HU193060B - Process for preparing a 39079 antibiotic s-1 factor - Google Patents
Process for preparing a 39079 antibiotic s-1 factor Download PDFInfo
- Publication number
- HU193060B HU193060B HU844247A HU424784A HU193060B HU 193060 B HU193060 B HU 193060B HU 844247 A HU844247 A HU 844247A HU 424784 A HU424784 A HU 424784A HU 193060 B HU193060 B HU 193060B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- nrrl
- streptomyces
- factor
- antibiotic
- spheroides
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D498/08—Bridged systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/02—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using fungi
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/188—Heterocyclic compound containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen atoms and oxygen atoms as the only ring heteroatoms
- C12P17/189—Heterocyclic compound containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen atoms and oxygen atoms as the only ring heteroatoms containing the rifamycin nucleus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/24—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carbonyl group
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/886—Streptomyces
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás az (I) általános képlett! (R és R' jelentése egyaránt vagy -OH vagy =0 csoport), a rifamicin csoportba tartozó új antibiotikum, az A39079
S-l faktor előállítására.
A találmány tárgykörébe tartozik továbbá a fenti antibiotikumnak kloramfenikoltől, cikloheximidtől (aktidion) aktifenoltól és szeptacidintől történő elválasztása.. Az S-l faktort kloramfenikolt, cikloheximidet, aktifenolt vagy szeptacidint a lesavanyított fermentlé szőriéiből extraháljuk ki poláris szerves oldószerrel, és extrakciós kromatográfiás és/vagy kristályosítási módszerekkel tisztíthatjuk tovább.
Az S-l faktor tartalmazza mind a (II) képletű vegyületet (a redukált forma,ahol mind R, mind R’ csoportok jelentése hidroxi-csoport), mind a (111) képletű vegyületet (az oxidált forma, ahol mind R, mind R’ jelentése=0 csoport).Jóllehet mind a (II),mind a (111) vegyület jelen van az S-.l faktorban, a (III) képletű vegyület (az oxidált forma) túlsúlyban van a legtöbb készítményben.
Folytonos az igény új, javított tulajdonságú antibiotikumok iránt. Jobb antibiotikumokra van szükség emberi betegségek kezeléséhez, valamint az állatgyógyászatban. Megnövelt hatékonyság, szélesebb spektrumú bakteriális gátlás, megnövelt in vivő hatásosság, valamint javított farmakológiai tulajdonságok (például jobb felszívódás szájon át, magasabb vér- vagy szövet-koncentráció, hosszabb in vivő lebomlási idő, a kiválasztás előnyösebb módja és sebessége, a metabolizmus előnyösebb útja és sebessége), ez néhány példa a jobb antibiotikumok fejlesztésénél követett szempontokra.
Az új antibiotikumok kutatása során az ismert aktibiotikumok szerkezeti módosítását is megkísérlik, ha csak lehetséges. Ez a megközelítés azonban a kívánt aktivitást megtartó származékokra korlátozódik. Számos antibiotikum, ideértve a rifamicin típusúakat is, olyan bonyolult szerkezetű, hogy még kis módosítást is nehéz kémiai módszerekkel végrehajtani.A fermentációs eljárásokkal előállítható új antibiotikumok feltalálásának továbbra is nagy fontossága van.
Az (1) általános képletű S-l faktor az antibiotikumok rifamicin csoportjában újonnan feltalált tag. A csoport tagjai közé tartozik a rifamicin S (lásd például a 4 353 826 szá2 mú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírást).
A találmány tárgya tehát eljárás az A39079 antibiotikum S-l faktorának előállí5 tására.oly módon,hogy a Streptomyces spheroides NRRL 15600 törzset, vagy annalTS-l faktort termelő variánsát vagy mutánsát emészthető szénforrást, nitrogén-forrást és szervetlen sókat tartalmazó közegben, süllyesztett10 levegőztetett fermentációs körülmények között tenyésztjük.
Az S-l faktor mellett az NRRL 15600 törzs termel még kloramfenikolt, cikloheximidet, aktifenolt és szeptacidint.Tehát a találmány tárgya továbbá eljárás az S-l faktor kloramfeni5 kohói, ciklohexamidtől,aktifenoltól vagy szeptacidintől történő elválasztására, oly módon, hogy a Streptomyces spheroides NRRL 15600 törzset, vagy annak variánsát vagy
2Q mutánsát emészthető széníorrást,nitrogénforrást és szervetlen sókat tartalmazó közegben, süllyesztett-levegőztetett fermentációs körülmények között tenyésztjük, majd a felsorolt antibiotikumokat a fermentléből kinyer25 ÍükA találmány foglalkozik továbbá ismert módszerekkel előállított gyógyászati készítményekkel, melyek aktív adalékanyagként az A39079 antibiotikum S-l faktorát tartalmazza, egy vagy több gyógyászatilag elfogadható hordozóval vagy hígítóanyaggal.
Az A39079 antibiotikum S-l faktora amorf sárga por, oldódik metanolban, acetonitrilben és acetonban, de gyengén oldódik vízben. Az S-t faktor oxidált formájának (111) az 35 összegképlete C36H43NO12, molekulasúlya körülbelül 681. Az S-l faktor fizikai jellemzői a következők:
1) Infravörös spektroszkópia: jellemző csúcsok' 3420, 3163, 1672, 1642, 1621, 1599 40 1412, 1182, 1136 és 1072 cm'' -nél.
2) Ultraibolya spektrofotometria: abszorpciós maximum 305 nm-nél (váll) (ε= 16,000), 272 nm-nél (ε = 30,000) és 208 nm-nél (8=24,000) semleges és savas metanol45 bán, valamint 312 nm-nél (ε=30,000) és 250 nm-nél (ε=37,000) lúgos metanolban.
3) Titrálás: 66%-os vizes dimetilformamidban: pKa 8.0.· 5_ 4) Tömegspektrometria: A gyors-atom bombázási módban a következő eredményeket kapjuk.
| M/Z | Forma | HRMS* M/Z | HRMS* képlet |
| 706 (M+Na)+ | redukált | 706.286 | C36 N°t2 Na |
| 684 (M+H)+ | redukált | ||
| 683 (M) + | redukált | ||
| 682 (M+H)+ | oxidált | ||
| 681 (M)+ | oxidált | ||
| 287 (a rifamicin kromofór |
fragmentjét mutatja).
*HRMS: Nagy felbontóképességű tömeg-spektrum.
-2193060 .1
5) Mag-mágnese5 rezonancia spektroszkópia (NMR):
a) AI3C NMR vizsgálatot deuterált kloroformban, íetradeutero-metanolban vagy hexadeutero-acetonban végezzük. A protonált 5 szénatomok rezonanciáit egyszeri frekvencia-szétcsatolási technikával azonosítottuk. A többi szénatom frekvenciáinak azonosítását teljesen csatolt spektrumból, valamint a rifamicin
A39079 faktor S-1 (2):
Rifamicin S (3):
b) A proton NMR vizsgálatokat tetradeutero-metanolban, deutero-kloroformban és hexadeutero-acetonban végezzük. A rifamicin S proton NMR adataival összehasonlítva a 3^
16. és 27. szénatom helyettesítésében van élté- 20 rés. Az NMR spektrumot 360 MHz-es és 270 MHz-e.s készülékeken vesszük fel, ismert szétcsatolási technikákat alkalmazva. A szétcsatolási adatok egy ansa lánc (azaz a rifamicinekre jellemző alapváz) jelenlétét mutatják, 25 amely a 16-os és 27-es helyen (R2 és R3) különbözik a tipikus rifamicinekben levő lánctól. A gyűrű hármas helyén (Rt) levő proton hiánya, kapcsolva a ’3C spektrumban lévő aromás metil csúccsal igazolta egy metil-cso- 30 port jelenlétét a C-3-as helyzetében.
6) Stabilitás: Az S-1 faktor stabilitásának vizsgálatát vizes metanolos oldatokban végezzük 2, 5, 7 és 9-es pH értékeken,4, 25 és 37 °C-on. Ezekben a vizsgálatokban S-1 sokkal stabilabb enyhén savas, semleges és lúgos oldatokban mint erősen savas oldatokban (pH —2), a vizsgált hőmérsékletek közül legstabilabb 4°C-on,kevésbé stabil 25°C-on és legkevésbé stabil 37 °C-on.
7) Kromatográfia
a) Analitikai nagynyomású folyadék-kromatográfia (HPLC).
Oszlop: 0,64 x 12,5 cm Töltet: Zorbax ÓDS (6 μ, E.I. DuPont) Oldószer: acetonitril:víz:trifluor-ecetsav (56:
:43, 996:0,004), pH = 4,6.
Áramlási sebesség: 1 ml/perc Detektálás: UV 264 nm-en Mennyiségi értékelés: Micrometrics 740 mikroprocesszor adat-csomaggal (Micromertics Corp.).Az S-1 retenciós ideje: 5,6 perc (k’ = 3.74).
b) Vékonyréteg-kromatográfia (TLC) Réteg: szilikagél (Whatman LKDSF lemezek)
Oldószer:kloroform: metanol: ammóniám-hidroxid (90:9,5:0,5)
Kimutatás: UV és bioantográfia Staphylococcus aureus-szál.
Rf érték: 0.7.
A szakterületen jártas szakember számára nyilvánvaló, hogy az A39079 S-1 faktor acil-észter ^származékokat tud képezni. Ezek a
S irodalmi értékeivel való összehasonlítással nyerjük. Harminchat külön szén-frekvencia jelentkezik, ami megegyezik a nagy felbontóképességű tömeg-spektronkópíás elemanalizis adataival. Az A39079 S-1 faktor 13C adatainak összehasonlítása a rifamicin S adataival három helyettesítésbeli eltérést mutat a (IV) általános képlet szerint:
R< _ Rz R3
CHj H H
H CH3 CH3 származékok jól használhatók az S-1 faktor izolálásában, tisztításában és adagolásában.
Az A39079 S-1 faktor acil-észter származékait acilező szerrel, ismert eljárásokat használva állíthatjuk elő. Az ehhez a reakcióhoz megfelelő oldószerek közé tartozik a piridin és trietilamin. A tipikus acilező szerek közé tartoznak a savanhidridek, savhalogenidek (általában savkötő anyaggal kombinálva), valamint a szerves savak aktív észterei. Az acilezést végrehajthatjuk úgy is, hogy szerves sav és dehidratáló anyag,példáúl N,N’-diciklohexil-karbodiimid keverékét használjuk. Az észterezést ismert módszerekkel, például vékonyréteg kromatográfiával követhetjük, hogy meghatározzuk a kívánt reakció lejátszódásához szükséges időt. A létrejött megfelelő észter-származékokat ismert módszerekkel választhatjuk el és tisztíthatjuk.
A találmány tárgya eljárás S-1 faktor előállítására, és kloramfenikoltól, cikloheximidtől, aktifenoltól és szeptacidintől történő elvá-i lasztására, oly módon, hogy a Streptomyces spheroides új törzsét süllyesztett-levegozte40 tett fermentációs körülmények között tenyésztjük mindaddig, míg megfelelő szintű antibiotikum-aktivitás jön létre, majd az egyes antibiotikumokat a fermentléből kinyerjük. A kloramfenikol jól ismert, kereskedelmi forgalom45 bán levő baktérium-ellenes szer. A cikloheximid (lásd a 2 574 519 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírást) és szeptacidin hasznos gombaellenes szerek. így ezen anyagok mindegyikének előállítása a Strepto50 myces spheroides tenyészettel további előnyös vonása a jelen találmánynak.
Az A39079 S-1 faktor előállítására használható Streptomyces spheroides törzset letétbe helyeztük (1983. szeptember 8-án) és a
Northern Régiónál Research Center, U.S.Department of Agriculture, 1815 N. University St., Peoria, Illionis 61604, Agricultural Research Culture Collection állandó gyűjteményének része lett, ahol bárki számára hozzáfér60 hető az \RRL 15600 sorszám alatt.
A Streptomyces spheroides NRRL 15600 törzset vancuveri (British Columbia, Canada) talajmintából izoláltuk. Ezt a szervezetet Wallich és munkatársai Streptomyces ”5 spheroides-nek írták le. Ez az osztályozás 3
-3193060 szimultán laboratóriumi összehasonlításon-, valamint a Streptomyces spheroides és más hasonló fajok közölt leírásával való összehasonlításon alapszik [R.E. Buchanan and N.E. Gibbons, Eds. „Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology,” 8th ed., The Williams and Wilkins Co., Baltimore, 1974. E.B.Shirling and D. Gottlieb, Cooperative Deschription of Type Cultures of Streptomyces? Int.J. Syst. Bacteriol. 18(4): 279-399 (1968), és H.Wallick, D.A.Harris, M.A.Reagan, M.Ruger és H.B.Woodruff, “Discovery and Antimicrobial Properties of Cathomycin, a New Antibiotic Produced by Streptomyces spheroides N. sp^Antibíotics Annual 1955-1966:909917 (1956)].
A mikroorganizmus leírása során a Streptomyces fajok leírására az Internationl Streptomyces Project (ISP) által Streptomyces fajok jellemzésére javasolt módszereket használtuk [E.B. Shirling and D. Gottlieb „Methods of Characterization of Streptomyces species? Int.J.Syst, Bacteriol, 16, (3), 319-340 (1966)} bizonyos kiegészítő vizsgálatokkal együtt.
A szénforrás hasznosítást ISP No. 9. alaptáptalajjal határozzuk meg, annyi szűréssel sterilezett szénforrást adva a táptalajhoz, hogy a végkoncentráció 1.0 tömegszázalék legyen. A lemezeket 30°C-on inkubáljuk és 14 nap múltán értékeljük.
A melanoid-pigment termelő képességét (kromogenícitás) ISP No. 1. (trypton-élesztő kivonat tápleves), ISP No. 6. (pepton-élesztő kivonat-vas agar), ISP No. 7. (tirozin agar) és módosított ISP No. 7. (tirozin-mentes) táptalajokon határozzuk meg.
A keményítő-hidrolízist a keményítő jódos kimutatásával ISP No. 4. (szervetlen sók keményítő-agar) lemezeken [D.J.Blazevic and G.M.Ederer, “Principles of Biochemical Tests in Diagnostic Microbiology, John Wiley and Sons, Inc. New York, 136. oldal (1975] határozzuk meg.
A morfológiai tulajdonságokat optikai fénymikroszkóppal tanulmányozzuk. Pásztázó elektron-mikroszkóppal tanulmányozzuk a spórák felszínének mintázatát.
A nátrium-klorid tűrőképességét ISP No.2. agárhoz megfelelő végkoncentrációt biztosító nátrium-klorid mennyiség hozzáadásával vizsgáljuk.
1. T á
A szín-nevek azonosításához az ISCC-NBS Centroid Color Charts No. 2106 számú'standard mintát (U.S. Department of Commerce, National Bureau of Standards, 1958) és a
Color Harmony Manual (4-ik kiadás, Color Standards Department, Container Corporation of America, Illinois, 1958) kiadványokat használjuk.
A diamino-pimelinsav (DAP) izomerek je10 lenlétét, valamint a szénhidrátok jelenlétét a sejthídroHzátumokban Becker és munkatársai valamint Lechevalier [B.Becker, M.P.Leche valier, R.E.Gordon and H.A.Lechevalier,Rapid Differentiaton Between Nocardia and
Streptomyces by Paper Chromatography of Whole Cell Hydrolysates, Appl. Microbiol. XJ, 421-423 (1964), és M.P. Lechevalier, „Identification of Aerobic Antinomycetes of Clinical Importance, J.Lab. Clin. Med., TA,
934-944 (1968)] kromatográfiás módszerével állapítjuk meg.
A hasonlósági koefficienseket az s=[n;+ ní3/[n: + n;+ NJ-IÓO egyenlettel határozzuk meg, ahol Nf jelentése a pozitív hasonlóságok száma, Ng a negatív hasonlóságok száma, Nd a különbözőségek száma, lásd [W, Kurilowicz, A. Paszkiewicz, W. Woznicka, W. Kurzatkowski, „Numerical Taxonomy of. Streptomyces Polish Medical Publishers, Warsaw, (1975)].
A tenyészet jellemzői
A tenyészetet bőséges lég- és vegetatív-micéliumos növekedés jellemzi különböző táptalajokon.
A spóratömeg főleg a sárga (Y) szín-sorozatba tartozik. A legjobban közelítő szín a 2ba halvány sárga [H.D.Tresner and f0 E.J.Backus., System of Color Wheels fór Streptomycete Taxonomy*, Applied Microbiology, 11, 335-338 (1956) ]. Ez legjobban az ISP Nö?5. glicerin-aszparagiu agaron figyelhető meg. Ez a szín nem állandó, változik.
A tenyészet hátoldalán nem látható meg5 különböztethető színanyag. Sárgás-barna, és a pH változása nem befolyásolja. Oldódó színanyagot nem termel, kivéve, hogy az ISPNo.2. és ISP No.3. agar-táptalajokon nagyon gyen0 ge barna színanyag látható.
A tenyészet stabil, homogén izolátum. A tenyészetről megfigyelt információkat az 1. táblázatban foglaljuk össze:
b 1 á z a t
Az NRRL 15600 és a jS.spheroides NRRL 2449 tenyészetek jellemzői®
| NRRL 15600 | S.spheroides NRRL 2449 | |
| G: bőséges | jó | |
| ISP | R: 77 m.yBr | 87.mY |
| No. 2 | Am: bőséges (Y) | közepes (W) |
| 1 db.p.yGN | _b fehér | |
| Sp: világos barna | nincs |
-4193060
2 I, táblázat (folytatás)
| NRRL 15600 | S. spheroides NRRL 2449 | |
| G: közepes (foltos) | közepes | |
| ISP | R: 79.1.gy yBr | 89.p.Y |
| No.3. | Am: jó (GN) | jó (Y) |
| 1 1/2_ ge | 2 ba halvány Y | |
| 1.gy.Olive So: nacvon vil.barna | nincs | |
| G: bőséges | jó | |
| ISP | R: 79.1.gy.yBr | 87.m.Y |
| No. 4 | Am: jó (Y) | jó (Y) |
| 1 1/2ec p„yGN | 2ba halvány Y | |
| Sp: nincs | nincs | |
| G: bőséges | bőséges | |
| ISP | R: 70.1.0Y | 70.1.0Y |
| No. 5 | Am: bőséges(Y) | bőséges (Y) |
| 2ba halvány Y | 2ba halvány Y | |
| Sp: nincs | r incs | |
| G: bőséges | bőséges | |
| ISP | R: 76.1yBr | 70.1. OY |
| No. 7 | Am: bőséges (Y) | bőséges (Y) |
| 2ba halvány Y | 2ba halvány Y | |
| Sp: nincs | nincs | |
| G: közepes | jó | |
| Czapek | R: 73 p.OY | 70.1.0Y |
| Agár | Am: gyenge (foltos)(Y) | jó (Y) |
| 2ba halvány Y | 2ba YT halvány | |
| Sp: nincs | nincs |
-5193060
1. táblázat (folytatás)
Emerson
NRRL 15600
G: bőséges
R: 55.s.Br
Am: bőséges (W) b fehér
Sp: nincs
S.spheroides NRRL 2449 bőséges
71.m.OY bőséges (W) b fehér nincs
G: nincs jó
R:---- 71.m.OY
TPO
Am:---Sp:---közepes (W) b fehér nincs aG = növekedés R = fordított
Sp = oldódó pigment Morfológiai jellemzők
A tenyészetben jólfej lett, nem fragmentálódó, monopodiálisan elágazó micélium fejlődik. A spóratartók hosszú, nyitott spirális formában rendeződnek el, öt vagy több fordulattal. Sporangium, szklerotium vagy mozgó 40 spóra nem figyelhető meg. A törzs Pridham és mtsai Spirales (S) szekciójába tartozik (T.G.Pridham, C.W.Hesseltine és R.C.Benedict „A Guide fór the Classifícation of Streptomycetes According to Selected Groúps, Appl. Microbiol., 6, 52-79 (1957)].
A spirális morfológia az összes olyan táptalajon megfigyelhető, ahol légmicélium keletkezik.Különösen jól fejlett az ISP No.5. agar 50 táptalajon. Az érett spóralánc 50 vagy több spórát tartalmaz.
A spóra hossúkás alakú. A spóra mérete pásztázó elektronmikroszkópos felvételek 55 alapján a következő: 1.0-1.4 μΜ hosszú és 0.6-0.8 μΜ széles. Az átlagos méret 0,7 x
Am: Légmicélium x 1,1 μΜ. A spóra felszínének mintázata sima.
Fiziológiai jellemzők
A teljes sejthidrolizátum LL-diamino-pimelinsavat (DAP) tartalmaz, mező- vagy hidroxi-izomer nincs jelén. A következő cukrok vannak jelen a teljes sejthidrolizátumbamglükóz, mannóz, ribóz és ramnóz. Ez 1 típusú sejtfalat és NC, vagy nem karakterisztikus cukor-összetételt jelent [lásd Lechevalier,idézett mű]. A fő sejtfal-komponenseknek ez a kombinációja a Streptomyces genus-ra jellemző (lásd Buchanan és mtsai és Lechevalier idézett mű).
A törzs szénforrás-hasznosítási képe a következő: a D-glükózt, D-arabinózt, cellobiózt, D-fruktózt, D-galaktózt, maltózt, D-mannitot, L-ramnózt,ribózt, szalicint és D-xilózt felhasználja a növekedés során; az L-arabinózt, i-inozitolt, laktózt, melibiózt, raffinózt és szacharózt nem használja fel a növekedés során. A
11. táblázat ban foglaljuk össze ezeket az adatokat.
II. Táblázat
Az NRRL 15600 és S.spheroides NRRL 2449 törzsek szénforrás-hasznosító képessége
Szénvegyület NRRL 15600 S.spheroides NRRL 2449
Kontroll - D-Glülóz + +
-6193060
II. Táblázat (folytatás)
| Szénvegyület | NRRL 1560 |
| D-Arabinóz | + |
| L-Arabinóz | - |
| Cellobíóz | + |
| Fruktóz | + |
| D-Galaktóz | + |
| i-Inozitol | - |
| Laktóz | - |
| Maltóz | + |
| D-Mannitol | + |
| Melibióz | - |
| Raffinóz | - |
| L-Ramnóz | + |
| Ribóz | (+) |
| Szalicin | + |
| Szacharóz | - |
| D-Xilóz | + |
S.spheroides NRRL 2449 (±) +
- nem hasznosít + hasznosít + kétséges hasznosítás
A törzs tenyészete katalázt termel, elbontja a kazeint és eszkulínt, elfolyósítja a zselatint, részlegesen redukálja a nitrátot és híd- 50 roHzálja a keményítőt. Maximum egy százalék nátrium-klorid jelenlétét viseli el és 15-37°C közötti hőmérsékleten nő.
A törzs tenyészete nem képes lebontani a hipoxantint,nem -termel melanoid pigmenteket 55 és változóan reagál a fölözött tejjel. Rezisztens kloromicetinre, linkomicinre, nalidicinsavra, rifampinra és szulfametaxazol-trimetoprimra, de érzékeny bacitracinra,cefaIotinra, eritromicinre, gentamicinre, neomi- θθ cinre, novobiocinra, penicillin G-re, polimixin B-re, streptopiicinre, szulfadiazinra, tetracíklinre és vankomicinre.
Fapmeghatározás
Tenyésztési, morfológiai fiziológiai jellemzőket használunk, hogy hasonló fajokat vá- 65 lasszunk ki, az irodalomban közölt leírások alapján [Buchanan és mtsai, idézett mü;Kurylowicz és mtsai, idézett mű; Eberhard Kuster „Simple Working Key tor the Classification and Identification of Named Toxa Included in the International Streptomyces Project”. Int.J. Syst.Bacteriol. 22(3):139-148 (1972); Hideo Nonomura, „Key fór Classification and Identification of 458 Species of the Streptomyces Included in ISP,“ J.Ferment. Technoi. 52(2) :78-92 (1974); I.M.Sz'abo.et ak, „A Díagnostic Key fór the Identification of „Species of Streplomyces and Streptoverticillium Included in the Internacional Streptomyces Project, Acta Botanica Academiae Scientiarium Hungaricae 21 (3-4), 387-418 (1975) ;and
S.A.Waksmen, „The Actinomycetes Vol. 117 The William and Wilkins Co., 1961, Baltimore]
A jelen találmányban szereplő törzshöz nagyon hasonló, következő hét Streptomyces fajt használjuk szimultán laboratóriumi összehasonlításokban.
Streptomyces almguisti0 ” chrestornyceticus1’ ” longisporoflavusc ” niveusJ ” pseudogriseolus* ” rangoon ” spheroides NRRL 2449c “E.B.Shirling and D.Gottlieb, „Cooperative Description of Type Cultures of St'reptomyces“, Int.J. Syst. Bacteriol. 19(4) :375390 (1965) * ^E.B.Shirling and D.Gottlieb , ibid. 22(4):265-394 (1972)
Έ.Β. Shirling and Gottlieb, ibid 18(4):279-399 (1968) dE.B. Shirling and Gottlieb, ibid 18(2):69-189 (1968).
Az irodalomban leírt törzsek a sárga (Y) vagy fehér (W) szín sorozatba tartoznak, spirális (S) spóratartó morfológiával, sima (sm) a spóra-felszín morfológiájuk, nem termelnek melanoid színanyagokat,valamint a szénforrás-hasznosítási képük és tenyésztési jellemzőik hasonlóak az NRRL 15600 törzs megfelelő tulajdonságaihoz. A vizsgálat végkövetkeztetéseit a következő leírások támasztják alá:
1. Streptomyces almguisti és Streptomyces rangoon:
Majdnem az összes összehasonlító vizsgálatban azonos eredményt adott a két törzs.A tenyészetek jellemzői megkülönböztethetetlenek.A hasonlósági koefficiens a Streptomyces almguisti és Streptomyces rangoon között 95. Nem kétséges,hogy ezek a tenyészetek azonos törzsek.Ezt a következtetést az a tény támasztja alá,hogy az ATCC törzs-katalógusban mindegyik Streptomyces albus törzsként szerepel.Ügy tűnik,tehát,hogy az almguisti és rangoon -értéktelen faj-nevek,és meg kellene szüntetni őket. Az NRRL 15600 törzs mind a tenyészet jellemzőiben,mind morfológiailag és fiziológiailag különbözik ezektől a Streptomyces albus törzsektől. A tenyészet jellemzőit tekintve, az NRRL 15600 törzs inkább a sárga sorozatba tartozik, míg a Streptomyces albus a fehér sorozatba tartozik. Morfológunlag nagyon különböznek a tenyészetek, a Streptomyces albus-nek szoros, gömböt képező kanyarulatai vannak, míg az NRRL 15600 törzsnek öt vagy több kanyarulatos, hosszú, nyílt spiráljai vannak. A Streptomyces albus törzsek antibiotikum érzékenysége, szénforrás hasznosítása, hipoxantin- és xantin-bontó képessége, nátrium-klorid tűrőképessége, nitrát redukciója, keményítő hidrolizáló képessége, a növekedés hőmérséklet tartománya és a sovány-tej reakciója mind eltér az NRRL 15600 törzs megfelelő jellemzőitől.
2. Streptomyces chrestornyceticus: Az NRRL 15600 törzs és e törzs tenyésztési és fiziológiai jellemzői között levő eltérések elegendőek ahhoz, hogy megállapítsuk, különböző fajokhoz tartoznak. Nagy eltérések figyelhetők meg az antibiotikum-érzékenységben és szénforrás-hasznosításában. A különböző anyagok lebontásának képessége, a nátrium-klorid tűrőképesség, a növekedésre mégfelelő hőmérséklet-tartomány és a sovány-tej reakció is különböző. Jóllehet a Streptomyces chrestomyceticus spóratartói is spirál alakúak, kevesebb kanyarulat van bennük, mint az NRRL 15600-éban.
3. Streptomyces longisporoflavus:
Ez a törzs a tenyésztési jellemzőkben különbözik az NRRL 15600-tól. A törzstenyészete nagyon gyengén képez légmicéliumot: ha képez az nagyon különbözik az NRRL 15600 micéliumától.Ez a törzs oldódó színanyagot termel,míg az NRRL 15600 nem termel.Ha jelen vannak spóratartók,azok morfológiája hasonló az NRRL 15600 spóratartóiéhoz.Czapek agaron a Streptomyces longisporoflavus coremia-t képez.A két törzs jelentősen különbözik fiziológiai jellemzőkben. A megfigyelt különbözőségek között van az antibiotikum-érzékenység, szénforrás-hasznosítás, nátrium-klorid tűrőképesség, a növekedés hőmérséklete, a hipoxantin- és xantin-bontó képesség és a sovány-tej reakció. A Streptomyces longisporoflavus és az NRRL 15600 törzsek közölt kicsi a hasonfóság ahhoz, hogy azonos fajnak tekintsük őket.
4. Streptomyces pseudogriseolus:
Ez a törzs laboratóriumi körülmények között lényegesen eltér az NRRL 15600-tól.A törzsek antibiotikum érzékenysége és szénforrás-hasznosítása eltérő. A Streptomyces pseudogriseolus bontja a tizozínt, hipoxantint és xantint, az NRRL 15600 nem. A (Streptomyces pseudogriseolus nem red'ukálja a nitrát-vegyületeket.A Streptomyces pseudogriseolus eltűr kilenc százalék nátrium-kloridot, nő 1545°C közötti hőmérsékleten, az NRRL 15600 csak egy százalék nátrium-kloridot bír ki, és 15-37°C közötti hőmérsékleten nő. A Streptomyces pseudogriseolus bőséges, a szürkefGY) szín-sorozatba tartozó légmicéliumot képez. A Streptomyces pseudogriseolus spórák felszíni mintázata tüskés. Számos táptalajon jellegzetes hátoldali pigment figyelhető meg.Ezek a tenyésztési és fiziológiai eltérések különböztetik meg ezt a törzset az NRRL 15600-tól.
5. Streptomyces niveus és Streptomyces spheroides NRRL 2449 C
Ezek a törzsek majdnem az összes összehasonlító vizsgálatokban azonos eredményeket adnak. A 117 jellemzőből számított hasonlósági koefficiens 95.7.Ráadásul mindegyik termel novobiocint.Ezek után nem kétséges,hogy ezek a törzsek azonosak.
Az NRRL 15600 törzs tenyésztési jellemzők alapján morfológiailag és fiziológiailag hasonlít a Streptomyces spheroides NRRL 2449 re. Mindkettő a sárga színsorozatba tartozik.
-8193060
Ez könnyen megfigyelhető a No.5 és No.7 ISP táptalajon. Mindkettő fehér légmicéliumot képez Emerson agaron. A lemezek hátoldala sárgás-barna. Morfológiailag azonosak. A spóratartók öt vagy több kanyarulatos hosszú, nyí- g tott spirálok. Mindkettőnek sima, hosszúkás spórái vannak. Az antibiotikum-érzékenység, a hipoxantin és xantin lebontásának képessége a nátrium-klorid tűrőképesség, a nitrát-'redukáló képesség, és a növekedési hőmérséklet- -jq
-tartomány nem egyezik. A szénforrás-hasznosítás jóllehet nem azonos, jól egyezik. Az eszkulin-, kazein-bontás, keményítő-hidrolízis, zselatin-eífolyósítás,valamint tirozin lebontásának vagy melanoid színanyag termelésére való képtelenség azonos a két törzsben. Az NRRL 15600 és Streptomyces spheroides NRRL 2449 közötti hasonlósági koefficiens 78. Ezeket a hasonlóságokat és különbségeket a III és IV. táblázatban foglaljuk össze:
III. Táblázat
Az NRRL 15600 és a Streptomyces spheroides NRRL 2449 „ . összehasonlítása ,
Hasonlóságok _____________különbségek__
Antibiotikum érzékenység
Szénforrás hasznosítás
Kataláz pozitív
Tenyésztési jellemzők
Kazein lebontás
Eszkulin lebontás
Tirozin lebontás
Hipoxantin lebontás
Xantin lebontás
Nátrium-klorid tűrőképesség
Nitrát redukció
Növekedési hőmérséklet -tartomány
Zselatin elfolyósítás
Melanoid színanyagok hiánya A spóratartók morfológiája (s) Spóralánc-hosszúság
Spóra-alak
Spórák felületi mintázata (smi) Keményítő hidrolízis
TV. Táblázat
Az NRRL 15600 és az S,spheroides NRRL 2449 jellemzőinek összehasonlítása
Jellemzők NRRL 15600 S.spheroides NRRL 2449
Légmicelium-spóratömeg színe (Y)
Szénforrás hasznosítás:
D-arabinóz + melibióz szacharóz (Y)
-9193060
| Jellemzők | IV. Táblázat NRRL 15600 S | (folytatás) .spheroides NRRL |
| Katalóz termelés | + | + |
| Kazein lebontás | + | + |
| Eszkulin | + | + |
| Hipoxantin | - | + |
| Tirozin | - | - |
| Xantin | - | + |
| Jellegzetes színanyagok | - | - |
| Zselatin elfolyósítás | + | + |
| Növekedési jellemzők | + | + |
| Melanoid pigmentáció | ||
| ISP No. 1 . | ± | - |
| No. 6. | - | - |
| No. 7. | - | - |
| Morfológia | (s) | (S) |
| NaCl tűrőképesség (%) | 1 | 7 |
| Nitrát redukció | + | - |
| Hátoldali szín | yBr | yBr |
| Sovány tej | változó | + |
| Oldódó színanyagok | - | - |
| Spóralánc hossza | 10 | 10 |
| Spóra forma | hossúkás | hossúkás |
| Spóra-felület mintázata | (Sm) | (Sm) |
| Keményítő hidrolízis | + | + |
| Hőmérséklet-tartomány °C | 15-37 | 4-34 |
Ezek az összehasonlítások azt mutatják, hogy az NRRL 15600, jóllehet nem azonos, de θθ nagyon hasonlít a Streptomyces spheroides NRRL 2449:hez. A különbségek nem elegen· dők ahhoz, hogy az NRRL 15600-at külön fajként írjuk le. Ennélfogva az NRRL 15600-at Streptomyces spheroides Walleck, Harris, Reagan,Ruger és Woodruff 1956,ATCC 23965, 65
NRRL 2449 egy alternatív törzseként osztályozzuk. A Streptomyces spheroides-t elismerik a Baktérium-nevek jóváhagyott listáján LV.B.D.Skerman et al, “Approved Lists of Bacterial Names, Int.J.Syst. Bacteriol., 30 (1), 225-420 (1980)], tehát egy igazoltan publikált faj.
-10193060
Csakúgy, mint más szervezeteknél,a Streptomyces spheroides NRRL 15600 jellemzői is változhatnak.Például különböző ismert mutagénekkel, úgymint ultra-ibolya-sugarak, röntgen-sugarak,nagyfrekvenciájú hullámok, radioaktív sugarak és kémiai szerek, az NRRL 15600 törzsből mesterséges variánsok és mutánsok nyerhetők.Az összes, az S-l faktor termelőképességet megtartott Streptomyces spheroides NRRL 15600 természetes és mesterséges variánsok és mutánsok felhasználhatók a jelen találmányban.
Az S-l faktor, kloramfenikol,, ciklohexamid.aktifenil és szepticidin előállítása során az említett anyagokat termelő Streptomyces spheroides NRRL 15600 törzset, vagy ennek variánsát vagy mutánsát süllyesztett levegőztetett körülmények, megfelelő táptalajban addig tenyésztjük, míg elegendő antibiotikus aktivitás termelődik. A Streptomyces spheroides NRRL 15600 tenyésztésére használt táptalaj számos táptalaj közül választható. A termelés gazdaságossága, az optimális kitermelés és a termék izolálásának egyszerűsége szempontjából azonban bizonyos tenyész-táptalajokát előnyben részesítünk.így például a nagy-térfogatú fermentációk esetében az előnyös szénforrások közé tartoznak a szénhidrátok,például a glicerin és a burgonya-dextrin. Az előnyös nitrogén-források közé tartozik az enzimesen emésztett kazein,gyapotmagliszt, szójaliszt,protein-peptonok és hasonlók.A tenyésztő táptalajban használható szervetlen sók közé tartoznak a vas, kálium, nátrium, magnézium, kalcium, ammónium, klorid, karbonát, szulfát és nitrát ionokat szolgáltató, oldódó sók.
Az organizmus növekedéséhez és fejlődéséhez szükséges nyomelemeket is be kell juttatnunk a tenyésztő táptalajba.Ezek a nyomelemek legtöbbször az organizmus növekedési igényeit kielégítő mennyiségben fordulnak elő szennyezésként a táptalaj egyéb alkotó-elemeiben. Ha a habzás problémát okoz, kívánatos lehet kis mennyiségű (azaz 0,2 mi/1) habzásgátló anyag, úgymint polipropilén glikol, (mólsúly körülbelül 2000) hozzáadása a nagy-térfogatú fermentációs közeghez.
Jelentős mennyiségű S-l faktor, kloramfenikol, cikloheximid, aktifenol és szeptacidin előállítására előnyösen a süllyesztett-levegőztetett tank-fermentációt alkalmazzuk. Ezekből az anyagokból kis mennyiségeket rázott-lombikos tenyészettel állíthatunk elő.Mivel az antibiotikum-termelésben megfigyelt időbeli késést általában azzal hozzák kapcsolatba,hogy a nagy fermentorokat az organizmus spóraformájával oltják, ezért előnyös a vegetatív oltóanyag használata. A vegetatív inokulum előállításánál kis térfogatú táptalajt oltunk az organizmus spórás formájával vagy micéliumtörmelékével, így friss, aktívan növő tenyészetet kapunk az organizmusból.A vegetatív, ol2 ‘óanyagot ezután nagyobb fermentorba viszszük át.A vegetatív oltóanyag készítéséhez használt táptalaj lehet azonos,de lehet a nagyobb fermentorban használttól eltérő is.
A Streptomyces spheroides NRRL 15600 törzset 15-37°C közötti hőmérsékleten tenyészthetjük.Az antibiotikum-termelésre optimális hőmérséklet 30°C körül van.
Amint az a süllyesztett levegőztetett tenyésztési eljárásoknál szokásos,steril levegőt buborékoltatunk a tenyészeten keresztül.Megfelelő mennyiségű antibiotikum előállításához az oldott oxigén szintjét 30% körül vagy e fölött kell tartani a fermentorban (30°C-on és 105 Pa nyomáson).
A fermentáció során az antibiotikum-termelést úgy követhetjük, hogy a fermentléből vett mintákat ezekre az antibiotikumokra érzékeny organizmusokkal vizsgáljuk. A biológiai vizsgálatot kényelmesen automatizált turbidimetriás módszerrel végezhetjük. Az antibiotikum-termelést ezenkívül könnyen követhetjük HPLC-vel, UV detektálással.
A süllyesztett - levegőztetett fermentációs körülmények között való előállítást követően az S-l faktort a szakterületen ismert módszerekkel nyerhetjük ki a fermentléből. Az izolálási eljárásban a fermentlét általában először leszűrik, hogy a micéliumot eltávolítsák. A megszűrt fermentlevet ezután tovább lehet tisztítani a kívánt antibiotikum előállítása céljából.Különböző technikákat használhatunk a tisztítás során. A megszűrt fermentlé tisztításának egy előnyös technikája, ha a fermentlé pH-ját 2-re állítjuk, a fermentlevet megfelelő adszorbensen,például nagy porozitású makroretikuláris polimeren megkötjük, a faktort oldószerrel,például acetonitrillel leoldjuk az adszorbensről,az eluátumot besűrítjük,majd újra megfelelő oldószerrel, például etilacetáttal extraháljuk. A további tisztítás során alkalmazhatunk extrakciót, kromatográfiás és/vagy kicsapásos technikát.
Egy másik módszer szerint a fermentlében lévő szilárd anyagok, ideértve a táptalaj komponenseit és a micéliumot, használhatók az
S-l faktor forrásaként extrakció vagy elválasztás nélkül, de előnyösen a víz eltávolítása után. Például az S-l faktor előállítása után az egész fermentlevet, vagy a szűrt fermentlevet liotilizálással vagy dob-szárítóval szárítjuk, illetve azeotróp desztillációval és szárítással. A szárított teljes fermentlevet vagy szárított fc rmentlé szürletet ezután közvetlenül a takarrrány-premixbe keverhetjük.
Az A39079 S-l faktor-széles spektrumban gátolja patogén baktériumok, főleg Gram-pozitív baktériumok növekedését.Az V. táblázatban az S-l faktor bizonyos mikroorganizmusok növekedését gátló, agar-hígítással meghatározott minimális gátló koncentrációit foglaljuk. A táblázatban az S-l faktor aktivitását a rifampinéval hasonlítjuk össze.
-11193060
2
| V. Táblázat | MIC (pg/ml) Faktor S-1 | |
| Az S-1 faktor in vitro Organizmus | aktivitása Rifampin | |
| Staphylococcus aureus NRRL B313 | 0.03 | 0.015 |
| Staphylococcus aureus V41 | 0,015 | 0,015 |
| Staphylococcus aureus X400 | 0.06 | 0.06 |
| Staphylococcus aureus S13E | 0.03 | 0.015 |
| Staphylococcus epidermidis EPI1 | 0.06 | 0.008 |
| Staphylococcus epidermidis 222 | 0.06 | 0.008 |
| Streptococcus pyogenes C203 | 0.25 | a |
| Streptococcus pneumoniae Park 1 | 0.125 | 0.008 |
| Streptococcus faecium ATCC 9790 | 2 | 1 |
| Streptococcus sp. group Γ) 9960 ' | 2 | 1 |
| Haemophilus influenzáé C.L. | - | 0.25 |
| Haemophilus influenzáé 76 | - | 0.125 |
| Escherichia coli N10 | 16 | 8 |
| Escherichia coli EC14 | '6 | 16 |
| Escherichia coli TEM | 128 | 128 |
| Klebsiella pneumoniae X26 | 16 | 32 |
| Klebsiella pneumoniae KAE | 32 | 16 |
| X68 | 16 | 16 |
| Enterobacter aerogenes | 32 | 16 |
C32
| Enterobacter aerogenes EB17 | 32 | 32 | |
| Tf | cloacae EB5 | 32 | 32 |
| TT | 265A | 32 | 32 |
-12193060
V. táblázat (folytatás) MIC(ug/ml)
Rifampin Faktor S-1
Organizmus
| Salmonella typhi X514 | 16 | 32 | |
| 11 | 1335 | 16 | 32 |
| Pseudomonas aeruginosa X528 | 16 | 16 | |
| II | X239 | 16 | 16 |
| 11 | Ps18 | 128 | 128 |
| 11 | Ps72 | - | β |
| Serratia marcescens X99 | 32. | 32 | |
| 11 | SE3 | 64 | 16 |
| Shigella sonnei N9 | 16 | 8 | |
| Proteus | morganii PR15 | 32 | 8 |
| 11 | inconstans PR33 | 16 | 8 |
| 11 | rettgeri C24 | 8 | 2 |
| citrobacter freundii CF1/ | 16 | 16 | |
| Acinetobacter calcoateticus | |||
| ' AC12 | - | 2 | |
| 3nincs vizsgálva. |
Az V. táblázat adatai azt mutatják, hogy az
S-1 faktor igen sokféle organizmussal szemben mutat antibiotikus aktivitást, fgy a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek 45 alkalmasak melegvérű állatok mikrobiológiai fertőzésének kezelésére, azáltal, hogy az említett állatnak az A39079 S-1 faktor, kemoterápiailag hatásos mennyiségét adjuk be.
Az S-1 faktor másik fontos tulajdonsága, 50 hogy javítja a takarmány-hasznosítás hatásfokát kérődzőknél. Fejlett kérődző funkcióval rendelkező állatok a takarmány hasznosítása során először lebontják a szénhidrátot (a fő táplálék-komponenst) piruváttá.A piruvát to- 55 vább metabolizálódik illékony zsírsav (VFA) származékokká, úgymint acetáttá, propionnáttá.,. és butiráttá. A szakterületen jártas szakember tudja, hogy kérődzőkben a szénhidrát hasznosítás hatékonysága megnövelhető olyan kezeléssel,mely az állat bendő-flóráját acetát vagy butirát vegyületek képzése helyett propionát vegyületek előállítására készteti. A takarmány-hasznosítás hatékonysága növelhető a metán-termelés gátlásával is. A bendőben keletkezett metángáz általában a böfögéssel elvész. Ezt az energia-veszteséget a metán-képződés gátlásával minimalizálni lehet.
A takarmány-hasznosítás hatékonyságát a bendő propionát-vegyület termelésének illetve koncentrációjának megfigyelésével lehet követni Beck és munkatársai módszerével (lásd 4 333 923 számú Amerikai Egyesült Államek-beli szabadalmi leírás, főleg a 6.-7. oszlop) A VI. táblázat az illékony zsírsav (VFA) koncentrációk arányát mutatja az S-1 faktorral lezelt lombikokat a kontroll lombikokhoz hasonlítva.
-13193060
VI, Táblázat
Kérődzők takarmány-hasznosítása
Az' S-Ύ f aktor * akttv'ftas',·'
A kezelt és kontroll aránya mMól/Nap
| Dózis (ppm) | Ecetsav | propionsav | vaj s av | teli es VFA | metán |
| 0.5 | 1.22 | 1.52 | 0.67 | 1.18 | 1 .03 |
| 1 | 1.27 | 1.75 | 0.59 | 1.22 | 0.98 |
| 2 | 1.15 | 1.63 | 0.46 | 1 .06 | 1 .09 |
| 5 | 1.16 | 1.39 | 0.66 | 1 .07 | 0.50 |
| A kezelt és a | kontroll | aránya |
Mólszázalék
| Dózis (ppm) | ecetsav | propionsav | vaj s av |
| 0.5 | 1.04 | 1.29 | 0.57 |
| 1 | 1.05 | 1.49 | 0.48 |
| 2 | 1.08 | 1.55 | 0.43 |
| 5 | 1 .07 | 1.30 | 0.62 |
Ha a fejlett bendő funkcióval rendelkező kérődző állatoknak az (1) általános képletű vegyületből szájon át propionát-növelő vagy metán-gátló mennyiséget adunk be, a propionát-termelés növekedését ill. a metán-termelés csökkentését lehet elérni.
Az erre a célra beadott vegyület mennyisége általában 0,10 mg/testsúly-kilogramm/nap és 4,0 mg/kg/nap között van. Az előnyös tartomány 0,25 mg/kg/nap és 2,75 mg/kg/nap között van.
Az S-l faktor még másik fontos tulajdonsá ga,hogy képes egy-gyomrú állatoknál a takarmány hasznosító hatékonyságát megnövelni. Kereskedelmileg fontos egy-gyomrú állat a csirke és a sertés. Ezenkívül a fiatal kérődzők, különösen ha még szopósak, egy-gyomrú állatokként léteznek. Az egy-gyomrú állatban a baktériumok és a gazdaállat verseng a tápanyagokért az emésztési folyamatban. Azok az anyagok,melyek a baktériumokat a kevésbé hatásos anyagok felhasználására szorítják, ezáltal a hatásosabb tápanyagok, például a glükóz megmarad a gazda-állatoknak,növelik a gazda-állat takarmány-hasznosítási hatékonyságát.Az S-l faktornak van ilyen hatása,azaz megakadályozza,hogy az egy-gyomrú emésztőrendszerben normális körülmények között je lenlévő baktériumok felhasználják a glükózt.
így a találmány szerinti eljárással előállított vegyület alkalmas egy-gyomrú állatokban 14 a glükóz megóvására.Az ebből a célból adagolt hatóanyag mennyisége 0,1 mg vegyület (testsúlykilogramm/nap és 15,0 mg/kg/nap között változik.Az előnyös takarmány 0,6 mg/ /kg/nap és 6,0 mg/kg/nap között változik. Áz állattenyésztésben jártas szakemberek számára nyilvánvaló,hogy az ezekre a célokra adagolt hatóanyag mennyisége változik, függően az állat állapotától, korától, a kapott
45 tápláléktól, és attól,hogy milyen célra tartják az állatokat.
Kérődzőknél az (I) általános képletű vegyületet úgy kell adagolni, hogy a bendőben maradjon. E cél elérésének módszere, különö50 sen szopós állatoknál, ha a vegyületet nyújtott hatású készítmény formájában adagoljuk. Ezek a készítmények lehetnek tabletták, optimálisan úgy elkészítve, hogy a vegyület oldódása hosszabb időre elnyúljon. Olyan kapszu55 Iák állíthatók elő, melyek hosszú ideig, 100 napig vagy tovább bocsátják ki állandóan a hatóanyagot.Számos polimer vegyületet használnak ilyen kapszulák előállítására;különösen hatékony polimer a poli-tejsav és a poli-glikolqq sav kopolimerje.Szükséges,hogy a kapszula bendőben maradjon,ne kerüljön ki az emésztőrendszerből. Ezt úgy érhetjük el, hogy nagy sűrűségűre alakítjuk ki a kapszulát, például úgy, hogy fémrészecskéket keverünk a készítménybe, vagy a bendőben kinyíló szárnyakkal 65 látjuk el és túl naggyá tesszük ahhoz,hogy az
-14193060 állati százrétfi gyomrának nyílásán átjusson. Ezek a kapszulák körülbelül 0,1 mg vegyületet bocsáthatnak ki naponta egy testsúly-kilogrammra számítva egész 4 mg/kg/nap értékig,előnyösen 0,25—2,75 mg/kg/nap mennyiséget.
A vegyületek adagolásának másik előnyös formája az ásványi kocka, különösen szopós állatoknál. Az általánosan használt kockák erősen összepréselt,fiziológiailag szükséges sókból és tápanyagokból állnak, tartalmaznak foszfátot, karbonátot,halogenideket,kalcium-sókat,nyomelemeket,például cinket, kobaltot,mangánt és hasonlókat,vitaminokat,szteroidokat,valamint a préselés elősegítésére csúsztató- és kötő-anyagokat. A vegyületet a kockákhoz 200-500 mg/kg (0,020,05%) koncentrációban adjuk hozzá,előnyösen 400 mg/kg (0,04%) és 1500 mg/kg (0,15%) közötti koncentrációban.
A hatóanyagokat, állatoknak való beadás céljaira, fehérje-kockákba is keverhetjük. Ezek a kockák ismertek, melasz és karbamid keverékéből állnak, adott esetben más fehérje-forrásokat is adhatunk hozzá, és ezzel kérődző állatokat etetünk. A jelen találmány szerinti hatóanyagot tartalmazó fehérje-kockát 200 mg/kg/0,02%/és 7.000 mg/kg (0,7%) hatóanyagot, előnyösen 400 mg/kg (0,04%) 3.000 mg/kg (0,3%) hatóanyagot tartalmaznak.
A találmány szerinti hatóanyagokat szájon át is adagolhatjuk különböző gyógyászati készítmény, például tabletta, kapszula és hasonlók formájában.Ezek a készítmények azonban drágábbak és adagolásuk kényelmetlenebb.
Legelőnyösebb, ha a jelen találmány szerinti hatóanyagokat az állatok táplálékának adalékanyagként adjuk be.
Az állati-táp készítményeket általában lépcsőzetesen készítik. A vegyületet először semleges adalékanyagokkal keverve készítik a táp-premixet, és a vegyületet ebben a formában szállítják az előállítótól a helyi takarmánykeverő üzemekig. A premixek lehetnek szilárd vagy folyékony halmazállapotnak és a hatóanyag koncentrációja 1% és 90% között lehet bennük. A táp-premix semleges adalékanyagai nem lényegesek, lehetnek bármely, szokásosan használt, fiziológiálisan elfogadható adalékanyagok. A folyékony hordozók közé tartoznak például a glikolok, úgymint a különböző molekulasúlyú polietilén-glikolok és a propilén-glikol, semleges olajok, ideértve a növényi olajokat és tisztított ásványi olajat, valamint a fiziológiálisan elfogadható alkoholok, például az etanol. A szilárd premix-hordozók közé tartozik például a vermikulit, diatómaföld, a fiziológiásán elfogadható anyagok, például az attapulgit és montmorrillonit, valamint a granulált vagy porított táp-komponensek, példáúl a darált kukorica, szójaíiszt, lucernaliszt, rizskorpa, darált kukorica-csutka, búza vagy zabdara és egyéb, a mag-feldolgozásbói származó hulladék. A szilárd táp-premixeknek ezeket az adalékait gyakran granulálják,tablettázzák vagy másképpen kezelik,például pormentesítő olajokkal, ezzel biztosítják, hogy a táp-premix ne legyen poros és homogén maradjon.
A következő példákban tipikus táp-premix készítményeket mutatunk be.
I.
Adalékanyag Százalék őrölt zab 94
Propilénglikol 2
Lignin 3 (I) általános képletíi vegyület 1
II.
Sárga kukorica 24
Őrolt kukorica-csutka 25 Ásványolaj 1 (I) általános képletíi vegyület 50
Az állati tápok előállításának második szakasza a táp-kiegészítő vagy sűrítmény. Ezek a kiegészítők olyan készítmények, melyékben a hatóanyag tápanyagokkal, példáúl ásványi anyagokkal, szervetlen sókkal, .nyomelemekkel és vitaminokkal van elkeverve. A kiegészítőket gyakran úgy keverik össze, hogy a táp-premixet más alkotó-elemekkel hígítják. A kiegészítőt használhatjuk az (I) általános kcple tű vegyületet tartalmazó teljes kevert tápkészítmény előállításában, vagy egyszerűen ráönthetjük a táplálék-vályúkban vagy táplálék-tartályokban lévő, hatóanyagot nem tartalmazó tápra. A kiegészítőben széles határok között változik a hatóanyagok koncentrációja, az egyes állatoknál megetetendő kiegészítő mennyiségétől függően. A komplett kevert tápokban a koncentráció általában 0,0005% és 0,01% között van,előnyösen 0,002% és 0,0075% között.A táp-vályúkban vagy táptartályokban lévő, hatóanyagot nem tartalmazó tápra öntött kiegészítőben a koncentráció 0,001% és 0,5% között van, előnyösen 0,03% és 0,3% között.Néhány a találmány szerinti táp-kiegészítő készítmény összetétele a következő:
I
Adalékanyag Százalék őrölt kukorica-csutka 38,570
Szójaliszt 25,0
-15I
I.
Adalékanyag Százalék
| Kukoricadara | 20,0 |
| Zabdara | 10,0 |
| Melasz | 2,5 |
| Só | 0,4 |
| Vitamin premix | 1,1 |
| Állati faggyú | 1,5 |
| (I) általános képletű | |
| vegyület | 0,93 |
| II. | |
| Szójaliszt | 66,897 |
| Cirok | 25,5 |
| Dikalcium-főszfát | 2,1 |
| Mészkő | 1,2 |
| Só | 1,6 |
| Melasz | 2,1 |
| Nyomelemek és vitamin | |
| premix | 0,6 |
| (I) általános képletű | |
| vegyület | 0,003 |
Az állattenyésztésben jártas szakemberek számára érthetőek az állati tápok szokásos komponensei.Ezek a tápok megszokott módon az alapot adó magvakból állnak és vitaminokkal,ásványi anyagokkal, szervetlen sókkal és más, állatok helyes táplálását biztosító fontos tápanyagokkal vannak kiegészítve. A tápnak körülbelül 10-110 ppm (vagy 20-100g/tonna) hatóanyagot kell tartalmaznia, előnyösen 25-70 ppm (vagy 30-60 g/tonna) közötti menynyiséget. A következőkben táp-összetételekre mutatunk be példákat.
I.
Adalékanyag Mennyiség
Vágott lucerna 54,88%
Cirokmag 36,20%
| ídalékanyag | Mennyiség |
| Szój aliszt | 4,10% |
| Karbamid/mag keverék 70% fehérje | 3,60% |
| Dikalcium-főszfát | 0,90% |
| Nyomelem-ásványi anyagok 0,23% | |
| Vitamin-kiegészítő | 0,09% |
| (I) általános képletű vegyület | 25 ppm |
| II. | |
| őrölt cirok | 60,0% |
| Lucernaliszt | 15,0% |
| Gyapotmag-korpa | 15,0% |
| Gyapotmag-liszt | 8,5% |
| Só | 1,0% |
| Őrölt mészkő | 0,5% |
| (I) általános képletű vegyület | 50 ppm |
Az A39079 S-l faktor antibiotikum-ként való alkalmazása esetén az adagolt aktív antibiotikum mennyisége függ a kezelt vagy megelőzendő betegség súllyosságától, az éppen folyó kezeléstől és más az ilyen kezelésekhez általában kapcsolódó faktoroktól. A hatóanyagot normális körülmények között 0,550 mg/testsúlykilogramm, előnyösen 120 mg/kg dózisban adjuk be. Ezeket a menynyiségeket egyszer vagy kétszer adhatjuk be naponta, illetve gyakrabban, az adott betegségtől, vagy a kezelt alanytól függően.Egy átlagos felnőtt ember tipikus napi adagja 200600 mg között van.
A jelen találmány szerinti vegyületeket tartalmazó készítmények 0,1-95 tömegszázalékban tartalmazzák a találmány szerinti aktív antibiotikumot, gyógyászatilag elfogadható hordozó-, hígító- vagy töltőanyaggal elkeverve.A jellemző készítmények 10-60 sülyszázalékban tartalmazzák az aktív adalékanyagot,előnyösen 20-50 százalékban.
A kényelmes adagolás céljaira a vegyületeket a szájon át beadandó készítményeknél általánosan használt számos hígító, töltő- és hordozóanyag bármelyikével elkeverhetjük és
-16193060 tablettáké,pirulákká, pasztillákká préselhetjük vagy zselatin-kapszulákba tölthetjük. Az általánosan használt tipikus hordozó-, hígító- és töltőanyag lehet a burgonya-keményítő, kukorica-keményítő, szacharóz, glükóz, mikrokristályos cellulóz, dikalcium-foszfát, alaginsav, akácia; a csúsztató-anyag lehet magnézium-sztearát, a kötőanyag lehet tragantmézga, vagy zselatin, az ízesítő-anyag lehet menta-olaj, meggy- vagy eper-aroma, gaulteria-olaj és hasonlók.
A hatóanyagot formulázhatjuk szirupként vagy elixirként, általános hígító-anyagokat, például zsír-olajat, metil- vagy propil-parabéneket,megfelelő festékeket és ízesítő-anyagokat használva. A hatóanyagokat formulázhatjuk száj-pecsétként, nyelv alatti tablettaként, vagy más megfelelő, az aktív adalékanyag hosszú időn át történő szabályozott kibocsátását biztosító módon.
A készítmények más módon történő előállítása ismert a szakemberek számára.
A találmány részletesebb bemutatására a következő példákat mutatjuk be:
1. Példa
A, Az S-1 faktor előállítása .S spheroides rázott-lombikos fermentációval
A Streptomyces spheroides NRRL 15600 liofilizált sejtjeit 1-2 ml steril vízben diszpergáljuk.Ezt a szuszpenziót (<0,1 ml) használjuk a következő összetételű ferde-agar oltására.
Adalék Mennyiség (%)
Burgonya-dextrin 1,0
Kazein-hidrolízátum 0,2
Élesztő-kivonat 0,1
Húskivonat 0,1
CoCl^-óH^O 0,001
Deionizált víz 1-1-re pH sterilízés előtt 6,2, nátrium-hidroxiddal 7,0-ra állítjuk, sterilezés után a pH = 6.9
A beoltott ferde-agarokat 30°C-on inkubáljuk körülbelül 7 napig. Az érett ferde-tenyészetekről steril pipettával vagy kaccsal eltávolítjuk a spórákat. A spóráknak körülbelül egy-negyed részével 50 ml vegetatív táptalajt oltunk, melynek összetétele a következő: Adalék Mennyiség (%)
Glükóz 1,5
| Adalékanyag | Mennyiség |
| Burgonya-dextrin | 2,0 |
| Szójadara | 1,5 |
| Élesztő-kivonat | 0,1 |
| Kukorica-lekvár | 1,0 |
| CaC03 | 0,2 |
| Csapvíz | 1 1-re |
| pH sterilízés előtt 5,6, nátrium-hidroxiddal 6,5-re állítjuk; pH sterilezés után 6.8. | |
| A beoltott vegetatív táptalajt 250 ml-es széles-szájú Erlenmeyer-lombikban inkubáljuk körülbelül 96 órán át 5,08 cm kitérésű körkörös rázógépen, 250/perc fordulatszámmal. Ebből a vegetatív tenyészetből 0,4 ml-t használunk 50 ml termelő-táptalaj oltására, melynek összetétele a következő: | |
| Adalék | Mennyiség (%) |
| Glükóz | 2,5 |
| Kukorica-keményítő | 1,0 |
| Oldható-hús-peptona | 1,5 |
| Melasz | 2,0 |
| MgSO,· 7Hz0 | 0,05 |
| Ca C03 | 0,2 |
| Csapvíz | 100%-ra |
| aO.M.Peptone, Amber Laboratories, Iunean, Wis 53039,pH sterilezés előtt és után 6,2 (nincs állítva). A beoltott fermentációs táptalajt 250 ml-es szélesszájú Erlenmeyer-lombikban inkubáljuk 30°C-on 5-6 napig,250/perc fordulatszámú 5,08 cm kitérésű körkörös rázógépen. B. S-1 faktor előállítása S.spheroides tank- |
Nagyobb térfogatú oltóanyag előállítása céljából az A pontban leírt módon előállított vegetatív tenyészet 10 ml-ével oltunk 400 ml, a vegetatív táptalajjal azonos összetételű második vegetatív tenyésztő táptalajt. Ezt a második vegetatív tenyészetet 2 literes lombikban 30° C-on inkubáljuk 48 órán át, 5,08 cm <i17
-17193060 térésfi, 250/perc fordulatszámú körkörös rázógépen.
800 ml így előállított második-képcsős tenyészettel oltunk 100 liter, az A pontban ismertetett összetételű steril termelő-táptalajt.
A beoltott termelő táptalajt 165 literes tank-fermentorban 5-7 napon át inkubáljuk 30° C-on.A fermentációs közeget steril levegővel levegőztetjük úgy, hogy az oldott-oxigén szintje 30-60% között legyen, és szokásos keverővei 200/perc fordulatszámmal kevertetjük.
2. Példa
Az S-l faktor, kloramfenikol és cikloheximid kinyerése
100 liter az 1. példa B pontja szerint előállított fermentlevet szűrési segédanyaggal (Hyflo Supercel, Johns-Manville Corp) megszűrünk. A kapott 86 liter szfirlet pH-ját 5 normál sósavval 2,0-re állítjuk, majd kétszer 0,5 — 0,5 térfogat etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos kivonatot csökkentett nyomáson besűrítve 49 g olajos terméket kapunk.Ezt a maradékot metanolban oldjuk,majd 10 liter Diaion HP-20 oszlopra visszük (Mitsubishi Industries). Az oszlopot 500 ml vízzel mossuk, majd acetonitril:víz eleggyel eluáljuk (30 liter 3:7 arányú, majd 50 liter 3:2 arányú eleggyel), utána 20 liter acetonitrillel. Az eluálást 100 ml/perc sebességgel végezzük, 4 literes frakciókat gyűjtünk.A frakciók antibiotikus aktivitását vizsgáljuk Micrococcus luteus, Escherichia coli és Neurospora crassa mikroorganizmusokkal szemben.
A Neurospora crassa-ra ható cikloheximid a 3:7 frakciók elején eluálódik.Az Escherichia coli-ra ható kloramfenikol a késői 3:7 frakciókban eluálódik. A Micrococcus luteusra ható S-l faktor tartalmazó frakciókat egyesítjük, majd csökkentett nyomáson besűrítve
7,65 g olajos maradékot kapunk.
Ezt a maradékot 1,9 literes szilikagéloszlopon (grade 62, Matheson, Coleman és Bell) kromatografáljuk. Az oszlopot 2,5 liter 90:0,5 arányú kloroform :metanol:ammónium-hidr2 oxid eleggyel eluáljuk 20 ml/perc sebességgel. A frakciókat a színük'alapján (sárga és vörös) valamint a Micrococcus luteus-szal szembeni aktivitásuk alapján egyesítjük.A vörös színű sávból származó frakciókat csökkentett nyomáson besűrítve olajszerfi anyagot kapunk.Az olajat 100 ml tetrahidrofuránban oldjuk, majd a terméket 15 térfogat hexánhoz adva kicsapjuk. A csapadékot elválasztva 1,2 g S-l faktort kapunk.
Az S-l faktor további tisztítását 200 mg-os részletekben végezzük, metanolban oldva, majd 2,54 x 30 cm-es, Zorbax ODS (12μ) (E.I.duPont) töltetű oszlopon kromatogra15 táljuk. Az oszlopot 10 ml/perc sebességgel eluáljuk 400 ml 45% acetonitril-0,01% trifluor-ecetsav eleggyel, majd 400 ml, 0,01 % trifluor-ecetsavban készített 45-100%-os acetonitril gradienssel. A frakciókat UV ab szorpció (264 nm-en) és M.luteus-szal szembeni aktivitás alapján vizsgáljuk. A csak S-l faktort tartalmazó frakciókat egyesítjük, besűrítjük, majd liofilezzük. Az S-l faktoron kívül más anyagokat is tartalmazó frakciókat besörít25 jük, majd preparatív HPLC oszlopon újra kromatografáljuk. Körülbelül 800 mg tisztított
S-l faktort kapunk 100 liter fermentléből,melynek fizikai állandóit a leírás bevezető része tartalmazza.
Claims (1)
- Eljárás az (I) általános képletű A39079S-l faktor redukált és oxidált alakjának elő35 állítására, ahol R és R’ jelentése egyaránt vagy hidroxi-csoport vagy oxo-csoport, azzal jellemezve, hogy a Streptomyces spheroides NRRL 15600 törzset, vagy annak A39079 S-l termelő variánsát vagy mutánsát asszimilál4Q ható szénforrást, nitrogénforrást és szervetlen sókat tartalmazó tenyésztő közegben,süllyesztett-levegőztetett fermentációs körülmények között tenyésztjük, a terméket izoláljuk, és kívánt esetben a keletkezett klóramfenikoltól, cikloheximidtől, aktifenoltól vagy szepta45 cidintől elválasztjuk az A39079 S-l antibiotikumot.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/552,549 US4560509A (en) | 1983-11-16 | 1983-11-16 | Antibiotic A39079 factor S-1 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT37817A HUT37817A (en) | 1986-02-28 |
| HU193060B true HU193060B (en) | 1987-08-28 |
Family
ID=24205814
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU844247A HU193060B (en) | 1983-11-16 | 1984-11-14 | Process for preparing a 39079 antibiotic s-1 factor |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4560509A (hu) |
| EP (1) | EP0142375A3 (hu) |
| JP (1) | JPS60172985A (hu) |
| KR (1) | KR870000248B1 (hu) |
| CA (1) | CA1220743A (hu) |
| DK (1) | DK536584A (hu) |
| GB (1) | GB2149793B (hu) |
| GR (1) | GR80902B (hu) |
| HU (1) | HU193060B (hu) |
| IL (1) | IL73479A0 (hu) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PE5591A1 (es) * | 1988-12-19 | 1991-02-15 | Lilly Co Eli | Un nuevo grupo de compuestos de macrolida |
| US5227295A (en) * | 1991-11-08 | 1993-07-13 | Dowelanco | Process for isolating A83543 and its components |
| US5591606A (en) * | 1992-11-06 | 1997-01-07 | Dowelanco | Process for the production of A83543 compounds with Saccharopolyspora spinosa |
| WO1994020518A1 (en) * | 1993-03-12 | 1994-09-15 | Dowelanco | New a83543 compounds and process for production thereof |
| US6001981A (en) * | 1996-06-13 | 1999-12-14 | Dow Agrosciences Llc | Synthetic modification of Spinosyn compounds |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1375654A (fr) * | 1959-08-10 | 1964-10-23 | Lepetit Spa | Procédé pour la préparation de nouveaux antibiotiques de la série de la rifamycine |
| US4447432A (en) * | 1981-11-17 | 1984-05-08 | Farmitalia Carlo Erba S.P.A. | Azino rifamycins |
-
1983
- 1983-11-16 US US06/552,549 patent/US4560509A/en not_active Expired - Fee Related
-
1984
- 1984-11-08 CA CA000467325A patent/CA1220743A/en not_active Expired
- 1984-11-09 IL IL73479A patent/IL73479A0/xx unknown
- 1984-11-09 GR GR80902A patent/GR80902B/el unknown
- 1984-11-09 KR KR1019840007009A patent/KR870000248B1/ko active IP Right Grant
- 1984-11-12 DK DK536584A patent/DK536584A/da not_active Application Discontinuation
- 1984-11-13 JP JP59239320A patent/JPS60172985A/ja active Pending
- 1984-11-14 HU HU844247A patent/HU193060B/hu unknown
- 1984-11-14 GB GB08428749A patent/GB2149793B/en not_active Expired
- 1984-11-14 EP EP84307897A patent/EP0142375A3/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK536584D0 (da) | 1984-11-12 |
| GB2149793A (en) | 1985-06-19 |
| KR870000248B1 (ko) | 1987-02-21 |
| CA1220743A (en) | 1987-04-21 |
| GR80902B (en) | 1985-03-11 |
| HUT37817A (en) | 1986-02-28 |
| GB8428749D0 (en) | 1984-12-27 |
| IL73479A0 (en) | 1985-02-28 |
| EP0142375A3 (en) | 1987-09-02 |
| US4560509A (en) | 1985-12-24 |
| KR850003732A (ko) | 1985-06-26 |
| EP0142375A2 (en) | 1985-05-22 |
| GB2149793B (en) | 1987-07-15 |
| JPS60172985A (ja) | 1985-09-06 |
| DK536584A (da) | 1985-05-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4582822A (en) | Antibiotic A80190, pharmaceutical compositions containing same and method of use | |
| JPH04261140A (ja) | 新規α−グルコシダーゼ阻害物質、プラジマイシンＱ | |
| US4548974A (en) | Antibiotics produced by Kibdelosporangium aridum shearer | |
| US4683201A (en) | Antibiotic A80190-producing Actinomadura oligospora and process | |
| HU193060B (en) | Process for preparing a 39079 antibiotic s-1 factor | |
| IE60394B1 (en) | Antibiotic A10255 complex and factors, process, microorganisms for its production | |
| AU605495B2 (en) | Process for the preparation of antibiotics 10381b | |
| US4870021A (en) | Pure culture of antibiotic A42125-producing strains of Nocardia aerocolonigenes | |
| AU625818B2 (en) | Polyether antibiotic | |
| US4824863A (en) | Antibiotic A80438 | |
| US4461723A (en) | Antibiotic A-4696 factor G | |
| US4110435A (en) | Antibiotic a-28086 factor d and process for production thereof | |
| US5043353A (en) | A80789 polyether antibiotic | |
| US5098834A (en) | Process for producing antibiotic A8210 which comprises cultivating Actinomadura Fibrosa sp nov. NRRL 18348, or an A82810-producing mutant thereof | |
| US5314875A (en) | Method for treating swine dysentery with the derivatives of the antibiotic A82810 | |
| US4672036A (en) | Pure cultures of Kibdelsporangium aridum Shearer gen. nov., sp. nov. ATCC 39323 and mutants thereof | |
| US5242814A (en) | Polyether antibiotic | |
| US4637981A (en) | Antibiotic A-4696 factor G | |
| US4615975A (en) | Purified culture of Actinomadura verrucaspora subspecies veractimyces | |
| US4876273A (en) | Antibotic A80577 and process for its production | |
| US5213797A (en) | A80407 antibiotics | |
| EP0209971A1 (en) | Polyether antibiotic and process for its production | |
| US5478735A (en) | Process for producing acidic polycyclic ether antibiotic having anticoccidial and growth promant activity with Actinomadura | |
| US4797280A (en) | Antibiotics produced by Kibdelosporangium aridum Shearer gen. nov., sp. nov. ATCC 39323 | |
| CS209848B2 (cs) | Způsob přípravy polyetberických antibiotik A-28086 |