GR1010557B - Sars-cov-2-ειδικα τ λεμφοκυτταρα για θεραπεια της covid-19 - Google Patents
Sars-cov-2-ειδικα τ λεμφοκυτταρα για θεραπεια της covid-19 Download PDFInfo
- Publication number
- GR1010557B GR1010557B GR20220100369A GR20220100369A GR1010557B GR 1010557 B GR1010557 B GR 1010557B GR 20220100369 A GR20220100369 A GR 20220100369A GR 20220100369 A GR20220100369 A GR 20220100369A GR 1010557 B GR1010557 B GR 1010557B
- Authority
- GR
- Greece
- Prior art keywords
- cov
- sars
- virus
- patients
- specific
- Prior art date
Links
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 title claims abstract description 34
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title abstract description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 45
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 claims abstract description 42
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 23
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims abstract description 6
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims abstract description 5
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 claims abstract description 3
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims abstract description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 23
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 12
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 abstract description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 5
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 abstract description 4
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 abstract description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 abstract description 2
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 abstract description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 abstract description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 27
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 8
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 5
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 4
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 3
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 3
- 208000037847 SARS-CoV-2-infection Diseases 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 description 2
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 2
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 2
- 230000009692 acute damage Effects 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000011194 good manufacturing practice Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000000329 lymphopenic effect Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003154 D dimer Substances 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 102000008857 Ferritin Human genes 0.000 description 1
- 238000008416 Ferritin Methods 0.000 description 1
- 108050000784 Ferritin Proteins 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 1
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 206010025327 Lymphopenia Diseases 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035415 Reinfection Diseases 0.000 description 1
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000008910 Severe acute respiratory syndrome-related coronavirus Species 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 230000008482 dysregulation Effects 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 108010052295 fibrin fragment D Proteins 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 238000004362 fungal culture Methods 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011134 hematopoietic stem cell transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000005745 host immune response Effects 0.000 description 1
- 230000008938 immune dysregulation Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 231100001023 lymphopenia Toxicity 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000037125 natural defense Effects 0.000 description 1
- 230000004719 natural immunity Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 230000008447 perception Effects 0.000 description 1
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/215—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/464838—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/20011—Coronaviridae
- C12N2770/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Virology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Η εφεύρεση αφορά την παραγωγή SARS-CoV-2-ειδικών Τ λεμφοκυττάρων και τη χρήση τους σε θεραπεία της ασθένειας COVID-19 που προκαλεί ο ιός SARS CoV-2. Πρόκειται για κύτταρα μνήμης που προέρχονται από ασθενείς που ανάρρωσαν από λοίμωξη από τον ιό SARS-CoV-2, μετά από διέγερση με πεπτίδια αντιγόνων του ιού και καλλιέργεια. Η παραγωγή των SARS-CoV-2-ειδικών Τ λεμφοκυττάρων γίνεται με α) λήψη περιφερικού αίματος από ασθενείς που ανάρρωσαν από λοίμωξη από τον ιό SARS-CoV-2, β) απομόνωση των περιφερικών μονοπύρηνων κυττάρων, γ) διέγερση των περιφερικών μονοπύρηνων κυττάρων με πεπτίδια αντιγόνων του SARS-CoV-2 και δ) καλλιέργεια των διεγερμένων περιφερικών μονοπύρηνων κυττάρων για 9 έως 11 ημέρες, με την παρουσία ιντερλευκινών 4 και 7. Τα SARS-CoV-2-ειδικά Τ λεμφοκύτταρα συλλέγονται και ψύχονται ώστε να κρυοσυντηρηθούν σε θρεπτικό μέσο (π.χ. RPMI advanced) με κρυοπροστατευτικό Dimethyl sulfoxide (DMSO) και ανθρώπινη αλβουμίνη, σε κρυοφιαλίδια και σε οποιαδήποτε επιθυμητή συγκέντρωση και να αποθηκευτούν για μετέπειτα χρήση.
Description
ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ
SARS-CoV-2-ειδικά Τ λεμφοκύτταρα για χρήση σε θεραπεία της COVID-19
Τεχνικό πεδίο της εφεύρεσης
[001] Η παρούσα εφεύρεση αφορά την παραγωγή SARS-CoV-2-ειδικών Τ λεμφοκυττάρων και τη χρήση τους σε θεραπεία της ασθένειας COVID-19 που προκαλεί ο ιός SARS CoV-2.
[002] Ο ιός SARS CoV-2 είναι ένας ιός RNA (+ ssRNA) με γονιδίωμα μονόκλωνου RNA θετικής πολικότητας, κσταγράφηκε για πρώτη φορά το 2019 και κατατάσσεται από την επιστημονική κοινότητα στην οικογένεια των ιών που προκαλούν σοβαρά οξέα αναπνευστικά σύνδρομα (ΣΟΑΣ).
Στάθμη της τεχνικής
[003] Το σοβαρό οξύ αναπνευστικό σύνδρομο, γνωστό και ως SARS, είναι ιογενής νόσος του αναπνευστικού συστήματος, ζωονοσικής προέλευσης. Μια επιδημία SARS από κορωνοϊό (CoV), κσταγράφηκε από τον Νοέμβριο του 2002 μέχρι τον Ιούλιο του 2003 στη νότια Κίνα. Συνολικά κσταγράφηκαν σε 37 χώρες 8.098 περιστατικά και 774 επιβεβαιωμένοι θάνατοι [Smith, Richard D (2006). «Responding to global infectious disease outbreaks: Lessons from SARS on the role of risk perception, communication and management». Social Science & Medicine 63 (12):3113-3. doi: 10.1016/j.socscimed.2006.08.004. PMID 16978751.], με τα περισσότερα περιστατικά να παρατηρούνται στην Κίνα και Χονγκ Κονγκ και τη θνητότητα να ανέρχεται στο 9,6%, σύμφωνα με τον Παγκόσμιο Οργανισμό Υγείας [«Summary of probable SARS cases with onset of illness from 1 November 2002 to 31 July 2003». World Health Organization (WHO)].
Στα τέλη του 2019 ένα νέο είδος κορωνοϊού (CoV-2) αναγνωρίσθηκε ως αιτία μαζικών περιπτώσεων πνευμονίας στην πόλη Wuhan, στην επαρχία Hubei της Κίνας. Ο νέος ιός εξαπλώθηκε γρήγορα, με αποτέλεσμα την απαρχή μιας παγκόσμιας πανδημίας με εκατοντάδες εκατομμύρια επιβεβαιωμένες νέες περιπτώσεις και εκατομμύρια θανάτους. Η καινούρια αυτή νόσος ονομάζεται COronaVIrus Disease 2019 (COVID-19) και προκαλεί σοβαρό οξύ αναπνευστικό σύνδρομο (SARS-CoV-2).
[004] Μετά το ξέσπασμα της πανδημίας COVID-19, υπήρξαν αξιόλογες προσπάθειες από ολόκληρη την επιστημονική κοινότητα για την καταπολέμηση της λοιμώδους νόσου που προκαλείται από τον SARS-CoV-2. Μέχρι σήμερα, οι προσπάθειες επικεντρώθηκαν κυρίως στην ανάπτυξη (προληπτικών) εμβολίων, εκ των οποίων κάποια χρησιμοποίησαν τεχνολογία m-RNA.
Δεδομένου ότι η παθοφυσιολογία της COVID-19 περιλαμβάνει μια ευρεία απορρύθμιση του ανοσοποιητικού συστήματος έναντι του SARS-CoV-2, που χαρακτηρίζεται από μειωμένη επαγωγή ιντερφερονών, πληθωρικές φλεγμονώδεις αποκρίσεις [Wong, L. Υ. R. & Perlman, S. Immune dysregulation and immunopathology induced by SARS-CoV-2 and related coronaviruses — are we our own worst enemy? Nat. Rev. Immunol.
2021 221 22, 47-56 (2021)] και καθυστερημένες επίκτητες ανοσολογικές αποκρίσεις, το τρέχον οπλοστάσιο για τη θεραπεία της περιλαμβάνει κυρίως αντι-ιικούς και ανοσοθεραπευτικούς παράγοντες που ρυθμίζουν την ανοσολογική απόκριση του ξενιστή [van de Veerdonk, F. L etal. A guide to immunotherapy for COVID-19. Nat. Med. 2022281 28, 39-50 (2022)]. Παρά τη μείωση του αριθμού των επιβεβαιωμένων κρουσμάτων, ο αριθμός των εβδομαδιαίων θανάτων παραμένει περίπου 3.000 την εβδομάδα [WHO Coronavirus (COVID-19) Dashboard | WHO Coronavirus (COVID-19) Dashboard With Vaccination Data. Available at: https://covidl9.who.int/. (Accessed: 14th March 2022)], δημιουργώντας επιτακτική ανάγκη για ανάπτυξη νέων θεραπειών, ειδικά για τους νοσηλευόμενους ασθενείς με COVID-19 υψηλού κινδύνου.
[005] Η επιστημονική κοινότητα βρίσκεται σε ένα διαρκή αγώνα για την εύρεση των κατάλληλων θεραπευτικών προσεγγίσεων για την καταπολέμηση της COVID-19, χωρίς ωστόσο τα επιθυμητά αποτελέσματα έως σήμερα, ιδιαίτερα για συγκεκριμένους ευάλωτους πληθυσμούς όπως οι ηλικιωμένοι, οι ανοσοκστασταλμένοικαι τα άτομα με συννοσηρότητες (διαβήτης, καρδιοαγγειακή νόσος), οι οποίοι θεωρούνται υψηλού κινδύνου για δυσμενείς εκβάσεις, συμπεριλαμβανομένου του θανάτου [Imam, Ζ. etal. Older age and comorbidity are independent mortality predictors in a large cohort of 1305 COVID-19 patients in Michigan, United States. J. Intern. Med. 288, 469-476 (2020)]. Καθώς παρατηρήθηκε ότι οι ασθενείς με COVID-19 εμφάνισαν υποξείες και χρόνιες συνέπειες, είναι σημαντική η εύρεση θεραπειών που όχι μόνο θα μειώνουν την οξεία βλάβη, αλλά θα το κάνουν στοχευμένα, αποκαθιστώντας τη φυσιολογική λειτουργία και βοηθώντας στην πρόληψη των μακροπρόθεσμων επιπλοκών της νόσου. Λόγω της δυναμικής των Τ λεμφοκυττάρων, της προσαρμοστικότητάς τους, της ικανότητάς τους να στοχεύουν ειδικά ένα παθογόνο και να αποκαθιστούν το ανοσοποιητικό σύστημα, αποτελούν μία πολλά υποσχόμενη θεραπευτική προσέγγιση της σοβαρής COVID-19.
[006] Τα Τ λεμφοκύτταρα παρέχουν προστασία κατά αναρίθμητων ιών τους οποίους αναγνωρίζουν ειδικά μέσω του υποδοχέα τους. Η υιοθετούμενη ανοσοθεραπεία με αντι-ιικά Τ λεμφοκύτταρα, δηλαδή η χορήγηση αντι-ιικών Τ-λεμφοκυττάρων που πολλαπλασιάζονται στο εργαστήριο από δότες που έχουν προηγουμένως εκτεθεί σε συγκεκριμένο ιό, σε ασθενείς με αντίστοιχη ιογενή λοίμωξη, αποτελεί μια «φυσική» μορφή θεραπείας με εξαιρετικό προφίλ ασφάλειας και αποτελεσματικότητας [Bollard, CM and Heslop HE. T cells for viral infections after allogeneic hematopoietic stem cell transplant. Blood 2016;127(26):3331-40].
Παρουσίαση της εφεύρεσης
[007] Η παρούσα εφεύρεση αφορά θεραπευτική προσέγγιση για την καταπολέμηση της σοβαρής COVID-19 σε νοσηλευόμενους ασθενείς, συμπεριλαμβανομένου του συνδρόμου σοβαρής οξείας αναπνευστικής δυσχέρειας που προκαλείται από τον SARS-CoV-2. Η εφεύρεση αφορά την παραγωγή ειδικών Τ λεμφοκυττάρων που στοχεύουν τον SARS-CoV-2 από αναρρώσαντες δότες, και τη θεραπευτική χορήγησή τους, ως μία έτοιμη φυσική άμυνα, σε ασθενείς με σοβαρή COVID-19. Σε αυτή τη θεραπευτική προσέγγιση, τα «φάρμακα» είναι ζωντανά κύτταρα που παραμένουν στον οργανισμό και «εκπαιδευμένα» στο εργαστήριο να αναγνωρίζουν τον ιό. Μετά τη χορήγησή τους, ως «ζωντανά φάρμακα» πλέον, μπορούν να πολλαπλασιαστούν εντός του σώματος μόλις «δουν» τον ιό και να τον εξαλείψουν με φυσικό τρόπο.
