DE2513840A1 - REAGENT FOR THE COLORIMETRIC DETERMINATION OF PROTEIN, METHOD FOR DETERMINATION OF PROTEIN USING THE APPLICABLE REAGENT AND DEVICE FOR CARRYING OUT THE METHOD - Google Patents
REAGENT FOR THE COLORIMETRIC DETERMINATION OF PROTEIN, METHOD FOR DETERMINATION OF PROTEIN USING THE APPLICABLE REAGENT AND DEVICE FOR CARRYING OUT THE METHODInfo
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Description
HENKEL, KERN, FEILER&HÄNZELHENKEL, KERN, FEILER & HÄNZEL
Telefon- (0 891 β«3i 97 «w„ q, EDUARD-SCHMID-STRASSE 2 wechselbankMünchenNr.ais-esiiiTelephone- (0 891 β «3i 97« w „q, EDUARD-SCHMID-STRASSE 2 exchange bank, Munich No.ais-esiii
Commonwealth Scientific and
Industrial Research Organisation,
Campbell, AustralienCommonwealth Scientific and
Industrial Research Organization,
Campbell, Australia
Reagens zur kolor!metrischen Bestimmung von Protein, Verfahren zur Bestimmung von Protein unter Verwendung des betreffenden Reagenses und Vorrichtung zur DurchführungReagent for the colorimetric determination of protein, method for the determination of protein using the relevant reagents and device for implementation
des Verfahrensof the procedure
Die Erfindung betrifft die rasche und bequeme Bestimmung der Proteinkonzentration in menschlichen und tierischen Nahrungsmitteln und dergleichen. Insbesondere betrifft die Erfindung Verbesserungen in der Biuret-Technik der Proteinbestimmung, wobei ein in alkalischer Lösung extrahiertes Protein mit einem Kupfersalz unter Bildung einer zur kolor!metrischen Analyse geeigneten violetten Färbung komplexgebunden wird. Obwohl sich die erfindungsgemäß verbesserte Bestimmung insbesondere zur Routinebestimmung des Proteingehalts von Körnerfrüchten, wie Weizen und Gerste, eignet (und im Zusammenhang damit näher erläutert wird), ist sie selbstverständlich nicht nur auf die Bestimmung des Proteingehalts von Körnerfrüchten beschränkt .The invention relates to the rapid and convenient determination of protein concentration in human and animal species Food and the like. In particular, the invention relates to improvements in the biuret technique of US Pat Protein determination, whereby a protein extracted in an alkaline solution is mixed with a copper salt to form a violet color suitable for colorimetric analysis is complex-bound. Although the determination improved according to the invention is particularly suitable for routine determination the protein content of grains, such as wheat and barley, is suitable (and in connection with it more closely is of course not limited to determining the protein content of grains .
In der Literatur sind zahlreiche Biuret-Techniken beschrieben. Diese eignen sich jedoch in der Regel nicht zurNumerous biuret techniques are described in the literature. However, these are usually not suitable for
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Dr.F/rmDr.F / rm
Routineanalyse im Handel und Gewerbe. So beschreibt beispielsweise Pinkney in "Cereal Chem.", Band 26, Seite 423 (1949), ein Verfahren, bei welchem mittels einer Kaliumhydroxidlösung peptisiertes Protein mit Kupfersulfat, das mittels einer geringen Menge Glyzerin in alkalischer Lösung stabilisiert wurde, behandelt wird. Bei diesem Verfahren kommt es bei der Untersuchung bestimmter Arten von Körnerfrüchten zu Störungen in der Farbbildung. Jennings beschreibt in "Cereal Chemistry", Band 38, Seite 467 (1961), ein weiteres Reagens, bei dem durch Ersatz des Glyzerins durch Kaliumnatriumtartrat eine erhöhte Empfindlichkeit erreicht wird. Ein Nachteil beider Techniken ist ihre relativ lange Reaktionsdauer. Ein rascheres Verfahren, bei welchem Isopropanol verwendet wird und ferner die Probe, das Isopropanol und Kupfercarbonat gemischt werden, wurde von Johnson & Craney gemäß "Cereal Chemistry", Band 48, Seite 276 (1971), entwickelt. Die Notwendigkeit, nach dem Abwiegen der Probe drei weitere Wiege- oder Meßvorgänge vornehmen zu müssen, macht dieses Verfahren für eine Routineanalyse ungeeignet.Routine analysis in trade and industry. For example, describes Pinkney in "Cereal Chem.", Volume 26, page 423 (1949), a method in which by means of a potassium hydroxide solution peptized protein with copper sulphate, which is obtained by means of a small amount of glycerine in an alkaline solution has been stabilized. This procedure comes into play when examining certain types of Grains cause disorders in color formation. Jennings describes in "Cereal Chemistry", volume 38, page 467 (1961), Another reagent in which replacing the glycerol with potassium sodium tartrate increases sensitivity is achieved. A disadvantage of both techniques is their relatively long reaction time. A faster process at which isopropanol is used and further the sample that isopropanol and copper carbonate are mixed by Johnson & Craney in "Cereal Chemistry", Volume 48, page 276 (1971). The need after Weighing the sample to have to carry out three more weighing or measuring processes makes this method a routine analysis not suitable.
Erfindungsgemäß werden nun die Nachteile des Standes der Technik vermieden. Die Erfindung beruht auf der Erkenntnis, daß man durch Zusatz eines mit Wasser mischbaren, niedermolekularen aliphatischen Alkohols zu einem Jennings-Reagens ein hochstabiles Reagens in Form einer einzigen Lösung erhält, das eine rasche Farbentwicklung ermöglicht und kaum Trübungsprobleme aufwirft. Unter einem "Jennings-Reagens" ist hier und im folgenden ein Reagens zu verstehen, welches Kaliumnatriumtartrat, Kaliumhydroxid und einen Lieferanten für Kupfer(II)-Ionen enthält und bei Berührung mit einem Protein eine violette Färbung bildet.According to the invention, the disadvantages of the prior art are now avoided. The invention is based on the knowledge that by adding a water-miscible, low molecular weight aliphatic alcohol to a Jennings reagent a highly stable reagent is obtained in the form of a single solution, which enables rapid color development and hardly Poses turbidity problems. A "Jennings reagent" is to be understood here and below as a reagent which Contains potassium sodium tartrate, potassium hydroxide and a supplier of copper (II) ions and in contact with a protein turns purple.
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Erfindungsgemäß wird zusammen mit dem Jennings-Reagens vorzugsweise als Alkohol ein einwertiger Alkohol, insbesondere Isopropanol, verwendet.According to the invention, together with the Jennings reagent A monohydric alcohol, in particular isopropanol, is preferably used as the alcohol.
Vorzugsweise beträgt das Verhältnis von Jennings-Reagens zu Alkohol in dem erfindungsgemäßen, aus einer einzigen Lösung bestehenden Reagens etwa 3 : 2, Der prozentuale Anteil an Alkohol kann etwa 25 bis 50 Vol.-$ der Mischung betragen. Höhere Alkoholgehalte können Trübungsprobleme aufwerfen.Preferably the ratio of Jennings reagent is to Alcohol in the single solution reagent of the present invention is about 3: 2, the percentage of Alcohol can be about 25 to 50 $ by volume of the mixture. Higher alcohol levels can cause turbidity problems.
Für den Fachmann dürfte es selbstverständlich sein, daß die einzelnen Bestandteile des Jennings-Reagens untereinander etwas variiert werden können. Um jedoch möglichst gtinstige Ergebnisse zu erzielen, sollte das Kupfersalz 10 bis 15#> das Kaliumhydroxid 40 bis 70% und das Kaliumnatriumtartrat 20 bis 45$ ausmachen.For the person skilled in the art it should be self-evident that the individual constituents of the Jennings reagent can be varied somewhat from one another. However, for best results, the copper salt should be 10 to 15 %, the potassium hydroxide 40 to 70% and the potassium sodium tartrate 20 to 45%.
