FR3077136A1 - DEVICE FOR OBSERVING A CELL OR A SET OF LIVING CELLS - Google Patents
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Abstract
La présente invention se rapporte à un dispositif d'imagerie (100) pour l'observation du développement d'une cellule ou d'un ensemble de cellules vivantes tel que des embryons (80) comprenant un système d'éclairage (110), des moyens de déplacement relatif et deux systèmes d'imagerie : - un premier système d'imagerie (120) équipé d'une caméra grand champ (121) adaptée pour permettre d'identifier un ou plusieurs embryons (80) à observer ; et - un second système d'imagerie (130) comprenant une caméra petit champ (131) adaptée pour imager un embryon (80) éclairé et permettre d'observer son développement. L'invention porte également sur une boîte de Petri (10) adaptée pour fonctionner avec le dispositif d'imagerie (100) ainsi qu'un procédé d'observation du développement d'embryons par un tel dispositif (100) et un programme d'ordinateur pour la mise en œuvre du procédé.The present invention relates to an imaging device (100) for observing the development of a cell or a set of living cells such as embryos (80) comprising an illumination system (110), relative displacement means and two imaging systems: - a first imaging system (120) equipped with a wide-field camera (121) suitable for identifying one or more embryos (80) to be observed; and - a second imaging system (130) comprising a small field camera (131) suitable for imaging an illuminated embryo (80) and making it possible to observe its development. The invention also relates to a Petri dish (10) adapted to work with the imaging device (100) as well as a method of observing the development of embryos by such a device (100) and an examination program. computer for implementing the method.
Description
DISPOSITIF D’OBSERVATION D’UNE CELLULE OU D’UN ENSEMBLE DE CELLULES VIVANTESDEVICE FOR OBSERVING A CELL OR A SET OF LIVING CELLS
DESCRIPTIONDESCRIPTION
Domaine technique [01] La présente invention se rapporte à un dispositif d’imagerie pour l’observation d’une cellule ou d’un ensemble de cellules vivantes tel que le développement d’embryons dans le cadre d’une Fécondation In Vitro (FIV). [02] Plus précisément, l’invention concerne un dispositif d’imagerie pour l’observation d’une cellule ou d’un ensemble de cellules vivantes, une boîte de Pétri associée ainsi qu’un procédé et un produit programme d’ordinateur adaptés à cette observation.Technical Field [01] The present invention relates to an imaging device for observing a cell or a set of living cells such as the development of embryos in the context of In Vitro Fertilization (IVF) ). [02] More specifically, the invention relates to an imaging device for the observation of a cell or a set of living cells, an associated petri dish and a method and a suitable computer program product. to this observation.
Etat de la technique [03] Les dispositifs d’imagerie actuels pour l’observation d’une cellule ou d’un ensemble de cellules vivantes tel que des embryons sont en majorité des microscopes équipés d’objectifs de grossissement différents, d’un système d’observation direct monoculaire ou binoculaire et généralement d’un système d’observation déporté pour permettre la visualisation de la cellule ou de l’ensemble de cellules vivantes sur un écran vidéo.State of the art [03] Current imaging devices for observing a cell or a set of living cells such as embryos are mostly microscopes equipped with different magnification objectives, a system monocular or binocular direct observation and generally of a remote observation system to allow the visualization of the cell or of all living cells on a video screen.
[04] La cellule ou l’ensemble de cellules vivantes est placé sur un support puis il est observé à l’aide de différents objectifs permettant de zoomer / dézoomer et voir ainsi la cellule ou l’ensemble de cellules vivantes selon différents grossissement et donc dans le détail ou de manière globale.[04] The cell or set of living cells is placed on a support and then it is observed using different objectives making it possible to zoom in / out and thus see the cell or set of living cells at different magnifications and therefore in detail or as a whole.
[05] Ces dispositifs ne sont pas très précis dans la manipulation ni faciles d’utilisation. Il faut commencer par regarder la cellule ou l’ensemble de cellules vivantes avec un faible grossissement pour le localiser et le centrer dans le champ du microscope en le déplaçant manuellement puis changer d’objectif en utilisant des grossissements de plus en plus important pour regarder la cellule ou l’ensemble de cellules vivantes dans le détail.[05] These devices are not very precise in handling or easy to use. You have to start by looking at the cell or the set of living cells with a low magnification to locate it and center it in the field of the microscope by moving it manually then change the objective using increasingly important magnifications to look at the cell or set of living cells in detail.
[06] Dans le cadre particulier de la réalisation d’une Fécondations In Vitro (FIV), les embryons destinés à être implantés sont sélectionnés en fonction de leur qualité cellulaire, à savoir : leur nombre de cellules, leur régularité (tailles des cellules différentes ou non), et de leur fragmentation. Les embryons sélectionnés sont, en priorité, ceux dont la chronologie de la division cellulaire est respectée, avec des cellules bien régulières et sans fragmentation. Ces paramètres sont censés être un indicateur des meilleures chances de grossesse.[06] In the specific context of carrying out an In Vitro Fertilization (IVF), the embryos intended for implantation are selected according to their cell quality, namely: their number of cells, their regularity (different cell sizes or not), and their fragmentation. The embryos selected are, in priority, those whose chronology of cell division is respected, with very regular cells and without fragmentation. These parameters are believed to be an indicator of the best chance of pregnancy.
[07] Cette observation se fait en général hors des enceintes de culture embryonnaire adaptées pour reconstituer un environnement idéal, en température et en concentration de gaz, pour le bon développement des embryons. Le document US 2015/0278625 A1 décrit un tel mode d’observation hors incubateur. Or, il a été démontré que ce genre d’observations et surtout le changement brutal d’environnement pour les embryons joue un rôle potentiellement délétère sur le développement de ceux-ci.[07] This observation is generally made outside embryonic culture chambers adapted to reconstitute an ideal environment, in temperature and in gas concentration, for the good development of the embryos. Document US 2015/0278625 A1 describes such a mode of observation outside the incubator. However, it has been shown that these kinds of observations and especially the sudden change of environment for embryos plays a potentially harmful role on their development.
[08] Des dispositifs d’imagerie d’embryons ont donc été développés dans le cadre des techniques de Fécondations In Vitro (FIV) afin de permettre une observation in vitro du développement des embryons, après fécondation, dans ce type d’environnement idéal à leur développement.[08] Embryo imaging devices have therefore been developed in the context of In Vitro Fertilization (IVF) techniques in order to allow in vitro observation of embryo development, after fertilization, in this type of environment ideal for their development.
[09] Cette observation peut se poursuivre sur 2 à 5 jours en fonction des centres de FIV et permet de mieux sélectionner les embryons qui seront transférés dans les voies génitales de la patiente et donc d’améliorer les taux de succès de la FIV.[09] This observation can continue over 2 to 5 days depending on the IVF centers and makes it possible to better select the embryos which will be transferred into the patient's genital tract and therefore to improve the IVF success rates.
[10] Deux catégories de dispositifs d’observation existent. Soit le dispositif d’observation est directement intégré dans un système adapté pour reconstituer l’environnement idéal pour le bon développement des embryons, avec des chambres de culture individuelles comprises recevant des boîtes spécifiques à chaque dispositif. Soit le dispositif d’observation est individuel et à mettre dans des enceintes préexistantes avec des boîtes également spécifiques pour l’observation.[10] Two categories of observation devices exist. Either the observation device is directly integrated into a system adapted to reconstitute the ideal environment for the proper development of embryos, with individual culture chambers included receiving boxes specific to each device. Either the observation device is individual and to be placed in pre-existing enclosures with boxes also specific for observation.
[11] Toutes ces spécificités rendent les dispositifs actuels ainsi que leur utilisation très coûteux limitant ainsi leur accès aux structures médicales au budget restreint ou nécessitant une augmentation des frais et/ou des coûts de prise en charge pour les bénéficiaires d’une FIV.[11] All these specificities make current devices and their use very expensive, thereby limiting their access to medical facilities on a limited budget or requiring an increase in the fees and / or costs of treatment for IVF beneficiaries.
[12] La qualité optique des images, l’identification précise des embryons et le suivi temporel et régulier de leur développement sont des paramètres essentiels à l’utilisation de ces procédés. Or,[12] The optical quality of the images, the precise identification of embryos and the temporal and regular monitoring of their development are essential parameters for the use of these processes. Gold,
a. les systèmes actuels ne permettent pas une localisation précise des embryons, ceux-ci sont confinés dans les espaces réduits limitant le champ d’observation dans les 3 axes x, y et z. Les mouvements naturels de l’embryon peuvent le faire sortir du champ de la zone observable sans possibilité d’une relocalisation ou le faire apparaître en bordure de champ, là où les aberrations optiques sont les plus importantes.at. current systems do not allow precise location of embryos, they are confined in reduced spaces limiting the field of observation in the 3 axes x, y and z. The natural movements of the embryo can move it out of the field of the observable area without the possibility of relocation or make it appear at the edge of the field, where optical aberrations are the most important.
b. l’observation sous une seule incidence n’a pas permis jusqu’à maintenant de pouvoir créer des algorithmes susceptibles de réaliser une aide à l’interprétation.b. observation under a single incidence has not so far made it possible to be able to create algorithms capable of achieving interpretation assistance.
[13] Il existe donc un réel besoin d’un dispositif d’imagerie palliant les défauts, inconvénients et obstacles de l’art antérieur, en particulier d’un dispositif et d’un procédé permettant d’améliorer la qualité optique et temporelle de l’observation des embryons, permettre une relocalisation si nécessaire des embryons, tout en réduisant les coûts de fabrication et d’utilisation du dispositif permettant ainsi d’améliorer l’accessibilité de la FIV aux personnes concernées.[13] There is therefore a real need for an imaging device which overcomes the faults, disadvantages and obstacles of the prior art, in particular a device and a method making it possible to improve the optical and temporal quality of observation of embryos, allow relocation of embryos if necessary, while reducing the costs of manufacturing and using the device, thereby improving the accessibility of IVF to those concerned.
Description de l’invention [14] Pour résoudre un ou plusieurs des inconvénients cités précédemment, l’invention propose en particulier sur un dispositif d’imagerie pour l’observation du développement d’embryons comprenant :Description of the invention [14] To solve one or more of the drawbacks mentioned above, the invention provides in particular on an imaging device for the observation of the development of embryos comprising:
- un système d’éclairage comprenant au moins une source lumineuse adaptée pour éclairer un embryon à observer ;- a lighting system comprising at least one light source adapted to illuminate an embryo to be observed;
- un premier système d’imagerie comprenant une caméra grand champ adaptée pour permettre d’identifier un ou plusieurs embryons à observer, les embryons étant déposés dans une boîte de Pétri adaptée ;- a first imaging system comprising a wide-field camera adapted to identify one or more embryos to be observed, the embryos being placed in an adapted petri dish;
- un second système d’imagerie comprenant une caméra petit champ adaptée pour imager un embryon éclairé et permettre d’observer son développement ; et- a second imaging system comprising a small field camera suitable for imaging an illuminated embryo and making it possible to observe its development; and
- des moyens de déplacement relatif de la boîte de Pétri par rapport à l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage et la caméra petit champ du second système d’imagerie de sorte à pouvoir observer un embryon identifié à l’aide du premier système d’imagerie.means for relative displacement of the Petri dish with respect to the assembly formed by at least the lighting system and the small field camera of the second imaging system so as to be able to observe an embryo identified using the first imaging system.
[15] De sorte à pouvoir observer un autre embryon, les moyens de déplacement peuvent au choix :[15] So as to be able to observe another embryo, the means of movement can choose:
- permettre de déplacer la boîte de Pétri dans laquelle sont déposés les embryons à observer relativement par rapport à l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage et la caméra petit champ du second système d’imagerie, ou- allow to move the Petri dish in which the embryos to be observed are deposited relatively with respect to the assembly formed by at least the lighting system and the small field camera of the second imaging system, or
- permettre de déplacer l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage et la caméra petit champ du second système d’imagerie relativement par rapport à la boîte de Pétri dans laquelle sont déposés les embryons à observer.- allow to move the assembly formed by at least the lighting system and the small field camera of the second imaging system relatively relative to the Petri dish in which the embryos to be observed are deposited.
selon le mode de réalisation choisi.depending on the embodiment chosen.
[16] Des caractéristiques ou des modes de réalisation particuliers du dispositif d’imagerie, utilisables seuls ou en combinaison, sont :[16] Characteristics or particular embodiments of the imaging device, usable alone or in combination, are:
[17] le système d’éclairage comprend au moins un type d’éclairage particulier parmi :[17] the lighting system comprises at least one particular type of lighting among:
- éclairage de type « identification » dans lequel la source lumineuse est adaptée pour optimiser l’identification du ou des embryons à observer par le premier système d’imagerie ;- "identification" type lighting in which the light source is adapted to optimize the identification of the embryo (s) to be observed by the first imaging system;
- éclaire de type « contours » dans lequel la source lumineuse est adaptée pour optimiser le comptage des cellules présentes dans l’embryon observé par le second système d’imagerie ;- "contour" type light in which the light source is adapted to optimize the counting of the cells present in the embryo observed by the second imaging system;
- éclairage de type « relief » dans lequel la source lumineuse est adaptée pour optimiser la visualisation de la texture et la granularité des cellules présentes dans l’embryon observé par le second système d’imagerie ;- "relief" type lighting in which the light source is adapted to optimize the visualization of the texture and granularity of the cells present in the embryo observed by the second imaging system;
[18] le premier système d’imagerie :[18] the first imaging system:
- permet de détecter et visualiser une mire de centrage localisée sur le récipient de la boîte de Pétri dans laquelle se trouve le ou les embryons à observer ;- makes it possible to detect and visualize a centering pattern located on the container of the Petri dish in which the embryo (s) to be observed is located;
- permet de définir un repère géométrique permettant de déduire, à partir la position de la mire de centrage, la position d’un élément d’identification localisé sur le récipient de la boîte de Pétri et/ou la position approximative du ou des embryons à observer, en fonction des caractéristiques de la boîte de Pétri utilisée ; et/ou- allows to define a geometric reference allowing to deduce, from the position of the centering target, the position of an identification element located on the container of the Petri dish and / or the approximate position of the embryo (s) observe, depending on the characteristics of the Petri dish used; and or
- permet de détecter la position exacte de l’embryon à observer lorsque l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage et la caméra grand champ du premier système d’imagerie est positionné, à l’aide des moyens de déplacement, au niveau de la position approximative de l’embryon à observer ;- makes it possible to detect the exact position of the embryo to be observed when the assembly formed by at least the lighting system and the wide field camera of the first imaging system is positioned, using the displacement means, at the level of the approximate position of the embryo to be observed;
[19] le second système d’imagerie :[19] the second imaging system:
- permet de compter le nombre de cellules présentes dans l’embryon observé ; et/ou- allows to count the number of cells present in the embryo observed; and or
- permet de visualiser la texture et la granularité des cellules présentes dans l’embryon observé ;- allows to visualize the texture and the granularity of the cells present in the embryo observed;
[20] les moyens de déplacement :[20] means of travel:
[21] permettent de déplacer l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage et la caméra petit champ du second système d’imagerie relativement par rapport à la boîte de Pétri dans laquelle sont déposés les embryons à observer de sorte à pouvoir imager l’embryon dans sa profondeur.[21] make it possible to move the assembly formed by at least the lighting system and the small field camera of the second imaging system relatively with respect to the Petri dish in which the embryos to be observed are deposited so as to be able to image the embryo in its depth.
[22] Dans un second aspect l’invention se rapporte à une boîte de Pétri pour l’observation du développement d’embryons par un dispositif d’imagerie tel que défini précédemment comprenant :[22] In a second aspect, the invention relates to a Petri dish for the observation of the development of embryos by an imaging device as defined above comprising:
- un récipient adapté pour recevoir un ou plusieurs embryons à observer ; et- a container suitable for receiving one or more embryos to be observed; and
- un couvercle, le récipient de la boîte de Pétri comprenant en outre :- a lid, the container of the Petri dish further comprising:
- un élément d’identification adapté pour permettre l’identification du ou des embryons observés ; et- an identification element adapted to allow the identification of the embryo (s) observed; and
- une mire de centrage adaptée pour permettre de connaître la position de l’élément d’identification et la position approximative du ou des embryons à observer en fonction des caractéristiques de la boîte de Pétri.- a centering pattern adapted to allow to know the position of the identification element and the approximate position of the embryo (s) to be observed according to the characteristics of the Petri dish.
[23] Selon un mode de réalisation de la boîte de Pétri, le fond du récipient comprend également un système de repérage et d’aide à la dépose d’un ou plusieurs embryons, ce système de repérage et d’aide comprenant au moins deux cercles concentriques, le premier cercle étant adapté pour délimiter la zone utile pour recevoir un embryon, le second cercle, de diamètre supérieur au premier, étant adapté pour délimiter une zone où déposer une goutte d’un milieu de culture qui va recouvrir l’embryon précédemment déposé, la position relative de ces cercles concentriques par rapport à la mire de centrage étant connue et faisant partie des caractéristiques de la boîte de Pétri.[23] According to one embodiment of the Petri dish, the bottom of the container also includes a tracking and assistance system for the removal of one or more embryos, this tracking and assistance system comprising at least two concentric circles, the first circle being adapted to delimit the area useful for receiving an embryo, the second circle, of diameter greater than the first, being adapted to delimit an area where to deposit a drop of a culture medium which will cover the embryo previously deposited, the relative position of these concentric circles with respect to the centering pattern being known and forming part of the characteristics of the Petri dish.
[24] Selon un autre mode de réalisation de la boîte de Pétri, le fond du récipient comprend au moins un réservoir à embryon comprenant en son centre une cupule adaptée pour recevoir un embryon, le réservoir étant adapté pour recevoir, en plus l’embryon dans la cupule, une goutte d’un milieu de culture, les positions relatives du réservoir et de la cupule par rapport à mire de centrage étant connue et faisant partie des caractéristiques de la boîte de Pétri.[24] According to another embodiment of the Petri dish, the bottom of the container comprises at least one embryo reservoir comprising in its center a cup adapted to receive an embryo, the reservoir being adapted to receive, in addition the embryo in the well, a drop of a culture medium, the relative positions of the tank and the well with respect to the center rod being known and forming part of the characteristics of the Petri dish.
[25] Dans troisième aspect, l'invention se rapporte à un procédé d’observation du développement d’embryons par un dispositif d’imagerie tel que défini précédemment comprenant :[25] In the third aspect, the invention relates to a method for observing the development of embryos by an imaging device as defined above, comprising:
- une première étape de préparation consistant à déposer successivement un embryon puis une goutte d’un milieu de culture puis de recommencer l’opération en fonction du nombre d’embryons à observer souhaité et enfin recouvrir le tout avec un liquide, de type huile, ou de l’eau, dans une boîte de Pétri telle que définie précédemment, ;a first preparation step consisting in successively depositing an embryo then a drop of a culture medium, then recommencing the operation as a function of the number of embryos to be observed desired and finally covering the whole with a liquid, of the oil type, or water, in a Petri dish as defined above,;
- une seconde étape de repérage de la boîte de Pétri consistant à détecter et visualiser, à l’aide du premier système d’imagerie, la mire de centrage de la boîte de Pétri dans laquelle se trouve le ou les embryons à observer de sorte à pouvoir en déduire la position de l’élément d’identification et la position approximative du ou des embryons par rapport à la mire de centrage en fonction des caractéristiques de la boîte de Pétri ;a second step of locating the petri dish consisting of detecting and visualizing, using the first imaging system, the centering pattern of the petri dish in which the embryo (s) to be observed is located so as to be able to deduce therefrom the position of the identification element and the approximate position of the embryo (s) relative to the centering pattern as a function of the characteristics of the Petri dish;
- une troisième étape d’identification du ou des embryons à observer consistant à imager et analyser, à l’aide du premier système d’imagerie, l’élément d’identification de la boîte de Pétri dans laquelle se trouve le ou les embryons à observer ; eta third step in identifying the embryo (s) to be observed, consisting in imaging and analyzing, using the first imaging system, the element for identifying the petri dish in which the embryo (s) is located observe; and
- une quatrième étape d’observation d’un premier embryon à l’aide du second système d’imagerie.- a fourth stage of observation of a first embryo using the second imaging system.
[26] Avantageusement, le procédé comprend également, avant l’étape d’observation d’un premier embryon à l’aide du second système d’imagerie, une étape de centrage consistant dans un premier temps à détecter la position exacte de l’embryon à observer à l’aide du premier système d’imagerie et à positionner l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage et le second système d’imagerie sur la position exacte de l’embryon à observer à l’aide des moyens de déplacement de sorte à précentrer l’embryon dans le champ de la caméra petit champ.[26] Advantageously, the method also comprises, before the step of observing a first embryo using the second imaging system, a centering step consisting firstly of detecting the exact position of the embryo to be observed using the first imaging system and to position the assembly formed by at least the lighting system and the second imaging system on the exact position of the embryo to be observed using the means of movement so as to pre-center the embryo in the field of the small field camera.
[27] Avantageusement, le procédé comprend également, après l’étape d’observation, une étape de déplacement permettant soit l’observation d’un autre embryon, soit l’observation de l’embryon dans sa profondeur, cette étape pouvant être répéter autant de fois que nécessaire.[27] Advantageously, the method also comprises, after the observation step, a displacement step allowing either the observation of another embryo, or the observation of the embryo in its depth, this step being able to be repeated as many times as necessary.
[28] Dans un quatrième aspect, l’invention se rapporte à un produit programme d'ordinateur téléchargeable depuis un réseau de communication et/ou enregistré sur un support lisible par ordinateur et/ou exécutable par un processeur, comprenant des instructions de code de programme pour la mise en œuvre du procédé d’observation du développement d’embryons tel que décrit précédemment.[28] In a fourth aspect, the invention relates to a computer program product downloadable from a communication network and / or recorded on a computer-readable medium and / or executable by a processor, comprising code instructions. program for implementing the process for observing the development of embryos as described above.
Brève description des figures [29] L’invention sera mieux comprise à la lecture de la description qui suit, faite uniquement à titre d’exemple, et en référence aux figures en annexe dans lesquelles :Brief description of the figures [29] The invention will be better understood on reading the description which follows, given solely by way of example, and with reference to the appended figures in which:
- La figure 1 représente un premier mode de réalisation d’un dispositif d’imagerie selon l’invention ;- Figure 1 shows a first embodiment of an imaging device according to the invention;
- La figure 2 représente un mode de réalisation d’un éclairage de type « identification » ;- Figure 2 shows an embodiment of lighting type "identification";
- La figure 3 représente un mode de réalisation d’un éclairage de type « contours » ;- Figure 3 shows an embodiment of a lighting type "contours";
- La figure 4 représente un mode de réalisation d’un éclairage de type « texture » ;- Figure 4 shows an embodiment of lighting of the "texture" type;
- La figure 5 représente un deuxième mode de réalisation d’un dispositif d’imagerie selon l’invention ;- Figure 5 shows a second embodiment of an imaging device according to the invention;
- La figure 6 représente un dispositif d’imagerie selon un autre mode de réalisation de l’invention disposé à l’intérieur d’un incubateur ;- Figure 6 shows an imaging device according to another embodiment of the invention arranged inside an incubator;
- La figure 7a représente une vue de profil du dispositif d’imagerie disposé l’intérieur d’un incubateur de la figure 6 ;- Figure 7a shows a side view of the imaging device arranged inside an incubator of Figure 6;
- La figure 7b représente une vue du dessus du dispositif d’imagerie disposé l’intérieur d’un incubateur de la figure 6 ;- Figure 7b shows a top view of the imaging device arranged inside an incubator of Figure 6;
- La figure 8a représente une vue de profil d’un mode de réalisation d’une boîte de Pétri, selon l’invention, posée sur un support ; et- Figure 8a shows a profile view of an embodiment of a Petri dish, according to the invention, placed on a support; and
- La figure 8b représente une vue de dessus de la boîte de Pétri de la figure 8a posée sur un support.- Figure 8b shows a top view of the Petri dish of Figure 8a placed on a support.
- La figure 9 représente un réservoir à embryon présent sur le fond d’une boîte de Pétri selon un mode de réalisation de l’invention ;- Figure 9 shows an embryo reservoir present on the bottom of a Petri dish according to an embodiment of the invention;
- Les figures 10a à 10c représentent un autre mode de réalisation d’une boîte de Pétri selon l’invention, respectivement la figure 10a représente une vue de profil, la figure 10b une vue du dessus et la figure 10c une coupe du profil de la boîte de Pétri ;- Figures 10a to 10c show another embodiment of a Petri dish according to the invention, respectively Figure 10a shows a side view, Figure 10b a top view and Figure 10c a section of the profile of the Petri dish ;
- La figure 11a représente une vue du dessus d’une boîte de Pétri selon un autre mode de réalisation de l’invention ;- Figure 11a shows a top view of a Petri dish according to another embodiment of the invention;
- La figure 11b représente un vue de profil de la boîte de Pétri selon le mode de réalisation de la figure 11a ;- Figure 11b shows a side view of the Petri dish according to the embodiment of Figure 11a;
- La figure 12 représente le synoptique d’un procédé d’observation du développement d’un embryon selon un premier mode de réalisation de l’invention ; et- Figure 12 shows the block diagram of a process for observing the development of an embryo according to a first embodiment of the invention; and
- La figure 13 représente le synoptique d’un procédé d’observation du développement d’un embryon selon un deuxième mode de réalisation de l’invention.- Figure 13 shows the block diagram of a process for observing the development of an embryo according to a second embodiment of the invention.
Modes de réalisation [30] Afin de rendre plus clair l'objet, les solutions techniques et les avantages de l'invention, l'invention est décrite plus en détail ci-dessous avec la référence aux figures et aux modes de réalisation spécifiques correspondants. Il est important de noter que les modes de réalisation de l'invention et les caractéristiques de ces modes de réalisation peuvent être combinés librement à condition qu’il n’y ait pas de conflit entre les différents éléments.Embodiments [30] In order to make the object, the technical solutions and the advantages of the invention clearer, the invention is described in more detail below with reference to the figures and to the corresponding specific embodiments. It is important to note that the embodiments of the invention and the characteristics of these embodiments can be combined freely provided that there is no conflict between the different elements.
[31] L’invention porte dans un premier temps sur un dispositif d’imagerie pour l’observation d’une cellule ou d’un ensemble de cellules vivantes puis sur l’utilisation d’un tel dispositif pour l’observation du développement d’embryons.[31] The invention relates firstly to an imaging device for the observation of a cell or a set of living cells and then to the use of such a device for the observation of the development of embryos.
[32] Afin de simplifier la description, le dispositif d’imagerie pour l’observation d’une cellule ou d’un ensemble de cellules vivantes n’est décrit ci-dessous que dans le cas particulier de l’observation du développement d’embryons. Cette description est cependant généralisable à tous types de cellule ou d’ensemble de cellules vivantes en remplaçant simplement le terme « embryon » utilisé dans la description ci-dessous par le terme « cellule ou ensemble de cellules vivantes ».[32] In order to simplify the description, the imaging device for observing a cell or a set of living cells is described below only in the particular case of observing the development of embryos. This description can however be generalized to all types of cell or set of living cells by simply replacing the term "embryo" used in the description below with the term "cell or set of living cells".
[33] La suite de la description porte donc sur un dispositif d’imagerie pour l’observation du développement d’embryons.[33] The remainder of the description therefore relates to an imaging device for observing the development of embryos.
[34] Comme illustré Figure 1 et selon un premier mode de réalisation, le dispositif d’imagerie 100 comprend :[34] As illustrated in FIG. 1 and according to a first embodiment, the imaging device 100 comprises:
• un système d’éclairage 110 comprenant au moins une source lumineuse 111 adaptée pour éclairer un embryon 80 à observer ;• a lighting system 110 comprising at least one light source 111 adapted to illuminate an embryo 80 to be observed;
• un premier système d’imagerie 120 comprenant une caméra grand champ 121 adaptée pour permettre d’identifier un ou plusieurs embryons 80 à observer, les embryons 80 étant déposés dans une boîte de Pétri 10 adaptée ;• a first imaging system 120 comprising a wide field camera 121 adapted to identify one or more embryos 80 to be observed, the embryos 80 being deposited in a suitable Petri dish 10;
• un second système d’imagerie 130 comprenant une caméra petit champ 131 adaptée pour imager un embryon 80 éclairé et permettre d’observer son développement ; et • des moyens de déplacement relatif (non représentés) de la boîte de Pétri 10 par rapport à l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage 110 et la caméra petit champ 131 du second système d’imagerie 130 de sorte à pouvoir observer un embryon 80 identifié par le premier système d’imagerie 120.• a second imaging system 130 comprising a small field camera 131 adapted to image an illuminated embryo 80 and make it possible to observe its development; and • means for relative displacement (not shown) of the Petri dish 10 relative to the assembly formed by at least the lighting system 110 and the small field camera 131 of the second imaging system 130 so as to be able to observe an embryo 80 identified by the first imaging system 120.
[35] Dans le mode de réalisation présenté Figure 1, le dispositif 100 est réalisé en configuration « microscope inversé », c’est-à-dire que la cellule ou l’ensemble de cellules vivantes observé, ici un embryon 80 est éclairé par le dessus et que les systèmes d’imagerie 120 et 130 se trouvent en dessous et observent la lumière transmise par l’embryon 80 qui est un objet translucide. Pour la suite de la description, c’est cette configuration qui est retenue, cependant le dispositif 100 peut aussi bien être réalisé en configuration « normale » (la cellule ou l’ensemble de cellules vivantes éclairé par le dessous et observé vu de dessus comme avec un microscope de base), qu’en configuration « inversée ».[35] In the embodiment presented in FIG. 1, the device 100 is produced in an “inverted microscope” configuration, that is to say that the cell or the set of living cells observed, here an embryo 80 is lit by above and that the imaging systems 120 and 130 are below and observe the light transmitted by the embryo 80 which is a translucent object. For the remainder of the description, it is this configuration which is retained, however the device 100 can equally well be produced in “normal” configuration (the cell or the set of living cells lit from below and observed seen from above as with a basic microscope), only in an “inverted” configuration.
[36] La prise d’image par la caméra grand champ 121 ou petit champ 131 se fait en transmission à travers l’embryon (ou la cellule ou l’ensemble de cellules vivantes) soit par la technique dite de diascopie. C’est-à-dire que l’éclairage se trouve d’un côté de l’objet à imager et la caméra de l’autre côté de l’objet.[36] The image taken by the wide field 121 or small field 131 camera is transmitted through the embryo (or the cell or set of living cells) either by the so-called transmitted-light technique. That is, the light is on one side of the object to be imaged and the camera is on the other side of the object.
[37] Ainsi la boîte de Pétri 10 dans laquelle se trouve le ou les embryons 80 à observer doit être transparente à la lumière utilisée pour éclairer l’embryon 80. Dans le cas où la boîte de Pétri 10 est posée sur un support 1, comme dans le mode réalisation présenté Figure 1, ce support 1 devra aussi être transparent à la lumière utilisée pour éclairer l’embryon 80, comme une vitre en verre pour les microscopes classiques dont la lumière est une ampoule ou émettant dans le visible. Ce support 1 peut être une vitre ou encore un tiroir coulissant sur lequel peut être déposé une ou plusieurs boîtes de Pétri 10. Avantageusement, ce support 1 peut comprendre des plots ou rebord permettant de pré-positionner la ou les boîtes de Pétri sur des positions prédéfinies.[37] Thus the Petri dish 10 in which the embryo (s) 80 is to be observed must be transparent to the light used to illuminate the embryo 80. In the case where the Petri dish 10 is placed on a support 1, as in the embodiment presented in Figure 1, this support 1 must also be transparent to the light used to illuminate the embryo 80, like a glass pane for conventional microscopes whose light is a bulb or emitting in the visible. This support 1 can be a window or a sliding drawer on which one or more Petri dishes 10 can be placed. Advantageously, this support 1 can include studs or flange enabling the Petri dish (s) to be pre-positioned in positions predefined.
[38] Selon le mode de réalisation de l’invention, les moyens de déplacement permettent :[38] According to the embodiment of the invention, the displacement means allow:
- soit de déplacer la boîte de Pétri 10 dans laquelle sont déposés les embryons 80 à observer relativement par rapport à l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage 110 et la caméra petit champ 131 du second système d’imagerie 130 ;- Or to move the Petri dish 10 in which the embryos 80 are deposited to be observed relatively with respect to the assembly formed by at least the lighting system 110 and the small field camera 131 of the second imaging system 130;
- soit de déplacer l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage 110 et la caméra petit champ 131 du second système d’imagerie 130 relativement par rapport à la boîte de Pétri 10 dans laquelle sont déposés les embryons 80 à observer.- Or to move the assembly formed by at least the lighting system 110 and the small field camera 131 of the second imaging system 130 relatively relative to the Petri dish 10 in which the embryos 80 to be observed are deposited.
[39] Dans les deux cas, le déplacement s’effectue dans un plan (X, Y) parallèle au fond de la boîte de Pétri 10.[39] In both cases, the displacement takes place in a plane (X, Y) parallel to the bottom of the Petri dish 10.
[40] Avantageusement, le système d’éclairage 110, la caméra grand champ 121 et la caméra petit champ 131 sont solidaires et montés sur une structure en forme de « U » de sorte que le système d’éclairage 110 se trouve en face des caméras grand champ et petit champ comme sur la[40] Advantageously, the lighting system 110, the wide field camera 121 and the small field camera 131 are integral and mounted on a U-shaped structure so that the lighting system 110 is opposite the large field and small field cameras like on the
Figure 1.Figure 1.
[41] Avantageusement, le système d’éclairage 110 comprend au moins un type d’éclairage particulier parmi les suivants :[41] Advantageously, the lighting system 110 comprises at least one particular type of lighting among the following:
- l’éclairage de type « identification » dans lequel la source lumineuse 111 est adaptée pour optimiser l’identification du ou des embryons 80 à observer par le premier système d’imagerie 120 ;- "identification" type lighting in which the light source 111 is adapted to optimize the identification of the embryo (s) 80 to be observed by the first imaging system 120;
- l’éclairage de type « contours » dans lequel la source lumineuse 111 est adaptée pour optimiser le comptage des cellules présentes dans l’embryon 80 observé par le second système d’imagerie 130 ; et- Lighting of the “contour” type in which the light source 111 is adapted to optimize the counting of the cells present in the embryo 80 observed by the second imaging system 130; and
- l’éclairage de type « relief » dans lequel la source lumineuse 111 est adaptée pour optimiser la visualisation de la texture et la granularité des cellules présentes dans l’embryon 80 observé par le second système d’imagerie 130.- “relief” type lighting in which the light source 111 is adapted to optimize the visualization of the texture and the granularity of the cells present in the embryo 80 observed by the second imaging system 130.
[42] L’éclairage de type « identification », est de préférence utilisé pour la détection et la visualisation, par le premier système d’imagerie 120, d’une mire de centrage présente sur la boîte de Pétri 10 ainsi que pour l’imagerie et l’analyse, toujours par le premier système d’imagerie 120, d’un élément d’identification aussi présent sur la boîte de Pétri 10 et permettant l’identification du ou des embryons 80 à observer. Ainsi le choix de la source lumineuse 111 et de la caméra grand champ 121 doit être adapté. Par exemple, la sensibilité de la caméra grand champ 121 doit être optimisée en fonction de la longueur d’onde émise par la source lumineuse 111.[42] Lighting of the “identification” type is preferably used for the detection and visualization, by the first imaging system 120, of a centering pattern present on the Petri dish 10 as well as for the imaging and analysis, still by the first imaging system 120, of an identification element also present on the Petri dish 10 and allowing the identification of the embryo (s) 80 to be observed. Thus the choice of the light source 111 and the wide field camera 121 must be adapted. For example, the sensitivity of the wide-field camera 121 must be optimized as a function of the wavelength emitted by the light source 111.
[43] Cet éclairage de type « identification peut aussi être utilisé pour aider à la détection de l’embryon 80 par la caméra grand champ 121 et le premier système d’imagerie 120.[43] This type of identification lighting can also be used to assist in the detection of the embryo 80 by the wide-field camera 121 and the first imaging system 120.
[44] La Figure 2 représente un mode de réalisation d’un éclairage de type « identification ». Dans cette Figure 2, l’objet à identifier ou détecter à l’aide de la caméra grand 121 et du premier système d’imagerie, qui peut être la mire de centrage, l’élément d’identification ou comme dans la Figure 2 l’embryon 80, est éclairé par un éclairage de type homogène ou diffus. Les rayons lumineux 112 issus de la source lumineuse 110 sont concentrés ou focalisés sur l’objet à identifier ou détecter, dans un cône ayant une ouverture angulaire oc_GC de l’ordre de 30°. L’objet observé (mire de centrage, élément d’identification ou embryon 80 / cellule ou ensemble de cellules vivantes) est donc éclairé selon des angles d’incidence variant entre -15° et +15° par rapport à l’axe perpendiculaire P au plan formé par le support 1 de la boîte de Pétri 10 ou la boîte de Pétri 10 elle-même.[44] Figure 2 shows an embodiment of lighting of the "identification" type. In this Figure 2, the object to be identified or detected using the large camera 121 and the first imaging system, which can be the centering pattern, the identification element or as in Figure 2 l embryo 80, is lit by a homogeneous or diffuse type of lighting. The light rays 112 coming from the light source 110 are concentrated or focused on the object to be identified or detected, in a cone having an angular opening oc_GC of the order of 30 °. The object observed (centering target, identification element or embryo 80 / cell or set of living cells) is therefore illuminated according to angles of incidence varying between -15 ° and + 15 ° relative to the perpendicular axis P to the plane formed by the support 1 of the Petri dish 10 or the Petri dish 10 itself.
[45] L’éclairage de type « contours », est de préférence utilisé pour optimiser la visualisation, par le second système d’imagerie 130, des contours des cellules constituant l’embryon 80 et donc en faciliter leur comptage.[45] Lighting of the “contour” type is preferably used to optimize the visualization, by the second imaging system 130, of the contours of the cells constituting the embryo 80 and therefore facilitate their counting.
[46] La Figure 3 représente un mode de réalisation d’un éclairage de type « comptage ». Dans cette Figure 3, l’embryon 80 à observer par la caméra petit champ 131 et dont le nombre de cellules sera compté à l’aide du second système d’imagerie 130, est éclairé selon deux axes de préférence symétriques par rapport à l’axe perpendiculaire P au plan formé par le support 1 de la boîte de Pétri 10 ou la boîte de Pétri 10 elle-même. Ainsi, les rayons issus de la source lumineuses 110 sont séparés en deux faisceaux collimatés 113 et 114. Le premier faisceau 113 éclaire l’embryon 80 selon un angle d’incidence β_Ρ01 par rapport à l’axe perpendiculaire P et le second faisceau 114 éclaire l’embryon 80 selon un angle d’incidence 3_PC2. Comme énoncé précédemment, les angles 3_PC1 et 3_PC2 sont de préférence égaux et opposés (i.e. 3_PC1 = - 3_PC2), c’est-à-dire que les faisceaux 113 et 114 sont de préférence symétriques par rapport à l’axe perpendiculaire P. Typiquement, les angles 3_PC1 et 3_PC2 sont de l’ordre de +/-12°. L’angle total entre les deux directions formées par les faisceaux 113 et 114 est donc typiquement de l’ordre de 24°.[46] Figure 3 shows an embodiment of lighting of the “counting” type. In this Figure 3, the embryo 80 to be observed by the small field camera 131 and the number of cells of which will be counted using the second imaging system 130, is illuminated along two axes preferably symmetrical with respect to the axis perpendicular P to the plane formed by the support 1 of the Petri dish 10 or the Petri dish 10 itself. Thus, the rays from the light source 110 are separated into two collimated beams 113 and 114. The first beam 113 illuminates the embryo 80 at an angle of incidence β_Ρ01 relative to the perpendicular axis P and the second beam 114 illuminates the embryo 80 at an angle of incidence 3_PC2. As stated above, the angles 3_PC1 and 3_PC2 are preferably equal and opposite (ie 3_PC1 = - 3_PC2), that is to say that the beams 113 and 114 are preferably symmetrical with respect to the perpendicular axis P. Typically , the angles 3_PC1 and 3_PC2 are of the order of +/- 12 °. The total angle between the two directions formed by the beams 113 and 114 is therefore typically of the order of 24 °.
[47] L’éclairage de type « texture » est de préférence utilisé pour optimiser la visualisation, par le second système d’imagerie 130, de la texture et la granularité des cellules présentes dans l’embryon 80 observé de sorte à permettre d’apprécier le relief et la profondeur de l’embryon 80.[47] Lighting of the “texture” type is preferably used to optimize the visualization, by the second imaging system 130, of the texture and the granularity of the cells present in the embryo 80 observed so as to allow appreciate the relief and depth of the embryo 80.
[48] La Figure 4 représente un mode de réalisation d’un éclairage de type « texture ». Dans cette Figure 4, l’embryon 80 à observer par la caméra petit champ 131 et dont la texture et la granularité des cellules vont être visualisées, est éclairé par un seul faisceau lumineux 115. Ce faisceau 115 est collimaté et propage selon un axe incliné d’un angle y_PC par rapport à l’axe perpendiculaire P. La valeur absolue de cet angle y_PC varie typiquement entre 8° et 16°. Aucune direction d’incidence n’est privilégiée par rapport à l’axe perpendiculaire P ou l’embryon 80.[48] Figure 4 shows an embodiment of “texture” type lighting. In this Figure 4, the embryo 80 to be observed by the small field camera 131 and whose texture and granularity of the cells will be visualized, is illuminated by a single light beam 115. This beam 115 is collimated and propagates along an inclined axis of an angle y_PC relative to the perpendicular axis P. The absolute value of this angle y_PC typically varies between 8 ° and 16 °. No direction of incidence is preferred with respect to the perpendicular axis P or the embryo 80.
[49] Pour faciliter la réalisation de ces différents éclairages, le système d’éclairage 110 peut être composés de plusieurs sources lumineuses 111, de type DEL (ou LED en anglais). Chacune de ces sources lumineuses 111 peut être commandée individuellement. Il est à noter que les LED ont pour avantage d’être très peu volumineuses de sorte qu’il est possible de dupliquer l’éclairage par un ensemble de LEDs de sorte qu’une LED éclaire un embryon 80.[49] To facilitate the realization of these different lights, the lighting system 110 can be composed of several light sources 111, of LED type (or LED in English). Each of these light sources 111 can be controlled individually. It should be noted that LEDs have the advantage of being very small so that it is possible to duplicate the lighting by a set of LEDs so that an LED illuminates an embryo 80.
[50] De préférence, la longueur d’onde de la source lumineuse 111 utilisée (LED ou autre) est dans le domaine du rouge (aux alentours de 630 nm), qui est le domaine le moins nocif pour l’embryon 80. De plus, il est préférable que la source lumineuse 111 soit commandée en mode pulsé de sorte à limiter la durée cumulée d’exposition de l’embryon 80 à la lumière à quelques dizaines de secondes par jour, cela pour ne pas l’endommager. [51 ] La Figure 5 illustre un mode de réalisation de l’invention où le système d’éclairage 110 comprend plusieurs sources lumineuses 111a, 111b, 111c, trois dans cet exemple.[50] Preferably, the wavelength of the light source 111 used (LED or other) is in the red range (around 630 nm), which is the least harmful range for the embryo 80. more, it is preferable that the light source 111 is controlled in pulsed mode so as to limit the cumulative duration of exposure of the embryo 80 to light to a few tens of seconds per day, so as not to damage it. [51] Figure 5 illustrates an embodiment of the invention where the lighting system 110 comprises several light sources 111a, 111b, 111c, three in this example.
[52] Pour collimater la lumière émise par la source lumineuse 111 et émettre un éclairage homogène ou encore émettre un éclairage diffus, le système d’éclairage 110 pourra comprendre en outre un système optique de mise en forme 140 du faisceau lumineux émis par la source lumineuse 111, tel qu’une lentille ou une matrice de lentilles, des filtres, etc.[52] To collimate the light emitted by the light source 111 and emit homogeneous lighting or even emit diffuse lighting, the lighting system 110 may further comprise an optical system 140 for shaping the light beam emitted by the source light 111, such as a lens or lens array, filters, etc.
[53] Pour ajuster la zone à éclairer, ce système optique de mise en forme 140 pourra également comprendre un masque, tel qu’une plaque avec un trou, pouvant être déplacé de sorte à laisser passer la lumière de la source lumineuse 111 pour que celle-ci éclaire l’embryon 80 à observer. Cela peut notamment est être le cas si la source lumineuse 111 est étendue ou si le système d’éclairage 110 comprennent plusieurs sources lumineuses 111 pilotables séparément ou non. De plus l’utilisation d’un tel masque permet aussi de filtrer les lumières parasites qui pourraient perturber l’observation de l’embryon 80.[53] To adjust the area to be lit, this optical shaping system 140 may also include a mask, such as a plate with a hole, which can be moved so as to allow light to pass from the light source 111 so that this illuminates the embryo 80 to be observed. This can in particular be the case if the light source 111 is extended or if the lighting system 110 comprises several light sources 111 which can be controlled separately or not. In addition, the use of such a mask also makes it possible to filter stray lights which could disturb the observation of the embryo 80.
[54] Ainsi, dans le cadre de la Figure 5, pour réaliser un éclairage de type « texture » et éclairer l’embryon 80 à observer sur le côté, la source lumineuse 111b située à la verticale de l’embryon 80 pourrait être éteinte et l’une des deux sources lumineuses 111a ou 111c situées sur les côtés de la source lumineuse centrale 111b pourrait être allumée projetant ainsi une lumière oblique sur l’embryon 80.[54] Thus, in the context of FIG. 5, in order to produce “texture” type lighting and to illuminate the embryo 80 to be observed from the side, the light source 111b situated vertically above the embryo 80 could be extinguished and one of the two light sources 111a or 111c situated on the sides of the central light source 111b could be switched on, thus projecting an oblique light onto the embryo 80.
[55] Concernant le premier système d’imagerie 120 situé, dans le cas des Figures 1 et 5, en dessous de la boîte de Pétri 10 et donc de l’embryon 80 à observer (principe du microscope inversé), celui comprend une caméra grand champ 121 adaptée pour permettre d’identifier d’un ou plusieurs embryons 80 à observer, les embryons 80 étant déposés dans une boîte de Pétri 10 adaptée.[55] Regarding the first imaging system 120 located, in the case of Figures 1 and 5, below the Petri dish 10 and therefore the embryo 80 to be observed (principle of the inverted microscope), that includes a camera large field 121 adapted to allow the identification of one or more embryos 80 to be observed, the embryos 80 being deposited in a suitable Petri dish 10.
[56] Pour cela, la caméra grand champ 121 est réglée de telle sorte que celle-ci puisse imager une mire de centrage et/ou un élément d’identification présents sur la boîte de Pétri 10 permettant ainsi l’identification du ou des embryons 80 à observer. Pour cela, le premier système d’imagerie 120 comprend en outre une unité de traitement qui analyse l’image capturée par la caméra grand champ 121 pour détecter la mire de centrage et en déduire l’orientation de la boîte de Pétri 10 ainsi que la position de l’élément d’identification et la position approximative du ou des embryons 80 à observer à l’aide des caractéristiques de la boîte de Pétri 10.[56] For this, the wide field camera 121 is adjusted so that it can image a centering pattern and / or an identification element present on the Petri dish 10 thus allowing the identification of the embryo (s) 80 to observe. For this, the first imaging system 120 further comprises a processing unit which analyzes the image captured by the wide field camera 121 to detect the centering pattern and deduce therefrom the orientation of the petri dish 10 as well as the position of the identification element and the approximate position of the embryo (s) 80 to be observed using the characteristics of the Petri dish 10.
[57] Ainsi, le premier système d’imagerie 120 permet de définir un repère géométrique permettant de déduire, à partir la position de la mire de centrage, la position d’un élément d’identification localisé sur le récipient de la boîte de Pétri 10 et/ou une position approximative du ou des embryons 80 à observer, en fonction des caractéristiques de la boîte de Pétri 10 utilisée.[57] Thus, the first imaging system 120 makes it possible to define a geometric coordinate system making it possible to deduce, from the position of the centering target, the position of an identification element located on the container of the Petri dish 10 and / or an approximate position of the embryo (s) 80 to be observed, depending on the characteristics of the Petri dish 10 used.
[58] Cette unité de traitement permet aussi d’analyser l’image capturée par la caméra grand champ 121 lorsque celle-ci est positionnée, à l’aide des moyens de déplacement, de sorte à imager l’élément d’identification de la boîte de Pétri 10, de sorte à retrouver dans une base de données préalablement remplie les informations relatives au contenu de la boîte de Pétri 10, c’est-à-dire aux embryons 80, telles que le couple de patients auquel appartiennent les embryons 80, le nombre d’embryons 80 présents dans la boîte, la date de préparation et de mise en place des embryons 80, etc.[58] This processing unit also makes it possible to analyze the image captured by the wide-field camera 121 when the latter is positioned, using the displacement means, so as to image the element for identifying the Petri dish 10, so as to find in a previously filled database the information relating to the content of the petri dish 10, that is to say the embryos 80, such as the couple of patients to which the embryos 80 belong , the number of 80 embryos present in the box, the date of preparation and placement of the 80 embryos, etc.
[59] A partir des données récupérées via l’élément d’identification et de la position de la caméra grand champ 121 par rapport à la mire de centrage de la boîte de Pétri 10, il est possible d’identifier chacun des embryons 80 observés.[59] From the data retrieved via the identification element and the position of the wide-field camera 121 relative to the centering pattern of the petri dish 10, it is possible to identify each of the embryos 80 observed. .
[60] Avantageusement, pour affiner la position de l’embryon 80 à observer, le premier système d’imagerie 120 permet de détecter l’embryon 80 à observer et d’affiner la détermination de la position de l’embryon 80 à observer lorsque l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage 110 et la caméra grand champ 121 du premier système d’imagerie 120 est positionné, à l’aide des moyens de déplacement, au niveau de la position approximative de l’embryon 80 à observer.[60] Advantageously, to refine the position of the embryo 80 to be observed, the first imaging system 120 makes it possible to detect the embryo 80 to be observed and to refine the determination of the position of the embryo 80 to be observed when the assembly formed by at least the lighting system 110 and the wide field camera 121 of the first imaging system 120 is positioned, using the displacement means, at the approximate position of the embryo 80 at observe.
[61 ] Le second système d’imagerie 130, comprend une caméra petit champ 131 adaptée pour imager un embryon 80 éclairé et permettre d’observer son développement.[61] The second imaging system 130 includes a small field camera 131 adapted to image an illuminated embryo 80 and make it possible to observe its development.
[62] Pour cela, la caméra petit champ 131 est une caméra dite à « haute résolution ». Celle-ci est typiquement équipée d’un capteur d’image de 1200 x 1000 pixels et d’une résolution de l’ordre de 5 pixels par 1 pm observé.[62] For this, the small field camera 131 is a so-called "high resolution" camera. This is typically equipped with an image sensor of 1200 x 1000 pixels and a resolution of the order of 5 pixels per 1 pm observed.
[63] De plus, de sorte à pouvoir séparer les différentes couches de cellules présentes dans l’embryon 80, la caméra petit champ 131 doit avoir une profondeur de champ relativement faible, de l’ordre de 100 pm.[63] In addition, in order to be able to separate the different layers of cells present in the embryo 80, the small field camera 131 must have a relatively shallow depth of field, of the order of 100 μm.
[64] Pour voir les différentes couches de cellules et donc observer l’embryon 80 dans sa profondeur, les moyens de déplacement permettent avantageusement de déplacer, relativement par rapport à la boîte de Pétri 10, l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage 110 et la caméra petit champ 131 selon un axe Z perpendiculaire au plan défini par la boîte de Pétri 10 ou au plan défini par le support 1.[64] To see the different layers of cells and therefore observe the embryo 80 in its depth, the displacement means advantageously make it possible to move, relatively with respect to the Petri dish 10, the assembly formed by at least the system of lighting 110 and the small field camera 131 along an axis Z perpendicular to the plane defined by the Petri dish 10 or to the plane defined by the support 1.
[65] Le second système d’imagerie 130 comprend également une unité de traitement qui peut être commune avec celle du premier système d’imagerie 120. Grâce à cette unité de traitement, le second système d’imagerie 130 permet de compter le nombre de cellules présentes dans l’embryon 80 observé. Pour cela, l’unité de traitement du second système d’imagerie 130 analyse les images capturées par la caméra petit champ 131 et par des traitements d’image tels que la détection de contours, permet de compter le nombre de cellules présentes dans l’embryon 80 observé.[65] The second imaging system 130 also includes a processing unit which may be common with that of the first imaging system 120. With this processing unit, the second imaging system 130 makes it possible to count the number of cells present in the embryo 80 observed. For this, the processing unit of the second imaging system 130 analyzes the images captured by the small field camera 131 and by image processing such as edge detection, makes it possible to count the number of cells present in the embryo 80 observed.
[66] Le comptage et notamment les traitements d’image sont optimum lorsque l’embryon 80 observé est éclairé à l’aide de l’éclairage de type « contours ».[66] The counting and in particular the image processing are optimum when the embryo 80 observed is lit using lighting of the "contour" type.
[67] Le second système d’imagerie 130 permet également de visualiser la texture et la granularité des cellules présentes dans l’embryon 80 observé. Pour cela, l’unité de traitement du second système d’imagerie 130 analyse les images capturées par la caméra petit champ 131 et les traite avec des traitements d’image optimisant le rendu visuel de la texture et du grain des cellules présentes dans l’embryon 80 observé.[67] The second imaging system 130 also makes it possible to visualize the texture and granularity of the cells present in the embryo 80 observed. For this, the processing unit of the second imaging system 130 analyzes the images captured by the small field camera 131 and processes them with image processing optimizing the visual rendering of the texture and grain of the cells present in the embryo 80 observed.
[68] Avantageusement, pour centrer l’embryon 80 à observer dans le champ de la caméra petit champ 131 et ainsi optimiser son observation, le second système d’imagerie 130 permet de détecter l’embryon 80 à observer et de déterminer sa position exacte lorsque l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage 110 et la caméra petit champ 131 du second système d’imagerie 130 est positionné, à l’aide des moyens de déplacement, au niveau de la position approximative de l’embryon 80 à observer ou de la position affinée déterminées par le premier système d’imagerie 120.[68] Advantageously, to center the embryo 80 to be observed in the field of the small field camera 131 and thus optimize its observation, the second imaging system 130 makes it possible to detect the embryo 80 to be observed and to determine its exact position when the assembly formed by at least the lighting system 110 and the small field camera 131 of the second imaging system 130 is positioned, using the displacement means, at the level of the approximate position of the embryo 80 to be observed or the refined position determined by the first imaging system 120.
[69] Comme illustré sur la Figure 5, le premier 120 et le second 130 systèmes d’imagerie, notamment la caméra grand champ 121 et la caméra petit champ 131, peuvent avantageusement être déportés à l’aide d’un système optique de renvoi 150, de sorte à rendre le dispositif 100 plus compact. Ce système optique de renvoi 150 peut être constitué par exemple d’une lentille 151 et d’un miroir de renvoi 152 positionné à 45° par rapport à l’axe optique A du dispositif d’imagerie 100, en pointillés sur la Figure 5.[69] As illustrated in FIG. 5, the first 120 and the second 130 imaging systems, in particular the wide field camera 121 and the small field camera 131, can advantageously be deported using an optical deflection system 150, so as to make the device 100 more compact. This optical deflection system 150 may consist, for example, of a lens 151 and of a deflection mirror 152 positioned at 45 ° relative to the optical axis A of the imaging device 100, with dotted lines in FIG. 5.
[70] Comme l’illustre la Figure 6, les dimensions du dispositif d’imagerie 100 sont de préférence compatibles avec les incubateurs 200 présents dans les centres de FIV pour que celui-ci puisse être disposé à l’intérieur de tels incubateurs 200. Ainsi, la hauteur et la profondeur du dispositif 100 sont de l’ordre de 30 cm et la largeur du dispositif 100 est de l’ordre de 30 cm à 55 cm environ.[70] As illustrated in FIG. 6, the dimensions of the imaging device 100 are preferably compatible with the incubators 200 present in the IVF centers so that it can be placed inside such incubators 200. Thus, the height and the depth of the device 100 are of the order of 30 cm and the width of the device 100 is of the order of approximately 30 cm to 55 cm.
[71 ] Le dispositif d’imagerie 100 de la Figure 6 comporte un tiroir coulissant sur lequel peut être déposé une ou plusieurs boîtes de Pétri 10 comme précédemment indiqué.[71] The imaging device 100 of FIG. 6 comprises a sliding drawer on which can be placed one or more Petri dishes 10 as previously indicated.
[72] Les Figures 7a et 7b représentent respectivement une vue de profil et une vue du dessus du dispositif d’imagerie 100 de la Figure 6 présent dans un incubateur 200. Dans le cas présent, le support 1 faisant toute la largeur du dispositif d’imagerie 100, c’est l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage 110, la caméra grand champ 121 et la caméra petit champ 131 fixés sur une structure en forme de « U allongé » qui se déplace dans un plan (X, Y) parallèle à celui défini par le support 1 de sorte à pouvoir visualiser soit un autre embryon 80 d’une même boîte de Pétri 10, soit un embryon 80 dans une autre boîte de Pétri 10.[72] Figures 7a and 7b respectively show a side view and a top view of the imaging device 100 of Figure 6 present in an incubator 200. In this case, the support 1 making the entire width of the device d imagery 100, it is the assembly formed by at least the lighting system 110, the wide field camera 121 and the small field camera 131 fixed on a structure in the shape of an "elongated U" which moves in a plane ( X, Y) parallel to that defined by the support 1 so as to be able to visualize either another embryo 80 of the same Petri dish 10, or an embryo 80 in another Petri dish 10.
[73] Dans un deuxième temps la boîte de Pétri 10 adaptée pour l’observation du développement d’embryons par un dispositif d’imagerie 100 tel que défini précédemment va être détaillée ci-dessous. Comme précédemment indiqué, il est à noter que cette boîte de Pétri 10 peut également être généralisée et utilisée dans le cadre de l’observation d’autres types de cellule ou d’ensemble de cellules vivantes. Il suffit pour cela de remplacer le terme « embryon » utilisé ci-dessous par « cellule ou ensemble de cellules vivantes ».[73] Secondly, the Petri dish 10 adapted for the observation of the development of embryos by an imaging device 100 as defined above will be detailed below. As previously indicated, it should be noted that this Petri dish 10 can also be generalized and used in the context of the observation of other types of cell or set of living cells. It suffices to replace the term "embryo" used below with "cell or set of living cells".
[74] Selon un premier mode de réalisation, comme l’illustre la Figure 8a, la boîte de Pétri 10 comprend :[74] According to a first embodiment, as illustrated in FIG. 8a, the Petri dish 10 comprises:
• un récipient 20 adapté pour recevoir un ou plusieurs embryons 80 à observer ; et • un couvercle 30.• a container 20 adapted to receive one or more embryos 80 to be observed; and • a cover 30.
[75] De sorte à pouvoir voir les embryons 80 au travers de la boîte de Pétri 10, celle-ci est fabriquée dans un matériau transparent à la lumière émise par le système d’éclairage 110 comme évoqué précédemment. Cette lumière est en général dans le domaine du visible (soit approximativement entre 400 nm et 800 nm). Ainsi le matériau utilisé peut être du verre ou un matériau plastique par exemple.[75] So that the embryos 80 can be seen through the Petri dish 10, it is made of a material transparent to the light emitted by the lighting system 110 as mentioned above. This light is generally in the visible range (approximately between 400 nm and 800 nm). Thus the material used can be glass or a plastic material for example.
[76] En référence à la Figure 8b, le fond du récipient 20 comprend une mire de centrage 40 et un élément d’identification 50 adaptés pour permettre l’identification du ou des embryons 80 observés.[76] Referring to Figure 8b, the bottom of the container 20 comprises a centering pattern 40 and an identification element 50 adapted to allow the identification of the embryo (s) 80 observed.
[77] Selon le mode de réalisation présenté dans la Figure 8b, la boîte de Pétri 10 est de forme rectangulaire.[77] According to the embodiment shown in Figure 8b, the Petri dish 10 is rectangular.
[78] La mire de centrage 40 peut être un ensemble de symboles permettant de pouvoir orienter la boîte de Pétri 10 dans l’espace et aussi de définir un repère géométrique permettant de déterminer la position de l’élément d’identification 50 ainsi que la position approximative du ou des embryons 80 à observer par rapport à la mire de centrage 40, en fonction des caractéristiques de la boîte de Pétri 10.[78] The centering pattern 40 can be a set of symbols making it possible to orient the Petri dish 10 in space and also to define a geometric reference making it possible to determine the position of the identification element 50 as well as the approximate position of the embryo (s) 80 to be observed relative to the centering pattern 40, as a function of the characteristics of the Petri dish 10.
[79] Dans le mode de réalisation présenté Figure 8b la mire de centrage 40 comprend trois carrés pleins 40a disposés dans trois coins d’un carré imaginaire un peu plus grand représenté en pointillé sur la figure. Dans ce mode de réalisation, les dimensions de la boîte de Pétri 10 par rapport au support 1 comprenant un pion d’arrêt 1a font que la boîte de Pétri 10, ne peut être insérée que dans deux positions différentes : soit la mire de centrage 40 est localisée du côté du pion d’arrêt 1a, soit elle est à l’opposé comme c’est le cas sur la Figure 8b. Ainsi selon l’orientation des carrés pleins 40a de la mire de centrage 40, il est possible de définir une origine (le centre du carré imaginaire par exemple) ainsi qu’un repère géométrique (X, Y, Z) orienté selon l’orientation de la mire de centrage 40.[79] In the embodiment shown in Figure 8b the centering pattern 40 comprises three solid squares 40a arranged in three corners of a slightly larger imaginary square shown in dotted lines in the figure. In this embodiment, the dimensions of the Petri dish 10 relative to the support 1 comprising a stop pin 1a mean that the Petri dish 10 can only be inserted in two different positions: either the centering rod 40 is located on the side of the stop pin 1a, or it is opposite as is the case in Figure 8b. Thus, according to the orientation of the solid squares 40a of the centering target 40, it is possible to define an origin (the center of the imaginary square for example) as well as a geometric coordinate system (X, Y, Z) oriented according to the orientation of the test pattern 40.
[80] Ainsi, la mire de centrage 40 permet un repérage spatial du fond récipient 20 et par conséquent une indexation de la position / de l’orientation du fond de la boîte de Pétri 10 et des éléments associés à celle-ci comme la position de l’élément d’identification 50 et la position du ou des embryons 80 par rapport à la mire de centrage 40.[80] Thus, the centering target 40 allows a spatial identification of the container bottom 20 and therefore an indexing of the position / orientation of the bottom of the Petri dish 10 and of the elements associated with it such as the position of the identification element 50 and the position of the embryo (s) 80 relative to the centering pattern 40.
[81] L’élément d’identification 50 peut par exemple être un code-barres ou bien un code 2D, de type data-matrix comme représenté sur la Figure 8b. Cet élément d’identification 50 permet notamment de connaître les informations relatives au contenu de la boîte de Pétri 10, c’est-à-dire aux embryons 80 qu’elle contient, telles que le couple de patients auquel appartiennent les embryons 80, le nombre d’embryons 80 présents dans la boîte, la date de préparation et de mise en place des embryons 80, etc. au travers d’une base de données préalablement renseignée.[81] The identification element 50 can for example be a barcode or else a 2D code, of the data-matrix type as shown in FIG. 8b. This identification element 50 makes it possible in particular to know the information relating to the content of the Petri dish 10, that is to say to the embryos 80 which it contains, such as the pair of patients to which the embryos 80 belong, the number of embryos 80 present in the box, the date of preparation and placement of the embryos 80, etc. through a database previously informed.
[82] Selon ce mode de réalisation, les embryons 80 sont répartis de manière linéaire sur une ou plusieurs rangées comme c’est le cas pour la boîte de Pétri 10 rectangulaire illustrée sur la Figure 8b.[82] According to this embodiment, the embryos 80 are distributed linearly over one or more rows as is the case for the rectangular Petri dish 10 illustrated in FIG. 8b.
[83] Selon un mode de réalisation particulier de la boîte de Pétri 10 illustré Figure 9, le fond du récipient 20 comprend avantageusement au moins un réservoir à embryon 60 comprenant en son centre une cupule 61 adaptée pour recevoir un embryon 80, le réservoir 60 étant également adapté pour recevoir, en plus l’embryon 80 dans la cupule 61, une goutte d’un milieu de culture 62 (typiquement de l’ordre de 6 pl), les positions relatives du réservoir 60 et de la cupule 61 par rapport à mire de centrage 40 étant connue et faisant partie des caractéristiques de la boîte de Pétri 10. Le diamètre de la cupule est typiquement de l’ordre de 1 mm et sa capacité de l’ordre de 0,75 pl. La zone où se trouve le milieu de culture 62 est délimitée par une surélévation du fond du récipient 20 ou bosse 64.[83] According to a particular embodiment of the Petri dish 10 illustrated in FIG. 9, the bottom of the container 20 advantageously comprises at least one embryo reservoir 60 comprising in its center a cup 61 adapted to receive an embryo 80, the reservoir 60 also being adapted to receive, in addition to the embryo 80 in the cup 61, a drop of a culture medium 62 (typically of the order of 6 μl), the relative positions of the reservoir 60 and of the cup 61 relative to centering target 40 being known and forming part of the characteristics of the Petri dish 10. The diameter of the well is typically of the order of 1 mm and its capacity of the order of 0.75 μl. The zone in which the culture medium 62 is located is delimited by an elevation of the bottom of the container 20 or hump 64.
[84] L’ensemble formé par au moins l’embryon 80, la goutte de milieu de culture 62 est ensuite recouvert d’un liquide 63 de type huile, ou de l’eau. Pour cela, les bords du récipient 20 doivent être suffisamment hauts, typiquement de l’ordre de 5 à 10 mm.[84] The assembly formed by at least the embryo 80, the drop of culture medium 62 is then covered with a liquid 63 of oil type, or water. For this, the edges of the container 20 must be sufficiently high, typically of the order of 5 to 10 mm.
[85] Selon un autre mode de réalisation, illustré dans les Figures 10a à 10c et similaire à la celui présenté dans les Figures 8a et 8b, la boîte de Pétri 10 est solidaire d’une plaque transparente 11 comprenant un ergo de préhension 12 permettant une manipulation aisée de la boîte Pétri 10. Cela évite le risque de salir le fond du récipient 20 ou le couvercle 30 ce qui perturberait l’observation de l’embryon 80 et la qualité des images prises par le dispositif 100. Avantageusement, l’ergo de préhension 12 comprend une zone de marquage 13 sur laquelle il est possible d’apposer la mire de centrage 40 ainsi que l’élément d’identification 50 plutôt que dans sur le fond du récipient 20.[85] According to another embodiment, illustrated in Figures 10a to 10c and similar to that presented in Figures 8a and 8b, the Petri dish 10 is secured to a transparent plate 11 comprising a gripping ergo 12 allowing easy handling of the Petri dish 10. This avoids the risk of dirtying the bottom of the container 20 or the cover 30 which would disturb the observation of the embryo 80 and the quality of the images taken by the device 100. Advantageously, the gripping ergo 12 comprises a marking zone 13 on which it is possible to affix the centering target 40 as well as the identification element 50 rather than in the bottom of the container 20.
[86] La Figure 11a représente un autre mode de réalisation particulier de la boîte de Pétri 10. Dans cet exemple, la boîte de Pétri 10 est circulaire et peut être du commerce telle que la boîte commercialisée par la société Corning Falcon de référence 353655.[86] Figure 11a shows another particular embodiment of the Petri dish 10. In this example, the Petri dish 10 is circular and can be commercial such as the box sold by the company Corning Falcon reference 353655.
[87] L’élément d’identification 50 représenté sur cette Figure 11a est un code-barres accompagné du code alphanumérique correspondant selon la codification choisi par l’utilisateur.[87] The identification element 50 represented in this Figure 11a is a bar code accompanied by the corresponding alphanumeric code according to the coding chosen by the user.
[88] Selon ce mode de réalisation, la boîte de Pétri 10 comprend ici en outre un système de repérage et d’aide à la dépose 70 d’un ou plusieurs embryons 80, ce système de repérage et d’aide 70 comprend au moins deux cercles concentriques, comme illustrés sur la Figure 11a.[88] According to this embodiment, the Petri dish 10 here further comprises a tracking and assistance system for the removal 70 of one or more embryos 80, this tracking and assistance system 70 comprises at least two concentric circles, as shown in Figure 11a.
[89] Le premier cercle 71 est adapté pour délimiter la zone utile pour recevoir un embryon 80. Son diamètre D1 est typiquement de l’ordre de 2 mm.[89] The first circle 71 is adapted to delimit the useful area for receiving an embryo 80. Its diameter D1 is typically of the order of 2 mm.
[90] Le second cercle 72, de diamètre D2 supérieur au diamètre du premier cercle 71 et concentrique à celui-ci, est adapté pour délimiter une zone où déposer une goutte d’un milieu de culture 62 qui va recouvrir l’embryon 80. Son diamètre est quant à lui de l’ordre de 4 mm.[90] The second circle 72, of diameter D2 greater than the diameter of the first circle 71 and concentric with it, is adapted to delimit an area in which to deposit a drop of a culture medium 62 which will cover the embryo 80. Its diameter is about 4 mm.
[91] Enfin, les bords du récipient 20 sont suffisamment hauts de sorte à pouvoir déposer une quantité de liquide 63, de type huile, ou de l’eau, pour recouvrir l’ensemble formé par la goutte de milieu de culture 62 et l’embryon 80, typiquement de l’ordre de 5 à 10 mm.[91] Finally, the edges of the container 20 are sufficiently high so as to be able to deposit a quantity of liquid 63, of the oil type, or of water, to cover the assembly formed by the drop of culture medium 62 and l embryo 80, typically of the order of 5 to 10 mm.
[92] Dans ce mode de réalisation, les embryons 80 et donc les « zones de dépose » sont répartis selon un cercle de diamètre inférieur à celui de la boîte de Pétri 10.[92] In this embodiment, the embryos 80 and therefore the “deposition zones” are distributed in a circle with a diameter smaller than that of the Petri dish 10.
[93] La Figure 11b représente une vue de profil de la boîte de Pétri 10 (sans le couvercle 30) de la Figure 11a selon la coupe A-A. Le récipient 20 présente ici un fond 25 plat sur lequel les embryons 80 sont déposés.[93] Figure 11b shows a side view of the Petri dish 10 (without the cover 30) of Figure 11a according to section A-A. The container 20 here has a flat bottom 25 on which the embryos 80 are deposited.
[94] Avantageusement, les « zones de dépose » définies soit par le réservoir à embryon 60, soit par le système de repérage et d’aide 70, et comprenant chacune un embryon 80 sont repérées par une numérotation 90 pour faciliter leur indexation et donc l’identification de chaque embryon 80.[94] Advantageously, the “deposition zones” defined either by the embryo reservoir 60 or by the tracking and assistance system 70, and each comprising an embryo 80 are identified by a number 90 to facilitate their indexing and therefore identification of each embryo 80.
[95] Selon le mode de réalisation, la mire de centrage 40 et/ou l’élément d’identification 50 peuvent être réalisés directement dans la matière, par usinage du fond du récipient 20 sur sa face interne ou externe, ou par apposition d’une étiquette et/ou de repères autocollants sur le fond extérieur du récipient 20.[95] According to the embodiment, the centering target 40 and / or the identification element 50 can be produced directly in the material, by machining the bottom of the container 20 on its internal or external face, or by affixing d '' a label and / or self-adhesive marks on the outside of the container 20.
[96] Le réservoir à embryon 60 et le système de repérage et d’aide 70 sont eux, de préférence, gravé dans le récipient 20 ou sont façonnés directement lors du moulage du récipient 20.[96] The embryo reservoir 60 and the tracking and aid system 70 are preferably engraved in the container 20 or are shaped directly during the molding of the container 20.
[97] Dans un troisième temps un procédé de d’observation du développement d’embryons par un dispositif d’imagerie 100 tel que défini précédemment va être détaillée ci-dessous. Comme précédemment indiqué, il est à noter que ce procédé peut également être généralisé et utilisé dans le cadre de l’observation d’autres types de cellule ou d’ensemble de cellules vivantes. Il suffit pour cela de remplacer le terme « embryon » utilisé ci-dessous par « cellule ou ensemble de cellules vivantes».[97] Thirdly, a method for observing the development of embryos by an imaging device 100 as defined above will be detailed below. As previously indicated, it should be noted that this method can also be generalized and used in the context of the observation of other types of cell or set of living cells. It suffices to replace the term "embryo" used below with "cell or set of living cells".
[98] Selon un premier mode de réalisation général du procédé illustré Figure 12, celui-ci comprend quatre étapes principales :[98] According to a first general embodiment of the method illustrated in FIG. 12, it comprises four main steps:
- une étape de préparation S300 ;- an S300 preparation step;
- une étape de repérage S302 ;- a locating step S302;
- une étape d’identification S304 ; et- an identification step S304; and
- une étape d’observation S310.- an observation step S310.
[99] La première étape, l’étape de préparation S300, consiste à déposer successivement un embryon 80 puis une goutte d’un milieu de culture 62 (ou inversement une goutte d’un milieu de culture 62 puis un embryon 80) puis de recommencer l’opération en fonction du nombre d’embryons 80 à observer souhaité et enfin recouvrir le tout avec un liquide 63, de type huile, ou de l’eau, dans une boîte de Pétri 10 telle que définie précédemment.[99] The first step, the preparation step S300, consists in successively depositing an embryo 80 then a drop of a culture medium 62 (or conversely a drop of a culture medium 62 then an embryo 80) then repeat the operation as a function of the number of embryos 80 to be observed desired and finally cover the whole with a liquid 63, of oil type, or water, in a Petri dish 10 as defined above.
[100] Selon la boîte de Pétri 10 utilisée, l’embryon 80 peut être déposé dans la cupule 61 puis recouvert par un goutte d’un milieu de culture 62 dans le réservoir à embryon 60 ou l’embryon 80 peut être déposé à l’intérieur du premier cercle 71 du système de repérage et d’aide à la pose des embryons 70, et la goutte d’un milieu de culture 62 dans le second cercle 72 du système de repérage et d’aide à la pose des embryons 70 définis précédemment.[100] Depending on the Petri dish 10 used, the embryo 80 can be deposited in the cup 61 and then covered with a drop of culture medium 62 in the embryo tank 60 or the embryo 80 can be deposited inside the first circle 71 of the system for locating and assisting in the placement of embryos 70, and the drop of a culture medium 62 in the second circle 72 of the system for locating and assisting in the placement of embryos 70 previously defined.
[101 ] Avantageusement, suite à cette opération de préparation ou de dépose des embryons 80, une base de données peut être remplie par le préparateur avec les caractéristiques de la boîte Pétri 10 et surtout les données liées aux embryons 80 déposés dans la boîte de Pétri 10 telles que : le couple de patients auquel appartiennent les embryons 80, le nombre d’embryons 80 présents dans la boîte et éventuellement le numéro des emplacements 90 ou « zones de dépose » correspondant, la date de préparation et de mise en place des embryons 80, etc.[101] Advantageously, following this operation of preparing or depositing the embryos 80, a database can be filled in by the preparer with the characteristics of the petri dish 10 and especially the data related to the embryos 80 deposited in the petri dish 10 such as: the couple of patients to which the embryos 80 belong, the number of embryos 80 present in the box and possibly the number of the corresponding locations 90 or “drop-off areas”, the date of preparation and placement of the embryos 80, etc.
[102] La seconde étape, l’étape de repérage S302 de la boîte de Pétri 10 consiste à détecter et visualiser la mire de centrage 40 de la boîte de Pétri 10 dans laquelle se trouve le ou les embryons 80 à observer de sorte à pouvoir en déduire la position de l’élément d’identification 50 et la position approximative du ou des embryons 80 par rapport à la mire de centrage 40 en fonction des caractéristiques de la boîte de Pétri 10.[102] The second step, the step S302 of locating the Petri dish 10 consists in detecting and visualizing the centering pattern 40 of the Petri dish 10 in which the embryo (s) 80 is to be observed so as to be able to deduce therefrom the position of the identification element 50 and the approximate position of the embryo (s) 80 relative to the centering pattern 40 as a function of the characteristics of the Petri dish 10.
[103] La mire de centrage 40 est détectée et imagée par la caméra grand champ 121 du dispositif d’imagerie 100 puis l’unité de traitement du premier système d’imagerie 120 analyse les images prises par la caméra grand champ 121 et permet de définir un repère géométrique (X, Y, Z) dont le centre peut par exemple être le centre de la mire de centrage 40. La mire de centrage 40 permet aussi d’orienter dans l’espace la boîte de Pétri 10 et son contenu, notamment l’élément d’identification 50 et le ou les embryons 80 déposés ou les « zones de dépose » des embryons 80, par rapport au dispositif d’imagerie 100 et donc aussi par rapport aux moyens de déplacement.[103] The centering pattern 40 is detected and imaged by the wide field camera 121 of the imaging device 100 then the processing unit of the first imaging system 120 analyzes the images taken by the wide field camera 121 and makes it possible to define a geometric coordinate system (X, Y, Z) whose center can for example be the center of the centering pattern 40. The centering pattern 40 also makes it possible to orient the Petri dish 10 and its content in space, in particular the identification element 50 and the embryo (s) 80 deposited or the “deposition zones” of the embryos 80, with respect to the imaging device 100 and therefore also with respect to the means of movement.
[104] Pour faciliter la détection de la mire de centrage 40, les moyens de déplacement peuvent permettre d’effectuer soit une sorte de balayage de la surface du support 1 sur lequel est posé la boîte de Pétri 10 par déplacement relatif de la boîte de Pétri 10 et de l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage 110 et la caméra grand champ 121, soit de se positionner sur des positions prédéfinies où le système d’éclairage 110 doit éclairer la mire de centrage 40 qui doit être dans le champ de la caméra grand champ 121.[104] To facilitate the detection of the centering pattern 40, the displacement means can make it possible to carry out either a sort of scanning of the surface of the support 1 on which the Petri dish 10 is placed by relative displacement of the dish. Petri dish 10 and of the assembly formed by at least the lighting system 110 and the wide-field camera 121, that is to position themselves in predefined positions where the lighting system 110 must illuminate the centering pattern 40 which must be in the field of the wide field camera 121.
[105] La troisième étape, dite étape d’identification S304 du ou des embryons 80 à observer consiste à imager et analyser, à l’aide du premier système d’imagerie 120, l’élément d’identification 50 de la boîte de Pétri 10 dans laquelle se trouve le ou les embryons 80 à observer.[105] The third step, called the identification step S304 of the embryo (s) 80 to be observed, consists in imaging and analyzing, using the first imaging system 120, the identification element 50 of the petri dish 10 in which the embryo (s) 80 is to be observed.
[106] Pour cela, après avoir défini le repère géométrique grâce à l’étape de repérage S302 et déterminer la position de l’élément d’identification 50 et de la position approximative du ou des embryons 80 à observer, les moyens de déplacement déplacent soit la boîte de Pétri 10, soit l’ensemble constitué par au moins le système d’éclairage 110 et la caméra grand champ 121 de sorte à ce que le système d’éclairage 110 éclaire l’élément d’identification 50 et que la caméra grand champ 121 détecte et image cet élément d’identification 50.[106] For this, after defining the geometrical coordinate system using the locating step S302 and determining the position of the identification element 50 and the approximate position of the embryo (s) 80 to be observed, the displacement means move either the Petri dish 10, or the assembly consisting of at least the lighting system 110 and the wide-field camera 121 so that the lighting system 110 illuminates the identification element 50 and the camera large field 121 detects and images this identifying element 50.
[107] Puis l’unité de traitement du premier système d’imagerie 120 analyse l’image prise par la caméra grand champ 121 et permet d’analyser l’élément d’identification 50 pour remonter aux caractéristiques de la boîte de Pétri 10 observée via une base de données préalablement remplie.[107] Then the processing unit of the first imaging system 120 analyzes the image taken by the wide-field camera 121 and makes it possible to analyze the identification element 50 to go back to the characteristics of the Petri dish 10 observed via a database previously filled.
[108] La quatrième étape, dite étape d’observation S310 consiste à imager un premier embryon 80 à l’aide du second système d’imagerie 130.[108] The fourth step, called observation step S310, consists in imaging a first embryo 80 using the second imaging system 130.
[109] Pour cela, les moyens de déplacement déplacent relativement la boîte de Pétri 10 et l’ensemble constitué par au moins le système d’éclairage 110 et la caméra petit champ 131 au niveau de la position approximative du premier embryon 80 précédemment déterminée, de sorte à ce que le système d’éclairage 110 éclaire le premier embryon 80 et que la caméra petit champ 131 image celui-ci.[109] For this, the displacement means relatively move the Petri dish 10 and the assembly constituted by at least the lighting system 110 and the small field camera 131 at the approximate position of the first embryo 80 previously determined, so that the lighting system 110 illuminates the first embryo 80 and that the small field camera 131 images it.
[110] Avantageusement, lors de cette étape d’observation S310, il sera possible de compter le nombre de cellules présentes dans l’embryon 80 observé ou d’observer la texture et le grain de ces cellules grâce au second système d’imagerie 130 et éventuellement aussi grâce à un éclairage adapté.[110] Advantageously, during this observation step S310, it will be possible to count the number of cells present in the embryo 80 observed or to observe the texture and the grain of these cells thanks to the second imaging system 130 and possibly also thanks to suitable lighting.
[111 ] La Figure 13 présente le synoptique d’un autre mode de réalisation du procédé d’observation comprenant des étapes supplémentaires optionnelles représentées en pointillé dans le schéma.[111] Figure 13 shows the block diagram of another embodiment of the observation method comprising optional additional steps shown in dotted lines in the diagram.
[112] L’embryon 80 pouvant se déplacer au cours de son développement dans la goutte de milieu de culture 62, il est avantageux, de rajouter une étape intermédiaire avant l’observation de l’embryon 80 dite étape de centrage S306. Cette étape facultative de centrage S306, consiste dans un premier temps à détecter la position exacte de l’embryon 80 à observer à l’aide du premier système d’imagerie 120, lorsque l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage 110 et la caméra grand champ 121 est positionné (ou la boîte de Pétri 10 selon l’ensemble qui est déplacé par les moyens de déplacement) sur la position approximative de l’embryon 80 à observer défini grâce à l’étape de repérage S302, puis à positionner l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage 110 et le second système d’imagerie 130 (ou la boîte de Pétri 10) sur la position exacte de l’embryon 80 à observer à l’aide des moyens de déplacement de sorte à précentrer l’embryon 80 dans le champ de la caméra petit champ 131.[112] Since the embryo 80 can move during its development in the drop of culture medium 62, it is advantageous to add an intermediate step before observing the embryo 80, known as the centering step S306. This optional centering step S306 consists firstly in detecting the exact position of the embryo 80 to be observed using the first imaging system 120, when the assembly formed by at least the lighting system 110 and the wide field camera 121 is positioned (or the Petri dish 10 depending on the assembly which is moved by the displacement means) on the approximate position of the embryo 80 to be observed defined by the locating step S302, then positioning the assembly formed by at least the lighting system 110 and the second imaging system 130 (or the Petri dish 10) on the exact position of the embryo 80 to be observed using the displacement means so as to pre-center the embryo 80 in the field of the small field camera 131.
[113] Une autre méthode de centrage de l’embryon 80 dans le champ de la caméra petit champ 131, qui peut venir en complément ou en remplacement de l’étape de centrage S306, s’appelle l’étape d’ajustement S308. Cette étape facultative d’ajustement S308, consiste à déplacer relativement la boîte de Pétri 10 et l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage 110 et la caméra petit champ 131 soit sur la position approximative de l’embryon 80 à observer comme déterminé dans l’étape de repérage S302, soit sur la position exacte de l’embryon 80 comme déterminé dans l’étape de centrage S306, puis de détecter à l’aide du second système d’imagerie 130 l’embryon 80 et sa position dans l’image de la caméra petit champ 131 pour le recentrer ensuite dans le champ de la caméra petit champ 131 à l’aide des moyens de déplacement, en déplaçant relativement la boîte de Pétri 10 et l’ensemble formé par au moins formé le système d’éclairage 110 et la caméra petit champ 131. Pour cela, l’unité de traitement du second système d’imagerie 130 peut déterminer la position du centre de l’embryon 80 observé et calculer le déplacement à effectuer pour positionner le centre de l’embryon 80 dans le centre du champ de la caméra petit champ 131 puis envoyer les consignes correspondantes aux moyens de déplacement.[113] Another method of centering the embryo 80 in the field of the small-field camera 131, which can complement or replace the centering step S306, is called the adjustment step S308. This optional adjustment step S308 consists in relatively moving the Petri dish 10 and the assembly formed by at least the lighting system 110 and the small field camera 131, ie to the approximate position of the embryo 80 to be observed as determined in the locating step S302, that is to say on the exact position of the embryo 80 as determined in the centering step S306, then detecting, using the second imaging system 130, the embryo 80 and its position in the image of the small field camera 131 to then refocus it in the field of the small field camera 131 using the displacement means, relatively moving the Petri dish 10 and the assembly formed by at least formed the lighting system 110 and the small field camera 131. For this, the processing unit of the second imaging system 130 can determine the position of the center of the embryo 80 observed and calculate the displacement to be carried out er to position the center of the embryo 80 in the center of the field of the small field camera 131 then send the corresponding instructions to the means of movement.
[114] De sorte à pouvoir observer un autre embryon 80 ou à pouvoir observer l’embryon 80 dans sa profondeur, une étape de déplacement S312 peut être réalisée à l’aide des moyens de déplacement suite à l’étape d’observation S310.[114] So as to be able to observe another embryo 80 or to be able to observe the embryo 80 in its depth, a displacement step S312 can be carried out using the displacement means following the observation step S310.
[115] Dans le cas de l’observation d’un autre embryon 80, le déplacement relatif entre la boîte de Pétri 10 et de l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage 110 et la caméra petit champ 131 se fait selon un plan parallèle au plan horizontal défini par la boîte de Pétri 10 ou à celui défini par le support 1 sur lequel est posée la boîte de Pétri 10. Le déplacement se fait de sorte à ce que l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage 110 et la caméra petit champ 131 soit positionné au niveau de la position approximative du nouvel embryon 80 à observer tel que déterminé dans l’étape de repérage S302.[115] In the case of the observation of another embryo 80, the relative displacement between the Petri dish 10 and the assembly formed by at least the lighting system 110 and the small field camera 131 is done according to a plane parallel to the horizontal plane defined by the Petri dish 10 or to that defined by the support 1 on which the Petri dish 10 is placed. The movement is done so that the assembly formed by at least the system d lighting 110 and the small field camera 131 is positioned at the approximate position of the new embryo 80 to be observed as determined in step S302.
[116] Avant d’observer le nouvel embryon 80, il est possible de refaire un pré-centrage selon l’étape de centrage S306 puis un ajustement selon l’étape d’ajustement S308 de la position du nouvel embryon 80 à observer de sorte à ce qu’il soit bien centré dans le champ de la caméra petit champ 131 et donc entier dans l’image. Cette étape de déplacement horizontal S312a peut être répétée autant de fois qu’il y a d’embryons 80 à observer.[116] Before observing the new embryo 80, it is possible to redo a pre-centering according to the centering step S306 then an adjustment according to the adjustment step S308 of the position of the new embryo 80 to be observed so that it is well centered in the field of the camera small field 131 and therefore whole in the image. This step of horizontal displacement S312a can be repeated as many times as there are embryos 80 to be observed.
[117] Il est à noter que pour gagner du temps lors de l’observation de plusieurs embryons, l’unité de traitement du premier système d’imagerie 120 comme celle du second système d’imagerie 130 peuvent conserver en mémoire les positions précédentes des embryons 80 observés (i.e. les positions approximatives, exactes et ajustées) pour pouvoir commander aux moyens de déplacement d’aller directement à ces positions. Ainsi, le timelapse entre deux prises d’image d’un même embryon est diminué et l’évolution temporelle de l’embryon est mieux observée.[117] It should be noted that in order to save time when observing several embryos, the processing unit of the first imaging system 120 as well as that of the second imaging system 130 can store the previous positions of the 80 embryos observed (ie approximate, exact and adjusted positions) in order to be able to command the displacement means to go directly to these positions. Thus, the timelapse between two images of the same embryo is reduced and the temporal evolution of the embryo is better observed.
[118] Dans le cas de l’observation de l’embryon 80 dans sa profondeur, le déplacement relatif entre la boîte de Pétri 10 et l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage 110 et la caméra petit champ 131 se fait cette fois-ci perpendiculairement au plan horizontal défini par la boîte de Pétri 10 ou à celui défini par le support 1 sur lequel est posé la boîte de Pétri 10. Ce déplacement est de l’ordre de quelques micromètres (par exemple de 5 pm à 100 pm, typiquement de 20 pm). Cette étape de déplacement vertical S312b peut être répétée autant de fois que nécessaire afin d’observer l’embryon 80 sur toute sa profondeur.[118] In the case of observing the embryo 80 in its depth, the relative displacement between the Petri dish 10 and the assembly formed by at least the lighting system 110 and the small field camera 131 is done this time perpendicular to the horizontal plane defined by the Petri dish 10 or to that defined by the support 1 on which the Petri dish is placed 10. This displacement is of the order of a few micrometers (for example from 5 pm to 100 pm, typically 20 pm). This step of vertical displacement S312b can be repeated as many times as necessary in order to observe the embryo 80 over its entire depth.
[119] Il est à noter qu’un dispositif d’imagerie 100 peut fonctionner avec différents types de boîte de Pétri 10 comme précédemment définis : des boîtes rectangulaires avec des « zones de dépose » réparties linéairement ou des boîtes circulaires avec des « zones de dépose » réparties selon un cercle de diamètre inférieur à celui de la boîte de Pétri 10. Ainsi pour connaître le type de boîte utilisé, il est possible d’avoir différents types de mire de centrage 40 un pour chaque forme de boîte de Pétri 10.[119] It should be noted that an imaging device 100 can operate with different types of Petri dish 10 as previously defined: rectangular dishes with “drop-off areas” distributed linearly or circular dishes with “drop-off areas”. deposit »distributed in a circle with a diameter smaller than that of the Petri dish 10. Thus to find out the type of dish used, it is possible to have different types of centering pattern 40 one for each shape of Petri dish 10.
[120] Sinon, il est possible de n’avoir qu’une seule mire de centrage 40 mais dans ce cas-là, l’information sur la forme de la boîte de Pétri 10 et donc sur la position des éléments qui la composent (élément d’identification 50 et embryons 80, système de repérage 70, réservoir à embryon 60, etc.) doit être renseignée via l’élément d’identification 50. La détermination de la position approximative du ou des embryons 80 contenus dans la boîte de Pétri 10 ne pourra alors se faire que dans l’étape d’identification.[120] Otherwise, it is possible to have only one centering pattern 40 but in this case, information on the shape of the Petri dish 10 and therefore on the position of the elements which compose it ( identification element 50 and embryos 80, tracking system 70, embryo reservoir 60, etc.) must be entered via identification element 50. The determination of the approximate position of the embryo (s) 80 contained in the box Pétri 10 can only be done in the identification step.
[121] Dans le cas où un dispositif d’imagerie 100 peut contenir plusieurs boîtes de Pétri, la position des boîtes dans le dispositif 100 pourra être détectée via un balayage de la surface du support 1 sur lequel sont disposées les boîtes de Pétri à l’aide des moyens de déplacement déplaçant relativement les boîtes de Pétri et l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage 110 et la caméra grand champ 121, et à l’aide du premier système d’imagerie 120 qui détectera et analysera le nombre de mire de centrage 40 présentes. Ou bien, le support 1 sera adapté pour définir une zone prédéterminée pour chaque boîte, par exemple par un système de tiroir ou de pions d’arrêt ou cales.[121] In the case where an imaging device 100 can contain several Petri dishes, the position of the dishes in the device 100 can be detected by scanning the surface of the support 1 on which the Petri dishes are placed on the surface. using displacement means relatively moving the Petri dishes and the assembly formed by at least the lighting system 110 and the wide field camera 121, and using the first imaging system 120 which will detect and analyze the number of focus rods 40 present. Or, the support 1 will be adapted to define a predetermined area for each box, for example by a system of drawers or stop pins or wedges.
[122] Pour pouvoir observer l’évolution du développement d’un embryon 80 dans son ensemble les images prises par la caméra petit champ 131 pourront être enregistrées en prenant soin d’identifier l’embryon 80 et la date et l’heure de la prise de vue.[122] In order to be able to observe the development of an embryo 80 as a whole, the images taken by the small field camera 131 can be recorded, taking care to identify the embryo 80 and the date and time of the shooting.
[123] L’invention porte également un produit programme d’ordinateur téléchargeable depuis un réseau de communication et/ou enregistré sur un support lisible par ordinateur et/ou exécutable par un processeur. Ce programme d’ordinateur comprend des instructions de code de programme pour la mise en œuvre du procédé d’observation du développement d’embryons (respectivement d’une cellule ou d’un ensemble de cellules vivantes) tel que précédemment défini.[123] The invention also relates to a computer program product downloadable from a communication network and / or recorded on a medium readable by computer and / or executable by a processor. This computer program includes program code instructions for implementing the process for observing the development of embryos (respectively of a cell or of a set of living cells) as defined above.
[124] Pour optimiser l’observation des embryons 80 et notamment réduire au maximum l’écart entre chaque prise de vue par la caméra petit champ 131, le programme ordinateur pourra optimiser le déplacement de l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage 110 et la caméra petit champ 131 grâce à la connaissance des positions approximatives des embryons 80, et/ou à la position exacte ou réajustée qui pourront être gardées en mémoire.[124] To optimize the observation of embryos 80 and in particular to minimize the difference between each shot by the small field camera 131, the computer program can optimize the movement of the assembly formed by at least the system of lighting 110 and the small field camera 131 thanks to the knowledge of the approximate positions of the embryos 80, and / or to the exact or readjusted position which can be kept in memory.
[125] Avantageusement, ce programme d’ordinateur pourra également permettre de visionner les images prises d’un embryon 80 soit sous forme d’une vidéo retraçant son évolution au fil du temps, soit image par image.[125] Advantageously, this computer program may also make it possible to view the images taken from an embryo 80 either in the form of a video retracing its evolution over time, or image by image.
[126] L’invention telle que précédemment décrite présente de multiples avantages.[126] The invention as previously described has multiple advantages.
[127] Le dispositif d’imagerie n’est plus équipé d’un jeu d’objectifs de grossissements différents à manipuler manuellement comme sur les microscopes actuels mais il est équipé de deux caméras :[127] The imaging device is no longer equipped with a set of different magnification objectives to be manipulated manually as on current microscopes, but it is equipped with two cameras:
- une caméra grand champ 121 permettant l’identification de la boîte de Pétri 10 donc des cellules ou ensembles de cellules vivantes ou des embryons 80 contenus à l’intérieur et permettant aussi la détection de ces cellules ou ensembles de cellules vivantes ou embryons afin de déterminer leur position pour pouvoir positionner au mieux (i.e. de centrer) l’ensemble formé par au moins le système d’éclairage 110 et la caméra petit champ 131 pour une bonne observation (i.e. cellule ou ensemble de cellules vivantes centré dans le champ de la caméra petit champ et non plus en bord de champ) ;- a wide field camera 121 allowing the identification of the Petri dish 10 therefore cells or sets of living cells or embryos 80 contained inside and also allowing the detection of these cells or sets of living cells or embryos in order to determine their position in order to be able to position at best (ie to center) the assembly formed by at least the lighting system 110 and the small field camera 131 for good observation (ie cell or set of living cells centered in the field of small field camera and no longer at the edge of the field);
- une caméra petit champ 131 permettant l’observation haute résolution de la cellule ou l’ensemble de cellules vivantes ou de l’embryon (i.e. l’observation des cellules le composant).- a small field camera 131 allowing the high resolution observation of the cell or the set of living cells or of the embryo (i.e. observation of the cells making it up).
[128] Les contraintes vis-à-vis de la dépose des embryons 80 (ou des cellules ou ensembles de cellules vivantes) qui peuvent se déplacer, sont donc relâchées et l’observation est améliorée car les embryons (respectivement les cellules ou ensembles de cellules vivantes) sont centrés dans le champ de la caméra petit champ 131, là où les performances optiques sont optimales.[128] The constraints on the removal of embryos 80 (or cells or sets of living cells) which can move, are therefore relaxed and observation is improved because the embryos (respectively cells or sets of living cells) are centered in the field of the small field camera 131, where the optical performance is optimal.
[129] Les différents types d’éclairage que peut comprendre le dispositif d’observation permettent d’optimiser les traitements d’image associés aux différentes phases du processus d’observation tel que l’identification de la boîte de Pétri et donc des embryons, leur détection par le premier ou le second système d’imagerie 120 et 130 pour permettre leur centrage dans le champ de la caméra petit champ 131, ou encore le comptage du nombre de cellules présentes dans l’embryon 80 observé.[129] The different types of lighting that the observation device can include make it possible to optimize the image processing associated with the different phases of the observation process such as the identification of the Petri dish and therefore of the embryos, their detection by the first or second imaging system 120 and 130 to allow their centering in the field of the small field camera 131, or even the counting of the number of cells present in the embryo 80 observed.
[130] Enfin, le processus d’observation est optimisé de manière à permettre un suivi régulier et un time-lapse le plus court possible entre deux prises de vue d’un même embryon pour aider au mieux la sélection de celui-ci avant son implantation et dont la chronologie de la division cellulaire et l’aspect de ces cellules sont des critères importants pour la réussite de la FIV.[130] Finally, the observation process is optimized so as to allow regular monitoring and the shortest time-lapse possible between two shots of the same embryo to best help the selection of the latter before its implantation and whose chronology of cell division and the appearance of these cells are important criteria for the success of IVF.
[131] La description et les dessins illustrent simplement les principes de l'invention. On comprendra ainsi que l'homme du métier sera capable de concevoir diverses variantes qui, bien que non explicitement décrites ou illustrées ici, incorporent les principes de l'invention. En outre, tous les exemples cités ici sont principalement destinés à des fins pédagogiques pour aider le lecteur à comprendre les principes de l'invention et les concepts apportés par l'inventeur à l'art antérieur et doivent être interprétés comme étant sans limitation à ces exemples et conditions spécifiquement cités. Par ailleurs, toutes les déclarations dans lesquelles des principes, aspects et modes de réalisation de l'invention, ainsi que des exemples spécifiques de ceux-ci, sont censés englober des équivalents de ceux-ci. En 5 outre, bien que l’invention décrite porte sur un dispositif d’imagerie d’un embryon lors de son développement, ledit dispositif peut également être utilisé pour l’observation de toute cellule ou ensemble de cellules vivantes, l’embryon n’étant qu’un exemple de cellule ou d’ensemble de cellules vivantes.[131] The description and the drawings simply illustrate the principles of the invention. It will thus be understood that a person skilled in the art will be able to design various variants which, although not explicitly described or illustrated here, incorporate the principles of the invention. Furthermore, all the examples cited here are mainly intended for educational purposes to help the reader understand the principles of the invention and the concepts brought by the inventor to the prior art and should be interpreted as being without limitation to these. examples and conditions specifically cited. Furthermore, all statements in which principles, aspects and embodiments of the invention, as well as specific examples thereof, are intended to include equivalents thereof. In addition, although the invention described relates to a device for imaging an embryo during its development, said device can also be used for the observation of any cell or set of living cells, the embryo does not being just one example of a cell or set of living cells.
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