HU179912B - Process for producing polyether antibiotics - Google Patents

Process for producing polyether antibiotics Download PDF

Info

Publication number
HU179912B
HU179912B HU8181171A HU17181A HU179912B HU 179912 B HU179912 B HU 179912B HU 8181171 A HU8181171 A HU 8181171A HU 17181 A HU17181 A HU 17181A HU 179912 B HU179912 B HU 179912B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
narasin
agar
medium
growth
streptomyces
Prior art date
Application number
HU8181171A
Other languages
English (en)
Inventor
Ralph E Kastner
L Robert Hamill
Original Assignee
Lilly Co Eli
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lilly Co Eli filed Critical Lilly Co Eli
Publication of HU179912B publication Critical patent/HU179912B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/16—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing two or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C12P17/181—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system, e.g. Salinomycin, Septamycin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/886—Streptomyces

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Description

Eljárás poliéter antibiotikum előállítására
A találmány tárgya új mikrobiológiai eljárás a narasin antibiotikum előállítására.
A narasin ismert poliéter antibiotikum, hatásos Grampozitív baktériumok, anaerob baktériumok, gombák ellen, használható antikokcidiális hatóanyagként, valamint kérődzőkben a tápanyag-hasznosítás javítására. Előállítását a Streptomyces aureofaciens NRRL 5758 vagy Streptomyces aureofaciens NRRL 8092 számú törzsek fermentációjával, előzőleg leírták a 4 038 384 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban, valamint Befg és munkatársai a Journal of Antibiotícs 31,1—6 (1978).
A találmány tárgya új eljárás a narasin antibiotikum előállítására egy újonnan felfedezett, DeBoer és munkatársai által Streptomyces lydicus NRRL 12 034 számmal jelölt törzs tenyésztésével, vagy ennek narasintermelő mutánsával, használható szénforrást, nitrogénforrást és szervetlen sókat tartalmazó tenyésztáptalajban, süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között mindaddig, míg az említett táptalajban az említett organizmus megfelelő mennyiségű narasint termel, és tetszés szerint izoláljuk az említett narasint a tenyészléből. Az eljárás magas hozammal eredményezi a narazint.
A találmányban szereplő, a narasin előállítására használt mikroorganizmust olyan talajmintából izoláltuk biológiailag tiszta tenyészet formájában, melyet DélAmerikában Surinam államban, a Surinam folyónál gyűjtöttek, és azonosítási célokra a tenyészetnek az A—39 861.3 számot adtuk.
Az A—39 861.3 számú tenyészetet a DeBoer és munkatársai által Streptomyces lydicusnak leírt törzshöz tartozónak azonosítottuk, azon az alapon, hogy egyszerre tenyésztettük. A Streptomyces hygroscopicus, 5 Srreptomyces endus, Streptomyces platensis és Streptomyces lydicus törzseket a Shirling és Gottlieb által leírt módszereket és táptalajokat használva [Methods of Characterization of Streptomyces Species, Intem. Bull, of Systematic Bacteriol. 16, 313—340. (1966)] együtt 10 b zonyos kiegészítő vizsgálatokkal. A kapott jellemzők alapján a Streptomyces lydicus fajt találtuk a legközelebbi rokonságban. Az A—39 861.3 számú tenyészet és a Streptomyces lydicus típustenyészet közötti fő különbség a szénhidrát-hasznosításban van, valamint a 15 S~reptomyces lydicus magasabb nátrium-klorid tűrőképességében, valamint abban áll, hogy az A—39 861.3 tenyészet bizonyos táptalajokon fehér légmicéliumot fejleszt.
A színek nevét az ISCC—NBS módszer szerint hatá20 roztuk meg (K. L. Kelly és D. B. Judd., ..The ISCC— NBS Methods of Designating Colors and a Dictionary of Color Names”, U.S. Department of Commerce Circ. 553, 1955., Washington, D.C.). A zárójelben levő számok a Tresner és Backus színsorozatra utalnak 25 [II. D. Tresner and E. J. Backus, „Systcm of Color Wheels fór Streptomycete Taxonomy”, Appl. Microbjol. 11, 335—338 (1956)].
A színek élregiszter jeleit aláhúztuk. A Maerz és Paul 30 szinblokkokat [A. Maerz és M. R. Paul, „Dictionary of
179912:
Color”, McGraw-Hill Book Co., Inc., New YorkÁN.Y> (1950)].
A sejtfal cukortartalmát Μ. P. Lechavalier [Chemical Methods as Criteria fór the Separation of Actinomycetes Intő Genera, Workshop sponsored by the Subcommittee on Actinomycetes of the American Society of Microbiology. Dr. Thomas G. Pridham, Convenor. Held at the Institute of Microbiojogy, Rutgers University, The State University of New Jersey, New Brunswick, N.J. (1971)] módszerét módosítva határoztuk meg. A diamino7pinjelinsav-izomereket Becker és munkatársai Appl. Microbiol. 11, 421—423 (1964) módszerét használva határoztuk meg. Minden lemezt 13 napig inkubáltunk 30 °C-on, a más módszert megemlítjük.
A spórák az elektronmikroszkópos meghatározás szerint sima felületűek. A sporofórok spirálisak, a spirálok nyitottak és nem tekerednek szorosan össze. Két-három fordulatos spirálok fordulnak elő általában. Alkalmanként horog vagy hurok is megfigyelhető. A spórák oválisak vagy enyhén hengeresek, az átlagos méretük 1,365 !im x 1,69 μπι-ig terjed, a következő tartományokban 1,3 μτη-től 1,95 μπι-ig X 1,3 μπι-től 2,6 μπι-ig.
I. táblázat
Tenyésztési jellemzők különböző táptalajokon
Táptalaj Jellemzők
Táptalaj
I. táblázat folytatása
Jellemzők paradicsom paszta zabliszt agar élesztő-kivonat— maláta-kivonat agar (ISP táptalaj 2)
Bőséges növekedés, hátoldal felöl . te,k(ntve középsárga-barna (14F6)-tóí feketéig (8C8) az oltás középpontja felé. Bőséges légmicélium. Szürke (GY) 3fe világos barnásszürkétől 4-ig világos szürkésbarnáig. Nincs oldható színanyag. Higroszkópos.
Bőséges növekedés, hátoldalról tekintve világosbarna (13F8). Jó légmicélium-növekedés. Fehér (W) b fehér; nincs oldható színzabliszt agar (ISP táptalaj 3) szervetlen sók— keményítő agar anyag.
Bőséges növekedés, hátoldalról tekintve világos szürkészöld (13H4). Bőséges légmicélium (GY) 3fe világos bamásszürke.
Zöldes, oldható színanyag. Fekete higroszkópos területek az mokulum szélén.
Bőséges növekedés, hátoldalról tekintve fiatalabb növekedésnél barnától sárgásbarnáig (7 nap), 14 nap után sötétszürkéről (8A9) feketéig (8A8) változik. Jó légmicélium (GY) d világosszürke. Higroszkópos.
glicerin aszparagin agar (ISP táptalaj 5)
Emerson agar,
Bennett-féle módosított agar
Czapek agar
Nutrient agar
Kalcium-malát agar ,
Glicerin-glicin agar
Inpton élesztőkivonat agar
Tirozin agar
Glükóz aszparagin agar
Bőséges növekedés, hátoldalról tekintve középsárgajbarna (14J7). Jó légmicélium és fehér spórák (W) bl Enyhc barna színű, oldódó színanyag.
Bőséges növekedés, hátoldalról tekintve erős sárgásbarna (1318). Bőséges légmicélium és fehér spórák (W) b. Nincs oldódó színanyag.
Jó növekedés, hátoldalról tekintve barnás-narancs (12B9); szórványosan vagy nincs légmicélium; ha van (GY) 2dc sárgásszürke. Nincs oldódó színanyag. Szórványos növekedés, valamint nincs légmicélium vagy spórák. Nincs színmegjegyzés.
Jó növekedés, hátoldalról tekintve halványsárga (11C2). Nincs légmicélium vagy spórák; nincs oldódó pigment.
Jó növekedés, hátoldalról tekintve világos-szürkészöld (14B2); nincs légmicélium vagy spórák. Halványbama, oldódó pigment. Jó növekedés, hátoldalról tekintve közepes zöld (15L6). Jó légmicélium növekedés és spórák (GY) 2dc sárgásszürke. Nincs oldódó pigment.
Szórványos növekedés, valamint nincs légmicélium vagy spórák. Nincs színmegjelölés.
Jó növekedés, hátoldalról tekintve világos sárgásbarna (13H7). Jó légmicélium növekedés és spórák (Y) 2db—2fb-ig halványsárga. Halványbama, oldódó pigment.
Jó növekedés, hátoldalról tekintve világos sárgásbarna (13H7).' Jó légmicélium növekedés és spórák (GY) 2dc sárgásszürke. Nincs oldódó pigment.
Az organizmus kiválasztott fiziológiai tulajdonságait vizsgáltuk standard előírások szerint. A megfigyelt tulajdonságokat és a talált jellemzőket a 2. táblázatban 55 gyűjtöttük össze.
II. táblázat
Az A—39861.3. törzs fiziológiai jellemzői
Melanoid-típusú pigmentek képződése:
1. Pepton élesztőkivonat vas ferde agar
2. Tirozin agar ferdék
3. Tripton élesztőkivonat táptalaj Nitrát redukció
Nincs melanoid színanyag Nincs melanoid színanyag Nincs melanoid színanyag Pozitív
II. táblázat folytatása
Zselatin elfolyósítás
Burgonyaszelet
Répaszelet
Keményítő hidrolízis Lefölözött tej
A növekedés hőfokfüggése
ISP 2 agart használunk, élesztőkivonat, malátakivonat agar ferdéket. Inkubáljuk a ferdéket 20 °C-on, 25 °C-on, 30 °C-on, 37 °C-on, 43 °C-on és 49 °C-on Nátrium-klorid tűrés
ISP 2 agart használunk, élesztőkivonat, malátakivonat agárhoz adunk nátrium-kloridot 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 8%, 10% és 12% koncentrációban
Hozzáadott nátrium-klorid nélküli ISP 2 agar a kontroll ApH változásokra való reagálás
ISP 2 agart használunk élesztőkivonat, malátakivonat agart. Az agar pH-ját 5,0, 6,0, 7,0, 8,0, 10,0 és 11,5-re állítjuk a sterilezés után
A szénhidrát-hasznosítást Pridham és Gottlieb-féle alaptáptalajon végeztük, melyhez a szénforrást 1,0% végső koncentrációban adtuk hozzá Shirling és Gottlieb idézett műve alapján. A szénforrásokat sterileztük, mielőtt az alaptáptalajhoz adtuk. A lemezeket 5, 9 és 16 nap 30 °C-os inkubálás után olvastuk le, és a végső leolvasások eredményét közöljük.
Az A—39 861.3 tenyészettel véghezvitt szénhidráthasznosítási vizsgálatok eredményeit a III. táblázatban közöljük.
III. táblázat Szénhidrát-hasznosítás
Szubsztrátum: Az A—39 861.3
Pridham- és Gottlieb-féle reagálása, alaptáptalajhoz adott szénforrások 16 nap után
D-glükóz* * + +
D-xilóz* +
L-arabinóz* + 4L-ramnóz* + 4D-fruktóz* 4- 4D-galaktóz + 4Raffinóz* D-mannit* — i-inozit* 4Szalicin 4Szacharóz* ±
Cellobióz + 4D-maltóz + 4Melibióz —
Melecitóz i
Oldható keményítő + 4Trehalóz + 4Turanóz ± * A nemzetközi Streptomyces Project szénforrásai (Shirling és Gottlieb idézett műve).
Kulcs: 4-4- Erős pozitív hasznosítás.
+ Pozitív hasznosítás.
± Kétséges hasznosítás.
— Negatív hasznosítás.
A zselatin 60%-a elfolyósodik 14 nap alatt ló sárgásbarna vegetatív növekedés
Nincs légmicélium; a burgonyaszelet színe nem változik
Nincs növekedés
A keményítőt hidrolizálja
A tejet peptonizálja
Nincs növekedés 20 °C-on és 49 °C-on
Optimális növekedés 25 °C—37 °C-on
Némi növekedés 43 °C-on
1—3%-ig elviseli a nátrium-kloridot, 3%-nál nagyobb koncentrációnál nincs megfigyelhető növekedés
Bőséges növekedés és sporuláció pH 5,0-tól pH 8,0-ig. pH 10,0-nál különálló telepek formájában volt a növekedés, csökevényes légmicéliummal. pH 11,5-nél nincs növekedés
Az organizmus teljes sejthidrolizátumát használva bizonyos jellegzetes cukrok jelenlétét mutattuk ki. Izolált sejtfalat használtunk, hogy meghatározzuk a diamino-pimelinsav izomereket. Ezeknek a sejtfal-vizsgálatoknak az eredményeit közöljük az alábbiakban:
Vizsgálat Megfigyelt eredmény diamino-pimelinsav izomerek LL-izomer azonosított jellegzetes cukrok glükóz, ribóz
Az A—39 861.3 és a Streptomyces lydicus törzsek szénhidrát-hasznosítási spektrumának összehasonlítását közöljük a következő, IV. táblázatban.
IV.' táblázat
Az A—39 861.3 és a Streptomyces lydicus szénhidrát hasznosítási spektruma
Szénforrás A—39 86L3 S. lydicus
D-glükóz 4-4- + 4-
L-arabinóz 4-4- + 4-
D-xilóz + + +
I-inozit 4-4- 4-4-
D-mannit - 4-4-
L-ramnóz 4-4- —
Raffinóz - 4-4-
D-mannit — 4-4-
Szalicin 4- 4-
Szacharóz 4- 4-4-
Cellobióz 4- ±
D-maltóz 4-4- 4-4-
Melecitóz ± 4-4-
Oldható keményítő + 4- 4-4-
Trehalóz + 4- 4-4-
+ + =Erős pozitív hasznosítás. -(- =Pozitív hasznosítás.
± =Kétséges hasznosítás.
— —Negatív hasznosítás.
Az A—39 861.3 és a Streptomyces lydicus törzsek közötti hasonlóságokat és különbségeket az V. táblázatban foglaljuk össze.
V. táblázat
Hasonlóságok és különbségek az Á—39 861.3 és a S. lydicus között
Vizsgálat jellemzők, stb. A -39 861.3 S. lydicus
Sporofőrok morfológiája spirális spirális
Spórák felülete sima sima
Melanoid színanyag negatív negatív
* Légmicélium elsősorban szürke
Zselaiin-elfolyósítás szürkés-fehér néhány táptalajon -1-
* Sovány tej peptonizálja hidrolizálja
* Nitrát redukció + —
* Nátrium-klorid tűrés 3% 87„
Diamino-pimelinsav izomer LL-izomer LL-izomer
*=A különbségeket jelöli.
Ennek a két törzsnek a morfológiai és fiziológiai tulajdonságai jól megegyeznek; kivéve az V. táblázatban látható nitrátredukcióban levő különbségeket. A többi szoros rokonságban levő fajták a következőkben különböznek az A—39 861.3 tenyészettől:
1. A Streptomyces hygroscopicus és a Streptomyces endus törzsek szemölcsös spórákat képeznek, míg az A—39 861.3 törzs spóráinak felületé sima.
2. A Streptomyces platensis abban különbözik az A—39 861.3 törzstől, hogy néhány táptalajon narancsbarnától vörösesbarnáig terjedő színű vegetatív micéliumot képez. Azonkívül a Streptomyces hygroscopicus, Streptomyces endus, Streptomyces platensis törzsek rendkívül higroszkóposak, míg a Streptomyces lydicus törzs higroszkópos jellemzőit nem említik.
A narasin-termelő Streptomyces lydicus törzset, melyet DeBoer és munkatársai izoláltak, letétbe helyezték, és a következő törzsgyűjtemény része lett: Északi Területi Kutató Központ, Amerikai Egyesült Államok, Mezőgazdasági Minisztérium, Mezőgazdasági Kutató Szolgálat, Peoria, Illinois, 61604, ahol elérhető az NRRL 12 034 szám alatt.
Ugyanúgy, mint más mikroorganizmusoknál, a DeBoer és munkatársai által leírt Streptomyces lydicus, NRRL 12 034 törzs tenyészetei is változnak. Például ebben a szabadalmi leírásban a narasin antibiotikumot termelő törzsből származó mutánsok (spontán vagy indukált) használhatók.
Számos különböző táptalajt használhatunk, hogy a DeBoer és munkatársai által leírt Streptomyces lydicus NRRL Í2 034 törzzsel antibiotikumot termeljünk. Ezek a táptalajok tartalmazhatnak emészthető szénforrást, nitrogénforrást és szervetlen sókat. A megfelelő szénforrásokhoz tartoznak: glükóz, keményítő és dextrin. A megfelelő nitrogénforrásokhoz tartoznak: a pepton, enzim-hidrolizált kazein, gyapotmagliszt és a húspepton.
Az organizmus növekedéséhez és fejlődéséhez szükséges nyomelemek elegendő mennyiségben találhatók a táptalaj egyéb alkotórészeiben szennyezésként, hogy az organizmus növekedéséhez és a bioszintézishez szükséges igényeket kielégítsék. Azonban hasznos lehet a táptalajba további oldódó szervetlen sókat adagolni, melyek nátrium, kálium, magnézium, kalcium, ammónium, klorid, karbonát, foszfát, szulfát, nitrát és hasonló ionokat szolgáltatnak.
Nagy térfogatú fermentáció esetén, ha a habzás nehézségeket okoz, szükséges lehet kis mennyiségben (például 0,2 ml/liter) habzásgátló anyagot, például propilén-glikolt adni a fermentlébe.
Hogy megfelelő mennyiségben állítsunk elő narasint az NRRL 12 034 törzs használatával, süllyesztett, levegőztetett fermentációt használunk. Azonban kismenynyiségű narasint nyerhetünk rázott-lombik tenyészetből. Tankfermentációhoz előnyös a vegetatív oltóanyag használata. A vegetatív oltóanyagot úgy állítjuk elő, hogy az organizmusból készült spóraszuszpenzióban micélium töredékes tenyészettel, vagy liofilizált tenyészettel oltunk kis térfogatú tenyésztő táptalajt, és így nyerjük a friss, jól növekedő tenyészetet. A vegetatív oltóanyagot ezután átvisszük egy nagyobb tankba, ahol megfelelő inkubációs idő után a narasin antibiotikum optimális mennyiségben keletkezik.
A beoltatlan fermentációs táptalaj pH-ja változik a termeléshez használt táptalajjal, de az összes fermentációs táptalaj pH-ja körülbelül pH=6,5 és pH=7,5 közé esik.
Ez a narasin-termelő organizmus jól nő széles hőmérséklethatárok között, körülbelül 25 °C és 37 °C között. A narasin antibiotikumnak az NRRL 12 034 törzzsel való optimális termelése körülbelül 30 °C-nál játszódik le.
Amint az szokásos a süllyesztett, levegőztetett tenyésztési eljárásoknál, steril levegőt fújunk keresztül a tenyésztő táptalajon. Az organizmus megfelelő növekedéséhez a tankfermentációs előállításnál a tankon keresztül áramoltatott levegő mennyisége 0,25 és 1,0 térfogat fermentlének felel meg percenként (v/v/m). Egy tíz literes fermentorban az optimális sebesség körülbelül 0,5 v/v/m, 600-1 fordulatszámmal forgó, szokásos keverővei kevertetve a táptalajt.
A narasin antibiotikum termelését a fermentáció során agardiffúziós vagy turbidimetriás módszerekkel követhetjük. A használathoz megfelelő organizmusok a Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis cs Micrococcus luteus.
Az antibiotikus aktivitás általában 40 óra múlva jelentkezik, és legalább két vagy több napig megmarad a fermentáció során. A legmagasabb antibiotikum-termelés általában a második és negyedik nap során jelentkezik.
A narasin antibiotikumot jól ismert módon nyerhetjük ki a fermentációs táptalajból, amint azt Berg és munkatársai a 4 038 384 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban közölték.
A DeBoer cs munkatársai által leírt Streptomyces lydicus, NRRL 12034 új narasin-termelő organizmus megfelelő mennyiségben termeli a narasin A komponensét, valamint csekély mennyiségben a narasin D komponensét. Az egyes komponenseket szükség esetén külön is megkaphatjuk külön antibiotikumként a komplex további tisztításával, például oszlopkromatográfiás technikával. Ezek a 4 038 384 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban szerepelnek, mely felfedezés ennek a találmánynak is részét képezi.
A találmány szerinti eljárás részletesebb jellemzésére a következő példákat mutatjuk be. Ezek a példák azonban nem korlátozzák a szabadalmi leírás érvényességi körét.
1. példa
A DeBoer és munkatársai által leírt Streptomyces lydicus NRRL 12 034 törzs részére a következő ferde agar táptalajt használjuk:
Adalékanyagok Mennyiség (g/1) burgonyadextrin10,0 enzim-hidrolizált kazein12,0 húskivonat1,0 élesztőkivonat1,0 agar2,0
Czapek-féle sóoldat 2,0ml/1 desztillált víz 1000 ml-re 1 N-Z-Amin A (Humko Sheffield Chemical Co., Memphis, Tenn.).
A Czapek-féle szervetlen sóoldatot a következő ada-
lékanyagokból készítjük:
Adalékanyag Mennyiség (g/100 ml)
kálium-klorid 10,0
magnézium-szulfát 7 molekula víz 10,0
vas(II)-szulfát 7 molekula víz 0,2
desztillált víz 100 ml-re
A DeBoer és munkatársai féle Streptomyces lydicus NRRL 12 034 törzs spóráit a fentiekben meghatározott adalékanyagokat tartalmazó ferdített tápagar felszínére oltottuk, és az így inokulált ferdített agartenyészetet körülbelül 7 napig inkubáltuk körülbelül 30 °C-on. Az érett ferde tenyészetre vizet töltöttünk, és megfelelő steril szerszámmal meglazítottuk a spórákat és a micéliumot. Az így nyert spóraszuszpenzióból 1 ml-t használtunk arra, hogy a következő összetételű táptalaj 50 ml-ét beoltsuk vele:
Adalékanyagok Mennyiség (g/1)
dextróz 15,0
szójaliszt 15,0
kukorica-lekvár 5,0
kalcium-karbonát 2,0
nátrium-klorid 5,0
Czapek-féle sóoldat 2,0 ml/1
desztillált víz 1000 ml-re
A vegetatív oltóanyagot 250 ml-es, széles szájú Erlenmeyer lombikban inkubáltuk körülbelül 30 °C-on, körülbelül 48 óráig olyan rotációs rázógépen, mely 5 cm átmérőjű kör kerületén 250-szer fordult percenként. Az így inkubált táptalajt használtuk mind kis térfogatú fermentorok oltására (az oltóanyag mennyisége körülbelül 1 térfogat%-a a táptalajnak), mind pedig a máso dik fázisú lombikok beoltására nagyobb mennyiségű micélium előállításához.
A termelő táptalajból kivett 200 ml térfogatot 1 literes Erlenmeyer lombikba helyeztük, és 121 °C-on, 30 percig sterileztük. Lehűlés után a lombikokat a vegetatív oltóanyag 5%-nyi mennyiségével oltottuk be. A tenyészetet 108/perc löketszámú, 5 cm lökethosszú sík rázógépen inkubáltuk. A 72 órás fermentáció végén a fermentlé pH-ja körülbelül 8,0. A fermentációt 30 °C-on végeztük.
2. példa
A narasint a következő összetételű steril termelő táptalaj használatával állítottuk elő:
Adalékanyag Mennyiség (g/1)
szilikon habzásgátló anyag1 0,2
glükóz 10,0
melasz 20,0
pepton 5,0
kalcium-karbonát 2,0
desztillált víz 9,0 1-re
1 Dow-Corning Antifoam A.
Ezt a termelő táptalajt, melynek a pH-ja 6,7, az I. példában leirt második fázisú inokulum táptalajból 2%-nyi mennyiséggel oltottuk be. A beoltott termelő táptalajt 10 liter térfogatú tank-fermentorban körülbelül 3 napig, körülbelül 30 °C-on hagytuk növekedni. A fermentációs táptalajt steril levegővel levegőztettük 0,5 v/v/m sebességgel, és megszokott kevcrőkkel körülbelül 400/perc
fordulatszámmal kevertettük.
3. példa
A narasint a 2. példa szerinti eljárással állítottuk elő, de a következő összetételű steril termelő táptalaj haszná-
latéval:
Adalékanyag Mennyiség (g/1)
szilikon habzásgátló anyag1 0,2
glükóz 25,0
kukoricakeményítő 10,0
folyékony húspepton 10,0
enzim-hidrolizált kazein2 4,0
melasz, Blackstrap magnézium-szulfát 5,0
(7 molekula víz) 0,5
Czapek-féle sóoldat 2,0 ml
desztillált víz 9,0 1-re
1 Dow-Corning Antifoam A.
2 N-Z-Amin A (Humko Sheffield Chemical Co.,
Memphis, Tenn.).
Ezt a termelő táptalajt, melynek a pH-ja 6,5, oltottuk 2% oltóanyaggal, és 10 literes tank-fermentorban nö-
vesztettük 4 napig, körülbelül 30 °C-on. A fermentációs 5
táptalajt steril levegővel levegőztettük 0,5 v/v/m sebességgel, és megszokott keverővei kevertettük körülbelül 600/perc fordulatszámmal.
4. példa
A narasint a 2. példa szerinti eljárással állítjuk elő, de a következő összetételű steril termelő táptalaj használatával :
Mennyiség (g/1)
Adalékanyag
szilikon habzásgátló anyag1 0,2
tápióka dextrin 30,0
enzim-hidrolizált kazein2 10,0
Czapek-féle sóoldat 2,0 ml
desztillált víz 9,0 1-re
1 Dow-Corning Antifoam A.
2 N-Z-Amin A (Humko Sheffield Chemical Co., Memphis, Tenn.).
A termelő táptalajt, melynek a pH-ja 6,4, pH=7,l-re állítottuk, körülbelül 3 ml, 10 n vizes nátrium-hidroxiddal sterilezés előtt, és sterilezés után 2% oltóanyaggal oltottuk. A táptalajt 10 literes tank-fermentorban körülbelül 3 napig, körülbelül 30 QC-on hagytuk növekedni. A fermentációs táptalajt steril levegővel levegőztettük 0,5 v/v/m sebességgel, és megszokott keverővei kevertettük 600/perc fordulatszámmal.
5. példa
A fermentléből 10 ml-t szűrési segédanyag (Hyflo Supercel szűrési segédanyag, egy diatomaföld, melyet a 5 Johns-Manville Corp. állít elő) szűrtük le, és a maradékot vízzel mostuk. A fcrmentlé szűrletét egyesítettük a mosóvízzel, és 2 x 4,5 1 etil-acetáttal extraháltuk. Az etil-acetátos extraktumokat egyesítettük, és csökkentett nyomáson bepároltuk; így kaptunk egy olajos ma10 radékot. A maradékot 100 ml acetonban oldottuk, és 100 ml vizet adtunk hozzá. Az oldat pH-ját 3,0-ra állítottuk be 1 n vizes sósavval, és az oldatot körülbelül egy óráig szobahőmérsékleten kevertettük. A keletkező kristályokat leszűrtük, és hideg vízzel mostuk. A kristályo15 kát átkristályosítottuk, feloldva őket 50 ml acetonban, hozzáadva 50 ml vizet, majd a keveréket egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. A keletkező kristályokat kiszűrtük, hideg vízzel mostuk, és csökkentett nyomáson szárítva 100 mg fehér kristályt nyertünk. 20 A kristályok mágneses magrezonancia, infravörös, ultraibolya és tömegspektruma alapján, valamint vékonyréteg-kromatográfia bioautográfiás előhívása alapján azonosnak bizonyultak a narasinnal.

Claims (1)

  1. Szabadalmi igénypont
    Eljárás a narasin antibiotikum fermentációs úton történő előállítására, azzal jellemezve, hogy a Streptomyces 30 lydicus NRRL 12034 törzset vagy ennek narasintermelő mutánsát asszimilálható szénhidrát- és nitrogénforrást, valamint szervetlen sókat tartalmazó táptalajban, süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között tenyésztjük.
HU8181171A 1980-01-28 1981-01-27 Process for producing polyether antibiotics HU179912B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/115,656 US4309504A (en) 1980-01-28 1980-01-28 Process for preparing narasin

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HU179912B true HU179912B (en) 1982-12-28

Family

ID=22362679

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU8181171A HU179912B (en) 1980-01-28 1981-01-27 Process for producing polyether antibiotics

Country Status (15)

Country Link
US (1) US4309504A (hu)
EP (1) EP0034009B1 (hu)
JP (1) JPS56121486A (hu)
KR (1) KR840000749B1 (hu)
AR (1) AR228445A1 (hu)
BE (1) BE887199A (hu)
CA (1) CA1174995A (hu)
CH (1) CH650797A5 (hu)
DE (1) DE3160499D1 (hu)
FR (1) FR2476128A1 (hu)
GB (1) GB2068372B (hu)
HU (1) HU179912B (hu)
IE (1) IE51169B1 (hu)
IL (1) IL61960A (hu)
IT (1) IT1141957B (hu)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4342829A (en) * 1981-05-06 1982-08-03 Eli Lilly And Company Process for preparing narasin
US4894366A (en) * 1984-12-03 1990-01-16 Fujisawa Pharmaceutical Company, Ltd. Tricyclo compounds, a process for their production and a pharmaceutical composition containing the same
US4920050A (en) * 1989-02-27 1990-04-24 Pfizer Inc. Acidic polycyclic ether antibiotic
TWI656872B (zh) 2014-11-13 2019-04-21 美商益農美國公司 甲基鹽黴素於豬飼料中之抗病毒效果

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4038384A (en) * 1974-06-10 1977-07-26 Eli Lilly And Company Antibiotic a-28086 and process for production thereof
US4141907A (en) * 1977-10-20 1979-02-27 Eli Lilly And Company Deoxynarasin antibiotics

Also Published As

Publication number Publication date
IL61960A0 (en) 1981-02-27
FR2476128B1 (hu) 1984-05-11
IE51169B1 (en) 1986-10-29
GB2068372A (en) 1981-08-12
IL61960A (en) 1984-07-31
GB2068372B (en) 1984-06-27
KR830005357A (ko) 1983-08-13
FR2476128A1 (fr) 1981-08-21
CA1174995A (en) 1984-09-25
AR228445A1 (es) 1983-03-15
CH650797A5 (fr) 1985-08-15
IT8119333A0 (it) 1981-01-26
EP0034009A2 (en) 1981-08-19
US4309504A (en) 1982-01-05
EP0034009A3 (en) 1981-11-11
BE887199A (fr) 1981-07-23
EP0034009B1 (en) 1983-06-29
IE810143L (en) 1981-07-28
KR840000749B1 (en) 1984-05-31
IT1141957B (it) 1986-10-08
DE3160499D1 (en) 1983-08-04
JPS56121486A (en) 1981-09-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4800157A (en) Process for producing the A-21978C antibiotics
CA1225053A (en) Methods and compounds and compositions for treating protozoal infections with a novel antibiotic
US4384043A (en) Process for producing the antibiotic nosiheptide
US5484717A (en) Antibiotic 31F508α1, 31F508α2, 31F508β1, 31F508β2
HU179912B (en) Process for producing polyether antibiotics
HU190358B (en) Process for preparing enduracidin
US4927810A (en) Efomycin G and it's use as yield promoter in animals
KR850001230B1 (ko) 나라신의 제조방법
US4358584A (en) Antibiotics A6888C and A6888X
US4064013A (en) Process for preparing thiostrepton
US4628046A (en) Antibiotic LL-C23201δ
US4835141A (en) Neutral macrolide antibiotics from Streptomyces
US4600691A (en) R-(Z)-4-amino-3-chloro-2-pentenedioic acid, novel antibacterial agent
US4608343A (en) Biologically pure culture of Streptomyces majorciensis Labeda
US4670466A (en) R-(Z)-4-amino-3-chloro-2-pentenedioic acid, novel antibacterial agent
US4956283A (en) Process for preparing macrolide antibiotics by culturing streptomyces hirsutus ATCC 53513
JACKSON et al. PHENELFAMYCINS, A NOVEL COMPLEX OF ELFAMYCIN-TYPE ANTIBIOTICS I. DISCOVERY, TAXONOMY AND FERMENTATION
CA1239886A (en) R-(z)-4-amino-3-chloro-2-pentenedioic acid, novel antibacterial agent
US4534970A (en) Antibacterial antibiotics LL-CO8078α1, α2, α3 and β
KR820000031B1 (ko) 미생물에 의한 리파마이신 b의 제법
US4830967A (en) Process for producing antibiotic A80438
US3549502A (en) Process for the production of neutramycin
US3310468A (en) Antifungal antibiotic rutamycin and process for the production thereof
JPH06312997A (ja) Ｋｏ−８１１９物質及びその製造法
US4329472A (en) Antibiotic A-33853 and the tetraacetyl derivative thereof