Die Analyse läßt sich durch bloßes Vereinigen von Reagens und zu untersuchender Probe, Inlösunggehenlassen des Proteins, Entwickelnlassen der Farben und Bestimmen der Farbkonzentration in einem geklärten Teil des Reaktionsgemisches durchführen. Es sollte so viel Reagens verwendet werden, daß nach der Reaktion des Reagens mit dem verfügbaren Protein ein Überschuß an Kupfer(II)-Ionen vorhanden ist. Bei Weizenmehl mit einem bis zu I5$igen Gehalt an Protein sollten für 2 g Weizenmehl etwa 100 ml des im folgenden beschriebenen Reagenses verwendet werden. Bei Proben mit höherem Gehalt an Protein als 15$ ist es ratsam, beispielsweise 200 ml Reagens auf 2 g Probe zu verwenden. Die Farbentwicklung wird durch Erwärmen deutlich begünstigt. Eine vollständige Farbentwicklung dauert beispielsweise bei einer Temperatur von 20° C mindestens 30 min. VorzugsweiseThe analysis can be carried out by simply combining the reagent and the sample to be examined, letting the protein dissolve, Allowing the colors to develop and determining the concentration of the color in a clarified portion of the reaction mixture carry out. Sufficient reagent should be used after the reagent has reacted with the available one Protein an excess of copper (II) ions is present. at Wheat flour with up to 15% protein should be used about 100 ml of the reagent described below can be used for 2 g of wheat flour. For samples with a higher For example, protein content than $ 15 is advisable Use 200 ml of reagent for 2 g of sample. The color development is clearly favored by heating. One Complete color development takes, for example, at least 30 minutes at a temperature of 20 ° C. Preferably
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sollte die Farbentwicklung mindestens 60 min lang ablaufen gelassen werden. Bei einer Temperatur von 40°C sollte die Farbentwicklung mindestens 20 min lang dauern. Bei einer Temperatur von 70°C läßt sich dagegen die kolorimetrische Bestimmung bereits nach etwa 3 min sicher und mit reproduzierbaren Ergebnissen durchführen. Sofern das filtrierte Gemisch aus Reagens und Probe in einem Kühlschrank gelagert wird, ist die entwickelte Färbung mindestens 24 h stabil. Bei Raumtemperatur ist die Färbung mindestens etwa 2 h stabil.color development should be allowed to proceed for at least 60 minutes. At a temperature of 40 ° C should the color development should take at least 20 minutes. At a temperature of 70 ° C, on the other hand, the colorimetric Carry out the determination safely and with reproducible results after approx. 3 min. Unless that filtered If the mixture of reagent and sample is stored in a refrigerator, the color will develop for at least 24 h stable. The color is stable for at least about 2 hours at room temperature.
Im folgenden wird die Zubereitung eines typischen Reagenses gemäß der Erfindung näher erläutert.The preparation of a typical reagent according to the invention is explained in more detail below.
Zubereitung des Reagenses:Preparation of the reagent:
15 g Kupfer(II)sulfat, 60 g Kaiiumnatriumtartrat und 56 g Kaliumhydroxid wurden in getrennten 500-ml-Anteilen destilliertem Wasser gelöst. Dann wurden die Kupfer(II)sulfatlösung und die Kaliumnatriumtartratlösung in einen 2-1-Kolben überführt. Unter Rühren wurde die Kaliumhydroxidlösung zugesetzt. Dann wurde das Ganze mit destilliertem Wasser auf 2 1 aufgefüllt. Der Kolbeninhalt wurde schließlich in einem 10-1-Behälter gründlich mit 4 1 destilliertem Wasser und 4 1 Isopropanol gemischt.15 g copper (II) sulfate, 60 g potassium sodium tartrate and 56 g Potassium hydroxide was distilled in separate 500 ml portions Dissolved in water. Then the copper (II) sulfate solution and the potassium sodium tartrate solution in a 2-1 flask convicted. The potassium hydroxide solution was added with stirring. Then the whole thing was done with distilled water padded to 2 1. The contents of the flask were finally washed thoroughly with 4 liters of distilled water in a 10-1 container and 4 1 isopropanol mixed.
Analyse von Protein in grobem oder feinem Mehl:Analysis of protein in coarse or fine flour:
Es wurden etwa 2 g des feinen Mehls oder von auf eine Teilchengröße von kleiner als 0,175 mm (80 mesh) vermahlenem Weizen oder einer auf eine entsprechende Teilchengröße gemahlenen sonstigen Körnerfrucht abgewogen. Die Probe wurde mit 100 ml des in der geschilderten Weise hergestelltenIt got about 2 grams of the fine flour or down to one particle size of less than 0.175 mm (80 mesh) milled wheat or one milled to an appropriate particle size other grains weighed. The sample was prepared with 100 ml of the as described above
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Biuret-Reagens gemischt, worauf die erhaltene Mischung 4 1/2 min lang bei einer Temperatur von 7O°C gerührt wurde. Nach dem Abfiltrieren eines 10-ml-Anteils durch ein Glasfaserfilterpapier wurde die Absorption des Filtrats bei 550 nm aufgezeichnet.Biuret reagent mixed, and the resulting mixture was stirred for 4 1/2 minutes at a temperature of 70 ° C. After filtering off a 10 ml portion through a glass fiber filter paper, the absorption of the filtrate became recorded at 550 nm.
Analyse des Proteins in Lösung:Analysis of the protein in solution:
Eine bestimmte Menge einer Lösung, die schätzungsweise bis zu 15 mg Protein in einem geeigneten Lösungsmittel, z.B. Wasser, einer Pufferlösung, einer Harnstofflösung und dergleichen, enthielt, wurde z.B. in einem Wirbelmischer gründlich mit 10 ml des in der geschilderten Weise hergestellten Biuret-Reagens gemischt. Die erhaltene Mischung wurde dann 20 min lang bei einer Temperatur von 40°C inkubiert und schließlich zur Entfernung sämtlicher Trübstoffe 10 min lang zentrifugiert (13000 xg) oder durch ein Glasfaserfilter filtriert. Schließlich wurde die Absorption des Zentrifugats bzw. Filtrats gegen eine sämtliche Bestandteile mit Ausnahme von Protein enthaltende Blindprobe bei 550 nm abgelesen.A certain amount of a solution estimated to contain up to 15 mg of protein in a suitable solvent, e.g. Water, a buffer solution, a urea solution and the like was mixed in, for example, a vortex mixer mixed thoroughly with 10 ml of the biuret reagent prepared as described above. The mixture obtained was then incubated for 20 minutes at a temperature of 40 ° C. and finally to remove all turbid substances Centrifuged (13,000 xg) for 10 min or filtered through a glass fiber filter. Finally there was absorption of the centrifugate or filtrate against a blank sample containing all components with the exception of protein read at 550 nm.
Wenn man der angegebenen Vorschrift folgt, werden genauestens reproduzierbare analytische Ergebnisse erhalten, die darüber hinaus in linearer Beziehung mit üblichen Kjeldahl-Analysen derselben Proben stehen* Aus der später folgenden Tabelle geht die Beziehung Biuret/Kjeldahl bei der Untersuchung einer Reihe von Proben mit verschiedenen Proteingehalten und Korngrößen hervor.If one follows the specified procedure, precisely reproducible analytical results are obtained that are above also in a linear relationship with common Kjeldahl analyzes The same samples are * The table below shows the Biuret / Kjeldahl relationship in the investigation a number of samples with different protein contents and grain sizes.
Die mit dem erfindungsgemäßen Reagens und dem erfindungsgemäßen Bestimmungsverfahren gegenüber den bekannten Reagentien und Bestimmungsverfahren erzielbaren Vorteile lassen sich wie folgt zusammenfassen:Those with the reagent according to the invention and the determination method according to the invention compared with the known reagents and determination methods achievable advantages can be summarized as follows:
"-6-509843/0801 "-6- 509843/0801
1. Es wird lediglich ein einziges Reagens benötigt, das sich (a) leicht herstellen läßt und (b) stabil ist.1. Only a single reagent is required (a) is easy to manufacture and (b) is stable.
.2. Es ist für jede Probe lediglich eine Reagensabmessung erforderlich..2. Only one reagent dimension is required for each sample.
3. Die Farbentwicklung hängt nicht von einer Wechselwirkung mit einem unlöslichen Reagensanteil ab.3. The color development does not depend on any interaction with an insoluble portion of the reagent.
4. Das Verfahren läßt sich zur Schnellanalyse entwickeln.4. The method can be developed for rapid analysis.
5. Das Verfahren läßt sich mit unlöslichen Proben durchführen. 5. The procedure can be carried out with insoluble samples.
6. Die analytische Reproduzierbarkeit ist hoch, wobei die Standardabweichung etwa 0,08 mg Protein beträgt.6. The analytical reproducibility is high, the standard deviation being about 0.08 mg protein.
7. Ohne merklichen Verlust an Genauigkeit lassen sich Proben bis herunter zu 50 mg einsetzen.7. Samples down to 50 mg can be used without any noticeable loss of accuracy.
8. Die Ergebnisse stehen mit nach der üblichen Kjeldahl-Methode ermittelten Vergleichsanalysen in linearer Beziehung. 8. The results are based on the usual Kjeldahl method determined comparative analyzes in a linear relationship.
Der wesentlichste Vorteil des erfindungsgemäßen Reagenses ist, daß es die Möglichkeit einer automatischen oder halbautomatischen Proteinanalyse eröffnet. Folglich umfaßt die Erfindung auch automatische oder halb-automatische Verfahren und hierzu geeignete Vorrichtungen zur Bestimmung des Proteingehalts von zerkleinerten Nahrungsmitteln.The main advantage of the reagent according to the invention is that there is the possibility of an automatic or semi-automatic Protein analysis opened. Consequently, the invention also encompasses automatic or semi-automatic methods and devices suitable for this purpose for determining the protein content of comminuted foods.
Eine zur automatischen oder halb-automatischen Proteinbestimmung mittels eines erfindungsgemäßen Reagenses geeignete Vorrichtung enthält.One for automatic or semi-automatic protein determination contains suitable device by means of a reagent according to the invention.
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1) ein mit einer Rührvorrichtung versehenes und zu erwärmendes Reaktionsgefäß;1) one provided with a stirrer and to be heated Reaction vessel;
2) eine Einrichtung zum Füllen des Reaktionsgefäßes mit geeigneten Mengen an Reagens und Probe;2) a device for filling the reaction vessel with suitable Amounts of reagent and sample;
3) eine Einrichtung zugsteuerung der Temperatur und Aufenthaltsdauer des Reagens und der Probe in dem Reaktionsgefäß; 3) a device to control the temperature and length of stay the reagent and sample in the reaction vessel;
4) eine Einrichtung zum Austragen einer gegebenen Menge des Reaktionsgemische aus dem Reaktionsgefäß nach beendetem Rühren und Erwärmen;4) means for discharging a given amount of the reaction mixture from the reaction vessel after completion Stirring and heating;
5) eine Einrichtung zum Klären des abgetrennten Teils des Reaktionsgemische;5) means for clarifying the separated portion of the reaction mixture;
6) eine Einrichtung zur Durchführung einer kolorimetrischen Bestimmung an dem geklärten Teil des Reaktionsgemische und6) a device for carrying out a colorimetric determination on the clarified part of the reaction mixture and
7) eine Einrichtung, mit deren Hilfe - abgesehen von der Zufuhr des Reagenses und der Probe zu der Vorrichtung der Durchtritt des Reaktionsgemische durch die Vorrichtung automatisch gesteuert wird.7) a device with the help of which - apart from the supply of the reagent and the sample to the device of the Passage of the reaction mixture through the device is controlled automatically.
Der Betrieb einer die genannten Einrichtungen aufweisenden Vorrichtung wird nun im Zusammenhang mit dem in Figur 1 dargestellten Fließschema näher erläutert. Zu Beginn des Bestimmungsverfahrens wird das Reagens aus einem Vorratsbehälter 1 entnommen, wobei eine Proportioniereinrichtung 2 eine solche Menge abmißt, die in gegebenem Verhältnis zum Gewicht einer zu analysierenden Probe steht. Die abgemessene Reagensmenge wird dann in ein Reaktionsgefäß 3 eindosiert. Das Reaktionsgefäß 3 wird auch mit der zu analysierenden Probe beschickt. Das Gemisch aue Reagene und ProbeThe operation of a device having the said devices will now be shown in connection with that shown in FIG Flow chart explained in more detail. At the beginning of the determination process, the reagent is taken from a storage container 1 taken, wherein a proportioning device 2 measures such an amount that in a given ratio to The weight of a sample to be analyzed. The measured amount of reagent is then metered into a reaction vessel 3. The reaction vessel 3 is also charged with the sample to be analyzed. The mixture of reagents and sample
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wird schließlich eine gsgsbens Seit bei gegebener Temperatur (die mittels eines Heismantels oder einer Heizschlange aufrechterhalten wird) gerührt, wobei eine Farbentwicklung eintritt. Wenn las >ühren --sizigestellt wird, ifird. das Reaktionsgemisch sine Zeitlang absetzen gelassen. Die überstehende Flüssigkeit wird über ein Filter 4 einem Kolorimeter 5 zugeführt. Der Durchtritt des gesamten Materials durch die Vorrichtung wird durch .geeignetes Betätigen (beispielsweise mittels sines nicht-dargestellten Zeitgebers) von Ventilen 6, 7, 8, 9 und 10 gesteuert. Die Anordnung der einzelnen Vorrichtungsteile entsprechend Figur 1 ist vom Reagensvorratsbehälter zum Kolorimeter senkrecht fortschreitend. In einer solchen Vorrichtung kann man die Schwerkraft ausnützen. Für den Fachmann dürfte ss selbstverständlich keine Schwierigkeiten bereiten, dia einzelnen Vorrichtungsteile in anderer Weise zueinander anzuordnen, wobei dann der Materialtransport beispielsweise mit Hilfe von Pumpen und Ansaughebern unterstützt wird.eventually becomes a gsgsbens side at a given temperature (maintained by means of a heating mantle or heating coil), with color development entry. If read> ou - is displayed, ifird. the reaction mixture let sine down for a while. The protruding Liquid is fed to a colorimeter 5 via a filter 4. The passage of all the material through the device is activated by appropriate actuation (for example by means of a timer (not shown) of valves 6, 7, 8, 9 and 10 controlled. The arrangement of the individual device parts according to Figure 1 is from the reagent reservoir advancing perpendicular to the colorimeter. In such a device one can make use of the force of gravity. The individual device parts should of course not cause any difficulties for the person skilled in the art to be arranged in a different way to each other, in which case the material transport, for example, with the aid of pumps and Suction lifters is supported.
