GR1010099B - Thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl acetamides as autotaxin inhibitors - Google Patents
Thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl acetamides as autotaxin inhibitors Download PDFInfo
- Publication number
- GR1010099B GR1010099B GR20200100391A GR20200100391A GR1010099B GR 1010099 B GR1010099 B GR 1010099B GR 20200100391 A GR20200100391 A GR 20200100391A GR 20200100391 A GR20200100391 A GR 20200100391A GR 1010099 B GR1010099 B GR 1010099B
- Authority
- GR
- Greece
- Prior art keywords
- group
- fibrosis
- atx
- autotaxin
- inhibition
- Prior art date
Links
- 102100021977 Ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase family member 2 Human genes 0.000 title claims abstract description 82
- 108050004000 Ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase family member 2 Proteins 0.000 title claims abstract description 81
- -1 pyrazol-3-yl acetamides Chemical class 0.000 title claims abstract description 72
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title description 3
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims abstract description 35
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 25
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims abstract description 17
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 16
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 15
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims abstract description 15
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 claims abstract description 15
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims abstract description 12
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 claims abstract description 11
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 claims abstract description 11
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 230000009787 cardiac fibrosis Effects 0.000 claims abstract description 9
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 201000002793 renal fibrosis Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 claims abstract description 8
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims abstract description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 24
- KYQCOXFCLRTKLS-UHFFFAOYSA-N Pyrazine Chemical compound C1=CN=CC=N1 KYQCOXFCLRTKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N Piperazine Chemical compound C1CNCCN1 GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N Naphthalene Chemical compound C1=CC=CC2=CC=CC=C21 UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N Phenazine Natural products C1=CC=CC2=NC3=CC=CC=C3N=C21 PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- PBMFSQRYOILNGV-UHFFFAOYSA-N pyridazine Chemical compound C1=CC=NN=C1 PBMFSQRYOILNGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- BCHZICNRHXRCHY-UHFFFAOYSA-N 2h-oxazine Chemical compound N1OC=CC=C1 BCHZICNRHXRCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- 125000004800 4-bromophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C([H])C([H])=C1Br 0.000 claims description 5
- KGWNRZLPXLBMPS-UHFFFAOYSA-N 2h-1,3-oxazine Chemical compound C1OC=CC=N1 KGWNRZLPXLBMPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- YHWMFDLNZGIJSD-UHFFFAOYSA-N 2h-1,4-oxazine Chemical compound C1OC=CN=C1 YHWMFDLNZGIJSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N anthracene Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3C=C21 MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 15
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 abstract description 12
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 abstract description 5
- 125000000171 (C1-C6) haloalkyl group Chemical group 0.000 abstract 2
- 125000000876 trifluoromethoxy group Chemical group FC(F)(F)O* 0.000 abstract 2
- WRGQSWVCFNIUNZ-GDCKJWNLSA-N 1-oleoyl-sn-glycerol 3-phosphate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)COP(O)(O)=O WRGQSWVCFNIUNZ-GDCKJWNLSA-N 0.000 description 17
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 108010022198 alkylglycerophosphoethanolamine phosphodiesterase Proteins 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 13
- WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N Pyrazole Chemical compound C=1C=NNC=1 WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 11
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 9
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- PKYCWFICOKSIHZ-UHFFFAOYSA-N 1-(3,7-dihydroxyphenoxazin-10-yl)ethanone Chemical compound OC1=CC=C2N(C(=O)C)C3=CC=C(O)C=C3OC2=C1 PKYCWFICOKSIHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 7
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical class NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 7
- RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 1-acetyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 6
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 6
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 6
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 108010000659 Choline oxidase Proteins 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- OHPSBDAUCJNDHP-UHFFFAOYSA-N 4-oxothiolane-3-carbonitrile Chemical compound O=C1CSCC1C#N OHPSBDAUCJNDHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 4
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 4
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 4
- 125000003226 pyrazolyl group Chemical group 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ASWBNKHCZGQVJV-HSZRJFAPSA-N 1-hexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-HSZRJFAPSA-N 0.000 description 3
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 3
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 3
- 108090001050 Phosphoric Diester Hydrolases Proteins 0.000 description 3
- 102000004861 Phosphoric Diester Hydrolases Human genes 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- 239000003518 caustics Substances 0.000 description 3
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 3
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 3
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- IRQRBVOQGUPTLG-UHFFFAOYSA-M sodium;3-(n-ethyl-3-methylanilino)-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)CC(O)CN(CC)C1=CC=CC(C)=C1 IRQRBVOQGUPTLG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 3
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000006154 Chronic hepatitis C Diseases 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- OATSQCXMYKYFQO-UHFFFAOYSA-N S-methyl thioacetate Chemical compound CSC(C)=O OATSQCXMYKYFQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009087 cell motility Effects 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 2
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N glycine betaine Chemical compound C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000010710 hepatitis C virus infection Diseases 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 208000008338 non-alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 description 2
- 201000004071 non-specific interstitial pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical class NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- 125000004739 (C1-C6) alkylsulfonyl group Chemical group 0.000 description 1
- VPBZAEQIIOFSLN-UHFFFAOYSA-N 2-(4-bromophenyl)-1,4-dihydrothieno[3,4-c]pyrazol-3-amine Chemical compound NC(N(C(C=C1)=CC=C1Br)N1)=C2C1=CSC2 VPBZAEQIIOFSLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SVEQHRSELNPKJJ-UHFFFAOYSA-N 2-methoxypyridin-4-amine Chemical compound COC1=CC(N)=CC=N1 SVEQHRSELNPKJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AOPRXJXHLWYPQR-UHFFFAOYSA-N 2-phenoxyacetamide Chemical compound NC(=O)COC1=CC=CC=C1 AOPRXJXHLWYPQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NUKYPUAOHBNCPY-UHFFFAOYSA-N 4-aminopyridine Chemical compound NC1=CC=NC=C1 NUKYPUAOHBNCPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WDFQBORIUYODSI-UHFFFAOYSA-N 4-bromoaniline Chemical compound NC1=CC=C(Br)C=C1 WDFQBORIUYODSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N Acrylonitrile Chemical compound C=CC#N NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000022309 Alcoholic Liver disease Diseases 0.000 description 1
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000000419 Chronic Hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 238000006228 Dieckmann condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 201000010915 Glioblastoma multiforme Diseases 0.000 description 1
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000897035 Homo sapiens Ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase family member 2 Proteins 0.000 description 1
- 201000009794 Idiopathic Pulmonary Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102400000743 NPP Human genes 0.000 description 1
- 101150111783 NTRK1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000009609 Pyrophosphatases Human genes 0.000 description 1
- 108010009413 Pyrophosphatases Proteins 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 208000013738 Sleep Initiation and Maintenance disease Diseases 0.000 description 1
- 102000000890 Somatomedin B domains Human genes 0.000 description 1
- 108050007913 Somatomedin B domains Proteins 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100031274 Translocator protein Human genes 0.000 description 1
- 101710166801 Translocator protein Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 150000001263 acyl chlorides Chemical class 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000011360 adjunctive therapy Methods 0.000 description 1
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 125000004414 alkyl thio group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- BIVUUOPIAYRCAP-UHFFFAOYSA-N aminoazanium;chloride Chemical class Cl.NN BIVUUOPIAYRCAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000021617 central nervous system development Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 125000000000 cycloalkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005144 cycloalkylsulfonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003596 drug target Substances 0.000 description 1
- 230000007247 enzymatic mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- FDNPVQXLGFNHGX-UHFFFAOYSA-N ethoxycyclododecane Chemical compound CCOC1CCCCCCCCCCC1 FDNPVQXLGFNHGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;hexane Chemical compound CCCCCC.CCOC(C)=O OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol group Chemical group OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 238000000126 in silico method Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 206010022437 insomnia Diseases 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 208000036971 interstitial lung disease 2 Diseases 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000004132 lipogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003818 metabolic dysfunction Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000008271 nervous system development Effects 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 206010053219 non-alcoholic steatohepatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- BHAAPTBBJKJZER-UHFFFAOYSA-N p-anisidine Chemical compound COC1=CC=C(N)C=C1 BHAAPTBBJKJZER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 230000009038 pharmacological inhibition Effects 0.000 description 1
- 125000001792 phenanthrenyl group Chemical group C1(=CC=CC=2C3=CC=CC=C3C=CC12)* 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002206 pro-fibrotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 210000004915 pus Anatomy 0.000 description 1
- IVRLZJDPKUSDCF-UHFFFAOYSA-N pyrazin-2-ylhydrazine Chemical compound NNC1=CN=CC=N1 IVRLZJDPKUSDCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003217 pyrazoles Chemical class 0.000 description 1
- 239000001008 quinone-imine dye Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 208000019116 sleep disease Diseases 0.000 description 1
- 208000020685 sleep-wake disease Diseases 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- ZPCAZHPYLUKSMY-UHFFFAOYSA-M sodium;3-(n-ethyl-3-methylanilino)-2-hydroxypropane-1-sulfonate;dihydrate Chemical compound O.O.[Na+].[O-]S(=O)(=O)CC(O)CN(CC)C1=CC=CC(C)=C1 ZPCAZHPYLUKSMY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 150000003672 ureas Chemical class 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/415—1,2-Diazoles
- A61K31/4162—1,2-Diazoles condensed with heterocyclic ring systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
- A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
- A61K31/497—Non-condensed pyrazines containing further heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Abstract
Description
Θειενο[3,4-c]πυραζολ-3-υλο ακεταμίδια με δράση αναστολής της αυτοταξίνης Thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl acetamides with autotaxin inhibitory activity
Περιγραφή της εφεύρεσης Description of the invention
Η παρούσα εφεύρεση αφορά φαρμακευτικές ενώσεις με δομή (Α) ή φαρμακευτικά αποδεκτά άλατα αυτής, όπου οι υποκαταστάτες R1 και R2 είναι πλήρως καθορισμένοι. Οι χημικές ενώσεις με δομή (Α) της παρούσας εφεύρεσης παρουσιάζουν δράση αναστολής του ενζύμου αυτοταξίνη και χρησιμοποιούνται για την αντιμετώπιση πνευμονικής ίνωσης, ίνωσης αλλομοσχεύματος πνεύμονα, ηπατικής ίνωσης, νεφρικής ίνωσης, καρδιακής ίνωσης, πνευμονίας, ασθένειας COVID-19, βακτηριακής λοίμωξης, ρευματοειδούς αρθρίτιδας, νευροεκφυλιστικών παθήσεων και ασθενειών σχετιζόμενων με το μεταβολικό σύνδρομο και τον καρκίνο. The present invention relates to pharmaceutical compounds with structure (A) or pharmaceutically acceptable salts thereof, where the substituents R1 and R2 are fully defined. The chemical compounds with structure (A) of the present invention exhibit autotaxin enzyme inhibition activity and are used to treat pulmonary fibrosis, lung allograft fibrosis, liver fibrosis, renal fibrosis, cardiac fibrosis, pneumonia, COVID-19 disease, bacterial infection, rheumatoid arthritis , neurodegenerative diseases and diseases related to metabolic syndrome and cancer.
Η αυτοταξίνη (ΑΤΧ) απομονώθηκε για πρώτη φορά αρχές δεκαετίας του 1990 ως ένας αυτοκρινής παράγοντας διέγερσης της κινητικότητας κυττάρων μελανώματος [Stracke, M.L., et al., Identification, purification, and partial sequence analysis of autotaxin, a novel motility-stimulating protein. J Biol Chem, 1992, 267(4): p. 2524-9]. Στην πορεία, η ATX αναγνωρίστηκε ως μέλος της οικογένειας των έκτο-νουκλεοτιδικών πυροφωσφατασών/ φωσφοδιεστερασών (ecto-nucleotide pyrophosphatases/phosphodiesterases, NPPs), εξωκυτταρικών ενζύμων που υδρολύουν τους φωσφοδιεστερικούς δεσμούς των νουκλεοτιδίων και των παραγόντων τους, οπότε και μετονομάστηκε σε ΕΝΡΡ2. Αργότερα, αποδείχθηκε ότι η κύρια ενζυμική δράση της ΑΤΧ είναι αυτή της λυσο-φωσφολιπάσης D, και η κατάλυση της υδρόλυσης της εξωκυτταρικής λυσοφωσφατιδυλοχολίνης (lysophosphatidylcholine, LPC) σε λυσοφωσφατιδικό οξύ (lysophosphatidic acid, LPA) [Tokumura, A., et al., Identification of human plasma lysophospholipase D, a lysophosphatidic acidproducing enzyme, as autotaxin, a multifunctional phosphodiesterase. J Biol Chem, 2002, 277(42): p. 39436-42]. To LPA είναι ένα απλό λιπιδικό μόριο που αποτελείται από μια αλυσίδα γλυκερόλης με μια υδροξυλική ομάδα, από μια φωσφορική ομάδα και από μια μακριά αλυσίδα λιπαρών οξέων, κορεσμένων ή μη. To LPA ανιχνεύεται σε διάφορα βιολογικά δείγματα όπως στον ορό, στο πλάσμα, στα ενεργοποιημένα αιμοπετάλια και στο σάλιο. To LPA δρα σαν ένας φωσφολιπιδικός αυξητικός παράγοντας και επηρεάζει σχεδόν όλους τους κυτταρικούς τύπους, ενώ εμπλέκεται και σε παθολογικές καταστάσεις μεταξύ των οποίων ο καρκίνος, η αθηροσκλήρωση και η επούλωση τραύματος. Autotaxin (ATX) was first isolated in the early 1990s as an autocrine factor stimulating melanoma cell motility [Stracke, M.L., et al., Identification, purification, and partial sequence analysis of autotaxin, a novel motility-stimulating protein. J Biol Chem, 1992, 267(4): p. 2524-9]. Along the way, ATX was identified as a member of the family of ecto-nucleotide pyrophosphatases/phosphodiesterases (NPPs), extracellular enzymes that hydrolyze the phosphodiester bonds of nucleotides and their factors, at which point it was renamed ENPP2. Later, it was shown that the main enzymatic activity of ATX is that of lyso-phospholipase D, and the catalysis of the hydrolysis of extracellular lysophosphatidylcholine (LPC) to lysophosphatidic acid (LPA) [Tokumura, A., et al., Identification of human plasma lysophospholipase D, a lysophosphatidic acid producing enzyme, as autotaxin, a multifunctional phosphodiesterase. J Biol Chem, 2002, 277(42): p. 39436-42]. LPA is a simple lipid molecule consisting of a glycerol chain with a hydroxyl group, a phosphate group and a long chain of fatty acids, saturated or unsaturated. LPA is detected in various biological samples such as serum, plasma, activated platelets and saliva. LPA acts as a phospholipid growth factor and affects almost all cell types, and is involved in pathological conditions including cancer, atherosclerosis and wound healing.
Η ΑΤΧ εμφανίζει ευρεία έκφραση στους ιστούς, με υψηλότερη την έκφραση σε λιπώδη ιστό, εγκέφαλο, πνεύμονα, νωτιαίο μυελό, ωοθήκες, άρχεις, έντερο, νεφρούς, και λεμφαδένες. Η ΑΤΧ συναντάται σε πολλά βιολογικά υγρά όπως ορός, πλάσμα, βρογχοκυψελιδικό έκκριμα, υγρό πύον, εγκεφαλονωτιαίο υγρό, περιτοναϊκό υγρό, αρθρικό υγρό και ούρα. Υπό φυσιολογικές συνθήκες η ΑΤΧ παίζει σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη των εμβρυϊκών κυττάρων, στην ανάπτυξη του νευρικού συστήματος και στην λιπογένεση [Fotopoulou S, et al. ΑΤΧ expression and LPA signaling are vital for the development of the nervous system. Dev Biol. 2010; 339(2):451-64]. Αντίθετα, η έκφραση της ΑΤΧ σε ενήλικα μοντέλα έχει αποδειχθεί περιττή [Katsifa A, et al. The bulk of Autotaxin activity is dispensable for adult mouse Life. PLoS One. 2015; 10(ll):e0143083]. Επιπρόσθετα, η ATX έχει βρεθεί να συμμετέχει στην παθογένεση χρόνιων φλεγμονωδών παθήσεων, ενώ υπερεκφράζεται και σε αρκετούς τύπους καρκίνου [Barbayianni, Ε., et al., Autotaxin, a secreted lysophospholipase D, as a promising therapeutic target in chronic inflammation and cancer. Prog Lipid Res., 2015, 58: p. 76-96]. Εκτός από τα κύτταρα μελανώματος, η ΑΤΧ συναντάται και σε άλλες καρκινικές κυτταρικές σειρές, επιπρόσθετα, θεωρείται ότι συμβάλλει στη μετάσταση μέσω της αύξησης της κινητικότητας των καρκινικών κυττάρων και την επαγωγή της καρκινικής αγγειογένεσης [Leblanc, R., 8ι Peyruchaud, Ο. New insights into the autotaxin/LPA axis in cancer development and metastasis. Experimental Cell Research, 2015. 333(2): p. ATX exhibits widespread tissue expression, with highest expression in adipose tissue, brain, lung, spinal cord, ovaries, testes, intestine, kidney, and lymph nodes. ATX is found in many biological fluids such as serum, plasma, bronchoalveolar secretion, liquid pus, cerebrospinal fluid, peritoneal fluid, synovial fluid and urine. Under normal conditions ATX plays an important role in fetal cell development, nervous system development and lipogenesis [Fotopoulou S, et al. ATX expression and LPA signaling are vital for the development of the nervous system. Dev Biol. 2010? 339(2):451-64]. In contrast, ATX expression in adult models has been shown to be redundant [Katsifa A, et al. The bulk of Autotaxin activity is dispensable for adult mouse life. PLoS One. 2015? 10(ll):e0143083]. Additionally, ATX has been found to participate in the pathogenesis of chronic inflammatory diseases, while it is also overexpressed in several types of cancer [Barbayianni, E., et al., Autotaxin, a secreted lysophospholipase D, as a promising therapeutic target in chronic inflammation and cancer. Prog Lipid Res., 2015, 58: p. 76-96]. In addition to melanoma cells, ATX is found in other cancer cell lines, in addition, it is thought to contribute to metastasis by increasing tumor cell motility and inducing tumor angiogenesis [Leblanc, R., 8i Peyruchaud, O. New insights into the autotaxin/LPA axis in cancer development and metastasis. Experimental Cell Research, 2015. 333(2): p.
183-189]. Στο πλαίσιο αυτό έχει βρεθεί ότι η ΑΤΧ υπερεκφράζεται σε διάφορους τύπους καρκίνου όπως του μαστού και στο μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα, με την υπερέκφραση αυτή να σχετίζεται με την ικανότητα διήθησης των καρκινικών κυττάρων. Επίσης η ΑΤΧ υπερεκφράζεται στο γλοιοβλάστωμα, στον καρκίνο του θυρεοειδούς, του νεφρού, στο λέμφωμα Β κυττάρων, στο λέμφωμα Hodgkin και στο πολύμορφο γλοιοβλάστωμα. 183-189]. In this context, it has been found that ATX is overexpressed in various types of cancer such as breast and non-small cell lung cancer, with this overexpression being related to the invasiveness of cancer cells. ATX is also overexpressed in glioblastoma, thyroid cancer, kidney cancer, B cell lymphoma, Hodgkin lymphoma and glioblastoma multiforme.
Όπως αναφέρθηκε παραπάνω ο άξονας ATX/LPA παίζει καθοριστικό ρόλο και σε άλλες παθολογικές και φλεγμονώδεις καταστάσεις. Έτσι, αυξημένα επίπεδα ΑΤΧ και LPA εντοπίστηκαν στις αρθρώσεις ασθενών με ρευματοειδή αρθρίτιδα. Έχει βρεθεί ότι τα υψηλά επίπεδα ΑΤΧ και σηματοδότησης μέσω του LPA προωθούν την υπερπλασία στην άρθρωση και την προοδευτική καταστροφή του χόνδρου [Orosa, Β., et al. The autotaxin-lysophosphatidic acid pathway in pathogenesis of rheumatoid arthritis. European Journal of Pharmacology 2015. 765: p. 228-233]. As mentioned above, the ATX/LPA axis plays a crucial role in other pathological and inflammatory conditions. Thus, increased levels of ATX and LPA were detected in the joints of patients with rheumatoid arthritis. High levels of ATX and LPA signaling have been found to promote joint hyperplasia and progressive cartilage destruction [Orosa, B., et al. The autotaxin-lysophosphatidic acid pathway in pathogenesis of rheumatoid arthritis. European Journal of Pharmacology 2015. 765: p. 228-233].
Άλλες μελέτες έχουν δείξει ότι η χρόνια φλεγμονή του ήπατος διεγείρει την έκκριση της ΑΤΧ από ηπατοκύτταρα, ενώ το LPA φαίνεται να ενεργοποιεί ηπατικά κύτταρα και να ενισχύει προ-ινωτικά μονοπάτια [Watanabe, Ν., et al., Both plasma lysophosphatidic acid and serum autotaxin levels are increased in chronic hepatitis C. J Clin Gastroenterol, 2007. 41(6): p. 616-23]. Τα επίπεδα της ATX στον ορό αποτελούν σημαντικό δείκτη πρόγνωσης της ίνωσης σε ασθενείς με χρόνιες ηπατίτιδες Β και C, καθώς και τον πιο αξιόπιστο δείκτη για τον προσδιορισμό των σταδίων της ίνωσης. Κατά συνέπεια, η ΑΤΧ μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως διαγνωστικός και φαρμακευτικός στόχος στην προσπάθεια αναστολής της εξέλιξης της ιογενούς ηπατίτιδας σε καρκίνο. Other studies have shown that chronic inflammation of the liver stimulates the secretion of ATX from hepatocytes, while LPA appears to activate liver cells and enhance pro-fibrotic pathways [Watanabe, N., et al., Both plasma lysophosphatidic acid and serum autotaxin levels are increased in chronic hepatitis C. J Clin Gastroenterol, 2007. 41(6): p. 616-23]. Serum ATX levels are an important prognostic marker of fibrosis in patients with chronic hepatitis B and C, as well as the most reliable marker for determining stages of fibrosis. Consequently, ATX can be used as a diagnostic and pharmaceutical target in the attempt to inhibit the progression of viral hepatitis to cancer.
Ένας άλλος τομέας στον οποίο φαίνεται να έχει ενεργό ρόλο η ΑΤΧ είναι οι ασθένειες του κεντρικού νευρικού συστήματος όπου αυξημένα επίπεδα ΑΤΧ και LPA έχουν αναφερθεί στον ορό και το εγκεφαλονωτιαίο υγρό ασθενών με πολλαπλή σκλήρυνση [Dennis, J., et al., Phosphodiesterase-Ialpha/autotaxin (PD-Ialpha/ATX): a multifunctional protein involved in central nervous system development and disease. J Neurosci Res, 2005. 82(6): p. 737-42]. Επίσης, αυξημένα επίπεδα της ATX συσχετίζονται με αυξημένο κίνδυνο εμφάνισης ήπιων γνωστικών δυσλειτουργιών, καθώς και με νόσο Αλτσχάιμερ [McLimans, Κ. Ε. & Willette, A. A. Autotaxin is related to metabolic dysfunction and predicts Alzheimer's disease outcomes. Journal of Alzheimer's disease 2017. 56: p. 403-413]. Another area in which ATX appears to have an active role is in diseases of the central nervous system where increased levels of ATX and LPA have been reported in the serum and cerebrospinal fluid of patients with multiple sclerosis [Dennis, J., et al., Phosphodiesterase-Ialpha /autotaxin (PD-Ialpha/ATX): a multifunctional protein involved in central nervous system development and disease. J Neurosci Res, 2005. 82(6): p. 737-42]. Also, increased levels of ATX are associated with an increased risk of mild cognitive dysfunctions, as well as with Alzheimer's disease [McLimans, K. E. & Willette, A. A. Autotaxin is related to metabolic dysfunction and predicts Alzheimer's disease outcomes. Journal of Alzheimer's disease 2017. 56: p. 403-413].
Μελέτες σε ζωικά μοντέλα αλλά και στους ινωτικούς πνεύμονες ασθενών με ιδιοπαθή πνευμονική ίνωση έδειξαν αύξηση των επιπέδων της ΑΤΧ στον κυψελιδικό χώρο [Ninou, I., et al. Autotaxin in pathophysiology and pulmonary fibrosis. Frontiers in Medicine 2018. 5: p. 180]. Επίσης έχει αναφερθεί ότι το LPA επάγει την απόπτωση των επιθηλιακών κυττάρων σε μοντέλο πνευμονικής ίνωσης, τα οποία βρέθηκε ότι εκφράζουν κυτοκίνες όπως ο παράγοντας νέκρωσης όγκων α (TNF-α), ο οποίος εμπλέκεται στην παθογένεση της πνευμονικής ίνωσης [Oikonomou, Ν. et al. Pulmonary autotaxin expression contributes to the pathogenesis of pulmonary fibrosis. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology 2012. 47, 566-574]. Τέλος, τα αυξημένα επίπεδα έκφρασης της ΑΤΧ έχουν συσχετισθεί και με την παθογένεια του άσθματος. Studies in animal models but also in the fibrotic lungs of patients with idiopathic pulmonary fibrosis showed an increase in ATX levels in the alveolar space [Ninou, I., et al. Autotaxin in pathophysiology and pulmonary fibrosis. Frontiers in Medicine 2018. 5: p. 180]. LPA has also been reported to induce apoptosis of epithelial cells in a model of pulmonary fibrosis, which were found to express cytokines such as tumor necrosis factor α (TNF-α), which is involved in the pathogenesis of pulmonary fibrosis [Oikonomou, N. et al . Pulmonary autotaxin expression contributes to the pathogenesis of pulmonary fibrosis. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology 2012. 47, 566-574]. Finally, increased levels of ATX expression have also been associated with the pathogenesis of asthma.
Σε όλες τις παραπάνω περιπτώσεις διάφορα πειραματικά μοντέλα έχουν δείξει ότι η φαρμακολογική αναστολή της ΑΤΧ μείωσε την περαιτέρω ανάπτυξη των παθολογικών και φλεγμονωδών καταστάσεων, γεγονός που καταδεικνύει τη σπουδαιότητα της ΑΤΧ ως πιθανό φαρμακευτικό στόχο για όλες τις παραπάνω καταστάσεις. Ο προσδιορισμός της ενζυμικής δραστικότητας λυσοφωσφολι πόσης D (LysoPLD) της ΑΤΧ και κατ' επέκταση ο βαθμός αναστολής αυτής, πραγματοποιείται με διάφορες μεθόδους οι οποίες αναλύονται παρακάτω. In all of the above cases, various experimental models have shown that pharmacological inhibition of ATX reduced the further development of pathological and inflammatory conditions, which demonstrates the importance of ATX as a potential drug target for all of the above conditions. The determination of the enzymatic activity of lysophospholipid D (LysoPLD) of ATX and, by extension, the degree of its inhibition, is carried out by various methods which are analyzed below.
Μέθοδος TOOS. TOOS method.
FI μέθοδος αυτή βασίζεται στο γεγονός ότι η ΑΤΧ καταλύει τη μετατροπή της λυσοφωσφατιδυλοχολίνης σε λυσοφωσφατιδικό οξύ με ταυτόχρονη απελευθέρωση της χολίνης. FI απελευθερωμένη χολίνη οξειδώνεται με τη δράση της οξειδάσης της χολίνης προς παραγωγή βεταΐνης και υπεροξειδίου του υδρογόνου (FI2O2). To Η2Ο2 δρα ως οξειδωτικός παράγοντας, το οποίο παρουσία της υπεροξειδάσης της ραπανίδας (horseradish peroxidase - HRP), αντιδρά με Ν-αιθυλο-Ν-(2-υδροξυ-3-σουλφοπροπυλο)-3-μεθυλοανιλίνη (αντιδραστήριο TOOS) και την 4-αμινο-2,3-διμεθυλο-1-φαίνυλο-3-πυραζολιν-5-όνη (4-ΑΑΡ) σχηματίζοντας ένα σύμπλοκο ροζ χρωστικής κινονεϊμίνης, η οποία απορροφά στα 555 nm. FI this method is based on the fact that ATX catalyzes the conversion of lysophosphatidylcholine to lysophosphatidic acid with simultaneous release of choline. FI released choline is oxidized by the action of choline oxidase to produce betaine and hydrogen peroxide (FI2O2). H2O2 acts as an oxidizing agent, which in the presence of horseradish peroxidase (HRP), reacts with N-ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3-methylaniline (TOOS reagent) and 4- amino-2,3-dimethyl-1-phenyl-3-pyrazolin-5-one (4-AAP) forming a pink quinoneimine dye complex, which absorbs at 555 nm.
Μέθοδος FS-3 Method FS-3
Η ενεργότητα της ΑΤΧ στο πλάσμα καθορίζεται μετρώντας την αποκοπή του ειδικού για την ΑΤΧ φθορισμογόνου υποστρώματος FS-3 (ένα διπλά επισημασμένο ανάλογο της LPC). Η δοκιμασία πραγματοποιείται σε όγκο 100 μl με 20 μl 5Χ διαλύματος αντίδρασης (700 mM NaCI, 25 mM KCI, 5 mM MgCI2 και 250 mM Tris, pH 8.0), 20 μl FS-3 (τελική συγκέντρωση 2.5 μΜ) και 60 μl πλάσματος (αραίωση 1:5 σε PBS). Οι αντιδράσεις επωάζονται στους 37 °C σε ένα φθορισμόμετρο Tecan Infinite 200 (Tecan Trading AG, Switzerland) και μετρείται η αύξηση του φθορισμού στα 528 nm. ATX activity in plasma is determined by measuring the cleavage of the ATX-specific fluorescent substrate FS-3 (a doubly labeled analog of LPC). The assay is performed in a volume of 100 μl with 20 μl of 5X reaction solution (700 mM NaCl, 25 mM KCl, 5 mM MgCl2, and 250 mM Tris, pH 8.0), 20 μl of FS-3 (2.5 μM final concentration), and 60 μl of plasma ( 1:5 dilution in PBS). The reactions are incubated at 37 °C in a Tecan Infinite 200 fluorometer (Tecan Trading AG, Switzerland) and the increase in fluorescence at 528 nm is measured.
Μέθοδος Amplex Red Amplex Red method
Κατά ανάλογο τρόπο με τη μέθοδο TOOS, αυτή η ευρέως χρησιμοποιούμενη μέθοδος ανιχνεύει την ικανότητα της ΑΤΧ να υδρολύει την LPC χρησιμοποιώντας μια δοκιμασία που παρακολουθεί την απελευθέρωση χολίνης χρησιμοποιώντας το φθορισμογόνο αντιδραστήριο Amplex Red (10 mM), οξειδάση χολίνης (0,2 U/mL) και υπεροξειδάση της ραπανίδας (HRP - 2 U/mL). Όλες οι αντιδράσεις πραγματοποιούνται με 2 nΜ καθαρής ΑΤΧ και 50μΜ LPC (16:0 ή 18:0) στους 37 °C. Οι αναστολείς (3 mM) διαλύονται σε διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) σε συγκεντρώσεις από 0,001 έως 5 μmol/L. Οι τιμές φθορισμού μετρούνται σε συσκευή ανάγνωσης πλακών φθορισμού (Tecan Infinite 200). Οι τιμές IC50προσδιορίζονται χρησιμοποιώντας τις τιμές από δύο ανεξάρτητα πειράματα, με τη χρήση της σιγμοειδούς καμπύλης δόσηςαπόκρισης (λογισμικό PrismH) από την εξίσωση f=yo+a/(l+exp(-(x-xo)/b) που δίνεται από το SigmaPlot 11.0. Analogous to the TOOS method, this widely used method detects the ability of ATX to hydrolyze LPC using an assay that monitors choline release using the fluorescent reagent Amplex Red (10 mM), choline oxidase (0.2 U/mL ) and horseradish peroxidase (HRP - 2 U/mL). All reactions are performed with 2 nM pure ATX and 50 µM LPC (16:0 or 18:0) at 37 °C. Inhibitors (3 mM) are dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) at concentrations from 0.001 to 5 μmol/L. Fluorescence values are measured in a fluorescence plate reader (Tecan Infinite 200). IC50 values are determined using the values from two independent experiments, using the sigmoidal dose-response curve (PrismH software) from the equation f=yo+a/(l+exp(-(x-xo)/b) given by SigmaPlot 11.0.
Στο πλαίσιο αυτό, ο προσδιορισμός της κρυσταλλικής δομής της ΑΤΧ επέτρεψε το σχεδίασμά φαρμάκων προς την κατεύθυνση της αναστολής αυτής. Η αλληλουχία της ΑΤΧ επίμυων παρουσιάζει 93% ομοιότητα με την αντίστοιχη της ανθρώπινης ΑΤΧ και έχει χρησιμοποιηθεί σε in vitro μελέτες αναστολής του ενζύμου. Η δομή της ΑΤΧ διαθέτει μια κεντρική καταλυτική περιοχή φωσφοδιεστεράσης, μια περιοχή νουκλεάσης (nuclease-like), η οποία βρίσκεται στο C-τελικό άκρο της ΑΤΧ και μια υδρόφοβη αμινο-τελική περιοχή, η οποία αποτελείται επιμέρους από δυο περιοχές σωματομεδίνης-Β (somatomedine-B-like) [Nakanaga, Κ., et al. Autotaxin-an LPA producing enzyme with diverse functions. Journal of Biochemistry, 2010, 148(1): 13-24]. Ο ρόλος των περιοχών αυτών δεν είναι απόλυτα σαφής, ωστόσο, πρόσφατες μελέτες έχουν αναδείξει ότι και τα τρία κέντρα είναι δυνητικά ενεργά για καταλυτική δράση. Στο πλαίσιο αυτό, διάφορα μικρά οργανικά μόρια έχουν προταθεί ως πιθανοί αναστολείς της δράσης της ΑΤΧ μέσω σύνδεσης τους με αυτά τα κέντρα. Οι δομές των μορίων αυτών επιλέγονται μέσα από μία διαδικασία ελέγχου της αλληλεπίδρασης αυτών με τις διάφορες κρυσταλλικές μορφές της ΑΤΧ και η βελτιστοποίησή τους περιλαμβάνει εφαρμογή μεθόδων χημειοπληροφορικής (in silico). In this context, the determination of the crystal structure of ATX allowed the design of drugs in the direction of its inhibition. The sequence of rat ATX shows 93% similarity to that of human ATX and has been used in in vitro enzyme inhibition studies. The structure of ATX has a central phosphodiesterase catalytic domain, a nuclease-like domain, which is located at the C-terminus of ATX, and a hydrophobic amino-terminal domain, which is composed of two somatomedin-B domains. -B-like) [Nakanaga, K., et al. Autotaxin-an LPA producing enzyme with diverse functions. Journal of Biochemistry, 2010, 148(1): 13-24]. The role of these regions is not entirely clear, however, recent studies have shown that all three centers are potentially active for catalytic action. In this context, various small organic molecules have been proposed as potential inhibitors of ATX action through binding to these centers. The structures of these molecules are selected through a process of controlling their interaction with the various crystalline forms of ATX and their optimization involves the application of chemoinformatics methods (in silico).
Ακολουθώντας σάρωση μίας βιβλιοθήκης με 14400 χημικά μόρια διαπιστώθηκε με έκπληξη ότι το χημικό μόριο Ν-[2-(4-νιτροφαινυλο)-2,5-διυδρο-4Η-θειενο[3,4-c]πυραζολ-3-υλο-ναφθαλενακεταμίδιο (Α1) παρουσιάζει ανασταλτική δράση έναντι της ΑΤΧ με τιμή IC508.6 μ Μ, όταν εξετάστηκε σε εδραιωμένα πειραματικά in vitro πρωτόκολλα. Following a scan of a library of 14400 chemical molecules it was surprisingly found that the chemical molecule N-[2-(4-nitrophenyl)-2,5-dihydro-4H-thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl-naphthaleneacetamide ( A1) exhibits inhibitory activity against ATX with an IC value of 508.6 µM, when tested in established experimental in vitro protocols.
Το έγγραφο ΕΡ1698335Α1 αναφέρεται σε χημικές ενώσεις με τη γενική δομή (Β) όπου: οι οποίες εμφανίζουν δράση στην αντιμετώπιση ασθενειών που σχετίζονται με τους μιτοχονδριακούς υποδοχείς βενζοδιαζεπινών, όπως για παράδειγμα διάφορες ασθένειες του κεντρικού νευρικού συστήματος ή του αναπνευστικού συστήματος ή του πεπτικού συστήματος που οφείλονται στο άγχος, μεταξύ των οποίων διαταραχή ύπνου, αϋπνία και κατάθλιψη, επιπλέον, άσθμα, χρόνια αποφρακτική πνευμονοπάθεια, επιπρόσθετα σύνδρομο ευερέθιστου εντέρου ή και έλκος. The document EP1698335A1 refers to chemical compounds with the general structure (B) where: which show activity in the treatment of diseases related to mitochondrial benzodiazepine receptors, such as for example various diseases of the central nervous system or the respiratory system or the digestive system due to to stress, including sleep disorder, insomnia and depression, in addition, asthma, chronic obstructive pulmonary disease, additionally irritable bowel syndrome or even ulcer.
Τα έγγραφα WO2012/158413 και WO2014/078322 αναφέρουν την ένωση 2-φαίνυλο 5-οξο-4,6-διυδρο-2Η-θειενο[3,4-c]πυραζολ-3-υλο φαινυλοξυ ακεταμίδιο (C) ως ενδιάμεσο παράγωγο για την παρασκευή υποκατεστημένων αναλογών ουρίας και θειου ρίας με δράση αναστολής κινασών τυροσίνης (Tropomyocin-related Kinase - Trk) TrkA. WO2012/158413 and WO2014/078322 report the compound 2-phenyl 5-oxo-4,6-dihydro-2H-thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl phenyloxyacetamide (C) as an intermediate for the preparation of substituted analogues of urea and thiourea with activity of inhibiting tyrosine kinases (Tropomyocin-related Kinase - Trk) TrkA.
Ωστόσο, στη στάθμη της τεχνικής δεν έχει αναφερθεί μέχρι σήμερα η επίδραση των παραπάνω ενώσεων στην αναστολή της ενζυμικής δράσης της αυτοταξίνης και στην διακοπή των παθολογικών και φλεγμονωδών καταστάσεων που αυτή επιφέρει. However, in the state of the art, the effect of the above compounds on the inhibition of the enzymatic activity of autotaxin and the cessation of the pathological and inflammatory conditions that it brings about has not been reported to date.
Η παρούσα εφεύρεση καθορίζεται ως ακολούθως: The present invention is defined as follows:
Ορισμός 1: Φαρμακευτική ένωση ή φαρμακευτικά αποδεκτό άλας αυτής, για χρήση στην αντιμετώπιση πνευμονικής ίνωσης, ίνωσης αλλομοσχεύματος πνεύμονα, ηπατικής ίνωσης, νεφρικής ίνωσης, καρδιακής ίνωσης, πνευμονίας, ασθένειας COVID-19, βακτηριακής λοίμωξης, ρευματοειδούς αρθρίτιδας, νευροεκφυλιστικών παθήσεων και ασθενειών σχετιζόμενων με το μεταβολικό σύνδρομο και τον καρκίνο, μέσω αναστολής της αυτοταξίνης, με τη χημική δομή (Α), Definition 1: Pharmaceutical compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for use in the treatment of pulmonary fibrosis, lung allograft fibrosis, liver fibrosis, renal fibrosis, cardiac fibrosis, pneumonia, COVID-19 disease, bacterial infection, rheumatoid arthritis, neurodegenerative diseases and diseases related to the metabolic syndrome and cancer, through inhibition of autotaxin, with the chemical structure (A),
όπου: where:
- η ομάδα R1επιλέγεται ανάμεσα από μία ετεροκυκλική ομάδα ή μία αρωματική ομάδα, ή μία ετεροαρωματική ομάδα, οι οποίες ανεξάρτητα δύναται να φέρουν έναν ή περισσότερους υποκαταστάτες, οι οποίοι επιλέγονται ανάμεσα από υδρογόνο, αλογόνο, (C1-6)άλκυλο-, (C1-6)αλκυλαλογόνο-, νίτρο-, μεθόξυ-, τριφθορομεθόξυ-, θειόνυλο-, θειονυλάμιδο- και καρβοξυ-ομάδα, - η ομάδα R2 επιλέγεται ανεξάρτητα ανάμεσα από μία αλειφατική ανθρακική αλυσίδα ή από μία ομάδα -NHAr, όπου Ar είναι ένας αρωματικός ή ετεροαρωματικός δακτύλιος ή από έναν κυκλικό υδρογονάνθρακα ή από έναν ή περισσότερους ετεροκυκλικούς, αρωματικούς ή ετεροαρωματικούς δακτυλίους, όπου ο κάθε δακτύλιος ανεξάρτητα δύναται να φέρει έναν ή περισσότερους υποκαταστάτες, οι οποίοι επιλέγονται ανάμεσα από υδρογόνο, αλογόνο, (C1-6)άλκυλο-, (C1-6)αλκυλαλογόνο-, νίτρο-, μεθόξυ-, τριφθορομεθόξυ-, θειόνυλο-, θειονυλάμιδο- και καρβοξυ-ομάδα. - the group R1 is selected from a heterocyclic group or an aromatic group, or a heteroaromatic group, which independently may carry one or more substituents, which are selected from hydrogen, halogen, (C1-6)alkyl-, (C1- 6)alkylhalo-, nitro-, methoxy-, trifluoromethoxy-, thionyl-, thionylamido- and carboxy-group, - the R2 group is independently selected from an aliphatic carbon chain or from a -NHAr group, where Ar is an aromatic or heteroaromatic ring or from a cyclic hydrocarbon or from one or more heterocyclic, aromatic or heteroaromatic rings, where each ring independently may bear one or more substituents, which are selected from hydrogen, halogen, (C1-6)alkyl-, (C1 -6)alkylhalo-, nitro-, methoxy-, trifluoromethoxy-, thionyl-, thionylamido- and carboxy-group.
Ορισμός 2: Η φαρμακευτική ένωση σύμφωνα με τον ορισμό 1, όπου η ομάδα R1επιλέγεται κατά προτίμηση ανάμεσα από πιπεριδίνη, πιπεριδαζίνη, πιπεραζίνη, μορφολίνη, πυριδίνη, πυριδαζίνη, πυριμιδίνη, πυραζίνη, οξαζίνη ή έναν αρωματικό δακτύλιο, τα οποία ανεξάρτητα δύναται να φέρουν υποκαταστάτες που επιλέγονται ανάμεσα από υδρογόνο, αλογόνο, (C1-6)άλκυλο-, (C1-6)αλκυλαλογόνο-, νίτρο-, μεθόξυ-, τριφθορομεθόξυ-, θειόνυλο-, θειονυλάμιδο- και καρβοξυ-ομάδα, κατά ιδιαίτερη προτίμηση επιλέγεται ανάμεσα από πυριδίνη, πυραζίνη, 4-νιτροφαίνυλο- ή 4-βρωμοφαίνυλο-ομάδες. Ορισμός 3: Η φαρμακευτική ένωση σύμφωνα με οποιοδήποτε από τους ανωτέρω ορισμούς, όπου η ομάδα R2 επιλέγεται κατά προτίμηση ανάμεσα από ανιλίνο-, 4-βρωμοανιλίνο-, 4-μεθοξυανιλίνο-, 4-αμινοπυριδίνο-, 4-αμινο-2-μεθοξυπυριδίνο-, πιπεριδίνο-, πιπεριδαζίνο-, πιπεραζίνο-, μορφολίνο-, πυριδίνο, πυριδαζίνο-, πυριμιδίνο-, πυραζίνο-, 1,2-οξαζίνο-, 1,3-οξαζίνο-, 1,4-οξαζίνο-, φαίνυλο-, ναφθαλένο-, ανθρακένο-, φαινανθρένο-ομάδες, κατά ιδιαίτερη προτίμηση ανάμεσα από ναφθαλένο-, ανθρακένο- και φαινανθρένο-ομάδες. Ορισμός 4: Η φαρμακευτική ένωση σύμφωνα με οποιοδήποτε από τους ανωτέρω ορισμούς, όπου η ομάδα Ri είναι πυραζίνη και η ομάδα R2 είναι ναφθαλένο-ομάδα. Definition 2: The pharmaceutical compound according to definition 1, wherein the group R1 is preferably selected from piperidine, piperidazine, piperazine, morpholine, pyridine, pyridazine, pyrimidine, pyrazine, oxazine or an aromatic ring, which independently may bear substituents which are selected from hydrogen, halogen, (C1-6)alkyl-, (C1-6)alkylhalo-, nitro-, methoxy-, trifluoromethoxy-, thionyl-, thionylamido- and carboxy-group, with particular preference selected from pyridine, pyrazine, 4-nitrophenyl- or 4-bromophenyl-groups. Definition 3: The pharmaceutical compound according to any of the above definitions, wherein the R2 group is preferably selected from aniline-, 4-bromoaniline-, 4-methoxyaniline-, 4-aminopyridine-, 4-amino-2-methoxypyridine-, piperidine-, piperidazine-, piperazine-, morpholino-, pyridine, pyridazine-, pyrimidine-, pyrazine-, 1,2-oxazine-, 1,3-oxazine-, 1,4-oxazine-, phenyl-, naphthalene-, anthracene-, phenanthrene-groups, more preferably among naphthalene-, anthracene- and phenanthrene-groups. Definition 4: The pharmaceutical compound according to any of the above definitions, wherein the R 1 group is pyrazine and the R 2 group is a naphthalene group.
Ορισμός 5: Μία φαρμακευτική σύνθεση η οποία περιέχει μία ένωση σύμφωνα με οποιοδήποτε από τους ανωτέρω ορισμούς και ένα ή περισσότερα φαρμακευτικά αποδεκτά έκδοχα. Definition 5: A pharmaceutical composition which contains a compound according to any of the above definitions and one or more pharmaceutically acceptable excipients.
Ορισμός 6: Φαρμακευτική σύνθεση σύμφωνα με τον ορισμό 5, για χρήση συμπληρωματικά ή μεμονωμένα στην αντιμετώπιση πνευμονικής ίνωσης, ίνωσης αλλομοσχεύματος πνεύμονα, ηπατικής ίνωσης, νεφρικής ίνωσης, καρδιακής ίνωσης, πνευμονίας, ασθένειας COVID-19, βακτηριακής λοίμωξης, ρευματοειδούς αρθρίτιδας, νευροεκφυλιστικών παθήσεων και ασθενειών σχετιζόμενων με το μεταβολικό σύνδρομο και τον καρκίνο, μέσω αναστολής της αυτοταξί νης. Definition 6: A pharmaceutical composition according to definition 5, for use adjunctively or singly in the treatment of pulmonary fibrosis, lung allograft fibrosis, liver fibrosis, renal fibrosis, cardiac fibrosis, pneumonia, COVID-19 disease, bacterial infection, rheumatoid arthritis, neurodegenerative diseases and diseases associated with the metabolic syndrome and cancer, through inhibition of autotaxin.
Ορισμός 7: Φαρμακευτική σύνθεση σύμφωνα με τον ορισμό 6, για χρήση συμπληρωματικά στην αντιμετώπιση μορφών καρκίνου, μέσω αναστολής της αυτοταξίνης. Definition 7: A pharmaceutical composition according to definition 6, for use adjunctively in the treatment of cancers by inhibiting autotaxin.
Διαπιστώθηκε με έκπληξη ότι το Ν-[2-(4-νιτροφαινυλο)-2,5-διυδρο-4Η-θειενο[3,4-c]πυραζολ-3-υλο-ναφθαλενακεταμίδιο (Α1) έχει σαφή ένδειξη στην αντιμετώπιση της πνευμονικής ίνωσης, μέσω αναστολής του μηχανισμού της ενζυμικής δράσης της αυτοταξίνης. It was surprisingly found that N-[2-(4-nitrophenyl)-2,5-dihydro-4H-thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl-naphthaleneacetamide (A1) has a clear indication in the treatment of pulmonary fibrosis , by inhibiting the mechanism of autotaxin's enzymatic action.
Διαπιστώθηκε με έκπληξη ότι το Ν-[2-(4-νιτροφαινυλο)-2,5-διυδρο-4Η-θειενο[3,4-c]πυραζολ-3-υλο-ναφθαλενακεταμίδιο (Α1) έχει σαφή ένδειξη στην αντιμετώπιση της ηπατικής ίνωσης, μέσω αναστολής του μηχανισμού της ενζυμικής δράσης της αυτοταξίνης. It was surprisingly found that N-[2-(4-nitrophenyl)-2,5-dihydro-4H-thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl-naphthaleneacetamide (A1) has a clear indication in the treatment of liver fibrosis , by inhibiting the mechanism of autotaxin's enzymatic action.
Διαπιστώθηκε με έκπληξη ότι το Ν-[2-(4-νιτροφαινυλο)-2,5-διυδρο-4Η-θειενο[3,4-c]πυραζολ-3-υλο-ναφθαλενακεταμίδιο (Α1) έχει σαφή ένδειξη στην αντιμετώπιση της νεφρικής ίνωσης, μέσω αναστολής του μηχανισμού της ενζυμικής δράσης της αυτοταξίνης. It was surprisingly found that N-[2-(4-nitrophenyl)-2,5-dihydro-4H-thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl-naphthaleneacetamide (A1) has a clear indication in the treatment of renal fibrosis , by inhibiting the mechanism of autotaxin's enzymatic action.
Διαπιστώθηκε με έκπληξη ότι το Ν-[2-(4-νιτροφαινυλο)-2,5-διυδρο-4Η-θειενο[3,4-c]πυραζολ-3-υλο-ναφθαλενακεταμίδιο (Α1) έχει σαφή ένδειξη στην αντιμετώπιση της καρδιακής ίνωσης, μέσω αναστολής του μηχανισμού της ενζυμικής δράσης της αυτοταξίνης. It was surprisingly found that N-[2-(4-nitrophenyl)-2,5-dihydro-4H-thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl-naphthaleneacetamide (A1) has a clear indication in the treatment of cardiac fibrosis , by inhibiting the mechanism of autotaxin's enzymatic action.
Διαπιστώθηκε με έκπληξη ότι το Ν-[2-(4-νιτροφαινυλο)-2,5-διυδρο-4Η-θειενο[3,4-c]πυραζολ-3-υλο-ναφθαλενακεταμίδιο (Α1) έχει σαφή ένδειξη στην αντιμετώπιση της πνευμονίας, μέσω αναστολής του μηχανισμού της ενζυμικής δράσης της αυτοταξίνης. It was surprisingly found that N-[2-(4-nitrophenyl)-2,5-dihydro-4H-thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl-naphthaleneacetamide (A1) has a clear indication in the treatment of pneumonia, by inhibiting the mechanism of autotaxin enzymatic action.
Διαπιστώθηκε με έκπληξη ότι το Ν-[2-(4-νιτροφαινυλο)-2,5-διυδρο-4Η-θειενο[3,4-c]πυραζολ-3-υλο-ναφθαλενακεταμίδιο (Α1) έχει σαφή ένδειξη στην αντιμετώπιση της ίνωσης αλλομοσχεύματος πνεύμονα, μέσω αναστολής του μηχανισμού της ενζυμικής δράσης της αυτοταξίνης. It was surprisingly found that N-[2-(4-nitrophenyl)-2,5-dihydro-4H-thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl-naphthaleneacetamide (A1) has a clear indication in the treatment of allograft fibrosis lung, through inhibition of the autotaxin enzymatic action mechanism.
Διαπιστώθηκε με έκπληξη ότι το Ν-[2-(4-νιτροφαινυλο)-2,5-διυδρο-4Η-θειενο[3,4-c]πυραζολ-3-υλο-ναφθαλενακεταμίδιο (Α1) έχει σαφή ένδειξη στην αντιμετώπιση της βακτηριακής λοίμωξης, μέσω αναστολής του μηχανισμού της ενζυμικής δράσης της αυτοταξίνης. It was surprisingly found that N-[2-(4-nitrophenyl)-2,5-dihydro-4H-thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl-naphthaleneacetamide (A1) has a clear indication in the treatment of bacterial infection , by inhibiting the mechanism of autotaxin's enzymatic action.
Διαπιστώθηκε με έκπληξη ότι το Ν-[2-(4-νιτροφαινυλο)-2,5-διυδρο-4Η-θειενο[3,4-c]πυραζολ-3-υλο-ναφθαλενακεταμίδιο (Α1) έχει σαφή ένδειξη στην αντιμετώπιση της ρευματοειδούς αρθρίτιδας, μέσω αναστολής του μηχανισμού της ενζυμικής δράσης της αυτοταξίνης. It was surprisingly found that N-[2-(4-nitrophenyl)-2,5-dihydro-4H-thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl-naphthaleneacetamide (A1) has a clear indication in the treatment of rheumatoid arthritis , by inhibiting the mechanism of autotaxin's enzymatic action.
Διαπιστώθηκε με έκπληξη ότι το Ν-[2-(4-νιτροφαινυλο)-2,5-διυδρο-4Η-θειενο[3,4-c]πυραζολ-3-υλο-ναφθαλενακεταμίδιο (Α1) έχει σαφή ένδειξη στην αντιμετώπιση νευροεκφυλιστικών παθήσεων, μέσω αναστολής του μηχανισμού της ενζυμικής δράσης της αυτοταξίνης. It was surprisingly found that N-[2-(4-nitrophenyl)-2,5-dihydro-4H-thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl-naphthaleneacetamide (A1) has a clear indication in the treatment of neurodegenerative diseases, by inhibiting the mechanism of autotaxin enzymatic action.
Διαπιστώθηκε με έκπληξη ότι το Ν-[2-(4-νιτροφαινυλο)-2,5-διυδρο-4Η-θειενο[3,4-c]πυραζολ-3-υλο-ναφθαλενακεταμίδιο (Α1) έχει σαφή ένδειξη στην αντιμετώπιση ασθενειών σχετιζόμενων με το μεταβολικό σύνδρομο, μέσω αναστολής του μηχανισμού της ενζυμικής δράσης της αυτοταξίνης. It was surprisingly found that N-[2-(4-nitrophenyl)-2,5-dihydro-4H-thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl-naphthaleneacetamide (A1) has a clear indication in the treatment of diseases associated with the metabolic syndrome, through inhibition of the autotaxin enzyme mechanism.
Σύμφωνα με την παρούσα εφεύρεση, υποκατάστατες με μοριακή ποικιλομορφία ως προς τις ηλεκτρονικές, στερεοχημικές και φυσικοχημικές τους ιδιότητες (λιποφιλικότητα, εμβαδόν πολικής επιφάνειας) ενσωματώνονται στις θέσεις 2 και 3 του δακτυλίου του πυραζολίου και παρουσιάζουν όμοια φαρμακευτική δράση με το Ν-[2-(4-νιτροφαινυλο)-2,5-διυδρο-4H-θειενο[3,4-c]πυραζολ-3-υλο-ναφθαλενακεταμίδιο μέσω αναστολής της ενζυμικής δράσης της ΑΤΧ. Σύμφωνα με την παρούσα εφεύρεση, ο υποκαταστάτης που βρίσκεται σε θέση 2 του πυραζολίου επιλέγεται ανάμεσα από μία ετεροκυκλική ομάδα ή μία αρωματική ομάδα, ή μία ετεροαρωματική ομάδα, οι οποίες ανεξάρτητα δύναται να φέρουν έναν ή περισσότερους υποκαταστάτες. According to the present invention, substituents with molecular diversity in terms of their electronic, stereochemical and physicochemical properties (lipophilicity, polar surface area) are incorporated in the 2 and 3 positions of the pyrazole ring and exhibit similar pharmaceutical activity to N-[2-( 4-nitrophenyl)-2,5-dihydro-4H-thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl-naphthaleneacetamide through inhibition of ATX enzyme activity. According to the present invention, the substituent at position 2 of the pyrazole is selected from a heterocyclic group or an aromatic group, or a heteroaromatic group, which independently may bear one or more substituents.
Σύμφωνα με την παρούσα εφεύρεση, ο υποκαταστάτης που βρίσκεται σε θέση 2 του πυραζολίου επιλέγεται ανάμεσα από μία ετεροκυκλική ομάδα ή μία αρωματική ομάδα, ή μία ετεροαρωματική ομάδα, οι οποίες ανεξάρτητα δύναται να φέρουν έναν ή περισσότερους υποκαταστάτες ανάμεσα από αλογόνο, (C1-6)άλκυλο-, (C1-6)αλκυλαλογόνο-, νίτρο-, μεθόξυ-, τριφθορομεθόξυ-, θειόνυλο-, θειονυλάμιδο- και καρβοξυ-ομάδα. According to the present invention, the substituent in position 2 of the pyrazole is selected from a heterocyclic group or an aromatic group, or a heteroaromatic group, which independently may carry one or more substituents between halogen, (C1-6) alkyl-, (C1-6)alkylhalo-, nitro-, methoxy-, trifluoromethoxy-, thionyl-, thionylamido- and carboxy group.
Σύμφωνα με την παρούσα εφεύρεση, ο υποκαταστάτης που βρίσκεται σε θέση 2 του πυραζολίου είναι μία ετεροκυκλική ομάδα η οποία επιλέγεται ανάμεσα από πιπεριδίνη, πιπεριδαζίνη και πιπεραζίνη, οι οποίες ανεξάρτητα δύναται να φέρουν έναν ή περισσότερους υποκαταστάτες ανάμεσα από αλογόνο, (C1-6)άλκυλο-, (C1-6)αλκυλαλογόνο-, νίτρο-, μεθόξυ-, τριφθορομεθόξυ-, θειόνυλο-, θειονυλάμιδο- και καρβοξυ-ομάδα. According to the present invention, the substituent in position 2 of the pyrazole is a heterocyclic group selected from piperidine, piperidazine and piperazine, which independently may carry one or more substituents from halogen, (C1-6)alkyl -, (C1-6)alkylhalo-, nitro-, methoxy-, trifluoromethoxy-, thionyl-, thionylamido- and carboxy-group.
Σύμφωνα με την παρούσα εφεύρεση, ο υποκαταστάτης που βρίσκεται σε θέση 2 του πυραζολίου είναι μία ετερο-αρωματική ομάδα η οποία επιλέγεται ανάμεσα από πυριδίνη, πυριδαζίνη, πυριμιδίνη και πυραζίνη, οι οποίες ανεξάρτητα δύναται να φέρουν έναν ή περισσότερους υποκαταστάτες ανάμεσα από αλογόνο, (C1-6)άλκυλο-, (C1-6)αλκυλαλογόνο-, νίτρο-, μεθόξυ-, τριφθορομεθόξυ-, θειόνυλο-, θειονυλάμιδο- και καρβοξυ-ομάδα. According to the present invention, the substituent in position 2 of the pyrazole is a hetero-aromatic group selected from pyridine, pyridazine, pyrimidine and pyrazine, which independently may carry one or more substituents between halogen, (C1 -6)alkyl-, (C1-6)alkylhalo-, nitro-, methoxy-, trifluoromethoxy-, thionyl-, thionylamido- and carboxy group.
Σύμφωνα με την παρούσα εφεύρεση, ο υποκαταστάτης που βρίσκεται σε θέση 2 του πυραζολίου είναι ένας αρωματικός δακτύλιος ο οποίος δύναται να φέρει υποκαταστάτες σε θέσεις 2 έως 6 που επιλέγονται ανάμεσα από υδρογόνο, αλογόνο, (C1-6)άλκυλο-, (C1-6)αλκυλαλογόνο-, νίτρο-, μεθόξυ-, τριφθορομεθόξυ-, θειόνυλο-, θειονυλάμιδο- και καρβοξυ-ομάδα. According to the present invention, the substituent in position 2 of the pyrazole is an aromatic ring which may bear substituents in positions 2 to 6 selected from hydrogen, halogen, (C1-6)alkyl-, (C1-6 )alkylhalo-, nitro-, methoxy-, trifluoromethoxy-, thionyl-, thionylamido- and carboxy-group.
Σύμφωνα με την παρούσα εφεύρεση, οι υποκατάστατες συνδέονται μέσω ενός αμιδικού δεσμού σε θέση 3 του πυραζολίου και επιλέγονται ανάμεσα από μία μία αλειφατική ανθρακική αλυσίδα ή από έναν κυκλικό υδρογονάνθρακα ή από έναν ή περισσότερους ετεροκυκλικούς, αρωματικούς ή ετεροαρωματικούς δακτυλίους, οι οποίοι ανεξάρτητα δύναται να φέρουν έναν ή περισσότερους επιπλέον υποκαταστάτες. According to the present invention, the substituents are linked through an amide bond in position 3 of the pyrazole and are selected from an aliphatic carbon chain or from a cyclic hydrocarbon or from one or more heterocyclic, aromatic or heteroaromatic rings, which independently may bear one or more additional substituents.
Σύμφωνα με την παρούσα εφεύρεση, ο υποκαταστάτης που συνδέεται μέσω αμιδικού δεσμού σε θέση 3 του πυραζολίου είναι μία αλειφατική ανθρακική αλυσίδα η οποία επιλέγεται ανάμεσα από (C1-6)αλκυλο-, (C1-6)αλκοξυ-, (C1-6)αλκυλαλογόνο-, (C1-6)αλκυλοθείο- ή (C1-6)αλκυλσουλφονυλο-ομάδα. According to the present invention, the substituent attached through an amide bond in position 3 of the pyrazole is an aliphatic carbon chain selected from (C1-6)alkyl-, (C1-6)alkyl-, (C1-6)alkylhalogen -, (C1-6)alkylthio- or (C1-6)alkylsulfonyl group.
Σύμφωνα με την παρούσα εφεύρεση, ο υποκαταστάτης που συνδέεται μέσω αμιδικού δεσμού σε θέση 3 του πυραζολίου είναι ένας κυκλικός υδρογονάνθρακας ο οποίος επιλέγεται ανάμεσα από (C1-6)κυκλοαλκυλο-, (C1-6)κυκλοαλκοξυ-, (C1-6)κυκλοαλκυλαλογόνο-, (C1-6)κυκλοαλκυλοθείο- ή (C1-6) κυ κλοαλκυλσουλφονυλο-ομάδα . According to the present invention, the substituent attached through an amide bond at position 3 of the pyrazole is a cyclic hydrocarbon selected from (C1-6)cycloalkyl-, (C1-6)cycloalkoxy-, (C1-6)cycloalkylhalo- , (C1-6)cycloalkylthio- or (C1-6)cycloalkylsulfonyl group.
Σύμφωνα με την παρούσα εφεύρεση, ο υποκαταστάτης που συνδέεται μέσω αμιδικού δεσμού σε θέση 3 του πυραζολίου είναι μία ετεροκυκλική ομάδα η οποία επιλέγεται ανάμεσα από πιπεριδίνη, πιπεριδαζίνη, πιπεραζίνη και μορφολίνη, οι οποίες ανεξάρτητα δύναται να φέρουν έναν ή περισσότερους υποκαταστάτες ανάμεσα από αλογόνο, άλκυλο-, αλκυλαλογόνο-, νίτρο-, μεθόξυ-, τριφθορομεθόξυ-, θειόνυλο-, θειονυλάμιδο-, καρβοξυ- και αρυλοκαρβοξυ-ομάδα . According to the present invention, the substituent connected through an amide bond in position 3 of the pyrazole is a heterocyclic group selected from among piperidine, piperidazine, piperazine and morpholine, which independently may carry one or more substituents among halogen, alkyl -, alkylhalo-, nitro-, methoxy-, trifluoromethoxy-, thionyl-, thionylamido-, carboxy- and arylcarboxy- group.
Σύμφωνα με την παρούσα εφεύρεση, ο υποκαταστάτης που συνδέεται μέσω αμιδικού δεσμού σε θέση 3 του πυραζολίου είναι ένας ετεροαρωματικός δακτύλιος, ο οποίος επιλέγεται ανάμεσα από πυριδίνη, πυριδαζίνη, πυριμιδίνη, πυραζίνη, 1,2-οξαζίνη, 1,3-οξαζίνη, 1,4-οξαζίνη οι οποίες ανεξάρτητα δύναται να φέρουν έναν ή περισσότερους υποκαταστάτες ανάμεσα από αλογόνο, άλκυλο-, αλκυλαλογόνο-, νίτρο-, μεθόξυ-, τριφθορομεθόξυ-, θειόνυλο-, θειονυλάμιδο-, καρβοξυ- και αρυλοκαρβοξυ-ομάδα. According to the present invention, the amide-linked substituent at position 3 of the pyrazole is a heteroaromatic ring selected from pyridine, pyridazine, pyrimidine, pyrazine, 1,2-oxazine, 1,3-oxazine, 1, 4-oxazine which independently may bear one or more substituents among halogen, alkyl-, alkylhalogen-, nitro-, methoxy-, trifluoromethoxy-, thionyl-, thionylamido-, carboxy- and arylcarboxy-group.
Σύμφωνα με την παρούσα εφεύρεση, ο υποκατάστατης που συνδέεται μέσω αμιδικού δεσμού σε θέση 3 του πυραζολίου είναι ένας αρωματικός δακτύλιος, ο οποίος επιλέγεται ανάμεσα από φαίνυλο-, ναφθαλένο-, ανθρακένο- ή φαινανθρένο-ομάδες, οι οποίες ανεξάρτητα δύναται να φέρουν έναν ή περισσότερους υποκαταστάτες ανάμεσα από αλογόνο, άλκυλο-, αλκυλαλογόνο-, νίτρο-, μεθόξυ-, τριφθορομεθόξυ-, θειόνυλο-, θειονυλάμιδο-, καρβοξυ- και αρυλοκαρβοξυ-ομάδα . According to the present invention, the substituent connected through an amide bond in position 3 of the pyrazole is an aromatic ring, which is selected from phenyl-, naphthalene-, anthracene- or phenanthrene-groups, which independently may carry one or more substituents among halogen, alkyl-, alkylhalogen-, nitro-, methoxy-, trifluoromethoxy-, thionyl-, thionylamido-, carboxy- and arylcarboxy- group.
Σύμφωνα με την παρούσα εφεύρεση, ο υποκαταστάτης που συνδέεται σε θέση 3 του πυραζολίου είναι μία ουρία που φέρει υποκαταστάτες έναν αρωματικό ή ετεροαρωματικό δακτύλιο ο οποίος ανεξάρτητα δύναται να φέρει έναν ή περισσότερους υποκαταστάτες. According to the present invention, the substituent attached to the 3-position of the pyrazole is a urea which bears substituents on an aromatic or heteroaromatic ring which independently may bear one or more substituents.
Σύμφωνα με την παρούσα εφεύρεση, η ουρία που συνδέεται σε θέση 3 του πυραζολίου είναι υποκατεστημένη με έναν αρωματικό δακτύλιο, ο οποίος επιλέγεται ανάμεσα από φαίνυλο-, ναφθαλένο-, ανθρακένο- ή φαινανθρένοομάδες, οι οποίες ανεξάρτητα δύναται να φέρουν έναν ή περισσότερους υποκαταστάτες οι οποίοι επιλέγονται ανάμεσα από αλογόνο, (C1-6)άλκυλο-, (Ci-6)αλκυλαλογόνο-, νίτρο-, μεθόξυ-, τριφθορομεθόξυ-, θειόνυλο-, θειονυλάμιδοκαι καρβοξυ-ομάδα. According to the present invention, the urea attached to position 3 of the pyrazole is substituted with an aromatic ring, which is selected from phenyl-, naphthalene-, anthracene- or phenanthrene groups, which independently may carry one or more substituents which are selected from halogen, (C1-6)alkyl-, (C1-6)alkylhalo-, nitro-, methoxy-, trifluoromethoxy-, thionyl-, thionylamido and carboxy group.
Σύμφωνα με την παρούσα εφεύρεση, η ουρία που συνδέεται σε θέση 3 του πυραζολίου είναι υποκατεστημένη με έναν αρωματικό δακτύλιο, ο οποίος επιλέγεται ανάμεσα από πυριδίνη, πυριδαζίνη, πυριμιδίνη, πυραζίνη, 1,2-οξαζίνη, 1,3-οξαζίνη, 1,4-οξαζίνη οι οποίες ανεξάρτητα δύναται να φέρουν έναν ή περισσότερους υποκαταστάτες οι οποίοι επιλέγονται ανάμεσα από αλογόνο, (C1-6)άλκυλο-, (C1-6)αλκυλαλογόνο-, νίτρο-, μεθόξυ-, τριφθορομεθόξυ-, θειόνυλο-, θειονυλάμιδο- και καρβοξυ-ομάδα. According to the present invention, the urea attached at position 3 of the pyrazole is substituted with an aromatic ring selected from pyridine, pyridazine, pyrimidine, pyrazine, 1,2-oxazine, 1,3-oxazine, 1,4 -oxazine which independently may carry one or more substituents selected from halogen, (C1-6)alkyl-, (C1-6)alkylhalogen-, nitro-, methoxy-, trifluoromethoxy-, thionyl-, thionylamido- and carboxy-group.
Σε μία προτιμώμενη ενσωμάτωση, η φαρμακευτική ένωση (Α) της παρούσας εφεύρεσης έχει στη θέση R1μία 4-βρωμοφαινυλο-ομάδα και στη θέση R2 μία ναφθαλένο-ομάδα. In a preferred embodiment, the pharmaceutical compound (A) of the present invention has in the R1 position a 4-bromophenyl group and in the R2 position a naphthalene group.
Σε μία προτιμώμενη ενσωμάτωση, η φαρμακευτική ένωση (Α) της παρούσας εφεύρεσης έχει στη θέση R1μία 2-πυραζινο-ομάδα και στη θέση R2 μία ναφθαλένο-ομάδα. In a preferred embodiment, the pharmaceutical compound (A) of the present invention has in the R1 position a 2-pyrazine group and in the R2 position a naphthalene group.
Σε μία προτιμώμενη ενσωμάτωση, η φαρμακευτική ένωση (Α) της παρούσας εφεύρεσης έχει στη θέση R1μία 4-πυριδινο-ομάδα και στη θέση R2 μία ναφθαλένο-ομάδα. In a preferred embodiment, the pharmaceutical compound (A) of the present invention has in the R1 position a 4-pyridine group and in the R2 position a naphthalene group.
Σε μία προτιμώμενη ενσωμάτωση, η φαρμακευτική ένωση (Α) της παρούσας εφεύρεσης έχει στη θέση R1μία 4-νιτροφαίνυλο-ομάδα και στη θέση R2 μία ναφθαλένο-ομάδα. In a preferred embodiment, the pharmaceutical compound (A) of the present invention has in the R1 position a 4-nitrophenyl group and in the R2 position a naphthalene group.
Σύμφωνα με την παρούσα εφεύρεση νέα πρωτότυπα δομικά ανάλογα της φαρμακευτικής ένωσης Α1 παράγονται ακολουθώντας γνωστές αντιδράσεις από τη στάθμη της τεχνικής. Σύμφωνα με τη συνθετική πορεία του Σχήματος 1, ξεκινώντας από θειοοξικό μεθυλεστέρα και ακρυλονιτρίλιο, μέσω μίας αντίδρασης Michael-Dieckmann παράγεται το 4-κυανο-3-οξοτετραϋδροθειοφένιο 1. Αντίδραση του παραγώγου 1 με τις υποκατεστημένες υδροχλωρικές υδραζίνες 2 σε αιθανόλη και υπό συνθήκες βρασμού, οδηγεί στα 3-αμινο-2-(R1-υποκατεστημένα)-2,5-διυδρο-4Η-θειενο[3,4-c]πυραζόλια 3. Αντίδραση του ενδιαμέσου παραγώγου 3 με το άκυλο-χλωρίδιο 4 παρουσία βάσης οδηγεί στο τελικό παράγωγο (Α) το οποίο παρουσιάζει φαρμακευτική δράση μέσω αναστολής της ενζυμικής δράσης της ΑΤΧ. According to the present invention new prototype structural analogues of the pharmaceutical compound A1 are produced following known reactions from the state of the art. According to the synthetic route of Scheme 1, starting from methyl thioacetate and acrylonitrile, 4-cyano-3-oxotetrahydrothiophene 1 is produced through a Michael-Dieckmann reaction. Reaction of derivative 1 with substituted hydrazine hydrochlorides 2 in ethanol and under boiling conditions, leads to 3-amino-2-(R1-substituted)-2,5-dihydro-4H-thieno[3,4-c]pyrazoles 3. Reaction of intermediate 3 with acyl chloride 4 in the presence of base leads to the final derivative (A) which exhibits a medicinal effect through inhibition of the enzymatic action of ATX.
Στην περίπτωση που η ομάδα R2 είναι -NHAr, όπου Ar είναι ένας υποκατεστημένος αρωματικός ή ετεροαρωματικός δακτύλιος, το ενδιάμεσο 3-παράγωγο 3 αντιδρά με το αντίστοιχο αρυλο-ισοκυανο-παράγωγο 5 σε θερμοκρασία δωματίου και οδηγεί στο αντίστοιχο τελικό παράγωγο (Α). In the case where the R 2 group is -NHAr, where Ar is a substituted aromatic or heteroaromatic ring, the intermediate 3-derivative 3 reacts with the corresponding aryl-isocyano-derivative 5 at room temperature and leads to the corresponding final derivative (A).
Σχήμα 1. Γενική συνθετική πορεία αναλογών ενώσεων της (Α1). Figure 1. General synthetic route of analogous compounds of (A1).
Σύμφωνα με την παρούσα εφεύρεση ορισμένα ενδεικτικά μη περιοριστικά παραδείγματα ενώσεων με χημική δομή (Α) και φαρμακευτική δράση μέσω μηχανισμού αναστολής της ΑΤΧ προκύπτουν από το συνδυασμό οποιουδήποτε υποκαταστάτη R1της πρώτης στήλης με οποιοδήποτε υποκαταστάτη R2της δεύτερης στήλης του Πίνακα 1. According to the present invention some indicative non-limiting examples of compounds with chemical structure (A) and pharmaceutical action through an ATX inhibition mechanism result from the combination of any R1 substituent of the first column with any R2 substituent of the second column of Table 1.
Πίνακας 1. Ενδεικτικοί συνδυασμοί νέων πρωτότυπων παραγώγων με φαρμακευτική δράση μέσω του μηχανισμού αναστολής της ΑΤΧ. Table 1. Indicative combinations of new prototype derivatives with pharmaceutical action through the mechanism of ATX inhibition.
Σύμφωνα με την παρούσα εφεύρεση, οι φαρμακευτικές ενώσεις με χημική δομή (Α) αναμιγνύονται με κατάλληλα φαρμακευτικά αποδεκτά έκδοχα και μορφοποιούνται σε διάφορες φαρμακοτεχνικές μορφές και σε κατάλληλη ποσότητα έτσι ώστε να έχουν την προβλεπόμενη θεραπευτική δράση. According to the present invention, the pharmaceutical compounds with chemical structure (A) are mixed with suitable pharmaceutical acceptable excipients and formulated in various pharmaceutical forms and in an appropriate amount so as to have the intended therapeutic effect.
Σύμφωνα με την παρούσα εφεύρεση, οι χημικές ενώσεις με τη βασική δομή (Α) είναι κατάλληλες για χρήση είτε ως μονοθεραπεία, είτε ως συμπληρωματική θεραπεία σε πνευμονική ίνωση, επιπλέον σε ίνωση αλλομοσχεύματος πνεύμονα, σαρκοείδωση και μη ειδική διάμεση πνευμονία (Nonspecific Interstitial Pneumonia, NSIP), σε οξεία πνευμονοπάθεια, πνευμονοπάθεια από χρήση αναπνευστήρα, σύνδρομο οξείας αναπνευστικής δυσχέρειας, πνευμονία, ασθένεια COVID-19, ηπατική ίνωση, συμπεριλαμβανομένων της μη αλκοολικής λιπώδους νόσου του ήπατος, της μη αλκοολικής στεατοηπατίτιδας, της αλκοολικής νόσου του ήπατος και της ηπατίτιδας C, επιπρόσθετα, σε νεφρική ίνωση, καρδιακή ίνωση, οφθαλμική ίνωση, βακτηριακή λοίμωξη, ρευματοειδή αρθρίτιδα και άλλες ρευματοειδείς παθήσεις, νευρολογικές και νευροεκφυλιστικές παθήσεις , σε ασθένειες που σχετίζονται με το μεταβολικό σύνδρομο, το διαβήτη και την παχυσαρκία, καθώς και σε όλες τις μορφές καρκίνου συμπεριλαμβανομένων των καρκίνων του πνεύμονα, του στήθους, του προστάτη, των οστών, σε μελανώματα και σε μεταστάσεις. According to the present invention, the chemical compounds with the basic structure (A) are suitable for use either as monotherapy or as adjunctive therapy in pulmonary fibrosis, in addition to lung allograft fibrosis, sarcoidosis and Nonspecific Interstitial Pneumonia (NSIP) ), in acute lung disease, ventilator-associated lung disease, acute respiratory distress syndrome, pneumonia, COVID-19 disease, liver fibrosis, including non-alcoholic fatty liver disease, non-alcoholic steatohepatitis, alcoholic liver disease and hepatitis C, additionally, in renal fibrosis, cardiac fibrosis, ocular fibrosis, bacterial infection, rheumatoid arthritis and other rheumatic diseases, neurological and neurodegenerative diseases, in diseases related to the metabolic syndrome, diabetes and obesity, and in all forms of cancer including of lung, breast, prostate cancers, etc of bones, in melanomas and metastases.
Η παρούσα εφεύρεση περιγράφεται με τα παρακάτω ενδεικτικά παραδείγματα. Παράδειγμα 1. Σύνθεση και αξιολόγηση δράσης παραγώγου (Α4) The present invention is described by the following illustrative examples. Example 1. Synthesis and evaluation of derivative activity (A4)
Για τη σύνθεση του παραγώγου (Α4) ακολουθείται η συνθετική πορεία του Σχήματος 2. Ένα διάλυμα του 4-κυανο-3-οξο-τετραϋδροθειοφενίου (10 mmol) και της υδροχλωρικής 4-βρωμοϋδραζίνης 5 (11 mmol) σε 40 ml. αιθανόλης θερμαίνεται έως βρασμού για 4 ώρες. Στη συνέχεια το μίγμα της αντίδρασης εξατμίζεται υπό κενό και το υπόλειμμα φέρεται σε 50 ml. νερό όπου στη συνέχεια ψύχεται στους 0°C. Στο ψυχρό διάλυμα προστίθεται διάλυμα καυστικού νατρίου 5% έως pH 10 οπότε και καθιζάνει το 3-αμινο-2-(4βρωμοφαινυλο)-2,5-διυδρο-4Η-θειενο[3,4-(:]πυραζόλιο 6, το οποίο λαμβάνεται σε καθαρή μορφή μετά από ανακρυστάλλωση από μίγμα αιθανόλης/νερού. Ακολουθεί διάλυση του 3-αμινο-2-(4-βρωμοφαινυλο)-2,5-διυδρο-4Η-θειενο[3,4-c]πυραζολίου 6 (5 mmol) σε άνυδρο διχλωρομεθάνιο (5 mL) και προσθήκη τριαιθυλαμίνης (6 mmol). Στη συνέχεια προστίθεται σταδιακά το άκυλο-χλωρίδιο του ναφθαλινίου 7, και το προκύπτον διάλυμα αναδεύεται σε θερμοκρασία δωματίου για 24 ώρες. Ακολουθεί εκχύλιση κατά σειρά με διάλυμα 5% υδροχλωρικού οξέος και κορεσμένου διαλύματος όξινου ανθρακικού νατρίου, διαχωρισμός της οργανικής φάσης και ξήρανση αυτής με θειικό νάτριο, Εξάτμιση του διαλύτη ακολουθούμενη από καθαρισμό με χρωματογραφία στήλης (διαλύτης έκλουσης εξάνιο:διχλωρομεθάνιο:ισοπροπανόλη) οδηγεί στο τελικό πρωτότυπο παράγωγο (Α4) (Σχήμα 2). ). Λευκό στερεό. Απόδοση: 61%.<1>H-NMR (DMSO-d6): 3.98 (s, 2Η), 4.03 (s, 2H), 7.54-7.62 (m, 5H), 7.73 (d, J = 8.7 Hz, 3H), 8.02 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 8.09 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 10.71 (s, 1H). MS: (M+l) = 451.0. For the synthesis of derivative (A4) the synthetic course of Scheme 2 is followed. A solution of 4-cyano-3-oxo-tetrahydrothiophene (10 mmol) and 4-bromohydrazine hydrochloride 5 (11 mmol) in 40 ml. of ethanol is heated to boiling for 4 hours. The reaction mixture is then evaporated in vacuo and the residue is brought to 50 ml. water where it is then cooled to 0°C. To the cold solution is added 5% sodium caustic solution until pH 10 at which time 3-amino-2-(4bromophenyl)-2,5-dihydro-4H-thieno[3,4-(:]pyrazole 6 precipitates, which is obtained in pure form after recrystallization from an ethanol/water mixture followed by dissolution of 3-amino-2-(4-bromophenyl)-2,5-dihydro-4H-thieno[3,4-c]pyrazole 6 (5 mmol) in anhyd. dichloromethane (5 mL) and triethylamine (6 mmol) was added. Naphthalene acyl chloride 7 was then added gradually, and the resulting solution was stirred at room temperature for 24 h. This was followed by successive extraction with 5% hydrochloric acid solution and sat. of sodium bicarbonate, separating the organic phase and drying it with sodium sulfate, Evaporation of the solvent followed by purification by column chromatography (eluent hexane:dichloromethane:isopropanol) leads to the final prototype derivative (A4) (Scheme 2). White solid. Yield: 61%.<1>H-NMR (DMSO-d6): 3.98 (s, 2H), 4.03 (s, 2H), 7.54-7.62 (m, 5H), 7.73 (d, J = 8.7 Hz, 3H ), 8.02 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 8.09 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 10.71 (s, 1H). MS: (M+1) = 451.0.
Σχήμα 2. Συνθετική πορεία αναλόγου (Α4). Figure 2. Synthetic route of analog (A4).
Η αναστολή της ενζυμικής δράσης της ΑΤΧ από το παράγωγο (Α4) μετρήθηκε in vitro εφαρμόζοντας τη μέθοδο Amplex Red. The inhibition of ATX enzyme activity by derivative (A4) was measured in vitro using the Amplex Red method.
Συνοπτικά, 2 μL διαφορετικών συγκεντρώσεων (0,001 έως 5 μmol/L) του αναλόγου (Α4) σε DMSO επωάστηκαν με 50 μL ΑΤΧ 8 nΜ (ώστε η τελική συγκέντρωση να φθάνει τα 2 nΜ και το 1 nΜ για ανθρώπινη ΑΤΧ) και 48 μL ρυθμιστικού διαλύματος (50 mM Tris-CI σε pH 8.0 και 5 mM CaCl2) για 15 λεπτά στους 37 °C. Στη συνέχεια, προστίθενται στο μίγμα της αντίδρασης 50 μL του ρυθμιστικού διαλύματος με 200 μΜ LPC 16:0 (τελική συγκέντρωση 50 μΜ) και όλα μαζί επωάζονται για 30 λεπτά στους 37 °C. Τέλος, προστίθενται 50 μL του διαλύματος εργασίας το οποίο περιέχει 200 μΜ αντιδραστηρίου Amplex Red και οξειδάση χολίνης (0,2 U/mL) και HRP (2U/mL), σε 50 mM Tris-HCI σε pH 8.0 και 5 mM CaCl2, ώστε να αρχίσει η αντίδραση. Οι τιμές φθορισμού στα 590 nm μετρήθηκαν σε συσκευή ανάγνωσης πλακών φθορισμού (Tecan Infinite 200) στους 37 °C μετά από διέγερση στα 530 nm κάθε 5 λεπτά και για 30 λεπτά συνολικά. Η τιμή IC50προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας τις τιμές από δύο ανεξάρτητα πειράματα, με τη χρήση της σιγμοειδούς καμπύλης δόσηςαπόκρισης (λογισμικό PrismH) από την εξίσωση f=y0+a/(1+exp(-(x-x0)/b) που δίνεται από το SigmaPlot 11.0. Briefly, 2 µL of different concentrations (0.001 to 5 µmol/L) of analog (A4) in DMSO were incubated with 50 µL of 8 nM ATX (to bring the final concentration to 2 nM and 1 nM for human ATX) and 48 µL of buffer solution (50 mM Tris-Cl at pH 8.0 and 5 mM CaCl2) for 15 min at 37 °C. Then, 50 µL of the buffer with 200 µM LPC 16:0 (50 µM final concentration) is added to the reaction mixture and incubated for 30 min at 37 °C. Finally, 50 µL of the working solution containing 200 µM of Amplex Red reagent and choline oxidase (0.2 U/mL) and HRP (2U/mL) are added, in 50 mM Tris-HCl at pH 8.0 and 5 mM CaCl2, so that to start the reaction. Fluorescence values at 590 nm were measured in a fluorescence plate reader (Tecan Infinite 200) at 37 °C after excitation at 530 nm every 5 min and for 30 min in total. The IC50 value was determined using the values from two independent experiments, using the sigmoidal dose-response curve (PrismH software) from the equation f=y0+a/(1+exp(-(x-x0)/b) given by SigmaPlot 11.0.
Η τιμή IC50για το παράγωγο (Α4) υπολογίστηκε σε 12.7 μΜ για την αναστολή της ΑΤΧ ποντικού και 3.5 μΜ για την αναστολή της ΑΤΧ ανθρώπου. The IC 50 value for derivative (A4) was calculated to be 12.7 µM for murine ATX inhibition and 3.5 µM for human ATX inhibition.
Παράδειγμα 2. Σύνθεση και αξιολόγηση δράσης παραγώγου (Α14). Example 2. Synthesis and activity evaluation of derivative (A14).
Για τη σύνθεση του παραγώγου (Α14) ακολουθήθηκε η συνθετική πορεία του Σχήματος 3. Ένα διάλυμα του 4-κυανο-3-οξο-τετραϋδροθειοφενίου (10 mmol) και της 2-υδραζινοπυραζίνης 8 (11 mmol) και 4Μ υδροχλωρίου σε διοξάνη (50 mmol) σε 40 mL αιθανόλης θερμαίνεται έως βρασμού για 72 ώρες. Ο διαλύτης εξατμίζεται υπό κενό, στο υπόλειμμα προστίθεται νερό και η υδατική φάση εκχυλίζεται με διαιθυλαιθέρα. Η υδατική φάση κατόπιν εξουδετερώνεται με διάλυμα καυστικού νατρίου 5% έως pH 10 και στη συνέχεια εκχυλίζεται με οξικό αιθυλεστέρα. Η οργανική φάση ξηραίνεται, διηθείται και ο διαλύτης αποστάζεται υπο κενό. Ακολουθεί διάλυση του 3-αμινο-2-(2-πυραζινο)-2,5-διυδρο-4Η-θειενο[3,4-c]πυραζολίου 9 (5 mmol) σε άνυδρη διοξάνη (5 mL) και προσθήκη τριαιθυλαμίνης (6 mmol). Στη συνέχεια προστίθεται σταδιακά το άκυλο-χλωρίδιο του ναφθαλινίου 7, και το προκύπτον διάλυμα αναδεύεται σε συνθήκες βρασμού υπό επαναρροή για 48 ώρες. Εξάτμιση του διαλύτη ακολουθούμενη από ανακρυστάλλωση του στερεού από οξικό αιθυλεστέρα οδηγεί στο τελικό πρωτότυπο παράγωγο (Α14) (Σχήμα 3). ). Μαύρο στερεό. Απόδοση: 11%.<1>H-NMR (DMSO-d6): 3.70 (s, 2Η), 3,86 (s, 2H), 7.58-7.64 (m, 3H), 7.77 (d , J = 8.7 Hz, 3H), 7,82 (m, 1H), 7.97 (m, 1H), 8.15 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 10.81 (s, 1H). MS: (M+l) = 374.1. For the synthesis of derivative (A14) the synthetic route of Scheme 3 was followed. A solution of 4-cyano-3-oxo-tetrahydrothiophene (10 mmol) and 2-hydrazinopyrazine 8 (11 mmol) and 4M hydrogen chloride in dioxane (50 mmol ) in 40 mL ethanol heated to boiling for 72 h. The solvent is evaporated in vacuo, water is added to the residue and the aqueous phase is extracted with diethyl ether. The aqueous phase is then neutralized with 5% sodium caustic solution to pH 10 and then extracted with ethyl acetate. The organic phase is dried, filtered and the solvent distilled off under vacuum. This is followed by dissolution of 3-amino-2-(2-pyrazine)-2,5-dihydro-4H-thieno[3,4-c]pyrazole 9 (5 mmol) in anhydrous dioxane (5 mL) and addition of triethylamine (6 mmol ). Naphthalene acyl chloride 7 is then gradually added, and the resulting solution is stirred at reflux for 48 hours. Evaporation of the solvent followed by recrystallization of the solid from ethyl acetate leads to the final prototype derivative (A14) (Scheme 3). ). Black solid. Yield: 11%.<1>H-NMR (DMSO-d6): 3.70 (s, 2H), 3.86 (s, 2H), 7.58-7.64 (m, 3H), 7.77 (d , J = 8.7 Hz , 3H), 7.82 (m, 1H), 7.97 (m, 1H), 8.15 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 10.81 (s, 1H). MS: (M+1) = 374.1.
Σχήμα 3. Συνθετική πορεία αναλόγου (Α14). Figure 3. Synthetic route of analogue (A14).
Η αναστολή της ενζυμικής δράσης της ΤΧ από το παραγωγό (Α14) μετρήθηκε in vitro εφαρμόζοντας τη μέθοδο Amplex Red. The inhibition of TX enzyme activity by the producer (A14) was measured in vitro using the Amplex Red method.
Συνοπτικά, 2 μL διαφορετικών συγκεντρώσεων (0,001 έως 5 μmol/L) του αναλόγου (Α14) σε DMSO επωάστηκαν με 50 μL ΑΤΧ (ώστε η τελική συγκέντρωση να φθάνει τα 2 nΜ και το 1 nΜ για ανθρώπινη ΑΤΧ) και 48 μL ρυθμιστικού διαλύματος (50 mM Tris-CI σε pH 8.0 και 5 mM CaCl2) για 15 λεπτά στους 37 °C. Στη συνέχεια, προστίθενται στο μίγμα της αντίδρασης 50 μL του ρυθμιστικού διαλύματος με 200 μΜ LPC 16:0 (τελική συγκέντρωση 50 μΜ) και όλα μαζί επωάζονται για 30 λεπτά στους 37 °C. Τέλος, προστίθενται 50 μL του διαλύματος εργασίας το οποίο περιέχει 200 μΜ αντιδραστηρίου Amplex Red και οξειδάση χολίνης (0,2 U/mL) και HRP (2U/mL), σε 50 mM Tris-HCI σε pH 8.0 και 5 mM CaCl2, ώστε να αρχίσει η αντίδραση. Οι τιμές φθορισμού στα 590 nm μετρήθηκαν σε συσκευή ανάγνωσης πλακών φθορισμού (Tecan Infinite 200) στους 37 °C μετά από διέγερση στα 530 nm κάθε 5 λεπτά και για 30 λεπτά συνολικά. Η τιμή IC50προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας τις τιμές από δύο ανεξάρτητα πειράματα, με τη χρήση της σιγμοειδούς καμπύλης δόσηςαπόκρισης (λογισμικό PrismH) από την εξίσωση f=y0+a/(1+exp(-(x-x0)/b) που δίνεται από το SigmaPlot 11.0. Briefly, 2 μL of different concentrations (0.001 to 5 μmol/L) of the analog (A14) in DMSO were incubated with 50 μL of ATX (so that the final concentration reached 2 nM and 1 nM for human ATX) and 48 μL of buffer ( 50 mM Tris-Cl at pH 8.0 and 5 mM CaCl2) for 15 min at 37 °C. Then, 50 µL of the buffer with 200 µM LPC 16:0 (50 µM final concentration) is added to the reaction mixture and incubated for 30 min at 37 °C. Finally, 50 µL of the working solution containing 200 µM of Amplex Red reagent and choline oxidase (0.2 U/mL) and HRP (2U/mL) are added, in 50 mM Tris-HCl at pH 8.0 and 5 mM CaCl2, so that to start the reaction. Fluorescence values at 590 nm were measured in a fluorescence plate reader (Tecan Infinite 200) at 37 °C after excitation at 530 nm every 5 min and for 30 min in total. The IC50 value was determined using the values from two independent experiments, using the sigmoidal dose-response curve (PrismH software) from the equation f=y0+a/(1+exp(-(x-x0)/b) given by SigmaPlot 11.0.
Η τιμή IC50για το παράγωγο (Α14) υπολογίστηκε σε 2.5 μΜ για την αναστολή της ΑΤΧ ποντικού και 1.3 μΜ για την αναστολή της ΑΤΧ ανθρώπου. The IC 50 value for derivative (A14) was calculated to be 2.5 µM for murine ATX inhibition and 1.3 µM for human ATX inhibition.
Παράδειγμα 3. Σύνθεση και αξιολόγηση δράσης (Α16) Example 3. Synthesis and evaluation of action (A16)
Για τη σύνθεση του παραγωγού (Α16) ακολουθήθηκε η συνθετική πορεία του Σχήματος 4. Ένα διάλυμα του 4-κυανο-3-οξο-τετραϋδροθειοφενίου (10 mmol) και της υδροχλωρικής 4-υδραζινοπυριδίνης 10 (11 mmol) σε 40 mL αιθανόλης θερμαίνεται έως βρασμού για 24 ώρες. Στη συνέχεια το μίγμα της αντίδρασης εξατμίζεται υπό κενό και το υπόλειμμα φέρεται σε 50 mL νερό όπου στη συνέχεια ψύχεται στους 0°C. Στο ψυχρό διάλυμα προστίθεται διάλυμα καυστικού νατρίου 5% έως pH 10 οπότε και καθιζάνει το 3-αμινο-2-(2-πυρίδινο)-2,5-διυδρο-4Η-θειενο[3,4-c]πυραζόλιο 11, το οποίο διηθείται, εκπλένεται με νερό, ξηραίνεται υπό κενό και χρησιμοποιείται χωρίς επιπλέον κατεργασία στο επόμενο στάδιο. Ακολουθεί διάλυση του 3-αμινο-2-(2-πυρίδινο)-2,5-διυδρο-4Η-θειενο[3,4-c]πυραζολίου 11 (5 mmol) σε άνυδρη διοξάνη (5 mL) και προσθήκη τριαιθυλαμίνης (6 mmol). Στη συνέχεια προστίθεται σταδιακά το άκυλο-χλωρίδιο του ναφθαλινίου 7, και το προκύπτον διάλυμα αναδεύεται σε συνθήκες βρασμού υπό επαναρροή για 18 ώρες. Ακολουθεί εκχύλιση κατά σειρά με διάλυμα 5% υδροχλωρικού οξέος και κορεσμένου διαλύματος όξινου ανθρακικού νατρίου, διαχωρισμός της οργανικής φάσης και ξήρανση αυτής με θειικό νάτριο. Εξάτμιση του διαλύτη ακολουθούμενη από καθαρισμό με χρωματογραφία στήλης (διαλύτης έκλουσης: εξάνιο-οξικός αιθυλεστέρας) οδηγεί στο τελικό πρωτότυπο παράγωγο (Α16) (Σχήμα 4). Καστανό στερεό. Απόδοση: 37%.<1>H-NMR (DMSO-d6): 3.99 (s, 2Η), 4.07 (s, 2H), 7,70 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 7.85 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 8.02 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 8.11-8.17 (m, 3H), 8.68 (d, J= 6.2 Hz, 2H), 8.86 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 10.91 (s, 1H). MS: (M+l) = 451.0. MS: (M+l) = 373.1. For the synthesis of the product (A16) the synthetic route of Scheme 4 was followed. A solution of 4-cyano-3-oxo-tetrahydrothiophene (10 mmol) and 4-hydrazinopyridine hydrochloride 10 (11 mmol) in 40 mL of ethanol was heated to boiling for 24 hours. The reaction mixture is then evaporated in vacuo and the residue is taken up in 50 mL of water where it is then cooled to 0°C. To the cold solution, 5% sodium caustic solution is added until pH 10, at which point 3-amino-2-(2-pyridine)-2,5-dihydro-4H-thieno[3,4-c]pyrazole 11 precipitates, which is filtered , washed with water, dried under vacuum and used without further treatment in the next step. This is followed by dissolution of 3-amino-2-(2-pyridine)-2,5-dihydro-4H-thieno[3,4-c]pyrazole 11 (5 mmol) in anhydrous dioxane (5 mL) and addition of triethylamine (6 mmol ). Naphthalene acyl chloride 7 is then added gradually, and the resulting solution is stirred at reflux for 18 hours. This is followed by sequential extraction with a 5% solution of hydrochloric acid and a saturated solution of sodium bicarbonate, separation of the organic phase and drying of it with sodium sulfate. Evaporation of the solvent followed by purification by column chromatography (eluent: hexane-ethyl acetate) leads to the final original derivative (A16) (Scheme 4). Brown solid. Yield: 37%.<1>H-NMR (DMSO-d6): 3.99 (s, 2H), 4.07 (s, 2H), 7.70 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 7.85 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 8.02 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 8.11-8.17 (m, 3H), 8.68 (d, J= 6.2 Hz, 2H), 8.86 (d, J= 8.6 Hz, 1H ), 10.91 (s, 1H). MS: (M+1) = 451.0. MS: (M+1) = 373.1.
Σχήμα 4. Συνθετική πορεία αναλόγου (Α16). Figure 4. Synthetic route of analog (A16).
Η αναστολή της ενζυμικής δράσης της ΤΧ από το παραγωγό (Α16) μετρήθηκε in vitro εφαρμόζοντας τη μέθοδο Amplex Red. The inhibition of TX enzyme activity by the producer (A16) was measured in vitro using the Amplex Red method.
Συνοπτικά, 2 μL διαφορετικών συγκεντρώσεων (0,001 έως 5 μmol/L) του αναλόγου (Α16) σε DMSO επωάστηκαν με 50 μL ΑΤΧ (ώστε η τελική συγκέντρωση να φθάνει τα 2 πΜ και το 1 πΜ για ανθρώπινη ΑΤΧ) και 48 μL ρυθμιστικού διαλύματος (50 mM Tris-CI σε pH 8.0 και 5 mM CaCl2) για 15 λεπτά στους 37 °C. Στη συνέχεια, προστίθενται στο μίγμα της αντίδρασης 50 μL του ρυθμιστικού διαλύματος με 200 μΜ LPC 16:0 (τελική συγκέντρωση 50 μΜ) και όλα μαζί επωάζονται για 30 λεπτά στους 37 °C. Τέλος, προστίθενται 50 μL του διαλύματος εργασίας το οποίο περιέχει 200 μΜ αντιδραστηρίου Amplex Red και οξειδάση χολίνης (0,2 U/mL) και HRP (2U/mL), σε 50 mM Tris-HCI σε pH 8.0 και 5 mM CaCl2, ώστε να αρχίσει η αντίδραση. Οι τιμές φθορισμού στα 590 nm μετρήθηκαν σε συσκευή ανάγνωσης πλακών φθορισμού (Tecan Infinite 200) στους 37 °C μετά από διέγερση στα 530 nm κάθε 5 λεπτά και για 30 λεπτά συνολικά. Η τιμή IC50προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας τις τιμές από δύο ανεξάρτητα πειράματα, με τη χρήση της σιγμοειδούς καμπύλης δόσηςαπόκρισης (λογισμικό PrismH) από την εξίσωση f=y0+a/(1+exp(-(x-x0)/b) που δίνεται από το SigmaPlot 11.0. Briefly, 2 μL of different concentrations (0.001 to 5 μmol/L) of the analog (A16) in DMSO were incubated with 50 μL of ATX (so that the final concentration reached 2 nM and 1 nM for human ATX) and 48 μL of buffer ( 50 mM Tris-Cl at pH 8.0 and 5 mM CaCl2) for 15 min at 37 °C. Then, 50 µL of the buffer with 200 µM LPC 16:0 (50 µM final concentration) is added to the reaction mixture and incubated for 30 min at 37 °C. Finally, 50 µL of the working solution containing 200 µM of Amplex Red reagent and choline oxidase (0.2 U/mL) and HRP (2U/mL) are added, in 50 mM Tris-HCl at pH 8.0 and 5 mM CaCl2, so that to start the reaction. Fluorescence values at 590 nm were measured in a fluorescence plate reader (Tecan Infinite 200) at 37 °C after excitation at 530 nm every 5 min and for 30 min in total. The IC50 value was determined using the values from two independent experiments, using the sigmoidal dose-response curve (PrismH software) from the equation f=y0+a/(1+exp(-(x-x0)/b) given by SigmaPlot 11.0.
Η τιμή IC50για το παράγωγο (Α16) υπολογίστηκε σε 7.5 μΜ για την αναστολή της ΑΤΧ ανθρώπου. The IC50 value for derivative (A16) was calculated to be 7.5 µM for inhibition of human ATX.
Παράδειγμα 4. Ο παρακάτω Πίνακας 2 αναφέρει ενδεικτικά και μη περιοριστικά ανάλογα της δομής (Α) με τιμές IC50στην κλίμακα των μΜ, όσο αφορά τη δράση τους στην αναστολή της αυτοταξίνης. Example 4. Table 2 below lists indicative and non-limiting analogues of structure (A) with IC50 values in the µM range, as regards their activity in inhibiting autotaxin.
Πίνακας 2. Δομές νέων πρωτότυπων παραγώγων και η ανασταλτική τους δράση έναντι της ΑΤΧ επίμυος (mATX). Table 2. Structures of novel prototype derivatives and their inhibitory activity against rat ATX (mATX).
* Η τιμή αναφέρεται σε μετρήσεις με ΑΤΧ ανθρώπου (hATX) 1 nM. * Value refers to measurements with 1 nM human ATX (hATX).
Claims (7)
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GR20200100391A GR1010099B (en) | 2020-07-02 | 2020-07-02 | Thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl acetamides as autotaxin inhibitors |
| PCT/GR2021/000045 WO2022003377A1 (en) | 2020-07-02 | 2021-07-02 | Thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl acetamides as autotaxin inhibitors |
| EP21740607.3A EP4175633A1 (en) | 2020-07-02 | 2021-07-02 | Thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl acetamides as autotaxin inhibitors |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GR20200100391A GR1010099B (en) | 2020-07-02 | 2020-07-02 | Thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl acetamides as autotaxin inhibitors |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| GR1010099B true GR1010099B (en) | 2021-10-08 |
Family
ID=74572810
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| GR20200100391A GR1010099B (en) | 2020-07-02 | 2020-07-02 | Thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl acetamides as autotaxin inhibitors |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| GR (1) | GR1010099B (en) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1698335A1 (en) * | 2003-12-26 | 2006-09-06 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Preventive and/or therapeutic agent for disease in which mitochondrial benzodiazepine receptor participates |
| US20080081833A1 (en) * | 2004-12-20 | 2008-04-03 | Astrazeneca Ab | Novel Pyrazole Derivatives And Their Use As Modulators Of Nicotinic Acetylcholine Receptors |
| US20100075993A1 (en) * | 2005-06-30 | 2010-03-25 | Drexel University | Small molecule inhibitors against west nile virus replication |
| US20100087415A1 (en) * | 2008-10-03 | 2010-04-08 | Calcimedica, Inc. | Inhibitors of store operated calcium release |
-
2020
- 2020-07-02 GR GR20200100391A patent/GR1010099B/en active IP Right Grant
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1698335A1 (en) * | 2003-12-26 | 2006-09-06 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Preventive and/or therapeutic agent for disease in which mitochondrial benzodiazepine receptor participates |
| US20080081833A1 (en) * | 2004-12-20 | 2008-04-03 | Astrazeneca Ab | Novel Pyrazole Derivatives And Their Use As Modulators Of Nicotinic Acetylcholine Receptors |
| US20100075993A1 (en) * | 2005-06-30 | 2010-03-25 | Drexel University | Small molecule inhibitors against west nile virus replication |
| US20100087415A1 (en) * | 2008-10-03 | 2010-04-08 | Calcimedica, Inc. | Inhibitors of store operated calcium release |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| CASTAGNA DIANA, BUDD DAVID C., MACDONALD SIMON J. F., JAMIESON CRAIG, WATSON ALLAN J. B.: "Development of Autotaxin Inhibitors: An Overview of the Patent and Primary Literature : Miniperspective", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, US, vol. 59, no. 12, 23 June 2016 (2016-06-23), US , pages 5604 - 5621, XP055793567, ISSN: 0022-2623, DOI: 10.1021/acs.jmedchem.5b01599 * |
| MAGKRIOTI CHRISTIANA, KAFFE ELEANNA, STYLIANAKI ELLI-ANNA, SIDAHMET CAMELIA, MELAGRAKI GEORGIA, AFANTITIS ANTREAS, MATRALIS ALEXIO: "Structure-Based Discovery of Novel Chemical Classes of Autotaxin Inhibitors", INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES, vol. 21, no. 19, pages 7002, XP055793531, DOI: 10.3390/ijms21197002 * |
| MAHER TOBY M, KREUTER MICHAEL, LEDERER DAVID J, BROWN KEVIN K, WUYTS WIM, VERBRUGGEN NADIA, STUTVOET SIMONE, FIEUW ANN, FORD PAUL,: "Trial registration numbers", BMJ OPEN RESPIRATORY RESEARCH, vol. 6, no. 1, 1 May 2019 (2019-05-01), pages e000422, XP055793568, DOI: 10.1136/bmjresp-2019-000422 * |
| MILLER SIMON; SON YOU LEE; AIKAWA YOSHIKI; MAKINO ERI; NAGAI YOSHIKO; SRIVASTAVA ASHUTOSH; OSHIMA TSUYOSHI; SUGIYAMA AKIKO; HARA A: "Isoform-selective regulation of mammalian cryptochromes", NATURE CHEMICAL BIOLOGY, NATURE PUBLISHING GROUP US, NEW YORK, vol. 16, no. 6, 30 March 2020 (2020-03-30), New York, pages 676 - 685, XP037145347, ISSN: 1552-4450, DOI: 10.1038/s41589-020-0505-1 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10654810B2 (en) | Inhibitors of lysine specific demethylase-1 | |
| US20080125417A1 (en) | Certain pyrimidines, method of making, and method of use thereof | |
| Zhu et al. | Synthesis, and docking studies of phenylpyrimidine-carboxamide derivatives bearing 1H-pyrrolo [2, 3-b] pyridine moiety as c-Met inhibitors | |
| Yang et al. | Discovery of 2-((4, 6-dimethylpyrimidin-2-yl) thio)-N-phenylacetamide derivatives as new potent and selective human sirtuin 2 inhibitors | |
| Pajk et al. | New direct inhibitors of InhA with antimycobacterial activity based on a tetrahydropyran scaffold | |
| Velankar et al. | Synthesis and biological evaluation of novel (4 or 5-aryl) pyrazolyl-indoles as inhibitors of interleukin-2 inducible T-cell kinase (ITK) | |
| Forcellini et al. | Synthesis and biological evaluation of novel quinazoline-4-piperidinesulfamide derivatives as inhibitors of NPP1 | |
| Zhang et al. | Design, synthesis and anti-inflammatory evaluation of 3-amide benzoic acid derivatives as novel P2Y14 receptor antagonists | |
| Wan et al. | Discovery of piperidin-4-yl-aminopyrimidine derivatives as potent non-nucleoside HIV-1 reverse transcriptase inhibitors | |
| Świątek et al. | Synthesis, COX-1/2 inhibition activities and molecular docking study of isothiazolopyridine derivatives | |
| EP1894931A1 (en) | Triazole derivatives as kinase inhibitors | |
| Glas et al. | Development of hetero-triaryls as a new chemotype for subtype-selective and potent Sirt5 inhibition | |
| GR1010099B (en) | Thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl acetamides as autotaxin inhibitors | |
| CN114539267B (en) | Evodiamine derivative and application thereof | |
| GR1010268B (en) | N-[2-(4-bromophenyl)-2,5-dihydro-4h-thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl-acetamides as autotaxin inhibitors | |
| JPWO2004014873A1 (en) | 4-Substituted quinazoline-8-carboxylic acid amide derivatives and their pharmacologically acceptable addition salts | |
| WO2022003377A1 (en) | Thieno[3,4-c]pyrazol-3-yl acetamides as autotaxin inhibitors | |
| Dong et al. | Discovery of novel Bcr–Abl inhibitors targeting myristoyl pocket and ATP site | |
| GR1010104B (en) | Tetrahydro-2-benzo[b]thiophene-1-carboxylic esters as autotaxin inhibitors | |
| GR1010096B (en) | Pyrazolo[1,5-a]pyrimidines as autotaxin inhibitors | |
| GR1010098B (en) | Indol-3-carboxy esters as autotaxin inhibitors | |
| KR20150067376A (en) | Tert-butyl n-[2-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoyl)-2-oxopyridin-1(2h)-yl]-3,5-difluorophenyl}ethyl)-l-alaninate or a salt, hydrate or solvate thereof | |
| GR1010097B (en) | Pyrrolo[1,2-a]pyrazino-2(1h)-thiocarbamides as autotaxin inhibitors | |
| US20230225991A1 (en) | Compounds for use in the treatment of acute intermittent porphyria | |
| Boggu et al. | Identification of diphenylalkylisoxazol-5-amine scaffold as novel activator of cardiac myosin |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PG | Patent granted |
Effective date: 20211111 |