown in vivo to induce the suppression of cytokines by activating its signaling. These drugs also induce apoptosis of the activated T lymphocytes of the lamina propria, counteracting a pathological mechanism observed in Crohn's disease, where the proliferation of mucosal T cells overcomes the apoptosis of these cells (9).

Molte delle classi di farmaci nominati per il trattamento dell’IBD sono associate a profili di sicurezza che devono essere attentamente considerati dal medico curante che anche dal paziente prima dell’inizio della terapia. Ad esempio, entrambi i corticosteroidi e gli immunomodulatori sono associati ad un aumento del rischio di infezione e perdita di massa ossea (corticosteroidi) o riduzione dei globuli bianchi (immunomodulatori) (9). Many of the classes of drugs appointed for the treatment of IBD are associated with safety profiles that must be carefully considered by the treating physician and also by the patient before starting therapy. For example, both corticosteroids and immunomodulators are associated with an increased risk of infection and bone loss (corticosteroids) or reduced white blood cells (immunomodulators) (9).

E’ quindi sentita la necessità di disporre di una terapia alternativa alle terapie convenzionali che presentano i sopra indicati effetti collaterali fortemente dannosi. E’ d’altronde noto che l’Andrographis paniculata è una pianta nativa dell’India e dello Sri Lanka sulla quale sono stati effettuati diversi trial clinici per i suoi effetti antinfiammatori a livello intestinale. L’Andrographis paniculata contiene polifenoli, flavonoidi e lattoni diterpenici: tra questi il principale composto attivo è l’Andrografolide, che ha mostrato in-vitro attività antinfiammatoria, immunomodulante, analgesica e antipiretica. L’Andrographis paniculata rappresenta una nuova terapia per pazienti affetti da leggera e moderata colite ulcerosa, mostrandosi una potenziale alternativa ai corticosteroidi, immunosoppressori e terapia biologica con anticorpi monoclonali verso mediatori dell’infiammazione (12). The need is therefore felt to have an alternative therapy to conventional therapies that have the aforementioned highly harmful side effects. It is also known that Andrographis paniculata is a native plant of India and Sri Lanka on which several clinical trials have been carried out for its anti-inflammatory effects on the intestine. Andrographis paniculata contains polyphenols, flavonoids and diterpene lactones: among these the main active compound is Andrographolide, which has shown in-vitro anti-inflammatory, immunomodulating, analgesic and antipyretic activity. Andrographis paniculata represents a new therapy for patients suffering from mild and moderate ulcerative colitis, showing itself to be a potential alternative to corticosteroids, immunosuppressants and biological therapy with monoclonal antibodies to inflammatory mediators (12).

L’Andrografolide e i suoi derivati esibiscono in vitro proprietà antinfiammatorie attraverso l’inibizione del fattore di trascrizione NF-κB (13-14). In particolare, l’Andrografolide reagisce con la cisteina in posizione-62 ridotta della subunità p50, formando un addotto covalente che blocca il legame dell’oligonucleotide alle proteine nucleari. Si blocca così il meccanismo di azione dell’NF-κB che promuove un aumento dell’espressione e della sintesi di differenti mediatori pro-infiammatori coinvolti nella risposta infiammatoria associata all’IBD, quali citochine, chemochine e molecole di adesione (15) Andrographolide and its derivatives exhibit anti-inflammatory properties in vitro through the inhibition of the transcription factor NF-κB (13-14). In particular, Andrographolide reacts with cysteine in the reduced 62-position of the p50 subunit, forming a covalent adduct that blocks the binding of the oligonucleotide to nuclear proteins. This blocks the mechanism of action of NF-κB which promotes an increase in the expression and synthesis of different pro-inflammatory mediators involved in the inflammatory response associated with IBD, such as cytokines, chemokines and adhesion molecules (15)

In esperimenti in-vitro con cellule RAW 264.7, cellule macrofagiche murine, è stato osservato che l’Andrografolide è inoltre in grado di ridurre l’espressione dell’iNOS e di conseguenza la produzione di ossido nitrico. Tale inibizione della produzione di NO dalla iNOS è dovuta sia al blocco dell’attività ezimatica sia ad un’alterazione della sintesi dell’enzima nonché associata ad riduzione della stabilità dell’enzima stesso attraverso un meccanismo di post-trascrizione (16). In in-vitro experiments with RAW 264.7 cells, murine macrophage cells, it was observed that Andrographolide is also able to reduce the expression of iNOS and consequently the production of nitric oxide. This inhibition of NO production by iNOS is due both to the blocking of the ezymatic activity and to an alteration of the synthesis of the enzyme as well as associated with a reduction in the stability of the enzyme itself through a post-transcription mechanism (16).

L'Andrographolide previene la produzione di specie reattive dell’ossigeno (ROS) da parte dei neutrofili attraverso la modulazione di una via della proteina chinasi C- (PKC). Questo conferisce all’estratto di Andrographis paniculata, e al suo principale attivo, la capacità di down-regolare l’azione dell’integrina leucocitaria Mac-1 (αMβ2CD11bCD18) che è stato segnalato essere up- regolata da ROS. Alterando questo meccanismo si ha una ridotta infiltrazione e transmigrazione nei neutrofili nel sito infiammato (17). Andrographolide prevents the production of reactive oxygen species (ROS) by neutrophils through the modulation of a protein kinase C- (PKC) pathway. This gives the extract of Andrographis paniculata, and its main active, the ability to down-regulate the action of Mac-1 leukocyte integrin (αMβ2CD11bCD18) which has been reported to be up-regulated by ROS. By altering this mechanism there is a reduced infiltration and transmigration in the neutrophils in the inflamed site (17).

