HU227211B1 - Incubator procedure for observing living cells with microscope - Google Patents
Incubator procedure for observing living cells with microscope Download PDFInfo
- Publication number
- HU227211B1 HU227211B1 HU0700362A HUP0700362A HU227211B1 HU 227211 B1 HU227211 B1 HU 227211B1 HU 0700362 A HU0700362 A HU 0700362A HU P0700362 A HUP0700362 A HU P0700362A HU 227211 B1 HU227211 B1 HU 227211B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- incubator
- housing
- temperature
- heated
- light
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 9
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims abstract description 44
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 11
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 10
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 18
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 claims 3
- 239000005349 heatable glass Substances 0.000 claims 1
- 238000013022 venting Methods 0.000 claims 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 20
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical class O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 19
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 abstract description 10
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 abstract description 10
- 230000007774 longterm Effects 0.000 abstract description 6
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 abstract description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 abstract description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 abstract description 3
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 abstract description 2
- 238000010865 video microscopy Methods 0.000 abstract 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 5
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 3
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 3
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 3
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000005485 electric heating Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 238000012634 optical imaging Methods 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000005139 Lycium andersonii Species 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004020 conductor Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 239000005357 flat glass Substances 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 230000017525 heat dissipation Effects 0.000 description 1
- 230000002706 hydrostatic effect Effects 0.000 description 1
- AMGQUBHHOARCQH-UHFFFAOYSA-N indium;oxotin Chemical compound [In].[Sn]=O AMGQUBHHOARCQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 208000021267 infertility disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 238000005496 tempering Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/48—Holding appliances; Racks; Supports
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/54—Constructional details, e.g. recesses, hinges hand portable
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/12—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of temperature
- C12M41/14—Incubators; Climatic chambers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/30—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration
- C12M41/34—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration of gas
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/30—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration
- C12M41/36—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration of biomass, e.g. colony counters or by turbidity measurements
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Thermal Sciences (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
A találmány egy mikroszkópasztalra szerelhető elektromos fűtésű hermetikusan zárt szén-dioxid-inkubátor, amely minimum három ponton elhelyezett hőmérő szenzorok segítségével és ezek által vezérelt fűtőtestekkel biztosítja a megfelelő, nagy pontossággal beállítható hőmérséklet-eloszlást. A három hőmérő szenzor közül egy-egy az alsó és felső fűtött üveg belső felületén, a harmadik az inkubátor fémtestében helyezkedik el. A felső üveglemez hőmérséklete 0,5-3,0 °C-kal magasabb hőmérsékleten van tartva az alsó fűtött üvegnél és az inkubátor fémtesténél. Az alsó és felső üvegablak fémbevonattal van ellátva, ezek fűtése a fémbevonaton keresztül folyó elektromos árammal történik. A zárt légtérnek és páralecsapódás-mentes megfigyelőablakoknak köszönhetően az inkubátor lehetővé teszi a hosszú távú, átvilágítással történő fénymikroszkópos megfigyeléseket 37 °C-os homogén hőmérséklet-eloszlású telített vízgözű 5%-os szén-dioxid-légkörben előmelegített gáz vagy folyadék áramoltatása nélkül. Alkalmazható élő emlőssejtek hosszú távú videomikroszkópos megfigyeléséhez. HU 227 211 Β1 A leírás terjedelme 10 oldal (ezen belül 4 lap ábra)The present invention relates to an electrically heated hermetically sealed carbon dioxide incubator for mounting on a microscope table, which provides the correct high-precision temperature distribution with the aid of thermometer sensors positioned at least three points and controlled by them. One of the three thermometer sensors is located on the inner surface of the lower and upper heated glass and the third on the metal body of the incubator. The upper glass plate temperature is maintained at 0.5-3.0 ° C above the lower heated glass and the metal body of the incubator. The lower and upper glass windows are provided with a metal coating and are heated by the electric current flowing through the metal coating. Thanks to the enclosed airspace and condensation-free observation windows, the incubator allows long-term, light-screen light microscopy without the flow of gas or liquid preheated at 37 ° C in a saturated water-vapor-filled 5% carbon dioxide atmosphere. It can be used for long-term video microscopy of live mammalian cells. EN 227 211 Β1 Scope of description 10 pages (including 4 sheets)
Description
A találmány tárgya eljárás és inkubátor élő sejtek mikroszkópos megfigyeléséhez. Az inkubátornak mikroszkópasztalon elhelyezhető, zárt inkubátorteret meghatározó inkubátorháza, a zárt térhez csatlakozó fűtőeleme és CO2-koncentrációt beállító eszköze van, ahol a zárt inkubátorházat legalább két szemközti oldalról fényáteresztő inkubátorfal határolja. A mikroszkópos megfigyelés az átlátszó szemközti oldalfalakon keresztül lehetséges. Az átlátszó oldalfalakat legtöbb esetben az inkubátor fedőlapja és fenéklapja képezi, amelyek üvegből készülnek. A sejtkultúrákat a megfigyeléshez sejttenyésztő edénybe helyezik és tápoldattal árasztják el őket. A folyamatos és hosszú távú megfigyelés során a sejteket életben kell tartani, aminek elengedhetetlen feltétele az állandó hőmérséklet biztosítása, amelynek értéke sejtkultúránként eltérő lehet, élő emlőssejtek esetében például 37 °C. Ezenkívül a tápoldat PH-értékének beállításához a CO2-koncentrációt megfelelő értéken kell tartani. Ez az érték esetenként eltérő lehet, a legáltalánosabban alkalmazott sejttenyésztő tápoldatok esetében például 5%. A mikroszkópos megfigyelés másik feltétele a jó láthatóság, amit az optikai útba eső, alacsonyabb hőmérsékletű elemek párásodása negatívan befolyásol.The present invention relates to a method and an incubator for microscopic observation of living cells. The incubator has a microscope table incubator housing defining a closed incubator space, a heating element attached to the enclosed space, and a CO 2 concentration setting device, wherein the enclosed incubator housing is surrounded by at least two opposed sides with a light-transmitting incubator. Microscopic observation is possible through transparent opposite side walls. Transparent sidewalls are in most cases the incubator's topsheet and bottom, which are made of glass. The cell cultures are placed in a cell culture vessel for observation and flooded with nutrient medium. During continuous and long-term monitoring, the cells must be kept alive, which is a prerequisite for ensuring a constant temperature, which may vary from one culture to another, for example 37 ° C for living mammalian cells. In addition, the CO 2 concentration should be maintained at an appropriate level to adjust the pH of the medium. This value may vary from time to time, for example 5% for the most commonly used cell culture media. Another condition for microscopic observation is good visibility, which is negatively affected by humidification of lower temperature elements entering the optical path.
Alapvetően kétféle technikai megoldás ismert élő emlőssejtek hosszú távú (többórás vagy -napos) fénymikroszkópos megfigyelésekor a sejteknek szükséges hőmérséklet és gázkeverék megteremtésére és stabilizálásra.There are basically two technical solutions for long-term (multi-hour or day) light microscopic observation of living mammalian cells to provide the cells with the required temperature and gas mixture and stabilize them.
Az egyik esetben a teljes mikroszkópot a lencsékkel, mikroszkópasztallal együtt zárt térbe helyezik és felfűtik 37 °C-osra a megfelelő páratartam és szén-dioxid-koncentráció biztosítása mellett. Ezek az angol elnevezés szerint az úgynevezett „cage” inkubátorok. A sejtek tápoldatának pH-értékét a legtöbb esetben 5%-os szén-dioxid-légkörrel szokás stabilizálni, a sejttenyészet kiszáradását pedig a vízgőzzel telített levegő biztosítja a nyitott sejttenyésztő edény környezetében. Számos hátrányt jelent a teljes mikroszkóp temperálása és vízgőzzel való elárasztása. A kísérleteket, megfigyeléseket lényegesen nehezíti a mikroszkóp körüli zárt doboz, a beavatkozás, manipuláció nehézkessé válik. Másrészről a mikroszkóp alkatrészeit hosszabb távon károsíthatja a telített vízgőz. Ezen tényezők miatt a teljes mikroszkópot inkubáló megoldásokat nem alkalmazzák elterjedten.In one case, the entire microscope, together with the lenses and the microscope stick, is placed in a confined space and heated to 37 ° C with adequate humidity and carbon dioxide concentration. These are called "cage" incubators. In most cases, the pH of the cell culture medium is stabilized with a 5% carbon dioxide atmosphere and the cell culture dehydration is provided by the water vapor-saturated air around the open cell culture vessel. There are many disadvantages to tempering the entire microscope and flooding it with water vapor. Experiments and observations are significantly complicated by the closed box around the microscope, the intervention and manipulation becomes difficult. On the other hand, the microscope components can be damaged in the long run by saturated water vapor. Because of these factors, full microscope incubation solutions are not widely used.
A másik, elterjedtebb megoldás szerint nem a teljes mikroszkópot inkubálják, hanem csak a sejttenyésztő edényt a mikroszkóp asztalán. Ez a technika sokkal inkább felhasználóbarát, a kísérletezés, megfigyelés lényegesen egyszerűbb vele. Ezek az angol elnevezés szerinti úgynevezett tárgyasztali (stage) inkubátorok. Ugyanakkor a kis tömegű, kis térfogatú sejttenyésztő edény (tipikusan Petri-csésze vagy úgynevezett többlyukú lemez) megfelelő inkubálása komoly technikai nehézségeket vet fel. A szoba-hőmérsékletű mikroszkópasztal és a sejtekhez gyakran rendkívül közel (néhány mm-re, vagy ennél is közelebbre) kerülő objektív lencse hőelvezetése a sejtek állandó és egyenletes temperálását egyszerű hőmérséklet-szabályozás esetén lehetetlenné teszi, különösen ha a fényút páramentességét is biztosítani kell mindeközben. A mikroszkóp fényútjában lévő felületeken megjelenő párásodás (vízgőz-kondenzáció) ugyanis az éles optikai leképezést gátolja.Another, more widespread, solution is not incubating the complete microscope, but only the cell culture dish on the microscope table. This technique is much more user-friendly, making experimentation and observation much easier. These are the so-called stage incubators. However, the proper incubation of a low-mass, low-volume cell culture dish (typically a Petri dish or so-called multi-well plate) poses major technical difficulties. The heat dissipation of the room-temperature microscope table and the objective lens, which is often very close to the cells (a few mm or more), makes constant and even temperature of the cells impossible with simple temperature control, especially if the light path is damp. Moisture (water vapor condensation) on the surfaces of the light path of the microscope prevents sharp optical imaging.
Bizonyos megoldásokban csak magát az objektív lencsét fűtik, amely viszonylagos nagy tömege és a sejtekhez való közelsége miatt a sejteket is temperálja. Más, hozzáférhető eszközök a Petri-csészét fűtik közvetlenül. A sejttenyészet kiszáradását és/vagy a csésze fedelén megjelenő párásodást ezen utóbbi módszerek nem küszöbölik ki, inkább csak rövidebb távú (néhány órás) megfigyelést tesznek lehetővé. A kis tömegű, kis hőkapacitású mikroszkópasztalra szerelhető inkubátorok temperálását szokás előmelegített (esetleg előhűtött) gáz vagy folyadék áramoltatásával megoldani.In some embodiments, only the objective lens itself is heated, which due to its relatively high mass and proximity to the cells also temper the cells. Other accessible devices heat the Petri dish directly. These latter methods do not eliminate cell culture dehydration and / or moisture on the lid of the dish, but rather allow for shorter observation (a few hours). Low temperature, low heat capacity microscope table-mounted incubators are usually tempered by the flow of preheated (or possibly pre-cooled) gas or liquid.
Sok esetben párásított, szén-dioxiddal kevert meleg levegő befújásával érik el a kívánt hatást. A JP2004329099 számú szabadalmi leírás szerinti megoldásnál például a mikroszkópos megfigyelés alatt lévő Petri-csészét kétféle levegő befújásával inkubálják. A csésze aljához előmelegített normál levegőt, míg a csésze nyitott tetejéhez szén-dioxiddal kevert párásított meleg levegőt juttatnak. A módszer fő hátránya a folyamatos légáramlás fenntartásának kényszere, és hogy csak meghatározott alakú sejttenyésztő edény befogadására képes. Az állandó légáram bizonyos kísérletekben zavaró. A tápfolyadék nagyon gyorsan elpárolog, ha bármilyen tökéletlenség lép fel a befújt levegő párásításában, például a befújásra használt csőben lecsapódik a vízgőz.In many cases, the desired effect is achieved by supplying humidified warm air mixed with carbon dioxide. For example, in JP2004329099, the microscope-monitored Petri dish is incubated with two types of air. The bottom of the cup is supplied with preheated normal air, while the open top of the cup is supplied with humidified warm air mixed with carbon dioxide. The main disadvantage of the method is the need to maintain a continuous flow of air and the ability to receive only a specific shape of a cell culture vessel. The constant airflow is disturbing in some experiments. The medium evaporates very quickly if any imperfection occurs in the humidification of the supply air, for example the water vapor condenses in the supply pipe.
Egy szellemes találmány a sejttenyészetek temperálására meleg levegő befújása helyett vízfűtést használ, amely kivitelezhető az úgynevezett „water-jacket” folyadékáramoltatással. A W02005095576 számú szabadalmi leírás szerinti megoldásnál az inkubátor mintatere körül vékony folyadékköpeny biztosítja a sejttenyészet fűtését. A folyadék előmelegített állapotban külső egységből pumpálva kerül az inkubátor testében lévő üregekbe. Ebben az esetben is folyamatos gázátáramoltatással biztosítják az inkubátor mintaterében a megfelelő pára- és szén-dioxid-tartalmat. A megoldás hátránya a bonyolult fűtőfolyadék-rendszer, melynek előállítása költséges, valamint az egyéb folyamatos gázcserét megvalósító megoldásokhoz hasonlóan bizonyos kísérletekben hátrányos lehet a vizsgált minta körüli állandó légáram.A clever invention uses water heating instead of blowing warm air to temper cell cultures, which can be accomplished by so-called "water-jacket" fluid flow. In WO2005095576, a thin liquid jacket around the incubator sample space provides heating of the cell culture. The liquid, when preheated, is pumped from an external unit into the cavities in the body of the incubator. In this case, too, a continuous flow of gas is provided to ensure the correct moisture and carbon content in the incubator sample space. The disadvantage of this solution is the complex heating fluid system, which is expensive to produce, and similarly to other continuous gas exchange solutions, the constant airflow around the test sample can be disadvantageous in some experiments.
Más megoldások sejttenyészetek kiszáradásának kiküszöbölésére víztartályt helyeznek el az inkubátor belsejében. A JP2003107364 számú szabadalmi leírás az inkubátor használhatóságát korlátozza, mert kizárja többféle alakú sejttenyésztő edény alkalmazását. A nagy szén-dioxid-inkubátorokban kézenfekvő megoldás jelentős mennyiségű cseppfolyós víz jelenlétével biztosítani a páratartalmat. A mikroszkópasztalra szerelhető inkubátorok esetében ez azonban hátrányos, mert a víztartály feleslegesen foglalja az amúgy is kevés helyet a mintától és az inkubátor egyéb alkatrészeitől, nem beszélve a víztartály sterilitást veszélyeztető voltáról.Other solutions to prevent dehydration of cell cultures are to place a water tank inside the incubator. JP2003107364 limits the usefulness of the incubator by excluding the use of multi-shaped cell culture vessels. In large carbon dioxide incubators, it is an obvious solution to ensure humidity with a significant amount of liquid water. However, this is disadvantageous for microscopic table-mounted incubators because the water tank occupies too little space from the sample and other parts of the incubator, not to mention the water tank's sterility risk.
HU 227 211 Β1HU 227 211 Β1
Léteznek több különálló alkatrészből felépülő mikroszkópasztalra szerelhető inkubátorok. Ilyenek például a www.pe-con.de interneteimen található megoldások, amelyeknek az egyes elemeit külön-külön lehet fűteni, ám ezek nem hermetikusan zártak, hátrányuk, hogy folyamatosan fogyasztják a szén-dioxidot, és a bemenő levegőt külön az erre a célra szolgáló eszközzel párásítani kell. Tehát itt is fennállnak a folyamatos levegő be-, illetve kiáramlással működő inkubátorok fentebb vázolt hátrányai.There are several microscope table-mounted incubators. For example, the solutions found on the www.pe-con.de Internet site, each of which can be heated separately but are not hermetically sealed, have the disadvantage that they consume carbon dioxide continuously and the intake air separately for this purpose. with a device to humidify. Thus, the disadvantages of the continuous incoming and outgoing incubators described above also exist.
Ismertek megoldások a mikroszkópasztal és az inkubátor minél tökéletesebb geometriai egymáshoz illesztésére annak érdekében, hogy a nagy nagyítású, kis munkatávolságú objektív lencsék elegendően közel kerülhessenek a sejttenyészetekhez. A W02007043561 számú szabadalmi leírás azonban nem ad választ a biológiai minta inkubálását érintő technikai kérdésekre, csak a rendelkezésre álló szűk hely előnyösebb kihasználást célozza a mikroszkópok asztalán abban az esetben, ha fűteni kell a mintát.There are known solutions for the perfect geometric alignment of the microscope table and incubator to provide high-magnification, short-range objective lenses close enough to cell cultures. WO2007043561, however, does not answer the technical questions regarding incubation of the biological sample, but merely seeks to make the most of the available space on the microscope table when the sample needs to be heated.
A fenti megoldások egyike sem alkalmas arra, hogy elektromos fűtéssel nagy térbeli homogenitást és időbeli stabilitást biztosítsunk élő sejtek páramentes megfigyelő ablakon keresztül történő hosszú távú mikroszkópiájához hermetikusan zárt inkubátorban folyamatosan beáramló temperált gázkeverék vagy folyadék alkalmazása nélkül.None of the above solutions is capable of providing high spatial homogeneity and temporal stability by electric heating to long-term microscopy of living cells through an anhydrous observation window without the use of a continuous flow of tempered gas mixture or liquid in a hermetically sealed incubator.
A találmány célját a legáltalánosabb értelemben olyan inkubátorral érhetjük el, amelynél a fényáteresztő oldalfalak és az inkubátorház fűtése egymástól függetlenül szabályozható hőmérsékletet biztosító szabályozóegységgel van összekötve.In the most general sense, the object of the present invention can be achieved by an incubator in which the heating of the light-transmitting side walls and the incubator housing is independently connected to a control unit for adjustable temperature.
Ennek megfelelően a találmány szerinti eljárás során a fényáteresztő oldalfalak és az inkubátorház hőmérsékletét egymástól függetlenül szabályozzuk. Az inkubátorban a felső fűtött üveget 0,5-3,0 °C-kal magasabb hőmérsékleten tartjuk, mint az alsó fűtött üveget és az inkubátorházat. A találmány olyan mikroszkópasztalra szerelhető szén-dioxid-inkubátort kínál, amely elektromos fűtés finom szabályozása útján, fűtő gáz vagy folyadék áramoltatása nélkül teszi lehetővé az élő sejtek és szövettenyészetek hosszú távú megfigyelését homogén hőmérséklet-eloszlású térben páramentes üvegablakon keresztül. A találmány felismerése az, hogy a zárt inkubátortérben lévő statikus légtér hőmérséklet-eloszlásának nagy pontosságú szabályozásával és időbeli stabilizálásával megoldható a vízgőz kontrollált helyen való lecsapatása a fényúton kívül előmelegített gáz vagy folyadék - az inkubátorba történő - áramoltatása nélkül.Accordingly, in the process of the invention, the temperature of the light-transmitting side walls and the incubator housing are independently controlled. In the incubator, the upper heated glass is maintained at 0.5-3.0 ° C higher than the lower heated glass and incubator housing. SUMMARY OF THE INVENTION The present invention provides a microscope table-mounted carbon dioxide incubator that provides long-term monitoring of living cells and tissue cultures through a homogeneous temperature distribution through a glass-free window by fine-tuning electric heating without flow of heating gas or liquid. It is an object of the present invention that high accuracy control and temporal stabilization of the temperature distribution of the static airspace within the enclosed incubator space allows for the precipitation of water vapor at a controlled location without the flow of preheated gas or liquid to the incubator.
A találmányt a továbbiakban a mellékelt rajzon példaképpen bemutatott kiviteli alakok alapján ismertetjük részletesebben, ahol azThe invention will now be described in more detail with reference to exemplary embodiments of the accompanying drawings, in which:
1. ábra a találmány szerinti inkubátor perspektivikus rajza, a csatlakozó vezetékekkel és csövekkel, aFIG
2. ábra a találmány szerinti inkubátor felülnézeti rajza, a csatlakozó vezetékekkel és csövekkel, aFig. 2 is a plan view of the incubator according to the invention, with connecting wires and tubes,
3. ábra a találmány szerinti inkubátornál a gázcserét megvalósító elemek elvi vázlata, aFigure 3 is a schematic diagram of the gas exchange elements of the incubator of the invention, a
4. ábra a találmány szerinti inkubátor keresztmetszeti oldalnézeti rajza, a csatlakozó vezetékekkel és csövekkel, azFig. 4 is a cross-sectional side view of an incubator according to the invention, with connecting wires and tubes,
5. ábra a találmány szerinti inkubátornál alkalmazott hőmérséklet-érzékelő rögzítését szemléltető oldalnézeti rajz metszetben, és aFigure 5 is a sectional side elevational view of a temperature sensor for use with the incubator of the invention, and
6. ábra a találmány szerinti inkubátornál alkalmazott fűtött üveglapok rajza oldalnézetben.Figure 6 is a side view of heated glass sheets used in the incubator of the invention.
Az 1. ábrán a találmány szerinti inkubátor perspektivikus rajza látható a csatlakozó vezetékekkel és csövekkel. Az ábrán bemutatott inkubátornak zárt teret meghatározó IB inkubátorteste, fényáteresztő alsó és felső oldalfala, a zárt térhez csatlakozó Gl gázbevezető csöve és GO gázkivezető csöve van. A fényáteresztő oldalfalak és az inkubátorház fűtése egymástól függetlenül szabályozható hőmérsékletet biztosító szabályozóegységgel van összekötve. Ezzel az inkubátorral a fényáteresztő oldalfalak és az inkubátorház hőmérsékletét egymástól függetlenül szabályozzuk. Az inkubátorban a felső fűtött üveget 0,5-3,0 °C-kal magasabb hőmérsékleten tartjuk, mint az alsó fűtött üveget és az inkubátorházat. A fűtőelemek, valamint a hőmérsékletérzékelő elemek (szenzorok) EP1 felső csatlakozó vezetéken és EP2 alsó csatlakozó vezetéken keresztül csatlakoznak a rajzon nem látható elektronikus vezérlőegységhez.Figure 1 is a perspective view of an incubator according to the invention with connecting wires and tubes. The incubator shown in the figure has a closed space incubator body IB, a light-transmitting lower and upper side wall, a gas inlet pipe G1 connected to the enclosed space, and a gas outlet pipe GO. The light-transmitting side walls and the incubator heater are independently connected to a temperature-adjustable control unit. With this incubator, the temperature of the light-transmitting side walls and the incubator housing are independently controlled. In the incubator, the upper heated glass is maintained at 0.5-3.0 ° C higher than the lower heated glass and incubator housing. The heating elements and the temperature sensing elements (sensors) are connected to an electronic control unit (not shown) via an upper connection cable EP1 and a lower connection cable EP2.
A 2. ábrán a találmány felülnézeti vázlata látható. A Gl gázbevezető csövön lehet az inkubátor belső terébe szén-dioxiddal kevert levegőt juttatni, a felesleges levegő a GO gázkivezető csövön keresztül távozik. Az inkubátor belső terében a gázcsere idején megvalósuló GF gázáramlás irányát mutatja a nyíl. Az inkubátor légterének cseréjét elegendő naponta néhányszor (5-10szer) elvégezni. Az ilyen gyakorisággal végzett légcsere csak időlegesen, maximum néhány perc erejéig változtatja meg az inkubátorban uralkodó hőmérséklet-eloszlást és páratartalmat, amely nincs jelentős hatással sem az élő sejtekre, sem a mikroszkópos megfigyelésre.Figure 2 is a plan view of the invention. The G1 gas inlet tube can be used to supply air mixed with carbon dioxide into the interior of the incubator, and excess air is discharged through the GO gas outlet tube. The arrow shows the direction of GF gas flow in the interior of the incubator during gas exchange. It is sufficient to change the incubator air space several times a day (5-10 times). Changing air at this frequency only temporarily changes the temperature distribution and humidity in the incubator for up to a few minutes, with no significant effect on living cells or microscopic observation.
A 3. ábrán a gázcserét szolgáló berendezés vázlata látható. A GS gáztartályból érkező alacsonynyomású gázkeverék a GV szelepen keresztül juthat a Gl gázbevezető csőbe. A GV szelep automatikusan vezérelhető: naponta néhányszor (5-10-szer) nyit ki néhány másodpercre. A GV szelep után a Gl gázbevezető csőből ágazik le az OP túlnyomáscső, amely arra szolgál, hogy pontosan beállítható legyen az inkubátorba érkező gázkeverék nyomása. Az OP túlnyomáscső a WT víztartályba merül, vége a tartály aljáig ér. A GO gázkivezető cső vége szintén a WT víztartályba merül, de a vége nem ér a tartály aljáig. Az inkubátor belső terébe jutó gáz nyomása így nem nagyobb, mint az OP túlnyomáscső és a GO gázkivezető cső végei közti vízoszlopnak megfelelő hidrosztatikai nyomás. Az itt vázolt elrendezés tehát egyrészt megakadályozza a külső levegő inkubátorba való visszaáramlását, másrészt maximálja az inkubátorba érkező gázkeverék nyomását. Légcsere idején a vízen keresztül buborékolva távozik az inkubátorból a GO gázkivezető csövön át a WT víztartályba érkező levegő. Ha a GV szelepen túl nagy nyomású gáz érkezik a rendszerbe, az az OP túlnyo3Figure 3 is a schematic diagram of the gas exchange apparatus. The low pressure gas mixture from the GS gas tank can pass through the GV valve to the G1 gas inlet pipe. The GV valve can be controlled automatically: opens several times a day (5-10 times) for a few seconds. After the GV valve, the overpressure pipe OP is branched off from the gas inlet G1, which serves to accurately control the pressure of the gas mixture entering the incubator. The OP overpressure pipe dives into the WT water tank and ends to the bottom of the tank. The end of the GO gas outlet pipe is also submerged in the WT water tank, but does not reach the bottom of the tank. The pressure of the gas entering the interior of the incubator is thus not greater than the hydrostatic pressure corresponding to the water column between the ends of the OP overpressure tube and the GO gas outlet tube. The arrangement outlined herein thus both prevents the return of outside air to the incubator and maximizes the pressure of the gas mixture entering the incubator. During air exchange, the air entering the WT water tank is bubbled through the water, bubbling through the incubator through the GO gas outlet. If the GV valve receives too much pressurized gas, the OP will overwhelm
HU 227 211 Β1 máscsövön át jut a WT víztartályba, és buborékok formájában távozik.EN 227 211 Β1 enters the WT water tank through the other pipe and exits in the form of bubbles.
A 4. ábra a találmány szerinti inkubátor vázlatos rajzát mutatja oldalnézetből metszetben. Az inkubátor külső befoglaló alakja téglatest, melynek hossza hozzávetőlegesen 130 mm, szélessége: 90 mm, magassága: 30 mm. Az inkubátor hozzávetőlegesen 100 mm hosszú, 80 mm széles, 20 mm magas belső terét alulról a BG alsó fűtött üveg, felülről a TG felső fűtött üveg határolja. Mindkettő fűtése átlátszó áramvezető fémbevonattal történik, az üvegek 1 mm-nél vékonyabb sík üvegek. Az üvegek fűtését szolgáló megoldást a 6. ábrán mutatjuk be. Az IB inkubátortest jó hővezető anyagból, például alumíniumból készül hasonlóan az IC inkubátor fedeléhez, melyet az SC csavarok az inkubátor négy sarkánál rögzítenek az inkubátor testéhez. Az IB inkubátortest határolja az inkubátor belső terét két oldalról, valamint elölről és hátulról. A BG alsó fűtött üveg az IB inkubátortesthez, a TG felső fűtött üveg az IC inkubátorfedélhez légmentesen hozzá van ragasztva. A TG felső fűtött üveg fölött néhány mm-rel szintén az IC inkubátorfedélhez légmentesen ragasztva helyezkedik el a CG fűtetlen fedőüveg, amely a felfelé való hőáramlás gátlását szolgálja.Figure 4 is a sectional side elevational view of an incubator of the invention. The incubator's external enclosure is rectangular in shape with a length of approximately 130 mm, a width of 90 mm and a height of 30 mm. The interior of the incubator is approximately 100 mm long, 80 mm wide, 20 mm high and is bounded on the bottom by the bottom heated glass BG and by the top heated glass TG. Both are heated with a transparent conductive metal coating, the glass is less than 1 mm flat glass. The solution for heating the glasses is shown in Figure 6. The IB incubator body is made of good heat conductive material, such as aluminum, similar to the IC incubator cover, which is secured to the incubator body by the SC screws at the four corners of the incubator. The IB incubator body delimits the interior of the incubator on two sides and the front and back. The lower heated glass BG is glued to the IB incubator body and the upper heated glass TG to the IC incubator cover. A few mm above the top heated glass TG is also hermetically glued to the IC incubator lid to prevent the upward heat flow of the non-heated glass CG.
A mikroszkópos megfigyelés során az L lámpából érkezik a fény, amely az inkubátor belső terében az alsó fűtött üvegre helyezett PT Petri-csészében lévő sejttenyészetet felülről megvilágítja. A fényút következő eleme a mikroszkóp OL objektív lencséje, amelyen keresztül alulról figyelhetjük a sejteket a szokásos invertált mikroszkópos elrendezésnek megfelelően.Microscopic observation emits light from the L lamp, which illuminates the cell culture from above in a PT Petri dish placed on a lower heated glass inside the incubator. The next element of the light path is the OL lens of the microscope, through which the cells can be viewed from below, according to the usual inverted microscope arrangement.
A rajzon bemutatott kiviteli példánál három ponton mérjük az inkubátor hőmérsékletét, de természetesen lehetőség van több hőmérséklet-érzékelő elhelyezésére is. Az S1 alsó szenzor a BG alsó fűtött üveg, az S2 felső szenzor a TG felső fűtött üveg, az S3 oldalsó szenzor az IB inkubátortest hőmérsékletét méri 0,1 °C-os pontossággal. Az S1 alsó szenzor és az S2 felső szenzor fűtött üveghez történő illesztését és rögzítését az 5. ábra mutatja be. Az IB inkubátortest felső síkjába az inkubátor jobb és bal oldalán egy-egy téglatest alakú üreg van marva. Ezek az E elektronikai üregek, melyekben a HT fűtőtranzisztorok rögzítésre kerülnek az IB inkubátortest anyagához. Az elektronikai üregeket az EC fedőlemezek borítják, melyek L profilú alumíniumlemezek. Az SL tömítőgyűrű az IB inkubátortest és az IC inkubátorfedél közti légmentes tömítést szolgálja. Az SL tömítőgyűrű a TG felső fűtött üveget körülfutó bemélyedésben fekszik, melyet az IB inkubátortest felső síkjába martak bele.In the embodiment shown in the drawing, the temperature of the incubator is measured at three points, but it is of course possible to place several temperature sensors. The lower sensor S1 measures the lower heated glass BG, the upper sensor S2 the upper heated glass TG, and the lateral sensor S3 measures the temperature of the incubator body IB with an accuracy of 0.1 ° C. The attachment and attachment of the lower sensor S1 and the upper sensor S2 to the heated glass is shown in Figure 5. In the upper plane of the IB incubator body, a rectangular cavity is milled on the left and right sides of the incubator. These are the electronic cavities E in which the HT heating transistors are fixed to the IB incubator body material. The electronic cavities are covered by EC cover plates, which are L profile aluminum plates. The sealing ring SL serves as an airtight seal between the IB incubator body and the IC incubator cover. The SL sealing ring is located in a recess surrounding the upper heated glass bottle TG, which is inserted into the upper plane of the IB incubator body.
Az inkubátor belső terében az egyenletes hőmérséklet-eloszlás megteremtése a cél a homogén kísérleti körülmények érdekében. Ez a feltétel azonban nincs összhangban a páralecsapatás lokalizálásával, vagyis azzal az elvárással, hogy az inkubátor belsejében lévő vízgőz az optikai leképezést ne zavarja azzal, hogy a fény útjába eső, egyébként átlátszó felületeken lecsapódik. A kontrollált helyen történő páralecsapatást az enyhén (néhány tized °C-kal) hidegebb felületek biztosíthatják az inkubátor belsejében.The aim is to achieve a uniform temperature distribution inside the incubator for homogeneous experimental conditions. However, this condition is inconsistent with the localization of condensation, i.e., the expectation that water vapor inside the incubator does not interfere with optical imaging by condensing on otherwise transparent surfaces in the path of light. Mild (a few tenths of a degree) colder surfaces inside the incubator can provide condensation at a controlled location.
A sejttenyészetek hőmérsékletét elsősorban az alsó fűtött üveg határozza meg, mivel ehhez igen közel vannak a sejtek, a sejttenyésztő edény közvetlen érintkezésben van az alsó üveggel. Az inkubátor zárt belső terében a homogén eloszlású 37 °C hőmérséklet biztosításához ezért a BG alsó fűthető üveglapot és az IB inkubátortestet fűtőelemek segítségével 37±0,1 °C értéken tartjuk, a TG felső fűtött üveglapot pedig 0,5-3,0 °C-kal magasabb hőmérsékletre, tehát 37,5-40 °C-ra fűtjük. Mivel az IB inkubátortestet a szélein, illetve a sarkoknál fűtjük és a hőmérsékletet érzékelő S3 szenzor ugyancsak a keskeny oldal közepénél két fűtőelem között helyezkedik el, a hosszabb oldalak mentén a hőmérséklet a középpontig folyamatosan csökken az alacsonyabb környezeti hőmérséklet következtében. Ennek eredményeként az inkubátor leghidegebb pontja az IB inkubátortest hosszanti oldalának középpontja, amelynek hőmérséklete 36 °C körüli. Ebből adódóan a páralecsapódás is az inkubátor hosszabbik oldalainak közepén, az inkubátortest belső alumíniumfelületén történik, mivel itt a leghidegebb az inkubátor teste. A 0,5-3,0 °C-kal melegebb felső üveg nem emeli meg jelentősen a sejttenyészetek hőmérsékletét.The temperature of the cell cultures is primarily determined by the lower heated glass, since the cells are very close to it and the cell culture vessel is in direct contact with the lower glass. Therefore, to ensure a homogeneously distributed temperature of 37 ° C in the enclosed interior of the incubator, the lower heated glass plate BG and the incubator body IB are heated at 37 ± 0.1 ° C by heating elements and the upper heated glass plate TG is maintained at 0.5-3.0 ° C. is heated to 37.5-40 ° C. Because the incubator body IB is heated at its edges and corners, and the temperature sensing sensor S3 is also located in the middle of the narrow side, between the two heaters, the temperature along the longer sides decreases continuously to the center due to the lower ambient temperature. As a result, the coldest point of the incubator is the center of the longitudinal side of the IB incubator body at a temperature of about 36 ° C. As a result, condensation also occurs in the middle of the longer sides of the incubator, on the inner aluminum surface of the incubator body, as the body of the incubator is the coldest here. The top glass, which is warmer by 0.5-3.0 ° C, does not significantly increase the temperature of the cell cultures.
Az inkubátor belsejében függőleges irányban a hőmérséklet a magassággal enyhén emelkedik. Amint azt már említettük, a TG felső fűtött üveget minimum 0,5 °C-kal magasabb hőmérsékletre fűtjük, mint a BG alsó fűtött üveget. A 0,5 °C-os különbség a hozzávetőlegesen 20 mm magas belső térben akkora hőmérséklet-gradienst teremt, amely kísérleteink szerint stabilan biztosítja, hogy sem a felső fűtött üveg, sem a Petricsésze tetejének külső vagy belső felülete nem fog párásodni. Ennél nagyobb hőmérséklet-gradiens is alkalmazható, azonban ha túl nagy a különbség, akkor az lesz az eredmény, hogy az alsó fűtött üvegen lecsapódik a pára. Ezért néhány °C-os különbségnél nagyobbat nem érdemes teremteni. A fent részletezett hőmérséklet-különbségek az inkubátorba helyezett sejttenyészetek hőmérsékletében méréseink szerint nem okoznak 0,1 °C-ot meghaladó eltéréseket.The temperature inside the incubator increases slightly with height. As mentioned above, the TG top heated glass is heated to a minimum of 0.5 ° C higher than the BG bottom heated glass. The difference of 0.5 ° C creates an internal temperature gradient of approximately 20 mm in height, which according to our experiments, ensures that neither the top heated glass nor the top of the Petri dish will be humidified. A higher temperature gradient may be used, but if the difference is too large, the result will be condensation on the lower heated glass. Therefore, it is not worth creating more than a few degrees Celsius. The temperature differences detailed above with respect to the temperature of the cell cultures placed in the incubator do not, according to our measurements, cause a difference of more than 0.1 ° C.
A GS gázcsonk menettel van rögzítve az inkubátor belső terét és az E elektronikai üreget elválasztó fal furatában. Az inkubátor automatizált gázcseréje két ilyen gázcsonkon keresztül történik, melyekhez a GT gázcsövek csatlakoznak. Az inkubátort fűtő HT fűtőtranzisztorok, a BG alsó fűtött üveg, a TG felső fűtött üveg és a hőmérsékletet három ponton mérő S1 alsó szenzor, S2 felső szenzor, valamint az S3 oldalsó szenzor elektromos kivezetései az EP1 felső elektromos csatlakozón és az EP2 alsó elektromos csatlakozón keresztül csatlakoznak az inkubátort szabályozó elektronikához.The GS gas outlet is threaded into the hole in the wall separating the interior of the incubator and the electronic cavity E. The automated gas exchange of the incubator is done through two such gas ports, to which the GT gas pipes are connected. HT heater transistors for heating the incubator, lower heated glass BG, upper heated glass TG, and low temperature sensor S1, top sensor S2, and side sensor S3 via electrical top connector EP1 and bottom electrical connector EP2 are connected to the electronics regulating the incubator.
Az 5. ábrán az S1 alsó szenzor példáján mutatjuk be a szenzorok fűtött üveghez való rögzítését. A BG alsó fűtött üveg felülete a P hővezető pasztán keresztül érintkezik az S1 alsó szenzorral. A P hővezető pasztát vékonyan visszük fel az üvegre. Az S1 alsó szenzort egy csepp G ragasztó ragasztja a BG alsó fűtött üveghez. A G ragasztó vízzáró szigetelést biztosít az S1 alsó szenzornak és két fémes kivezetésének.Fig. 5 shows an example of the mounting of the sensors to the heated glass by the example of the lower sensor S1. The surface of the lower heated glass BG contacts the lower sensor S1 through the thermal conductive paste P. Apply heat transfer paste P thinly to the glass. The lower sensor S1 is glued with a drop of glue G to the lower heated glass BG. Adhesive G provides a watertight seal to the bottom sensor S1 and its two metal terminals.
HU 227 211 Β1HU 227 211 Β1
A 6. ábra a fűtött üvegeket mutatja be vázlatosan. Az 1 mm-nél vékonyabb GL üveglemez felülete a vékony ITO átlátszó fémréteggel van bevonva. Az ITO átlátszó fémréteg nem zavarja a fénymikroszkópos megfigyelést, ugyanakkor a rajta keresztül folyó elektromos áram biztosítja az üveg fűtését. Az elektromos feszültséget a CP vezető ragasztón keresztül kapcsoljuk az ITO átlátszó fémrétegre, amelynek anyaga például indium-ón-oxid. A CP vezető ragasztót egy-egy vékony csíkban visszük fel a fűtött üvegek szemközti széleire.Figure 6 is a schematic representation of heated glass. The GL glass sheet, which is thinner than 1 mm, is coated with a thin layer of ITO transparent metal. The ITO transparent metal layer does not interfere with light microscopic observation, while the electrical current flowing through it provides heating of the glass. The electrical voltage is applied via the conductive adhesive CP to the transparent metal layer ITO, such as indium tin oxide. Apply the CP conductive adhesive in a thin strip to the opposite edges of the heated glass.
A találmány nagy mintatérben képes 0,1 °C-os tűrésen belül biztosítani a hőmérsékleti homogenitást és időbeli stabilitást átvilágítással történő fénymikroszkópos megfigyelések közben. Ez lehetővé teszi számos fajtájú és méretű sejttenyésztő edény használatát összevetve az egyszerűbb Petri-csésze fűtő berendezésekkel. A komplex, gáz- vagy folyadékáramoltatáson alapuló inkubátoroknál egyszerűbb és lényegesen olcsóbb eszköz állítható elő a találmány alapján, amely egyúttal a biológiai minta tökéletesebb inkubálását teszi lehetővé mikroszkópos megfigyelések idejére.The invention is capable of providing temperature homogeneity and stability over time under light microscopic observation over a large sample space within a tolerance of 0.1 ° C. This allows the use of cell culturing vessels of many varieties and sizes in comparison to simpler Petri dish heaters. Complex, gas or liquid flow incubators provide a simpler and much less expensive device according to the invention, which also allows for a more complete incubation of the biological sample for microscopic observation.
Claims (16)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU0700362A HU227211B1 (en) | 2007-05-22 | 2007-05-22 | Incubator procedure for observing living cells with microscope |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU0700362A HU227211B1 (en) | 2007-05-22 | 2007-05-22 | Incubator procedure for observing living cells with microscope |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU0700362D0 HU0700362D0 (en) | 2007-07-30 |
| HUP0700362A2 HUP0700362A2 (en) | 2009-03-30 |
| HU227211B1 true HU227211B1 (en) | 2010-11-29 |
Family
ID=89987536
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0700362A HU227211B1 (en) | 2007-05-22 | 2007-05-22 | Incubator procedure for observing living cells with microscope |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| HU (1) | HU227211B1 (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2690167B1 (en) * | 2011-03-22 | 2017-07-26 | Tokai Hit Co. Ltd. | Culture apparatus for microscopic viewing and method of use thereof |
-
2007
- 2007-05-22 HU HU0700362A patent/HU227211B1/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HU0700362D0 (en) | 2007-07-30 |
| HUP0700362A2 (en) | 2009-03-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2690167B1 (en) | Culture apparatus for microscopic viewing and method of use thereof | |
| CA3049949A1 (en) | System for viewing cell cultures under a microscope whilst applying tumor treating fields | |
| JP2006174828A (en) | Biological sample-culturing and observing system, incubator box, supply means, and culture container | |
| US8393234B2 (en) | Apparatus, device and method for arranging at least one sample container | |
| JP4321841B2 (en) | Microscope incubator | |
| JP2004141143A (en) | Culturing container for microscopic observation | |
| WO2024109896A1 (en) | Rapid temperature control device for cell culture based on microfluidic chip | |
| US7502165B2 (en) | Arrangement for regulating the temperature of the sample space of a microscope | |
| JPH1028576A (en) | Transparent constant temperature incubator for microscopy | |
| KR101706153B1 (en) | Microfluidic chip-based cell cultivation system | |
| JP2022173354A (en) | Culture vessel rack and analyzer | |
| HU227211B1 (en) | Incubator procedure for observing living cells with microscope | |
| Patching et al. | Chapter II The Effects and Control of Temperature | |
| US6670170B1 (en) | Temperature-regulated cell perifusion chamber | |
| WO2014060360A1 (en) | Embryo incubator incorporating gas control | |
| JP2005323509A (en) | Cell culture-observing device for measuring gene expression | |
| WO2022087862A1 (en) | Multifunctional carbon dioxide petri dish | |
| KR100745110B1 (en) | Culture chamber for a microscope | |
| JP6999916B2 (en) | Cell culture observation device and cell observation unit | |
| CN110669668B (en) | Carbon dioxide incubator | |
| JP4933745B2 (en) | Culture microscope | |
| CN209555392U (en) | Constant temperature electrophoresis control device | |
| JP2003061641A (en) | Incubator for minute culture | |
| US11925931B2 (en) | Humidified sample preparation station for serial crystallography | |
| JP2005331862A (en) | Cultivation apparatus for microscope observation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |