GR1008908B - Μεθοδος ψυχρης εκχυλισης και παραγωγης σταθερων στερεων υδατοδιαλυτων εκχυλισματων απο τα στιγματα του ελληνικου φυτου crocus saτivus l. και χρηση τους στη προληψη ή και αντιμετωπιση της αθηρωματωσης - Google Patents

Μεθοδος ψυχρης εκχυλισης και παραγωγης σταθερων στερεων υδατοδιαλυτων εκχυλισματων απο τα στιγματα του ελληνικου φυτου crocus saτivus l. και χρηση τους στη προληψη ή και αντιμετωπιση της αθηρωματωσης Download PDF

Info

Publication number
GR1008908B
GR1008908B GR20150100325A GR20150100325A GR1008908B GR 1008908 B GR1008908 B GR 1008908B GR 20150100325 A GR20150100325 A GR 20150100325A GR 20150100325 A GR20150100325 A GR 20150100325A GR 1008908 B GR1008908 B GR 1008908B
Authority
GR
Greece
Prior art keywords
extract
saffron
plant
stigmas
greek
Prior art date
Application number
GR20150100325A
Other languages
English (en)
Inventor
Αλεξιος-Λεανδρος Σκαλτσουνης
Ιουλια Κλεωνος Τσετη
Γεωργια Βαλσαμη
Ελενη Σκαλτσα
Ιωαννα Ανδρεαδου
Ευαγγελος Γκικας
Αριστειδης Δοκουμετζιδης
Ειρηνη Χριστοδουλου
Νικολαος Λεμονακης
Παναγιωτης Εφεντακης
Νικολαος Κωστομητσοπουλος
Νικολαος Καδογλου
Ιωαννης - Ζαχαριας Κακαζανης
Original Assignee
Ιουλια Και Ειρηνη Τσετη Φαρμακευτικα Εργαστηρια Α.Β.Ε.Ε.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ιουλια Και Ειρηνη Τσετη Φαρμακευτικα Εργαστηρια Α.Β.Ε.Ε. filed Critical Ιουλια Και Ειρηνη Τσετη Φαρμακευτικα Εργαστηρια Α.Β.Ε.Ε.
Priority to GR20150100325A priority Critical patent/GR1008908B/el
Publication of GR1008908B publication Critical patent/GR1008908B/el

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L27/00Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L27/10Natural spices, flavouring agents or condiments; Extracts thereof
    • A23L27/11Natural spices, flavouring agents or condiments; Extracts thereof obtained by solvent extraction
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Fodder In General (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Preparation Of Fruits And Vegetables (AREA)

Abstract

Μέθοδος ψυχρής εκχύλισης και παραγωγής σταθερών στερεών υδατοδιαλυτών εκχυλισμάτων από τα στίγματα του Ελληνικού φυτού Crocus sativus L. και χρήση τους στην πρόληψη ή/και αντιμετώπιση της αθηρωμάτωσης.

Description

Μέθοδος ψυχρής εκχύλισης και παραγωγής σταθερών στερεών υδατοδιαλυτών εκχυλισμάτων από τα στίγματα του Ελληνικού φυτού Crocus sativus L. και χρήση τους στη πρόληψη ή και αντιμετώπιση της αθηρωμάτωσης
Ο Κρόκος (Saffron) είναι τα αποξηραμένα στίγματα που προέρχεται από το άνθος του φυτού Crocus sativus L., κοινώς γνωστό ως «κρόκος του σαφράν. Το φυτό δίνει μέχρι τέσσερα λουλούδια, το καθένα από τα οποία δίνει τρία βυσσινί στίγματα, που βρίσκονται στο απώτατο άκρο του καρπόφυλλου. Το φυτό κρόκος φτάνει σε ύψος 20-30 εκατοστά [1]. Τα στίγματά του, που ονομάζονται νήματα, συλλέγονται και ξηραίνονται για να χρησιμοποιηθούν κυρίως ως καρύκευμα και χρωστικοί παράγοντες στα τρόφιμα. Ο κρόκος είναι, το πιο ακριβό μπαχαρικό του κόσμου ανά μονάδα βάρους. Καλλιεργήθηκε για πρώτη φορά στην Ελλάδα [2], δεν απαντάται ως αυτοφυές και πιθανότατα προέρχεται από το φυτό Crocus cartwrightianus που συναντάται στην Κρήτη. [3]
Η γεύση του Κρόκου και το άρωμα του είναι αποτέλεσμα των ουσιών πικροκροκίνη και σαφρανάλη. Περιέχει επίσης ένα καροτενοειδές τη χρωστική ουσία κρόκινη, που προσδίδει το πλούσιο χρυσοκίτρινο χρώμα στα τρόφιμα και στα κλωστοϋφαντουργικά προϊόντα. [2] [4]
Ο Κρόκος περιέχει πάνω από 150 πτητικές και αρωματικές ενώσεις. Έχει επίσης πολλά μη πτητικά δραστικά συστατικά, [5], όπως καροτενοειδή, συμπεριλαμβανομένων των ζεαξανθίνη, λυκοπένιο, και διάφορα α- και βκαροτένια. Ωστόσο, το χρυσό κίτρινο-πορτοκαλί χρώμα του σαφράν είναι κυρίως αποτέλεσμα της περιεχόμενης α-κροκίνης.
Υποδομή της Εφεύρεσης
Η εφεύρεση αναφέρεται σε μία μέθοδο παρασκευής στερεού εκχυλίσματος από τα στίγματα του κρόκου και παρέχει σταθερά στερεά παρασκευάσματα με συγκεκριμένη αναλογία φαρμακολογικά ενεργών συστατικών που μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την πρόληψη ή/και την θεραπεία της αθηρωμάτωσης.
Η μέθοδος για την παραλαβή των φαρμακολογικά δραστικών συστατικών του κρόκου περιλαμβάνει τα ακόλουθα στάδια:
 1. Την εκχύλιση των στιγμάτων του κρόκου με ψυχρό υδατικό μέσο εκχύλισης
2.        Την παραγωγή των στερεών σταθερών λυόφιλων προϊόντων του υδατικού εκχυλίσματος
3.        Την χρήση των λυόφιλων προϊόντων για την πρόληψη ή/και την θεραπεία της αθηρωμάτωσης.
Η μέθοδος έχει το πλεονέκτημα ότι παρέχει σταθερά στερεά παρασκευάσματα με αποδεδειγμένη φαρμακολογική δράση.
Όπως αναφέρθηκε τα εκχυλίσματα του κρόκου περιέχουν πάρα πολλά δραστικά συστατικά, τα κύρια όμως συστατικά, είναι η κρόκινη, πικροκροκίνη και σαφρανάλη.
Τα κυριότερα από αυτά και τα ποιο καλά μελετημένα είναι η κρόκινη και ο μεταβολίτης της κροκετίνη.
Οι βιολογικές και φαρμακολογικές δράσεις των κροκίνη/κροκετίνη μελετήθηκαν με πειράματα in vitro ή σε ζώα, αλλά λίγες μελέτες έχουν λάβει υπόψη την βιοδιαθεσιμότητα της κροκίνης/κροκετίνης μετά από χορήγηση από το στόμα και απορρόφηση από το γαστρεντερικό επιθήλιο..
Η Κρόκινη (μονο- και διγλυκοζύλ εστέρες του δικαρβοξυλικού οξέος, της κροκετίνης) έχει αποδειχθεί ότι είναι ένα ισχυρό αντιοξειδωτικό, καθώς επίσης ότι έχει αντικαταθλιπτική, αντικαρκινική και αντιφλεγμονώδη δράση, ενισχύει τη νοητική λειτουργία και μειώνει την υψηλή χοληστερόλη.
Η Κρόκινη είναι ένα υδατοδιαλυτό καροτενοειδές μεγάλου μοριακού βάρους και εμφανίζει μικρή απορρόφηση μετά από χορήγηση από το στόμα. Πιο συγκεκριμένα διαπιστώθηκε ότι δεν απορροφάται μετά από του στόματος χορήγηση σε ζώα και σε υγιείς εθελοντές (6) αλλά υδρολύεται σε κροκετίνη, της οποίας είναι εστέρας και η οποία και απορροφάται ταχύτατα.
Η Κροκετίνη, αναγνωρίζεται ως ένας από τους ενεργούς μεταβολίτες της κρόκινης στο σώμα, αλλά η αύξηση της κροκετίνης δεν ήταν σημαντική μετά από επαναλαμβανόμενη από του στόματος χορήγηση της καθαρής ουσίας, γεγονός που υποδεικνύει ότι η κροκετίνη ταχέως μεταβολίζεται με διαδικασία σύζευξης και αποβάλλεται χωρίς συσσώρευση στο σώμα. . Η κροκετίνη χαρακτηρίζεται από χαμηλή διαλυτότητα στο νερό και μειωμένη βιοδιαθεσιμότητα in vivo η οποία μπορεί να είναι ή αιτία της περιορισμένης εφαρμογής/χρήσης σε τρόφιμα, ή φαρμακευτικά προϊόντα ή συμπληρώματα διατροφής ως κροκετίνη.
To Saffron ( κρόκος) είναι ένα από τα πιο ακριβά αρτύματα στον κόσμο. Σήμερα, υπάρχουν πάρα πολλά πλαστά/νοθευμένα προϊόντα Saffron στην αγορά και εξαιτίας αυτών των προϊόντων απομίμησης ο Διεθνής Οργανισμός Τυποποίησης έχει δημιουργήσει ένα πρότυπο για την ταξινόμηση (ISO/TS 3632 standard) του Saffron που παρουσιάζεται παρακάτω .
Saffron classification under the ISO/TS 3632 standard - See more at:
•  Κατηγορία I - κροκίνη> 190
•  Κατηγορία II - κρόκινη 150-190
•  Κατηγορία III - κρόκινη 110-190
·  Κατηγορία IV - κρόκινη 80-110
Έχει αποδειχθεί ότι η γεωγραφική θέση και οι μέθοδοι επεξεργασίας επηρεάζουν τα προκύπτοντα δείγματα σαφράν όσον αφορά το χρώμα, το άρωμα και την πικρή γεύση..
Για παράδειγμα, ο ελληνικός κρόκος έχει την υψηλότερη συγκέντρωση σε δραστικά συστατικά (κρόκινη, πικροκροκίνη, σαφρανάλη), ακολουθούμενος από τον κρόκο Ινδίας και Νέας Ζηλανδίας. Αυτή η διαφορά μπορεί να είναι το αποτέλεσμα διαφορετικών διεργασιών ξήρανσης ή/και συνθηκώναποθήκευση, επηρεάζοντας τη συγκέντρωση των συστατικών (7). Οι πιο σημαντικοί παράγοντες που προκαλούν μείωση της περιεκτικότητας του κρόκου σε δραστικά συστατικά και κατά συνέπεια μείωση της ποιότητας του κρόκου, είναι η υγρασία του προϊόντος και η σχετική υγρασίας του αέρα, η θερμοκρασία του περιβάλλοντος χώρου, το άμεσο ηλιακό φως, το οξυγόνο και η ποιότητα των συσκευασιών καθώς και όλες οι διεργασίες που αφορούν σε αυτούς τους παράγοντες [8,9] Είναι σαφές ότι όσο χαμηλότερη είναι η θερμοκρασία και η υγρασία, τόσο υψηλότερη είναι η ποιότητα.
Ο κρόκος χρησιμοποιείται ως φυσικό φάρμακο και συγκεκριμένα ως αντισπασμωδικό, ηρεμιστικό νεύρων, καταπραϋντικό ούλων, εφιδρωτικό, και αποχρεμπτικό (10) . Σε σχετικά πρόσφατες φαρμακολογικές μελέτες, ο κρόκος έχει αποδειχθεί ότι έχει πολλές δράσεις, όπως η αντικαρκινική και αντιτοξική, η αντιοξειδωτική , η αναλγητική και η αντιφλεγμονώδης καθώς και η αντιδιαβητική (10).
Ο κρόκος λειτουργεί ως αντικαταθλιπτικό και βελτιώνει τη διάθεση (10). Έχει επίσης βρεθεί να έχει και αντιθηρωματική δράση (11,12,13). Διάφορες μεθοδολογίες και εργαλεία ανάλυσης εφαρμόστηκαν με σκοπό να ανακτηθούν τα βιοενεργά συστατικά του κρόκου (14, 15). Η ανάλυση των χημικών ουσιών που προέρχονται από το σαφράν από διάφορες γεωγραφικές περιοχές δείχνουν ότι η ποσότητα των συστατικών εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από την επεξεργασία, την μέθοδο εκχύλισης και την ξήρανση.
Η βελτιστοποίηση της διαδικασίας παραλαβής των δραστικών συστατικών του σαφράν αφορά στη χρήση κατάλληλου μέσου εκχύλισης , στις συνθήκες θερμοκρασίας και φωτός και στο χρησιμοποιούμενο χρόνο ανάδευσης.
Με βάση τη βιβλιογραφία, παραθέτουμε παρακάτω τις κυριότερες υπάρχουσες μεθόδους παρασκευής εκχυλίσματος από τα στίγματα του φυτού του κρόκου:
•   15 g κονιορτοποιημένων στιγμάτων κρόκου τοποθετούνται σε συσκευή Soxhlet με 400 mL απιονισμένου νερού για 18 h. Εν συνεχεία, το εκχύλισμα συμπυκνώνεται υπό κενό με τη βοήθεια RotaVap στα 100 mL και ακολουθεί ξήρανση στους 35-40 °C (16).
•   Τα στίγματα του φυτού εκχυλίζονται με νερό ή αιθανόλη για 30 λεπτά. Δεν δίνονται περισσότερες πληροφορίες για τις ποσότητες που χρησιμοποιούνται ή για τον τρόπο απομάκρυνσης του διαλύτη (17). • 10 g τεμαχισμένων ξηρών στημόνων του φυτού εκχυλίζονται με 25 mL νερό και 25 mL αιθανόλη με συστοιχία Soxhlet. Ο διαλύτης απομακρύνεται με εξάτμιση υπό κενό. Συνεπώς παρασκευάζεται το υδατο-αλκοολικό εκχύλισμα σε αναλογία Η2θ-αιθανόλη 50-50 (18).
•   40 g κόνεως στημόνων κρόκου εμβαπτίζονται σε 1500 mL νερού για 72 h. Στη συνέχεια, το μίγμα φυγοκεντρείται (3000 rpm, 5 min) και το υπερκείμενο υγρό εξατμίζεται μέχρι ξηρού υπό κενό στους 40 °C (19). • Τα στίγματα του φυτού εκχυλίζονται σε απιονισμένο νερό για 3 ημέρες. Δε δίνονται περισσότερες πληροφορίες για τις ποσότητες που χρησιμοποιούνται. Στη συνέχεια το μίγμα διηθείται και ψύχεται με τη βοήθεια υγρού αζώτου και λυοφιλοποιείται (20).
·   3 g τεμαχισμένων στημόνων αναμιγνύονται με 50 mL 70 % αιθανόλη για 72 h σε θερμοκρασία δωματίου. Η διαδικασία επαναλαμβάνεται 3 φορές (τριπλή εκχύλιση). Τα διαλύματα αφήνονται προς εξάτμιση σε θερμοκρασία δωματίου και αποθηκεύονται στους -4 °C (21 ).
•    Σε 400 mL 70% υδατικού διαλύματος αιθανόλης προστίθενται 10 g στιγμάτων του Crocus sativus προς εκχύλιση για 14 h σε Soxhlet. Το εκχύλισμα συμπυκνώνεται στα 100 mL με τη βοήθεια RotaVap. Στη συνέχεια, συμπυκνώνεται περαιτέρω με εξάτμιση υπό κενό και αποθηκεύεται στους -20 °C (22).
•    50 g saffron αναμιγνύονται με διχλωρομεθάνιο για 12 h. Το υπόλειμμα μετά την ξήρανση εκχυλίζεται εκ νέου με 400 mL EtOH-H2O (20/80 ν/ν), εξατμίζεται υπό κενό στους 40 °C και ακολουθεί επανασύσταση με 10 mL νερό με σκοπό τελικά τη λυοφιλοποίηση του προϊόντος (23).
•   Το εκχύλισμα παρασκευάζεται με τη μέθοδο της ομογενοποίησης με τη βοήθεια ιγδίου. 8 g κόνεως στιγμάτων κρόκου ομογενοποιούνται με 300 mL απιονισμένου νερού για 72 h υπό συνεχή ανάδευση στους 4°C. Το υπερκείμενο υγρό φυγοκεντρείται και λυοφιλοποιείται για 24 h (24).
•   1 g στημόνων του φυτού εκχυλίζονται με 20 mL νερό ή 85 % αιθανόλη για 3 h μακριά από φως και στη συνέχεια το εκχύλισμα διηθείται και συμπυκνώνεται υπό κενό με τη βοήθεια RotaVap στους 40 °C (φύλαξη στους 4 °C) (25).
·    Η GR 20110100113 αναφέρεται σε υδατοαλκοολικά και υδατικά εκχυλίσματα
•   Η CN 103550433Α αναφέρεται σε υδατικά εκχυλίσματα σε καθαρό νερό ψύξη και συμπύκνωση του με αντίστροφη ώσμωση .
•   Η US6458399 Β1 αναφέρεται μέθοδο εκχύλισης του κρόκου σε υδατοαλκοολικά διάλυμα.
•   Η CN 1569201 Α αναφέρεται σε λυοφιλοποιημένη σκόνη από κόκκινη ρίζα παιωνίας και κάρδαμου για τη θεραπεία καρδιαγγειακών και εγκεφαλοαγγειακών νόσων και τη μέθοδο παρασκευής τους.
Γνωρίζοντας την υψηλή περιεκτικότητα του ελληνικού κρόκου σε κρόκινη και την μεγάλη υδατική της διαλυτότητα καθώς και την ευαισθησία ως προς τη θερμοκρασία και το φώς σκεφτήκαμε ότι θα ήταν ενδιαφέρον να μπορέσουμε να παραλάβουμε ποσοτικά και ποιοτικά την μέγιστη ποσότητα αυτής χωρίς να υδρολυθεί ή και να απηκοδομηθεί κατά την διάρκεια της εκχύλισης χρησιμοποιώντας μόνο νερό ως διαλύτη εκχύλισης. Η διαδικασία της εκχύλισης γίνεται σε θερμοκρασία ψυγείου (4-8 °C) για μεγαλύτερη σταθερότητα του εκχυλίσματος αυξάνοντας το χρόνο εκχύλισης στις 72h
Το αποτέλεσμα μας εξέπληξε παρέχοντας καθαρά υδατικά διαλύματα με μεγάλα ποσοστά σε κρόκινη μεγαλύτερα από 25 % βάρος προς βάρος και ταυτόχρονα πολύ σταθερά.
Με στόχο να μπορέσουμε να παραλάβουμε το εκχύλισμα αυτό σε στερεή μορφή, ως δεύτερο βήμα προχωρήσαμε σε ταχεία υψηλή κατάψυξη του συγκεκριμένου υδατικού διαλύματος και σε συνέχεια σε λυοφιλοποίηση του με σκοπό να μελετηθεί η σταθερότητα του και να διερευνηθεί η δυνατότητα μορφοποίησης σε από του στόματος χορηγούμενο σκευάσματα.
Η λυοφιλοποίηση ως μέθοδος τελικής μορφοποίησης του προϊόντος έχει χρησιμοποιηθεί μόνο από τον Bathaie και τους συνεργάτες του (20, 2013) χωρίς όμως να γίνεται σαφής περιγραφή της μεθόδου παρασκευής του εκχυλίσματος και λυόφιλου προϊόντος.
Τυπικά, σε μία προτιμώμενη ενσωμάτωση, η μέθοδος που χρησιμοποιείται για την παρασκευή του εκχυλίσματος περιλαμβάνει την εμβάπτιση 1 g στημόνων σε 37.5 mL νερού για 3 ημέρες σε χαμηλή θερμοκρασία (4-8 °C). Το παραλαμβανόμενο υδατικό εκχύλισμα ψύχεται άμεσα στους -70 °C και λυοφιλοποιείται. Με βάση την ποσοτικοποίηση προκύπτει ότι η περιεκτικότητα του λυόφιλου προϊόντος σε κρόκινη κυμαίνεται μεταξύ 25-30% βάρος προς βάρος.
Το λαμβανόμενο με την παρούσα μέθοδο υδατοδιαλυτό λυόφιλο προϊόν παραμένει σταθερό ως προς την περιεκτικότητά του σε κρόκινη μετά την ανασύσταση με ενέσιμο ύδωρ για τουλάχιστον 5 ημέρες σε θερμοκρασία περιβάλλοντος. Παράλληλα, το λυόφιλο προϊόν παραμένει σταθερό ως προς την περιεκτικότητά του σε κρόκινη όταν φυλάσσεται σε θερμοκρασία δωματίου για τουλάχιστον 6 μήνες ενώ όταν διατηρείται σε συνθήκες 4-8 °C ο χρόνος παρατείνεται σε τουλάχιστον 12 μήνες (η μελέτη σταθερότητας είναι σε εξέλιξη).
Η παρούσα εφεύρεση παρέχει συνθέσεις που προέρχεται από το υδατικό εκχύλισμα του φυτικού υλικού που περιέχει κρόκινη ή και παράγωγα αυτής. Γενικά, οι συνθέσεις έχουν ένα αυξημένο περιεχόμενο σε κρόκινη περισσότερο από 25% βάρος κατά βάρος.
Επίδραση στην αθηρωμάτωση και την ισχαιμία
   Η μεταφορά και προσκόλληση ενδοθηλιακών κυττάρων είναι ένα από τα αρχικά στάδια της παθογένεσης της αθηροσκλήρωσης. Η κροκετίνη (ο βασικός μεταβολίτης της κρόκινης) έχει βρεθεί ότι αναστέλλει την έκφραση των ενδοθηλιακών κυττάρων και μειώνει σε σημαντικό βαθμό το ρυθμό προσκόλλησης των λευκοκυττάρων (26). Η κρόκινη επίσης μειώνει την εναπόθεση εστέρων της χοληστερόλης στα μακροφάγα κύτταρα καθώς και την πρόσληψη της οξειδωμένης LDL. Κατά συνέπεια, η κρόκινη μπορεί να καθυστερήσει το σχηματισμό κενοτοπίων που αποτελούν το πρωταρχικό στάδιο στην εξέλιξη της αθηρωμάτωσης. Ένας ακόμη μηχανισμός αντιαθηρωματικής δράσης της κρόκινης και της κροκετίνης είναι η ικανότητά τους να αυξάνουν τη διάχυση του οξυγόνου, γεγονός που περιορίζει την αρτηριακή βλάβη (27). Στις συγκεκριμένες μελέτες όμως η κρόκινη που χρησιμοποιήθηκε προερχόταν από το φυτό Gardenia jasminoides Ellis (κν. Γ αρδένια) μετά από απομόνωση και όχι από το φυτό Crocus sativus L.
   Οι δικές μας μελέτες σε πειραματικό ζωικό πρότυπο που αφορά διαγονιδιακούς μύες με ομόζυγη έλλειψη της απολιποπρωτεΐνης Ε (C57BI/6J knockout ApoE mice) με σκοπό την αξιολόγηση της έκτασης και σύστασης της αθηρωματικής πλάκας δεν έχουν επαναληφθεί με βάση την εκτενή αναζήτηση βιβλιογραφίας που πραγματοποιήθηκε. Το συγκεκριμένο ζωικό πρότυπο έχει πολύ καλή συσχέτιση σχηματισμού αθηρωματικής πλάκας σε σχέση με τον άνθρωπο και η σύστασή της παρουσιάζει αρκετά μεγάλες ομοιότητες. Παράλληλα, οι προαναφερθείσες μελέτες που έχουν πραγματοποιηθεί αφορούν στη χορήγηση μεμονωμένης ουσίας του κρόκου -όπως η κρόκινη ή η κροκετίνη- και όχι το σύνολο των ουσιών που περιέχονται στο εκχύλισμα, όπως συμβαίνει στα δικά μας πειράματα.
   Σύμφωνα με τα έως τώρα αποτελέσματα σχετικά με την αθηρωμάτωση παρατηρείται κατά τη χορήγηση 3 διαφορετικών δόσεων του εκχυλίσματος (30, 60 και 90 mg/kg βάρους σώματος) σε μύες, δοσοεξαρτώμενη σχέση αποτελέσματος. Συγκεκριμένα, μετά το πέρας της χορήγησης των 4 εβδομάδων, η μέση επιφάνεια των αθηρωματικών αλλοιώσεων στις ομάδες που έλαβαν εκχύλισμα κρόκου Κοζάνης έτεινε να είναι μικρότερη σε σχέση με την ομάδα ελέγχου που έλαβε από του στόματος (gavage) μόνο water for injection. Συγκεκριμένα, η έκταση της αθηρωματικής πλάκας στη δόση των 60 mg/kg σωματικού βάρους μετρήθηκε σε 25.44±6.63 % ενώ στην ομάδα που δεν έλαβε εκχύλισμα (control) η έκταση ήταν σαφώς μεγαλύτερη με ποσοστό 38.21±7.98 % με οριακά στατιστικά σημαντική διαφορά. Σε ό,τι αφορά στην συγκέντρωση κολλαγόνου και ελαστίνης, η περιεκτικότητα των αθηρωματικών πλακών των μυών που έλαβαν θεραπεία ήταν σημαντικά αυξημένη (33.54±6.89 % και 28.1 ±4.96 % αντίστοιχα) στη δόση των 60 mg/kg ενώ στα ζώα της ομάδας control τα αντίστοιχα ποσοστά ήταν 20.8±5.11 % και 16.1±5.54 %. Το γεγονός αυτό οδηγεί σε βελτιωμένη σταθερότητα και αυξημένη ελαστικότητα των αθηρωματικών πλακών και κατά συνέπεια σε μειωμένο κίνδυνο ρήξης. Τέλος, με βάση το τεστ ανοχής στη γλυκόζη που διεξήχθη στα ζώα, η συγκέντρωση της γλυκόζης και η ανοχή σε αυτή υπήρξε σημαντικά βελτιωμένη στις ομάδες του εκχυλίσματος σε σχέση με την ομάδα ελέγχου. Σε ό,τι αφορά στη μελέτη της επίδρασης του εκχυλίσματος στην ισχαιμία του μυοκαρδίου, οι έως τώρα δημοσιεύσεις αφορούν καταρχήν στην επαγωγή εμφράγματος του μυοκαρδίου σε μύες ή επίμυες με τη χορήγηση ισοπροτερενόλης μετά από θεραπεία με χορήγηση εκχυλίσματος κρόκου για μια εβδομάδα (28,29). Στη δική μας πειραματική διαδικασία, το έμφραγμα επάγεται με χειρουργική επέμβαση στο μυοκάρδιο μυός μετά από περίδεση του πρόσθιου κατιόντος του μυοκαρδίου για μισή ώρα. Ακολουθεί επαναιμάτωση του μυοκαρδίου για 2 ώρες. Η θεραπεία με εκχύλισμα κρόκου διήρκεσε 4 εβδομάδες με καθημερινή peros χορήγηση και σε δόση 60 mg/kg σωματικού βάρους. Μετά το τέλος της επαναιμάτωσης, αφαιρείται το μυοκάρδιο και πραγματοποιείται ειδική χρώση με σκοπό την εκτίμηση της περιοχής που ισχαίμησε και εν τέλει νεκρώθηκε μετά την όλη διαδικασία.
   Τα αποτελέσματά μας δείχνουν, με βάση τη στατιστική ανάλυση που έγινε στις φωτογραφίες που ελήφθησαν μετά από χρώση του μυοκαρδίου, ότι η έκταση της νεκρωμένης εμφραγματικής περιοχής στα ζώα που έλαβαν κρόκο ήταν το 17 % περίπου του ιστού ενώ στην ομάδα ελέγχου, έφτανε το 37 %.
ΠΑΡΑΔΕΙΓΜΑΤΑ
Τυπικά, σε μία προτιμώμενη ενσωμάτωση, η μέθοδος που χρησιμοποιείται για την παρασκευή του εκχυλίσματος περιλαμβάνει την εμβάπτιση 1 g στημόνων σε 30 mL νερού για 3 ημέρες σε χαμηλή θερμοκρασία (4-8 °C). Το παραλαμβανόμενο υδατικό εκχύλισμα ψύχεται άμεσα στους -70 °C και λυοφιλοποιείται. Με βάση την ποσοτικοποίηση προκύπτει ότι η περιεκτικότητα του λυόφιλου προϊόντος σε κρόκινη μεγαλύτερη από 25 % βάρος προς βάρος. .
Σύμφωνα με την εφεύρεση, η μέθοδος που χρησιμοποιείται για την παρασκευή του εκχυλίσματος περιλαμβάνει την εμβάπτιση 1 g στημόνων σε 40 mL νερού για 4 ημέρες σε χαμηλή θερμοκρασία (4-8 °C). Το παραλαμβανόμενο υδατικό εκχύλισμα ψύχεται άμεσα στους -70 °C και λυοφιλοποιείται. Με βάση την ποσοτικοποίηση προκύπτει ότι η περιεκτικότητα του λυόφιλου προϊόντος σε κρόκινη είναι μεγαλύτερη από 30% βάρος προς βάρος.
Σύμφωνα με την εφεύρεση, η μέθοδος που χρησιμοποιείται για την παρασκευή του εκχυλίσματος περιλαμβάνει την εμβάπτιση 1 g στημόνων σε 45 mL νερού για 4 ημέρες σε χαμηλή θερμοκρασία (4-8 °C). Το παραλαμβανόμενο υδατικό εκχύλισμα ψύχεται άμεσα στους -70 °C και λυοφιλοποιείται. Με βάση την ποσοτικοποίηση προκύπτει ότι η περιεκτικότητα του λυόφιλου προϊόντος σε κρόκινη είναι μεγαλύτερη από 32% βάρος προς βάρος.
Σε μία ιδιαίτερα προτιμώμενη ενσωμάτωση, η μέθοδος που χρησιμοποιείται για την παρασκευή του εκχυλίσματος περιλαμβάνει την εμβάπτιση 10 g στημόνων σε 375 mL νερού για 3 ημέρες σε χαμηλή θερμοκρασία (4-8 °C). Το παραλαμβανόμενο υδατικό εκχύλισμα ψύχεται άμεσα στους -70 °C και λυοφιλοποιείται. Με βάση την ποσοτικοποίηση προκύπτει ότι η περιεκτικότητα του λυόφιλου προϊόντος σε κρόκινη μεγαλύτερη από 28 % βάρος προς βάρος.
 Όλα τα παραπάνω είναι μερικά παραδείγματα μεθόδων που παράγουν σταθερά εκχυλίσματα.
ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ
1.  Kafi, Μ.; Koocheki, A.; Rashed, Μ. H.; Nassiri, M. (eds.) (2006), Saffron (Crocus sativus) Production and Processing.
2.  McGee, H. (2004), On Food and Cooking: The Science and Lore of the Kitchen, Scribner, ISBN 978-0-684-80001
3.   Rubio-Moraga, A.; Castillo-Lopez, R.; Gomez-Gomez, L.; Ahrazem, O. (2009), "Saffron is a Monomorphic Species as Revealed by RAPD, ISSR and Microsatellite Analyses", BMC Research Notes 2: 189,
4.  Katzer, G. (2010), "Saffron (Crocus sativus L.)", Gernot Katzer's Spice Pages, retrieved 1 December 2012.
5.   Abdullaev, F. I. (2002), "Cancer Chemopreventive and Tumoricidal Properties of Saffron (Crocus sativus L.)", Experimental Biology and Medicine 227 (1), PMID 11788779, retrieved 11 September 201 1 .
(6).    Xi L, Qian Z, Du P, Fu J. Pharmacokinetic properties of crocin (crocetindigentiobiose ester) following oral administration in rats. Phytomedicine 2007; 14:633-36.
(7)  Caballero-Ortega, H., Pereda-Miranda, R., Abdullaev, F.I., 2007. HPLC quantification of major active components from 11 different saffron (Crocus sativus L.) sources. Food Chem. 100, 1126-1131.
8.  Dadkhah MR, Ehtesham M, Fekrat H. Tehran: Shahr Ashoob Publication; 2003. Iranian saffron an unknown jewel; pp. 1-20.
9.  Post-harvest degradation of carotenoid glucose esters in saffron. Morimoto S, Umezaki Y, Shoyama Y, Saito H, Nishi K, Irino N
Planta Med. 1994 Oct; 60(5):438-40.
10.  Maryam Mashmoul , Azrina Azlan , Huzwah Khaza'ai , Barakatun Nisak Mohd Yusof and Sabariah Mohd Noor . Review. Saffron: A Natural Potent Antioxidant as a Promising Anti-Obesity Drug. Antioxidants 2013, 2, 293-308;
11.  Kamalipour, M.; Akhondzadeh, S. Cardiovascular effects of saffron: An evidence-based review. J. Tehran Univ. Heart Cent. 201 1 , 6, 59-61 .
12.  He, S.-Y.; Qian, Z.-Y.; Tang, F.-T.; Wen, N.; Xu, G.-L.; Sheng, L. Effect of crocin on experimental atherosclerosis in quails and its mechanisms. Life Sci. 2005, 77, 907-921.
13.   He, S.-Y.; Qian, Z.-Y.; Wen, N.; Tang, F.-T.; Xu, G.-L.; Zhou, C.-H. Influence of crocetin on experimental atherosclerosis in hyperlipidamic-diet quails. Eur. J. Pharmacol. 2007, 554, 191-195.
14.  Castellar, M.R., Montijano, H., Manjon, A., Iborra, J.L., 1993. Preparative highperformance liquid chromatographic purification of saffron secondary metabolites. J. Chromatogr. A 648, 187-190
15.  Hosseinzadeh, H., Shariaty, V.M., Sameni, A.K., Vahabzadeh, M., 2010. Acute and sub-acute toxicity of crocin, a constituent of Crocus sativus L. (saffron), in mice and rats. Pharmacologyonline 2, 943-951 .
16.   Samarghandian S, Azimi-Nezhad M, Samini F. Ameliorative effect of saffron aqueous extract on hyperglycemia, hyperlipidemia and oxidative stress on diabetic encephalopathy in streptozotocin induced experimental diabetes mellitus. Biomed Research International, 2014
17.   Wang Y, Han T, Zhu Y, Zheng CJ, Ming QL, Rahman K, Qin LP. Antidepressant properties of bioactive fractions from the extract of Crocus sativus L. J Nat Med. 64:24-30, 2010.
18.    Boskabady MH, Shafei MN, Shakiba A, Sang Sefidi H. Effect of aqueous-ethanol extract from Crocus sativus (Saffron) in Guinea-pig isolated heart. Phytother Res. 22: 330-334, 2008.
19.   Hosseinzadeh H, Ziaee T, Sadeghi A. The effect of saffron, Crocus sativus stigma, extract and its constituents, safranal and crocin on sexual behaviors in normal male rats. Phytomedicine, 15: 491-495, 2008.
20.    Bathaie SZ, Hamidreza M, Mohagheghi MA, Mikhtari-Dizaji M, Shahbazfar AA, Hasanzadeh H. Saffron aqueous extract inhibits the chemically-induced gastric cancer progression in the Wistar Albino rat. Iran J Basic Med Sci, 16: 27-38, 2013.
21.   Gholamnezhad Z, Koushyar H, Byrami G, Boskabady MH. The extract of Crocus sativus and its constituent safranal, affect serum levels of endothelin and total protein in sensitized Guinea pigs. Iran J Basic Med Sci, 16: 1022-1026, 2013.
22.   Vosooghi S, Mahmoudabady M, Neamati A, Aghababa H. Preventive effects of hydroalcoholic extract of saffron on hematological parameters of experimental asthmatic rats. AJP, 3: 279-287, 2013.
23.    Lautenschlager M, Lechtenberg M, Sendker J, Hensel A. Effective isolation protocol for secondary metabolites from saffron: semi-preparative scale preparation of crocin-1 and trans-crocetin. Fitoterapia, 92: 290-295, 2014.
24.    Imenshahidi M, Razavi BM, Faal A, Gholampoor A, Mousavi SM, Hosseinzadeh H. The effect of chronic administration of saffron (Crocus sativus) stigma aqueous extract on systolic blood pressure in rats. Jundishapur J Nat Pharm Prod, 8(4): 175-179, 2013.
25.   Alessandro AM, Mancini A, Lizzi AR, De Simone A, Marrocella CE, Gravina GL, Tatone C, Festuccia C. Crocus sativus stigma extract and its major constituent crocin possess significant antiproliferative properties against human prostate cancer. Nutrition and Cancer, 65(6): 930-942, 2013. 26. Min X, Qian Z, Chenghua Z, Juan L, Wenna L. Crocetin inhibits leukocyte adherence to vascular endothelial cells induced by AGEs. Journal of Ethnopharmacology. 107: 25-31, 2006.
27.    Zheng S et al. Suppression of vascular cell adhesion molecule-1 expression by crocetin contributes to attenuation of atherosclerosis in hypercholesterolemic rabbits. Biochem Pharmacol. 70 (8): 1192-1199, 2005.
28.  Joukar S, Najafipour H, Khaksari M, Sepehri G, Shahrokhi N, Dabiri S, Gholamhoseinian A, Hasanzadeh S. The effect of saffron consumption on biochemical and histopathological heart indices of rats with myocardial infarction. Cardiovasc Toxicol. 10:66-71, 2010.
29.   Mehdizadeh R, Parizadeh MR, Khooei AR, Mehri S, Hosseinzadeh H. Cardioprotective effect of saffron extract and safranal in isoproterenolinduced myocardial infarction in Wista 63, 2013
r rats. Iran J Basic Med Sci. 16: 56-

Claims (5)

Α Ξ Ι Ω Σ Ε Ι Σ
 1. Μία μέθοδος ψυχρής εκχύλισης στιγμάτων του Ελληνικού φυτού Crocus sativus L τα οποία μετά την συλλογή τους συνθλίβονται και με ψυχρή υδατική εκχύλιση σε θερμοκρασία από 4 έως 8 oC υπό κανονική πίεση, εκχυλίζονται για χρονικό διάστημα μεγαλύτερο των δύο ημερών.
Μετά την αφαίρεση του εκχυλίσματος από το τυχόν ίζημα του διαλύματος, το διήθημα καταψύχεται και λυοφιλοποιείτε.
2.   Μία μέθοδος ψυχρής εκχύλισης σύμφωνα με την αξίωση 1, όπου ο χρόνος εκχύλισης κυμαίνεται από δύο έως 4 ημέρες.
3.  Εκχύλισμα στιγμάτων του ελληνικού φυτού Crocus sativus L σύμφωνα με την αξίωση 1 που η τελική του αναλογία σε κρόκινη είναι μεγαλύτερη από 25 % βάρος προς βάρος.
4.  Εκχύλισμα στιγμάτων του ελληνικού φυτού Crocus sativus L σύμφωνα με τις παραπάνω αξιώσεις που η τελική αναλογία του εκχυλίσματος σε κρόκινη κυμαίνεται από 25 έως 30 % βάρος προς βάρος.
5.  Εκχύλισμα στιγμάτων του ελληνικού φυτού Crocus sativus L σύμφωνα με τις παραπάνω αξιώσεις που θα χρησιμοποιηθεί είτε από του στόματος είτε σε ενέσιμη μορφή για την πρόληψη της καρδιαγγειακής νόσου της αθηρωμάτωσης
GR20150100325A 2015-07-21 2015-07-21 Μεθοδος ψυχρης εκχυλισης και παραγωγης σταθερων στερεων υδατοδιαλυτων εκχυλισματων απο τα στιγματα του ελληνικου φυτου crocus saτivus l. και χρηση τους στη προληψη ή και αντιμετωπιση της αθηρωματωσης GR1008908B (el)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GR20150100325A GR1008908B (el) 2015-07-21 2015-07-21 Μεθοδος ψυχρης εκχυλισης και παραγωγης σταθερων στερεων υδατοδιαλυτων εκχυλισματων απο τα στιγματα του ελληνικου φυτου crocus saτivus l. και χρηση τους στη προληψη ή και αντιμετωπιση της αθηρωματωσης

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GR20150100325A GR1008908B (el) 2015-07-21 2015-07-21 Μεθοδος ψυχρης εκχυλισης και παραγωγης σταθερων στερεων υδατοδιαλυτων εκχυλισματων απο τα στιγματα του ελληνικου φυτου crocus saτivus l. και χρηση τους στη προληψη ή και αντιμετωπιση της αθηρωματωσης

Publications (1)

Publication Number Publication Date
GR1008908B true GR1008908B (el) 2016-12-19

Family

ID=58186308

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
GR20150100325A GR1008908B (el) 2015-07-21 2015-07-21 Μεθοδος ψυχρης εκχυλισης και παραγωγης σταθερων στερεων υδατοδιαλυτων εκχυλισματων απο τα στιγματα του ελληνικου φυτου crocus saτivus l. και χρηση τους στη προληψη ή και αντιμετωπιση της αθηρωματωσης

Country Status (1)

Country Link
GR (1) GR1008908B (el)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1106223A1 (en) * 1999-03-26 2001-06-13 Azafran Los Molinos de la Mancha, S.L. Process for obtaining an extract of saffron
US20040126467A1 (en) * 2002-12-19 2004-07-01 Council Of Scientific And Industrial Research Efficient method for the preparation of value added saffron pigment and flavour concentrate
FR2921797A1 (fr) * 2007-10-05 2009-04-10 Alexis Majid Lepers Procede de production d'une solution de safran (crocus sativus l.) standardisee en concentration et en pouvoir colorant.

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1106223A1 (en) * 1999-03-26 2001-06-13 Azafran Los Molinos de la Mancha, S.L. Process for obtaining an extract of saffron
US20040126467A1 (en) * 2002-12-19 2004-07-01 Council Of Scientific And Industrial Research Efficient method for the preparation of value added saffron pigment and flavour concentrate
FR2921797A1 (fr) * 2007-10-05 2009-04-10 Alexis Majid Lepers Procede de production d'une solution de safran (crocus sativus l.) standardisee en concentration et en pouvoir colorant.

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Mustapa et al. Extraction of phytocompounds from the medicinal plant Clinacanthus nutans Lindau by microwave-assisted extraction and supercritical carbon dioxide extraction
JP2009531331A (ja) 桂皮種を含む抽出物および方法
Rodrigues et al. Subcritical water extraction and microwave-assisted extraction applied for the recovery of bioactive components from Chaya (Cnidoscolus aconitifolius Mill.)
CA2837028C (en) Composition comprising cashew apple extract
Xia et al. Antioxidant activity of Chinese mei (Prunus mume) and its active phytochemicals
EP0810222B1 (fr) Procédé d'extraction de polyphénols catéchiques à partir de potentilles, extrait obtenu et son utilisation
US20140302180A1 (en) Composition comprising chicory extract
JP2015515457A (ja) デスモディウムから植物抽出物を製造する方法およびその抽出物
Herrera-Balandrano et al. Effect of in vitro gastro-intestinal digestion on the phenolic composition and antioxidant capacity of Burdock roots at different harvest time
Angeloni et al. Mechanisms underlying neurodegenerative disorders and potential neuroprotective activity of agrifood by-products
AU2012266308A1 (en) Composition comprising cashew apple extract
Medina et al. Valorization strategy of banana passion fruit shell wastes: an innovative source of phytoprostanes and phenolic compounds and their potential use in pharmaceutical and cosmetic industries
Piatti et al. Comprehensive characterization of phytochemicals in edible sea fennel (Crithmum maritimum L., Apiaceae) grown in central Italy
Ben Jeddou et al. Profiling beneficial phytochemicals in a potato somatic hybrid for tuber peels processing: phenolic acids and anthocyanins composition
Saad et al. Antihyperlipidemic, antihyperglycemic, and liver function protection of olea europaea var. Meski stone and seed extracts: LC-ESI-HRMS-Based composition analysis
Rao et al. Quercetin 3-galactoside from Azadirachta indica
Kumar et al. Chemoprotective and antioxidant activities of methanolic extract of amaranthus spinosus leaves on paracetamol induced liver damage in rats
KR20160081814A (ko) 옥수수 추출물의 추출 방법 및 상기 옥수수 추출물을 포함하는 기능성 조성물
Mezhoudi et al. Moringa oleifera leaves: LC-ESI-MS analysis of phenolic compounds and antioxidant activities
Xie et al. Recovery of chlorogenic acid from haskap leaves (Lonicera caerulea) using aqueous two-phase extraction
GR1008908B (el) Μεθοδος ψυχρης εκχυλισης και παραγωγης σταθερων στερεων υδατοδιαλυτων εκχυλισματων απο τα στιγματα του ελληνικου φυτου crocus saτivus l. και χρηση τους στη προληψη ή και αντιμετωπιση της αθηρωματωσης
Yalcin et al. Determination of ellagic acid in the wastes of walnut, chestnut, and pomegranate grown in Turkey
Sut et al. Bioactive agents from Parkia biglobosa (Jacq.) R. Br. ex G. Don bark extracts for health promotion and nutraceutical uses
Lee et al. Effect of plant part, extraction method, and harvest time over antioxidant yield of rubus coreanus
Fondevila et al. Chemical analysis of Passiflora edulis fo. Flavicarpa leaves and its nutraceutical applications

Legal Events

Date Code Title Description
PG Patent granted

Effective date: 20170130