HU183115B - Process for producing immunobiological composition for detecting, profilacting and/or treating infections with candida guilliermondii - Google Patents
Process for producing immunobiological composition for detecting, profilacting and/or treating infections with candida guilliermondii Download PDFInfo
- Publication number
- HU183115B HU183115B HU48580A HU48580A HU183115B HU 183115 B HU183115 B HU 183115B HU 48580 A HU48580 A HU 48580A HU 48580 A HU48580 A HU 48580A HU 183115 B HU183115 B HU 183115B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- immunobiological
- candida guilliermondii
- culture
- candida
- animals
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
A találmány tárgya eljárás emlősök Candida guilliermondii-fertőzésének kimutatására, megelőzésére és/vagy kezelésére alkalmas, újtípusú immunbiológiai készítmények előállítására. A találmány értelmében a következőképpen járnak el: a) Candida guilliermondii-törzset aerob körülmények között, 24—42 °C-on, a gomba által asszimilálható szénforrást és nitrogénforrást tartalmazó folyékony táptalajon végzett tenyésztéssel elszaporítanak, majd a kapott populációt vagy populációkat azonos körülmények között fenntartják meghosszabbított tenyésztés céljából, ezután a gombasejteket elkülönítik a tenyészettől, mossák, mechanikai úton feltárják, extrahálják, az extraktumot alkohollal kezelik, és a kapott csapadékot — adott esetben további tisztítás után - immunbiológiai célokra alkalmas készítménnyé alakítják a humán-, állatgyógyászatban alkalmazható formában, pl. allergen, oldódó antigén, oltóanyag formájában, vagy b) Candida guilliermondii-törzset aerob körülmények között, 24—42 °C-on, a gomba által asszimilálható szénforrást és nitrogénforrást tartalmazó folyékony táptalajon 48—72 órán át tenyésztenek, adott esetben 2—3 újabb populáció előállításáig tovább szaporítják, majd a gombasejteket elkülönítik a tenyészettől, mossák, mechanikai úton feltárják, extrahálják, kívánt esetben az extraktumból alkohollal csapadékot választanak le, és a csapadékot — adott esetben további tisztítás után — immunbiológiai célokra alkalmas készítménnyé alakítják a humán-, állatgyógyászatban alkalmazható formában, pl. allergen, oldódó antigén, oltóanyag formájában, vagy c) Candida guilliermondii-törzset aerob körülmények között, 24-42 °C-on, a gomba által asszimilálható szénforrást és nitrogénforrást tartalmazó folyékony vagy szilárd táptalajon 48—72 órán át tenyésztenek, majd a tenyészetet elölik, az elölt sejteket elkülönítik, végül immunbiológiai célokra alkalmas készítménnyé alakítják, a humán-, állatgyógyászatban alkalmazható formá- ban, pl. korpuszkuláris antigén formájában. A Candida guilliermondii-fertőzés laboratóriumi ki- mutatásában reagensként alkalmazható nagy precipitintartalmú vérsavó előállítására az a) eljárásváltozattal előállított készítménnyel immunizálnak, vagy agglutinintartalraú vérsavó előállítására a b) vagy c) eljárásváltozattal előállított immunbiológiai készítménnyel immunizálnak, majd az állatokat elvéreztetik, és az állatok vérsavóját ismert módon elkülönítik. -1-The present invention relates to novel immunological compositions for the detection, prevention and / or treatment of Candida guilliermondii infection in mammals. In accordance with the present invention, the following are performed: a) Candida guilliermondii strain is grown under aerobic conditions at 24-42 ° C by culturing on a liquid medium containing a fungal source and a nitrogen source that can be assimilated by the fungus, and the resulting population or populations are maintained under the same conditions for extended cultivation, then the fungal cells are separated from the culture, washed, mechanically excised, extracted, the extract is treated with alcohol, and the resulting precipitate, optionally after further purification, is transformed into a composition suitable for immunological purposes in human, veterinary medicine, e.g. allergenic, soluble antigen, vaccine, or b) Candida guilliermondii strain is cultured under aerobic conditions at 24-42 ° C on liquid medium containing fungus assimilable carbon source and nitrogen source for 48 to 72 hours, optionally 2 to 3 until the population is produced, the fungal cells are separated from the culture, washed, mechanically excised, extracted, if necessary, the precipitate is separated from the extract by alcohol, and the precipitate is optionally transformed into a composition suitable for human, veterinary medicine after further purification. in form, e.g. allergenic, soluble antigen, inoculant form; or c) Candida guilliermondii strain is cultured under aerobic conditions at 24-42 ° C on liquid or solid medium containing a carbon source and a nitrogen source that can be assimilated by the fungus for 48-72 hours and then cultured , the killed cells are isolated and finally converted into a composition suitable for immunological purposes, in a form suitable for human, veterinary medicine, e.g. corpuscular antigen. Candida guilliermondii infection can be used as a reagent for laboratory detection of high precipitinic acid in the laboratory by immunization with the preparation of process a) or immunized with agglutinin b) or c) for the preparation of agglutinin-containing serum, and the animals are bled and the sera of the animals are isolated by known methods. . -1-
Description
A találmány tárgya eljárás emlősök Candida guilliermondii-fertőzésének kimutatására, megelőzésére és/vagy kezelésére alkalmas, újtípusú immunbiológiai készítmények előállítására. A találmány szerinti eljárással előállított immunbiológiai készítmények különösen előnyösen alkalmazhatók az állatgyógyászatban és a humán gyógyászatban a Candida guilliermondii-fertőzés kimutatására, a fertőzésveszélynek kitett egyedek immunizálására, valamint a betegség gyógykezelésére.The present invention relates to novel immunobiological compositions for the detection, prevention and / or treatment of Candida guilliermondii infection in a mammal. The immunobiological compositions of the present invention are particularly useful in veterinary and human medicine for the detection of Candida guilliermondii infection, for immunization of susceptible individuals, and for the treatment of the disease.
Kérődző állatokon először 1959-ben észlelték a Candida guilliermondii által kiváltott enzootiás candidiasist (Hauptman, B., Jasinska, S., Siedlicka, B.: Infections of sheep with Saccharomycetes, Med. Vet. 17, 22 (1961)). A későbbi vizsgálatok során kitűnt, hogy a Candida guilliermondii szarvasmarhákon elsősorban a húgyivarszerveket támadja meg, és kórokozó szerepet játszik a szarvasmarhák vetéléseiben, a húgyivarszervek és nemi utak (méh, ondóhólyag, mellékhere, tőgy, vese stb.) gyulladásos megbetegedéseiben és számos szaporodásbiológiai rendellenességben. A Candida guilliermondii-fertőzések előfordulását, klinikai, kórbonctani és kórszövettani képét, a gombákon végzett mikrobiológiai vizsgálatok eredményeit és a fertőzött szarvasmarha szervezetéből izolált gombatörzsek taxonómiai besorolását az alábbi közlemények részletesen ismertetik: Sutka P., Mészáros I.: Tenyészbikák C. guilliermondii fertőzöttsége; Magyar Állatorvosok Lapja 33, 151 (1978); Sutka P., Mészáros I.: Candida guilliermondii által fertőzött tenyészbikák szerveinek kórbonctani és kórszövettani vizsgálata; Magyar Állatorvosok Lapja 33, 155 (1978); Sutka P., Rátz F., Dobolyi Cs., Novák E.: Tenyészbikák szerveiből izolált C. guilliermondii törzsek varietas-besorolása és ultrastrukturális vizsgálata; Magyar Állatorvosok Lapja 12, 837 (1978); Decun, M., Rosu, M.: Investigation of normál and pathological microflora of cervical secretions in cattle; Revta Zootech. Vet. Med. 23, 39 (1973).In ruminant animals, enzootic candidiasis caused by Candida guilliermondii was first observed in 1959 (Hauptman, B., Jasinska, S., Siedlicka, B., Infections of Sheep with Saccharomycetes, Med. Vet. 17, 22 (1961)). Subsequent studies have shown that Candida guilliermondii bovine animals primarily target the genitourinary tract and play a pathogenic role in cattle abortion, urinary tract and genital tract (uterus, seminal vesicle, gonorrhea, etc.), kidney, udder, udder, udder. The occurrence, clinical, pathological and histopathological findings of Candida guilliermondii infections, the results of microbiological examinations of fungi and the taxonomic classification of fungal strains isolated from infected bovine organisms are described in detail in Sutka P., Mészáros I., T. Journal of Hungarian Veterinarians 33, 151 (1978); P. Sutka, I. Mészáros: Pathological and histological examination of the organs of breeding bulls infected with Candida guilliermondii; Journal of Hungarian Veterinarians 33, 155 (1978); P. Sutka, F. Rátz, Cs. Dobolyi, E. Novák: Varietal classification and ultrastructural examination of C. guilliermondii strains isolated from the organs of breeding bulls; Journal of Hungarian Veterinarians 12, 837 (1978); Decun, M., Rosu, M.: Investigation of normal and pathological microflora of cervical secretions in cattle; Revta Zootech. Vet. Med., 23, 39 (1973).
A rendelkezésre álló irodalmi adatok alapján a Candida guilliermondii-fertőzés elsősorban kérődző állatokon fordul elő; a gomba azonban az emberre nézve is kórokozó. A Candida guilliermondii gombákat a humán gyógyászatban is kimutatták a legkülönbözőbb kórképekben: húgyúti és nemi utak fertőzésénél (Harding, S. A., Merz, W, E.: J. of Clin. Mic. 2, 222 (1975), szemfertőzéseknél (Segal és munkatársai: Mycopath. Mycol. Appl. 54, 32 (1974)), szívbelhártya-gyulladásnál (Utley, J. R., Milis, J. és munkatársai: Circulation 48, 42 (1973)); továbbá systémás candidiasisok esetében (Kozinn, P. J., Taschdijian, C. J., Claire, L.: Sab. 7, 98 (1969)).According to available literature data, Candida guilliermondii infection is predominantly found in ruminants; however, the fungus is pathogenic to humans. Candida guilliermondii fungi have also been detected in human medicine in a variety of conditions: urinary tract and genital tract infections (Harding, SA, Merz, W, E. J. of Clin. Mic. 2, 222 (1975), and Segal et al., Mycopath. Mycol. Appl. 54, 32 (1974)), in endocarditis (Utley, JR., Milis, J. et al., Circulation 48, 42 (1973)), and in systemic candidiasis (Kozinn, PJ, Taschdijian, CJ). , Claire, L.: Sab. 7, 98 (1969)).
A C. guilliermondii embereken és állatokon többnyire systemas mycosist (vérfertőzést) idéz elő, míg a leggyakrabban diagnosztizált C. albicans fertőzések a szervezet nyálkahártyáin (szájüreg, vagina, gyomor-bélcsatorna), bőrön, körmökön, okoznak elváltozásokat és ritkábban alakulnak át generalizált jellegű általános megbetegedés formájába. Ezért a C. guilliermondii diagnosztizálása főleg systemas candidiasis kimutatását jelenti. A megbetegedések korai felismeréséhez nem elegendő a kórokozó mielőbbi izolálása, morfológiai, biokémiai identifikálása, hanem korszerű, gyors, mykológiai immunológiai módszerek is szükségesek. Az embergyógyászat területén a systemas candidiasis diagnosztizálását elsősorban C. albicans vonatkozásában, főleg ahumorális ellenanyagok laboratóriumi kimutatására alkalmas módszerekkel végzik: agglutináció, latex agglutináció, indirekt 2 fluoreszcencia, Ouchterloni féle immun diffúzió, counter immunelektroforézis (Taschdjian C. L., P. J. Kozzin, Μ. B. Cuesta, E. F. Tonu, 1972: Serodiagnosis of Candida infections. Amer. J. Clin. Pathol. 57, 195-205.; Chemical Abstracts 1978: 4659 m; Remington, J. S., J. D. Gaines, M. A. Gilmer, 1972: Demonstration of Candida precipitins in humán sera by counter immunoelektrophorézis. Láncét I, 413—445.). Bőrgyógyászatban alkalmazást nyertek a késői túlérzékenységi immunválasz kiváltására alkalmas Bencard féle allergenek. A systemas candidiasisok gyógykezelésére az embergyógyászatban csak különböző antimycoticumokat alkalmaznak: amphotericin B, 5-fluorocytosin, miconazol (Stevens, D. A. Drug fór systemic fungal infections. Drug Therapy. 1979.77. 1—7.). Kísérleti immunizálások során nyulakon elölt és gyengített C. albicans sejtekből készített vakcinákkal jó védettséget értek el (Balogh, E., Kakuk, Gy., Halmy, K., Szabolcsi, M. Mykosen, 1970.C. guilliermondii most commonly causes systemic mycosis in humans and animals, while the most commonly diagnosed C. albicans infections cause changes in the mucous membranes of the body (mouth, vagina, gastrointestinal tract), skin, nails, and form of the disease. Therefore, diagnosis of C. guilliermondii mainly involves the detection of systemic candidiasis. Early detection of the disease does not require early isolation, morphological and biochemical identification of the pathogen, but also modern, rapid, mycological immunological methods are required. In the field of human medicine, the diagnosis of systemic candidiasis is primarily performed for C. albicans, mainly by laboratory methods for the detection of ahumoral antibodies: agglutination, latex agglutination, indirect 2 fluorescence, Ouchterloni's immuno-diffusion, P. , EF Tonu, 1972: Serodiagnosis of Candida Infections, Amer. J. Clin. Pathol. 57, 195-205; Chemical Abstracts 1978: 4659; Remington, J. S., J. D. Gaines, M. A. Gilmer, 1972: Demonstration of Candida Precipitates in. human sera by counter immunoelectrophoresis. Chain I, 413-445). Bencard allergens have been used in dermatology to induce a late hypersensitivity immune response. In human medicine, only various antimycotic agents are used in the treatment of systemic candidiasis: amphotericin B, 5-fluorocytosine, miconazole (Stevens, D.A. Drug for systemic fungal infections. Drug Therapy, 1-77, 1979.). In experimental immunizations, vaccines prepared from rabbit killed and attenuated C. albicans cells were well protected (Balogh, E., Kakuk, Gy., Halmy, K., Szabolcs, M. Mykosen, 1970).
14. 385-392.). Azonban az embergyógyászatban Candidákból készült immunbiológiai készítményeket sem a korai túlérzékenységi reakción alapuló immunválasz kimutatására, sem prevenciós oltásokra, ill. gyógykezelésre ezidáig nem alkalmaztak.14. 385-392.). However, in human medicine, Candidas immunobiological preparations should not be used for the detection of an immune response based on an early hypersensitivity reaction, nor for preventive vaccines or vaccines. hitherto not used for medical treatment.
Állatgyógyászatban a candidiasis diagnosztizálása többnyire kórbonctani, kórszövettani elemzésekkel, esetenként a kórokozó Candida izolálásával, morfológiai, biokémiai meghatározásával történik. Ilyen esetekben szerológiai vizsgálatokat is végeznek az izolált gombatörzsből készített antigénekkel (Szpeszivceva, N. A., 1971: Metodu iszledovanija v veterinarnoj mikologii. „Kolosz”. Moszkva.). Állatgyógyászat területén a candidiasisok immunológiai úton történő kimutatása a mai napig nem nyert gyakorlati alkalmazást. Állatorvosi vonatkozásban nincsenek még jól kidolgozva ezek a módszerek. Különösen vonatkozik ez az allergiás diagnosztikai eljárásokra. Azonkívül ezidáig nem rendelkeztek erre alkalmas, megfelelő fajspecifikussággal rendelkező antigénekkel, allergenekkel.In veterinary medicine, the diagnosis of candidiasis is usually done by pathological, histopathological analysis, sometimes by isolation, morphological and biochemical determination of the pathogen Candida. In such cases, serological tests are also carried out on antigens prepared from the isolated fungal strain (Spesivtseva, N.A., 1971: Metodu iszledovanija v veterinarnoj mikologii. "Kolos". Moscow). To date, immunological detection of candidiasis in the veterinary field has not been practically applied. These methods are not yet well developed in the veterinary field. This is especially true for allergic diagnostic procedures. Moreover, until now, they have no suitable species-specific antigens and allergens.
A candidiasisok gyógykezelésére az állatgyógyászatban chemoterápiás készítményeket, különböző antimycotikumokat alkalmaznak (pl.:Yystatin). Az állatgyógyászati C. guilliermondii fertőzések immunbiológiai kimutatásáról, megelőzésére, illetve kezelésére alkalmas immunbiológiai készítményekről nem találtunk ismertetést.Chemotherapy, a variety of antimycotics (such as Yystatin), is used in veterinary medicine for the treatment of candidiasis. No immunobiological agents have been found for the immunobiological detection, prevention or treatment of veterinary C. guilliermondii infections.
A Candidák antigén struktúráját vizsgálva megállapították, hogy az több összetevőből áll, s ezek között specifikus és közös antigének találhatók (J. Biguet et all: Elektrophorese et immunochimie de Candida antigenes. Mycopath. Mycol. Appl. 1962.7 7. 239.)Examining the antigen structure of the Candidates, it was found to be composed of several components, including specific and common antigens (J. Biguet et al., Electrophores et Immunochimie de Candida antigens. Mycopath. Mycol. Appl. 7, 239, 1962).
Kétdimenziós immunelektroforézises eljárással 78 antigén frakciót nyertek egy vékony falú Candida albicans sejtből. A sejtfal 5 rétegből állónak bizonyult az elektronmikroszkópos vizsgálatok alkalmával (Axelsen, Ν. H. 1973: Quantitative immunoelektrophoretic methods as tools fór a polyvalent approach to standartization in the immunochemistry of Candida albicans. Infect. Immun. 7. 949—960.; Drouchet, E. S., Montplaisir 1975:Phenotypes de resistance a la 5-fluorocytosine et rslation avec l’ultra-strukture chez les Candida. Bull. Soc. Fr. Mycol. Med. 4. 115—118.) Kimutatták a Candida polysaccharida elleni IgM és IgC ellenanyagok jelentőségét a candidiasis szerológiai vizsgálatánál. (Müller, H. L. 1974: IgM and IgC-antibodies against Candida polysaccharides in the serodiagnosis of candidiasis. Bull. Soc. Fr. Mycol. Med. 7. 51-52.) Ismertté vált az érintetlen sejtek és aTwo-dimensional immunoelectrophoresis yielded 78 antigenic fractions from a thin-walled Candida albicans cell. The cell wall has been shown to consist of 5 layers for electron microscopic examination (Axelsen, H.H. 1973: Quantitative immunoelectrophoretic methods as tools for polyvalent approach to standardization in the immunochemistry of Candida albicans. Infect. Immun. 7: 949-960; Drouchet, ES, Montplaisir 1975: Phenotypes de resistance to la 5-fluorocytosine and transcription of lucrative structure of Candida Bull. Soc. Fr. Mycol. Med. 4. 115-118.) IgM and IgC against Candida polysaccharida have been detected. the importance of antibodies in serological testing for candidiasis. (Müller, H.L. 1974: IgM and IgC-antibodies against Candida polysaccharides in serodiagnosis of candidiasis. Bull. Soc. Fr. Mycol. Med. 7. 51-52.) Intact cells and
183 115 sejtekből kivont mannán-fehérje összetett vegyületek magas antigén hatása (Tomsikova, A.,Sikl, D., Nováckova, D. 1976: Antigenic activiti of the cell components of C. albicans. Mykosen. 19. 175-182). Azonban a Candida sejt sok antigén hatású anyaga még jelenleg is meghatározásra vár. Mind a szerológiai, mind az allergiás próbákhoz a candidiasis esetében évek óta változatlanul problémát jelent a fajspecifikus antigén előállítása. Főleg a belső sejt antigének előállítása során eddig igénybe vett feltárási eljárások és kivonások (a sejtek autoklávozása, főzése, autolízise, naphtolos hydrolisise, fenolos, acetonos kezelése) alkalmával károsodást szenvedtek natív, eredeti állapotukban olyan fehérjék is, melyek a specifikusságban játszanak szerepet. Ugyanakkor ezekkel az eljárásokkal a sejtekből többnyire a belső antigén természetű anyagoknak csak egy bizonyos részét sikerült kivonni, melyek ugyan jó antigén hatásúnak bizonyultak (pl.: mannán, mannán-protein), de az élesztő sejt faj specifikusságát hordozó fehérjéket, fehérjékhez kötődő többféle hapténeket nem, vagy kis mennyiségben tartalmazták, s az így nyert antigének nem bizonyultak teljes értékűeknek az immundiagnosztika, de főleg az immunprevenció és immunbiológiai gyógykezelések szempontjából. (Szpeszivceva,N. A.: Metodü iszledovánija v veterinarnoj mikologii. „Kolosz”. Moszkva. 1971: Chemical Abstracts: 1968-1129988 p: 1976:—175335; NDK-beli szabadalmi leírás 113843) Ugyancsak az ilyen jellegű antigénekhez sorolható a 23080378 számú NSZK-beli Közrebocsátási iratban foglaltak szerint előállított Candida sejtből leválasztott mannan hapten és a hozzá kötött heterogén fehérje is, melyet a Candidák kizárólagos laboratóriumi szerológiai identifikálására dolgoztak ki. A találmányunk tárgyát képező feltárt antigének a 2308037 számú NSZK-beli Közrebocsátási iratban leírtak szerint előállított C. guilliermondii antigéntől lényegében azzal különböznek, hogy tartalmazzák a C. guilliermondii sejt fajspecifikus fehérjéit a mannan, lipoid és egyéb haptenek mellett, valamint más antigén hatású anyagokat.High antigenic activity of mannan-protein compound compounds extracted from 183,115 cells (Tomsikova, A., Sikl, D., Nováckova, D. 1976: Antigenic activity of cellular components of C. albicans. Mykosen, 19. 175-182). However, many antigenic substances in Candida cells are still to be determined. For both serological and allergic tests, the production of species-specific antigen has been a problem for many years in candidiasis. Especially during the production of intracellular antigens, the exploration procedures and extractions (autoclaving, cooking, autolysis, naphthol hydrolysis, phenol, acetone treatment) used to date have also damaged native proteins that play a role in their specificity. At the same time, these methods were able to extract only a fraction of the intrinsic antigenic material from the cells, which, although they had good antigenic activity (eg, mannan, mannan protein), did not remove the proteins that carry the yeast cell species specificity, , or in small amounts, and the antigens so obtained have not been shown to be of complete value for immune diagnostics, but especially for immunoprevention and immunobiological therapies. (Spesivtseva, NA: Methododisledovaniya v veterinarnoj mycologii. "Kolos". Moscow. 1971: Chemical Abstracts: 1968-1129988 p: 1976: -175335; GDR Patent 113843) Similarly, such antigens can be classified in GDR 23080378. The mannan hapten isolated from Candida cells and the heterogeneous protein bound thereto have been developed for the exclusive laboratory serological identification of Candida. The disclosed antigens of the present invention differ substantially from the C. guilliermondii antigen produced as described in German Patent Publication No. 2308037 in that they contain C. guilliermondii cell-specific protein in addition to mannan, lipoid and other hapten and other antigenic agents.
Az utóbbi időben a Candida sejt mechanikai úton történő feltárásával és az oldható komponensek különböző centrifugálásával állítottak elő antigéneket, melyeket jelenleg is használnak a latex agglutinációs,immundiffúziós, counter immunprecipitaciós eljárásokhoz (Palmer, D. F. és munkatársai: Serodiagnosis of mycotic diseases. Charles C. Thomas. Illinois, Amerikai Egyesült Államok: 1977; 4.051,232 számú Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás).Recently, antigens have been produced by mechanical digestion of Candida cells and various centrifugation of soluble components, which are currently used for latex agglutination, immunodiffusion, counter immunoprecipitation methods (Palmer, DF et al., Serodiagnosis of mycotic diseases. Charles C. Thomas. Illinois, United States, 1977; U.S. Patent 4,051,232.
Találmányunk újdonsága, haladó jellege a fenti eljárásokhoz viszonyítva az antigén előállítás vonatkozásában magában foglalja a C. guilliermondii sejt mechanikai úton történő feltárásán kívül az élettani konyhasóval végzett extrakciót, az evtraktum előnyös alkoholos kezelését, a csapadék adott esetben további tisztítását, s az ezt követő immunbiológiai készítménnyé alakítását (pl.: antigén-liofilizált ampulla kiszerelésben). Találmányunk szerint ily módon előállított oldódó antigének az alkalmazott előnyös kivonás következtében a C. guilliermondii sejt elsősorban fajspecifikus fehérjéit, fehérjékhez kötődő hapteneket, valamint más eddig ismeretlen antigén hatású anyagokat tartalmazzák. Ezért az ezidáig előállított antigénekhez viszonyítva a találmány szerint előállított antigének immunbiológiai hatáskifejtés vonatkozásában hatékonyabbak.The novel and advanced nature of the present invention in comparison to the above methods for antigen production involves, in addition to mechanical digestion of the C. guilliermondii cell, extraction with physiological saline, preferred alcohol treatment of the extract, optionally further purification of the precipitate, and subsequent immunobiological preparation. formulation (e.g., antigen-lyophilized ampoule formulation). According to the present invention, due to the advantageous extraction used, the soluble antigens produced in this way contain primarily species-specific proteins, protein-binding hapten and other antigenic substances which have not been previously known. Therefore, compared to hitherto produced antigens, the antigens of the present invention are more effective in immunobiological activity.
A systemas candidiasisok laboratóriumi úton történő kimutatására alkalmazott ismertetett eljárások a rutin gyakorlatnál magasabb fokú felkészülést igényelnek. Ezidáig nem rendelkeztek olyan fajspecifikus C. guilliermondii antigénekkel, melyekkel a beteg ágyánál, vagy a rutin szűrővizsgálatok alkalmával az állatorvosi gyakorlatban a helyszínen kimutatható lenne a fertőzöttség. Uj és haladó jellegű találmányunk magában foglalja az ilyen antigének előállítási eljárásának a kidolgozását.The methods described for the laboratory detection of systemic candidiasis require a higher degree of preparation than routine practice. To date, no species-specific C. guilliermondii antigens have been identified that could detect infections at the patient's bedside or during routine screening in the veterinary practice. Our new and advanced invention includes the development of a process for the preparation of such antigens.
Az antigén készítés során többnyire csak a Candidák 48—72 órás tenyészeteinek sejtjeiből állítottak elő antigén hatású anyagokat. Ezidáig nagyon keveset foglalkoztak a Candida sejtben a prolongált tenyésztés alkalmával végbemenő változásokkal, s az ott képződő anyagokkal. Pedig in vivő, a fertőzött, beteg szervezetben különböző korú Candida sejtek termékei is megtalálhatók. Először állapítottuk meg, hogy a prolongált tenyésztés alkalmával a Candida sejtben olyan új anyagok keletkeznek, melyek helyszínen alkalmazhatók a korai túlérzékenységi próba kiváltására, és a csőprecipitáeiós diagnosztikai eljárás kivitelezésére, valamint a gombával fertőzött, beteg szervezet immunbiológiai jellegű gyógykezelésére. Uj és haladó jellegű találmányunk magában foglalja ezeknek az anyagoknak az általunk először kidolgozott előállítási eljárását. Felhasználásukkal állategészségügyi vonatkozásban lehetővé válik az állományok laboratóriumi jellegű szűrővizsgálata mellett a farmokon, közvetlenül a helyszínen a gyors diagnosztizálás végrehajtása a korai túlérzékenységi reakción alapuló bőrpróba és szérum csó'precipitáció alkalmazásával.In antigen preparation, only antigenic agents were produced from cells of Candidat cultures for 48-72 hours. So far, very little attention has been paid to changes in Candida cells during prolonged culture and the substances formed there. However, in vivo, the infected, diseased organism also contains products of Candida cells of various ages. First, it has been established that during prolonged culture, new substances are generated in the Candida cell that can be used locally to induce an early hypersensitivity test and to carry out a tubular Precipitation diagnostic procedure and immunobiological treatment of a fungal infected patient. Our new and advanced invention includes a process for the first development of these materials which we have developed. In addition to laboratory screening of herds, they allow rapid diagnosis on the farm, directly on the spot, using a skin test based on an early hypersensitivity reaction and serum tubing precipitation.
Figyelembe véve, hogy a Candida guilliermondii-fertőzés kérődző állatokon (elsősorban az élelmiszeripari szempontból alapvető jelentőségű szarvasmarhákon) komoly vérfertőzéssel, húgyivarszervi és szaporodásbiológiai rendellenességekkel, tejtermelési zavarokkal, az ezzel járó közegészségügyi problémákkal is járó megbetegedéseket vált ki, amelynek következtében igen komoly gazdasági kár keletkezik, igen nagy' szükség van a fertőzés kimutatására, megelőzésére, illetve kezelésére alkalmas állatgyógyászati készítményekre. Ezek a készítmények megfelelő kiszerelési formában - a gomba humán kórokozó jellegére tekintettel — a humán gyógyászatban is alkalmazhatók. A találmány ilyen készítmények előállítására vonatkozik.Considering that Candida guilliermondii infection in ruminants (primarily cattle of food-related importance) results in serious blood infection, urinary and reproductive disorders, there is a great need for veterinary medicines for the detection, prevention or treatment of infection. These formulations can also be used in human medicine in suitable formulations, given the human pathogen nature of the fungus. The present invention relates to the preparation of such compositions.
A Candida guilliermondii-fertőzés kimutatására, megelőzésére és/vagy kezelésére alkalmas immunbiológiai készítményeket a találmány értelmében a következőképpen állítjuk elő:Immunobiological compositions for the detection, prevention and / or treatment of Candida guilliermondii infection according to the present invention are prepared as follows:
a) Candida guilliermondii törzset aerob körülmények között, 24-42 °C-on, előnyösen 32-38 °C-on a gomba által asszimilálható szénforrást és nitrogénforrást tartalmazó folyékony táptalajon végzett tenyésztéssel elszaporítunk, majd a kapott populációt, vagy populációkat azonos körülmények között fenntartjuk meghosszabbított tenyésztés céljából, ezután a gombasejteket elkülönítjük a tenyészettől, előnyösen élettani konyhasó oldattal mossuk, mechanikai úton (így őrléssel és/vagy ultrahangos kezeléssel) feltárjuk, előnyösen élettani konyhasó oldattal extraháljuk, az extraktumot szerves oldószerrel, előnyösen alkohollal, még előnyösebben etanollal kezeljük, és a kapott csapadékot — adott esetben további tisztítás után - immunbiológiai célokra alkalmas készítménnyé alakítjuk; vagya) The Candida guilliermondii strain is propagated under aerobic conditions at 24-42 ° C, preferably 32-38 ° C, in liquid medium containing the fungal assimilable carbon source and the nitrogen source and maintaining the resulting population or populations under the same conditions. for extended cultivation, the fungal cells are then separated from the culture, preferably washed with physiological saline solution, mechanically (such as by grinding and / or sonication), preferably extracted with physiological saline solution, and the extract is treated with an organic solvent, converting the resulting precipitate, if appropriate after further purification, into a formulation suitable for immunobiological purposes; obsession
b) Candida guilliermondii-törzset aerob körülmények között, 24-42 °C-on, előnyösen 32-38 °C-on a gombab) Candida guilliermondii strain under aerobic conditions at 24-42 ° C, preferably 32-38 ° C.
-3183 115 által asszimilálható szénforrást és nitrogénforrást tartalmazó folyékony táptalajon 48—72 órán át tenyésztünk, adott esetben 2—3 újabb populáció előállításáig tovább szaporítjuk, majd a gombasejteket elkülönítjük a tenyészettől, előnyösen élettani konyhasó oldattal mossuk, 5 mechanikai úton (így őrléssel és/vagy ultrahangos kezeléssel) feltárjuk, előnyösen élettani konyhasó oldattal extraháljuk (ez az extraktum a kívánt fehérjetartalom beállítása után antigénként alkalmazható a laboratóriumi vizsgálatokhoz), és adott esetben tisztább hatóanyag előállítása céljából az extraktumhoz szerves oldószert, előnyösen alkoholt, még előnyösebben etanolt adunk, a kapott csapadékot pedig — adott esetben további tisztítás után — immunbiológiai célokra alkalmas készítménnyé alakítjuk; vagy 15-3183115 is grown for 48-72 hours on liquid medium containing assimilable carbon sources and nitrogen sources, optionally further producing up to 2-3 new populations, and the fungal cells are separated from the culture, preferably washed with physiological saline, by mechanical means (e.g. or by sonication), preferably extracted with physiological saline solution (this extract can be used as an antigen for laboratory tests after adjusting the desired protein content) and optionally an organic solvent, preferably alcohol, more preferably ethanol, is added to the extract. and, if necessary after further purification, converting it to a composition suitable for immunobiological purposes; or 15
c) Candida guilliermondii-törzset aerob körülmények között, 24—42 °C-on, előnyösen 32-38 °C-on a gomba által asszimilálható szénforrást és nitrogénforrást tartalmazó folyékony vagy szilárd táptalajon 48—72 órán át tenyésztünk, majd a tenyészetet elöljük, az elölt sejteket elkülönítjük, végül immunbiológiai célokra alkalmas készítménnyé alakítjuk.(c) culturing the Candida guilliermondii strain under aerobic conditions at 24 to 42 ° C, preferably 32 to 38 ° C, in liquid or solid media containing the fungus-assimilable carbon source and the nitrogen source for 48 to 72 hours, and killing the culture, the killed cells are harvested and finally transformed into a formulation suitable for immunobiological purposes.
A találmány szerinti a) és b) eljárásváltozatban kapott csapadék tisztítására ismert fehérjetisztítási módszereket (pl.: kromatográfia, ultraszűrés, dialízis, szűrési segédanyagok és detergensek alkalmazása, elektroforézis stb.) használhatunk fel. Az ultrahangos kezelés mellett a sejtek feltárását például X-press készüléken is végezhetjük.Known protein purification methods (e.g., chromatography, ultrafiltration, dialysis, use of filter aids and detergents, electrophoresis, etc.) can be used to purify the precipitate obtained in process variants a) and b) of the present invention. In addition to ultrasound treatment, cells can also be disrupted, for example, using an X-press.
A következőkben a találmány szerinti a) eljárásváltozattal előállított immunbiológiai készítményt Cgl-gyel, a b) eljárásváltozattal előállított immunbiológiai készítményt Cg2-vel, a c) eljírásváltozattal előállított immunbiológiai készítményt pedig Cg3-mal jelöljük.In the following, the immunobiological composition produced by process variant a) of the invention is designated Cgl, the immunobiological composition produced by process variant b) is designated Cg2 and the immunobiological composition produced by protocol c) is designated Cg3.
A Cgl jelű immunbiológiai készítmény prolongált tenyésztésnek alávetett Candida guilliermondii sejtekből elkülönített, fehérjét is tartalmazó sejtkivonat. A sejtkivonat legfontosabb alkotó elemei a Candida guilliermondii toxinjai. A Cgl jelű immunbiológiai készítmény elsősorban a Candida guilliermondii fertőzés kimutatására alkalmas az intradermális próbával végzett korai túlérzékenységi immunbiológiai reakció kiváltása alapján; ugyancsak alkalmas keringő ellenanyagok kimutatására a durham-cső vagy kapilláris-cső precipitációs eljárás alapján; ezen túlmenően ez a készítmény az élő szervezetbe juttatva olyan ellenanyagok termelését indítja meg, amelyek a már kialakult Candida guilliermondiifertőzés megszüntetésére alkalmasak.The Cgl immunobiological composition is a cell extract containing protein, isolated from Candida guilliermondii cells subjected to extended culture. The most important constituents of the cell extract are toxins of Candida guilliermondii. The Cgl immunobiological composition is particularly useful for the detection of Candida guilliermondii infection by inducing an early hypersensitivity immunobiological reaction by intradermal probe; also capable of detecting circulating antibodies by the durham tube or capillary tube precipitation method; moreover, when administered to a living organism, this composition induces the production of antibodies capable of eradicating an established Candida guilliermondi infection.
A Cg2 jelű immunbiológiai készítmény — amelyet rövid tenyésztésnek alávetett Candida guillierinondiisejtekből különítünk el — a Cgl jelű immunbiológiai készítménynél lényegesen nagyobb mennyiségű fehérjét is tartalmaz, ugyanakkor toxintartalma csekély. Ez az immunbiológiai készítmény elsősorban a fertőzésveszélynek kitett élő szervezetek immunizálására alkalmas; ezen kívül diagnosztikumként alkalmazható intradermális próbával a késői túlérzékenységi immunbiológiai reakció kimutatására, továbbá antigénként használható fel a fertőzés kimutatására latex agglutinációs, immundiffúziós és counter-immunelektroforézises eljárásokhoz.The Cg2 immunobiological composition, which is isolated from short cultured Candida guillierinond cells, contains a much higher amount of protein than the Cgl immunobiological composition, but has a low toxin content. This immunobiological product is primarily intended for the immunization of live organisms at risk of infection; in addition, it can be used as a diagnostic agent for intradermal probe detection of late hypersensitivity immunobiology, and as antigen for detection of infection by latex agglutination, immunodiffusion and counter-immunoelectrophoresis.
A Cg3 jelű immunbiológiai készítmény elölt teljes Candida guilliermondii-sejtekből áll, és elsősorban a Candida guilliermondii-fertőzés korai stádiumának kimutatására használható fel laboratóriumi eljárásokban (például agglutináció, indirekt fluoreszcens vizsgálat), vagy ABR (Abortus-Bang-Ringprobe) típusú próbához szükséges festett antigén előállításához.(Hutyra.F.,I.Marék, R. Manninger, I. Mocsy: Spezielle Pathologie und Therapie der Haustiere. VEB. Gustav Fisher Verlag. Jena. 1959 ).The Cg3 immunobiological composition consists of killed whole Candida guilliermondii cells and is used primarily for the detection of early stage Candida guilliermondii infection in laboratory procedures (eg, agglutination, indirect fluorescence) or for the ABR (Abortus-Bang-Ringprobe) antigen test. (Hutyra.F., I.Marék, R.Manninger, I.Mocsy: Spezielle Pathologie und Therapie der Haustiere. VEB. Gustav Fisher Verlag. Jena. 1959).
Mindhárom immunbiológiai készítmény előállításához termelő mikroorganizmusként előnyösen a fertőzött egyedek szervezetéből elkülönített Candida guilliermondii alkalmazható sikerrel. Felhasználhatjuk azonban erre a célra az ismert nemzetközi törzsgyűjteményekből szár10 mazó Candida guilliermondii törzseket is, például a Centralbureau voor Schimmelcultures törzsgyűjteményben (Delft, Hollandia) CBS—566 számon letett törzset, valamint az American Type Culture Collection törzsgyűjteményben letett Candida guilliermondii-törzseket.Candida guilliermondii, isolated from the organism of infected individuals, is preferably used as a producing microorganism for the production of all three immunobiological preparations. However, strains of Candida guilliermondii from known international strains, such as the strain CBS-566 in Centralbureau voor Schimmelcultures (Delft, The Netherlands), and Candida guilliermii from the American Type Culture Collection may also be used.
Az immunbiológiai készítmények előállításakor célszerűen a termelő Candida guilliermondii törzs aerob körülmények között, asszimilálható szén- és nitrogénforrást tartalmazó táptalajon, 24—42 °C-on 48—72 órán át végzett tenyésztésével kapott elő tenyészetéből indulunk 20 ki. Az előtenyésztéshez, valamint a további tenyésztéshez asszimilálható szénforrásként a következő anyagokat használhatjuk fel: glükóz, szacharóz, maltóz, cellobióz, melibióz, melecitóz, inulin, arbutin, galaktóz, szorbóz, trehalóz, ribóz, xilóz, L-arabinóz, D-arabinóz, glicerin, 25 ribit, D-mannit, D-dulcit-, L-metil-D-glükozid, szalicin, borostyánkősav, citromsav stb. Az előtenyésztéshez, illetve a további tenyésztéshez felhasznált táptalajok asszimilálható nitrogénforrásként például a következő anyagokat tartalmazhatják: szérum, „Proteose peptone” 30 (Difco certified, Difco Laboratories, Detroit Michigan, USA) és egyéb proteózok, peptonokat és aminosavakat tartalmazó készítmények.For the preparation of the immunobiological compositions, it is convenient to start by culturing the producing strain Candida guilliermondii under aerobic conditions in a medium containing assimilable carbon and nitrogen sources at 24-42 ° C for 48-72 hours. The following materials can be used as assimilable carbon sources for pre-cultivation and further cultivation: glucose, sucrose, maltose, cellobiose, melibose, melecytosis, inulin, arbutin, galactose, sorbose, trehalose, ribose, xylose, L-arabinose, D-arabinose , 25 ribitol, D-mannitol, D-dulcitol, L-methyl-D-glucoside, salicin, succinic acid, citric acid, etc. The media used for pre-cultivation and further cultivation as assimilable nitrogen sources include, for example, serum, "Proteose peptone" (Difco certified, Difco Laboratories, Detroit Michigan, USA) and other proteases containing peptones and amino acids.
A Cgl és Cg2 jelű immunbiológiai készítmények előállítása során a tenyésztési szakasz végén a baktérium35 mentességet ellenőrizzük, majd a gombasejteket célszerűen centrifugálással különítjük el a fermentlétől. Az elkülönített sejteket vízzel vagy vizes sóoldattal (előnyösen élettani nátriumklorid-oldattal) mossuk. Az elkülönített Candida guilliermondii-sejteket ezután önmagában 40 ismert mechanikai feltárásnak vetjük alá. Eljárhatunk például úgy, hogy a csapadékot szárítjuk, majd steril őrlőben őröljük, miközben az őrleményből időről időre mintát veszünk, és a feltárás mértékét mikroszkóposán ellenőrizzük. Ezt követően a mechanikailag feltárt sej45 teket élettani konyhasó oldattal extraháljuk. Egy másik módszer szerint az elkülönített Candida guilliermondii sejteket vízzel vagy vizes sóoldattal (előnyösen élettani konyhasó oldattal) keverjük össze, és a sejtszuszpenziót ultrahanggal kezeljük. A szuszpenzióból idó'ró'l időre 50 mintát veszünk, és a feltárás mértékét mikroszkóposán ellenőrizzük. Mindkét kezelési eljárásban a mechanikai roncsolással egyidőben a vizes, előnyösen élettani konyhasó oldattal végzett extrakció is lezajlik. Ezután a szilárd anyagot (sejttörmeléket) centrifugálással eltávolít 55 juk, a felülúszót szűrjük, és a szűrlethez alkoholt adunk. A kivált csapadékot kívánt esetben a fehérjék tisztítására felhasználható, általánosan ismert módszerekkel (pl. kromatografálással, ultraszűréssel, dialízissel, elektroforézissel stb.) tisztíthatjuk, abban az esetben azonban, ha az S0 immunbiológiai készítményt diagnosztikai célokra kívánjuk felhasználni, nincs feltétlenül szükség a csapadék további tisztítására. Miként már említettük, a Cg2 jelű immunbiológiai készítmény esetén diagnosztikai célokra a feltárt sejtek extraktuma közvetlenül is felhasználható. 85 Az „immunbiológiai készítmény” megjelölés ezt a diag4During the preparation of immunoglobulin formulations Cgl and Cg2, bacterial immunity is checked at the end of the culture period and fungal cells are conveniently isolated by centrifugation. The isolated cells are washed with water or aqueous saline (preferably physiological saline). The isolated Candida guilliermondii cells are then subjected to 40 well-known mechanical digests. For example, the precipitate may be dried and then milled in a sterile mill while sampling from time to time and microscopic examination of the degree of digestion. Thereafter, the mechanically digested cell lysates are extracted with physiological saline. Alternatively, the isolated Candida guilliermondii cells are mixed with water or aqueous saline (preferably physiological saline) and the cell suspension is sonicated. From time to time 50 samples of the suspension are taken and the extent of digestion is checked microscopically. In both treatment processes, extraction with aqueous, preferably physiological, saline solution takes place at the same time as mechanical destruction. The solid (cellular debris) was then removed by centrifugation, the supernatant was filtered and alcohol was added to the filtrate. Deposited precipitates can be purified, if desired, by commonly known methods for purifying proteins (e.g., chromatography, ultrafiltration, dialysis, electrophoresis, etc.), but further purification of the precipitate is not required if the immunoassay S0 is to be used for diagnostic purposes. . As mentioned above, for the Cg2 immunobiological composition, the extracted cell extract can be used directly for diagnostic purposes. 85 The term "immunological preparation" is used in this diag4
183 115 nosztikai célokra közvetlenül alkalmas extraktumot is magában foglalja. A további esetekben a csapadékot önmagában ismert módon alakítjuk immunbiológiai készítményekké, szokásos hordozóanyagok (pl. élettani sóoldat stb.) és a hagyományos technológiai műveletek (pl. oldás, fagyasztás, liofilizálás) felhasználásával.183,115 also includes an extract which is directly suitable for aesthetic purposes. In other cases, the precipitate is converted into immunobiological preparations in a manner known per se using conventional carriers (e.g., physiological saline, etc.) and conventional technology (e.g., dissolution, freezing, lyophilization).
A Cg3 jelű immunbiológiai készítmény előállítása során a tenyésztési szakasz végén a tenyészetben sejtmérgek (például formaldehid) felhasználásával öljük el a Candida guilliermondii-sejteket. Eljárhatunk például úgy, hogy a tenyészethez 0,5 %-os vizes formaldehid-oldatot adunk, és 6 órán át 37 °C-on inkubáljuk. Az elölt sejteket mosással tisztíthatjuk. Mosófolyadékként előnyösen élettani konyhasó oldatot használhatunk fel. Ezután az elölt sejteket a laboratóriumi diagnosztikumok előállítására alkalmas, önmagukban ismert módszerekkel (pl. szuszpendálás vizes közegben, fagyasztás stb.) immunbiológiai készítményekké alakítjuk.Candida guilliermondii cells are killed in the culture using cell poisons (e.g., formaldehyde) at the end of the culture period to produce the Cg3 immunobiological composition. For example, 0.5% aqueous formaldehyde solution can be added to the culture and incubated for 6 hours at 37 ° C. The killed cells can be purified by washing. Physiological saline solution is preferably used as the washing liquid. The killed cells are then transformed into immunobiological preparations by methods known per se (e.g., suspension in aqueous media, freezing, etc.) suitable for laboratory diagnostics.
A Cgl, és Cg2 valamint a Cg3 jelű - például porampulla formájában kiszerelt — immunbiológiai készítményeket a következőképpen használhatjuk fel élő szervezetek Candida guilliermondii-fertőzésének megállapítására:Immunobiological compositions Cgl, Cg2 and Cg3, e.g. in the form of a powder ampoule, may be used to detect infection of living organisms by Candida guilliermondii as follows:
A Cgl és Cg2 jelű készítményt in vitro és in vivő körülmények között végzett vizsgálatokhoz egyaránt alkalmazhatjuk, míg a Cg3 jelű készítményt in vitro vizsgálatokhoz használhatjuk fel.Cgl and Cg2 can be used for both in vitro and in vivo assays, while Cg3 can be used for in vitro assays.
Az in vivő körülmények között végzett vizsgálatok során a vizsgálandó egyednek intradermálisan, injekció formájában Cgl vagy Cg2 jelű készítményt adunk be. A Candida guilliermondii-fertőzés előfordulását a Cgl jelű készítménnyel kiváltott korai túlérzékenységi reakció segítségével az nitradermális oltás után 1—6—12 órával bíráljuk el: a fertőzött egyedeknél az oltás helyén növekedő, jól elkülönülő duzzanat jelentkezik, amely a beoltást követő 24 óra elteltével már nem észlelhető. A Candida guilliermondii-fertőzés előfordulása a Cg2 jelű készítménnyel kiváltott késői, tuberkulin-típusú túlérzékenységi reakció segítségével az intradermális oltás után 36—48 órával bírálható el.In in vivo studies, the subject is injected intradermally with Cgl or Cg2 as an injection. The occurrence of Candida guilliermondii infection is evaluated by an early hypersensitivity reaction induced by Cgl 1-16-12 hours after nitradermal inoculation: the infected individuals develop a marked, distinct swelling at the injection site which is not observed 24 hours after vaccination. detected. The incidence of Candida guilliermondii infection can be judged by a delayed tuberculin-type hypersensitivity reaction to Cg2 36-48 hours after intradermal inoculation.
A Cgl, Cg2 és Cg3 jelű immunbiológiai készítményt in vitro körülmények között végzett (laboratóriumi) diagnosztikai vizsgálatokhoz a következőképpen használjuk fel:Cgl, Cg2 and Cg3 immunobiological formulations are used for in vitro diagnostic (laboratory) diagnostic tests as follows:
A kimutatás alapja minden esetben a csapadékkcpzéses immunbiológiai reakció, amelyhez reagensként negetív savót, nagy agglutinin-tartalmú savót, valamint nagy precipitin-tartalmú savót használunk fel. Oltalmi igényünk a nagy agglutinin-tartalmú savó és a nagy precipitin-tartalmú savó előállítására is kiterjed.In all cases, the detection is based on the precipitation immunobiological reaction using negative whey, high agglutinin high whey and high precipitin high whey reagent. Our patent claims also cover the production of high agglutinin-containing whey and high precipitin-containing whey.
A „negatív savó” megjelölésen a Cgl, Cg2, illetve Cg3 jelű immunbiológiai készítménnyel végzett vizsgálatban negatív reakciót adó szarvasmarhák vagy laboratóriumi állatok vérsavóját értjük.By "negative serum" is meant the serum of bovine animals or laboratory animals giving a negative reaction to an immunoglobulin Cgl, Cg2 or Cg3.
A nagy agglutinin-tartalmú savót úgy állítjuk elő, hogy nyulakat Cg2 vagy Cg3 jelű immunbiológiai készítménnyel standard módszerrel immunizálunk, majd az állatokat elvéreztetjük, és az állatok vérsavóját ismert módon elkülönítjük.The high agglutinin-containing serum is prepared by immunizing rabbits with a Cg2 or Cg3 immunobiological preparation by a standard method, then the animals are bled and the serum of the animals is isolated in a known manner.
A nagy precipitin-tartalmú savót úgy állítjuk elő, hogy nyulakat Cgl jelű immunbiológiai készítménnyel standard módszerrel immunizálunk, majd az állatokat elvéreztetjük, és az állatok vérsavóját ismert módön elkülönítjük. Nagy precipitin-tartalmú savóhoz juthatunk úgy is, ha a természetes körülmények között megbetegedett szarvasmarhák vérsavóját (például Durham-cső vagy kapilláris-cső precipitációs módszerrel) Cgl allergénnel vizsgáljuk, és a nagy precipitin-titerértékű savóval rendelkező állatokat elvéreztetjük, majd a vérsavót ismert módon elkülönítjük.The high precipitin-containing serum is prepared by immunizing rabbits with a Cgl immunobiological preparation by a standard method, then the animals are bled and the serum of the animals is isolated in a known manner. High precipitin-containing whey can also be obtained by testing the serum of naturally occurring bovine animals (for example, Durham tube or capillary tube precipitation method) with Cgl allergen and bleeding the animals with high precipitation titer and then isolating the serum in known manner. .
A fenti reagensek, valamint a Cgl, Cg2 és Cg3 jelű immunbiológiai készítmények birtokában például a következő laboratóriumi vizsgálatokat hajthatjuk végre:For example, the following reagents, as well as immunobiological formulations Cgl, Cg2 and Cg3, may be used to perform the following laboratory tests:
I. Durham-cső vagy kapilláris-cső precipitációs próba Cgl jelű immunbiológiai készítménnyel:I. Durham tube or capillary tube precipitation test with immunoglobulin Cgl:
Egy-egy Durham-csőbe negatív savóját, illetve nagy precipitin-tartalmú savót mérünk be pasztőrpipettával úgy, hogy a savó felületén légbuborék ne legyen. A Durham-csövet körülbelül a feléig töltjük meg a savóval. Két Durham-csövet ugyanilyen módon a vizsgálandó savóval töltünk fel. A Cgl jelű immunbiológiai készítményt élettani konyhasó oldattal készített oldat formájában használjuk fel. Az oldatot pasztőrpipettával óvatosan a vizsgálandó savóra, valamint a reagensekre (negatív savóra és nagy precipitin-tartalmú savóra) rétegezzük. A második Durham-csőbe töltött vizsgálandó savóra csak élettani konyhasó oldatot rétegezünk. A csöveket szobahőmérsékleten tartjuk, 10—15 perc, illetve 1 óra elteltével feljegyezzük az észleléseket, majd 24 órán át +5 °C-on tartjuk, és ezután is feljegyezzük az észleléseket. Amenynyiben a vizsgálandó savóban a Candida guilliermondii antigénnel (Cgl jelű készítménnyel) szemben ellenanyagok vannak, úgy a két réteg határán precipitációs gyűrű jelentkezik.Into a Durham tube, weigh the negative whey or the high precipitin-containing whey with a paste pipette so that no air bubble is present on the whey surface. Fill the Durham tube with about half the whey. Two Durham tubes are filled in the same way with the serum to be tested. Immunobiological composition Cgl is used as a solution in physiological saline. Carefully coat the solution with the paste pipette on the whey to be tested and on the reagents (negative whey and high precipitin whey). To the test whey in the second Durham tube, only physiological saline solution is layered. The tubes are kept at room temperature, and after 10-15 minutes or 1 hour, the observations are recorded, then kept at + 5 ° C for 24 hours, and the observations are then recorded. If the test serum contains antibodies to Candida guilliermondii antigen (formulation Cgl), a precipitation ring is present at the border of the two layers.
II. A Cg2 jelű immunbiológiai készítmény antigénként alkalmazható az immundiffúziós, latex agglutinációs és counter-immunelektroforézises eljárásokban. Ezeket az eljárásokat a szakirodalomból ismert módon hajtjuk végre (lásd például Palmer, D. F. és munkatársai: Serodíagnosís of mycotie diseases, Charles C. Thomas, Illinois, USA (1977).II. The Cg2 immunobiological composition can be used as an antigen in immunodiffusion, latex agglutination and counter-immunoelectrophoresis methods. These procedures are carried out in a manner known in the art (see, for example, Palmer, D.F., et al., 1977, Ser. Ed. Of Mycotic Diseases, Charles C. Thomas, Illinois, USA).
III. A Cg3 jelű immunbiológiai készítmény antigénként alkalmazható az agglutinációs és az indirekt fluoreszcens eljárásokban az ismert módszerek szerint (lásd például Palmer, D. F. és munkatársai: Serodiagnosis of mycotic diseases, Charles C. Thomas, Illinois, USA (1977), vagy ABR (Abortus-Bang-Ringprobe) típusú próbához szükséges festett antigén előállításához (Hutyra, F., I. Marék, R. Manninger, I. Mocsy: Spezielle Pathologie und Therapie dér Haustiere. VEB. Gustav Fisher Verlag. Jena. 1959).III. The Cg3 immunobiological composition can be used as an antigen in agglutination and indirect fluorescence methods according to known methods (see, for example, Palmer, DF et al., Serodiagnosis of Mycotic Diseases, Charles C. Thomas, Illinois, USA (1977) or ABR (Abortus-Bang). -Ringprobe) (Hutyra, F., I. Marek, R. Manninger, I. Mocsy: Spezielle Pathologie und Therapie dere Haustiere. VEB. Gustav Fisher Verlag. Jena 1959).
A Cg2 jelű immunbiológiai készítményt a Candida guilliermondii fertőzés veszélyének kitett emberek és állatok preventív immunizálására is felhasználhatjuk. Erre a célra a Cg2 jelű immunbiológiai készítményt a vakcinák ismert alakjában hozzuk forgalomba. A vakcinák adott esetben a hatóanyag és a hígítószer mellett hordozóanyagot, például alumíniumhidroxid-gélt is tartalmazhatnak, amely a hatóanyag lassú, fokozatos felszívódását biztosítja. A vakcinát intradermális, intramuszkuláris vagy szubkután ijekció formájában vihetjük be a kezelendő szervezetbe. Előnyösen járunk el akkor, ha az immunizálás során az első oltást követő két hét elteltével újra oltjuk a kezelt egyedeket oly módon, hogy a második oltással nagyobb mennyiségű antigént juttatunk a szervezetbe, mint az első esetben. Az immunizáláshoz felhasználandó dózis több tényezőtől, köztük a kezelendő egyed korától, általános egészségi állapotától, az állat fajától, korától, a megelőző immunizáló kezelésektől és a veszélyeztetettség fokától függően változik.The Cg2 immunobiological composition may also be used for the preventive immunization of humans and animals at risk of Candida guilliermondii infection. For this purpose, the Cg2 immunobiological composition is marketed in known forms of vaccines. Vaccines may optionally contain, in addition to the active ingredient and diluent, a carrier, such as aluminum hydroxide gel, to provide slow, gradual absorption of the active ingredient. The vaccine may be administered by intradermal, intramuscular or subcutaneous injection into the body to be treated. Preferably, two weeks after the first vaccination, the immunized subjects are re-inoculated with the second vaccine to deliver a greater amount of antigen than in the first. The dose to be used for immunization will vary depending on several factors, including the age, general health, species, age of the animal being treated, preventive immunization treatments and the degree of risk.
183 115183,115
A Cgl jelű immunbiológiai készítményt Candida guilliermondii-fertőzésben szenvedő emberek és állatok gyó®kezelésére is felhasználhatjuk. Ebben az esetben először a kezelendő e®edet a készítménnyel deszenzibilizáljuk, majd a Cgl jelű immunbiológiai készítményt intradermális, intramuszkuláris va® szubkután oltások formájában visszük be a szervezetbe. Az immunbiológiai készítmény ebben az esetben is tartalmazhat hordozóanyagot (például alumíniumhidroxid-gélt), amely a hatóanyag lassú, fokozatos felszívódását biztosítja. Az im- 1 munbiológiai ®ó®kezelés alkalmával az első oltást követően kéthetenként ismételten oltjuk az egyebeket oly módon, ho® minden következő oltásnál fokozatosan na®obb mennyiségű antigén kerüljön a szervezetbe.The Cgl immunobiological composition may also be used for the therapeutic treatment of humans and animals suffering from Candida guilliermondii infection. In this case, the food to be treated is first desensitized to the composition, and the Cgl immunobiological composition is then administered by intradermal, intramuscular or subcutaneous vaccination. Again, the immunobiological composition may contain a carrier (e.g., aluminum hydroxide gel) that provides slow, gradual absorption of the active ingredient. During immuno-immunoassay treatment, the others are re-inoculated every two weeks after the first vaccination in such a way that each subsequent vaccine is gradually given a higher amount of antigen.
A kezeléshez szükséges dózisok mértéke számos ténye- 1 zőtől, így a kezelendő egyed korától, a fertőzés mértékétől, súlyosságától, az állat fajától, a kezelés módjától és gyakoriságától függően változik.The dosage required for treatment will vary depending on a number of factors, such as the age of the subject being treated, the degree, severity of infection, the species of animal, the mode and frequency of treatment.
A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. 2The following examples illustrate the invention without limiting it. 2
1. példaExample 1
Cgl jelű immunbiológiai készítmény előállításaPreparation of an immunoglobulin Cgl
500 ml-es rázólombikba 250 ml standard folyékony dextróz(pepton)élesztő leves táptalajt (lásd Palmer, D. F. és munkatársai: Serodiagnosis of mycotic diseases,44 pp. Charles C. Thomas, Illinois, USA (1977)) töltünk. A táptalajt a Candida guilliermondii fenntartott tenyészetével oltjuk be, majd 48 órán át 37 °C-on inkubáljuk. A tenyésztés közben a lombikot 130 fordulat/perc sebességgel rázzuk. Az így kapott tenyészetet oltótenyészetként használjuk fel a következő lépésben.A 500 ml shake flask is filled with 250 ml of standard liquid dextrose (peptone) yeast broth (see Palmer, D.F., et al., Serodiagnosis of mycotic diseases, 44 pp. Charles C. Thomas, Illinois, USA, 1977). The medium is inoculated with a maintained culture of Candida guilliermondii and incubated for 48 hours at 37 ° C. During culturing, the flask was shaken at 130 rpm. The culture thus obtained is used as seed culture in the next step.
literes laboratóriumi fermentorba 10 liter, az előzővel azonos összetételű táptalajt töltünk, és a táptalajhoz hozzáadjuk a fentiek szerint előállított oltótenyészetet. A tenyésztést levegőztetés és keverés közben 37 °C-on végezzük. A szaporodás 72 óra elteltével fokozatosan csökken, majd leáll. A tenyésztést ugyanilyen körülmények között még 15 napig folytatjuk (fenntartó va® prolongált tenyésztés). Ezután a tenyészetből Gram-festéshez mintát veszünk. Amennyiben a minta festődik, ez baktériumszennyezések jelenlétére utal; ekkor a tenyészetet nem használhatjuk fel immunbiológiai készítmény előállításához. Ha az elvégzett vizsgálat szerint a tenyészet nem tartalmaz baktériumszennyezést, a fermentor tartalmát centrifugába töltjük, és a gomba sejtanyagot centrifugálással (10 perc, 1000 fordulat/perc) elkülönítjük a folyadékfázistól. A kapott sejtanyagot élettani konyhasó oldattal háromszor mossuk, centrifugáljuk (10 perc, 1000 fordulat/perc), majd élettani konyhasó oldatban szuszpendáljuk, és a szuszpenziót X-press típusú készülékben kb. 10 000 kg/cm2 nyomáson feltárjuk. A szilárd anyagot centrifugálással (3000 fordulat/perc, 30 perc) eltávolítjuk, a felülúszót Seitz-szűrőbetéten szűrjük, majd a szűrlethez 4 térfogat 96 %-os etanolt adunk. A kivált csapadékot leszűrjük, majd élettani konyhasó oldatban oldjuk, és az oldatot —20 C-on fagyasztva szárítjuk. A fermentációtól, feltárástól függően a kapott kb. 500 mg liofilizált por alakú terméket porampulla kiszerelésben hozzuk forgalomba és felhasználhatjuk mint allergent a korai túlérzékenységi reakción alapuló intradermális próbához.10 liters of culture medium of the same composition are added to a 1 liter laboratory fermenter and the seed culture prepared as above is added to the medium. Culturing was performed at 37 ° C with aeration and agitation. After 72 hours, reproduction gradually decreases and then stops. Culturing was continued for 15 days under the same conditions (sustained or prolonged culture). The culture is then sampled for Gram staining. If the sample is stained, this indicates the presence of bacterial contamination; at this time the culture cannot be used to produce an immunobiological composition. If the assay shows that the culture is free of bacterial contamination, the fermentor contents are centrifuged and the fungal cell material is separated from the liquid phase by centrifugation (10 min, 1000 rpm). The resulting cellular material was washed three times with physiological saline solution, centrifuged (10 min, 1000 rpm) and resuspended in physiological saline solution, and the suspension suspended in an X-press apparatus for approx. It is exposed at a pressure of 10,000 kg / cm 2 . The solid was removed by centrifugation (3000 rpm, 30 min), the supernatant was filtered through a Seitz filter cartridge, and 4 volumes of 96% ethanol were added to the filtrate. The precipitate was filtered off, dissolved in physiological saline solution and freeze-dried at -20 ° C. Depending on fermentation and digestion, the resulting ca. 500 mg of lyophilized powder product are marketed in a powder ampoule formulation and can be used as an allergen for the early hypersensitivity reaction intradermal test.
2. példaExample 2
Cg2 jelű immunbiológiai készítmény előállítása 500 ml-es rázólombikban 250 ml standard folyékony dextróz/pepton/élesztő leves táptalajt töltünk. A táptalajt a Candida guilliermondii fenntartott tenyészetével oltjuk be, majd 48 órán át 37 °C-on inkubáljuk. A tenyésztés közben a lombikot 130 fordulat/perc sebességgel rázzuk. Az í® kapott tenyészetet oltótenyészetként használjuk fel a következő lépésben.Preparation of Cg2 Immunobiological Preparation In a 500 mL shake flask, 250 mL of standard liquid dextrose / peptone / yeast broth is filled. The medium is inoculated with a maintained culture of Candida guilliermondii and incubated for 48 hours at 37 ° C. During culturing, the flask was shaken at 130 rpm. The resulting culture is used as seed culture in the next step.
literes laboratóriumi fermentorban 10 liter folyékony dextróz/pepton/élesztő leves táptalajt töltünk és a táptalajhoz hozzáadjuk a fentiek szerint előállított oltótenyészetet. A tenyésztést levegőztetés és keverés köz5 ben 37 “C-on 72 órán át végezzük. Ezután a tenyészethez annyi 30 40 %-os vizes formaldehid-oldatot adunk, hogy a tenyészet végső formaldehid-koncentrációja 0,5 % le®en. Majd a tenyészetet keverés közben még 6 órán keresztül tovább inkubáljuk 37 °C-on. Ezután !0 a tenyészetből mintát veszünk, és a gomba életképességét Sabouraud dextróz agarra történő leoltással ellenőrizzük (a lemezeket 37 °C-on 48 órán át inkubáljuk). A tenyészetből Gram-festéshez mintát veszünk. Amenynyiben a minta festődik, ez baktériumszennyezések je»5 lenlétére utal; ekkor a tenyészetet nem használhatjuk fel immunbiológiai készítmény előállításához. Ha az elvégzett vizsgálat szerint a tenyészet nem tartalmaz baktériumszennyezést, a fermentor tartalmát centrifugába töltjük és 10 percig 1000 fordulat/perc sebességgel cent50 rifugáljuk. A szilárd anyagot elkülönítjük 0,85 %-os vizes nátriumklorid-oldattal háromszor mossuk, centrifugáljuk (10 percig 1000 fordulat/perc sebességgel). A szilárd anyaghoz 0,85 %-os vizes nátriumklorid oldatot adunk, és a kapott sejtszuszpenziót X-press típusú készülékben kb. 10 000 kg/cm2 nyomáson feltárjuk. A kapott sejthomogenizátumot 30 percig 5000 fordulat/perc sebességgel centrifugáljuk, a felülúszót elkülönítjük, Seitz-szűrőbetéten szűrjük, majd a szűrlethez 4 térfogat 96 %-os etanolt adunk. A kivált csapadékot leszűrjük, majd élet10 tani konyhasó oldatban oldjuk és az oldatot —20 °C-on fa®asztva szárítjuk. A fermentációtól, feltárástól függően nyert kb. 1500 mg liofilizált por alakú készítményt, mint antigént titrálás után latex agglutinációs, immundiffúziós és counter-immunelektroforézises vizsgálatok15 hoz, továbbá a késői túlérzékenységen alapuló in vivő vizsgálathoz használhatjuk fel.10 L of liquid dextrose / peptone / yeast broth is added to a 1 liter laboratory fermenter and the inoculum culture prepared as above is added. Cultivation is carried out under aeration and agitation at 37 ° C for 72 hours. Thereafter, 30% 40% aqueous formaldehyde solution is added to the culture so that the final concentration of formaldehyde in the culture is 0.5%. The culture was then further incubated at 37 ° C for 6 hours with stirring. The culture was then sampled and the viability of the fungus was checked by inoculation on Sabouraud dextrose agar (plates incubated at 37 ° C for 48 hours). A sample is taken from the culture for Gram staining. If the sample is stained, this indicates the presence of bacterial contamination; at this time the culture cannot be used to produce an immunobiological composition. If the assay shows that the culture is free of bacterial contamination, the fermenter contents are centrifuged and centrifuged at 1000 rpm for 10 minutes. The solid was collected, washed three times with 0.85% aqueous sodium chloride solution, and centrifuged (10 minutes at 1000 rpm). A 0.85% aqueous solution of sodium chloride was added to the solid and the resulting cell suspension was placed in an X-press apparatus for approx. It is exposed at a pressure of 10,000 kg / cm 2 . The resulting cell homogenate was centrifuged for 30 minutes at 5000 rpm, the supernatant was collected, filtered through a Seitz filter cartridge, and 4 volumes of 96% ethanol were added to the filtrate. The precipitate was filtered off and dissolved in physiological saline and the solution was dried at -20 ° C. Depending on the fermentation and digestion, approx. 1500 mg of lyophilized powder formulation as antigen after titration can be used for latex agglutination, immunodiffusion and counter-immunoelectrophoresis assays 15 and for in vivo testing based on late hypersensitivity.
3. példaExample 3
Cg3 jelű immunbiológiai készítmény előállításaPreparation of an immunobiological composition Cg3
Sabouraud dextróz-ferde agarra a gomba fenntartott tenyészetét oltjuk, majd 48 órán át 37 °C-on inkubáljuk. A kapott ferde agar tenyészeten fejlődött gombát dextróz/pepton/élesztő levesben szuszpendáljuk, és a szuszpenziót oltótenyészetként használjuk fel a következő lépésben.Inoculated cultures of fungi on Sabouraud dextrose oblique agar were incubated for 48 hours at 37 ° C. The resulting fungus cultured on an oblique agar culture was suspended in dextrose / peptone / yeast broth and used as inoculum for the next step.
500 ml/es Erlenmeyer lombikba 250 ml folyékony dextróz/pepton/élesztő leves táptalajt töltünk, és a táptalajhoz hozzáadjuk a fentiek szerint előállított oltótenyészetet. A kapott ele®et 48 órán át 37 °C-on inkubáljuk. A tenyésztés közben a lombikot 130 fordulat/perc sebességgel rázzuk. Ezután a tenyészethez annyi 30— -40 %-os vizes formaldehid-oldatot adunk, ho® a tenyészet végső formaldehid-koncentrációja 0,5 % le®en.Into a 500 ml Erlenmeyer flask is added 250 ml of liquid dextrose / peptone / yeast broth and the inoculum culture prepared as above is added. The resulting mixture was incubated for 48 hours at 37 ° C. During culturing, the flask was shaken at 130 rpm. A further 30-40% aqueous formaldehyde solution is then added to the culture to maintain a final culture concentration of 0.5% formaldehyde.
183 115183,115
A tenyészetet visszahelyezzük a rázógépbe, és 6 órán keresztül 37 °C-on, 130 fordulat/perc sebességgel rázzuk. Ezután a tenyészetből mintát veszünk, és a gomba életképességét Sabouraud dextróz agarra történő leoltással ellenőrizzük (a lemezeket 48 órán át 37 °C-on inkubáljuk). A tenyészetből Gram-festéshez mintát veszünk. Amennyiben a minta festődik, ez baktériumszennyezések jelenlétére utal; ekkor a tenyészetet nem használhatjuk fel immunbiológiai készítmény előállításához. Ha az elvégzett vizsgálat szerint a tenyészet nem tártál- 1 máz baktériumszennyezést, a lombik tartalmát 10 percig 1000 fordulat/perc sebességgel centrifugáljuk. A szilárd anyagként kapott teljes sejteket steril élettani konyhasó oldattal háromszor mossuk, centrifugáljuk (10 percig 1000 fordulat/perc sebességgel) és kb. 2,5 gr 1 nedves sejtmasszát nyerünk.The culture is returned to the shaker and shaken for 6 hours at 37 ° C and 130 rpm. The culture is then sampled and the viability of the fungus is checked by inoculation on Sabouraud dextrose agar (plates incubated for 48 hours at 37 ° C). A sample is taken from the culture for Gram staining. If the sample is stained, this indicates the presence of bacterial contamination; at this time the culture cannot be used to produce an immunobiological composition. If the assay shows that the culture does not contain 1 g of bacterial contamination, centrifuge the flask at 1000 rpm for 10 minutes. The whole cells obtained as solids were washed three times with sterile physiological saline solution, centrifuged (1000 rpm for 10 minutes) and ca. 2.5 g of 1 wet cell mass are obtained.
térfogatrész így kapott nedves sejtmasszához 3 térfogatrész steril élettani konyhasó oldatot adunk. Az oldathoz kereskedelmi minőségű Merthiolat (Nátrium-etilmercuri-tio-szalicilát) oldatot adunk olyan mennyiség- 2 ben, hogy a végső koncentráció 1:10 000 legyen, és a kapott sejtszuszpenziót +4 °C-on tároljuk. Immunbiológiai készítményt kapunk, amit a laboratóriumi diagnosztikában a csőagglutinációs és az indirekt fluoreszcens vizsgálatokhoz használhatunk fel, vagy ABR (Abortus-Bang- 2 Ringprobe) típusú próbához szükséges festett antigén előállításához (Hutyra, F., I. Marék, R. Manninger,To 3 volumes of wet cell mass thus obtained, 3 volumes of sterile physiological saline solution are added. A commercial grade Merthiol (Sodium ethylmercuric thiosalicylate) solution was added to the solution in an amount 2 to a final concentration of 1:10,000 and the resulting cell suspension was stored at + 4 ° C. An immunobiological composition is obtained which can be used in laboratory diagnostics for tube agglutination and indirect fluorescence, or for the preparation of a stained antigen for the ABR (Abortus-Bang-2 Ringprobe) probe (Hutyra, F., Marek I., R. Manninger,
I. Mocsy: Spezielle Pathologie und Therapie dér Haustiere. VEB. Gustav Fisher Verlag. Jena. 1959.)I. Mocsy: Spezielle Pathologie und Therapie dér Haustiere. VEB. Gustav Fisher Verlag. Jena. 1959)
A jelen találmány szerinti eljárások segítségével kimu- 3 tatható a Candida guilliermondii fertőzöttségnek mértéke, megoldható a rendszeres preventív szűrés, immunizálás. Csak a fertőzött egyedek szaporodásbiológiai vonatkozású kiszűrése az állományokban komoly tartási, takarmányozási és egyéb költségmegtakarítást biztosít 3 a gazdaságoknak. Mivel az ember is fogékony a fertőzés iránt — a diagnosztikai szűrővizsgálatoknak közegészségügyi és élelmiszerhigiéniai jelentősége is van. Mindezek a diagnosztikai és immunizálásra alkalmas anyagok humán vonatkozásban is érvényesek. 4The methods of the present invention detect the level of Candida guilliermondii infection and provide regular preventive screening and immunization. Only breeding-related screening of infected specimens in flocks will result in significant housing, feeding and other cost savings 3 for farms. Because humans are also susceptible to infection, diagnostic screening tests are also important for public health and food hygiene. All of these diagnostic and immunization materials are also applicable to humans. 4
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU48580A HU183115B (en) | 1980-03-03 | 1980-03-03 | Process for producing immunobiological composition for detecting, profilacting and/or treating infections with candida guilliermondii |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU48580A HU183115B (en) | 1980-03-03 | 1980-03-03 | Process for producing immunobiological composition for detecting, profilacting and/or treating infections with candida guilliermondii |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU183115B true HU183115B (en) | 1984-04-28 |
Family
ID=10949790
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU48580A HU183115B (en) | 1980-03-03 | 1980-03-03 | Process for producing immunobiological composition for detecting, profilacting and/or treating infections with candida guilliermondii |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| HU (1) | HU183115B (en) |
-
1980
- 1980-03-03 HU HU48580A patent/HU183115B/en not_active IP Right Cessation
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zabriskie et al. | An immunological relationship between the group A streptococcus and mammalian muscle | |
| Corbel et al. | Differentiation of the serological response to Yersinia enterocolitica and Brucella abortus in cattle | |
| SALATI et al. | Immune response of red sea bream to Edwardsiella tarda antigens | |
| Lyampert et al. | Immunological phenomena associated with cross-reactive antigens of micro-organisms and mammalian tissues | |
| US4678748A (en) | Process for the production of immunobiological preparations applicable in the diagnosis, prevention and/or treatment of Candida guilliermondii infections | |
| Mendes-Giannini et al. | Infection and apparent invasion of Vero cells by Paracoccidioides brasiliensis | |
| Ortiz-Ortiz et al. | Delayed skin reactions to cytoplasmic extracts of Nocardia organisms as a means of diagnosis and epidemiological study of Nocardia infection | |
| Kaplan et al. | Production of fluorescent antibody reagents specific for the tissue form of Coccidioides immitis | |
| Lim et al. | Development and evaluation of a direct fluorescent antibody method for the diagnosis of Pneumocystis carinii infections in experimental animals | |
| Schonfeld et al. | Specificity of gingival plasma cells for bacterial somatic antigens | |
| HU183115B (en) | Process for producing immunobiological composition for detecting, profilacting and/or treating infections with candida guilliermondii | |
| Kimura et al. | Rapid, simple serological diagnosis of infectious pancreatic necrosis by coagglutination test using antibody-sensitized staphylococci | |
| Taylor et al. | Experimental avian aspergilosis | |
| Casavant et al. | Host response to Treponema pallidum infection: III. Demonstration of autoantibodies to heart in sera from infected rabbits | |
| RU2802251C1 (en) | Vaccine composition for the prevention of enzootic abortion in sheep | |
| NZ198809A (en) | Production of immunobiological preparations for the diagnosis prevention and treatment of candida guilliermondii infections | |
| Masfufatun et al. | The potential of candida biofilm protein as bioreceptor for candidiasis immunoassay | |
| RU2217163C2 (en) | Vaccine against candidosis in agriculture animals | |
| RU2120300C1 (en) | Method of erythrocyte antigenic diagnosticum preparing | |
| Kalter et al. | Rapid diagnosis of respiratory disease due to adenovirus and mycoplasma | |
| Schneider et al. | Immunologically reactive substance from Schistosoma mansoni | |
| RU2188036C1 (en) | Method for obtaining erythrocytic antigenic glanderous diagnostic kit | |
| RU2230567C2 (en) | Vaccine against aspergillosis | |
| JP3850670B2 (en) | Reagents for differentiation of mycobacteria and methods for differentiation | |
| Thomson | Evaluation of some cell-mediated and humoral responses in dogs experimentally exposed to Mycobacterium bovis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HU90 | Patent valid on 900628 | ||
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |