HU183928B - Process and apparatus for genetical characterizing and qualifying plants, first of all sorts of cultivated plants - Google Patents

Process and apparatus for genetical characterizing and qualifying plants, first of all sorts of cultivated plants Download PDF

Info

Publication number
HU183928B
HU183928B HU821582A HU158282A HU183928B HU 183928 B HU183928 B HU 183928B HU 821582 A HU821582 A HU 821582A HU 158282 A HU158282 A HU 158282A HU 183928 B HU183928 B HU 183928B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
gel
plants
proteins
seed
soluble proteins
Prior art date
Application number
HU821582A
Other languages
Hungarian (hu)
Inventor
Gabor Vida
Istvan Gyurjan
Karolyne H Nagy Anna Hafiek
Laszlo Kassay
Original Assignee
Mezoegazdasagi Es Elelmiszerip
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Mezoegazdasagi Es Elelmiszerip filed Critical Mezoegazdasagi Es Elelmiszerip
Priority to HU821582A priority Critical patent/HU183928B/en
Priority to IT8348317A priority patent/IT8348317A0/en
Priority to PCT/HU1983/000023 priority patent/WO1983003946A1/en
Priority to AU15570/83A priority patent/AU1557083A/en
Priority to EP19830901607 priority patent/EP0108782A4/en
Publication of HU183928B publication Critical patent/HU183928B/en

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416—Systems
    • G01N27/447—Systems using electrophoresis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G7/00—Botany in general

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Ecology (AREA)
  • Forests & Forestry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

The invention is characterized in that the cells of a selected vegetable plant are disaggregated upon adding mixture of a given buffer solution, said cells provided from the seed, embryon or plantlet; the soluble proteins are separated by centrifugation from the insoluble components; said soluble proteins are subjected to a fractionation by gel electrophoresis; this step allows to fractionate the soluble proteins according to criteria which are on one hand the electric charge of molecules and on the other hand the molecular weight of said molecules; this analysis of soluble proteins is carried out in a gel-based filter under an electric field; the fractions of soluble proteins are deposited at precise and distinct locations of the gel-based filter and these fractions are then visualized by specific enzymatic respectively proteinic coloration; such analysis provides a visualized fractionation by coloration and allows the genetic characterization as well as the qualitative sorting of vegetable varieties by simple visualization.

Description

A találány tárgya eljárás növények, főként kultúrnövények termesztett fajtáinak genetikai jellemzésére és minősítésére, valamint berendezés ezen eljárás megvalósítására.The present invention relates to a process for the genetic characterization and certification of cultivated varieties of plants, especially cultivated plants, and to an apparatus for carrying out this process.

Jelenleg a kultúrnövények termesztett fajtáinak jellemzésére a nemesítők illetve a vetőmagok minősítésével foglalkozó szakemberek gyakorlatilag kizárólag morfológiai és citológiai ismertetőjegyeket használnak, vagyis az egyes növények fajtabéli jellegzetességeit, másrészt homogenitását vagy kevertségét (idegen beporzás esetén) a külső megjelenési formák illetve a kromoszómaállományok összevetésével állapítják meg. Gén-enzim szintű elemzés elvégzésére alkalmas eljárás eddig nem volt ismeretes.Currently, practitioners and seed certification practitioners use exclusively morphological and cytological characteristics to characterize cultivated varieties of cultivated plants. The method for carrying out gene-enzyme analysis has not been known so far.

A jelenleg alkalmazott módszerek alapvető hátránya az, hogy a morfológiai és citológiai jellemzés elkészítéséhez a vizsgálandó fajta magját el kell vetni, és a növényt fel kell nevelni virágzásig illetve terméshozatalig, hogy a szakember egyáltalán valamilyen adatot nyerhessen. Ez az eljárás időben rendkívül hosszú, egy teljes generációs időt (általában egy évet) igényel, mégpedig megfelelő agrotechnikai feltételek mellett, és végül a levonható következtetések és a kapott paraméterek így is csak közelítő jellegűeknek tekinthetők, ahol nagy szórással kell számolni.A major disadvantage of the current methods is that for the morphological and cytological characterization to be carried out, the seed of the test variety should be sown and the plant grown to flower or yield so that any data can be obtained by the skilled person. This procedure is extremely long in time, requires a full generation time (usually one year) under appropriate agrotechnical conditions, and finally the conclusions to be drawn and the parameters obtained can only be considered approximate, where a large variance is to be expected.

Az időveszteség mellett további hátrányt jelent az ismertetett módszer jelentős munka- és költségigénye, valamint az, hogy a vizsgálati eredményeket a nevelési feltételek is erősen befolyásolják. A fentiek mellett még azt a hátrányt is meg kell említeni, hogy bizonyos növények rendkívül kis méretű kromoszómái csak egy rendkívül szűk azonosítási spektrumot biztosítanak.In addition to the loss of time, the significant work and cost requirements of the described method and the fact that the study results are strongly influenced by the educational conditions are further disadvantages. In addition to the foregoing, it is to be noted that the extremely small chromosomes of certain plants provide only a very narrow identification spectrum.

A találmány által megoldandó feladat tehát olyan eljárás kidolgozása növények, elsősorban kultúrnövények termesztett fajtáinak genetikai jellemzésére, amely a vizsgálat elvégzését bármikor, néhány nap vagy adott esetben még rövidebb idő alatt is lehetővé teszi, vagyis nem kötött a vegetációs periódushoz, kísérleti parcellák költséges agrotechnikai előkészítését és gondozását nem igényli és amelynél a nevelési feltételek nem befolyásolják a vizsgálati eredményt, amely így a korábbiaknál sokkal egyértelműbb és megbízhatóbb.SUMMARY OF THE INVENTION It is an object of the present invention to provide a method for the genetic characterization of cultivated varieties of plants, particularly cultivated plants, which allows the study to be carried out at any time, a few days or even shorter, i.e. not subject to vegetation, does not require care and where the educational conditions do not affect the test result, which is thus much clearer and more reliable than before.

A találmány alapja az a felismerés, hogy a kitűzött feladat megfelelően előkészített és feldolgozott mag, embrió, csíranövény közvetlen géntermék-analízissel oldható meg, amelynél a levont következtetések minden mellékhatást kizárva biztosan az adott fajta genetípusára és fenotípusára jellemzőek.The present invention is based on the discovery that the object of the present invention can be solved by direct gene product analysis of a properly prepared and processed seed, embryo, seedling, the conclusions drawn being specific to the genotype and phenotype of the species.

A kitűzött feladatot a találmány értelmében olyan eljárással oldottuk meg, amelynek során a vizsgált növényi mintához az oldható fehérjék extrahálására alkalmas, stbil pH-tartományt biztosító, antioxidánsokat tartalmazó pufferoldatot adagolnak, az így kezelt mintánál homogenizálással és/vagy fogyasztva roncsolással sejtfeltárást végzünk, majd az oldott és nem oldható komponenseket hűtéses centrifugálással különválasztjuk, az oldott fehérjéket tartalmazó folyékony fázist gélelektroforézisnek tesszük ki, amelynek során az oldott fehérjéket töltésük nagysága és molekulasúlyuk szerint gélszerűen különválasztjuk, majd a gélszűrő megfelelő helyeit elfoglaló fehérjéket enzimspecifikus festék(ek)kel és adott esetben fehérjespecifikus festék(ek)kel kezeljük és a kapott színes sávminta alapján vizuálisan elvégezzük a minta genetikai jellemzését és minősítését.The object of the present invention is solved by the process of adding to the test plant sample a buffer containing antioxidants for extracting soluble proteins, etc., containing a pH range, homogenizing and / or consuming the digested cell, and dissolving and the insoluble components are separated by cooling centrifugation, the liquid phase containing the solubilized proteins is subjected to gel electrophoresis, wherein the solubilized proteins are gel-separated according to their charge size and molecular weight, and the proteins occupying the appropriate sites of the (s) treating and visually carrying out the genetic characterization and qualification of the sample on the basis of the colored bar pattern obtained.

A találmány értelmében vizsgálati mintaként a vizsgált növény jellegzetességeinek illetve a vizsgálat céljainak megfelelően magot, embriót) vagy csíranövényt alkalmazunk, mely utóbbit a csíráztatás alatt célszerűen meghatározott megvilágítási programnak illetve szabályozott hőmérsékletnek teszünk ki.According to the invention, the test sample is seed (embryo) or seedling, according to the characteristics of the test plant and the purpose of the test, the latter being subjected to an appropriate illumination program or controlled temperature during germination.