È inoltre possibile conferire all’Andrographis paniculata proprietà immunomodulanti che principalmente interessano le cellule dell’immunità innata quali macrofagi, cellule dendritiche e linfocitit T, mediante la down-regolazione di citochine proinfiammatorie che ne stimolano l’attività (17-18-19=64 – 65-66 da review). In tale contesto, è stato osservato che andrographolide riduce significativamente ed in modo dose-dipendente, la produzione di IFN-γ in-vitro in cellule T murine stimolate con concanavalina, mentre i suoi effetti sull'inibizione IL-2 erano parziali. Inoltre, può ridurre il ERK1/2 fosforilazione associata ad una riduzione della produzione di IFNγ (18). In un altro studio è stata osservata la capacità di andrographolide di interferire con la maturazione delle cellule dendritiche DC e con la loro capacità di presentare antigeni alla cellule-T (19). It is also possible to give Andrographis paniculata immunomodulating properties that mainly affect innate immunity cells such as macrophages, dendritic cells and T lymphocytes, through the down-regulation of proinflammatory cytokines that stimulate their activity (17-18-19 = 64 - 65-66 from review). In this context, andrographolide was observed to significantly reduce in-vitro IFN-γ production in concanavaline-stimulated murine T cells in a dose-dependent manner, while its effects on IL-2 inhibition were partial. Furthermore, it can reduce the ERK1 / 2 phosphorylation associated with a reduction in IFNγ production (18). In another study the ability of andrographolide to interfere with the maturation of DC dendritic cells and their ability to present antigens to T-cells was observed (19).

L’estratto di Andrographis paniculata contiene inoltre Andrograpanina, un idrolisato del Neoandrografolide, un altro lattone biciclico diterpenoide contenuto nell’estratto di Andrographis paniculata, che ha mostrato attività antinfiammatorie. L’Andrograpanina è in grado di ridurre l’espressione di mRNA di diversi geni tra cui TNF-alfa, IL-6, IL-12p35 e IL-12p40, in maniera dose- dipendente (20). The extract of Andrographis paniculata also contains Andrograpanin, a hydrolyzate of Neoandrographolide, another bicyclic diterpenoid lactone contained in the extract of Andrographis paniculata, which has shown anti-inflammatory activity. Andrograpanin is able to reduce the mRNA expression of various genes including TNF-alpha, IL-6, IL-12p35 and IL-12p40, in a dose-dependent manner (20).

Tutti questi studi, seppur preclinici ed in-vitro, possono giustificare gli effetti inibitori che l’estratto di Andrographis paniculata può avere sulle cellule immunitarie come linfociti T e macrofagi, che sono implicati nello sviluppo e nella progressione della patologia IBD, quali CD e UC. All these studies, albeit preclinical and in-vitro, can justify the inhibitory effects that the Andrographis paniculata extract can have on immune cells such as T lymphocytes and macrophages, which are implicated in the development and progression of IBD pathology, such as CD and UC. .

L’estratto di Andrographis paniculata è stata utilizzata in studi clinici in pazienti che presentavano leggera e moderata rettocolite ulcerosa in trattamento con mesalamina. Il trattamento con Andrographis paniculata a 1200 mg/day e 1800 mg/day, risulta essere efficace rispetto il placebo nel controllo della risposta infiammatoria nei pazienti affetti da IBD con elevata efficacia nella remissione della sintomatologia, con una maggiore incidenza alla dose più elevata. I pazienti sono stati randomizzati ad estratto di Andrographis paniculata (HMPL-004) 1.200 mg o 1.800 mg al giorno o placebo per 8 settimane. Dai risultati ottenuti in totale, il 45 e il 60% dei pazienti che ricevevano Andrographis paniculata 1.200 mg e 1.800 mg al giorno rispettivamente, presentavano un miglioramento della sintomatologia valutata dalla risposta clinica alla settimana 8, rispetto al 40% di quelli che avevano ricevuto placebo. Inoltre, il 34 e il 38% dei pazienti che hanno ricevuto Andrographis paniculata rispettivamente 1.200 mg e 1.800 mg al giorno, erano in remissione clinica alla settimana 8, rispetto al 25% di quelli che hanno ricevuto placebo (21-22). Andrographis paniculata extract has been used in clinical studies in patients who presented with mild and moderate ulcerative colitis under treatment with mesalamine. Treatment with Andrographis paniculata at 1200 mg / day and 1800 mg / day, appears to be effective compared to placebo in controlling the inflammatory response in IBD patients with high efficacy in symptom remission, with a higher incidence at the highest dose. Patients were randomized to Andrographis paniculata extract (HMPL-004) 1,200 mg or 1,800 mg per day or placebo for 8 weeks. From the overall results, 45 and 60% of patients receiving Andrographis paniculata 1,200 mg and 1,800 mg per day, respectively, had symptom improvement as assessed by clinical response at week 8, compared with 40% of those who received placebo. . In addition, 34 and 38% of patients who received Andrographis paniculata 1,200 mg and 1,800 mg per day, respectively, were in clinical remission at week 8, compared with 25% of those who received placebo (21-22).

L’estratto di Silybum marianum (nome comune: Cardo mariano) è essenzialmente costiuito da Silimarina, contenente approssimativamente dal 65 all’ 80% di flavonolignani (Silibina A, Silibina B, Isosilibina A, Isosilibina B, Silicristina e Silidianina), con piccole quantità di flavonoidi, e dal 20% al 35% di acidi grassi e composti polifenolici che possiedono una serie di effetti metabolici regolatori. I principi attivi che costituiscono la miscela presentano proprietà antiossidanti (23). Sembra che l’intestino sia il miglior posto in cui i polifenoli possano esplicare la loro azione protettiva contro l’infiammazione (24-25), ed infatti giocano un ruolo importante nell’integrità della mucosa gastrica, infiammazione e permeabilità (26). Tali composti fenolici esplicano la loro azione modulando l’espressione di geni proinfiammatori come ciclossigenasi, lipossigenasi, ossido nitrico sintasi e riducendo la produzione di importanti citochine pro-infiammatorie come il TNF-alfa, agendo principalmente attraverso l’inibizione dell’NF-κB (27). L’attività anti-infiammatoria dei composti polifenolici contenuti nell’estratto di Cardo mariano, va poi ad associarsi ad una riduzione del danno ossidativo, modulazione della flora batterica a livello del colon e la variazione nell’espressione genica. È infatti confermata l’importanza centrale del controllo omeostatico dell’ambiente redox dell’epitelio intestinale necessario sia per la digestione dei nutrienti che per il loro assorbimento, nonché per la proliferazione delle cellule staminali, per regolazione dei processi apoptotici degli enterociti e per la modulazione della risposta immunitaria (28). Principalmente, i polifenoli del cardo mariano sono in grado di prevenire o ritardare la progressione delle patologie intestinali caratterizzate da stress ossidativo e infiammazione, agendo come scavenger di radicali liberi e modulatori di specifici geni infiammatori implicati nel signaling redox cellulare (29). Silybum marianum extract (common name: Milk thistle) is essentially made up of Silymarin, containing approximately 65 to 80% flavonolignans (Silybin A, Silybin B, Isosilybin A, Isosilybin B, Silicristin and Silidianin), with small quantities of flavonoids, and from 20% to 35% of fatty acids and polyphenolic compounds which possess a series of regulatory metabolic effects. The active ingredients that make up the mixture have antioxidant properties (23). It seems that the intestine is the best place where polyphenols can exert their protective action against inflammation (24-25), and in fact play an important role in the integrity of the gastric mucosa, inflammation and permeability (26). These phenolic compounds exert their action by modulating the expression of proinflammatory genes such as cyclooxygenase, lipoxygenase, nitric oxide synthase and reducing the production of important pro-inflammatory cytokines such as TNF-alpha, acting mainly through the inhibition of NF-κB ( 27). The anti-inflammatory activity of the polyphenolic compounds contained in the milk thistle extract is then associated with a reduction of oxidative damage, modulation of the bacterial flora in the colon and the variation in gene expression. In fact, the central importance of the homeostatic control of the redox environment of the intestinal epithelium is confirmed, necessary both for the digestion of nutrients and for their absorption, as well as for the proliferation of stem cells, for the regulation of the apoptotic processes of the enterocytes and for the modulation of the immune response (28). Mainly, milk thistle polyphenols are able to prevent or delay the progression of intestinal pathologies characterized by oxidative stress and inflammation, acting as free radical scavengers and modulators of specific inflammatory genes involved in cellular redox signaling (29).

La Silimarina, è l’attivo principale del Cardo mariano, responsabile delle proprietà antiossidanti dell’estratto le quali ne determinano l’effetto protettivo della pianta. La Silimarina ha mostrato potenti effetti antinfiammatori ed è in grado di contribuire alle difese antiossidanti dell’organismo mediante diversi meccanismi. Lo scavenging diretto dei radicali liberi e la capacità di chelare ioni quali Ferro e Rame sono meccanismi antiossidanti particolarmente efficaci a livello intestinale. La prevenzione della formazione dei radicali liberi mediante inibizione degli enzimi che producono ROS e il miglioramento dell’integrità della catena di trasporto dei mitocondri in condizioni di stress, sono altri meccanismi di grande importanza. Silymarin is the main active of milk thistle, responsible for the antioxidant properties of the extract which determine the protective effect of the plant. Silymarin has shown powerful anti-inflammatory effects and is able to contribute to the body's antioxidant defenses through various mechanisms. The direct scavenging of free radicals and the ability to chelate ions such as Iron and Copper are particularly effective antioxidant mechanisms in the intestine. The prevention of the formation of free radicals by inhibiting the enzymes that produce ROS and improving the integrity of the mitochondria transport chain under stress conditions are other mechanisms of great importance.

Analizzando i livelli di ROS intracellulare, si conclude che un eccesso della produzione di radicali liberi nel tessuto infiammato può indurre la migrazione delle cellule dell’immunità innata nel sito dell’infiammazione (30). I neutrofili polimorfonucleati così richiamati inducono l’aumento dell’espressione di componenti infiammatorie, tra cui citochine pro-infiammatorie come IL-1B, IL-6, IL-8, TNF-alfa, molecole di adesione, prostaglandine, leucotrieni, e fattori che attivano all’aggregazione piastrinica (31). Inoltre, i neutrofili attivati consumano una gran quantità di ossigeno causando un aumento della produzione di ROS e sovraespressione di enzimi ossidativi quali mieloperossidasi (MPO). Questi enzimi sono localizzati nei granuli dei neutrofili e i loro livelli sono indice dell’infiltrazione dei neutrofili nel sito dell’infiammazione in modelli umani di IBD. Studi hanno confermato che la Silimarina è in grado di ridurre l’attività delle MPO nella colite di ratto e la migrazione dei neutrofili prevenendo così la progressione della condizione infiammatoria (36). Analyzing the intracellular ROS levels, it is concluded that an excess of free radical production in the inflamed tissue can induce the migration of innate immunity cells to the inflammation site (30). The polymorphonuclear neutrophils thus recalled induce an increase in the expression of inflammatory components, including pro-inflammatory cytokines such as IL-1B, IL-6, IL-8, TNF-alpha, adhesion molecules, prostaglandins, leukotrienes, and factors that activate platelet aggregation (31). Furthermore, activated neutrophils consume a large amount of oxygen causing increased ROS production and overexpression of oxidative enzymes such as myeloperoxidase (MPO). These enzymes are located in the granules of neutrophils and their levels indicate the infiltration of neutrophils at the site of inflammation in human models of IBD. Studies have confirmed that silymarin is able to reduce the activity of MPOs in rat colitis and the migration of neutrophils, thus preventing the progression of the inflammatory condition (36).

Un severo stress ossidativo conduce a danno ossidativo e morte cellulare. I principali fattori di trascrizione coinvolti nel sistema di difesa antiossidante sono NRF-2, NF-κB e AP-1. L’estratto di Cardo mariano incrementa l’espressione cellulare di NRF-2 la quale ha un ruolo significante nella risposta a stress ossidativo, in quanto è responsabile dell’espressione di fattori antiossidanti, come la catalasi, la superossido dismutasi (SOD), la glutatione perossidasi, la tireodossina perossidasi, la glutatione trasferasi, la glucoronato trasferasi ed altri. Questi costituiscono gli Antiossidanti di seconda generazione, e sono enzimi in grado di neutralizzare i radicali liberi in maniera molto più efficiente di coloro che sono identificati come Antiossidanti di prima generazione, come Vitamina C, Vitamina E, Carotenoidi, clorofilla, acido alfa lipoico, Coenzima Q10 ed altri. L’abilità della Silimarina di up-regolare la sintesi e l’espressione di NRF-2 è stata studiata in modelli in-vitro e in-vivo. Il fattore di trascrizione nucleare eritroide-2 (Nrf2; codificato nell’uomo dal gene NFE2L2) è un fattore di trascrizione che regola l’espressione genica di una grande varietà di enzimi citoprotettivi antiossidanti e della fase II di disintossicazione attraverso una sequenza promotrice nota come elemento di risposta antiossidante (ARE). L’ ARE è un elemento promotore che si trova in molti geni citoprotettivi e quindi Nrf2 svolge un ruolo fondamentale nel sistema di difesa cellulare contro gli stress ambientali ARE-dipendenti. Gli agenti che hanno come target la via ARE/Nrf2 sono stati testati in una vasta gamma di disturbi e almeno un nuovo farmaco Nrf2 attivante è stato approvato dalla FDA americana. Sperimentazioni in-vitro e in-vivo e recenti risultati di studi clinici hanno consolidato l’evidenza che le strategie di attivazione di Nrf2 - che possono includere farmaci, alimenti, integratori e esercizio fisico - sono probabilmente più efficaci nel prevenire le malattie e nel rallentarne la progressione, ma possono essere utili anche come risorse terapeutiche. Un capitolo a parte e peculiare è quello che riguarda i tumori, dove l’attivazione della via Nrf2 può determinare benefici in termini di chemio-prevenzione ma può anche risultare inutile o addirittura dannoso. L’interazione con la via ARE/Nrf2 è quindi di grande interesse come possibile target per il controllo di malattie degenerative, immunologiche ed altro. Esistono decine di piante e integratori alimentari che interagiscono con la via ARE/Nrf2 e fra gli integratori maggiormente studiati relativamente agli effetti sulla via ARE/Nrf2 c’è il Protandim® (costituito da Silybum marianum, Bacopa monniera, Withania somnifera, Camelia sinensis e Curcuma longa) che è un attivatore di Nrf2 (sembra, soprattutto per la curcuma) (32). Anche le alghe (Ulva lactuca e altre) sono un ambito di interesse per la via ARE/Nrf2, mentre fra i nutrienti di un certo interesse sono i broccoli e diversi composti presenti nell’aglio, pomodori, uva, tè verde, caffè, frutti di bosco che attivano Nrf2. In tale contesto di protezione da stress ossidativo, ricerche scientifiche dimostrano che la silimarina è in grado di aumentare l’attività antiossidante di enzimi quali la superossido dismutasi e la catalasi (37). Severe oxidative stress leads to oxidative damage and cell death. The major transcription factors involved in the antioxidant defense system are NRF-2, NF-κB, and AP-1. Milk thistle extract increases the cellular expression of NRF-2 which has a significant role in the response to oxidative stress, as it is responsible for the expression of antioxidant factors, such as catalase, superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase, thyrodoxin peroxidase, glutathione transferase, glucuronate transferase and others. These constitute the second generation antioxidants, and are enzymes capable of neutralizing free radicals much more efficiently than those identified as first generation antioxidants, such as Vitamin C, Vitamin E, Carotenoids, chlorophyll, alpha lipoic acid, Coenzyme Q10 and others. The ability of silymarin to up-regulate the synthesis and expression of NRF-2 has been studied in in-vitro and in-vivo models. Erythroid nuclear transcription factor-2 (Nrf2; encoded in humans by the NFE2L2 gene) is a transcription factor that regulates the gene expression of a large variety of antioxidant and phase II cytoprotective enzymes through a promoter sequence known as antioxidant response element (ARE). ARE is a promoter element found in many cytoprotective genes and therefore Nrf2 plays a fundamental role in the cellular defense system against ARE-dependent environmental stresses. Agents that target the ARE / Nrf2 pathway have been tested in a wide range of disorders and at least one new activating Nrf2 drug has been approved by the US FDA. In-vitro and in-vivo trials and recent clinical trial results have consolidated the evidence that Nrf2 activation strategies - which may include drugs, foods, supplements and exercise - are likely to be more effective in preventing and slowing disease. progression, but they can also be useful as therapeutic resources. A separate and peculiar chapter is that which concerns tumors, where the activation of the Nrf2 pathway can lead to benefits in terms of chemo-prevention but can also be useless or even harmful. The interaction with the ARE / Nrf2 pathway is therefore of great interest as a possible target for the control of degenerative, immunological and other diseases. There are dozens of plants and food supplements that interact with the ARE / Nrf2 pathway and among the most studied supplements regarding the effects on the ARE / Nrf2 pathway there is Protandim® (consisting of Silybum marianum, Bacopa monniera, Withania somnifera, Camelia sinensis and Curcuma longa) which is an activator of Nrf2 (it seems, especially for turmeric) (32). Algae (Ulva lactuca and others) are also an area of interest for the ARE / Nrf2 pathway, while among the nutrients of some interest are broccoli and various compounds present in garlic, tomatoes, grapes, green tea, coffee, fruits of forest that activate Nrf2. In this context of protection from oxidative stress, scientific research shows that silymarin is able to increase the antioxidant activity of enzymes such as superoxide dismutase and catalase (37).

Allo stesso modo, il Cardo mariano è in grado di diminuire le risposte infiammatorie tramite inibizione del pathways di innesco di NF-kB, meccanismo emergente degli effetti protettivi della Silimarina. L’attività anti-infiammatoria dei composti fenolici che costituiscono gli attivi del Cardo mariano è stata dimostrata in studi in-vitro e invivo (27). L’attività è dovuta alla modulazione dell’espressione di geni proinfiammatori come COX, LOX, Ossido Nitrico sintasi endoteliale e/o inducibile (eNOS e iNOS, quest’ultima principalmente coinvolta nei processi infiammatorio) e diverse importanti citochine (33). I polifenoli possono sopprimere il TNF-α attivato, i pathways infiammatori associati all’NF-κB sia in-vitro che in-vivo. Studi hanno confermato che l’effetto protettivo anti-infiammatorio della Silimarina è mediato dal loro effetto inibitorio sull’ NF-κB, che è un fattore di trascrizione chiave per numerosi geni coinvolti nella regolazione dell’infiammazione, sistema immunitario, differenziazione cellulare, apoptosi. Similarly, milk thistle is able to decrease inflammatory responses through inhibition of the NF-kB trigger pathways, an emerging mechanism of the protective effects of silymarin. The anti-inflammatory activity of the phenolic compounds that make up the active ingredients of milk thistle has been demonstrated in in-vitro and in vivo studies (27). The activity is due to the modulation of the expression of pro-inflammatory genes such as COX, LOX, endothelial and / or inducible nitric oxide synthase (eNOS and iNOS, the latter mainly involved in inflammatory processes) and several important cytokines (33). Polyphenols can suppress activated TNF-α, the inflammatory pathways associated with NF-κB both in-vitro and in-vivo. Studies have confirmed that the anti-inflammatory protective effect of silymarin is mediated by their inhibitory effect on NF-κB, which is a key transcription factor for numerous genes involved in the regulation of inflammation, the immune system, cell differentiation, apoptosis.

La maggiore attività antiossidante degli attivi polifenolici del Cardo mariano si esplica a livello intestinale. I polifenoli della Silimarina contribuiscono a mantenere l’integrità della mucosa intestinale, riducono il danno al colon, la perossidazione lipidica e l’infiltrazione dei neutrofili (24,26). In questo modo aiutano a prevenire o ritardare la progressione delle patologie intestinali quali Morbo di Crohn e Rettocolite ulcerosa, caratterizzate da stress ossidativo e infiammazione, agendo come scavenger diretti di radicali liberi e come modulatori di specifici fattori di trascrizione quali NF-κB e NRF2. The greater antioxidant activity of the polyphenolic active ingredients of milk thistle is expressed in the intestine. The silymarin polyphenols help maintain the integrity of the intestinal mucosa, reduce damage to the colon, lipid peroxidation and infiltration of neutrophils (24,26). In this way they help prevent or delay the progression of intestinal diseases such as Crohn's disease and ulcerative colitis, characterized by oxidative stress and inflammation, acting as direct free radical scavengers and as modulators of specific transcription factors such as NF-κB and NRF2.

Lo Zinco è un minerale metallico essenziale per la vita e la salute dell'uomo; grazie alle sue innumerevoli proprietà ha un ruolo importante nel mantenimento della normale fisiologia dell’organismo, contribuendo alla regolazione di numerosi processi metabolici. Inoltre prende parte a diversi complessi enzimatici importanti per il nostro organismo, come ad esempio la Superossido dismutasi, che ha azione antiossidante, l’alcool deidrogenasi, la lattico deidrogenasi e le proteine zincfingers che sono coinvolte nella regolazione della trascrizione del DNA. Lo Zinco presenta attività antimicrobiche, antiossidanti e a livello del sistema immunitario influenza la reattività dei linfociti. Zinc is a metallic mineral essential for human life and health; thanks to its countless properties it plays an important role in maintaining the normal physiology of the body, contributing to the regulation of numerous metabolic processes. It also takes part in various enzymatic complexes that are important for our body, such as superoxide dismutase, which has an antioxidant action, alcohol dehydrogenase, lactic dehydrogenase and zinc finger proteins which are involved in the regulation of DNA transcription. Zinc has antimicrobial, antioxidant activities and at the level of the immune system it influences the reactivity of lymphocytes.

Tale minerale viene utilizzato principalmente in forma ossidata: Ossido di zinco (ZnO), tuttavia anche se probabilmente risulta essere meno efficacie, è comunque presente ed utilizzato in altre varie formule, come lo zinco solfato (ZnSO4), lo zinco acetato [(CH3COO)2Zn] e zinco gluconato (C12H22O14Zn). This mineral is mainly used in oxidized form: Zinc oxide (ZnO), however even if it is probably less effective, it is still present and used in other various formulas, such as zinc sulphate (ZnSO4), zinc acetate [(CH3COO) 2Zn] and zinc gluconate (C12H22O14Zn).

Lo Zinco ha numerose proprietà che possono essere finalizzate a migliorare la salute dell'uomo. Questo minerale può esercitare la propria efficacia in modo diverso e in diverse applicazioni. Ciò dipende se viene reso assorbibile o meno o se viene assunto per via orale o applicato in maniera topica. Le proprietà dello zinco, anche se non tutte confermate dalla bibliografia scientifica, sono: Zinc has numerous properties that can be aimed at improving human health. This mineral can exert its effectiveness in different ways and in different applications. This depends on whether or not it is made absorbable or whether it is taken orally or applied topically. The properties of zinc, although not all confirmed by the scientific bibliography, are:

1) Uso topico – creme, pomate, unguenti e spray: 1) Topical use - creams, ointments, ointments and sprays:

- Antibatterico; - Antibacterial;

- Antivirale - nota: gli spray nasali a base di zinco sono stati ritirati dal mercato; - Antipruriginoso – in creme, pomate, polvere per bambini, shampoo ecc.; - Filtro solare; - Antiviral - note: zinc-based nasal sprays have been withdrawn from the market; - Antipruritic - in creams, ointments, baby powder, shampoos etc .; - Solar filter;

- Preventivo gli infortuni muscolari; - Preventing muscle injuries;

- Deodorante - Deodorant

2) Uso interno – integratori di zinco, generalmente formulati in compresse: - Antiossidante; 2) Internal use - zinc supplements, generally formulated in tablets: - Antioxidant;

- Antivirale – contro il raffreddore da rinovirus; - Antiviral - against rhinovirus colds;

- Antidiarroico; - Antidiarrheal;

- Antidepressivo; - Antidepressant;

- In parte preventivo contro la degenerazione maculare senile; - Partly preventive against age-related macular degeneration;

- Rimedio per l'acrodermatite enteropatica; - Remedy for enteropathic acrodermatitis;

- Riduce i sintomi della gastroenterite infettiva; - Reduces the symptoms of infectious gastroenteritis;

- È possibile che mascheri i farmaci nelle urine. - It is possible that you mask drugs in your urine.

La maggior parte degli integratori alimentari multi-salini e vitaminici da assumere giornalmente, a compressa singola, contiene Zinco nutriente sotto forma di ossido di zinco, acetato di zinco o gluconato di Zinco, ed inoltre esistono anche molti rimedi farmacologici a base di Zinco, sempre ad uso interno, che basano il proprio meccanismo d'azione sull'efficacia di questo minerale. Most of the multi-saline and vitamin food supplements to be taken daily, single tablet, contain nutritious zinc in the form of zinc oxide, zinc acetate or zinc gluconate, and there are also many Zinc-based pharmacological remedies, always for internal use, which base their mechanism of action on the effectiveness of this mineral.

Una dieta povera di Zinco può rendere l’intestino più sensibile alle infiammazioni; questo è stato A diet low in zinc can make the intestine more sensitive to inflammation; this was

condotto su cellule intestinali isolate, dapprima sottoposte a carenza di Zinco e poi a stress conducted on isolated intestinal cells, first subjected to zinc deficiency and then to stress

infiammatorio, dimostrando l’andare incontro delle cellule a morte cellulare programmata e l’interruzione della continuità dell’epitelio intestinale; quindi, è stato visto come una carenza di Zinco potesse contribuire all’insorgenza di patologie cronico-infiammatorie dell’apparato intestinale, come il morbo di Crohn. Questo studio suggerisce dunque che qualora si presentassero disturbi gastrointestinali cronici, i livelli di Zinco dovrebbero essere ripristinati; inoltre, dimostra che i pazienti affetti dal morbo di Crohn beneficiano di supplementi di zinco, dando nuovi possibili spunti terapeutici per trattare i sintomi di questa patologia. inflammatory, demonstrating that the cells meet with programmed cell death and the interruption of the continuity of the intestinal epithelium; therefore, it was seen how a zinc deficiency could contribute to the onset of chronic-inflammatory diseases of the intestinal system, such as Crohn's disease. This study therefore suggests that if chronic gastrointestinal disorders occur, zinc levels should be restored; moreover, it demonstrates that patients with Crohn's disease benefit from zinc supplements, giving new possible therapeutic insights to treat the symptoms of this disease.

Dal momento che l'esaurimento dello Zinco intracellulare influenza la segnalazione attivata dal TNF- α, spostando il destino delle cellule intestinali dalla sopravvivenza alla morte, uno dei meccanismi tramite cui lo Zinco esplica un’attività antiinfiammatorio è la regolazione/modulazione/inibizione dell’azione cellulare del TNF-α. Infatti, TNF-α promuove un percorso di sopravvivenza dipendente dallo Zinco che include la modulazione dell'espressione genica di fattori di trascrizione e di proteine di segnalazione. Quindi, si dimostra come integratori di Zinco migliorano i sintomi della malattia di Crohn e diminuiscono la permeabilità intestinale. Since intracellular zinc depletion affects TNF-α-activated signaling, shifting the fate of intestinal cells from survival to death, one of the mechanisms by which zinc exerts anti-inflammatory activity is regulation / modulation / inhibition of cellular action of TNF-α. Indeed, TNF-α promotes a zinc-dependent survival pathway that includes modulation of gene expression of transcription factors and signaling proteins. Hence, zinc supplements are shown to improve symptoms of Crohn's disease and decrease intestinal permeability.

L’utilizzo dello Zinco nelle IBD è inoltre giustificato dal fatto che il supplemento di questo microelemento aumenta l’espressione di A20 e PPAR-alfa, due Zinco proteine con proprietà anti- infiammatorie (34). Questi fattori di trascrizione inibiscono l’attivazione di NF-κB, e la produzione di citochine pro-infiammatorie da esso mediato risulta essere drasticamente ridotta. The use of zinc in IBD is also justified by the fact that the supplement of this microelement increases the expression of A20 and PPAR-alpha, two zinc proteins with anti-inflammatory properties (34). These transcription factors inhibit the activation of NF-κB, and the production of pro-inflammatory cytokines mediated by it is drastically reduced.

Il trattamento con Zinco è in grado di migliorare la sintomatologia annessa alle IBD grazie alla sua attività di neutralizzazione dei ROS i quali rappresentano la principale conseguenza dello stato infiammatorio. Inoltre, l’utilizzo dello Zinco risulta essere essenziale nel trattamento della sintomatologia diarroica. Lo Zinco infatti possiede proprietà antidiarroiche: la somministrazione di Zinco è una soluzione semplice, economica ed efficacie per il trattamento degli episodi di diarrea nei bambini dei paesi in via di sviluppo. In passato si riteneva necessario aumentare l'apporto di zinco, a causa della diarrea, solo per compensare le perdite fecali. D' altro canto recenti studi evidenziano che l'integrazione con zinco - ciclo di trattamento da 10 a 14 giorni - possa ridurre la durata e la gravità degli episodi, contribuendo anche a prevenirli fino a tre mesi. Zinc treatment is able to improve the symptoms associated with IBD thanks to its neutralization activity of ROS which represent the main consequence of the inflammatory state. Furthermore, the use of zinc is essential in the treatment of diarrheal symptoms. In fact, Zinc has anti-diarrheal properties: the administration of Zinc is a simple, economical and effective solution for the treatment of diarrhea episodes in children in developing countries. In the past it was considered necessary to increase the zinc intake, due to diarrhea, just to compensate for faecal losses. On the other hand, recent studies show that supplementation with zinc - a treatment cycle from 10 to 14 days - can reduce the duration and severity of episodes, also helping to prevent them for up to three months.

Inoltre, esercitando un’attività antimicrobica diretta, l'integrazione di Zinco attenua sensibilmente i sintomi della gastroenterite infettiva. In particolare, lo Zinco risulta essere fisiologicamente rilasciato dalle cellule epiteliali della mucosa gastrointestinale e delle cellule del sistema immunitario. L’integrazione di tale minerale negli alimenti risulta essere necessaria in uno stato di alterazione dei fisiologici processi delle cellule epiteliali della mucosa gastro-intestinale e del sistema immunitario che comportano una riduzione del rilascio di Zinco. Furthermore, by exerting a direct antimicrobial activity, zinc supplementation significantly attenuates the symptoms of infectious gastroenteritis. In particular, Zinc appears to be physiologically released from the epithelial cells of the gastrointestinal mucosa and from the cells of the immune system. The integration of this mineral in food appears to be necessary in a state of alteration of the physiological processes of the epithelial cells of the gastro-intestinal mucosa and of the immune system which lead to a reduction in the release of zinc.

Lo Zinco spicca anche per le sue ottime proprietà antiossidanti che esplica attraverso diversi meccanismi: Zinc also stands out for its excellent antioxidant properties which it carries out through different mechanisms:

- lo Zinco compete con il ferro e il rame per il legame a membrane cellulari e proteine, non permettendo a tali metalli di catalizzare la produzione del radicale idrossilico dall’acqua (35); - Zinc competes with iron and copper for binding to cell membranes and proteins, not allowing these metals to catalyze the production of the hydroxyl radical from water (35);

- lo Zinco si lega ai gruppi sulfidrilici delle biomolecole proteggendole dall’ossidazione (35); - Zinc binds to the sulfhydryl groups of biomolecules protecting them from oxidation (35);

- lo Zinco aumenta l’attivazione di proteine e molecole antiossidanti come GSH, catalasi e SOD, e riduce le attività degli enzimi pro-ossidanti come iNOS e NADPH ossidasi, sfavorendo la generazione dei prodotti di perossidazione lipidica (35). - Zinc increases the activation of proteins and antioxidant molecules such as GSH, catalase and SOD, and reduces the activities of pro-oxidant enzymes such as iNOS and NADPH oxidase, disfavouring the generation of lipid peroxidation products (35).

SOMMARIO DELL’INVENZIONE SUMMARY OF THE INVENTION

La Richiedente ha ora trovato che l’associazione di estratto di Andrographis paniculata, estratto di Silybum marianum e Zinco è particolarmente efficace nel trattamento dei disturbi infiammatori del tratto intestinale, poiché riduce la sintomatologia associata al disturbo infiammatorio intestinale ripristinando la fisiologica funzionalità intestinale. The Applicant has now found that the combination of Andrographis paniculata extract, Silybum marianum extract and Zinc is particularly effective in the treatment of inflammatory disorders of the intestinal tract, since it reduces the symptoms associated with intestinal inflammatory disorder by restoring intestinal physiological function.

In questo modo la formulazione può essere impiegata come valido sostituto e/o coadiuvante della terapia convenzionale la quale ultima, presenta i suddetti effetti collaterali. In this way the formulation can be used as a valid substitute and / or adjuvant of the conventional therapy which, lastly, has the aforementioned side effects.

Questa associazione è in particolare efficace nella riduzione dei numerosi processi infiammatori che caratterizzano l’IBD. La formulazione proposta è in grado di intervenire nel ripristino dell’attività del sistema immunitario, riportandolo da una condizione di up-regolazione ad una condizione fisiologica; l’insieme degli ingredienti caratterizzanti la nuova formulazione è inoltre in grado di inibire i meccanismi proinfiammatori innescati dall’alterazione del sistema immunitario, riducendo l’espressione di recettori PRR in cellule dendritiche, cellule epiteliali, macrofagi e linfociti che caratterizzano il sistema immunitario innato della mucosa intestinale, inibendo la produzione di NF-κB e conseguenzialmente di citochine proinfiammatorie, molecole di adesione ed integrine, le quali sono poi responsabili di una riduzione dei processi differenziazione linfocitaria, processi chemiotattici e di infiltrazione di linfociti e altre cellule immunitarie. Tale associazione mostra un effetto benefico nel controllo dello stato infiammatorio acuto e cronico dell’IBD. This association is particularly effective in reducing the numerous inflammatory processes that characterize IBD. The proposed formulation is able to intervene in restoring the activity of the immune system, bringing it back from a condition of up-regulation to a physiological condition; the set of ingredients characterizing the new formulation is also able to inhibit the proinflammatory mechanisms triggered by the alteration of the immune system, reducing the expression of PRR receptors in dendritic cells, epithelial cells, macrophages and lymphocytes that characterize the innate immune system of the intestinal mucosa, inhibiting the production of NF-κB and consequently of proinflammatory cytokines, adhesion molecules and integrins, which are then responsible for a reduction of lymphocyte differentiation processes, chemotactic processes and infiltration of lymphocytes and other immune cells. This association shows a beneficial effect in controlling the acute and chronic inflammatory state of IBD.

L’associazione per l’uso secondo la presente invenzione viene in particolare somministrata per via orale in una formulazione comprendente come unico principio attivo la suddetta associazione in combinazione con adatti eccipienti e/o diluenti. The association for use according to the present invention is in particular administered orally in a formulation comprising the aforementioned association as the only active ingredient in combination with suitable excipients and / or diluents.

DESCRIZIONE DETTAGLIATA DELL’INVENZIONE DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

Preferibilmente le formulazioni orali oggetto della presente invenzione sono in forma di integratori alimentari. Preferably the oral formulations object of the present invention are in the form of food supplements.

Per gli scopi della presente invenzione con la definizione di integratore alimentare si intendono quelle formulazioni che rientrano nella Direttiva 2002/46/CE e successive modifiche. In questa normativa, gli integratori alimentari sono definiti precisamente come: "prodotti alimentari destinati ad integrare la comune dieta e che costituiscono una fonte concentrata di sostanze nutritive, quali le vitamine e i minerali, o di altre sostanze aventi un effetto nutritivo o fisiologico, in particolare, ma non in via esclusiva, aminoacidi, acidi grassi essenziali, fibre ed estratti di origine vegetale, sia monocomposti che pluricomposti, in forme predosate". For the purposes of the present invention, the definition of food supplement means those formulations that fall under Directive 2002/46 / EC and subsequent amendments. In this legislation, food supplements are defined precisely as: "food products intended to supplement the common diet and which constitute a concentrated source of nutrients, such as vitamins and minerals, or of other substances having a nutritional or physiological effect, in particular , but not exclusively, amino acids, essential fatty acids, fibers and extracts of vegetable origin, both single and multi-compound, in pre-dosed forms ".

Per gli scopi della presente invenzione con la definizione “comprendente” non si esclude la presenza di ulteriori componenti oltre a quelli elencati dopo tale definizione. Con la definizione “costituito” viene esclusa la presenza di ulteriori ingredienti oltre a quelli espressamente riportati. For the purposes of the present invention, the definition "comprising" does not exclude the presence of further components in addition to those listed after this definition. The definition "constituted" excludes the presence of additional ingredients in addition to those expressly indicated.

Con la definizione di eccipienti e/o diluenti si intendono quegli eccipienti abitualmente utilizzati in tecnica farmaceutica nella preparazione delle formulazioni orali. The definition of excipients and / or diluents means those excipients usually used in pharmaceutical technique in the preparation of oral formulations.

La richiedente ha trovato che tale associazione, in particolare per la presenza di Andrographolide contenuto in Andrographis paniculata e la Silimarina contenuta nel Cardo mariano, possono esplicare un maggiore effetto anti-infiammatorio, immunomodulante e antiossidante rispetto a quello dato dai singoli estratti. Pertanto, la miscela rivendicata, nelle condizioni pre-cliniche e cliniche dell’IBD come la rettocolite ulcerosa (UC) ulcerosa, e morbo di Crohn (CD), offre un significativo miglioramento del quadro patologico, dovuto all’up-regolazione del sistema immunitario, infiammatorio e ossidante. The Applicant has found that this association, in particular due to the presence of Andrographolide contained in Andrographis paniculata and the Silymarin contained in Milk thistle, can have a greater anti-inflammatory, immunomodulating and antioxidant effect than that given by the single extracts. Therefore, the claimed mixture, in the pre-clinical and clinical conditions of IBD such as ulcerative colitis (UC), and Crohn's disease (CD), offers a significant improvement of the pathological picture, due to the up-regulation of the immune system. , inflammatory and oxidizing.

Preferibilmente l’associazione oggetto dell’invenzione è costituita da estratto secco di foglie di Andrographis paniculata titolato in Andrographolide con titolo compreso tra 1 e 10%, e estratto secco di frutto di Silybum marianum mg titolato in Silimarina con titolo compreso tra 50 e 80% . zinco a dosaggio compreso tra 5 e 15 mg. Preferably the association object of the invention is constituted by dry extract of leaves of Andrographis paniculata titrated in Andrographolide with a title between 1 and 10%, and dry extract of fruit of Silybum marianum mg titrated in Silymarin with a title between 50 and 80% . zinc at a dosage between 5 and 15 mg.

Lo Zinco è presente in forma di un sale accettabile ad uso alimentare secondo regolamento europea 1170/2009 ad esempio: Ossido di Zinco, Solfato di Zinco, Gluconato di Zinco. Zinc is present in the form of a salt acceptable for food use according to European regulation 1170/2009 for example: Zinc Oxide, Zinc Sulphate, Zinc Gluconate.

Le formulazioni per l’uso secondo la presente invenzione sono in forma di compresse, bustine monodose, capsule, soluzioni orali e altre possibili ed accettabili formulazioni orali e preferibilmente sono somministrate da 1 a 2 volte al giorno. The formulations for use according to the present invention are in the form of tablets, single-dose sachets, capsules, oral solutions and other possible and acceptable oral formulations and are preferably administered 1 to 2 times a day.

Preferibilmente le formulazioni orali oggetto della presente invenzione contengono Andrographis paniculata in concentrazioni uguali o maggiori a 200 mg ed inferiori 800 mg totale di composizione orale Sylibum marianum in concentrazioni maggiori o uguali a 50mg ed inferiori a 500 mg della formulazione totale e tra 5 e 15 mg di zinco/grammo della formulazione totale. Preferably, the oral formulations object of the present invention contain Andrographis paniculata in concentrations equal to or greater than 200 mg and less than 800 mg total of Sylibum marianum oral composition in concentrations greater than or equal to 50 mg and less than 500 mg of the total formulation and between 5 and 15 mg of zinc / gram of the total formulation.

Si riportano qui di seguito a scopo illustrativo, ma non limitativo alcuni esempi di formulazioni orali per l’uso secondo la presente invenzione. Some examples of oral formulations for use according to the present invention are reported below for illustrative but not limitative purposes.

ESEMPIO: EXAMPLE:

Bustina monodose disperdibile in acqua comprendente come unici principi attivi, nei rispettivi quantitativi: – Single-dose sachet dispersible in water comprising as the only active ingredients, in the respective quantities: -

- Andrographis paniculata estratto secco di foglie, titolato 200 mg; - Andrographis paniculata dry leaf extract, titrated 200 mg;

10% in Andrographolide: 10% in Andrographolide:

- Sylibum marianum estratto secco del frutto, titolato 80% 50 mg - Sylibum marianum dry extract of the fruit, titrated 80% 50 mg

in Silimarina: in Silymarin:

-Zinco gluconato: corrispondenti a 5 mg di Zinco 40 mg -Zinc gluconate: corresponding to 5 mg of Zinc 40 mg

La modalità d’uso consigliata per tale formulazione è di 1-2 somministrazioni al giorno. The recommended method of use for this formulation is 1-2 doses per day.

Claims

CLAIMS 1. Association consisting of Andrographis paniculata, Silybum marianum extract and Zinc for the treatment and prevention of intestinal disorders attributable to inflammatory bowel diseases (IBD).

2. Association for use according to claim 1, in which said inflammatory bowel diseases (IBD) are Crohn's disease (CD) and ulcerative rectal colitis (UC).

3. Association for use according to claims 1 and 2, in which said extract of Andrographis paniculata obtained from the dry leaves of the plant, contains Andrographolide in quantities ranging between: 1 and 10% by weight of the total weight of the extract.

4. Association for use according to claims 1 and 2, in which said Silybum marianum extract is obtained from the fruit of the plant and contains Silymarin in concentrations ranging from 50% to 80% by weight of the total weight of said extract.

5. Association for use according to claims 1 and 2 in which Zinc is present in the form of an acceptable salt in foods.

6. Association for use according to any one of claims 1-5, in which said association is administered in the form of an oral formulation comprising as the only active ingredient the aforementioned association in combination with suitable excipients and / or diluents.

7. Association for use according to claim 6, wherein said oral formulation is a food supplement.

Combination for use according to any one of claims 6-8 wherein said oral formulations contain Andrographis paniculata in concentrations equal to or greater than 200 mg and less than 800 mg total of total formulation, Sylibum marianum in concentrations greater than or equal to 50 mg and less than 500 mg of the total formulation and between 5 and 15 mg of zinc in the total formulation.

9. Association for use according to claim 8, in which said oral formulation is administered 1 to 2 times a day.