FR3089302A1 - METHOD FOR THE ANALYSIS OF FREE GLYCEROL IN A BIODIESEL SAMPLE BY ENZYMATICS - Google Patents
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Abstract
L’invention concerne un procédé d’analyse du glycérol libre (FG) dans un échantillon de biodiesel comprenant, notamment, des esters méthyliques d’acides gras (EMAG) et des acylglycérols (MAG, DAG, TAG), caractérisé en ce qu’on sépare les esters méthyliques (EMAG) et les acylglycérols (MAG, DAG, TAG) du glycérol libre (FG) par extraction en phase solide à partir de l’échantillon dans au moins une cartouche de silice (A), on élue, d’une part, au moins une phase (F1) contenant les esters méthyliques et/ou les acylglycérols et, d’autre part, une phase (F2) contenant le glycérol libre (FG) puis, on sèche ladite phase (F2), on la met en suspension dans le solvant éthanol puis on la mélange avec un kit enzymatique de façon à obtenir un composé coloré (CC) et, on analyse ledit composé coloré par spectrophotométrie en vue de mesurer la concentration en glycérol libre (FG) dans ledit échantillon. Figure 1The invention relates to a method for analyzing free glycerol (FG) in a biodiesel sample comprising, in particular, fatty acid methyl esters (EMAG) and acylglycerols (MAG, DAG, TAG), characterized in that the methyl esters (EMAG) and the acylglycerols (MAG, DAG, TAG) are separated from the free glycerol (FG) by extraction in solid phase from the sample in at least one silica cartridge (A), eluted, d on the one hand, at least one phase (F1) containing the methyl esters and / or the acylglycerols and, on the other hand, a phase (F2) containing the free glycerol (FG) and then drying the said phase (F2), it is suspended in the ethanol solvent then it is mixed with an enzymatic kit so as to obtain a colored compound (CC) and, said colored compound is analyzed by spectrophotometry in order to measure the concentration of free glycerol (FG) in said sample . Figure 1
Description
DescriptionDescription
Titre de l’invention : PROCEDE D’ANALYSE DU GLYCEROL LIBRE DANS UN ECHANTILLON DE BIODIESEL PAR VOIE ENZYMATIQUE [0001] L’invention concerne un procédé d’analyse du glycérol libre dans un échantillon de biodiesel par voie enzymatique.Title of the invention: PROCESS FOR ANALYZING FREE GLYCEROL IN A BIODIESEL SAMPLE BY ENZYMATICS The invention relates to a method for analyzing free glycerol in a biodiesel sample by enzymatic way.
[0002] Plus précisément, l’invention s’intéresse à un procédé d’analyse par voie photoenzymatique du glycérol libre présent dans le biodiesel comprenant une étape de séparation en phase solide et une étape de spectrophotométrie.More specifically, the invention relates to a method of photoenzymatic analysis of free glycerol present in biodiesel comprising a step of separation in solid phase and a step of spectrophotometry.
Technique antérieure [0003] Les biodiesels sont principalement des esters méthyliques d’acides gras (EMAG) obtenus au moyen d’une trans-estérification à partir de la biomasse.PRIOR ART Biodiesels are mainly fatty acid methyl esters (EMAG) obtained by means of trans-esterification from biomass.
[0004] Les esters dérivés du glycérol que sont les mono-glycérides ou mono-acylglycérol (MAG), les di-glycérides ou di-acylglycérols (DAG), les triglycérides ou triacylglycérols (TAG) et le glycérol libre (LG) sont les principaux contaminants du biodiesel.Esters derived from glycerol that are mono-glycerides or mono-acylglycerol (MAG), di-glycerides or di-acylglycerols (DAG), triglycerides or triacylglycerols (TAG) and free glycerol (LG) are the main contaminants of biodiesel.
[0005] La présence de ces dérivés du glycérol dans le biodiesel altère ses propriétés combustibles et, outre les nuisances environnementales, ces polluants peuvent provoquer des dysfonctionnements des moteurs à combustion dans lesquels ce biocarburant est utilisé.The presence of these glycerol derivatives in biodiesel alters its combustible properties and, in addition to environmental nuisances, these pollutants can cause malfunctions of combustion engines in which this biofuel is used.
[0006] Dans ce contexte, il est apparu nécessaire de développer des procédés d’analyse de la composition du biodiesel en vue de déterminer la présence et la quantité de ces différents composants et, en particulier, de celle du glycérol libre (LG).In this context, it appeared necessary to develop methods for analyzing the composition of biodiesel in order to determine the presence and the quantity of these various components and, in particular, that of free glycerol (LG).
[0007] Parmi les procédés connus, celui décrit dans le BR200504024A vise à déterminer la quantité de glycérol dans un échantillon de biocarburant par spectrophotométrie.Among the known methods, that described in BR200504024A aims to determine the amount of glycerol in a biofuel sample by spectrophotometry.