Obwohl eine Proportioniereinrichtung keinen wesentlichen Bestandteil der Vorrichtung 'bildet, "bietet eine diesbezüglich geeignet ausgestaltete automatische Einrichtung den zusätzlichen Vorteil einer Vermeidung von Wägefehlern und vermag ferner, die Zeit bis zur Beendigung siner Analyse zu beschleunigen. Erfindungsgemäß hat sich eine in Figur 2 schematisch dargestellte Einrichtung als besonders Torteilhaft erwiesen. Bei dieser Einrichtung ist auf einer Hebelunterlage ein Träger 11 gelagert. An einem Ende des Trägers 11 befindet sich ein Probenhalter 13, am anderen Ende ein Gegengewicht 14. Am Träger 11 hängt auf derselben Seite der Hebelunterlage, auf der sich auch die Probe befindet, an einer Stelle, die entsprechend dem gewünschtenAlthough a proportioning device is not essential Part of the device 'forms, "provides one in this regard suitably designed automatic device the additional advantage of avoiding weighing errors and can also speed up the time it takes to complete his analysis. According to the invention, one shown in FIG The device shown schematically proved to be particularly part of the gate. This device is on a lever pad a carrier 11 is mounted. A sample holder 13 is located at one end of the carrier 11 and at the other end a counterweight 14. The support 11 hangs on the same side of the lever pad on which the sample is located. in a place according to the desired
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Verhältnis von Probe und Reagens gewählt wurde, ein Reagenshalter 15 (dies wird später noch näher erläutert). Ferner ist eine Trägersperre 16 vorgesehen, um den Träger in einer fixierten Lage zu halten, wenn keine Bewegung gewünscht wird. Schließlich hängt an dem Träger 11 an bestimmten Stellen (des Trägers) eine Fahne bzw. ein Abdeckflügel 17, die bzw. der einen auf einen photoelektrischen Sensor 18 auftreffenden Lichtstrahl unterbricht. Vorzugsweise wird die Einrichtung automatisch, beispielsweise mittels einer logischen Schaltung, die entsprechend bestimmten Signalen vom Photosensor 18 Ventile 19, 20 und 21 öffnet und schließt und die Trägersperre 16 betätigt, gesteuert, So läßt sich die zu Beginn der Analyse ablaufende Reihenfolge von Ereignissen wie folgt beschreiben:Ratio of sample and reagent has been selected, a reagent holder 15 (this will be explained in more detail later). A carrier lock 16 is also provided to keep the carrier in a fixed position when there is no movement it is asked for. Finally, a flag or a cover wing hangs on the carrier 11 at certain points (of the carrier) 17, the one on a photoelectric Sensor 18 interrupts incident light beam. Preferably the device is automatically, for example by means of a logic circuit, which are determined accordingly Signals from the photosensor 18 valves 19, 20 and 21 opens and closes and the carrier lock 16 is actuated, controlled, The sequence of events at the beginning of the analysis can be described as follows:
1. Wenn der Probenhalter 13 und der Reagenshalter 15 leer sind, ist die Trägersperre 16 außer Eingriff und das Ventil 19 offen. Auf diese Weise läuft das Reagens aus dem Vorratsbehälter in den Reagenshalter 15, bis der Träger so weit nach unten sinkt, daß die Fahne 17 den zum Sensor 18 gerichteten Lichtstrahl unterbricht. Wenn1. When the sample holder 13 and the reagent holder 15 are empty, the carrier lock 16 is disengaged and that Valve 19 open. In this way, the reagent runs from the reservoir into the reagent holder 15 until the The carrier sinks so far down that the flag 17 interrupts the light beam directed to the sensor 18. if
2. das Ventil 19 geschlossen und das Ventil 20 geöffnet werden, wird so lange das Reagens aus dem Reagenshalter 15 abgesaugt, bis der Träger sich wieder so weit hebt, daß der Lichtstrahl erneut auf den Sensor 18 auftreffen kann, wenn das Ventil 20 geschlossen und die Trägersperre in Eingriff gebracht werden. Der Probenhalter ist nun austariert worden.2. The valve 19 is closed and the valve 20 is opened as long as the reagent is removed from the reagent holder 15 until the carrier rises so far that the light beam strikes the sensor 18 again can when the valve 20 is closed and the carrier lock engaged. The sample holder has now been balanced.
3. Der Probenhalter wird mit der Probe gefüllt.3. The sample holder is filled with the sample.
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4. Die Trägersperre wird außer Eingriff gebracht, so daß der Träger so weit sinkt, bis die Fahne 17 erneut den Lichtstrahl unterbricht. Aufgrund der hierdurch bedingten öffnung des Ventils 21 wird Reagens aus dem Reagenshalter 15 in das Reaktionsgefäß oder ein zwischengeschaltetes Auffanggefäß gesaugt, bis sich der Träger wieder so weit hebt, daß die Fahne den Lichtstrahl wieder freigibt. Hierdurch wird das Ventil 21 geschlossen und die Trägersperre erneut betätigt. Auf diese Weise steht die Menge an in das Reaktionsgefäß oder das zwischengeschaltete Gefäß abgelassenen Reagenses im selben festen bzw. gegebenen Verhältnis zur Probenmenge, und zwar unabhängig von der tatsächlichen Probenmenge (Verhältnis Probe zu Reagens = Abstand Reagenshalter zur Hebelunterlage zu Abstand des Probenhalters zur Hebelunterlage). 4. The carrier lock is disengaged so that the carrier sinks until the flag 17 again Interrupts the light beam. Because of the opening of the valve 21 caused by this, reagent is discharged from the reagent holder 15 sucked into the reaction vessel or an intermediate collecting vessel until the carrier again so far that the flag releases the light beam again. This closes the valve 21 and actuated the carrier lock again. In this way the amount of is available in the reaction vessel or the intermediate one Vessel of discharged reagent in the same fixed or given ratio to the amount of sample, and regardless of the actual amount of sample (ratio of sample to reagent = distance from reagent holder to Lever pad to the distance between the specimen holder and the lever pad).
Indem man die die Proportion!ereinrichtung steuernde logische Schaltung vom Steuermechanismus für den Rest der Vorrichtung unabhängig hält, wird es möglich, den Wäge- und Austariervorgang für eine Analyse durchzuführen, während die vorhergehende Probe durch das Reaktionsgefäß und Kolorimeter läuft.By using the logical control that controls the proportions Circuit is independent of the control mechanism for the rest of the device, it becomes possible to control the weighing and performing taring for an analysis while the previous sample is passing through the reaction vessel and the colorimeter is running.
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Tabelle I
Vergleich von modifizierter Biuret-Analyse und KJeldahl-Analyse Table I.
Comparison of modified biuret analysis and KJeldahl analysis
in % - in der
vorliegenden
Form (as-is
basis)Protein content
in % - in the
present
Form (as-is
Base)
KörnungGrit
Pulverpowder
0,417 mm (40 mesh)0.417 mm (40 mesh)
0,246 mm (60 mesh)0.246 mm (60 mesh)
0,175 mm (80 mesh)0.175mm (80 mesh)
0,147 mm (100 mesh)0.147 mm (100 mesh)
in Lösungin solution
in Lösungin solution
in Lösungin solution
in Lösungin solution
Korrelationskoeffizient Biuret/KjeldahlCorrelation coefficient Biuret / Kjeldahl
0,9947 0,9998 0,99980.9947 0.9998 0.9998
0,9988 0,99960.9988 0.9996
0,9999 0,9981 0,9991 0,99940.9999 0.9981 0.9991 0.9994
Claims (11)
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