HU197450B - Reagent and method for detecting cells of phagocyte activity - Google Patents
Reagent and method for detecting cells of phagocyte activity Download PDFInfo
- Publication number
- HU197450B HU197450B HU134087A HU134087A HU197450B HU 197450 B HU197450 B HU 197450B HU 134087 A HU134087 A HU 134087A HU 134087 A HU134087 A HU 134087A HU 197450 B HU197450 B HU 197450B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- solution
- reagent
- weight
- reagent solution
- cells
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5094—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for blood cell populations
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Ecology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
A találmány tárgya reagens és eljárás fagocita aktivitású sejtek kimutatására.The present invention relates to a reagent and a method for detecting cells having phagocytic activity.
A korszerű orvostudomány egyik fő törekvése, hogy a magzatok fejlődési rendellenességeit a terhesség minél korábbi szakaszában diagnosztizálják.One of the main goals of modern medicine is to diagnose fetal malformations as early as possible in pregnancy.
Ismert, hogy a velőcsőzáródási rendellenesség sejtfestés útján diagnosztizálható, ugyanis velöcsőzáródási rendellenesség esetén a magzatvizben megjelenő fagocita aktivitású sejtek szinreakcióval kimutathatók. Sejtfestó reagensként neutrálvörőst alkalmaznak [Orvosi Hetilap 125, 9 (1984); N. Eng. J. Med. 310, 1463 (1984)].It is known that tubal disorder can be diagnosed by cell staining, since cells with phagocytic activity in amniotic fluid can be detected by color reaction in the amniotic fluid. Neutral red is used as the cell staining reagent (Medical Weekly 125: 9, 1984); N. Eng. J. Med. 310, 1463 (1984)].
A módszert rutinszerű klinikai diagnosztikai alkalmazása során azonban tóbb nehézség merült fel. Megállapítottuk, hogy a reakció megbízhatóságát a neutrálvörös minősége nagymértékben befolyásolja, azaz különböző gyártóhelyektől származó neutrálvörös festék felhasználásakor jelentős értékeltéréseket tapasztaltunk. Nehézségekbe ütközött a diagnosztikai célokra alkalmas neutrálvörös oldat elkészitése is. A neutrálvörös desztillált vizes oldata savas kémhatású (az 1 mg/ml koncentrációjú oldat pH-ja 3,1); a tiszta desztillált vizes oldat a sejteket a savas kémhatás, illetve a hipoozmotikus hatás miatt erőteljesen károsítja. A klinikai gyakorlatban rutinszerűen használt különböző vizes puffer- és tápoldatok egyike sem bizonyult megfelelő oldószernek, mert oldódás után csapadékkiválást tapasztaltunk. Szerves oldószerek használata sem vált be; így például etanolos neutrálvörös oldat alkalmazásakor nem kaptunk kellő szinhatást, a dimetil-szulfoxidoe oldat esetén pedig a sterilszűréseel adódtak problémák.However, difficulties have arisen in the routine clinical diagnostic application of the method. It was found that the reliability of the reaction is greatly influenced by the quality of the neutral red, that is to say, significant differences were found in the use of neutral red ink from various production sites. It was also difficult to make a neutral red solution for diagnostic purposes. The neutral red distilled aqueous solution has an acidic pH (1 mg / ml pH 3.1); the pure distilled aqueous solution severely damages the cells due to the acidic or hypo-osmotic effect. None of the various aqueous buffer and nutrient solutions routinely used in clinical practice proved to be a suitable solvent because precipitation was observed after dissolution. The use of organic solvents has also failed; For example, a neutral color solution using ethanol neutral red solution was not obtained and problems with the sterile filtration of the dimethylsulfoxidoe solution.
Célul tűztük ki olyan reagens oldat és diagnosztikai eljárás kidolgozását, amely a gyakorlatban nagy biztonsággal és egyszerűen alkalmazható fagocita aktivitású sejtek kimutatására.It is an object of the present invention to provide a reagent solution and diagnostic method which can be used in practice to detect cells with phagocytic activity with high safety and ease.
Kísérleteink során felismertük, hogy a neutrálvörös tartalmú citológiai reagens oldatnak megközelítőleg izoozmotikusnak kell lennie az esetlegesen kóros sejtekhez viszonyítva. Lényegesnek bizonyult az is, hogy a reagens oldat és a vizsgálandó minta (magzatvíz) elegye közel semleges kémhatású legyen. Meglepő módon azt tapasztaltuk továbbá, hogy a lizozim enzim jelenléte szignifikánsan elősegíti a sejtek festékfelvételét, ugyanakkor a festékoldat stabilitását is fokozza. Végül felismertük, hogy a reagens oldatnak a sejtek számára energiaforrásként hasznosíható szacharidot is kell tartalmaznia. Amennyiben hosszabb időn át tárolható reagens oldatra van szükség, célszerű a reagens oldathoz tartósítószert is adni.In our experiments, it was recognized that the neutral red-containing cytological reagent solution should be approximately iso-osmotic relative to potentially abnormal cells. It was also essential that the mixture of reagent solution and test sample (amniotic fluid) be approximately neutral. Surprisingly, it has also been found that the presence of the lysozyme enzyme significantly enhances the dye uptake of the cells while also enhancing the stability of the dye solution. Finally, it has been recognized that the reagent solution must also contain saccharide as an energy source for the cells. If a reagent solution is needed for a longer period of time, it is advisable to add a preservative to the reagent solution.
A találmány tehát fagocita aktivitású sejtek kimutatására alkalmas, ' neutrálvörőst tartalmazó reagens oldatra vonatkozik. A találmány szerinti reagens oldat vizes oldat formájában 0,2-0,8 tömegX neutrálvörőst, 0,ΙΌ,25 tömegX lizozim enzimet, 0,8-2,0 tömegX nátrium-kloridot, 0,1-0,3 tömegX szacharidot é3 adott esetben 0,02-0,6 tömegX tartósítószert tartalmaz; a vizes oldat pH-ja 3,0 és 8,0 közötti, célszerűen 3,5 és 5,0 közötti érték.The present invention therefore relates to a solution of a neutral red reagent for detecting cells with phagocytic activity. The reagent solution of the invention provided 0.2-0.8 wt.% Neutral red, 0.8, 25 wt.% Lysozyme enzyme, 0.8-2.0 wt.% Sodium chloride, 0.1-0.3 wt.% Saccharide in aqueous solution. in the case of 0.02-0.6% by weight of a preservative; the pH of the aqueous solution is between 3.0 and 8.0, preferably between 3.5 and 5.0.
A találmány tárgya továbbá eljárás fagocita aktivitású sejtek kimutatására neutrálvőrössel végzett szinfestés útján. A találmány értelmében úgy járunk el, hogy 0,2-0,8 tömegX neutrálvörőst, 0,1-0,25 tömegX lizozim enzimet, 0,8-2,0 tömegX nátrium-kloridot, 0,1-0,3 tömegX glükózt és adott esetben 0,02-0,6 tömegX tartósítószert vizben oldunk, az oldat pH-ját 3,0 és 8,0 közötti, célszerűen 3,5 és 5,0 közötti értékre állítjuk, az oldatot sterilre szűrjük, majd az igy kapott reagens oldat 1 térfogategységnyi mennyiségét 3-8 térfogategységnyi vizsgálandó mintával, célszerűen magzatvizzel keverjük össze, és a kapott sejtszuszpenziót önmagában ismert módon hemocitométerben megvizsgáljuk.The invention further relates to a method for detecting cells with phagocytic activity by staining with neutral red vein. According to the invention, 0.2 to 0.8% by weight of neutral red, 0.1 to 0.25% by weight of lysozyme, 0.8 to 2.0% by weight of sodium chloride, 0.1 to 0.3% by weight of glucose are used. and optionally 0.02-0.6% by weight of a preservative in water, adjusting the pH of the solution to 3.0 to 8.0, preferably 3.5 to 5.0, filtering the solution to sterile 1 volume of reagent solution is mixed with 3-8 volumes of test sample, preferably amniotic fluid, and the resulting cell suspension is assayed in a manner known per se in a hemocytometer.
A találmány szerinti reagens oldat azacharidként a sejtek száméra energiaforrásként hasznosítható mono- vagy diszacharidokat, különösen előnyösen glükózt tartalmazhat. Tartósítószerként - amennyiben erre szükség van - előnyösen benzoésavat és/vagy poli(vinil-alkohol)-t használunk.The reagent solution of the present invention may contain mono- or disaccharides, particularly preferably glucose, as a source of energy for the cells as an azaccharide. Preferably, benzoic acid and / or polyvinyl alcohol is used as a preservative.
A sejtszuszpenzió hemocitometriás vizsgálatát az Orvosi Hetilap 125, 9 (1984) és N. Eng. J. Med. 310, 1463 (1984) közleményekben leírt módon végezzük. A hemocitometriás vizsgálat során a reagens oldattal kezelt sejtszuszpenziót inkubálás után centrifugáljuk, a felülúszót leöntjük, az üledéket mosó-higító oldattal keverjük össze, majd Bürker kamrában vizsgáljuk a színreakciót.The hemocytometric assay of the cell suspension was performed as described in Medical Weekly 125, 9 (1984) and N. Eng. J. Med. 310, 1463 (1984). During the hemocytometric assay, the cell suspension treated with the reagent solution is centrifuged after incubation, the supernatant is discarded, the pellet is mixed with the washing dilution solution and the color reaction is examined in a Bürker chamber.
Klinikai vizsgálatok céljára a találmány szerinti reagenst célszerűen reagens készlet formájában hozzuk forgalomba. A reagens készlet dózisegységekbe kiszerelt (célszerűen ampullákba töltött) reagens oldatból és dózisegységekbe kiszerelt (célszerűen ampullákba töltött) mosó-hígító oldatból áll, és a reagens oldat és a mosó-hígító oldat dózisegységeinek térfogataránya 1:(0,5-2).For the purpose of clinical trials, the reagent of the present invention is conveniently marketed as a reagent kit. The reagent kit is comprised of a unit dose reagent solution (preferably filled in ampoules) and a dosage unit wash (preferably filled in ampoules), and the dosage ratio of reagent solution to wash dilution solution is 1: 0.5 (0.5-2).
Mosó-hígító oldatként a citológiai vizsgálatokhoz erre a célra felhasznált, önmagukban ismert oldatokat alkalmazhatjuk. Különösen előnyösen használhatunk Hank-oldatót [Hank, J. H. és Wallace, R. E.: Proc. Soc. Exptl. Bioi. Med. 71, 196 (1949)]. Kiemelkedően előnyös olyan Hank-oldat használata, amelynek pH-ját N-hidroxi-etil-piperazin-N’-2-etánszulfonsavval 7,2 és 7,4 közötti értékre (előnyösen pH 7,3-ra) állítottuk be.Wash-dilution solutions which are known per se for cytological studies may be used. Particularly preferred is Hank's solvent (Hank, J.H. and Wallace, R.E. Proc. Soc. Exptl. Biol. Med., 71, 196 (1949)]. It is highly preferred to use a Hank's solution adjusted to pH 7.2 to 7.4 (preferably pH 7.3) with N-hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulfonic acid.
Oltalmi igényünk a reagens készletekre is kiterjed.Our need for protection extends to reagent kits.
A találmány szerinti megoldás legfontosabb előnye, hogy a felhasznált oldatok stabilak, tartósítószer jelenlétében legalább 12 hónapig eltarthatok, és azonnal felhasználható formában kerülhetnek kiszerelésre. A találmány szerinti reagens oldat, illetve rea3 gens készlet felhasználásával a diagnosztikai munka az eddig ismerteknél gyorsabban és egyszerűbben végezhető el, és a kimutatási módszer megbízhatósága és reprodukálhatósága felülmúlja a korábbi megoldásokét.The most important advantage of the present invention is that the solutions used are stable, can be preserved for at least 12 months in the presence of a preservative, and can be formulated immediately. Using the reagent solution or reagent kit of the present invention makes diagnostic work faster and easier than previously known, and the reliability and reproducibility of the detection method is superior to previous solutions.
A találmányt az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük.The invention is further illustrated by the following non-limiting examples.
1. példaExample 1
Reagens készletet készítünk a kővetkező oldatokból:A reagent kit is prepared from the following solutions:
I. Reagens oldat:I. Reagent solution:
0,1 g poli(vinil-alkoholt) 45 ml forró desztillált vízben oldunk, majd az oldathoz szobahőmérsékletre hűtés után 0,8 g nétrium-kloridot, 0,1 g glükózt, 0,02 g benzoésavat és 0,1 g lizozim enzimet adagolunk. Az igy kapott oldat pH-ját 1 mólos Trisz [trisz(hidroxi-metil-amino-metán)] pufferrel 6,9-re állítjuk, és térfogatát desztillált vízzel 50 ml-re egészítjük ki. Az igy kapott oldathoz hozzáadjuk 0,2 g neutrálvörös [3-amino-7-(dimetil-amino)-2-metil-fenozin-hidroklorid) ml desztillált vízzel készített oldatát, majd alapos keverés után az oldatot G-5-ös üvegszürón csíraszegényre szűrjük, és a szűrletet 1-1 ml-enként jól záródó üvegcsékbe töltjük.Dissolve 0.1 g of polyvinyl alcohol in 45 ml of hot distilled water and, after cooling to room temperature, add 0.8 g of sodium chloride, 0.1 g of glucose, 0.02 g of benzoic acid and 0.1 g of lysozyme. . The resulting solution was adjusted to pH 6.9 with 1 M Tris (tris (hydroxymethylaminomethane)) buffer and made up to 50 ml with distilled water. To the resulting solution was added a solution of 0.2 g of neutral red [3-amino-7- (dimethylamino) -2-methylphenosine hydrochloride) in ml of distilled water and, after thorough mixing, the solution was germinated on a G-5 glass sieve. filter and pour the filtrate into 1-ml vials, which are well sealed.
II. Mosó-hígító oldat:II. Wash-dilution solution:
350 ml desztillált vízben 4 g nétrium-kloridot, 0,2 g kálium-kloridot, 0,1 g magnézium-szulfét-heptahidrátot, 0,09 g kalcium-klorid-dihidrátot, 0,03 g dinátrium-hidrogén-foszfét-dihidrátot, 0,03 g kálium-dihidrogén-foszfátot és 0,5 g glükózt oldunk, majd áz oldathoz 0,1 g benzoesavat adunk. Ezután az oldathoz 0,175 g nátrium-hidrogén-karbonát 12,5 ml desztillált vízzel készített oldatát adjuk. Az elegyet alaposan összekeverjük, majd az így kapott oldat (Hank-oldat) pH-ját 5 ml 1 mólos vizes N-hidroxi-etil-piperazin-Ν’-2-etán-szulfonsav oldattal 7,3-ra állítjuk be.In 350 ml of distilled water, 4 g of sodium chloride, 0.2 g of potassium chloride, 0.1 g of magnesium sulphate heptahydrate, 0.09 g of calcium chloride dihydrate, 0.03 g of disodium hydrogen phosphate dihydrate, 0.03 g of potassium dihydrogen phosphate and 0.5 g of glucose are dissolved in 0.1 g of benzoic acid. Then, a solution of sodium hydrogen carbonate (0.175 g) in distilled water (12.5 ml) was added. The mixture is thoroughly mixed and the pH of the solution thus obtained (Hank's solution) is adjusted to 7.3 with 5 ml of a 1M aqueous solution of N-hydroxyethylpiperazine-α-2-ethanesulfonic acid.
Ezután az oldat térfogatát desztillált vízzel 500 ml-re egészítjük ki, majd G-5-ös üvegszűrőn csiraszegényre szűrjük, és 5-5 ml-enként jól záródó üvegcsékbe töltjük.The solution is then made up to 500 ml with distilled water, filtered through a G-5 glass filter to a germ-free filter and filled in 5 to 5 ml sealed vials.
2. példaExample 2
Reagens készletet készítünk a kővetkező oldatokból:A reagent kit is prepared from the following solutions:
I. Reagens oldat:I. Reagent solution:
A reangens oldat összetétele és előállítása megegyezik az 1. példában leírtakkal.The composition and preparation of the reagent solution are as described in Example 1.
II. Mosó-hígító oldat:II. Wash-dilution solution:
350 ml desztillált vízben 4 g nátrium-kloridot, 0,2 g kálium-kloridot, 0,1 g magnézium- ezulfát-heptahidrátot, 0,03 g dinátrium-hidrogén-foezfátot, 0,03 g kálium-dihidrogén-foszfátot, 0,5 g glükózt, és 0,09 g kalcium-klorid-dihidrátot oldunk, ée az oldathoz 0,5 g benzoésavat adunk. Ezután az oldathoz 2,4 g nátrium-hidrogén-karbonát 30 ml desztillált vízzel készített oldatát adjuk. Az elegyet alaposan összekeverjük, majd az igy kapott oldat (Hank-oldat) pH-ját 5 ml 1 mólos vizes N-hidroxi-etil-piperazin-N’-2-etán-szulfonsav oldattal 7,3-ra állítjuk be.In 350 ml of distilled water, 4 g of sodium chloride, 0.2 g of potassium chloride, 0.1 g of magnesium sulphate heptahydrate, 0.03 g of disodium hydrogen phosphate, 0.03 g of potassium dihydrogen phosphate, 5 g of glucose and 0.09 g of calcium chloride dihydrate are dissolved and 0.5 g of benzoic acid is added. Then, a solution of 2.4 g of sodium bicarbonate in 30 ml of distilled water was added. The mixture was thoroughly mixed and the pH of the resulting solution (Hank's solution) was adjusted to 7.3 with 5 ml of 1 N aqueous N-hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulfonic acid.
A kapott oldat térfogatát desztillált vízzel 500 ml-re egészítjük ki, majd G-5-ös üvegszűrőn csíraszegényre szűrjük, és 5-5 ml-enként jól záródó üvegcsékbe töltjük.The resulting solution was made up to 500 ml with distilled water, filtered through a G-5 glass filter for germ-free filtration and filled into sealed vials every 5 to 5 ml.
3. példaExample 3
Reagens készletet készítünk a kővetkező oldatokból:A reagent kit is prepared from the following solutions:
I. Reagens oldat:I. Reagent solution:
A reagens oldat összetétele és előállítása megegyezik az 1. példában leírtakkal.The composition and preparation of the reagent solution is as described in Example 1.
II. Mosó-hígító oldat:II. Wash-dilution solution:
350 ml desztillált vízben 4 g nátrium-kloridot, 0,2 g kálium-kloridot, 0,1 g magnézium-szulfát-heptahidrátot, 0,03 g dinátrium-hidrogén-fősziét-dihidrátot, 0,03 g kálium-dihidrogén-foszfátot, 0,5 g glükózt és 0,09 g kalcium-klorid-dihidrátot oldunk, majd az oldathoz 0,6 g nátrium-be nzoátot adunk. Ezután az oldatot 0,130 g nátrium-hidrogén-karbonét 10 ml desztillált vízzel készített oldatával alaposan összekeverjük, és az igy kapott oldat (Hank-oldat) pH-ját 5 ml 1 mólos vizes N-hidroxi-etil-piperazin-N’-2-etán-szulfonsav oldattal 7,3-ra állítjuk be.In 350 ml of distilled water, 4 g of sodium chloride, 0.2 g of potassium chloride, 0.1 g of magnesium sulphate heptahydrate, 0.03 g of disodium hydrogen phosphate dihydrate, 0.03 g of potassium dihydrogen phosphate, Dissolve 0.5 g of glucose and 0.09 g of calcium chloride dihydrate, and add 0.6 g of sodium nzoate to the solution. The solution is then thoroughly mixed with 0.130 g of sodium bicarbonate solution in 10 ml of distilled water and the resulting solution (Hank's solution) is brought to pH 5 with 1 ml of aqueous N-hydroxyethylpiperazine-N'-2- adjust to 7.3 with ethanesulfonic acid solution.
A kapott oldat térfogatát desztillált vízzel 500 ml-re egészítjük ki, majd G-5-öe üvegszűrőn csíraszegényre szűrjük, és 5-5 ml-enként jól záródó üvegcsékbe töltjük.The resulting solution was made up to 500 ml with distilled water, filtered through a G-5 glass filter for germination, and filled in 5 to 5 ml sealed vials.
4. példaExample 4
Reagens készletet készítünk a kővetkező oldatokból:A reagent kit is prepared from the following solutions:
I. Reagens oldat:I. Reagent solution:
A reagens oldatot az 1. példában leirt módon állítjuk ejő, azzal a különbséggel, hogy 0,8 g neutrálvórőst használunk. Az így kapott reagens oldatot szűrés után 1-1 ml-enként jól záródó üvegcsékbe töltjük.The reagent solution was adjusted as described in Example 1, except that 0.8 g of neutral wick was used. After filtration, the reagent solution thus obtained is filled into 1-ml sealed vials.
-3197450-3197450
II. Mosó-higító oldat:II. Wash-dilution solution:
A mosó-hígító oldat összetétele és előállítása megegyezik az 1. példában leírtakkal.The composition and preparation of the wash-dilution solution were as described in Example 1.
Az 1-4. példa szerinti reagens készletekből egy-egy vizsgálat elvégzéséhez egy ampulla reagens oldat és egy ampulla moeó-higító oldat szükséges.1-4. One set of ampoules reagent solution and one ampoule of molar diluent are required to perform one assay of the reagent kits of Example 1A.
5. példa ml magzatvízhez 1 ampulla (1 ml), az 1. példa szerinti összetételű reagens oldatot adtunk. Az elegyet 15 perces inkubálás után centrifugáltuk, a felülúszót leöntöttük, majd az üledékhez 0,5-2,0 ml mosó-hígító oldatot adtunk. A festett mintát Bürker kamrában vizsgáltuk és értékeltük.Example 5 To 1 ml of amniotic fluid 1 ampoule (1 ml) of the reagent solution of Example 1 was added. After 15 minutes of incubation, the mixture was centrifuged, the supernatant was discarded, and 0.5 to 2.0 ml of washer-dilution solution was added to the pellet. The stained sample was examined and evaluated in a Bürker chamber.
összehasonlítás céljából 5 ml magzatvizet 1 ml, az Orvosi Hetilap 125, 9 (1984), ill. N. Eng. J. Med. 310, 1463 (1984) szakcikkben közöltek szerint kezeltünk a szakcikkekben közölt módon HAM F-10 típusú tépoldattal (gyártja a Gibco cég, Nagy-Britannia) frissen készített neutrálvörös oldattal.for comparison, 5 ml of amniotic fluid per ml, see Medical Weekly 125, 9 (1984) and N. Eng. J. Med., 310, 1463 (1984) was treated with a freshly prepared neutral red solution as described in the articles using HAM F-10 (manufactured by Gibco, UK).
Az összehasonlító kísérletekben a sejtek festékfelvételét és a szín tartósságát vizsgáltuk és értékeltük. Az észlelt adatok szerint a találmány szerinti összetételű reagens oldat alkalmazásakor a sejtek festékfelvétele 25-30%-kal nőtt az ismert összetételű oldattal elérthez viszonyítva, és a szín tartóssága közel tízszerese volt az ismert összetételű oldat használatakor kapott értéknek.In comparative experiments, the dye uptake and the color persistence of cells were examined and evaluated. According to the observed data, the dye uptake by the reagent solution of the present invention was increased by 25-30% compared to the solution of the known composition, and the color durability was approximately ten times that of the solution of the known composition.
Az ismert összetételű reagens oldatot szobahőmérsékleten 1 hétig tároltuk, majd megkíséreltük sejtfestésre felhasználni. Az oldat sejtfestésre alkalmatlanná vált. Ezzel szemben a találmány szerinti összetételű reagens oldat egy éves tárolás után is változatlan eredménnyel alkalmazható volt setjfestésre.The reagent solution of known composition was stored at room temperature for 1 week and then used for cell staining. The solution became unstable for cell staining. In contrast, the reagent solution of the present invention, after one year of storage, was able to be used for staining with unchanged results.
Claims (7)
Priority Applications (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
HU134087A HU197450B (en) | 1987-03-27 | 1987-03-27 | Reagent and method for detecting cells of phagocyte activity |
JP50258188A JPH03500961A (en) | 1987-03-27 | 1988-03-22 | Reagent and method for detecting cells with phagocytic activity |
PCT/HU1988/000015 WO1988007583A1 (en) | 1987-03-27 | 1988-03-22 | Reagent and method for detecting cells with phagocytic activity |
AU14885/88A AU1488588A (en) | 1987-03-27 | 1988-03-22 | Reagent and method for detecting cells with phagocytic activity |
EP19880902576 EP0345295A1 (en) | 1987-03-27 | 1988-03-22 | Reagent and method for detecting cells with phagocytic activity |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
HU134087A HU197450B (en) | 1987-03-27 | 1987-03-27 | Reagent and method for detecting cells of phagocyte activity |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HUT46145A HUT46145A (en) | 1988-09-28 |
HU197450B true HU197450B (en) | 1989-03-28 |
Family
ID=10954018
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU134087A HU197450B (en) | 1987-03-27 | 1987-03-27 | Reagent and method for detecting cells of phagocyte activity |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0345295A1 (en) |
JP (1) | JPH03500961A (en) |
AU (1) | AU1488588A (en) |
HU (1) | HU197450B (en) |
WO (1) | WO1988007583A1 (en) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105651579B (en) * | 2015-12-07 | 2018-10-23 | 上海太阳生物技术有限公司 | A kind of iophenoxic acid naphthol ester enzyme staining reagent kit |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2240672C2 (en) * | 1972-08-18 | 1974-08-22 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Method and device for staining biological material |
-
1987
- 1987-03-27 HU HU134087A patent/HU197450B/en not_active IP Right Cessation
-
1988
- 1988-03-22 JP JP50258188A patent/JPH03500961A/en active Pending
- 1988-03-22 EP EP19880902576 patent/EP0345295A1/en not_active Withdrawn
- 1988-03-22 AU AU14885/88A patent/AU1488588A/en not_active Abandoned
- 1988-03-22 WO PCT/HU1988/000015 patent/WO1988007583A1/en not_active Application Discontinuation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
HUT46145A (en) | 1988-09-28 |
WO1988007583A1 (en) | 1988-10-06 |
EP0345295A1 (en) | 1989-12-13 |
AU1488588A (en) | 1988-11-02 |
JPH03500961A (en) | 1991-03-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Fahn et al. | Sodium-Potassium-activated Adenosine Triphosphatase of Electrophorus Electric Organ: V. PHOSPHORYLATION BY ADENOSINE TRIPHOSPHATE-32P | |
Miller | Use of dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing sugar | |
Puchwein et al. | Uncoupling of catecholamine activation of pigeon erythrocyte membrane adenylate cyclase by filipin | |
McCaman et al. | Radiomimetric assay of acetylcholinesterase activity in submicrogram amounts of tissue | |
US3745090A (en) | Method of detecting and counting bacteria in body fluids | |
Melchior Jr et al. | Ethoxyformylation of proteins. Reaction of ethoxyformic anhydride with. alpha.-chymotrypsin, pepsin, and pancreatic ribonuclease at pH 4 | |
Frasch et al. | Competitive inhibition of phlorizin binding by D-glucose and the influence of sodium: a study on isolated brush border membrane of rat kidney | |
Tobin et al. | Rates of dissociation of enzyme-ouabain complexes and K0. 5 values in (Na++ K+) adenosine triphosphatase from different species | |
Smith et al. | The spectrophotometric determination of ampicillin | |
DE2122255A1 (en) | Method and reagent for the specific determination of creatinine | |
US3721607A (en) | Reagent composition and process for the determination of glucose | |
US3773626A (en) | Reagent composition and process for determining gamma-glutamyltranspeptidase | |
US5002893A (en) | Single color reading method for determining fructosamine | |
US4551427A (en) | Process and reagent for the determination of blood glucose in haemolysed whole blood | |
Ennor et al. | The application of the diacetyl reaction to the estimation of creatine in urine | |
US3791931A (en) | Reagent and method for determination of lactate dehydrogenase | |
US3119751A (en) | Reagents and analysis of nitrogen | |
HU197450B (en) | Reagent and method for detecting cells of phagocyte activity | |
Gips et al. | Preservation of urine for ammonia determination with a direct method | |
US4056485A (en) | Stable colored reference standard for enzymatic determinations | |
Whittington et al. | Comparative properties of high potassium and low potassium sheep erythrocyte membrane sodium-activated adenosine triphosphatase | |
Edlow et al. | Placental enzymes: specific activities and isoenzyme patterns during early and late gestation | |
IE42640B1 (en) | Compositions for the detection of fibrinogen, fibrinogen split products and/or fibrin split products | |
Scherstén et al. | A fluorometric method for the enzymatic determination of normal concentrations of urinary glucose | |
DE3854127T2 (en) | STABLE ALPHA AMYLASE REAGENT. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HU90 | Patent valid on 900628 | ||
HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |