IT201900002919A1 - Composizione antiossidante - Google Patents
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Description
Descrizione dell’invenzione industriale dal titolo:
“Composizione antiossidante”
TESTO DELLA DESCRIZIONE
Campo dell’invenzione
La presente descrizione si riferisce a una composizione particolarmente adatta per contrastare il danno ossidativo in un soggetto.
Sfondo dell’invenzione
La composizione dell’aria nell’atmosfera comprende il 21% in volume di ossigeno (O2), un gas essenziale per la vita. L'ottanta percento o più dell'O2 viene utilizzato per il processo di respirazione aerobica che consente una produzione efficiente di energia nei mitocondri delle cellule sotto forma di adenosina 5'-trifosfato (ATP).
Alcune molecole di O2 sono usate dagli enzimi per catalizzare le reazioni essenziali, che comprendono la sintesi dell'ormone adrenalina e del neurotrasmettitore dopamina, così come l'idrossilazione dei residui di aminoacidi durante la formazione del collagene, essenziale per la formazione dei tessuti connettivi. L’attività degli enzimi della famiglia del citocromo P450, inoltre, utilizza l'O2 per metabolizzare xenobiotici, quali, ad esempio, farmaci, prodotti chimici industriali, tossine trasformando tali composti in prodotti meno dannosi che vengono espulsi dal corpo umano.
L’ossigeno tuttavia, seppur fondamentale per il metabolismo, è un gas potenzialmente tossico e mutageno ed il corpo umano ha sviluppato una vasta gamma di difese antiossidanti che contribuiscono a esercitare una sorta di protezione nei confronti degli effetti dannosi. Oltre agli antiossidanti sintetizzati dal corpo umano (“antiossidanti endogeni"), la dieta umana può essere arricchita di antiossidanti, principalmente derivanti da prodotti di origine vegetale. Alcuni antiossidanti di origine vegetale rivestono un ruolo essenziale (ad esempio la vitamina E e la vitamina C). Altri non sono essenziali, ma sono comunque benefici per la salute umana (ad esempio i carotenoidi e i flavonoidi).
Negli ultimi anni, l’impiego di antiossidanti nella dieta o consumati in forma più concentrata come additivi e integratori è stato oggetto di numerosi studi e sperimentazioni in vitro sia negli animali sia nell’uomo.
Il glutatione, ad esempio, è una molecola endogena antiossidante in grado di esercitare una importante attività nel contrastare il fisiologico processo di invecchiamento. Il glutatione è presente in natura in tutti gli organismi, siano essi mono o pluricellulari. La particolare struttura chimica rende tale molecola particolarmente efficace i) per contrastare l’azione dannosa di radicali liberi formati come sottoprodotto naturale del normale metabolismo dell’ossigeno e ii) per la regolazione di funzioni cellulari, quali, ad esempio, la sintesi e la riparazione del DNA, la sintesi delle proteine, l’attivazione e la regolazione di enzimi importanti per il metabolismo cellulare degli organismi.
II glutatione è inoltre fondamentale nei processi di detossificazione cellulare, in quanto può svolgere la duplice funzione di i) supportare gli enzimi deputati a tale azione e ii) di legare le tossine, trasformandole in composti facilmente eliminabili attraverso la bile e/o l’urina.
Uno degli approcci noti per prevenire o trattare lo stress ossidativo, ad esempio mediato da specie reattive dell’ossigeno (ROS), si può basare sulla somministrazione di antiossidanti, quali il glutatione, al fine di stabilizzare o deattivare i radicali liberi prima che possano danneggiare le cellule sane.
La biodisponibilità del glutatione nell’uomo, tuttavia, è generalmente limitata in quanto i sistemi enzimatici dell’apparato digerente, del sangue, della barriera epatica lo degradano rapidamente anche quando si trova contenuto negli alimenti in combinazione con altri composti antiossidanti. Integratori nutrizionali a base di glutatione subiscono i medesimi processi degradativi ed inoltre le barriere gastrica, ematica ed epatica ne trattengono una larga parte; solo una minima parte, infatti, è in grado di raggiungere il circolo sanguigno per esercitare gli effetti benefici nell’organismo.
I livelli di glutatione, inoltre, si riducono fisiologicamente con il progredire dell’età con conseguente incremento dei processi di invecchiamento cellulare.
Vi sono poi fattori esogeni in grado di determinarne la riduzione quali le condizioni ambientali (radiazioni, smog, inquinamento), stili di vita scorretti (fumo di sigaretta, abuso di alcolici), obesità (eccesso di alimenti grassi, che possono aumentare i livelli di stress ossidativo).
A causa dei fattori sopraelencati, la somministrazione di composizioni nutrizionali, comprendenti ad esempio glutatione quale antiossidante, non sempre si sono dimostrate effettivamente efficaci nel contrastare il danno ossidativo.
Sintesi dell’invenzione
Lo scopo della presente descrizione consiste nel fornire una composizione con una elevata capacità antiossidante ed in grado di superare gli inconvenienti sopra delineati.
Secondo l’invenzione, il suddetto scopo viene raggiunto grazie all’oggetto specificamente richiamato nelle rivendicazioni che seguono, che vanno intese quale parte integrante della presente descrizione.
Una forma di realizzazione della presente descrizione fornisce una composizione antiossidante comprendente un agente attivo, l’agente attivo contenendo polidatina e acetilcisteina.
In una o più forme di attuazione, il principio attivo può comprendere – oltre a polidatina e acetilcisteina -almeno un ulteriore componente selezionato nel gruppo costituito da glutammina, glicina, alanina, acido α-cheto glutarico, selenio (SE).
In una o più forme di attuazione, l’agente attivo della composizione comprende polidatina e acetilcisteina, in combinazione con acido α-chetoglutarico, glutammina, glicina, alanina, selenio (Se).
Glutammina e acido α-chetoglutarico possono anche essere contenuti nel principio attivo sotto forma di glutammina α-chetoglutarato (glutammina akg). In una o più forme di attuazione, l’agente attivo della composizione comprende polidatina e acetilcisteina, in combinazione con glutammina α-chetoglutarato, glicina, alanina, selenio (Se).
La composizione descritta in questa sede può comprendere inoltre minerali, additivi e sostanze aromatizzanti.
Un’ulteriore forma di realizzazione della presente descrizione fornisce un procedimento di trattamento dello stress ossidativo in un soggetto, il procedimento comprendendo la selezione di una composizione comprendente un agente attivo contenente polidatina in combinazione con acetilcisteina ed opzionalmente con almeno un ulteriore componente selezionato nel gruppo costituito da glutammina, glicina, alanina, acido α-chetoglutarico, selenio e la somministrazione della composizione al soggetto.
In una o più forme di realizzazione, le composizioni descritte in questa sede possono essere usate anche in medicina. Le composizioni oggetto della presente descrizione si sono dimostrate efficaci nella prevenzione e/o nel trattamento di uno stato infiammatorio, e nel trattamento di malattia da deficit vitaminici quali ad esempio nictalopia, atassia, fibrosi cistica, malattia di Chron, degenerazione maculare e ipoacusia senile.
Descrizione dettagliata dell’invenzione
Nella seguente descrizione, sono riportati numerosi dettagli specifici per consentire una comprensione approfondita di forme di realizzazione. Le forme di realizzazione possono venire messe in pratica senza uno o più dei dettagli specifici, o con altri procedimenti, componenti, materiali, ecc. In altri casi, strutture, materiali od operazioni ben noti non vengono mostrati o descritti in dettaglio per evitare di confondere aspetti delle forme di realizzazione.
Il riferimento in tutta la presente descrizione a “una sola forma di realizzazione” o a “una forma di realizzazione” indica che un/una particolare aspetto, struttura o caratteristica descritto/a in relazione alla forma di realizzazione è incluso/a in almeno una sola forma di realizzazione. Pertanto, le forme delle espressioni “in una sola forma di realizzazione” o “in una forma di realizzazione” in vari punti in tutta la presente descrizione non si riferiscono tutte necessariamente alla stessa forma di realizzazione. Inoltre, i particolari aspetti, strutture o caratteristiche possono venire combinati in qualsiasi modo adatto in una o più forme di realizzazione.
I titoli forniti in questa sede sono solo per convenienza e non interpretano l’ambito o lo scopo delle forme di realizzazione.
Una forma di realizzazione della presente descrizione fornisce una composizione comprendente un agente attivo, detto agente attivo comprendendo polidatina e acetilcisteina.
Il principio attivo della composizione può inoltre comprendere un ulteriore componente selezionato nel gruppo costituito da glutammina, glicina, alanina, acido αchetoglutarico, selenio (SE).
In una ulteriore forma di attuazione, glutammina e acido α-chetoglutarico possono essere contenuti nel principio attivo sotto forma di glutammina αchetoglutarato. In questo caso, il principio attivo potrà contenere - in combinazione con polidatina e acetilcisteina – almeno un ulteriore componente selezionato tra glutammina α-chetoglutarato, glicina, alanina, selenio.
Le composizioni oggetto della presente domanda sono dotate di una elevata capacità antiossidante e possono essere utilizzate nella prevenzione e/o nel trattamento di una malattia da stress ossidativo quale ad esempio uno stato infiammatorio acuto o cronico.
Le composizioni possono essere inoltre destinate ad un uso nel trattamento di malattie causate da deficit vitaminici, ad esempio selezionate nel gruppo costituito da nictalopia, atassia, fibrosi cistica, malattia di Chron, degenerazione maculare e ipoacusia senile.
La polidatina (nota anche come piceide) presente nell’agente attivo delle composizioni qui descritte è una molecola naturale con attività antiossidante che può essere estratta, ad esempio, dalle radici di una pianta, la Poligonum cuspidatum, originaria dal nord est asiatico.
La polidatina è in grado di interagire con l’epigenoma attivando la sintesi di sirtuine, proteine che a loro volta innescano una serie di reazioni positive che vanno dalla riparazione del DNA, all’attivazione degli enzimi di II fase (antiossidanti), all’attivazione di glutatione-Perossidasi (GPX) e glutatione-S-Transferasi (GST).
Gli Inventori della presente domanda hanno dimostrato un sorprendente effetto esercitato da composizioni in cui la polidatina è presente nel principio attivo in combinazione con acetilcisteina e – opzionalmente - con almeno un ulteriore componente selezionato nel gruppo costituito da glutammina, glicina, alanina, acido αchetoglutarico, selenio (Se). In una o più forme di attuazione, la glutammina e acido α-chetoglutarico possono essere contenuti nel principio attivo sotto forma di glutammina α-chetoglutarato.
Tali composizioni risultano particolarmente efficaci quando i diversi componenti sono presenti nelle quantità di seguito indicate.
La polidatina può essere presente in una quantità inferiore al 15% (peso/peso) dell’agente attivo, preferibilmente tra 3 e 15% (peso/peso), più preferibilmente pari al 5% (peso/peso) dell’agente attivo.
La acetilcisteina può essere presente in una quantità compresa 25 e 35% (peso/peso), preferibilmente tra 28 e 32% (peso/peso) dell’agente attivo.
Il rapporto in peso tra polidatina e acetilcisteina può essere compreso tra 0,10 e 0,50, preferibilmente tra 0,15 e 0,30.
La glutammina, quando presente nel principio attivo, può essere contenuta in una quantità compresa tra 10 e 20% (peso/peso), preferibilmente tra 12 e 18% (peso/peso) dell’agente attivo.
Acido α-chetoglutarico può essere contenuto in una quantità compresa tra 10 e 20% (peso/peso), preferibilmente tra 12 e 18% (peso/peso) dell’agente attivo.
La quantità di glicina può essere compresa tra 10 e 18% (peso/peso), preferibilmente tra 12 e 16% (peso/peso) dell’agente attivo.
La alanina può essere presente in una quantità compresa 10 e 25% (peso/peso), preferibilmente tra 15 e 20% (peso/peso) dell’agente attivo.
La quantità di selenio contenuto nella composizione può essere compresa tra 0,010% e 0,030% (peso/peso) dell’agente attivo.
Quando il principio attivo contiene (in aggiunta o in alternativa a glutammina e acido α-chetoglutarico) glutammina α-chetoglutarato tale sale può essere presente nella composizione in una quantità compresa tra 20 e 40% (peso/peso), preferibilmente tra 25 e 35% (peso/peso) dell’agente attivo.
Le composizioni descritte possono comprendere almeno un ulteriore componente selezionato tra vitamine, minerali, additivi, sostanze aromatizzanti.
In una o più forme di attuazione, le composizioni oggetto della presente descrizione possono essere somministrate come supplemento nutrizionale orale.
Gli Inventori hanno dimostrato che le composizioni oggetto della presente domanda consentono di accelerare significativamente il metabolismo cellulare aumentando parallelamente le specie ridotte e diminuendo le ossidate, sia nel plasma che negli eritrociti. Inoltre, un effetto ancora più sorprendente si osserva a carico della sintesi delle vitamine C, E ed A e sulla ridotta sintesi di neopterina (marker di infiammazione), come risulterà evidente nel seguito.
ESEMPI
La Tabella 1 presenta esempi illustrativi, non limitativi, di composizioni (A, B, C) secondo forme di attuazione della presente descrizione.
Le composizioni possono essere preparate come segue. In un miscelatore a pale (A091) accuratamente igienizzato vengono inseriti in sequenza i componenti
precedentemente selezionati e pesati. In particolare, glutammina akg, n-acetilcisteina, alanina, glicina, polidatina e selenito di sodio vengono miscelati accuratamente per almeno 10 minuti. Di conseguenza, la miscelazione viene sospesa ed osservata al fine di verificare l’ottenimento di un prodotto perfettamente omogeneo. La miscelazione può riprendere per ulteriori 10 minuti. A miscelazione ultimata, l’intero lotto viene versato in uno o più sacchi in polietilene monouso, in quantità non superiore a 10 Kg per sacco. Un campione di prodotto viene prelevato e sottoposto a controllo organolettico per aspetto/forma, colore, odore e microbiologico per CBT, lieviti e muffe. Il prodotto viene trasferito in un’area dedicata (zona 34) in attesa dei report analitici. A valle dell’esito positivo delle analisi condotte, la miscela viene sottoposta a incapsulazione con incapsulatrice automatica (A029) a velocità massima 4 (pari a 20.000 cps/h), in ragione di 350 mg di composti attivi per capsula di gelatina (formato zero, da 90 mg) per un peso totale di 440 mg cadauna. A fine lavorazione il prodotto viene trasferito in un’area dedicata al confezionamento (zona 12) per le fasi di blisteratura e astucciatura.
La Tabella 2 mostra due diverse composizioni che sono state oggetto di sperimentazione clinica.
La composizione denominata “HOPE A” comprende un agente attivo contenente polidatina, N-acetilcisteina, glutammina α-chetoglutarato, glicina, alanina, selenio.
La composizione denominata “HOPE B” differisce dalla composizione “HOPE A” in quanto non contiene polidatina.
Tabella 2
MATERIALI E METODI
Sono stati selezionati 30 volontari sani, asintomatici di ambo i sessi con età compresa tra i 45 e i 75 anni. Tutti i soggetti selezionati per lo studio hanno firmato il consenso informato. Non hanno partecipato allo studio soggetti che soddisfacevano i seguenti criteri di esclusione:
• Donne in gravidanza;
• Soggetti che assumevano regolarmente farmaci inibenti il metabolismo dell’omocisteina (metotrexate, antiepilettici, ecc.);
• Portatori di patologie;
• Soggetti sottoposti a terapie con chemioterapici. I partecipanti allo studio sono stati divisi in due gruppi A e B, ciascun gruppo comprendente 15 volontari.
Ogni partecipante, a seguito di una visita medica per valutarne l’idoneità, è stato sottoposto a un prelievo ematico, delle urine e della saliva.
Ai soggetti del gruppo A (composto da 7 maschi e 8 femmine, età media: anni 59±12) è stata consegnata la composizione HOPE A sotto forma di 140 capsule. Le capsule sono state assunte tutti i giorni nella posologia di 2 capsule al giorno, a stomaco pieno (dopo un pasto).
Ai soggetti del gruppo B (composto da 7 maschi e 8 femmine, età media: anni 60±10) è stata consegnata la composizione HOPE B sotto forma di 140 capsule. Le capsule sono state assunte tutti i giorni nella posologia di 2 capsule al giorno, a stomaco pieno (dopo un pasto).
Dopo le prime 8 settimane, al termine della sperimentazione, è stato effettuato un secondo prelievo ematico, raccolta delle urine e saliva. I partecipanti hanno continuato ad assumere i farmaci d’uso loro prescritti dai medici curanti e si sono impegnati a segnalare eventuali stati patologici sopravvenuti durante il periodo di sperimentazione, i farmaci all’uopo assunti ed eventuali variazioni dello stile di vita ed in particolare delle abitudini alimentari.
Nei campioni biologici (sangue, urine e saliva) prelevati a ciascuno dei 30 volontari sono stati analizzati - al prelievo basale (tempo 0, t0) e dopo 8 settimane (t1), i seguenti parametri: Cisteina, Omocisteina, Cisteinilglicina, Glutatione nelle forme ossidate e ridotte, nel plasma, negli eritrociti e nella saliva. Nel sangue sono state valutate la vitamina C, la vitamina E e la vitamina A. Nelle urine è stata quantificata la neopterina quale marker infiammatorio. Nel siero la Transaminasi (ALT, AST, GGT), il Colesterolo totale, HDL, LDL, Trigliceridi, Proteina C reattiva (PCR), Glicemia. Procedure di analisi.
1) Determinazione in HPLC dei livelli urinari di Neopterina
L’analisi è stata effettuata presso il Laboratorio di Biochimica Clinica dell’Istituto di Fisiologia Clinica del CNR di Milano. Il dosaggio della neopterina urinaria, normalizzato per la creatinina urinaria analizzata nello stesso campione utilizzando due rivelatori in serie, è stato eseguito con metodica HPLC: il campione di urina dopo essere stato diluito con la fase mobile, è stato iniettato in un sistema HPLC isocratico con colonna a fase inversa e rilevatore UV (per dosaggio Creatinina) e rivelatore spettrofluorimetrico (per dosaggio neopterina); i picchi cromatografici della creatinina e della neopterina sono stati integrati da un software dedicato e la loro concentrazione determinata mediante curve di calibrazione.
2) Determinazione in HPLC dei livelli plasmatici ed eritrocitari dei principali tioli circolanti
L’analisi è stata condotta presso il Laboratorio di Biochimica Clinica dell’Istituto di Fisiologia Clinica del CNR di Milano.
Gli amminotioli totali e ridotti sono stati misurati negli eritrociti e nel plasma secondo un metodo precedentemente convalidato e descritto in Dellanoce, C.; Cozzi, L.; Zuddas, S.; Pratali, L.; Accinni, R. Determination of different forms of aminothiols in red blood cells without washing erythrocytes. Biom. Chrom.
28(3): 327-331; 2014.
Brevemente, Tris- (2 carboxyethyl) -fosfina cloridrato (TCEP) e 4-fluoro-7-sulfamoylbenzofurazan (ABD-F) sono stati utilizzati rispettivamente come agenti riducenti e derivatizzanti; gli amminotioli ridotti sono stati valutati miscelando eritrociti e plasma con acido tricloroacetico 10% (1:1 v/v). A 100 μL di ogni surnatante ottenuto sono stati aggiunti 10 μL di NaOH 0,4 M, 70 μL di tampone borato 1 M a pH 11 contenente 4 mM EDTA, 30 μL di tampone borato 1 M a pH 9.5 contenente EDTA 4 mM e 10 μL di 10 g.L-1 ABD-F in tampone borato (1M pH 9,5, contenente EDTA 4 mM). I campioni sono stati incubati a 4° C per 90 min e successivamente 10 μL sono stati iniettati nel sistema HPLC per l'analisi.
La separazione dei tioli avviene a temperatura ambiente mediante cromatografia liquida isocratica ad alta prestazione su una colonna Discovery C-18 (250 × 4,6 mm di diametro, Supelco, Sigma-Aldrich), eluita con una soluzione di 0,1 g, L-1 tampone acetato, pH 4.0: metanolo, 81:19 (v/v), con un flusso di 1 mL min-1. L'intensità di fluorescenza è stata misurata con una eccitazione a 390 nm ed emissione a 510 nm, utilizzando un spettrofotometro a fluorescenza Jasco. I campioni sono stati dosati mediante curva di calibrazione standard.
3) Determinazione in HPLC dei livelli serici di vitamina A, vitamina E, vitamina C
L’analisi è stata effettuata presso il Laboratorio di Biochimica Clinica dell’Istituto di Fisiologia Clinica del CNR di Milano, utilizzando Kit commerciali (Chromsystem) con certificazione europea.
RISULTATI
I parametri biochimici, dopo assunzione giornaliera per 8 settimane delle composizioni HOPE A e HOPE B, sono mostrati nelle Tabelle 3 e 4 che seguono dove sono indicati i valori medi (con deviazioni standard) e la variazione percentuale dei livelli medi dei valori (Δ%) riscontrati al prelievo basale (t0) ovvero prima dell’inizio della sperimentazione e dopo 2 mesi di trattamento (t1).
Tabella 3
Elenco delle abbreviazioni: cisteina plasma ridotta (cys pr), cisteinilglicina plasma ridotta (cysgly pr), cisteina plasma ossidata (cys po), cisteinilglicina plasma ossidata (cysgly po), cisteina eritrocitaria ridotta (cys er), cisteinilglicina eritrocitaria ridotta (cysgly er), glutatione eritrocitario ridotto (GSH er), cisteina eritrocitaria ossidata (cys eo), cisteinilglicina eritrocitaria ossidata (cysgly eo), glutatione eritrocitario ossidato (GSH eo).
La Tabella 4 che segue riporta i valori delle Vitamine A, E, C e della neopterina nei due gruppi di soggetti. Anche in questo caso sono indicati i valori medi (con deviazioni standard) e la variazione percentuale dei livelli medi dei valori (Δ%) riscontrati al prelievo basale (t0) ovvero prima dell’inizio della sperimentazione e dopo 2 mesi di trattamento (t1).
Tabella 4
Neopt.: Neopterina/Creatinina nelle urine
I dati biochimici ottenuti in questo studio mostrano variazioni significative delle specie ossidate e ridotte dei tioli nel plasma e negli eritrociti dopo integrazione alimentare con le composizioni HOPE A e HOPE B a dimostrazione di una accelerazione del metabolismo e di una attività antiossidante sia intra che extra cellulare.
La somministrazione della composizione HOPE A determina un aumento significativo dei livelli del glutatione (GSH) eritrocitario (pari al 43,7%; p=10<-4>) con una contemporanea diminuzione del glutatione ossidato (pari al 49%; p=10<-5>). La somministrazione della composizione HOPE B determina un aumento dei livelli del GSH eritrocitario significativo rispetto al tempo to (p=10<-8>) ma inferiore (pari 32,25%) rispetto all’aumento ottenuto nei soggetti che hanno assunto la composizione HOPE A.
La somministrazione della composizione HOPE A determina inoltre un aumento significativo di CysGly ridotta negli eritrociti e nel plasma che risulta decisamente superiore rispetto a quello osservato a seguito della somministrazione della composizione HOPE B (priva di polidatina). Basti considerare che l’aumento percentuale di CysGly ridotta nel plasma è pari al 26,5% dopo somministrazione della composizione HOPE B mentre raddoppia (52,4%) nei soggetti che hanno assunto la composizione HOPE A. Sorprendentemente, l’aumento percentuale di CysGly ridotta nel plasma è pari al 11% dopo somministrazione della composizione HOPE B mentre triplica (39%) nei soggetti che hanno assunto la composizione HOPE A.
Un ulteriore dato decisamente sorprendente riguarda la valutazione del marker di infiammazione neopterina, che diminuisce del 9% nei soggetti che hanno assunto la composizione HOPE B e del 31% nei soggetti che hanno assunto la composizione comprendente polidatina (HOPE A).
Gli Inventori della presente domanda hanno inoltre sorprendentemente osservato un effetto ampiamente potenziato a seguito dell’assunzione della composizione HOPE A sulla sintesi delle vitamine A, C, E.
Questo risultato riveste una fondamentale importanza visto l’effetto antiossidante che le vitamine A, C, E esercitano nell’organismo.
La somministrazione della composizione comprendente polidatina ha determinato un aumento del 47% dei livelli di vitamina C, del 61% di vitamina E e del 42% di vitamina A.
Paragonato questo effetto a quello ottenuto a seguito della somministrazione della composizione HOPE B, priva di polidatina, è possibile constatare che la composizione HOPE A determina un aumento di vitamina C più di quattro volte superiore a quello indotto dalla somministrazione della composizione HOPE B (47% versus 11%); un aumento di vitamina E 3,8 volte maggiore rispetto a quello indotto dalla somministrazione della composizione HOPE B (61% versus 16%); un aumento di vitamina A 3 volte superiore rispetto a quello indotto dalla somministrazione della composizione HOPE B (42% versus 14%).
Tali risultati suggeriscono che il glutatione sintetizzato a partire dai suoi precursori possa (tramite l’enzima deidroascorbato reduttasi) rigenerare l’acido ascorbico (vitamina C) dall’acido deidroascorbico (DHA) che altrimenti verrebbe irreversibilmente convertito a acido 2,3 dicheto gulonico con conseguente riduzione dei livelli di vitamina C. La riduzione dei livelli dell’acido deidroascorbico operata dal glutatione rappresenta una via molto attiva che consente il recupero quasi totale della vitamina C. A sua volta la vitamina C è in grado di trasformare l’alfa tocoferossil radicale nella forma originale di alfa tocoferolo ovvero in vitamina E, neutralizzando e azzerando, al contempo, i radicali dei carotenoidi che possono avere effetto pro ossidante se non sono rimossi dalla vitamina C.
Inoltre, poiché la vitamina E protegge dall’ossidazione sia il beta-carotene sia la vitamina A, contenuti all’interno delle cellule e delle lipoproteine circolanti, ne consegue l’aumento dei livelli di vitamina A che si osserva a seguito dell’assunzione della composizione HOPE A.
L’analisi comparativa descritta ha pertanto dimostrato che l’attività esercitata dalla composizione comprendente polidatina in combinazione con aminoacidi precursori del glutatione e molecole pro-glutatione come selenio(Se) determina rispetto alla composizione comprendente i medesimi aminoacidi ma priva di polidatina: un maggiore aumento di specie ridotte dei tioli nel plasma e negli eritrociti e quindi del glutatione stesso; una maggiore diminuzione di specie ossidate dei tioli nel plasma e negli eritrociti ad eccezione del glutatione ossidato; una generale attività antiossidante nettamente superiore; un aumento nettamente superiore dei livelli plasmatici di vitamine A, E e C; una diminuzione della neopterina, marker d’infiammazione, più di tre volte superiore.
La composizione comprendente polidatina in combinazione con almeno uno degli aminoacidi indicati è in grado pertanto di contrastare significativamente i danni esercitati dallo stress ossidativo. Con la sua valenza antiossidante la polidatina fornisce alle cellule equivalenti riducenti ed è in grado di esercitare la sua attività antiossidante sia direttamente con il gruppo OH in C4 sia indirettamente attivando le sirtuine che a loro volta, oltre ad attivare gli enzimi della fase II (antiossidanti), accrescono l’attività di due importanti famiglie di enzimi che coinvolgono il GSH: la glutatione -S-Trasferasi (GST) e la glutatione Perossidasi (GPX).
Le glutatione S-transferasi (GSTs) sono una famiglia di isoenzimi detossificanti che catalizzano la coniugazione di varie molecole tossiche con il glutatione rendendole meno reattive e più facilmente eliminabili dall’organismo. Questo tipo di coniugazione è reso possibile in quanto il GSH contiene nell'amminoacido cisteina un atomo di zolfo in forma ridotta SH che viene facilmente attivato per diventare un potente nucleofilo in grado di legare una varietà di molecole diverse, come gli xenobiotici elettrofili. Tali molecole, legate al GSH, diventano più solubili e possono essere eliminate. Inoltre il GSH pur essendo composto da tre comuni aminoacidi (acido glutammico, cisteina e glicina) si differenzia dai normali peptidi per il particolare legame tra l’acido glutammico e la cisteina; l'acido glutammico infatti non è legato alla cisteina nel modo usuale, con il carbossile in posizione alfa, ma è legato con il secondo carbossile posto in fondo alla catena laterale in posizione gamma e questo rende il GSH una molecola del tutto riconoscibile e non viene aggredito dalle comuni peptidasi.
Le glutatione S-transferasi pertanto per svolgere il loro prezioso “compito” detossificante utilizzano molecole di GSH ed è in questa occasione che la composizione HOPE A agisce in sinergia con l’attività di GSTs sintetizzando nuove molecole anche grazie agli aminoacidi, precursori del glutatione.
I sorprendenti risultati osservati a seguito della somministrazione della composizione comprendente polidatina possono essere il risultato dell’instaurarsi di un biochimismo virtuoso tra azione detossificante e rinnovata sintesi di glutatione dovuto all’attività della polidatina insieme ad aminoacidi precursori del glutatione stesso. Se l’attività detossificante del GSH è svolta dalle GSTs, l’azione antiossidante è compito della GPX, un enzima appartenente alla classe delle ossidoreduttasi.
Vi sono diversi isoenzimi codificati da diversi geni, che variano nella localizzazione cellulare e nella specificità di substrato. La Glutatione perossidasi 1 (GPx1) è la versione più abbondante, presente nei citoplasmi di quasi tutti i tessuti di mammiferi, che ha come substrato preferenziale il perossido di idrogeno. La Glutatione perossidasi 4 (GPx4) ha un'alta preferenza per gli idroperossidi lipidici; viene espressa in quasi ogni cellula di mammiferi, anche se a livelli molto più bassi. In tutti i casi la GPX utilizza come substrato il GSH e ossidandolo a disolfuro (GSSG) riduce perossidi e perossiacidi ad acqua ed alcoli. La glutatione riduttasi ha il compito di riportare il GSSG nella sua forma ridotta (GSH) che sarà nuovamente ossidato dalla GPX per ottenere quello stato antiossidante necessario per raggiungere l’omeostasi cellulare.
I risultati dei test sperimentali hanno dimostrato un sorprendente effetto esercitato dai diversi componenti dell’agente attivo della composizione oggetto della presente descrizione sullo stress ossidativo, sull’infiammazione, sulla sintesi vitaminica.
La realizzazione della composizione non è limitata a questi esempi, ma può avere varianti, che non superano i limiti delle rivendicazioni appresso riportate.
Naturalmente, fermo il principio dell’invenzione che rimane lo stesso, i dettagli di costruzione e le forme di attuazione potranno variare ampiamente rispetto a quanto è stato descritto ed illustrato a puro titolo di esempio, senza allontanarsi dall’ambito della presente invenzione.
Claims (12)
- RIVENDICAZIONI 1. Composizione antiossidante contenente un agente attivo, detto agente attivo comprendendo polidatina e acetilcisteina.
- 2. Composizione antiossidante secondo la rivendicazione 1, in cui polidatina è presente in una quantità inferiore al 15% (peso/peso), preferibilmente tra 3 e 15% (peso/peso) dell’agente attivo.
- 3. Composizione antiossidante secondo la rivendicazione 1 o la rivendicazione 2, in cui acetilcisteina è presente in una quantità compresa 25 e 35% (peso/peso), preferibilmente tra 28 e 32% (peso/peso) dell’agente attivo.
- 4. Composizione antiossidante secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui il rapporto in peso tra polidatina e acetilcisteina è compreso tra 0,10 e 0,50, preferibilmente tra 0,15 e 0,30.
- 5. Composizione antiossidante secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui l’agente attivo comprende almeno un ulteriore componente selezionato nel gruppo costituito da acido α-chetoglutarico, glutammina, glicina, alanina, selenio.
- 6. Composizione antiossidante secondo la rivendicazione 5, in cui glutammina è presente in una quantità compresa tra 10 e 20% (peso/peso), preferibilmente tra 13 e 18% (peso/peso) dell’agente attivo.
- 7. Composizione antiossidante secondo la rivendicazione 5 o la rivendicazione 6, in cui acido αchetoglutarico è presente in una quantità compresa tra 10 e 20% (peso/peso), preferibilmente tra 13 e 18% (peso/peso) dell’agente attivo.
- 8. Composizione antiossidante secondo una qualsiasi rivendicazione delle rivendicazioni 5 a 7, in cui glicina è contenuta in una quantità compresa tra 10 e 18% (peso/peso), preferibilmente tra 12 e 16% (peso/peso) dell’agente attivo.
- 9. Composizione antiossidante secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 5 a 8, in cui alanina è contenuta in una quantità compresa 10 e 25% (peso/peso), preferibilmente tra 15 e 20% (peso/peso) dell’agente attivo.
- 10. Composizione antiossidante secondo una qualsiasi rivendicazione precedente, per l’uso in medicina.
- 11. Composizione antiossidante secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, per l’uso nel trattamento di uno stato infiammatorio acuto o cronico.
- 12. Composizione antiossidante secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, per l’uso nel trattamento di una malattia selezionata nel gruppo costituito da nictalopia, atassia, fibrosi cistica, malattia di Chron, degenerazione maculare, ipoacusia senile.
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