FR3101240A1 - Cornea treatment method - Google Patents
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Abstract
PROCEDE DE TRAITEMENT DE CORNEES La présente invention relève du domaine de l’ophtalmologie plus précisément des kératoplasties. La présente invention concerne un procédé de traitement de greffon de cornée, caractérisé en ce qu’il comprend au moins les étapes de : collecte d’une cornée, préparation d’un greffon de cornée, dessiccation du greffon de cornée sous vide en température positive.The present invention relates to the field of ophthalmology, more specifically keratoplasties. The present invention relates to a method for treating a cornea graft, characterized in that it comprises at least the steps of: collecting a cornea, preparing a cornea graft, drying the cornea graft under vacuum at positive temperature .
Description
La présente invention relève du domaine de l’ophtalmologie plus précisément des kératoplasties ou plus communément appelées greffes de cornées.The present invention falls within the field of ophthalmology, more specifically keratoplasty or more commonly known as corneal transplants.
La présente invention est relative à un procédé de traitement de cornées issues de donneurs dans un but de préservation ou de recyclage de cornées périmées dont la viabilité est jugée insuffisante.The present invention relates to a method for treating corneas obtained from donors for the purpose of preserving or recycling expired corneas whose viability is deemed insufficient.
Art antérieurPrior art
La greffe de cornée consiste à remplacer une cornée malade par un cornée saine d'un donneur décédé.A corneal transplant involves replacing a diseased cornea with a healthy cornea from a deceased donor.
Depuis des années, le prélèvement de cornées se pratique dans de nombreux pays européens. Actuellement, seule la collerette cornéo-sclérale est retirée chez les patients décédés à cœur arrêté ou dans le cadre d'un prélèvement multi-organes.For years, corneal removal has been practiced in many European countries. Currently, only the corneoscleral collar is removed in patients who died from heart failure or in the context of a multi-organ harvest.
La cornée, tissu transparent et avasculaire, est la partie la plus antérieure de la paroi du globe oculaire. Elle est convexe et asphérique, ce qui lui confère un pouvoir réfractif. Son épaisseur est de 0,5 mm au centre, elle augmente progressivement vers la périphérie pour atteindre 0,7mm. Ses dimensions correspondent horizontalement à 11-12mm et verticalement à 9-11 mm. Elle est composée de 6 couches : le film lacrymal, l'épithélium, la couche de Bowman, le stroma, la membrane de Descemet, et l'endothélium.The cornea, transparent and avascular tissue, is the most anterior part of the wall of the eyeball. It is convex and aspherical, which gives it a refractive power. Its thickness is 0.5 mm in the center, it gradually increases towards the periphery to reach 0.7 mm. Its dimensions correspond horizontally to 11-12mm and vertically to 9-11 mm. It is composed of 6 layers: tear film, epithelium, Bowman's layer, stroma, Descemet's membrane, and endothelium.
La cornée compte 3 fonctions principales : protéger les tissus intra-oculaires, transmettre la lumière par sa transparence, focaliser les images par son pouvoir dioptrique.The cornea has 3 main functions: protecting the intraocular tissues, transmitting light through its transparency, focusing images through its dioptric power.
Plusieurs pathologies peuvent entraîner le recours à une kératoplastie, notamment : les anomalies de développement de la cornée, les dystrophies de cornée héréditaires, les anomalies d’épaisseur comme le kératocône et le kératoglobe, les anomalies de surcharge comme le gérotoxon, les pathologies épithéliales, les pathologies endothéliales, les kératites qu'elles soient virales, bactériennes, toxiques..., les traumatismes, les tumeurs.Several pathologies can lead to the use of keratoplasty, in particular: abnormal development of the cornea, hereditary corneal dystrophies, thickness abnormalities such as keratoconus and keratoglobus, overload abnormalities such as gerotoxin, epithelial pathologies, endothelial pathologies, keratitis whether viral, bacterial, toxic..., trauma, tumours.
Il existe différents types de kératoplasties :
- la kératoplastie transfixiante (KT) qui permet le changement de toute l’épaisseur de la cornée
- la Photo Kératectomie Thérapeutique (PTK) qui permet de traiter une cornée au laser jusqu’à 100 µm ;
- la Kératoplastie Lamellaire Automatisée (ALTK) qui permet de traiter des lésions jusqu’à 250 µm pour la technique dite superficielle et des lésions de toute l’épaisseur de la cornée pour la technique dite profonde ;
- la Kératoplastie Lamellaire Antérieure Profonde (KLAP) qui permet de traiter des lésions jusqu’à la membrane de Descemet ;
- la Kératoplastie Lamellaire Postérieure (DSAEK et DMEK) et l’Endokératoplastie (EKP) qui permettent de traiter les pathologies endothéliales.
- penetrating keratoplasty (KT) which allows the change of the entire thickness of the cornea
- Therapeutic Photo Keratectomy (PTK) which can treat a cornea with laser up to 100 µm;
- Automated Lamellar Keratoplasty (ALTK) which can treat lesions of up to 250 µm for the so-called superficial technique and lesions of the entire thickness of the cornea for the so-called deep technique;
- Deep Anterior Lamellar Keratoplasty (DALK) which treats lesions up to Descemet's membrane;
- Posterior Lamellar Keratoplasty (DSAEK and DMEK) and Endokératoplasty (EKP) which treat endothelial pathologies.
La législation impose comme à toutes les activités de transplantation d'organes et de tissus, un cadre précis dont les principaux objectifs sont le respect des personnes décédées, la transparence de l'activité et la sécurité sanitaire. Les dispositions actuelles sont issues essentiellement de la loi n094-654 du 29 juillet 1994 dite loi Bioéthique relative aux dons et à l'utilisation des éléments et produits du corps humain, à l'assistance médicale à la procréation et au diagnostic prénatal, de ses décrets d'application et arrêtés.The legislation imposes, as with all organ and tissue transplantation activities, a precise framework whose main objectives are respect for the deceased, transparency of the activity and health safety. The current provisions are essentially derived from Law No. 94-654 of July 29, 1994, known as the Bioethics Law, relating to donations and the use of elements and products of the human body, medically assisted procreation and prenatal diagnosis, its implementing decrees and orders.
Il existe 2 moyens de conservation des greffons de cornées :
- La conservation hypothermique à +4°C permet de conserver la cornée pendant une semaine. Cette conservation est surtout utilisée aux Etats Unis.
- L’organo-culture utilisée en Europe permet une conservation à +31°C pendant une durée plus longue d'environ 5 semaines. Cette culture permet une grande sécurité bactériologique des greffons, puisque ceux-ci sont traités pendant deux semaines et qu'à l'issue de ce délai on élimine les greffons porteurs de germes résistants.
- Hypothermic storage at +4°C allows the cornea to be preserved for one week. This conservation is mainly used in the United States.
- The organo-culture used in Europe allows storage at +31°C for a longer period of approximately 5 weeks. This culture allows great bacteriological safety of the grafts, since they are treated for two weeks and at the end of this period, the grafts carrying resistant germs are eliminated.
Du fait des procédures très strictes de prélèvement et de conservation, seulement 60% des cornées prélevées sont greffées.Due to the very strict collection and storage procedures, only 60% of the corneas removed are transplanted.
Le déficit de donneurs et le prix élevé des cornées importées implique de trouver des procédés de conservation des cornées permettant de prolonger leur durée de vie pour une utilisation en kératoplastie.The lack of donors and the high price of imported corneas means finding corneal preservation processes that can extend their lifespan for use in keratoplasty.
Une technique de conservation courante est la lyophilisation. L’utilisation de cornées lyophilisées destinées à la kératoplastie est bien connue de l’art antérieur.A common preservation technique is freeze-drying. The use of freeze-dried corneas intended for keratoplasty is well known from the prior art.
Par exemple, la publication de Farias R et al. « Deep anterior lamellar transplant using lyophilized and Optisol corneas in patients with keratoconus », divulgue l’utilisation de cornées lyophilisées pour des kératoplasties lamélaires antérieures profondes.For example, the publication by Farias R et al. " Deep anterior lamellar transplant using lyophilized and Optisol corneas in patients with keratoconus ", discloses the use of freeze-dried corneas for deep anterior lamellar keratoplasties.
La publication de Lee et al. 2009, « The effect of lyophilization on graft acceptance in experimental xenotransplantation using porcine cornea », divulgue les effets antigéniques moindres d’une cornée porcine lyophilisée en comparaison à une cornée porcine fraiche.The publication by Lee et al. 2009, "The effect of lyophilization on graft acceptance in experimental xenotransplantation using porcine cornea", discloses the lesser antigenic effects of freeze-dried porcine cornea compared to fresh porcine cornea.
Cette technique possède néanmoins l’inconvénient d’entrainer la formation de cristaux lors de la phase de congélation même en présence d’une faible quantité d’eau, cristaux qui vont dégrader les micro-fibrilles et entrainer une désorganisation des fibres de collagène. La cornée devient alors blanche et le stroma est désorganisé.This technique nevertheless has the disadvantage of causing the formation of crystals during the freezing phase, even in the presence of a small quantity of water, crystals which will degrade the micro-fibrils and lead to disorganization of the collagen fibers. The cornea then becomes white and the stroma is disorganized.
Cette technique ne permet également pas de contrôler la qualité de la transparence du produit par l’observation.This technique also does not make it possible to control the quality of the transparency of the product by observation.
Le document WO2014089548 divulgue un procédé de préparation d’un tissu biologique pouvant être une cornée. Le procédé comprend une étape de déshydratation du tissu qui peut être réalisée par séchage sous vide.Document WO2014089548 discloses a process for preparing a biological tissue which may be a cornea. The method includes a step of dehydrating the tissue which can be carried out by vacuum drying.
Le procédé de traitement de cornées mis au point par la demanderesse se démarque des de l’art antérieur en ce qu’il comprend une étape de dessiccation de la cornée sous vide à température positive par augmentation progressive de la température.The method for treating corneas developed by the applicant differs from the prior art in that it includes a step of drying the cornea under vacuum at a positive temperature by gradually increasing the temperature.
Description détaillée de l’inventionDetailed description of the invention
La présente invention concerne un procédé de traitement de greffon de cornée, caractérisé en ce qu’il comprend au moins les étapes de :
- collecte d’une cornée,
- préparation d’un greffon de cornée,
- dessiccation du greffon de cornée sous vide à température positive.
- collection of a cornea,
- preparation of a corneal graft,
- desiccation of the corneal graft under vacuum at positive temperature.
Par « greffon de cornée » on entend : la cornée complète issue d’un donneur c’est-à-dire possédant ses 5 couches principales que sont l'épithélium, la couche de Bowman, le stroma, la membrane de Descemet, et l'endothélium ou une cornée dite partielle possédant au minimum aumoins l’une de ses 5 couches comme par exemple un stroma seul ou un stroma avec la membrane de Descemet. Le greffon de cornée peut être, partiellement cellularisé ou decellularisé.By "corneal graft" we mean: the complete cornea from a donor, that is to say having its 5 main layers which are the epithelium, the layer of Bowman, the stroma, the membrane of Descemet, and the endothelium or a so-called partial cornea having at least one of its 5 layers, such as a stroma alone or a stroma with Descemet's membrane. The corneal graft can be partially cellularized or decellularized.
Par « collecte de la cornée » on entend : prélèvement de la cornée directement sur le donneur, ou prélèvement d’une cornée qui a été stockée dans un milieu de conservation après prélèvement sur le donneur.By "cornea collection" we mean: collecting the cornea directly from the donor, or collecting a cornea that has been stored in a preservation medium after collecting it from the donor.
Par « dessication » on entend : élimination de l'eau contenue dans une substance, à l'aide de la chaleur, du vide ou d'une matière hygroscopique.By "desiccation" is meant: removal of water from a substance, using heat, vacuum or hygroscopic material.
Par « température positive » on entend : une température supérieure ou égale à 0°C. En fonction de la pression les plages de température utilisées sont les plages de température ne permettant pas la formation de cristaux d’eau."Positive temperature" means: a temperature greater than or equal to 0°C. Depending on the pressure, the temperature ranges used are the temperature ranges that do not allow the formation of water crystals.
Ainsi, les dessiccations sous vide en températures négatives, telle que la cryodessiccation plus communément appelée lyophilisation, sont exclues.Thus, vacuum desiccations at negative temperatures, such as cryodesiccation more commonly called freeze-drying, are excluded.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que le greffon de cornée est une cornée complète.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the corneal graft is a complete cornea.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que le greffon de cornée est un stroma cornéen non associé à la membrane de Descemet.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the corneal graft is a corneal stroma not associated with Descemet's membrane.
La membrane de Descemet retirée peut servir par la suite de support cellulaire de cellules endothéliales.The removed Descemet's membrane can subsequently be used as a cell support for endothelial cells.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que le greffon de cornée est un stroma cornéen associé à la membrane de Descemet.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the corneal graft is a corneal stroma associated with Descemet's membrane.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que le greffon de cornée est une cornée decellularisée.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the corneal graft is a decellularized cornea.
Par « cornée decellularisée » on entend : cornée dans laquelle toutes les cellules et composés cellulaires ont été retirés par un procédé chimique, biologique ou physique, laissant ainsi une matrice biologique de protéines de la matrice extracellulaire native.By "decellularized cornea" is meant: cornea in which all cells and cellular compounds have been removed by a chemical, biological or physical process, thereby leaving a biological matrix of native extracellular matrix proteins.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que la dessiccation de la cornée sous vide en température positive est réalisée par montée progressive de la température à partir de 0°C.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the desiccation of the cornea under vacuum at a positive temperature is carried out by gradually increasing the temperature from 0°C.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que la montée progressive de la température s’effectue à partir de 2°C.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the gradual rise in temperature takes place from 2°C.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que la montée progressive de la température s’effectue à partir de 4°C.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the gradual rise in temperature takes place from 4°C.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que la montée progressive de la température s’effectue à partir de 5°C.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the gradual rise in temperature takes place from 5°C.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que la montée progressive de la température s’effectue jusqu’à 25°C.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the gradual rise in temperature takes place up to 25°C.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que la montée progressive de la température s’effectue jusqu’à 30°C.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the gradual rise in temperature takes place up to 30°C.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que la montée progressive de la température s’effectue jusqu’à 35°C.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the gradual rise in temperature takes place up to 35°C.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que la montée progressive de la température s’effectue entre 0°C et 25°C.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the gradual rise in temperature takes place between 0°C and 25°C.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que la montée progressive de la température s’effectue entre 0°C et 30°C.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the gradual rise in temperature takes place between 0°C and 30°C.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que la montée progressive de la température s’effectue entre 0°C et 35°C.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the gradual rise in temperature takes place between 0°C and 35°C.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que la montée progressive de la température s’effectue par paliers de 5°C.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the gradual rise in temperature takes place in steps of 5°C.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que la montée progressive de la température s’effectue par paliers de 10°C.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the gradual rise in temperature takes place in steps of 10°C.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que la dessication sous vide est réalisée sous des pressions comprises entre 900 et 50 microbars.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the vacuum drying is carried out under pressures of between 900 and 50 microbars.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que la dessication sous vide est réalisée sous des pressions comprises entre 600 et 100 microbars.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the vacuum drying is carried out under pressures of between 600 and 100 microbars.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce qu’il comprend une étape de stérilisation par irradiation.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that it comprises a step of sterilization by irradiation.
Par « stérilisation » on entend : méthode permettant de détruire divers micro-organismes (bactéries, virus, champignons, parasites) présents sur un support matériel.By "sterilization" we mean: a method of destroying various microorganisms (bacteria, viruses, fungi, parasites) present on a material medium.
Le greffon de cornée stérilisé peut servir de matrice de culture cellulaire et/ou de produit fini.The sterilized corneal graft can serve as a cell culture matrix and/or finished product.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que la stérilisation par irradiation est choisie dans le groupe constitué de l’irradiation par rayonnement beta, l’irradiation par rayonnement gamma, l’irradiation par rayons X, l’irradiation par faisceau d’électrons, et de leurs combinaisons.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the sterilization by irradiation is chosen from the group consisting of irradiation by beta radiation, irradiation by gamma radiation, irradiation by X-rays, electron beam irradiation, and combinations thereof.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce qu’il comprend une étape de réhydratation du greffon de cornée.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that it comprises a step of rehydrating the corneal graft.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que la cornée ou le greffon de cornée est issu(e) d’organoculture.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the cornea or the corneal graft is derived from organoculture.
Par « organoculture » on entend : milieu nutritif de conservation dans lequel les cellules cornéennes sont surveillées et testées avant la greffe.By “organoculture” is meant: nutrient preservation medium in which the corneal cells are monitored and tested before the transplant.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce qu’il comprend une étape de traitement de déturgescence de la cornée ou du greffon de cornée préalablement à l’étape de dessication.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that it comprises a step of deturgescence treatment of the cornea or of the corneal graft prior to the desiccation step.
Par « déturgescense de la cornée » on entend : mécanisme qui déséquilibre le gradient osmotique en faveur d’une exportation d’eau du stroma.Corneal deturgesis means a mechanism that unbalances the osmotic gradient in favor of exporting water from the stroma.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que le traitement de déturgescence de la cornée ou du greffon de cornée est réalisé par l’utilisation d’une solution comprenant un disaccharide.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the deturgescence treatment of the cornea or of the corneal graft is carried out by the use of a solution comprising a disaccharide.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que le traitement de déturgescence de la cornée ou du greffon de cornée est réalisé par l’utilisation d’une solution comprenant un disaccharide choisi dans le groupe constitué du saccharose, du tréhalose, et de leurs mélanges.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the deturgescence treatment of the cornea or of the corneal graft is carried out by the use of a solution comprising a disaccharide chosen from the group consisting of sucrose, trehalose, and mixtures thereof.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que le traitement de déturgescence de la cornée ou du greffon de cornée est réalisé par l’utilisation d’une solution de saccharose.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the deturgescence treatment of the cornea or of the corneal graft is carried out by the use of a sucrose solution.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que le traitement de déturgescence de la cornée ou du greffon de cornée par utilisation d’une solution de saccharose est réalisée par diminution progressive du taux de saccharose.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the deturgescence treatment of the cornea or of the corneal graft by using a sucrose solution is carried out by progressive reduction of the sucrose level.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que le traitement de déturgescence de la cornée ou du greffon de cornée est réalisé par utilisation d’une solution de saccharose à 20%.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the deturgescence treatment of the cornea or the corneal graft is carried out by using a 20% sucrose solution.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que le traitement de déturgescence de la cornée ou du greffon de cornée est réalisé par utilisation d’une solution de saccharose à 10%.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the deturgescence treatment of the cornea or the corneal graft is carried out by using a 10% sucrose solution.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce qu’il comprend une étape de rinçage de la cornée ou du greffon de cornée.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that it comprises a step of rinsing the cornea or the corneal graft.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que l’étape de rinçage de la cornée ou du greffon de cornée est réalisée avec de l’eau pour préparation injectable.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the step of rinsing the cornea or the corneal graft is carried out with water for injection.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que la cornée ou le greffon de cornée est issu(e) d’une conservation hypothermique.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the cornea or the corneal graft is obtained from hypothermic preservation.
Par « conservation hypothermique » on entend : conservation par le froid où la température avoisine les 4°C.By "hypothermic storage" we mean: cold storage where the temperature is around 4°C.
Dans un mode de réalisation, le procédé selon l’invention est caractérisé en ce que la cornée ou le greffon de cornée est une cornée ou un greffon de cornée fraiche.In one embodiment, the method according to the invention is characterized in that the cornea or the corneal graft is a fresh cornea or corneal graft.
Par « cornée fraiche » on entend : cornée n’ayant pas subi de pocédé de conservation au préalable.By "fresh cornea" we mean: cornea that has not undergone any prior preservation procedure.
ExemplesExamples
Exemple 1 : Procédé de traitement deExample 1: Process for processing greffons degrafts of cornéescorneas
On dispose de cornées présentant une date de péremption dépassée ou une cellularité inférieure à 1500 cellules/ mm2 We have corneas with an expired date or a cellularity of less than 1500 cells/mm 2
Les cornées sont conservées dans un milieu de culture à 4°C.The corneas are stored in a culture medium at 4°C.
On procède à une déturgescence des cornées par le protocole suivant :Corneal deturgescence is performed using the following protocol:
– Mise dans des solutions de 15 mL de saccharose à 20% avec un tampon PPBS ou BSS pendant 15 minutes,– Placement in 15 mL solutions of 20% sucrose with PPBS or BSS buffer for 15 minutes,
– Bain de 1h dans une solution de saccharose 10%,– 1 hour bath in a 10% sucrose solution,
– Bain de 15 min dans une solution de saccharose 10% afin d’oter le restant de rouge de phénol si besoin– 15 min bath in a 10% sucrose solution to remove the remaining phenol red if necessary
– Etape de rincage sous forme de 4 bains de 15 minutes à agitation linéaire dans une solution de NaCl 0.9%.– Rinsing step in the form of 4 baths of 15 minutes with linear agitation in a 0.9% NaCl solution.
– 2 Etapes de rincage de 5 minutes à l’eau pour préparation injectable sous agitation vortex.– 2 rinsing stages of 5 minutes with water for injection under vortex stirring.
On procède ensuite à une dessication des cornées, celles-ci sont disposées sur un support en inox au sein d’un lyophilisateur et subissent une dessication secondaire uniquement. Le cycle est le suivant :The corneas are then desiccated, they are placed on a stainless steel support in a freeze-dryer and only undergo secondary desiccation. The cycle is as follows:
- Température de 4°C pendant 10 minutes,- Temperature of 4°C for 10 minutes,
- Mise sous vide à 600 microbar,- Vacuum packing at 600 microbar,
- Température de 10°C pendant 1 heure,- Temperature of 10°C for 1 hour,
- Température de 15°C pendant 30 minutes,- Temperature of 15°C for 30 minutes,
- Température de 20°C pendant 30 minutes,- Temperature of 20°C for 30 minutes,
- Mise sous vide à 100 microbar,- Vacuum packing at 100 microbar,
- Température de 25°C pendant 30 minutes,- Temperature of 25°C for 30 minutes,
- Temperature de 30°C pendant 1 heure,- Temperature of 30°C for 1 hour,
- Température de 35°C pendant 20 minutes,- Temperature of 35°C for 20 minutes,
- Température de 25 °C pendant 30 minutes.- Temperature of 25°C for 30 minutes.
A la fin de l’étape de dessiccation, les cornées présentent une transparence optimale qui peut être contrôlée ainsi qu’un stroma non modifié structurellement.At the end of the desiccation step, the corneas present an optimal transparency which can be controlled as well as a structurally unmodified stroma.
Claims (15)
- collecte d’une cornée,
- préparation d’un greffon de cornée,
- dessiccation du greffon de cornée sous vide en température positive.
- collection of a cornea,
- preparation of a corneal graft,
- desiccation of the corneal graft under vacuum at positive temperature.
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Non-Patent Citations (1)
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| ANONYMOUS: "Lyophilisation - Wikipédia", 10 September 2015 (2015-09-10), XP055302259, Retrieved from the Internet <URL:https://web.archive.org/web/20150910125419/https://fr.wikipedia.org/wiki/Lyophilisation> [retrieved on 20160913] * |
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