Είναι γνωστό ότι τα άτομα που αναρρώνουν από λοίμωξη από τον SARS-CoV-2, αναπτύσσουν Τ λεμφοκύτταρα που στοχεύουν πλήθος αντιγόνων του ιού, δηλαδή αναγνωρίζουν αντιγόνα του ιού SARS-CoV-2 και τα καταπολεμούν, με τελικό στοχο να τα εξολοθρεύσουν, αποκτώντας έτσι φυσική ανοσία. Ένας αριθμός αυτών των κορωνο-ειδικών Τ λεμφοκυττάρων (CoV-2-specific Τ cells; CoV-2-STs) παραμένουν για αρκετούς μήνες (ίσως και χρόνια, όπως παρατηρήθηκε στην επιδημία από τον SARS-CoV, Li CK et al T Cell Responses to Whole SARS Coronavirus in Humans. J Immunol 2008; 181:5490-5500) στο αίμα του ατόμου ως κύτταρα μνήμης, δηλαδή, λόγω της προηγούμενης έκθεσής τους στον ιό, μπορούν και αναγνωρίζουν ειδικά τα αντιγόνα του ιού SARS-CoV-2, έχοντας την ικανότητα να πολλαπλασιαστούν και να ελέγξουν τον ιό εάν χρειαστεί, σε περίπτωση επαναλοίμωξης. Από τους αναρρώσαντες δότες λοιπόν, λαμβάνουμε μικρή ποσότητα περιφερικού αίματος και απομονώνουμε μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs), τα οποία διεγείρουμε με βιβλιοθήκες αλληλεπικαλυπτόμενων πεπτιδίων των αντιγόνων του κορωνοϊού-2 spike, NCAP ή/και membrane, τα οποία μπορούν να παρουσιαστούν μέσω πλήθους αντιγόνων ιστοσυμβατότητας HLA. Έτσι παράγονται Τ λεμφοκύτταρα που είναι ήδη εκπαιδευμένα στην καταπολέμηση του, τα οποία, μέσω απλής ενδοφλέβιας έγχυσης, πολλαπλασιάζονται στο σώμα του ασθενούς και καταπολεμούν τον SARS-CoV-2 εντός του ασθενούς στον οποίο γίνεται η έγχυση, με τελικό αποτέλεσμα τη βελτίωση των συμπτωμάτων ή και την πλήρη ανάρρωσή του.
Για να είναι άμεσα διαθέσιμα τα CoV-2-STs για τους ασθενείς όταν τα χρειάζονται δημιουργούμε τράπεζα κυτταρικών προϊόντων με μεγάλο αριθμό CoV-2-STs ξεκινώντας από μία μικρή ποσότητα αίματος από τους αναρρώσαντες δότες, με διαδικασία που παρουσιάζεται στη συνέχεια. Μετά τη λήψη του περιφερικού αίματος (~45ml) και τη διέγερση των PBMCs, προβαίνουμε σε καλλιέργεια των διεγερμένων PBMCs με την παρουσία ιντερλευκινών 4 και 7, για 9 έως 11 ημέρες. Η καλλιέργεια, ενδεικτικά, μπορεί να γίνει σε συμβατικά τριβλία καλλιέργειας, φλάσκες ειδικές για καλλιέργεια κυττάρων ή βιοαντιδραστήρες καλλιέργειας κυττάρων.
Η παραγωγή των CoV-2-STs που περιγράφεται εδώ πραγματοποιείται υπό συνθήκες GMP δηλ. Ορθής Παρασκευαστικής Πρακτικής, όπως προβλέπεται για μονάδες επεξεργασίας κυττάρων που προορίζονται για ανθρώπινη χρήση ή προϊόντα προηγμένων θεραπειών.
Η παραγωγή των CoV-2-STs γίνεται σε θρεπτικό υλικό RPMI advanced και Click's εμπλουτισμένο σε ποσοστό από 5% έως 10% με ορό εμβρύου βοός (fetal bovie serum-FBS). Εναλλακτικά, ο ορός βοός μπορεί να αντικστασταθεί από ορό ομάδας αίματος ΑΒ ή αυτόλογο πλάσμα ή και να χρησιμοποιηθούν θρεπτικά μέσα χωρίς ορό. Το θρεπτικό υλικό RPMI advanced και Click's μπορεί να αντικστασταθεί από οποιοδήποτε άλλο θρεπτικό μέσο καλλιέργειας κυττάρων.
Κατά τη διέγερση, τα PBMCs επωάζονται με βιβλιοθήκες αλληλεπι καλυπτόμενων πεπτιδίων των αντιγόνων του κορωνοϊού-2 spike, NCAP ή/και membrane (π.χ. σε συγκέντρωση 1μg/ml) για 30 λεπτά. Εναλλακτικά, τα PBMCs δύνσται να διεγερθούν με βιβλιοθήκες αλληλεπικαλυπτόμενων πεπτιδίων μόνο ενός ή 2 εκ των τριών αντιγόνων ή/και με βιβλιοθήκες πεπτιδίων άλλων αντιγόνων ή/και μεμονωμένα πεπτίδια του κορωνοιού-2. Ο χρόνος της διέγερσης μπορεί να περιοριστεί ή και να αυξηθεί, για παράδειγμα σε 1 ή 1,5 ή 2 ώρες.
Μετά τη διέγερση τα κύτταρα επωάζονται σε αεροδιαπερατούς βιοαντιδραστήρες καλλιέργειας κυττάρων, οι οποίοι προάγουν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε κλειστό σύστημα, για περίπου 10 ημέρες. Εναλλακτικά, μπορούν να καλλιεργηθούν σε συμβατικά τριβλία καλλιέργειας, φλάσκες ειδικές για καλλιέργεια κυττάρων. Αυτή η ημέρα καλλιέργειας θεωρείται ως ημέρα 0. Τα κύτταρα παραμένουν στην καλλιέργεια χωρίς καμία παρέμβαση για 6-8 ημέρες. Την ημέρα 7 (ημέρες 6 ή 7 ή 8) τα κύτταρα καταμετρώνται και το θρεπτικό καλλιέργειάς τους αντικαθίσταται από καινούριο θρεπτικό μέσο εμπλουτισμένο με κυτοκίνες ή εάν έχουν πολλά πλασιαστεί αρκετά, διαμοιράζονται σε 2 βιοαντιδραστήρες, όπου πάλι προστίθεται θρεπτικό μέσο εμπλουτισμένο με κυτοκίνες. Τις υπόλοιπες 3 ημέρες τα κύτταρα παραμένουν στην καλλιέργεια χωρίς καμία παρέμβαση και πραγματοποιείται η έκπτυξη των CoV-2-STs. Η σύντομη καλλιέργεια συνολικής διάρκειας 9-11 ημερών που προτείνεται στη συγκεκριμένη εφεύρεση περιορίζει τους χειρισμούς από το προσωπικό και κατά συνέπεια τον κίνδυνο επιμόλυνσης των τελικών προϊόντων σε σχέση με άλλα πρωτόκολλα που απαιτούν περισσότερες, π.χ.14 ή 21 ημέρες.
Την τελευταία ημέρα (ημέρα 9-11 μετά την διέγερση των κυττάρων), τα κυτταρικά προϊόντα συλλέγονται και ψύχονται ώστε να κρυοσυντηρηθούν σε θρεπτικό μέσο (π.χ. RPMI advanced) με κρυοπροστατευτικό Dimethyl sulfoxide (DMSO) και ανθρώπινη αλβουμίνη, σε κρυοφιαλίδια και σε οποιαδήποτε επιθυμητή συγκέντρωση, για παράδειγμα συγκέντρωση περίπου 10x10<6>/ml, και να αποθηκευτούν για μετέπειτα χρήση.
Τελικά, από ~45ml αίματος, σε διάστημα 10 ημερών και με μόνο μία διέγερση μπορούν να παραχθούν από κάθε δότη κατά μέσο όρο 650x10<6>CoV-2-STs (τα οποία συνιστούν τουλάχιστον σε 15 κλινικές δόσεις προϊόντος), τα οποία είναι πολυκλωνικά κυτταρικά προϊόντα αποτελούμενα από CD4+ και CD8+ κύτταρα, με ισχυρή δραστικότητα «ευρέος φάσματος», δηλαδή δραστικότητα έναντι πολλών επίτοπων διαφορετικών αντιγόνων του SARS-CoV-2. Το τελευταίο, διασφαλίζει σε μεγάλο βαθμό τη διατήρηση της δραστικότητάς τους έναντι των γνωστών μεταλλάξεων αλλά και νέων μεταλλάξεων του ιού που μπορεί να εμφανιστούν.
Με την ολοκλήρωση της καλλιέργειας, τα CoV-2-STs αξιολογούνται ως προς το εάν πληρούν τα απαραίτητα κριτήρια απελευθέρωσης προς έγχυση. Συγκεκριμένα ελέγχονται ως προς την έκπτυξη, τη λειτουργικότητά τους, τη βιωσιμότητα, τη στειρότητα, τον φαινότυπο και τα αντιγόνα ιστοσυμβατότητας HLA.
To κατάλληλο κυτταρικό προϊόν θα πρέπει να πληροί τα παρακάτω κριτήρια:
Τα κύτταρα να έχουν εκπτυχθεί πάνω από 4 φορές; για παράδειγμα έκπτυξη 5, 10, 15, ή 20 φορές είναι κατάλληλη.
Η βιωσιμότητα θα πρέπει να υπερβαίνει το 70%; για παράδειγμα βιωσιμότητα 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ή 99% μπορεί να είναι κατάλληλη.
Οι καλλιέργειες για αερόβια/αναερόβια/μύκητες να είναι στείρες και ο έλεγχος ανίχνευσης μυκοπλάσμστος και ενδοτοξίνης αρνητικός.
Φαινοτυπικά τα παραγμένα κυτταρικά προϊόντα θα πρέπει να εμπεριέχουν >80% Τ-λεμφοκύτταρα.
Λειτουργικά, ως προς την ειδικότητά τους τα παραγμένα κυτταρικά προϊόντα θα πρέπει να εκκρίνουν ιντερφερόνη-γ (IFN-γ) ως απόκριση στη διέγερση με πεπτίδια του κορωνοϊού-2 και να σχηματίζουν τουλάχιστον 30 κηλίδες ανά 200.000 κύτταρα στη δοκιμασία enzyme-linked immune absorbent spot (elispot), π.χ. 100, 200, 300, 400, 500, 600, 800, 1000.
Γονοτυπικά, τα παραγμένα κυτταρικά προϊόντα ταυτοποιούνται ως προς την έκφραση HLA. Λειτουργικά, μπορεί να ταυτοποιηθεί και μέσω ποιου HLA ασκείται η ειδικότητα των παραγμένων κυτταρικών προϊόντων μετά από διέγερση με μονήρη πεπτίδια του κορωνοϊού-2, τα οποία είναι γνωστό ότι παρουσιάζονται από συγκεκριμένα HLAs, με τη δοκιμασία enzyme-linked immune absorbent spot (elispot). Μία λίστα τέτοιων πεπτιδίων περιλαμβάνεται στα παρακάτω παραδείγματα. Έκκριση IFN-γ ως απόκριση στα μονήρη πεπτίδια του κορωνοϊού-2 με γνωστή ρύθμιση μέσω συγκεκριμένου HLA και σχηματισμός τουλάχιστον 30 κηλίδων ανά 200.000 κύτταρα π.χ. 100, 200, 300, 400, 500, 600, 800, 1000, φανερώνει ειδικότητα του κυτταρικού προϊόντος μέσω του συγκεκριμένου HLA. Τόσο η γονοτυπική όσο και η λειτουργική HLA χαρτογράφηση των CoV-2-STs συντελούν στην επιλογή του καταλληλότερου από πλευράς συμβατότητας και απόδοσης κυτταρικού προϊόντος προς έγχυση, σε σχέση με τα HLA του ασθενούς.
Στον παρακάτω πίνακα αναφέρονται, ενδεικτικά, κάποια από τα πεπτίδια που μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την ταυτοποίηση των αντιγόνων ιστοσυμβατότητας μέσω των οποίων ασκείται η δράση των CoV-2-STs:
Δηλαδή, τα κυτταρικά προϊόντα, CoV-2-STs, που θα παράγονται θα είναι χαρακτηρισμένα φαινοτυπικά, γενετικά (ως προς τα αντιγόνα ιστοσυμβατότητας, human leucocyte antigen - HLA) και λειτουργικά, και θα αποθηκεύονται κρυοσυντηρημένα σε δεξαμενές υγρού αζώτου, με οποιαδήποτε αποδεκτή μέθοδο κρυοκατάψυξης, ώστε να είναι άμεσα διαθέσιμα προς χορήγηση (τράπεζα CoV-2-STs).
Η επιλογή των δοτών είναι καλό να γίνεται με βάση τα πλέον επικρατή HLA, εθνικά ή/και ευρωπαϊκά, καθώς με δεδομένο ότι κάθε παραγωγή αποδίδει περίπου 10-15 δόσεις κυτταρικών προϊόντων, δίνεται η δυνατότητα από έναν μικρό σχετικά αριθμό δοτών (π.χ 30 για την Ελλάδα) που εκπροσωπούν ευρέως τον γενικό πληθυσμό ως προς τα HLA, να καλυφθούν σε ποσοστό >95% οι ασθενείς σε επίπεδο εθνικό/ευρωπαϊκό.
Οι νοσηλευόμενοι ασθενείς που χαρακτηρίζονται υψηλού ρίσκου για σοβαρή COVID-19 δηλ. ηλικιωμένοι, ανοσοκστασταλμένοι, καρκινοπαθείς, χημειοθεραπευμένοι, μεταμοσχευμένοι, σοβαρά λεμφοπενικοί, ασθενείς με συννοσηρότητες όπως διαβήτης, παχυσαρκία, καρδιαγγειακά νοσήματα κλπ, και με πνευμονία, μπορούν να ταυτοποιούνται επειγόντως ως προς τα αντιγόνα ιστοσυμβατότητας (HLA) για να λάβουν ενδοφλέβια μία ή περισσότερες δόσεις συμβατών, ως προς τουλάχιστον ένα ή/και περισσότερα HLA, CoV-2-SΤs από την τράπεζα κυτταρικών προϊόντων.
[008] Τα παραχθέντα CoV-2-STs θα χρησιμοποιούνται σε θεραπεία της COVID-19. Χορηγούνται ενδοφλέβια, άμεσα μετά την απόψυξή τους και το αργότερο εντός 2 ωρών, σε νοσηλευόμενους ασθενείς που δεν έχουν αναπτύξει ικανή δική τους άμυνα έναντι του SARS-CoV-2 (π.χ λεμφοπενι κοί ασθενείς), και επομένως έχουν ανάγκη να οχυρωθούν μέσω μιας «έτοιμης» άμυνας. Η χορήγησή τους σε ασθενείς υψηλού κινδύνου θεωρείται ιδιαίτερα σημαντική για μια επιτυχή έκβαση. Το προτεινόμενο πρωτόκολλο χορήγησης των CoV-2-STs σε ασθενείς με COVID-19 οι οποίοι διατρέχουν υψηλό κίνδυνο για δυσμενή εξέλιξη της νόσου, περιλαμβάνει τα ακόλουθα βήματα:
επιβεβαίωση της λοίμωξης από SARS-CoV-2,
έλεγχος (screening) κλινικών παραμέτρων του ασθενούς (ανάγκες σε οξυγόνο, πνευμονία, συννοσηρότητες, ηλικία, κλπ),
έλεγχος εργαστηριακών παραμέτρων (λεμφοπενία, βιοδείκτες όπως CRP, LDH, D-dimer, Ferritin),
τυποποίηση των HLA του ασθενούς,
εύρεση HLA συμβατού κυτταρικού προϊόντος από την τράπεζα των CoV-2-STs (με συμβατότητα >1 HLA)
ενδοφλέβια έγχυση CoV-2-SΤs εντός 8 ημερών από την έναρξη των συμπτωμάτων
παρακολούθηση της κλινικής εικόνας του ασθενούς σε τακτικά χρονικά στιγμιότυπα μετά την έγχυση, παρακολούθηση της θετικότητας στον ιό, παρακολούθηση εργαστηριακών παραμέτρων σε τακτικά χρονικά στιγμιότυπα μετά την έγχυση [γενική αίματος, βιοχημική εξέταση, επίπεδα Τ, Β και ΝΚ λεμφοκυττάρων, επίπεδα CoV-2-STs, επίπεδα κορωνο-ειδικών αντισωμάτων (IgG, IgM και εξουδετερωτικών αντισωμάτων), μέτρηση των επιπέδων κυτταροκινών (π.χ. IL-6, TNF-a, IFN-γ, IL-10, IL-2)] και παρακολούθηση της παραμονής των χορηγούμενων CoV-2-STs στο αίμα του ασθενούς.
Εάν ο ασθενής εξακολουθεί να έχει χαμηλό αριθμό Τ λεμφοκυττάρων (<800 CD3+ κύτταρα/μl αίματος) 7-11 ημέρες μετά την έγχυση μπορεί να λάβει και 2<η>χορήγηση CoV-2-STs. Εάν εξακολουθήσει να έχει χαμηλό αριθμό Τ λεμφοκυττάρων μπορεί να λάβει και 3<η>χορήγηση CoV-2-STs με μεσοδιάστημα 7 ημερών.
Η αποτελεσματική δόση CoV-2-STs βασίζεται στην επιφάνεια σώματος του ασθενούς και μπορεί να κυμαίνεται από 1 έως 2χ10<7>ή και παραπάνω κύτταρα /m<2>επιφάνειας σώματος.
Η ενδοφλέβια χορήγηση διαρκεί λιγότερο από 10 λεπτά.
Οι ασθενείς θα μπορούν να λάβουν εγκεκριμένη φαρμακευτική αγωγή, ή την πρότυπη φαρμακευτική φροντίδα πριν, ταυτόχρονα ή μετά τη χορήγηση των CoV-2-STs. Επίσης, μπορεί να έχει προηγηθεί ανεπιτυχής χορήγηση εγκεκριμένης φαρμακευτικής αγωγής.
Η παρακολούθηση των κλινικών και εργαστηριακών παραμέτρων των ασθενών θα μπορεί να πραγματοποιείται σε τακτά χρονικά διαστήματα, για παράδειγμα τις ημέρες 3, 5, 10, 15, 22, 30, 45 και 60 μετά την χορήγηση των CoV-2-STs.
Η χορήγηση CoV-2-STs μπορεί να επιταχύνει την ανάρρωση ασθενών υψηλού κινδύνου με COVID-19 και να μειώσει την θνητότητα μέχρι και 52%.
[009] Δεδομένης της έλλειψης επιθυμητών αποτελεσμάτων στην καταπολέμηση της COVID-19, ιδιαίτερα σε συγκεκριμένους ευάλωτους πληθυσμούς όπως οι ηλικιωμένοι, οι ανοσοκατασταλμένοι, οι καρκινοπαθείς, οι χημειοθεραπευμένοι, οι μεταμοσχευμένοι συμπαγών οργάνων και αιμοποιητικών στελεχιαίων κυττάρων, και οι ασθενείς με συννοσηρότητες όπως διαβήτης, παχυσαρκία, καρδιαγγειακά νοσήματα κλπ, είναι επιτακτική ανάγκη η εύρεση νέων θεραπευτικών στρατηγικών που θα σημάνουν το τέλος της πανδημίας. Η παρούσα εφεύρεση προσφέρει μία θεραπευτική στρατηγική στη μάχη έναντι της πανδημίας COVID-19.
Η συγκεκριμένη εφεύρεση περιλαμβάνει μια ταχεία και αποτελεσματική μέθοδο για τη δημιουργία CoV-2-STs με ισχυρή δραστικστητα «ευρέος φάσματος», δηλαδή δραστικότητα έναντι πολλαπλών επίτοπων διαφορετικών αντιγόνων του SARS-CoV-2, (και άρα με μικρή πιθανότητα διαφυγής της αποτελεσμστικότητας λόγω ανάπτυξης νέων μεταλλάξεων) και ένα πρωτόκολλο θεραπευτικής χορήγησης αυτών των κυττάρων.
Σε αντίθεση με άλλες τεχνικές παραγωγής Τ λεμφοκυττάρων για χρήση σε θεραπεία της COVID-19 ή άλλων ιογενών λοιμώξεων, η συγκεκριμένη εφεύρεση επιτρέπει την ταχεία παραγωγή πολλαπλών (δόσεων) κυτταρικών προϊόντων από μια μικρή ποσότητα περιφερικού αίματος και σε διάστημα μόλις 9-11 ημερών, με μόνο μία διέγερση, χωρίς την απαίτηση για 3 ή 4 διεγέρσεις.
Με την προτεινόμενη στην παρούσα εφεύρεση τεχνολογία, τα κυτταρικά προϊόντα παράγονται χρησιμοποιώντας βιβλιοθήκες αλληλεπι καλυπτόμενων πεπτιδίων των αντιγόνων του SARS-CoV-2. Με αυτόν τον τρόπο παραγωγής δίνεται η δυνατότητα μέσα από μία τράπεζα κυττάρων που δημιουργείται από σχετικά μικρό αριθμό δοτών (π.χ 30) οι οποίοι όμως αντιπροσωπεύουν ευρέως τον γενικό πληθυσμό ως προς τα HLA, να μπορούν να βρεθούν κυτταρικά προϊόντα καταλλήλως συμβατά με όλους τους ασθενείς που τα χρειάζονται.
Τα CoV-2-STs παρέχουν την δυνατότητα να μειώσουν την οξεία βλάβη που προκαλείται από τον SARS-CoV-2, να αποκαταστήσουν τη φυσιολογική λειτουργία του οργανισμού και να μειώσουν τις μακροπρόθεσμες επιπλοκές του νόσου στοχευμένα, αναγνωρίζοντας δηλαδή ειδικά τον συγκεκριμένο ιό, αποφεύγοντας επιπλοκές και τοξικότητες που παρατηρούνται με την χρήση των μη ειδικών για τον SARS-CoV-2 φαρμακευτικών παραγόντων.
Καθώς τα παραγόμενα με την παρούσα εφεύρεση CoV-2-STs προέρχονται από δότες που ανάρρωσαν μετά από έκθεση στον SARS-CoV-2, στοχεύουν σε μία πληθώρα αντιγόνων του ιού, δηλαδή τα αναγνωρίζουν, τα οποία είναι βασικά για την επιβίωση και τη λειτουργία του, ώστε να μπορούν να καταπολεμήσουν και να εξολοθρεύσουν τα μολυσμένα από τον ιό κύτταρα, για αυτό και εμφανίζουν ισχυρή δραστικότητα όχι μόνο έναντι του μη μεταλλαγμένου στελέχους του κορωνοϊού-2, αλλά και έναντι των μέχρι σήμερα μεταλλαγμένων στελεχών του ιού (alpha, beta, delta, omicron), καθώς και θεωρητικά έναντι κάθε μελλοντικού μεταλλαγμένου στελέχους. Κατά συνέπεια έχουν την ικανότητα να προστατέψουν τους ασθενείς που θα τα λάβουν από σοβαρή λοίμωξη από πολλαπλά στελέχη του ιού. Ακόμη και εάν δημιουργηθεί μία μετάλλαξη του ιού η οποία δεν καλύπτεται από τα αποθηκευμένα στην τράπεζα CoV-2-STs, κυτταρικά προϊόντα μπορούν να παραχθούν εκ νέου από αναρρώσαντες που έχουν μολυνθεί από το συγκεκριμένο μεταλλαγμένο στέλεχος του ιού και να επεκταθεί η τράπεζα κυτταρικών προϊόντων.
Περιγραφή των σχεδίων
[009] Το σχήμα 1 δείχνει τη διαδικασία παραγωγής CoV-2-STs. Συγκεκριμένα μία μικρή ποσότητα αίματος (1) επιστοιβάζετε σε διάλυμα φικόλης (2) για την απομόνωση των περιφερικών μονοπύρηνων κυττάρων (PBMCs). Τα απομονωμένα PBMCs διεγείρονται (3) με ένα μείγμα αλληλεπικαλυπτόμενων πεπτιδίων πχ τριών αντιγόνων του κορωνοϊού-2 [spike (4), NCAP (5) ή/και membrane (6) (π.χ. σε συγκέντρωση 1μg/ml) για 30 λεπτά. Τα διεγερμένα με πεπτίδια του SARS-CoV-2 PBMCs, καλλιεργούνται σε συμβατικά τριβλία καλλιέργειας (7) ή σε βιοαντιδραστήρες καλλιέργειας κυττάρων (8) σε θρεπτικό υλικό παρουσία ιντελευκινών 4 και 7. Τα κορωνο-ειδικά Τ λεμφοκύτταρα (9) που εμπεριέχονται στα διεγερμένα με πεπτίδια του SARS-CoV-2 PBMCs, εκπτύσσονται στην καλλιέργεια και σε διάστημα 10 ημερών επιτυγχάνεται ένας εμπλουτισμός του κυτταρικού προϊόντος σε CoV-2-STs.
[010] Το σχήμα 2 δείχνει τη λογική αξιοποίησης ενός υγιούς, COVID-19 αναρρώσαντος δότη (10) για την παραγωγή κυτταρικού προϊόντος CoV-2-STs (11), το οποίο μπορεί να χορηγηθεί σε πολλούς ασθενείς με COVID-19 υψηλού κινδύνου (12) με τους οποίους υπάρχει συμβατότητα ως προς τουλάχιστον 1 HLA μέσω του οποίου αναγνωρίζεται ο SARS-CoV-2.
[011] Το σχήμα 3 δείχνει τη λογική δημιουργίας τράπεζας κυτταρικών προϊόντων CoV-2-STs. Συγκεκριμένα, μετά από έκθεση στον SARS-CoV-2 (13), ένα υγιές άτομο (14) μπορεί να αναπτύξει Τ λεμφοκύτταρα μνήμης ειδικά έναντι του ιού (15) και να αναρρώσει. Από το αίμα αυτών των υγιών αναρρωσάντων COVID-19 δοτών (16), μπορούν να παραχθούν CoV-2-STs κυτταρικά προϊόντα, τα οποία μπορούν να ψυχθούν και να αποθηκευτούν σε δεξαμενές υγρού αζώτου (17) ώστε να είναι έτοιμα προς χορήγηση (τράπεζα κυτταρικών προϊόντων). Τα CoV-2-STs κυτταρικά προϊόντα μπορούν στη συνέχεια να εγχυθούν (18) ενδοφλέβια σε νοσηλευόμενους ασθενείς που χαρακτηρίζονται υψηλού ρίσκου για σοβαρή COVID-19 (ηλικιωμένοι, ανοσοκατασταλμένοι, καρκινοπαθείς, χημειοθεραπευμένοι, μεταμοσχευμένοι, ασθενείς με συννοσηρότητες όπως διαβήτης, παχυσαρκία, καρδιαγγειακά νοσήματα κλπ) (19) εφόσον οι ασθενείς εμφανίζουν τουλάχιστον ένα ή/και περισσότερα συμβατά HLA, με τα CoV-2-STs της τράπεζας κυτταρικών προϊόντων.
[012] Το σχήμα 4 δείχνει τον πιθανό μηχανισμό δράσης των CoV-2-STs in vivo, μετά την χορήγησή τους σε ασθενείς υψηλού κινδύνου. Συγκεκριμένα, μετά από έγχυση των CoV-2-STs (20) σε νοσηλευόμενο ασθενή που χαρακτηρίζεται υψηλού ρίσκου για σοβαρή COVID-19 (21), ο οποίος φέρει πολλά κύτταρα μολυσμένα με τον ιό SARS-CoV-2 ή κύτταρα που παρουσιάζουν τον ιό (22), τα χορηγούμενα CoV-2-STs πολλαπλασιάζονται στο σώμα του ασθενούς (23) καταστρέφοντας τα μολυσμένα από τον ιό κύτταρα του ασθενούς. Πιο αναλυτικά, αντιγονοπαρουσιαστικά κύτταρα ή κύτταρα μολυσμένα με τον ιό SARS-CoV-2 (24) παρουσιάζουν πεπτίδια αντιγόνων του ιού σε κυτταροτοξικά Τ λεμφοκύτταρα (25) ή σε Τ λεμφοκύτταρα βοήθειας (26). Τα Τ λεμφοκύτταρα βοήθειας εκκρίνουν κυτοκίνες (27) οι οποίες μπορούν να ενεργοποιήσουν περαιτέρω τα κυτταροτοξικά Τ λεμφοκύτταρα. Τόσο τα κυτταροτοξικά Τ λεμφοκύτταρα όσο και τα Τ λεμφοκύτταρα βοήθειας μεταναστεύουν στους ιστούς όπου υπάρχει η λοίμωξη από τον SARS-CoV-2 (28), όπου εκκρίνοντας διάφορους παράγοντες, π.χ. granzyme και περφορίνη (29), επιτυγχάνουν την λύση/εξουδετέρωση των μολυσμένων από τον ιό κυττάρων (30).
Πραγματοποίηση της εφεύρεσης
[013] Το παράδειγμα 1 (1 και 3) δείχνει την εφαρμογή της εφεύρεσης, δηλαδή τη διαδικασία παραγωγής και τη χρήση των SARS-CoV-2 ειδικών Τ-λεμφοκυττάρων. Συγκεκριμένα, το σχήμα 3 ξεκινάει από τη μόλυνση ασθενών με τον ιό και καταλήγει στη χορήγηση των SARS-CoV-2 ειδικών Τ-λεμφοκυττάρων. Το σχήμα 1 δείχνει τη διαδικασία παραγωγής των λεμφοκυττάρων, δηλαδή τη διαδικασία που μεσολαβεί από τη λήψη των μονοπύρηνων κυττάρων από τους ασθενείς που νόσησαν μέχρι την παρασκευή του τελικού προϊόντος που χορηγείται ενδοφλέβια.
Claims (1)
- ΑΞΙΩΣΕΙΣΑξίωση 1<η>: SARS-CoV-2-ειδικά Τ λεμφοκύτταρα που προέρχονται από περιφερικά μονοπύρηνα κύτταρα μνήμης από ασθενείς που ανάρρωσαν από λοίμωξη από τον ιό SARS-CoV-2 και χαρακτηρίζονται από το ότι αναγνωρίζουν αντιγόνα του ιού SARS-CoV-2 και μπορούν να καταπολεμήσουν τα μολυσμένα από τον ιό κύτταρα, με στόχο την εξολόθρευσή τους.Αξίωση 2<η>: SARS-CoV-2-ειδικά Τ λεμφοκύτταρα που αναφέρονται στην αξίωση 1 και χαρακτηρίζονται από το ότι μπορούν να χρησιμοποιηθούν σε θεραπεία για ασθενείς με νόσο COVID-19 που προκαλεί ο ιός SARS-CoV-2.Αξίωση 3<η>: Διαδικασία παραγωγής των SARS-CoV-2-ειδικών Τ λεμφοκυττάρων που αναφέρονται στην αξίωση 1 που χαρακτηρίζεται από τα εξής στάδια α) λήψη περιφερικού αίματος από ασθενείς που ανάρρωσαν από λοίμωξη από τον ιό SARS-CoV-2, β) απομόνωση των περιφερικών μονοπύρηνων κυττάρων, γ) διέγερση των περιφερικών μονοπύρηνων κυττάρων με πεπτίδια αντιγόνων του SARS-CoV-2 και δ) καλλιέργεια των διεγερμένων περιφερικών μονοπύρηνων κυττάρων για 9 έως 11 ημέρες, με την παρουσία ιντερλευκινών 4 και 7.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GR20220100369A GR1010557B (el) | 2022-05-04 | 2022-05-04 | Sars-cov-2-ειδικα τ λεμφοκυτταρα για θεραπεια της covid-19 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GR20220100369A GR1010557B (el) | 2022-05-04 | 2022-05-04 | Sars-cov-2-ειδικα τ λεμφοκυτταρα για θεραπεια της covid-19 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| GR1010557B true GR1010557B (el) | 2023-10-16 |
Family
ID=83593845
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| GR20220100369A GR1010557B (el) | 2022-05-04 | 2022-05-04 | Sars-cov-2-ειδικα τ λεμφοκυτταρα για θεραπεια της covid-19 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| GR (1) | GR1010557B (el) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020243729A1 (en) * | 2019-05-31 | 2020-12-03 | Children's National Medical Center | Cytokine cocktails for selective expansion of t cell subsets |
| WO2021189084A1 (en) * | 2020-03-20 | 2021-09-23 | Baylor College Of Medicine | Sars-cov2-specific t cell compositions and their use in treating and preventing coronavirus and other respiratory virus infections |
| WO2021194940A1 (en) * | 2020-03-27 | 2021-09-30 | Children's National Medical Center | Sars-cov-2-specific t cells and methods of treatment using them |
| WO2021203061A1 (en) * | 2020-04-03 | 2021-10-07 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | Stem cell immunomodulatory therapy for covid-19 infection |
| WO2021232048A1 (en) * | 2020-05-11 | 2021-11-18 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Sars-cov-2-specific t cells |
| WO2022051520A1 (en) * | 2020-09-02 | 2022-03-10 | Gumrukcu Serhat | Expanded memory subsets of gamma delta t cells for immunotherapy |
-
2022
- 2022-05-04 GR GR20220100369A patent/GR1010557B/el active IP Right Grant
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020243729A1 (en) * | 2019-05-31 | 2020-12-03 | Children's National Medical Center | Cytokine cocktails for selective expansion of t cell subsets |
| WO2021189084A1 (en) * | 2020-03-20 | 2021-09-23 | Baylor College Of Medicine | Sars-cov2-specific t cell compositions and their use in treating and preventing coronavirus and other respiratory virus infections |
| WO2021194940A1 (en) * | 2020-03-27 | 2021-09-30 | Children's National Medical Center | Sars-cov-2-specific t cells and methods of treatment using them |
| WO2021203061A1 (en) * | 2020-04-03 | 2021-10-07 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | Stem cell immunomodulatory therapy for covid-19 infection |
| WO2021232048A1 (en) * | 2020-05-11 | 2021-11-18 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Sars-cov-2-specific t cells |
| WO2022051520A1 (en) * | 2020-09-02 | 2022-03-10 | Gumrukcu Serhat | Expanded memory subsets of gamma delta t cells for immunotherapy |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Barbet et al. | Sensing microbial viability through bacterial RNA augments T follicular helper cell and antibody responses | |
| Zuniga et al. | Innate and adaptive immune regulation during chronic viral infections | |
| Kumararatne et al. | Specific lysis of mycobacterial antigen-bearing macrophages by class II MHC-restricted polyclonal T cell lines in healthy donors or patients with tuberculosis | |
| Zhao et al. | Protective role of γδ T cells in different pathogen infections and its potential clinical application | |
| Meraviglia et al. | γδ T cells cross‐link innate and adaptive immunity in Mycobacterium tuberculosis infection | |
| Wu et al. | γδ T cells and their potential for immunotherapy | |
| Morandi et al. | NK cells of human secondary lymphoid tissues enhance T cell polarization via IFN‐γ secretion | |
| Mills et al. | Antigen-specific regulatory T cells—their induction and role in infection | |
| Akdis et al. | T regulatory cells in allergy: novel concepts in the pathogenesis, prevention, and treatment of allergic diseases | |
| Pannetier et al. | Human dendritic cells infected with the nonpathogenic Mopeia virus induce stronger T-cell responses than those infected with Lassa virus | |
| Conceição-Silva et al. | The binomial parasite-host immunity in the healing process and in reactivation of human tegumentary leishmaniasis | |
| Lu et al. | Cannabinoid treatment suppresses the T-helper cell-polarizing function of mouse dendritic cells stimulated with Legionella pneumophila infection | |
| Yang | Factors regulating apoptosis and homeostasis of CD4+ CD25 (high) FOXP3+ regulatory T cells are new therapeutic targets | |
| Chivero et al. | Human Pegivirus (HPgV; formerly known as GBV-C) inhibits IL-12 dependent natural killer cell function | |
| Laphanuwat et al. | Senescent T cells: Beneficial and detrimental roles | |
| JP2022527293A (ja) | 複数の呼吸器ウイルス抗原に特異的なｔ細胞及びその作製方法及び治療での使用方法 | |
| Gay et al. | Role of Vγ9vδ2 T lymphocytes in infectious diseases | |
| Stackaruk et al. | Type I interferon regulation of natural killer cell function in primary and secondary infections | |
| Piersma et al. | Influenza matrix 1‐specific human CD4+ FOXP3+ and FOXP3− regulatory T cells can be detected long after viral clearance | |
| US11207401B1 (en) | COVID-19 peptide specific T-cells and methods of treating and preventing COVID-19 | |
| Rushbrook et al. | T-regulatory lymphocytes and chronic viral hepatitis | |
| Franco et al. | SARS-CoV-2 spike-specific regulatory T cells (Treg) expand and develop memory in vaccine recipients suggesting a role for immune regulation in preventing severe symptoms in COVID-19 | |
| Ferreras et al. | Results of phase 2 randomized multi-center study to evaluate the safety and efficacy of infusion of memory T cells as adoptive therapy in severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) pneumonia and/or lymphopenia (RELEASE NCT04578210) | |
| JP2021502796A (ja) | Ｎｋ細胞培養用組成物、及びそれを利用してｎｋ細胞を培養する方法 | |
| Mbawuike et al. | Human Interleukin-12 Enhances Interferon-γ—Producing Influenza-Specific Memory CD8+ Cytotoxic T Lymphocytes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PG | Patent granted |
Effective date: 20231113 |