[0008] Toutefois, du fait que le glycérol est soluble dans l’eau à la différence du biodiesel, ce procédé utilise un agent tensioactif pour effectuer sa séparation sans extraction. Mais la dispersion obtenue présente alors des bulles qui perturbent la lecture d’absorbance lors de la détection spectrophotométrique.However, because glycerol is soluble in water unlike biodiesel, this process uses a surfactant to separate it without extraction. However, the dispersion obtained then has bubbles which disturb the absorbance reading during spectrophotometric detection.
[0009] Le WO2017119007A1 décrit un procédé de purification et de raffinage du glycérol utilisant, à titre principal, au moins un adsorbant d'impuretés hydrophobe et au moins un adsorbant d'impuretés polaire.WO2017119007A1 describes a process for purifying and refining glycerol using, primarily, at least one hydrophobic impurities adsorbent and at least one polar impurities adsorbent.
[0010] Par ailleurs, dans les domaines médical et clinique (sérum, plasma, ...) ainsi que dans l’industrie alimentaire (produits fermentés, tabac, ...), il existe des méthodes d’analyse des triglycérides et, notamment, du glycérol libre (PG) et du glycérol combiné ou total (TG), qui utilisent la voie enzymatique combinée à des méthodes de détection optique.Furthermore, in the medical and clinical fields (serum, plasma, etc.) as well as in the food industry (fermented products, tobacco, etc.), there are methods for analyzing triglycerides and, in particular, free glycerol (PG) and combined or total glycerol (TG), which use the enzymatic pathway combined with optical detection methods.
[0011] Dans le cadre de ces méthodes, les triglycérides sont transformés en glycérol et en acides gras. Puis, le glycérol est transformé en di-hydroxy-acétone phosphate par l’action d’enzymes telles que le glycérol-kinase (GK) et le glycérol-3-phosphate oxydase (G3PO) selon les réactions suivantes :In the context of these methods, the triglycerides are transformed into glycerol and fatty acids. Then, the glycerol is transformed into di-hydroxyacetone phosphate by the action of enzymes such as glycerol kinase (GK) and glycerol-3-phosphate oxidase (G3PO) according to the following reactions:
1. Glycérol + ATP (en présence de GK) > G-3-P + ADP (où ATP et ADP sont respectivement l’adénosine triphosphate et l’adénosine diphosphate)1. Glycerol + ATP (in the presence of GK)> G-3-P + ADP (where ATP and ADP are respectively adenosine triphosphate and adenosine diphosphate)
2. G-3-P + O2 (en présence de GPO) > DAP + H2O2 2. G-3-P + O 2 (in the presence of GPO)> DAP + H 2 O 2
3. H2O2+ 4-AAP + OA (en présence de peroxydase) > CC + H2O ; (où 4-AAP est le 4-aminoantipyrine et OA un accepteur d’oxygène tel que le 4-chlorophenol) [0012] Le produit CC obtenu est un composé coloré dont la concentration est mesurée par spectrophotométrie.3. H 2 O 2 + 4-AAP + OA (in the presence of peroxidase)> CC + H 2 O; (where 4-AAP is 4-aminoantipyrine and OA an oxygen acceptor such as 4-chlorophenol) The CC product obtained is a colored compound whose concentration is measured by spectrophotometry.
[0013] Cependant, les méthodes actuelles qui utilisent la détection par spectrophotométrie ne sont pas fiables pour l’analyse des biocarburants car les mesures optiques ne se révèlent pas suffisamment précises en raison d’interférences générées par d’autres produits et, en particulier, des acyle-glycérols qui sont présents au côté du glycérol libre.However, current methods which use detection by spectrophotometry are not reliable for the analysis of biofuels because optical measurements do not prove to be sufficiently precise due to interference generated by other products and, in particular, acyl glycerols which are present alongside free glycerol.
[0014] En outre, les méthodes connues sont généralement destinées à l’analyse de biocarburants dans lesquels les teneurs en polluants sont relativement élevées ce qui n’est pas le cas des biodiesels du commerce.In addition, the known methods are generally intended for the analysis of biofuels in which the pollutant contents are relatively high, which is not the case for commercial biodiesels.
Exposé de l’invention [0015] La présente invention a pour but de résoudre les problèmes techniques posés par l’art antérieur et, en particulier, les problèmes d’interférence avec les acylglycérols, en proposant un procédé d’analyse combinant, d’une part, une étape de séparation du glycérol libre par une étape d’extraction en phase solide avec, d’autre part, une étape ultérieure de détection et de mesure par voie photo-enzymatique.SUMMARY OF THE INVENTION The aim of the present invention is to solve the technical problems posed by the prior art and, in particular, the problems of interference with acylglycerols, by proposing a method of analysis combining, on the one hand, a step of separation of free glycerol by a step of extraction in solid phase with, on the other hand, a subsequent step of detection and measurement by photo-enzymatic route.
[0016] Ce but est atteint, selon l’invention, au moyen d’un procédé d’analyse d’un échantillon de biodiesel comprenant, notamment, des esters méthyliques d’acides gras (EMAG) et des acylglycérols (MAG, DAG, TAG) en vue de déterminer sa teneur en glycérol libre (LG), caractérisé en ce que ;This object is achieved, according to the invention, by means of a method of analysis of a biodiesel sample comprising, in particular, methyl esters of fatty acids (EMAG) and acylglycerols (MAG, DAG, TAG) in order to determine its free glycerol (LG) content, characterized in that;
- on sépare les esters méthyliques (EMAG) et les acylglycérols (MAG, DAG, TAG) du glycérol libre (LG) par extraction en phase solide à partir de l’échantillon dans au moins une cartouche de silice (A),- the methyl esters (EMAG) and the acylglycerols (MAG, DAG, TAG) are separated from the free glycerol (LG) by extraction in solid phase from the sample in at least one silica cartridge (A),
- on élue, d’une part, au moins une phase (El) contenant les esters méthyliques et/ou les acylglycérols et, d’autre part, une phase (E2) contenant le glycérol libre (LG) puis,- on the one hand, at least one phase (E1) containing the methyl esters and / or the acylglycerols is eluted and, on the other hand, a phase (E2) containing the free glycerol (LG) then,
- on sèche ladite phase (E2), on la met en suspension dans le solvant éthanol puis on la mélange avec un kit enzymatique de façon à obtenir un composé coloré (CC) et,the said phase (E2) is dried, it is suspended in the ethanol solvent and then it is mixed with an enzymatic kit so as to obtain a colored compound (CC) and,
- on analyse ledit composé coloré par spectrophotométrie en vue de mesurer la concentration en glycérol libre (FG) dans ledit échantillon.- Said colored compound is analyzed by spectrophotometry in order to measure the concentration of free glycerol (FG) in said sample.
[0017] Selon une première caractéristique avantageuse du procédé de l’invention, on détermine la concentration en glycérol libre (FG) dans l’échantillon en comparant ses valeurs d’absorbance avec des valeurs de référence obtenues pour des solutions standards de glycérol libre.According to a first advantageous characteristic of the process of the invention, the concentration of free glycerol (FG) in the sample is determined by comparing its absorbance values with reference values obtained for standard solutions of free glycerol.
[0018] Selon une autre caractéristique avantageuse du procédé, on élue la phase (Fl) avec des solvants choisis dans le groupe constitué des éthers de pétrole, des éthers éthyliques et de mélanges en solution de ces éthers.According to another advantageous characteristic of the process, the phase (F1) is eluted with solvents chosen from the group consisting of petroleum ethers, ethyl ethers and mixtures in solution of these ethers.
[0019] Selon encore une autre caractéristique, on élue la phase (F2) avec de l’éthanol de qualité CHLP (Chromatographie Liquide Haute Performance) et on contrôle la séparation des composants par spectroscopie dans une plage de longueurs d’ondes UVvisible autour de 205 nm.According to yet another characteristic, the phase (F2) is eluted with ethanol of CHLP quality (High Performance Liquid Chromatography) and the separation of the components is checked by spectroscopy in a range of UV-visible wavelengths around 205 nm.
[0020] Selon une première variante de mise en œuvre du procédé, on élimine les esters méthyliques (EMAG) et les tri-acylglycérols (TAG), les mono-acylglycérols (MAG) et les di-acylglycérols (DAG) par séparation, respectivement, dans trois phases (Fia, Flb, Fie) distinctes de la phase (F2) du glycérol libre (FG).According to a first implementation variant of the method, the methyl esters (EMAG) and the tri-acylglycerols (TAG), the mono-acylglycerols (MAG) and the di-acylglycerols (DAG) are removed by separation, respectively , in three phases (Fia, Flb, Fie) distinct from the phase (F2) of free glycerol (FG).
[0021] De préférence, pour un échantillon de 0,150mL de biodiesel, on élue la première phase (Fia) avec 15mL d’éther de pétrole, la seconde phase (Flb) avec 40mL d’un mélange comprenant 35% d’éther éthylique et de 65% d’éther de pétrole et la troisième phase (Fie) avec 40mL d’éther éthylique tandis que la phase (F2) de glycérol libre (FG) et éluée avec 12mL d’éthanol.Preferably, for a sample of 0.150mL of biodiesel, the first phase (Fia) is eluted with 15mL of petroleum ether, the second phase (Flb) with 40mL of a mixture comprising 35% of ethyl ether and 65% petroleum ether and the third phase (Fie) with 40mL of ethyl ether while the phase (F2) of free glycerol (FG) and eluted with 12mL of ethanol.
[0022] Selon une autre variante de mise en œuvre du procédé, on analyse le composé coloré (CC) par spectroscopie dans une plage de longueurs d’ondes UV-visible autour de 505 nm.According to another variant implementation of the method, the colored compound (CC) is analyzed by spectroscopy in a range of UV-visible wavelengths around 505 nm.
[0023] Selon une autre caractéristique, on conditionne ladite cartouche de silice avec de l’hexane.According to another characteristic, said silica cartridge is conditioned with hexane.
[0024] Selon encore une autre variante du procédé, un volume de 90μΕ de solution de phase (F2) est mélangé avec 3mL de kit enzymatique.According to yet another variant of the process, a volume of 90 μΕ of phase solution (F2) is mixed with 3 ml of enzymatic kit.
[0025] Un autre objet de l’invention est une utilisation du procédé d’analyse défini ci-dessus pour l’analyse des polluants d’un biodiesel issu d’une trans-estérification à taux de conversion élevé.Another object of the invention is a use of the analysis method defined above for the analysis of the pollutants of a biodiesel resulting from a transesterification at a high conversion rate.
[0026] Le procédé d’analyse de l’invention combine une étape préalable de séparation en phase solide permettant d’éliminer les triglycérides (MAG, DAG, TAG) du glycérol libre (FG) avec une étape subséquente de spectrophotométrie par voie photo-enzymatique en supprimant ainsi les risques d’interférence.The analysis method of the invention combines a prior step of solid phase separation to remove the triglycerides (MAG, DAG, TAG) from free glycerol (FG) with a subsequent step of photophotometry. enzymatic, thereby eliminating the risk of interference.
[0027] La méthode photo-enzymatique constitue une alternative avantageuse à la technique chromatographique en ce qu’elle est plus rapide, facile à mettre en œuvre, non toxique, moins onéreuse et présente une plus grande sensibilité.The photo-enzymatic method is an advantageous alternative to the chromatographic technique in that it is faster, easy to use, non-toxic, less expensive and has greater sensitivity.
[0028] Le procédé de l’invention peut ainsi être mis en œuvre de façon simple au moyen d’un kit enzymatique tel qu’un kit destiné à l’analyse du taux de triglycérides dans le sang, qui est rapidement et aisément disponible et dont le prix sur le marché est relativement bas.The method of the invention can thus be implemented in a simple manner using an enzymatic kit such as a kit intended for the analysis of the level of triglycerides in the blood, which is quickly and easily available and whose market price is relatively low.
[0029] Ainsi, le procédé de l’invention peut être utilisé aussi bien par les producteurs que les distributeurs de carburants et même par des clients particuliers.Thus, the method of the invention can be used both by producers and distributors of fuels and even by individual customers.
Brève description des dessins [0030] D’autres caractéristiques et avantages de l’invention ressortiront à la lecture de la description qui va suivre, en référence aux figures annexées et détaillées ci-après.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS Other characteristics and advantages of the invention will emerge on reading the description which follows, with reference to the appended and detailed figures below.
[0031] La [fig.l] est un schéma illustrant un mode de mise en œuvre particulier de l’étape de séparation en phase solide intervenant dans le procédé d’analyse de l’invention.[Fig.l] is a diagram illustrating a particular mode of implementation of the solid phase separation step involved in the analysis process of the invention.
[0032] La [fig.2] est un graphe représentant la courbe analytique obtenue avec des solutions standard de glycérol mélangée avec 3mL d’un kit enzymatique de type commercial.[Fig.2] is a graph representing the analytical curve obtained with standard solutions of glycerol mixed with 3mL of a commercial type enzyme kit.
[0033] La [fig.3] est un graphe représentant les courbes analytiques obtenues à différents moments avec deux kits enzymatiques distincts.[Fig.3] is a graph representing the analytical curves obtained at different times with two separate enzyme kits.
[0034] Pour plus de clarté, les éléments identiques ou similaires sont repérés par des signes de référence identiques sur l’ensemble des figures.For the sake of clarity, identical or similar elements are identified by identical reference signs in all of the figures.
Description des modes de réalisation [0035] Naturellement, les modes de mise en œuvre du procédé de l’invention illustrés par les figures présentées ci-dessus et décrites ci-après, ne sont donnés qu'à titre d’exemples non limitatifs. Il est explicitement prévu que l'on puisse proposer et combiner entre eux différents modes pour en proposer d'autres.Description of the embodiments [0035] Naturally, the modes of implementation of the method of the invention illustrated by the figures presented above and described below, are given only by way of nonlimiting examples. It is explicitly provided that we can propose and combine different modes to offer others.
[0036] Le procédé d’analyse selon l’invention est mis en œuvre à partir d’un échantillon de biodiesel en vue de déterminer sa teneur en glycérol libre (FG). Un tel biocarburant comprend, notamment, des esters méthyliques d’acides gras (EMAG) et des acylglycérols (MAG, DAG, TAG).The analysis method according to the invention is implemented from a biodiesel sample in order to determine its free glycerol (FG) content. Such a biofuel comprises, in particular, methyl esters of fatty acids (EMAG) and acylglycerols (MAG, DAG, TAG).
[0037] Ce procédé prévoit d’effectuer les étapes suivantes ;This method provides for performing the following steps;
- séparation des esters méthyliques (EMAG) et des acylglycérols (MAG, DAG, TAG) du glycérol libre (FG) par extraction en phase solide à partir de l’échantillon via un collecteur pourvu d’au moins une cartouche ou une colonne de silice A (par exemple, sous forme d’aminopropylsilane), conditionnée avec de l’hexane,separation of methyl esters (EMAG) and acylglycerols (MAG, DAG, TAG) from free glycerol (FG) by solid phase extraction from the sample via a collector provided with at least one cartridge or a silica column A (for example, in the form of aminopropylsilane), conditioned with hexane,
- élution, d’une part, d’au moins une phase (Fl) contenant les esters méthyliques (EMAG) et/ou les acylglycérols (MAG, DAG, TAG) et, d’autre part, d’une phase (F2) contenant le glycérol libre (FG) puis,- elution, on the one hand, of at least one phase (F1) containing the methyl esters (EMAG) and / or the acylglycerols (MAG, DAG, TAG) and, on the other hand, of a phase (F2) containing free glycerol (FG) then,
- séchage, par exemple à l’azote, de la phase (F2) extraite et mise en suspension dans le solvant éthanol puis mélange de la suspension avec un kit enzymatique de façon à obtenir un composé coloré (CC).- drying, for example with nitrogen, of the phase (F2) extracted and suspended in the ethanol solvent then mixing the suspension with an enzymatic kit so as to obtain a colored compound (CC).
Ce composé coloré est ensuite analysé par spectrophotométrie en vue de mesurer la concentration en glycérol libre (FG) dans l’échantillon de biodiesel.This colored compound is then analyzed by spectrophotometry in order to measure the concentration of free glycerol (FG) in the biodiesel sample.
[0038] Comme illustré par la figure 1, on sépare, de préférence, les esters méthyliques et les acylglycérols dans des phases distinctes par chromatographie haute performance en phase liquide non-aqueuse inversée.As illustrated in FIG. 1, the methyl esters and the acylglycerols are preferably separated in separate phases by high performance chromatography in inverted non-aqueous liquid phase.
[0039] Fe principe de cette étape de séparation se fonde sur la compétition entre 1’analyte et la phase mobile pour occuper la surface des sites actifs de la phase stationnaire. Toutefois, pour que les molécules soient adsorbées pendant l’étape de séparation, il est nécessaire que la phase mobile quitte la surface de ces sites. Si cette surface est polaire, par exemple, les groupes apolaires n’auront que très peu d’affinité et ne quitteront pas la phase mobile. Dans ce cas, les groupes polaires auront, au contraire, une forte affinité avec la phase stationnaire et, interagissant avec les liaisons hydrogène, seront alors retenus dans la cartouche A (ou la colonne). De cette manière, la séparation des composants du biodiesel s’opère grâce à la polarité des solvants utilisés, en relation avec la phase stationnaire de la cartouche de silice, et en éliminant d’abord les composants les plus apolaires (ou les moins polaires) pour libérer le glycérol libre (FG) qui est considéré comme le composant le plus polaire du biodiesel.The principle of this separation step is based on the competition between the analyte and the mobile phase to occupy the surface of the active sites of the stationary phase. However, for the molecules to be adsorbed during the separation step, it is necessary for the mobile phase to leave the surface of these sites. If this surface is polar, for example, the apolar groups will have very little affinity and will not leave the mobile phase. In this case, the polar groups will, on the contrary, have a strong affinity with the stationary phase and, interacting with the hydrogen bonds, will then be retained in the cartridge A (or the column). In this way, the separation of the biodiesel components takes place thanks to the polarity of the solvents used, in relation to the stationary phase of the silica cartridge, and by first eliminating the most non-polar (or least polar) components. to release free glycerol (FG) which is considered to be the most polar component of biodiesel.
[0040] Fa phase mobile est constituée, de préférence, d’un mélange de méthanol avec une solution d’isopropanol et de n-hexane (5 :4 en volume) circulant avec un débit de ImF/min.The mobile phase is preferably made up of a mixture of methanol with a solution of isopropanol and n-hexane (5: 4 by volume) circulating with a flow rate of ImF / min.
[0041] Ainsi, il est prévu que les esters méthyliques (EMAG) et les tri-acylglycérols (TAG) soient séparés conjointement dans une première phase (Fia) tandis que les monoacylglycérols (MAG) et les di-acylglycérols (DAG) soient séparés, respectivement, dans deux autres phases (Flb, Fie).Thus, it is expected that the methyl esters (EMAG) and the tri-acylglycerols (TAG) are separated jointly in a first phase (Fia) while the monoacylglycerols (MAG) and the di-acylglycerols (DAG) are separated , respectively, in two other phases (Flb, Fie).
[0042] Par exemple, pour un échantillon de 0,150mF de biodiesel, les éludons sont alors effectuées, pour la première phase (Fia) avec un solvant constitué de 15mF d’éther de pétrole, pour la seconde phase (Flb) avec un solvant constitué de 40mF d’un mélange comprenant 35% d’éther éthylique et de 65% d’éther de pétrole et pour la troisième phase (Fie) avec un solvant constitué de 40mF d’éther éthylique.For example, for a sample of 0.150mF of biodiesel, the eludons are then carried out, for the first phase (Fia) with a solvent consisting of 15mF of petroleum ether, for the second phase (Flb) with a solvent consisting of 40mF of a mixture comprising 35% ethyl ether and 65% petroleum ether and for the third phase (Fie) with a solvent consisting of 40mF ethyl ether.
[0043] Fa phase (F2) de glycérol libre (FG) est, quant à elle, éluée avec 12mF d’éthanol de qualité CHFP (Chromatographie Liquide Haute Performance) et la séparation des composants est contrôlée par spectroscopie dans une plage de longueurs d’ondes UVvisible autour de 205 nm.The free glycerol (FG) phase (F2) is, for its part, eluted with 12mF of ethanol of CHFP quality (High Performance Liquid Chromatography) and the separation of the components is checked by spectroscopy over a range of lengths d UV wave visible around 205 nm.
[0044] En outre, à chaque séquence de l’étape de séparation, on prélève 5mL de chaque solvant pour vérifier le taux de séparation des composants (EMAG, MAG, DAG et TAG) et s’assurer que l’étape ultérieure de spectrophotométrie ne portera que sur une fraction de glycérol libre (FG) non polluée. En particulier, la vérification de l’élimination complète des mono-acylglycérols (MAG) est réalisée au moyen du kit enzymatique à partir de la collecte des derniers 2mL du solvant éther éthylique.In addition, at each sequence of the separation step, 5mL of each solvent is taken to check the separation rate of the components (EMAG, MAG, DAG and TAG) and to ensure that the subsequent spectrophotometry step will only relate to an unpolluted fraction of free glycerol (FG). In particular, verification of the complete elimination of mono-acylglycerols (MAG) is carried out using the enzymatic kit from the collection of the last 2mL of the ethyl ether solvent.
[0045] Le graphe analytique pour la quantification du glycérol libre (FG) est tracé après addition de 90pL de solution de la phase (F2) de glycérol libre (FG) dans 3mL d’un kit enzymatique. Ce kit enzymatique est, par exemple, celui commercialisé par la société Interkit ®. Le mélange est agité pendant 2 secondes puis on le laisse reposer pendant 10 min afin que la réaction soit complète.The analytical graph for the quantification of free glycerol (FG) is drawn after addition of 90 μL of solution of the phase (F2) of free glycerol (FG) in 3 ml of an enzymatic kit. This enzymatic kit is, for example, that sold by the company Interkit ®. The mixture is stirred for 2 seconds and then allowed to stand for 10 min so that the reaction is complete.
[0046] Le mélange est ensuite introduit dans une cellule en quartz de 1cm3 qui est utilisée pour les mesures d’absorbance avec un spectrophotomètre dans une plage de longueurs d’onde UV-visible autour de 505 nm. La correspondance entre les mesures d’absorbance et la concentration en glycérol libre (FG) est obtenue par comparaison avec des courbes analytiques relatives à des solutions standards de glycérol, comme illustré par la figure 2. Les résultats des mesures d’absorbance sont de 0,005, en dessous de la limite de quantification de la méthode enzymatique et dans la plage d’erreur permise par l’équipement utilisé.The mixture is then introduced into a 1 cm 3 quartz cell which is used for absorbance measurements with a spectrophotometer in a range of UV-visible wavelengths around 505 nm. The correspondence between the absorbance measurements and the concentration of free glycerol (FG) is obtained by comparison with analytical curves relating to standard solutions of glycerol, as illustrated by FIG. 2. The results of the absorbance measurements are 0.005 , below the quantification limit of the enzymatic method and within the error range allowed by the equipment used.
[0047] A titre expérimental, trois échantillons de biodiesel ont été analysés. Les concentrations en glycérol libre (FG) dans ces échantillons ont été comparées avec les valeurs obtenues en référence par chromatographie et sont présentées dans la table 1 ci-dessous (les pourcentages étant en masse).On an experimental basis, three biodiesel samples were analyzed. The concentrations of free glycerol (FG) in these samples were compared with the values obtained by reference by chromatography and are presented in table 1 below (the percentages being by mass).
[Tableaux 1][Tables 1]
[0048] L’échantillon de biodiesel constitué de 50% d’origine animale (suif) et de 50% d’origine végétale (soja) présente un taux d’interférence optique permis par l’Agence Nationale du Pétrole (ANP) avec des teneurs en mono-acylglycérols (MAG) de 0,70% et de 0,25% de glycérol total (pourcentages en masse).The biodiesel sample consisting of 50% of animal origin (tallow) and 50% of plant origin (soy) has an optical interference rate allowed by the National Petroleum Agency (ANP) with mono-acylglycerol (MAG) contents of 0.70% and 0.25% of total glycerol (percentages by mass).
[0049] La courbe analytique de référence donnant la quantité de glycérol libre (FG) a été obtenue par addition de 90pL de huit solutions standards de glycérol libre (FG) dans 3mL d’un kit enzymatique. Ces huit solutions standards de glycérol libre comprennent respectivement ; 3.2971 x 10 5% - 6.5941 x 10 5% - 9.8912 x 10 5% - 1.3188 x 10 4% 1.6485 x 10 4% - 1.9782 x 10 4% - 2.3079 x 10 4% - 2.6377 x 10 4% (les pourcentages étant en masse) et résultent d’une dilution dans de l’éthanol à 99.9%. Toutes ces solutions ont été analysées trois fois. La figure 2 représente les courbes analytiques d’absorbance obtenus à partir de ces huit solutions standards de glycérol dans 3mL d’un kit enzymatique.The reference analytical curve giving the amount of free glycerol (FG) was obtained by adding 90 μL of eight standard solutions of free glycerol (FG) in 3 ml of an enzymatic kit. These eight standard solutions of free glycerol respectively include; 3.2971 x 10 5 % - 6.5941 x 10 5 % - 9.8912 x 10 5 % - 1.3188 x 10 4 % 1.6485 x 10 4 % - 1.9782 x 10 4 % - 2.3079 x 10 4 % - 2.6377 x 10 4 % (the percentages being by mass) and result from a dilution in 99.9% ethanol. All of these solutions were analyzed three times. FIG. 2 represents the analytical absorbance curves obtained from these eight standard solutions of glycerol in 3 ml of an enzymatic kit.
[0050] Un test de Cochran a été utilisé pour vérifier que les courbes obtenues sont homocédastiques, c’est-à-dire, que leur variance est uniforme, en tenant compte du nombre de mesures (ici 3 mesures) et du nombre de variantes de solutions standards (ici 8). La valeur calculée C = 0,282 est inférieure à la valeur donnée par les tables (0,516) ce qui montre que la variance est bien uniforme. Les limites de détection et de quantification déterminées par le critère de pente étaient respectivement de 9,08 x 10 6% et de 2,72 x 10 5% (les pourcentages étant donnés en masse).A Cochran test was used to verify that the curves obtained are homocedastic, that is to say, that their variance is uniform, taking into account the number of measurements (here 3 measurements) and the number of variants standard solutions (here 8). The calculated value C = 0.282 is lower than the value given by the tables (0.516) which shows that the variance is indeed uniform. The detection and quantification limits determined by the slope criterion were 9.08 x 10 6 % and 2.72 x 10 5 % respectively (the percentages being given by mass).
[0051] Cette valeur est inférieure à la valeur limite requise par les agences de régulation internationales de 0,25% (les pourcentages étant donnés en masse). La méthode était linéaire sur une large plage de travail, de 2,3550 x 105 à 2,6377 x 10 4% (les pourcentages étant donnés en masse). Les valeurs d'écart type relatives obtenues pour les concentrations de la courbe analytique de la figure 2 ne dépassaient pas 5%, une valeur acceptable pour cette méthodologie (RIBANI et al., Validaçâo em métodos cromatogrdficos e eletroforéticos Quimica Nova, 2004. 27, p. 771-780) montrant que la méthode présente une bonne répétabilité avec une fiabilité de 95%. La précision intermédiaire (Figure 3) de la méthode proposée a été vérifiée par analyse de variance (ANOVA). Le facteur F calculé par ANOVA (F = 0,28) était inférieur à la valeur tabulée de référence (2.19), ce qui montre qu'il n'y a pas de différence statistique (intervalle de confiance de 95%) entre les courbes. La valeur calculée étant inférieure à la valeur tabulée, les variances sont donc statistiquement les mêmes. La figure 3 confirme, via l’analyse de la variance (ANOVA), que les variances des différentes courbes analytiques sont statistiquement les mêmes. Dans ces conditions, il s’avère possible d’utiliser différents lots de kits enzymatiques, quel que soit le jour prévu pour l’analyse et le type d’opérateur, sans que cela modifie la concordance des résultats.This value is lower than the limit value required by international regulatory agencies by 0.25% (the percentages being given by mass). The method was linear over a wide working range, from 2.3550 x 10 5 to 2.6377 x 10 4 % (the percentages being given by mass). The relative standard deviation values obtained for the concentrations of the analytical curve in Figure 2 did not exceed 5%, an acceptable value for this methodology (RIBANI et al., Validaçâo em métodos cromatogrdficos e eletroforéticos Quimica Nova, 2004. 27, p. 771-780) showing that the method has good repeatability with 95% reliability. The intermediate precision (Figure 3) of the proposed method was verified by analysis of variance (ANOVA). The factor F calculated by ANOVA (F = 0.28) was lower than the reference tabulated value (2.19), which shows that there is no statistical difference (95% confidence interval) between the curves . Since the calculated value is less than the tabulated value, the variances are therefore statistically the same. Figure 3 confirms, via the analysis of variance (ANOVA), that the variances of the different analytical curves are statistically the same. Under these conditions, it turns out to be possible to use different batches of enzyme kits, whatever the day scheduled for the analysis and the type of operator, without this modifying the concordance of the results.
[0052] Un test-T (dit aussi test de Student) qui a été effectué pour comparer les résultats obtenus par spectrophotométrie avec les résultats obtenus par chromatographie gazeuse, montre que ces résultats ne diffèrent pas statistiquement, comme cela ressort de la table 2 ci-dessous.A T-test (also called Student's test) which was carried out to compare the results obtained by spectrophotometry with the results obtained by gas chromatography, shows that these results do not differ statistically, as can be seen from table 2 below. below.
[Tableaux!][Paintings!]
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113607672A (en) * | 2021-07-29 | 2021-11-05 | 陕西师范大学 | Method for separating components and measuring content of ester type diesel antiwear agent |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040137546A1 (en) * | 2002-12-24 | 2004-07-15 | Stepan Company | Method for determination of free and combined glycerin in biodiesel |
| BRPI0504024A (en) | 2005-08-17 | 2006-01-31 | Fertibom Tecnologia Ltda | Spectrophotometric quantification of glycerol in biodiesel |
| WO2017119007A1 (en) | 2016-01-07 | 2017-07-13 | Institute Of Chemical Technology | Process for purification and refining of glycerol |
| FR3077883A1 (en) * | 2018-02-12 | 2019-08-16 | Peugeot-Citroen Do Brasil Automoveis Ltda | METHOD FOR TOTAL GLYCEROL ANALYSIS OF A BIODIESEL SAMPLE BASED ON SPECTROPHOTOMETRY DETECTION |
-
2018
- 2018-11-29 FR FR1872032A patent/FR3089302A1/en not_active Withdrawn
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040137546A1 (en) * | 2002-12-24 | 2004-07-15 | Stepan Company | Method for determination of free and combined glycerin in biodiesel |
| BRPI0504024A (en) | 2005-08-17 | 2006-01-31 | Fertibom Tecnologia Ltda | Spectrophotometric quantification of glycerol in biodiesel |
| WO2017119007A1 (en) | 2016-01-07 | 2017-07-13 | Institute Of Chemical Technology | Process for purification and refining of glycerol |
| FR3077883A1 (en) * | 2018-02-12 | 2019-08-16 | Peugeot-Citroen Do Brasil Automoveis Ltda | METHOD FOR TOTAL GLYCEROL ANALYSIS OF A BIODIESEL SAMPLE BASED ON SPECTROPHOTOMETRY DETECTION |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| ELIANE D ELIA ET AL: "Determinação de glicerol livre e total em amostras de biodiesel por método enzimático com detecção colorimétrica", QUÍMICA NOVA, vol. 35, 6 December 2011 (2011-12-06), pages 601 - 607, XP055518570, Retrieved from the Internet <URL:http://quimicanova.sbq.org.br/imagebank/pdf/Vol35No3_601_27-NT11279.pdf> [retrieved on 20181024], DOI: 10.1590/S0100-40422012000300028 * |
| ERIN JO MERCER ET AL: "Determination of Free Glycerol in Biodiesel via Solid-Phase Extraction and Spectrophotometric Analysis", JOURNAL OF THE AMERICAN OIL CHEMISTS' SOCIETY (JAOCS), vol. 88, no. 5, 11 November 2010 (2010-11-11), DE, pages 655 - 659, XP055556524, ISSN: 0003-021X, DOI: 10.1007/s11746-010-1707-6 * |
| JOSEF BAILER ET AL: "Determination of saponifiable glycerol in "Bio-Diesel"", FRESENIUS' JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY, vol. 340, no. 3, 1 March 1991 (1991-03-01), DE, pages 186 - 186, XP055518544, ISSN: 0937-0633, DOI: 10.1007/BF00324480 * |
| RIBANI ET AL.: "Validaçâo em métodos cromatogrâficos e eletroforéticos", QUIMICA NOVA, vol. 27, 2004, pages 771 - 780 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113607672A (en) * | 2021-07-29 | 2021-11-05 | 陕西师范大学 | Method for separating components and measuring content of ester type diesel antiwear agent |
| CN113607672B (en) * | 2021-07-29 | 2024-05-24 | 陕西师范大学 | Method for separating and measuring content of components in ester type diesel antiwear agent |
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