A találmány szerinti eljárás megvalósítására alkalmas berendezés lényegében pufferoldat-adagoló készülékből, dö 'zsmozsárból és/vagy fogyasztva roncsoló sajtoló berendezésből, hűthető preparatív centrifugából, valamint egvenirányított stabilizált villamos tápegységgel ellátott, gél szűrőt tartalmazó gélelektroforézis berendezésből áll.The apparatus for carrying out the process according to the invention consists essentially of a buffer solution dispenser, a mortar and / or a digestion press, a cooled preparative centrifuge, and a gel electrophoresis device equipped with a rectified stabilized electrical power supply containing a gel filter.

Csíranövény magról történő csúsztatásához a fenti berendezés célszerűen szabályozott hőmérsékletet és megvilágítást biztosító fitotronnal van kiegészítve.For sliding the seedling seed from the seed, the above apparatus is preferably completed with a phytotrone providing controlled temperature and illumination.

A találmányt részletesebben kiviteli példa kapcsán illetve a csatolt rajz alapján ismertetjük, amely a találmány szerinti eljárás vázlatos folyamatábráját tünteti fel.The invention will be described in more detail with reference to an exemplary embodiment and with reference to the accompanying drawing, which is a schematic flow diagram of the process of the invention.

Amint az a rajzon is látható, a kiindulási anyagot képező vizsgált növényi minta az adott növénynek megfelelően lehet 1 mag, 2 embrió, az 1 magból 3 csíráztató edényben csíráztatott és 4 fitotronban vagy tenyészszobáb/ n szabályozott hőmérséklet mellett 5 fénycsövek által szabályozottan megvilágított 6 csíranövény vagy ezen 6 csíranövény 7 hajtása (levele) vagy 8 gyökere. A csíráztatásnál a szabályozott hőmérséklet gyakorlatilag szobahőmérsékletet, vagyis 25 ± 2 °C-ot jelent, míg a megvilágítás célszerűen vörös fényű, 1000—10 000 lux fényerősségű fénycsövekkel történik, előnyösen 12 óra sötétből és 12 óra megvilágításból álló ciklusokban. A v zsgált mintát sejtfeltárás céljából 9 dörzsmozsárban 0 —5 °C-on szétdörzsölve homogenizáljuk és/vagy 11 sajtoló berendezésben —40 és —100 °C között, célszerűen --60 °C-on és 15—35 MPa közötti, célszerűen 27 MPa nyomáson (amelyet adott esetben 12 légkompresszor biztosít) fagyasztva roncsoljuk. A 11 sajtoló berendezésben szárazjéggel lefogyasztott mintát egy 2 mm 0 nyíláson szilárd állapotban, nagy nyomásai átsajtolva a sejteket úgy lehet elroncsolni, hogy a vizsgálandó komponenseiét nem éri károsodás.As shown in the drawing, the test plant sample constituting the starting material may be 1 seed, 2 embryos, germinated from 1 seed 3 in a germination vessel, and 4 seedlings illuminated by fluorescents under controlled temperature 5 in a phytotron or at room temperature. the 7 shoots (leaves) or 8 roots of these 6 seedlings. For germination, the controlled temperature is practically room temperature, i.e. 25 ± 2 ° C, while illumination is preferably with red fluorescent lamps of 1000 to 10,000 lux, preferably in cycles of 12 hours dark and 12 hours illumination. The sample is homogenized by trituration in 9 mortars at 0-5 ° C and / or in 11 press equipment at -40 ° C to -100 ° C, preferably at -60 ° C to 15-35 MPa, preferably at 27 MPa. pressurized (optionally provided by 12 air compressors) frozen. The sample, consumed with dry ice in the extruder 11, can be disrupted in a solid state, pressed through high pressures at a pressure of 2 mm, so that the component to be tested is not damaged.

Közvetlenül a sejtfeltárás előtt a vizsgált mintához 10 pufferoldat-adagolóból az oldható fehérjék extrahálására alkalmas, stabil, célszerűen 5 és 8 pH-érték közötti pHtartományt biztosító, antioxidánsokat tartalmazó pufferoldatot adunk.Immediately prior to cell lysis, a stable buffer, preferably pH 5 to 8, containing antioxidants for extracting soluble proteins, is added to the test sample from 10 buffer dosing units.

A sejtfeltárás után az oldott és nem oldhataó komponenseket hűthető preparatív 13 centrifugában választjuk szét, célszerűen 20 percig tartó, 0—5 °C-on végzett centrifugálással. Az így kapott folyékony fázist 14 gélelektroforízis berendezésbe visszük, amely gélszűrőt tartalmazó 15 elektroforízis cellából és egyenirányított, stabilizált 16 villamos tápegységből áll. A 14 gélelektroforízis berendezésben a gélszűrő megválasztásától függően a fehérjéket elektromos erőtérben töltésük nagysága és molekulasúlyuk alapján szétválaszthatjuk. Általában gélszűrőként poliacrilamidot alkalmazunk, de gélelektrofókuszáláshoz, vgyis a fehérjék csak töltés szerinti szétválasztásához pH-gradienst létrehozó anyaggal töltött gélszűrőt használunk. A gélszűrőn szétvált fehérjecsoportok, amelyeket a 17 hivatkozási számmal jelölt rész szimbolizál, színtelenek. Láthatóvá tételüknek két módja van: egyrészt a fehérjespecifikus festékekkel való kezelés, amit 19 hivatkozási számmal jelöltünk, másrészt a 18 hivatkozási számmal jelölt enzimspecifikus festés. A fehérjespecifi-21After cell lysis, soluble and insoluble components are separated in a cooled preparative 13 centrifuge, preferably by centrifugation at 0-5 ° C for 20 minutes. The resulting liquid phase is transferred to a gel electrophoresis device 14 consisting of an electrophoresis cell 15 containing a gel filter and a rectified stabilized electrical power supply 16. Depending on the choice of gel filter in the gel electrophoresis apparatus 14, proteins may be separated in an electric field based on their charge size and molecular weight. Generally, a polyacrylamide is used as a gel filter, but a gel filter filled with a pH gradient is used for gel electrofocusing, i.e. to charge proteins only for charge. The groups of proteins separated on the gel filter, symbolized by the part numbered 17, are colorless. There are two ways to make them visible: treatment with protein-specific dyes, designated 19 by reference, and enzyme-specific staining by reference 18. Protein specificity-21

183 928 kus festést elsősorban az enzimspecifikus festés kiegészítéseképpen alkalmazzuk, az enzimspecifikus festés eredményeinek alátámasztására vagy kiegészítésére.183,928 staining is used primarily as a complement to enzyme-specific staining to support or complement the results of the enzyme-specific staining.

Réztartalmú vagy ezüsttartalmú festékkel gyakorlatilag minden fehérje festhető.Virtually all proteins can be stained with copper or silver inks.

A fehérjék többsége enzimatikus funkcióval bír. Ha természetes vagy mesterséges szubsztrátjukat hozzáadjuk, szemmel láthatóan is kifejtik aktivitásukat, ezen alapszik az enzimspecifikus festés művelete. Az enzimműködést a reakciótermékek színreakcióival lehet a gélszűrőn levő enzimfehérje helyén kimutatni. A minta genetikai jellemzését a 20 helyen a létrejövő színes sávminta kiértékelésével tudjuk elvégezni. A fehérjék (enzimek) molekuláris sajátságai a vizsgált minta genetikai sajátságaival korrelációban vannak. Az eljárással létrehozott színes sávminták jellemlzőek fajra, fajtára, termesztett vonalakra egyaránt. Hibridekben az összetevő, fajták genomjának (vagyis egy adott növényi sejt génjei összességének) jelenléte a (szülőktől) már ismert sávminták alapján kimutatható. A nem egységes genetikai háttér a fehérje összetevők heterogenitásában (a sávminták eltéréseiben) tükröződik. Előnyös sajátságok átadása adott módon megjelölt fehérjék (enzimek) jelenlétével (vagyis azokra tipikus sávok jelenlétével) generációról generációra nyomon követhető. Hasonló módon a fajtaleromlás genetikai háttere vagy termesztett vonalak genetikai tisztasága is kimutatható.Most proteins have an enzymatic function. When added to their natural or artificial substrate, they are apparently active, based on the enzyme-specific staining process. Enzyme activity can be detected by color reactions of the reaction products at the site of the enzyme protein on the gel filter. Genetic characterization of the sample can be performed by evaluating the resulting colored band sample at 20 sites. Molecular properties of the proteins (enzymes) are correlated with the genetic properties of the test sample. The color band patterns created by the process are representative of the species, variety, and cultivated lines. In hybrids, the presence of the component, the genome of the species (that is, the sum of the genes of a given plant cell) can be detected on the basis of already known band patterns (from parents). The heterogeneous genetic background is reflected in the heterogeneity of the protein components (band differences). The transfer of advantageous properties can be traced from generation to generation with the presence of specifically labeled proteins (enzymes) (i.e., the presence of typical bands therefor). Similarly, the genetic background of the breed's deterioration or the genetic purity of the cultivated lines can be demonstrated.

A találmány szerinti eljárással a minták száma sokszorosa lehet annak, mint ami kísérleti parcellákban nevelt növények azalíziseinél lehetséges. így a találmány különösen alkalmas vetőmagok és szaporítóanyagok minősítésére, mivel a pontos genotípus-információ folyamatos és biztos előrejelzés lehetőségét adja meg a vetőmagforgalmazó és -vásárló számára egyaránt.By the method of the present invention, the number of samples may be many times greater than that available for azalysis of plants grown in experimental plots. Thus, the present invention is particularly suitable for the certification of seeds and propagating material, since accurate genotype information provides a continuous and reliable prediction for both the seed distributor and the purchaser.

A találmány gyakorlati alkalmazására nézzünk egy konkrét példát:Let us look at a specific example of the practice of the invention:

A feladat hibrid napraforgó vetőmag fajtaazonosságának megállapítása izoenzim vizsgálat alapján illetve az illegitim beporzás valószínűségének becslése.The task is to determine the hybrid identity of hybrid sunflower seed by isoenzyme analysis and to estimate the probability of illegitimate pollination.

A vizsgálatokat száraz magvakból és csíranövény levélből kiindulva végeztük, amelyeket a már leírt módon pufferoldat hozzáadása mellett dörzsmozsárban eldörzsöltük, centrifugáltuk és az így nyert fehérje kivonatokat vetettük alá gélelektroforízisnek, illetve gélelektrofókuszálásnak. Ezen belül elvégeztükThe assays were performed from dry seeds and seedling leaves, which were triturated in a mortar with the addition of a buffer solution as described above, centrifuged and the resulting protein extracts subjected to gel electrophoresis and gel electrophoresis. We did it inside

1. a dehidrogenáz enzimek gélelektroforízis utáni specifikus festését;1. specific staining of dehydrogenase enzymes after gel electrophoresis;

2. a dehidrogenáz izoenzimek gélelektrofókuszálás utáni specifikus festését;2. specific staining of dehydrogenase isoenzymes after gel electrofocusing;

3. a peroxidáz izoenzimek gélelektroforízis utáni specifikus festését.3. specific staining of peroxidase isoenzymes after gel electrophoresis.

A színes sávminták alapján elvégeztük az összehasonlító értékelést a szülői vonalak, a biztosan izolált illetve a kérdéses hibrid, valamint a feltételezett beporzó között.On the basis of the color band samples, a comparative evaluation was made between the parent lines, the definitely isolated and the hybrid in question, and the putative pollinator.

A sávminták összehasonlításából, illetve kiértékeléséből levonható következtetés a következő volt:The conclusion to be drawn from the comparison or evaluation of the lane samples was as follows:

1. Az idegen beporzásból adódó heterogenitás 4,2%. (A szabványban megengedett heterogenitás 10%).1. Heterogeneity due to foreign pollination is 4.2%. (The heterogeneity allowed in the standard is 10%).

2. Az alkalmazott izolációs távolság feleslegesen nagy és lényegesen kisebb távolság is kielégítő tisztaságot biztosít.2. The isolation distance used ensures a sufficiently high clearance and a considerably smaller distance.

Claims (15)

1. Eljárás növények, főként kultúrnövények termesztett fajtáinak genetikai jellemzésére és minősítésére, azzal 5 jellemezve, hogy a vizsgált növényi mintához az oldható fehérjék extrahálására alkalmas, stbil pH-tartományt biztosító, antioxidánsokat tartalmazó pufferoldatot adagolunk, az így kezelt mintánál homogenizálással és/vagy fagyasztva roncsolással sejtfeltárást végzünk, majd az 10 oldott és nem oldható komponenseket hűtéses centrifugálással különválasztjuk, az oldott fehéijéket tartalmazó folyékony fázist gélelektroforízisnek tesszük ki, amelynek során az oldott fehérjéket töltésük nagysága és molekulasúlyuk szerint gélszűrőben különválasztjuk, majd a gél15 szűrő megfelelő helyeit elfoglaló fehérjéket enzimspecifikus festék(ek)kel és adott esetben fehérjespecifikus festék(ek)kel kezeljük és a kapott színes sávminta alapján vizuálisan elvégezzük a minta genetikai jellemzését és minősítését.1. A method for the genetic characterization and qualification of cultivated varieties of plants, especially cultivated plants, characterized in that a buffered solution containing antioxidants, suitable for extracting soluble proteins, etc. having a pH range of about one milliliter, is added to the plant sample under examination, homogenized and / or frozen. cell lysis is performed, and the soluble and insoluble components are separated by cooling centrifugation, the liquid phase containing the solubilized proteins is subjected to gel electrophoresis, wherein the solubilized proteins are separated by size and molecular weight in a ) and, if appropriate, protein specific dye (s) and visually perform genetic evaluation and qualification of the sample based on the resulting colored band pattern ITES. 2020 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy vizsgálati mintaként növényi magot alkalmazunkj.2. The method of claim 1, wherein the test sample is a plant seed. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy vizsgálati mintaként növényi3. The method of claim 1, wherein the test sample is a plant 25 embriót alkalmazunk.25 embryos were used. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy vizsgálati mintaként növényi magból szabályozott megvilágítás és hőmérséklet mellett csíráztatott csíranövényt, vagy ennek hajtását illetve gyö30 kerét alkalmazzuk.4. The method of claim 1, wherein the test seed is a germinated germinated plant seed at controlled light and temperature, or a shoot or root of said seed. 5. A 4. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a csíráztatást szobahőmérsékleten, vörös fényű, 1000—10 000 lux fényerősségű fénycsövek adott megvilágítási ritmusú alkalmazása mellett, cél35 szerűen fitotronban végezzük.5. The method of claim 4, wherein the germination is carried out at room temperature using a phytotron at a target illumination rate of red fluorescent lamps of 1000 to 10,000 lux at a given illumination rhythm. 6. az 1—5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a pufferoldat pH-tartományát 5 és 8 pH közé állítjuk be.6. A process according to any one of claims 1 to 4, wherein the pH of the buffer solution is adjusted to a pH of between 5 and 8. 7. Az 1.—6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás fo4θ ganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a homogenizálást a vizsgált minta dörzsmozsárban való, 0—5 °C-on történő eldörzsölésével végezzük.7. A method of agglomerating fo4θ according to any one of claims 1 to 4, characterized in that homogenization is carried out by rubbing the test sample in a mortar at 0-5 ° C. 8. az 1.—6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a fogyasztva8. from 1-6. A method according to any one of claims 1 to 3, characterized in that when consumed 45 roncsolást —40 és —100 °C közötti, célszerűen —60 °C hőmérsékleten és 15—35 MPa, célszerűen 27 MPa nyomással működő sajtoló berendezésben végezzük.45 digestion is carried out in a press machine operating at a temperature of -40 to -100 ° C, preferably at -60 ° C and a pressure of 15 to 35 MPa, preferably 27 MPa. 9. Az 1—8. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a sejtfeltárás 5 után a pufferoldattal kezelt mintát 20 percig, 0—5 °C-on centrifugáljuk.9. Figures 1-8. A method according to any preceding embodiment, wherein the 5 cell disruption after the buffer-treated samples were centrifuged for 20 minutes at 0-5 ° C. 10. Az 1,—9. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a élelektroforízis során poliacrilamid gélszűrőt alkalmazunk.10. A method according to any one of claims 1 to 3, characterized in that a polyacrylamide gel filter is used for edge electrophoresis. 5555 11. Az 1.—9. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a gélelektrofókuszálás során pH-radienst létrehozó anyagú gélszűrőt alkalmazunk.11. A method according to any one of claims 1 to 3, characterized in that a gel filter with a pH-radiating agent is used in the gel electrofocusing. 12. Az 1,—11. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a fehérjék enzimspecifikus festésére a fehérjékhez ezek aktivitását megjelenítő természetes vagy mesterséges szubsztrátot adunk.12. 1, —11. A method according to any one of claims 1 to 6, characterized in that for the enzyme-specific staining of the proteins, a natural or artificial substrate displaying their activity is added to the proteins. 183 928183,928 13. Az 1.-11. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy fehérjespecifikus festékként réztartalmú vagy ezüsttartalmú festéket alkalmazunk.13. A method according to any one of claims 1 to 4, wherein the protein-specific dye is copper or silver dye. 14. Berendezés növények, főként kultúrnövények termesztett fajtáinak genetikai jellemzéséhez és minősítéséhez, azzal jellemlezye, hogy pufferoldat-adagoló készüléke (10), dörzsmozsara (9) és/vagy fagyasztva-roncsoló sajtoló berendezése (11), hűthető preparatív centrifugája (13) , valamint egyenirányítóit, stabilizált villamos tápegységgel (16) ellátott, elektroforízis cellában (15) elrendezett gélszűrőt tartalmazó gélelektroforízis berendezés (14) van.Apparatus for genetic characterization and qualification of cultivated varieties of plants, mainly cultivated plants, characterized in that it has a buffer solution dispenser (10), a mortar (9) and / or a freeze-thawing extraction apparatus (11), and a cooling preparative centrifuge (13) a gel electrophoresis device (14) having rectifiers, a gel filter equipped with a stabilized electric power supply (16) and arranged in an electrophoresis cell (15). 15. A 14. igénypont szerinti berendezés kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy szabályozott hőmérsékletet és megvilágítást biztosító, szabályozott hullámhosszú és fényintenzitású fénycsövekkel (5) felszerelt fitotronja (4) vai.15. An embodiment of the apparatus of claim 14, wherein the phytotron (4) is provided with fluorescent tubes (5) of controlled wavelength and light intensity providing controlled temperature and illumination.
HU821582A 1982-05-19 1982-05-19 Process and apparatus for genetical characterizing and qualifying plants, first of all sorts of cultivated plants HU183928B (en)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU821582A HU183928B (en) 1982-05-19 1982-05-19 Process and apparatus for genetical characterizing and qualifying plants, first of all sorts of cultivated plants
IT8348317A IT8348317A0 (en) 1982-05-19 1983-05-18 PROCEDURE AND EQUIPMENT FOR THE GENETIC CHARACTERIZATION AND QUALIFICATION OF PLANTS, IN PARTICULAR OF SELECTED VARIETIES OF CULTIVATED PLANTS
PCT/HU1983/000023 WO1983003946A1 (en) 1982-05-19 1983-05-19 Method and device for the genetic characterization and the qualitative sorting of vegetables, particularly cultivation vegetable varieties
AU15570/83A AU1557083A (en) 1982-05-19 1983-05-19 Verfahren und einrichtung zur genetischen characterisierung und qualifizierung von pflanzen insbesondere von gezuchteten kulturpflanzensorten
EP19830901607 EP0108782A4 (en) 1982-05-19 1983-05-19 Method and device for the genetic characterization and the qualitative sorting of vegetables, particularly cultivation vegetable varieties.

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU821582A HU183928B (en) 1982-05-19 1982-05-19 Process and apparatus for genetical characterizing and qualifying plants, first of all sorts of cultivated plants

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HU183928B true HU183928B (en) 1984-06-28

Family

ID=10955130

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU821582A HU183928B (en) 1982-05-19 1982-05-19 Process and apparatus for genetical characterizing and qualifying plants, first of all sorts of cultivated plants

Country Status (5)

Country Link
EP (1) EP0108782A4 (en)
AU (1) AU1557083A (en)
HU (1) HU183928B (en)
IT (1) IT8348317A0 (en)
WO (1) WO1983003946A1 (en)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2961727B1 (en) * 2010-06-28 2013-03-01 Seco E P B DAMPING MEANS FOR TOOL HOLDERS, SUCH AS ALESER HEAD,

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2513840A1 (en) * 1974-04-02 1975-10-23 Commw Scient Ind Res Org REAGENT FOR THE COLORIMETRIC DETERMINATION OF PROTEIN, METHOD FOR DETERMINATION OF PROTEIN USING THE APPLICABLE REAGENT AND DEVICE FOR CARRYING OUT THE METHOD
SU565242A1 (en) * 1975-06-09 1977-07-15 Институт питания АМН СССР Device for producing gradient polyacrylamide gel
SU830239A1 (en) * 1979-09-07 1981-05-15 Всесоюзный Ордена Ленина И Орденатрудового Красного Знамени Селек-Ционно-Генетический Институт Method of determining protein content in grain
DK72380A (en) * 1980-02-19 1981-08-20 Foss Electric As PROCEDURE FOR DETERMINING ONE OR MORE COMPONENTS IN A TEST
SU960625A1 (en) * 1980-03-25 1982-09-23 Хабаровский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Method of determination of soluble skin protein fraction composition

Also Published As

Publication number Publication date
WO1983003946A1 (en) 1983-11-24
EP0108782A4 (en) 1984-10-25
EP0108782A1 (en) 1984-05-23
IT8348317A0 (en) 1983-05-18
AU1557083A (en) 1983-12-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kowles et al. DNA amplification patterns in maize endosperm nuclei during kernel development
Moran Intraspecific variability in herbivore performance and host quality: a field study of Uroleucon caligatum (Homoptera: Aphididae) and its Solidago hosts (Asteraceae)
Islam Identification of wheat-barley addition lines with N-banding of chromosomes
Guerra et al. Somatic embryogenesis in Araucaria angustifolia (BERT) O. KTZE
Hammami et al. Prolamin storage proteins and alloploidy in wild populations of the small grass Brachypodium distachyon (L.) P. Beauv.
Cerović et al. Functionality of embryo sacs as related to their viability and fertilization success in sour cherry
CN108841982B (en) The Molecular Identification of fasciation capsicum annum fasciculatum Fertile cytoplasm marks and keeps system selective breeding method
Kroupin et al. Comparative molecular cytogenetic characterization of partial wheat-wheatgrass hybrids
Cremonini et al. Nuclear DNA content, chromatin organization and chromosome banding in brown and yellow seeds of Dasypyrum villosum (L.) P. Candargy
Minelli et al. Nucleotype and phenotype in Vicia faba
Morrison et al. CYTOGENETIC STUDIES IN THE GENUS HORDEUM: II. INTERSPECIFIC AND INTERGENERIC CROSSES
HU183928B (en) Process and apparatus for genetical characterizing and qualifying plants, first of all sorts of cultivated plants
Hossain et al. Intergeneric and interspecific hybrids through in vitro ovule culture in the Cruciferae
Ma et al. GISH and AFLP analyses of novel Brassica napus lines derived from one hybrid between B. napus and Orychophragmus violaceus
CN110273018A (en) Fertile mandarin orange SSR molecular marker and its application
Melz et al. Chromosome locations of genes controlling ‘purple leaf base’in rye and wheat
Tuna et al. Determination of nuclear DNA content and ploidy of Hypericum perforatum L. accessions collected from Western Turkey
Savenko et al. Cyto-histological aspects of haploid androgenesis when obtaining haploids/doubled haploids in rice (Oryza sativa L.) anther culture in vitro
CN112175059A (en) Method for identifying purity of wheat seeds in early development stage of seeds
Jha et al. A comparative karyo-morphometric analysis of Indian landraces of Sesamum indicum using EMA-giemsa and fluorochrome banding
SU1546022A1 (en) Method of identification of genotype of perenneal grasses of the wheat
Conkle et al. Use of isoenzyme techniques in forest genetics research
Weber Use of maize monosomics for gene localization and dosage studies
Collins et al. Cytophotometric determination of DNA content in Nicotiana megachromosomes
Van Tuyl et al. Identification of interspecific hybrids and determination of relationships between species in the genus Lilium by isoelectric focusing

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee