HU191134B - Process for preparing heat stable alpha amylase - Google Patents

Process for preparing heat stable alpha amylase Download PDF

Info

Publication number
HU191134B
HU191134B HU179184A HU179184A HU191134B HU 191134 B HU191134 B HU 191134B HU 179184 A HU179184 A HU 179184A HU 179184 A HU179184 A HU 179184A HU 191134 B HU191134 B HU 191134B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
medium
enzyme
alpha
activity
amylase
Prior art date
Application number
HU179184A
Other languages
Hungarian (hu)
Other versions
HUT37649A (en
Inventor
Robert O Horwath
Original Assignee
Nabisco Brands Inc,Us
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nabisco Brands Inc,Us filed Critical Nabisco Brands Inc,Us
Priority to HU179184A priority Critical patent/HU191134B/en
Publication of HUT37649A publication Critical patent/HUT37649A/en
Publication of HU191134B publication Critical patent/HU191134B/en

Links

Landscapes

  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

A process for the preparation of thermostable alpha amylase which comprises cultivating B. licheniformis ATCC No. 39326 in a nutrient medium therefore to produce the enzyme product. - (5pp)

Description

A találmány tárgya eljárás hőstabíl alfa-amiláz enzim előállítására.The present invention relates to a process for the preparation of a thermostable alpha-amylase enzyme.

Az alfa-amílázok jól ismert enzimek, amelyeket a kereskedelemben kapható tisztítószerek előállítására, valamint a keményítőnek vízben oldható szénhidrátokká való átalakításához használnak, ezen enzimek különösen alkalmasak a keményítőnek kémiai vagy enzimatikus úton glükózzá, egy, a kereskedelemben jól értékesíthető termékké való átalakítására.Alpha-amylases are well-known enzymes used to make commercially available cleaning agents and to convert starch to water-soluble carbohydrates, and these enzymes are particularly suitable for the chemical or enzymatic conversion of starch to a commercially available product.

Az amiláz enzimeket korábban mikrobiológiai eljárásokkal állították elő, például Bacillus-fajhoz tartozó törzsek tenyésztése útján. Az 1 296 839. számú brit szabadalmi leírás ismerteti a hőstabil alfa-amiláz előállításának egy olyan módszerét, amelynek során e terméket a Bacillus licheniformis tenyésztése útján állítják elő. Az így kapott enzim höstabilitása sokkal nagyobb, mint a Bacillus subtilis törzsek tenyésztése útján nyert készítményé, de az említett brit szabadalmi leírásban megadott enzimaktivitás-értékek nem magasak, s ezért ez az eljárás a hőstabil amiláz enzim ipari előállítása szempontjából nem kielégítő.Amylase enzymes have previously been produced by microbiological methods, for example by culturing strains of Bacillus species. British Patent No. 1,296,839 discloses a process for the preparation of heat-stable alpha-amylase which comprises the production of Bacillus licheniformis. The thermal stability of the enzyme thus obtained is much higher than that obtained by culturing Bacillus subtilis strains, but the enzyme activity values given in the said British Patent are not high and therefore this process is unsatisfactory for the industrial production of the thermostable amylase enzyme.

Azt tapasztaltuk, hogy a Bacillus licheniformis egyik törzse különösen alkalmas a hőstabil alfaamiláz enzim ipari méretű termelésére, ugyanis ezzel a törzzsel az enzimet magas kitermeléssel lehet előállítani. A Bacillus licheniformis ezen törzsével általában legalább körülbelül tízszer nagyobb kitermelést lehet elérni, mint az említeti brit szabadalmi leírásban ismertetett módszerrel. E mikroorganizmus életképes tenyészetét letétbe helyeztük az Amerikai Típustenyészetek Gyűjteményében (American Type Culture Collection), ahol e mikroorganizmust az ATCC 39 326 jelzéssel jegyezték be.It has been found that one strain of Bacillus licheniformis is particularly suitable for the industrial production of the heat-stable alpha-amylase enzyme, since this strain can be produced in high yield. Generally, this strain of Bacillus licheniformis has a yield of at least about 10 times greater than that described in the above-mentioned British Patent. A viable culture of this microorganism was deposited in the American Type Culture Collection, which was registered under ATCC 39,326.

A jelen találmány szerinti eljárással előállított alfaamiláz enzim höstabilitása ugyanolyan nagyságrendű, mint az 1 296 839. számú brit szabadalmi leírásban ismertetett eljárással előállított hasonló készítményé, az enzim továbbá kalcium-ionokat megkötő szerek nagy koncentrációjának jelenlétében is viszonylag stabil. A jelen találmány szerinti eljárással előállított enzimnek megvan valamennyi, az említett brit szabadalmi leírásban megadott előnyös tulajdonsága, és ezenkívül magas kitermeléssel lehet előállítani.The thermal stability of the alpha-amylase enzyme produced by the process of the present invention is of the same order of magnitude as that of the similar preparation of the process described in British Patent No. 1,296,839, and is relatively stable even in the presence of high concentrations of calcium ion binding agents. The enzyme produced by the process of the present invention has all the advantageous properties set forth in the aforementioned British Patent and can also be produced in high yield.

A jelen találmány szerinti eljárás kívánatos eredményeit úgy érhetjük el, hogy a megadott Bacillus licheniformis törzsei egy alkalmas táptalajban, süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között addig tenyésztjük, míg a táptalajban jelentős mennyiségű enzim fel nem halmozódik. A fermentációt általában 2 — 6 napig, 25 °C és 55 °C közötti hőmérsékleten végezzük, és ennek során a szakemberek előtt jól ismert szokásos, felhasználható szén- és nitrogénforrásokat, valamint más lényeges tápanyagokat használunk. Alkalmas szénforrások például a szénhidrátok, laktóz, glükóz és a keményítő, továbbá a szénhidrátot tartalmazó anyagok, mint például a szója, kukoricaliszt, valamint.ezek keverékei. A szénhidrát mennyisége széles határok között változhat, például 1 vegyes % és 25 vegyes % között, és előnyösen 5—15 vegyes % között van.The desired results of the process of the present invention can be achieved by culturing the indicated strains of Bacillus licheniformis in a suitable medium under submerged aeration until a significant amount of enzyme is accumulated in the medium. The fermentation is usually carried out for 2 to 6 days at a temperature between 25 ° C and 55 ° C using conventional sources of carbon and nitrogen and other essential nutrients well known to those skilled in the art. Suitable sources of carbon include carbohydrates, lactose, glucose and starch, as well as carbohydrate-containing materials such as soy, corn meal, and mixtures thereof. The amount of carbohydrate can be varied within a wide range, for example between 1% and 25% by weight, and preferably between 5% and 15% by weight.

A találmány szerinti eljárás legelőnyösebb változata szerint szénforrásként laktózt használunk, ugyanis így kaphatjuk az enzimet a legmagasabb kitermeléssel. A laktóz mennyisége a táptalajban általában 1—20 vegyes% között, és előnyösen 5—15 vegyes% között van. Szénforrásként használhatjuk a laktózt önmagában, vagy pedig más szénforrásokkal együtt, például tejsavóval vagy szójaliszttel együtt, ahol ez utóbbi mennyisége általában nem nagyobb, mint 5 vegyes %.In the most preferred embodiment of the process according to the invention, lactose is used as the carbon source, since this provides the highest yield of the enzyme. The amount of lactose in the medium is generally from 1 to 20% by weight, and preferably from 5 to 15% by weight. As the carbon source, lactose may be used alone or in combination with other carbon sources, such as whey or soy flour, the latter being generally not more than 5% by weight.

Nitrogénforiásként használhatunk szerves vagy szervetlen vegyületeket, például oldható nitrátokat vagy ammónium-sókat. A szerves nitrogénforrásek például az élesztőkivonat, kukoricalekvár, földimegyoró-liszt.Nitrogen sources include organic or inorganic compounds such as soluble nitrates or ammonium salts. Organic nitrogen sources include, for example, yeast extract, corn jam, earthmeal flour.

Az említett mikroorganizmust a táptalajban sülylyesztett, levegőztetett körülmények között tenyésztjük, e célból a fermentációs edényt levegőztetjük, mégpedig általában percenként a táptalaj térfogategységére számított körülbelül egy térfogatnyi levegővel.Said microorganism is cultured under aeration in the medium, for this purpose, the fermentation vessel is aerated, usually with about one volume of air per minute of the volume of the medium.

Miután megállapítottuk, hogy a táptalajban a kívánt mennyiségű enzim felhalmozódott, az enzimet elkülönítjük a közegből. Az elkülönítés módszerei a szakemberek előtt ismeretesek, ilyen módszerek például az enzimnek ismert kicsapőszerekkel, mint például nátrium-szulfáttal, vagy pedig vízzel elegyíthető szerves oldószerekkel, mint például acetonnal vagy etanollal végzett kicsapása. A kicsapott anyagot centrifugáljuk vagy kiszűrjük, és megszárítjuk, ily módon tisztított, szilárd formájú enzimet kapunk.Once it has been determined that the desired amount of enzyme has accumulated in the medium, the enzyme is isolated from the medium. Methods of isolation are known to those skilled in the art, such as precipitation of the enzyme with known precipitants such as sodium sulfate or water-miscible organic solvents such as acetone or ethanol. The precipitated material is centrifuged or filtered and dried to give a purified solid enzyme.

A fentiekben említett mikroorganizmus alkalmazásán kívül a jelen találmány oltalmi körébe beletartozik e mikroorganizmus mutánsainak és változatainak, valamint olyan, genetikailag átalakított változatainak alkalmazása is, amelyeket az enzim génjeinek az említett mikroorganizmusokba való bevitele útján kaphatunk.In addition to the use of the above-mentioned microorganism, the present invention also encompasses the use of mutants and variants of this microorganism, as well as genetically engineered variants obtainable by introducing the enzyme genes into said microorganisms.

A jelen találmány szerinti eljárást az alábbiakban, a találmány oltalmi körének szűkítése nélkül, példával szemléltetjük. A példákban szereplő %-ok tömeg%-ot jelentenek.The process of the present invention is illustrated by the following, without limiting the scope of the invention. The percentages in the examples are by weight.

1. példaExample 1

a) lépésthe step

A Bacillus licheniformis ATCC 39326 Difco keményítős agarral készült ferdeagaros tenyészetét egy Dífco keményítős agar lemezre szélesztjük, és 40 °C± 1 °C hőmérsékleten 18 ± 1 órán át tenyésztjük.The slant agar culture of Bacillus licheniformis ATCC 39326 Difco starch agar was plated on a Difco starch agar plate and cultured at 40 ° C ± 1 ° C for 18 ± 1 hours.

b) tépésb) tearing

A sejtek egy kacsnyi mennyiségét az alábbi összetételű táptalajra oltjuk át:One loop of cells is inoculated into the following medium:

Vizes inokulum (átoltó) táptalaj tömeg%Aqueous inoculum (inoculum) culture weight%

Élesztőkivonat 0,5 %Yeast extract 0.5%

Tripton (tripszinnel hidrolizált kazein) 0,5 %Tripton (casein hydrolysed with trypsin) 0.5%

EÜkálium-hidrogén-foszfát 0,1 %EC potassium hydrogen phosphate 0.1%

D-Glükóz 0,1 %D-Glucose 0.1%

Egy 1 liter térfogatú lombikba 350 ml ilyen táptalajt teszünk.350 ml of this medium were placed in a 1 liter flask.

A lombikot 1-2 napig 40 °C± 1 °C hőmérsékleten, percenkénti 200-as fordulatszámmal egy New Brunswick G - 50 rázókészüléken rázatjuk.The flask is shaken for 1-2 days at 40 ° C ± 1 ° C on a New Brunswick G-50 shaker at 200 rpm.

191 134 ' c) lépés191 134 'step c)

A fenti, rázott lombikos tenyészet teljes mennyiségét használjuk inokulumként a 3150 ml végső térfogatú, alábbi összetételű fermentációs táptalaj átoltásához:The entire volume of the above shake flask culture is used as inoculum to inoculate a final volume of 3150 ml of fermentation broth with the following composition:

Vizes fermentációs közeg tömeg%Wet fermentation media% by weight

Laktóz* Lactose* 10 10 % % Dikáhum-hidrogén-fószfát* Dikáhum hydrogen phosphate * 1,4 1.4 % % Kálium-dihidrogén-foszfát* Potassium dihydrogen phosphate * 0,6 0.6 % % Ammónium-szulfát Ammonium sulfate 0,6 0.6 % % Nátrium-citrát Sodium citrate 0,3 0.3 % % Teljes szójaliszt Whole soybean meal 3,0 3.0 % % Kalcium-klorid-dihidrát Calcium chloride dihydrate 0,05 % 0.05% Mazu DF 6000 (habzásgátló) Mazu DF 6000 (Antifoam) 1,0 1.0 ml ml Kezdeti pH = 6,8 - 7,0 Initial pH = 6.8 - 7.0 * A többi összetevőtől elkülönítve autoklávozzuk * Autoclave separately from other components

A fermentort 1 órán át 121 °C hőmérsékleten, 1,03 · 105 Pa túlnyomáson tartjuk.The fermenter was maintained for 1 hour at 121 ° C, 1.03 · 10 5 Pa overpressure.

Az alfa-amiláz enzim optimális termelése érdekében a táptalaj pH-jának 8,0 alatt, de 5,5 fölött kell lennie.For optimum production of the alpha-amylase enzyme, the pH of the medium should be below 8.0 but above 5.5.

A mikroorganizmus szaporodása során esetlegesen fellépő habzás meggátlására egy szokásos berendezés segítségével Mazu DF 6000 jelzésű habzásgátlót adagolunk a táptalajba.To prevent foaming that may occur during the growth of the microorganism, a Mazu DF 6000 antifoam agent is added to the culture medium using standard equipment.

Fermentációs körülmények:Fermentation conditions:

Fordulatszám: 600/percSpeed: 600 rpm

Hőmérséklet: 40 ’CTemperature: 40 'C

A levegőztetés sebessége: percenként i liter/1 liter táptalaj.Aeration rate: 1 liter / l medium per minute.

A táptalaj pH-ját 72 órás tenyésztés után megmérjük; a pH általában 6,5 és 7,0 között van.The pH of the medium was measured after 72 hours of culture; the pH is generally between 6.5 and 7.0.

Az alfa-amiláz enzim aktivitását önmagában ismert módszerekkel mérjük. Egy ilyen módszer a Wohlgemuth-módszer egy módosított változata, amelynek során az enzim aktivitásának meghatározása céljából a keményítő dextrioizálódásának meghatározott mértékét jelző színváltozás létrejöttéhez szükséges lebontási időt mérjük. A módszert úgy állítjuk be, hogy az amiláz aktivitását az alábbiakban leírt módon, közvetlenül íikvefon/g egységekben lehessen kiszámítani.The activity of the alpha-amylase enzyme is measured by methods known per se. Such a method is a modified version of the Wohlgemuth method, wherein the degradation time required to determine the degree of dextralisation of the starch is determined to determine the activity of the enzyme. The method is set up so that the amylase activity can be directly calculated in units of ixphone / g as described below.

Az alfa-amiláz enzim likvefon/g egységekben kifejezett aktivitását a következőképpen határozzuk meg:The activity of the alpha-amylase enzyme in units of lyconone / g is determined as follows:

A mintából 0,025 mólos kalcium-klorid-oldaítai mint oldószerrel és mint hígítószerrel olyan oldatot készítünk, hogy a végső koncentrációra hígított minta 5 ml térfogatú részletének dextrinizálási ideje körülbelül 10 perc legyen. Ha az enzim-készítmény aktivitását hozzávetőlegesen sem ismerjük, akkor a megfelelő mintaméretet és/vagy hígítást próbálgatás útján határozzuk meg.Prepare a 0.025 M solution of calcium chloride as a solvent and diluent in the sample so that a 5 ml aliquot of the final diluted sample has a dextrinization time of about 10 minutes. If the activity of the enzyme preparation is not known at all, the appropriate sample size and / or dilution is determined by testing.

5,0 ml híg jód-oldatot 13 x 200 mm méretű kémcsövekbe töltünk, és a kémcsöveket 30 ’C hőmérsékletű vízfürdőbe állítjuk. 10-12 ilyen kémcsövet használunk.5.0 ml of dilute iodine solution was filled into 13 x 200 mm test tubes and placed in a 30 ° C water bath. 10-12 such tubes are used.

ml Lintner-féle keményítő-oldatot (szoluilizált keményítő, melyet általában enzimatikus, főként amiláz aktivitás analíziséhez használnak) egy 23 x 200 mm méretű kémcsőbe öntünk, és a kémcsövet egy 30 ’C hőmérsékletű vízfürdőbe állítjuk.ml of Lintner's starch solution (solylated starch, commonly used for the analysis of enzymatic, mainly amylase activity) is poured into a 23 x 200 mm test tube and placed in a 30 ° C water bath.

— 30 ml híg, ismeretlen aktivitású alfa-amilázoidatot 23 x 200 mm méretű kémcsövekbe töltünk, és a kémcsöveket 30 ’C hőmérsékletű vízfürdőbe állítjuk.- 30 ml of dilute alpha-amylase solution of unknown activity are placed in 23 x 200 mm test tubes and placed in a 30 ° C water bath.

Az ismeretien aktivitású, hígított enzimminta 5 ml térfogatú részletét 10 ml keinényítőoldathoz öntjük, eközben a stopperórát akkor indítjuk el, amikor az ismeretien aktivitású alfa-amiláz-oldat felét beadagoltuk, majd az oldat másik felét ezután adjuk a keményítő-oldathoz.A 5 ml aliquot of the diluted enzyme sample of unknown activity is poured into 10 ml of the killing solution while the stopwatch is started when half of the alpha-amylase solution of unknown activity is added and the other half of the solution is then added to the starch solution.

Megfelelő időközönként a keményítőt és alfaamiláz-oldatot tartalmazó hidrolizáló elegy 1 ml térfogatú részleteit 1 ml-es pipettával belemérjük a megfelelő hőmérsékleten tartott híg jód-oldatba. Az elegyet minden alkalommal összerázzuk, beleöntjük egy 13 mm-es precíziós, négyzet keresztmetszetű küvettába, és egy Hellige-komparátorban összehasonlítjuk a standard alfa-amiláz színtárcsával. Az 1 ml-es pipetta tartalmát belefújjuk a jód-oldatba, hogy ezáltal pontosabban mérhessük a hidrolízis időtartamának végpontját. Amikor a hidrolízis végpontját már közel elértük, akkor 0,1 perc időközönként (6-12 másodpercenként) kell mintákat vennünk.At appropriate intervals, place 1 ml portions of the hydrolyzing mixture containing starch and alpha-amylase solution into a dilute iodine solution maintained at the appropriate temperature with a 1 ml pipette. The mixture is shaken each time, poured into a 13 mm precision square cuvette and compared in a Hellige comparator to a standard alpha-amylase dye. The contents of the 1 ml pipette are blown into the iodine solution to more accurately measure the end point of the hydrolysis time. When the hydrolysis end point is near, samples should be taken at 0.1 minute intervals (6-12 seconds).

Amikor a reakció teljesen végbemegy, feljegyezzük az időtartamot és a hígítást, és az enzim aktivitását likvefon/g vagy likvefon/ml egységekben számítjuk ki.When the reaction is complete, the time and dilution are recorded and the activity of the enzyme is calculated in units of Liquidone / g or Liquidone / ml.

Az enzim aktivitását az alábbi képlettel számítjuk ki:The enzyme activity is calculated using the formula:

Likvefon/g /vagy /ml) = _____1140____Likphone / g / or / ml) = _____1140____

Hígítás x a minta tényleges súlya (vagy térfogata) x dextrinizálási idő (perc)Dilution x actual weight (or volume) of sample x dextrinization time (minutes)

A fenti aktivitás-meghatározási módszerben használt oldatokat az alábbi módon állítjuk elő:The solutions used in the above activity determination method are prepared as follows:

Keményítő-oldat g Lintner-féle keményítőt egy lombikban összekeverünk 35 ml desztillált vízzel, az elegyet felforraljuk, és 5 percig állandó keverés mellett forraljuk. Utána szobahőmérsékletre hűtjük, hozzáadunk 125 ml acetát-puffer-oldatot, majd annyi vizet, hogy ezzel az elegy térfogatát 500 ml-re egészítjük ki, és végül hozzáadunk 1 ml toluolt. Az oldat stailitását az alfaamiláz enzim ismert aktivitású, standard mintájának segítségével ellenőrizzük.Starch solution Lintner starch g is mixed with 35 ml of distilled water in a flask, the mixture is boiled and refluxed for 5 minutes with constant stirring. After cooling to room temperature, 125 ml of acetate buffer solution are added, water is added to make up to 500 ml, and finally 1 ml of toluene is added. Stability of the solution is checked using a standard sample of enzyme alpha amylase of known activity.

A cetát-puffer-oldatCetate buffer solution

Kimérünk 1 mól (82,0 g) nátrium-acetátot, és feloldjuk 800 ml vízben. Az oldat pH-ját ecetsavval 6,2±0,l-re állítjuk, majd az oldatot 1 liter térfogatra hígítjuk. 1 liter keményitő-szubsztrát előállításához a fenti puffer-oldat 20 ml térfogatú részletét használjuk.One mole (82.0 g) of sodium acetate was weighed and dissolved in 800 ml of water. The pH of the solution was adjusted to 6.2 ± 0.1 with acetic acid and the solution was diluted to 1 liter. To make 1 liter of starch substrate, use 20 ml aliquots of the above buffer solution.

191 134191,134

0,025 mólos kalcium-klorid-oldat0.025M solution of calcium chloride

11,1 g kémiailag tiszta, vízmentes kalcium-kloridot feloldunk 4 liter vízben.11.1 g of chemically pure anhydrous calcium chloride are dissolved in 4 liters of water.

Puffer-oldatBuffer solution

25,3 g szemcsés nátrium-hidroxidot és 340 g kálium-dihidrogén-foszfátot feloldunk desztillált vízben, és az oldat térfogatát egy mérőlombikban 2 literre egészítjük ki. Amikor a puffer-oldat eléri a szobahőmérsékletet, végső térfogatára hígítjuk (pH = 6,2 ±0,1).Dissolve 25.3 g of particulate sodium hydroxide and 340 g of potassium dihydrogen phosphate in distilled water and make up to 2 liters in a volumetric flask. When the buffer solution reaches room temperature, it is diluted to its final volume (pH 6.2 ± 0.1).

Jód-törzsoldatIodine stock solution

5,50 g kémiailag tiszta, kristályos jódot és 11,0 g kálium-jodidot feloldunk vízben, és az oldatot 250 m! térfogatra hígítjuk. Az oldatot sötét színű üvegben tároljuk.5.50 g of chemically pure crystalline iodine and 11.0 g of potassium iodide are dissolved in water and the solution is 250 ml. make up to volume. Store the solution in a dark glass vial.

Híg jód-oldatDiluted iodine solution

20,0 g kálium-jodidot feloldunk vízben, hozzáadunk 2,00 ml jód-törzsoldatot, majd 500 ml térfogatra hígítjuk.Dissolve 20.0 g of potassium iodide in water, add 2.00 ml of iodine stock solution and dilute to 500 ml.

Az enzim likvefon/ml egységeben kifejezett aktivitásának meghatározására a fentiekben leírt eljárást használva, a jelen találmány szerinti eljárással előállított enzim aktivitása meghaladja az 1000 likvefon/mlt és legtöbbször eléri az 1500 — 2000 likvefon/ml t. Az említett brit szabadalmi leírásban ismertetett Bacillus licheniformist a fentiekben leírt fermentációs közegben tenyésztve, és az enzim aktivitását ugyancsak a fentiekben leírt módon meghatározva, az enzim aktivitása átlagosan 125 likvefon/ml volt, míg ugyanez a tenyészet az említett brit szabadalmi leírásban ismertetett táptalajban tenyésztve még alacsonya tb, 50 likvefon/ml alatti aktivitást eredményezett.The activity of the enzyme produced by the method of the present invention is greater than 1000 lyconone / ml and in most cases reaches 1500-2000 lyconone / ml in order to determine the activity of the enzyme expressed in units of lyconone / ml. The Bacillus licheniformist described in the above-mentioned British Patent was cultivated in the fermentation medium described above and the activity of the enzyme was also determined as described above, the activity of the enzyme was on average 125 lyconone / ml while the same culture was grown in the medium described in tb, resulted in activity below 50 likonphone / ml.

Az alfa-amiláz enzim aktivitását az említett brit szabadalmi leírásban ismertetett, módosított SKBeljárással [SK.B eljárást lásd Cerial Chemistry 16; 712-723 (1939)] is meghatározhatjuk. E módszert alkalmazva az említett brit szabadalmi leírásban ismertetett tenyészetek 500 SKB-egység/ml enzim-aktivitást termeltek, míg a jelen találmány szerinti tenyészetben az enzim aktivitása körülbelül 10 000 SKBegység/ml volt.The activity of the alpha-amylase enzyme is modified by the modified SKB method described in the above-mentioned British patent [SK.B method see Cerial Chemistry 16; 712-723 (1939)]. Using this method, the cultures described in the aforementioned British Patent produced 500 SKB Units / ml enzyme activity, while the cultures of the present invention had an enzyme activity of about 10,000 SKB Units / ml.

Claims (6)

1. Eljárás hőstabil alfa-amiláz enzim előállítására, azzal jellemezve, hogy Bacillus licheniformis ATCC 39326 jelzésű törzset 1 — 25 tömeg% szénforrást, így laktózt, glükózt, keményítőt, szóját, kukoricalisztet, vagy ezek keverékét és nitrogénforrást, így oldható nitrátokat, ammóniumsókat, élesztőkivonatot, kukoricalekvárt, földimogyorólisztet tartalmazó táptalajban tenyésztjük, és az alfa-amiláz enzimet kívánt esetben elkülönítjük a táptalajtól; a táptalaj pH-ját pedig előnyösen 8 és 5,5 között tartjuk.A process for the preparation of a thermostable alpha-amylase enzyme, wherein the strain Bacillus licheniformis ATCC 39326 is present in an amount of from 1 to 25% by weight of carbon sources such as lactose, glucose, starch, soy, corn flour or mixtures thereof and nitrogen sources such as soluble nitrates, culturing in a culture medium containing yeast extract, corn jam, peanut flour, and isolating the alpha-amylase enzyme from the culture medium if desired; and the pH of the medium is preferably maintained between 8 and 5.5. 2. Az l. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az alfa-amiláz enzimet elkülönítjük a táptalajtól.2. The l. The method of claim 1, wherein the alpha-amylase enzyme is isolated from the culture medium. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a Bacillus licheniformis ATCC 39326 jelzésű törzset egy szénforrásként laktózt tartalmazó táptalajba tenyésztjük.3. The method of claim 1, wherein the strain Bacillus licheniformis ATCC 39326 is cultured in a medium containing lactose as a carbon source. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a laktóz mennyisége a táptalajban 5 vegyes% és 15 vegyes % között van.The process according to claim 3, wherein the amount of lactose in the medium is between 5% and 15% by weight. 5. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az alfa-amiláz enzimet elkülönítjük a táptalajtól.The method of claim 3, wherein the alpha-amylase enzyme is isolated from the medium. 6. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az említett táptalaj pH-ját 8 alatt, de 5,5 fölött tartjuk.6. The method of claim 3, wherein said medium is maintained at a pH below 8 but above 5.5.
HU179184A 1984-05-08 1984-05-08 Process for preparing heat stable alpha amylase HU191134B (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU179184A HU191134B (en) 1984-05-08 1984-05-08 Process for preparing heat stable alpha amylase

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU179184A HU191134B (en) 1984-05-08 1984-05-08 Process for preparing heat stable alpha amylase

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT37649A HUT37649A (en) 1986-01-23
HU191134B true HU191134B (en) 1987-01-28

Family

ID=10956218

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU179184A HU191134B (en) 1984-05-08 1984-05-08 Process for preparing heat stable alpha amylase

Country Status (1)

Country Link
HU (1) HU191134B (en)

Also Published As

Publication number Publication date
HUT37649A (en) 1986-01-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US3623957A (en) Preparation of microbial alkaline protease by fermentation with bacillus subtilis, variety licheniformis
US4604355A (en) Maltogenic amylase enzyme, preparation and use thereof
Tsuchiya et al. Dextran-degrading enzymes from molds
EP0140610B1 (en) A process for producing thermostable alpha-amylases by culturing micro-organisms at elevated temperatures
US3979261A (en) Production of glucose isomerase by bacillus coagulans
KR890001827B1 (en) Method for production of alpha-amylase
US4387163A (en) Process for producing the enzyme cholesterol esterase and for hydrolyzing cholesterol esters of fatty acids by using the enzyme itself
EP0169920B1 (en) Process for thermally stable alpha-amylase production
US4104123A (en) Process of producing a "xanthemonas-type" polysaccharide
JPH0330672A (en) New heat-resistant and acid-resistant pullunase and its production
JPS62201577A (en) Beta-amylase
SE453836B (en) BIOLOGICALLY CLEAN CULTURE OF SACCHAROMYCES CEREVISIAE AND ITS APPLICATION FOR HYDROLYSIS OF RAFFINOS
JPH06500004A (en) Production of protein compositions
DE2717333C2 (en) Heat and acid resistant alpha-amylase
HU191134B (en) Process for preparing heat stable alpha amylase
US5741687A (en) Sorbitol oxidase reagent from xanthomonas
HU181488B (en) Process for the hydrolysis of racemic hydantoins into optically active n-carbamoyl-aminoacid derivatives and for preparing the hydrolyzing enzymatic complex
CA1225955A (en) PROCESS FOR THERMALLY STABLE .alpha.-AMYLASE PRODUCTION
Aunstrup Industrial approach to enzyme production
SU1344247A3 (en) Method of producing thermally-stable bacterial alfa-amylase
GB2030149A (en) Process for l- -glycerophosphate oxidase
JP3642344B2 (en) Method for producing creatine amidinohydrolase
JPH0472506B2 (en)
SU911765A1 (en) Method of cultivating entomopathogenic bacteria
JP3413294B2 (en) Method for producing 2,5-dihydroxypyridine and bacteria producing 2,5-dihydroxypyridine

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee