HK1027112B

HK1027112B - Survivin, a protein that inhibits cellular apoptosis, and its modulation

Info

Publication number: HK1027112B
Application number: HK00102427.9A
Authority: HK
Inventors: Dario C. Altieri
Original assignee: Yale University
Priority date: 1996-11-20
Filing date: 1997-11-20
Publication date: 2009-07-24

Claims

Isoliertes Nukleinsäuremolekül, dadurch gekennzeichnet, dass es für ein Säuger-Survivin-Protein codiert, das zelluläre Apoptose inhibiert, wobei das Survivin-Protein ein einzelnes BIR und eine βCOOH-coiled-coil-Region umfasst, und dadurch, dass das Nukleinsäuremolekül an das Komplement eines Nukleinsäuremoleküls, das aus den Nukleotiden 2811-2921, 3174-3283, 5108-5225 und 11955-12041 von Fig. 10A bis Fig. 10H besteht, unter Bedingungen hybridisiert, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus: (1) Waschen mit 0,015 M NaCl, 0,0015 M Natriumcitrat, 0,1% NaDodSO₄ bei 50°C; (2) Hybridisierung in 50% (Vol/Vol) Formamid mit 0,1% Rinderserumalbumin, 0,1% Ficoll, 0,1% Polyvinylpyrrolidon, 50 mM Natriumphosphatpuffer bei pH 6,5 mit 750 mM NaCl, 75 mM Natriumcitrat bei 42°C; und (3) Hybridisierung in 50% Formamid, 5X SSC (0,75 M NaCl, 0,075 M Natriumcitrat), 50 mM Natriumphosphat (pH 6,8), 0,1% Natriumpyrophosphat, 5X Denhardt-Lösung, ultraschallbehandelte Lachssperma-DNA (50 µg/ml), 0,1% SDS und 10% Dextransulfat bei 42°C, mit Waschschritten bei 42°C in 0,2X SSC und 0,1% SDS.
Isoliertes Nukleinsäuremolekül gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es für die Aminosäuresequenz von Fig. 4A codiert.
Isoliertes Nukleinsäuremolekül gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass es einen zusammenhängenden Bereich Nukleotide 2811-2921, direkt gebunden an Nukleotide 3174-3283, direkt gebunden an Nukleotide 5108-5225, direkt gebunden an Nukleotide 11955-12041, von Fig. 10A bis Fig. 10H, umfasst.
Isoliertes Nukleinsäuremolekül gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass es einen zusammenhängenden Bereich Nukleotide 2811-2921, direkt gebunden an Nukleotide 3174-3283, direkt gebunden an Nukleotide 5108-5225, direkt gebunden an Nukleotide 11955-12044, von Fig. 10A bis Fig. 10H, umfasst.
Isoliertes Nukleinsäuremolekül gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass es aus Nukleotiden 2811-2921, direkt gebunden an Nukleotide 3174-3283, direkt gebunden an Nukleotide 5108-5225, direkt gebunden an Nukleotide 11955-12041, von Fig. 10A bis Fig. 10H, besteht.
Isoliertes Nukleinsäuremolekül gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass es aus Nukleotiden 2811-2921, direkt gebunden an Nukleotide 3174-3283, direkt gebunden an Nukleotide 5108-5225, direkt gebunden an Nukleotide 11955-12044, von Fig. 10A bis Fig. 10H, besteht.
Isoliertes Nukleinsäuremolekül gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass es das offene Survivin-Leseraster von Fig. 10A bis Fig. 10H umfasst.
Isoliertes Nukleinsäuremolekül gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass es aus dem offenen Survivin-Leseraster von Fig. 10A bis Fig. 10H besteht.
Isoliertes Nukleinsäuremolekül gemäß einem der Ansprüche 1-8, dadurch gekennzeichnet, dass die Nukleinsäure DNA oder komplementäre DNA (cDNA) ist.
Isoliertes Nukleinsäuremolekül gemäß Anspruch 9, funktionell verknüpft mit wenigstens einem Expressionskontrollelement.
Isoliertes Nukleinsäuremolekül gemäß einem der Ansprüche 1-10, im Raster mit der Nukleinsäuresequenz eines Fusionspartners fusioniert.
Vektor, der ein isoliertes Nukleinsäuremolekül gemäß einem der Ansprüche 1-11 umfasst.
Wirtszelle, die so transfiziert ist, dass sie einen Vektor gemäß Anspruch 12 enthält.
Wirtszelle gemäß Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, dass sie aus der Gruppe, bestehend aus prokaryotischen Wirtszellen und eukaryotischen Wirtszellen, ausgewählt ist.
Verfahren zur Herstellung eines Säuger-Survivin-Proteins, umfassend das Kultivieren einer Wirtszelle gemäß Anspruch 14 unter Bedingungen, bei denen das Survivin-Protein exprimiert wird.
Isoliertes Nukleinsäuremolekül gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das isolierte Nukleinsäuremolekül für ein humanes Survivin-Protein codiert.
Isoliertes Polypeptid, dadurch gekennzeichnet, dass es die Aminosäuresequenz umfasst, die durch das Nukleinsäuremolekül gemäß Anspruch 1 oder Anspruch 2 codiert wird.
Isoliertes Polypeptid gemäß Anspruch 17, dadurch gekennzeichnet, dass es aus der Aminosäuresequenz besteht, die durch das Nukleinsäuremolekül gemäß Anspruch 1 oder Anspruch 2 codiert wird.
Isoliertes Polypeptid gemäß Anspruch 17 oder Anspruch 18, dadurch gekennzeichnet, dass das Polypeptid ein Säuger-Polypeptid ist.
Isoliertes Polypeptid gemäß Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, dass das Polypeptid ein humanes Polypeptid ist.
Fragment eines Polypeptids gemäß Anspruch 18, dadurch gekennzeichnet, dass es aus der Sequenz EGWEPDDDPIEEHKKHSSGC besteht, und seine konservativ substituierten Homologen.
Fusionsprotein, dadurch gekennzeichnet, dass es das Polypeptid gemäß Anspruch 17 oder Anspruch 18 umfasst.
Fusionsprotein gemäß Anspruch 22, dadurch gekennzeichnet, dass das Fusionsprotein ferner einen C-terminalen RING-Finger aus einem IAP-Protein umfasst.
Mutantes Polypeptid, dadurch gekennzeichnet, dass es eine Aminosäuresequenz umfasst, die sich von Fig. 4A dadurch unterscheidet, dass wenigstens ein Aminosäurerest in Fig. 4A durch eine andere Aminosäure ersetzt ist, wobei der wenigstens eine Rest ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus Pro²⁶, Leu⁶⁴, Trp⁶⁷, Pro⁷³ und Cys⁸⁴.
Mutantes Polypeptid gemäß Anspruch 24, dadurch gekennzeichnet, dass der wenigstens eine Rest durch Ala ersetzt ist.
Zusammensetzung, die ein Polypeptid gemäß einem der Ansprüche 17-25 umfasst.
Zusammensetzung gemäß Anspruch 26, dadurch gekennzeichnet, dass die Zusammensetzung eine pharmazeutische Zusammensetzung ist, und dadurch, dass sie ferner einen Träger umfasst.
Zusammensetzung gemäß Anspruch 26, dadurch gekennzeichnet, dass die Zusammensetzung eine immunogene Zusammensetzung ist.
Isolierter Antikörper oder isoliertes Antikörperfragment, dadurch gekennzeichnet, dass der Antikörper oder das Fragment davon an ein Polypeptid gemäß einem der Ansprüche 17 bis 20 bindet.
Isolierter Antikörper gemäß Anspruch 29, dadurch gekennzeichnet, dass der Antikörper ein polyklonaler Antikörper ist.
Isolierter Antikörper gemäß Anspruch 29, dadurch gekennzeichnet, dass der Antikörper ein monoklonaler Antikörper ist.
Monoklonaler Antikörper gemäß Anspruch 31, dadurch gekennzeichnet, dass der monoklonale Antikörper humanisiert ist.
Isolierter Antikörper gemäß Anspruch 29, dadurch gekennzeichnet, dass der Antikörper an ein Polypeptid, das aus der Sequenz APTLPPAWQPFLKDHRI besteht, bindet.
Isolierter Antikörper, der an humanes Survivin bindet, dadurch gekennzeichnet dass der Antikörper hergestellt wird durch Immunisieren eines Tieres mit einem Polypeptid, das aus der Sequenz APTLPPAWQPFLKDHRI besteht.
Isolierter Antikörper, dadurch gekennzeichnet, dass er hergestellt wird durch Immunisieren eines Tieres mit einem Polypeptid, das aus der Sequenz APTLPPAWQPFLKDHRI besteht.
Fragment eines Antikörpers gemäß Anspruch 29, dadurch gekennzeichnet, dass es ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus Fab, Fab' und F(ab')₂.
Zusammensetzung, die den Antikörper gemäß einem der Ansprüche 29 und 33 bis 35 umfasst.
Hybridomzelllinie, dadurch gekennzeichnet, dass sie einen Antikörper gemäß einem der Ansprüche 29 und 33 bis 35 produziert.
Verwendung eines Polypeptids gemäß Anspruch 17 oder eines Transgens, das für ein Polypeptid gemäß Anspruch 17 codiert, wobei das Transgen wirksam ist zum Bewirken der Expression des Survivin-Polypeptids, zur Herstellung eines Medikaments, das zelluläre Apoptose inhibiert.
Verwendung gemäß Anspruch 39, dadurch gekennzeichnet , dass das Transgen über einen viralen Vektor abgegeben werden soll.
Verwendung gemäß Anspruch 40, dadurch gekennzeichnet, dass der Vektor replikationsdefekt ist.
Verwendung gemäß Anspruch 39, dadurch gekennzeichnet, dass das Transgen als eine nackte Nukleinsäure abgegeben werden soll.
Verwendung des Polypeptids gemäß Anspruch 21 zur Herstellung eines Medikaments, das den Level der zellulären Apoptose erhöht.
Verwendung gemäß Anspruch 43, dadurch gekennzeichnet, dass das Medikament die Schwere eines pathologischen Zustandes verringert, bei dem der Level der zellulären Apoptose inhibiert ist, vermittelt durch Survivin, codiert durch das Nukleinsäuremolekül nach Anspruch 1, das in der Zelle vorhanden ist.
Verwendung gemäß Anspruch 43, dadurch gekennzeichnet, dass das Medikament bei der Behandlung von Krebs verwendbar ist.
Verfahren zum Testen auf das Vorhandensein eines Nukleinsäuremoleküls gemäß Anspruch 1 oder eines Polypeptids gemäß Anspruch 17 oder Anspruch 18 in einer Probe, umfassend den Schritt des Bestimmens, ob das Polypeptid oder die Nukleinsäure in der Probe vorhanden ist.
Verfahren gemäß Anspruch 46, dadurch gekennzeichnet, dass die Probe ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus einer Gewebebiopsie, Stuhl, Blut, Urin und Speichel.
Verfahren gemäß Anspruch 46, dadurch gekennzeichnet, dass es ferner die Schritte umfasst:
a) Herstellen eines Extrakts der Zellen in der Probe und

b) Untersuchen der Proteine des Zellextrakts, um das Vorhandensein des Polypeptids festzustellen.
Verfahren gemäß Anspruch 46, dadurch gekennzeichnet, dass es ferner die Schritte umfasst:
a) Herstellen eines Extrakts der Zellen in der Probe und

b) Untersuchen der mRNA des Zellextrakts, um das Vorhandensein des Nukleinsäuremoleküls festzustellen.
Verfahren gemäß Anspruch 46, dadurch gekennzeichnet, dass das Verfahren verwendet wird, um das Wachstumspotential einer Tumorzelle zu bestimmen, indem der Level der Expression des Polypeptids mit Kontrollproben korreliert wird, um das Tumorwachstumspotential anzuzeigen.
Verfahren gemäß Anspruch 46, dadurch gekennzeichnet, dass es den Schritt des Inkontaktbringens der Probe mit einem Mittel, das das Polypeptid bindet, wodurch das Vorhandensein von Survivin in einer Probe detektiert wird, umfasst.
Verfahren gemäß Anspruch 46, dadurch gekennzeichnet, dass es den Schritt des Inkontaktbringens der Probe mit wenigstens einer Nukleinsäure, die das Nukleinsäuremolekül gemäß Anspruch 1 bindet, wodurch Survivin in der Probe detektiert wird, umfasst.
Verfahren gemäß Anspruch 52, dadurch gekennzeichnet, dass es den Schritt des Amplifizierens des Nukleinsäuremoleküls mit wenigstens einem Primer, der das Nukleinsäuremolekül gemäß Anspruch 1 spezifisch bindet, wodurch Survivin in der Probe detektiert wird, umfasst.
Verfahren gemäß Anspruch 51, dadurch gekennzeichnet, dass das Mittel ein Antikörper ist.
Verfahren gemäß Anspruch 54, dadurch gekennzeichnet, dass das Mittel ein monoklonaler Antikörper ist.
Kit, der ein Survivin-Nukleinsäuremolekül nach Anspruch 1 umfasst, zum Detektieren des Vorhandenseins von Survivin-Protein, das durch ein Nukleinsäuremolekül nach Anspruch 1 codiert wird.
Kit zum Detektieren des Vorhandenseins von Survivin-Protein in einer Probe, der einen Antikörper gemäß Anspruch 29 umfasst.
Verfahren zum Detektieren oder Überwachen eines Krebses, dadurch gekennzeichnet, dass es umfasst: Inkontaktbringen einer Probe von biologischer Flüssigkeit eines Subjekts mit einem Survivin-Nukleinsäuremolekül gemäß Anspruch 1, um das Vorhandensein von Survivin in der Probe zu detektieren, wobei das Vorhandensein von Survivin in der Probe das Vorhandensein von Krebs vorhersagt.
Verfahren zum Detektieren oder Überwachen eines Krebses, dadurch gekennzeichnet, dass es das Inkontaktbringen einer Probe von biologischer Flüssigkeit eines Subjekts mit einem Antikörper gemäß Anspruch 29 und Bestimmen, ob der Antikörper Survivin, das durch das Nukleinsäuremolekül nach Anspruch 1 codiert wird, in der Probe erkennt und daran bindet, umfasst, wobei das Vorhandensein von Survivin dadurch das Vorhandensein von Krebs vorhersagt.
Verfahren gemäß Anspruch 59, dadurch gekennzeichnet, dass das Vorhandensein von Survivin, das durch das Nukleinsäuremolekül nach Anspruch 1 codiert wird, ein Tumorleiden im Endzustand vorhersagt.
Verfahren zum Identifizieren von Mitteln, die die Wechselwirkung von Survivin mit einem Survivin-Bindungspartner blockieren, umfassend:
a) Inkubieren des Polypeptids nach einem der Ansprüche 17, 18 und 21 und eines Bindungspartners mit einem Mittel, das getestet werden soll, und

b) Bestimmen, ob das Mittel die Bindung von Survivin, das durch das Nukleinsäuremolekül nach Anspruch 1 codiert wird, an den Survivin-Bindungspartner blockiert.
Verfahren zum Erhalten des Wachstums von Zellen in Kultur, umfassend das Inkontaktbringen der Zellen mit einer Menge an Survivin, das durch das Nukleinsäuremolekül gemäß Anspruch 1 codiert wird, die wirksam ist, um Apoptose zu verringern.
Verfahren gemäß einem der Ansprüche 51 bis 53, dadurch gekennzeichnet, dass die Probe biologische Flüssigkeit umfasst.
Verfahren gemäß Anspruch 63, dadurch gekennzeichnet, dass die biologische Flüssigkeit Urin ist.