FR3044873A1 - RODONTICIDE APPAT COMPRISING BRODIFACOUM AND METHOD FOR CONTROLLING HARMFUL TARGET RODENTS - Google Patents
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Abstract
L'invention concerne un appât rodonticide comprenant au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles et un stéréoisomère de configuration, dit énantiomère E3, du brodifacoum, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E3 et d'un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E2, du brodifacoum distinct dudit énantiomère E3 ; ○ ledit énantiomère E3 présentant, par analyse chromatographique du brodifacoum effectuée dans des conditions particulières et à la température de 21,5°C, un temps de rétention t3 ; ○ ledit énantiomère E2 présentant, par analyse chromatographique du brodifacoum effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de rétention t2 ; les temps de rétention t2 et t3 étant de valeurs telles que t1 < t2 < t3 < t4 ; ti et t4 représentant des temps de rétention de stéréo-isomères de configuration du brodifacoum distincts dudit énantiomère E2 et dudit énantiomère E3.The invention relates to a rodenticide bait comprising at least one edible carrier for harmful target rodents and a configuration stereoisomer, referred to as the E3 enantiomer, of brodifacoum, excluding a racemic mixture of said enantiomer E3 and a stereoisomer configuration, said enantiomer E2, brodifacoum distinct from said enantiomer E3; Said enantiomer E3 exhibiting, by chromatographic analysis of the brodifacoum carried out under particular conditions and at a temperature of 21.5 ° C., a retention time t3; Said enantiomer E2 having, by chromatographic analysis of brodifacoum carried out under these same conditions, a retention time t2; the retention times t2 and t3 being of values such that t1 <t2 <t3 <t4; ti and t4 represent retention times of brodifacoum configuration stereoisomers distinct from said enantiomer E2 and said enantiomer E3.
Description
APPÂT RODONTICIDE COMPRENANT DU BRODIFACOUM ET PROCÉDÉ DE LUTTE CONTRE DES RONGEURS CIBLES NUISIBLES L'invention concerne un appât rodonticide comprenant du brodifacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles. L'invention concerne aussi un procédé de séparation des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum. L’invention concerne donc le domaine technique de la lutte contre le développement de populations de rongeurs cibles nuisibles.
On sait de EP 0 147 052 que le stéréo-isomère « trans » du brodifacoum est métabolisé plus rapidement que le stéréo-isomère « cis » dans les tissus d’espèces non-cible et non-rongeurs et que ce stéréo-isomère « trans » du brodifacoum permet de diminuer les risques d’empoisonnement de ces espèces non-cible. En particulier EP 0 147 052 décrit un appât rodonticide comprenant du brodifacoum sous forme de stéréo-isomère « trans » dans une proportion de 50 ppm.
Un tel appât est susceptible d’être consommé par des animaux autres que des rongeurs cibles nuisibles lorsqu’il est mis à la disposition de rongeurs cibles nuisibles. Il peut être consommé directement (consommation primaire) par des animaux domestiques ou des animaux de compagnie. Il peut aussi être consommé accidentellement par des humains. Une telle consommation peut produire chez ces animaux domestiques, chez ces animaux de compagnie ou chez des humains un empoisonnement qui peut être létal.
En outre, une fraction du brodifacoum de ces appâts rodonticides peut être ingérée (consommation secondaire) par des animaux -notamment par des oiseaux- prédateurs ou charognards de rongeurs nuisibles et notamment de rongeurs cibles nuisibles affaiblis ayant consommé un tel appât rodonticide. Cette consommation secondaire est susceptible d’entraîner à terme la mort de ces animaux prédateurs ou charognards qui peuvent être des animaux -notamment des oiseaux- appartenant à des espèces protégées. L’invention vise donc à pallier ces inconvénients en proposant un appât rodonticide comprenant du brodifacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont en même temps efficaces pour contrôler des populations de rongeurs cibles nuisibles et qui permettent aussi de limiter les risques d’empoisonnement d’animaux non-cibles -notamment des animaux domestiques ou d’élevage, des animaux de compagnie ou des humains-consommant accidentellement un tel appât rodonticide. L’invention vise donc à pallier ces inconvénients en proposant un appât rodonticide comprenant du brodifacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont en même temps efficaces pour contrôler les populations de rongeurs cibles nuisibles et qui permettent aussi de limiter les risques d’empoisonnement secondaire d’animaux -par exemple de renards ou d’oiseaux- sauvages prédateurs de rongeurs cibles nuisibles affaiblis ayant consommé de l’appât rodonticide ou d’animaux sauvages charognards de cadavres de rongeurs cibles nuisibles empoisonnés. L’invention vise aussi à proposer un appât rodonticide comprenant du brodifacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles dont la mise en œuvre est en accord avec les règles de bon usage -notamment vis à vis de la protection des oiseaux, et en particulier des rapaces-. L’invention vise aussi à proposer un appât rodonticide comprenant du brodifacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont respectueux de l’environnement, de la santé humaine et des animaux non cibles -notamment des oiseaux, et en particulier des rapaces-. L’invention vise aussi à proposer un appât rodonticide comprenant du brodifacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui ne nécessitent pas, pour contrôler une population de rongeur cibles nuisibles, d’utiliser un agent rodonticide à forte dose et qui sont respectueux de l’environnement, de la santé humaine et des animaux non cibles -notamment des oiseaux-. L’invention vise aussi à proposer un appât rodonticide comprenant du brodifacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont susceptibles d’être utilisés pour lutter contre des rongeurs cibles nuisibles résistants à des appâts connus de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles. L’invention vise donc aussi à proposer une alternative à des appâts rodonticides connus.
Pour ce faire, l'invention concerne un appât rodonticide comprenant : - au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles, et ; - un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E3, du brodifacoum, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E3 et d’un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E2, du brodifacoum distinct dudit énantiomère E3 ; o ledit énantiomère E3 présentant, par analyse chromatographique d’une composition de brodifacoum comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du brodifacoum effectuée dans des conditions décrites ci-après et à la température de 21,5°C, un temps de rétention t3 ; o ledit énantiomère E2 présentant, par analyse chromatographique d’une composition de brodifacoum comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du brodifacoum effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de rétention t2 ; les temps de rétention t2 et t3 étant de valeurs telles que ti < t2 < t3 < t4 ; ti et t4 représentant des temps de rétention de stéréo-isomères de configuration du brodifacoum distincts dudit énantiomère E2 et dudit énantiomère E3, ladite analyse étant effectuée : - sur une colonne pour chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et comprenant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(4-méthylbenzoate), lesdites particules étant d’une taille moyenne de 3 pm et présentant une taille moyenne de pores de 1000 À; - en utilisant, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé de méthanol (A) et d’eau comprenant 0,1% en volume d’acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 95/5 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mE/min ; - par injection dans la colonne pour chromatographie d’un volume de 1 pL de composition de brodifacoum à une concentration de 1 pg de brodifacoum par millilitre d’acétonitrile.
Dans tout le texte : - le terme « brodifacoum » désigne le composé de formule 3-(4’- bromobiphényl-4-yl)-1 -(4-hydroxycoumarin-3-yl)-1,2,3,4-tétrahydronaphtalène ou 4-hydroxy-3-(3-(4'-bromo-4-biphénylyl)-1,2,3,4-tétrahydro-1 -naphtyl) coumarine de formule (I) ci-après :
(i); dans laquelle sont représentés les numéros des carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène ; - le terme « stéréo-isomères » désigne des isomères de même formule semi-développée, mais dont la position relative des atomes diffère dans l’espace. L’expression « stéréo-isomères de configuration » désigne les stéréo-isomères dont la conversion de l’un en l’autre de ces stéréo-isomères de configuration nécessite une rupture/reformation d’une liaison covalente interatomique. Ainsi, l’expression « stéréo-isomères de configuration » désigne les stéréo-isomères qui ne sont pas des isomères de conformation (ou « rotamères », dont la conversion de l’un en l’autre des isomères de conformation s’accompagne uniquement d’une rotation d’une partie de la molécule selon l’axe d’une liaison σ (sigma) formée par recouvrement axial d’orbitales) ; - le terme « diastéréoisomères » désigne des stéréo-isomères de configuration qui ne sont pas des énantiomères, c’est-à-dire des stéréo-isomères de configuration qui présentent le même enchaînement d'atomes, mais dont les structures ne sont ni superposables, ni image l'une de l'autre dans un miroir ; - le terme « quantité » s’entend d’une quantité molaire, d’une quantité massique ou d’une quantité volumique. Les proportions sont donc des proportions d’une quantité molaire rapportée à une quantité molaire, d’une quantité massique rapportée à une quantité massique, ou d’une quantité volumique rapportée à une quantité volumique ; - le terme « sensiblement » indique, de façon habituelle, qu'une caractéristique structurelle ou fonctionnelle ne doit pas être prise comme marquant une discontinuité abrupte, qui n'aurait pas de sens physique, mais couvre non seulement cette structure ou cette fonction, mais également des variations légères de cette structure ou de cette fonction qui produisent, dans le contexte technique considéré, un effet de même nature, sinon de même degré ; - les expressions « chromatographie liquide à haute pression » ou « chromatographie liquide à haute performance » (« CLHP ») désignent la chromatographie « HPLC » ou « High Performance Liquid Chromatography », et ; - l’expression « temps de rétention » désigne la durée mesurée au sommet du pic de chromatogramme pendant laquelle un composé est retenu sur la colonne de chromatographie.
Les inventeurs ont observé que l’analyse du brodifacoum par chromatographie liquide à haute pression dans les conditions décrites ci-dessus fait apparaître quatre signaux ou pics correspondant à quatre composés de même formule chimique développée et correspondant à la formule (I) du brodifacoum. Ils ont déterminé, par l’analyse de préparations de brodifacoum comprenant des proportions variables de diastéréoisomères du brodifacoum, que les deux composés correspondants au signal présentant un temps de rétention ti d’une valeur de l’ordre de 15,4 min et au signal présentant un temps de rétention t4 d’une valeur de l’ordre de 26,3 min sont les énantiomères, dits énantiomère E, et énantiomère E4, de l’un des deux diastéréoisomères, dit diastéréoisomère DL4, du brodifacoum et que les deux composés correspondants au signal présentant un temps de rétention t2 d’une valeur de l’ordre de 17,2 min et au signal présentant un temps de rétention t3 d’une valeur de l’ordre de 19,9 min sont les énantiomères, dits énantiomère E2 et énantiomère E3, d’un autre diastéréoisomère, dit diastéréoisomère D2 3 du brodifacoum distinct dudit diastéréoisomère D14. L’un des deux diastéréoisomères du brodifacoum est un stéréo-isomère de configuration du brodifacoum dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène du brodifacoum sont de même configuration absolue et l’autre des deux diastéréoisomères du brodifacoum est un stéréo-isomère de configuration du brodifacoum dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène du brodifacoum sont de configurations absolues distinctes, les configurations absolues étant déterminées selon les règles séquentielles de priorité et la nomenclature de Cahn, Ingold et Prelog (CIP).
Les valeurs des temps de rétention ti, t2, t3 et t4 sont susceptibles de varier, notamment avec la température de la colonne de chromatographie. Cependant, dans ces conditions chromatographiques, l’ordre d’élution des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum reste inchangé.
Les inventeurs ont réalisé une telle séparation des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum par chromatographie liquide à haute pression sur colonne chirale LUX® Cellulose-3 (00F-4492-B0, phenomenex, Le Pecq, France). Le cas échéant, il est possible de réaliser successivement plusieurs étapes de chromatographie liquide à haute pression sur colonne chirale aux fins d’obtenir la quantité dudit énantiomère E3 recherchée avec le taux pureté souhaité. Les inventeurs ont obtenu ledit énantiomère E3 purifié et séparé de l’énantiomère E2 et séparé de l’énantiomère Ei et de l’énantiomère E4 dudit diastéréoisomère D14 du brodifacoum par élimination de la phase mobile de la fraction collectée et contenant ledit énantiomère E3. Il est possible de réaliser une telle séparation par chromatographie liquide à haute pression sur colonne chirale préparative, c’est-à-dire sur une colonne chirale de plus grandes dimensions -notamment de diamètre intérieur supérieur à 2 mm- et dans laquelle la phase stationnaire présente une granulométrie supérieure à 3 pm.
Il n’était pas connu antérieurement de pouvoir séparer ledit énantiomère E3 dudit énantiomère E2 et des énantiomères (E, et E4) du diastéréoisomère D1>4 du brodifacoum.
Les inventeurs qui sont parvenus à séparer ledit énantiomère E3 et ledit énantiomère E2 et à isoler ledit énantiomère E3, ont aussi découvert que ledit énantiomère E3 présente une rémanence dans le foie de rongeurs cibles nuisibles plus élevée que la rémanence dudit énantiomère E2, et aussi plus élevée que la rémanence de chacun des deux énantiomères Ei et E4 dudit diastéréoisomère D] 4.
Un appât rodonticide selon l’invention comprend donc dudit énantiomère E3, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E2, ledit énantiomère E3 étant l’énantiomère dudit diastéréoisomère D2 3 qui est le plus retenu (de temps de rétention de plus grande valeur) en chromatographie dans les conditions précitées, desdits énantiomères E2 et E3.
Un appât rodonticide selon l’invention comprend donc une quantité dudit énantiomère E3 différente de la quantité dudit énantiomère E2. L’invention concerne donc aussi un tel appât rodonticide comprenant dudit énantiomère E3, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E2, c'est-à-dire à l’exclusion d’un mélange dans lequel ledit énantiomère E3 et ledit énantiomère E2 sont en quantités (molaires, massiques ou volumiques) égales dans l’appât rodonticide. L’invention concerne donc un appât rodonticide comprenant dudit énantiomère E3, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E2 non optiquement actif.
On dose ledit énantiomère E3 et ledit énantiomère E2 de toute composition comprenant du brodifacoum après analyse et séparation par chromatographie liquide en utilisant une phase stationnaire chirale et une phase mobile liquide telles que décrites ci-dessus pour l’analyse des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum, en réalisant une détection quantitative des énantiomères en sortie de colonne séparative, par exemple par photométrie d’absorption, en ajustant la concentration en brodifacoum et le volume d’injection aux fins d’obtenir une détection optimale et en mesurant la valeur de l’aire sous le pic de chaque énantiomère E3 et E2. Il est aussi possible de doser ledit énantiomère E2 et ledit énantiomère E3 de toute composition comprenant du brodifacoum en réalisant une détection par spectrométrie de masse en sortie de colonne séparative.
Selon l’invention, il est possible de réaliser un appât rodonticide comprenant des proportions prédéterminées de chacun des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum -notamment dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E2 dudit diastéréoisomère D2 3 et des énantiomères E, et E4 dudit diastéréoisomère Di>4- permettant d’optimiser l’efficacité rodonticide de cet appât rodonticide et de limiter sa toxicité vis-à-vis de l’environnement.
Avantageusement et selon l’invention, ledit énantiomère E3 est présent dans l’appât rodonticide en quantité supérieure à la quantité dudit énantiomère E2 dans l’appât rodonticide. Avantageusement, ledit diastéréoisomère D2 3 du brodifacoum est donc majoritairement sous forme dudit énantiomère E3 dans l’appât rodonticide. Avantageusement, un appât rodonticide selon l’invention comprend du diastéréoisomère D23 du brodifacoum majoritairement sous forme dudit énantiomère E3.
Dans tout le texte, l’expression « ledit diastéréoisomère D2 3 est majoritairement sous forme dudit énantiomère E3 » signifie que le rapport de la quantité (massique, molaire ou volumique) dudit énantiomère E3 sur la quantité (massique, molaire ou volumique correspondante) dudit diastéréoisomère D2 3 du brodifacoum (sous toutes ses formes énantiomères E2 et E3) est supérieur à 50%.
Ainsi, en particulier dans un appât rodonticide selon l’invention : le rapport de la quantité dudit énantiomère E3 sur la somme de la quantité dudit énantiomère E2 et de la quantité dudit énantiomère E3 est supérieur à 0,5 (supérieur à 50 %) ; le rapport de la concentration dudit énantiomère E3 sur la somme de la concentration dudit énantiomère E2 et de la concentration dudit énantiomère E3 est supérieur à 0,5 (supérieur à 50 %), et ; la proportion dudit énantiomère E3 dans l’appât rodonticide est supérieure à la proportion de dudit énantiomère E2dans l’appât rodonticide.
Avantageusement et selon l’invention, l’appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la somme de la quantité dudit énantiomère E2 et de la quantité dudit énantiomère E3 dans l’appât rodonticide est supérieur à 50%, notamment supérieur à 60%, en particulier supérieur à 70%, plus particulièrement supérieur à 80%, de préférence supérieur à 90%, plus préférentiellement supérieur à 95%, particulièrement préférentiellement supérieur à 98%, encore plus préférentiellement supérieur à 99% ou de l’ordre de 100%.
Dans un mode particulier de réalisation, avantageusement et selon l’invention, l’appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la somme de la quantité dudit énantiomère E2 et de la quantité dudit énantiomère E3 dans l’appât rodonticide est supérieur à 75 %, de préférence compris entre 85 % et 100 %, plus préférentiellement compris entre 90 % et 98 %.
Dans un autre mode de réalisation, avantageusement et selon l’invention, l’appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la somme de la quantité dudit énantiomère E2 et de la quantité dudit énantiomère E3 dans l’appât rodonticide est compris entre 98 % et 100 %. L’appât rodonticide peut aussi comprendre une quantité dudit énantiomère E2 telle que le rapport de cette quantité sur la somme de la quantité dudit énantiomère E2 et de la quantité dudit énantiomère E3 dans l’appât rodonticide est inférieur à 50 %, notamment inférieur à 25 %, préférentiellement compris entre 0 % et 25 %, en particulier inférieur à 10 %.
Avantageusement et selon l’invention, le brodifacoum est majoritairement sous forme dudit énantiomère E3 dans l’appât rodonticide. L’appât rodonticide comprend donc une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide est supérieur au rapport de la quantité dudit énantiomère E2 sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide, est supérieur au rapport de la quantité dudit énantiomère Ej sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide et est supérieur au rapport de la quantité dudit énantiomère E4 sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide..
Ainsi, en particulier, dans un appât rodonticide selon l’invention : le rapport de la quantité dudit énantiomère E3 sur la quantité du brodifacoum est supérieur à 0,25 (supérieur à 25 %) ; le rapport de la quantité dudit énantiomère E3 sur la somme de la quantité dudit énantiomère E2, de la quantité dudit énantiomère E3 et des quantités de chacun des énantiomères Ei et E4 dudit diastéréoisomère D, 4 du brodifacoum est supérieur à 0,25 (supérieur à 25 %) ; le rapport de la concentration dudit énantiomère E3 dans l’appât rodonticide sur la concentration du brodifacoum dans l’appât rodonticide est supérieur à 0,25 (supérieur à 25 %) ; la proportion dudit énantiomère E3 dans l’appât rodonticide est supérieure à la proportion de l’énantiomère E2 dans l’appât rodonticide et supérieure à la proportion de chacun des énantiomères Ej et E4 du diastéréoisomère Di;4 du brodifacoum dans l’appât rodonticide.
Les inventeurs ont aussi observé qu’un appât rodonticide selon l’invention comprenant du brodifacoum majoritairement sous forme dudit énantiomère E3 est susceptible de pouvoir être utilisé pour lutter contre des populations de rongeurs cibles nuisibles résistants à des traitements rodonticides connus.
Avantageusement et selon l’invention, l’appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide est supérieur à 25%, notamment supérieur à 50%, en particulier supérieur à 70%, plus particulièrement supérieur à 80%, de préférence supérieur à 90%, particulièrement préférentiellement supérieur à 95%, plus préférentiellement supérieur à 98%, encore plus préférentiellement supérieur à 99% ou de l’ordre de 100%.
Dans un mode particulier de réalisation, avantageusement et selon l’invention, l’appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide est supérieur à 70 %, de préférence compris entre 80 % et 100 %, plus préférentiellement compris entre 90 % et 100 %.
Dans un autre mode de réalisation, avantageusement et selon l’invention, l’appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du brodifacoum dans la composition est compris entre 95 % et 99 %.
Dans un autre mode de réalisation particulier, avantageusement et selon l’invention, l’appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide est supérieur à 95%.
Dans un autre mode de réalisation, avantageusement et selon l’invention, l’appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide est compris entre 98% et 100 % -bornes incluses-.
Dans un autre mode de réalisation particulièrement avantageux selon l’invention, l’appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du brodifacoum l’appât rodonticide est sensiblement de l’ordre de 100 %.
Un appât rodonticide selon l’invention peut être sensiblement exempt dudit énantiomère E2, c’est à dire que ledit énantiomère E2 peut éventuellement être présent dans l’appât rodonticide mais seulement à l’état de traces. Un appât rodonticide selon l’invention peut aussi être sensiblement exempt dudit diastéréoisomère DL4, c’est à dire que le diastéréoisomère DL4 peut éventuellement être présent dans l’appât rodonticide mais seulement à l’état de traces. L’appât rodonticide selon l’invention peut aussi être sensiblement exempt de l’énantiomère Ei dudit diastéréoisomère DK4, c’est à dire que l’énantiomère E, peut éventuellement être présent dans l’appât rodonticide mais seulement à l’état de traces. L’appât rodonticide selon l’invention peut aussi être sensiblement exempt de l’énantiomère E4 dudit diastéréoisomère D,4, c’est à dire que l’énantiomère E4 peut éventuellement être présent dans l’appât rodonticide mais seulement à l’état de traces.
Avantageusement, un appât rodonticide selon l’invention comprend une quantité massique de brodifacoum telle que le rapport de cette quantité massique de brodifacoum sur la quantité massique d’appât rodonticide est inférieur à 50 ppm -c’est-à-dire inférieur à 50 mg de brodifacoum par kilogramme d’appât rodonticide-. Avantageusement, il comprend une quantité massique de brodifacoum telle que le rapport de cette quantité massique de brodifacoum sur la quantité massique d’appât rodonticide est supérieur à 1 ppm. Avantageusement, un appât rodonticide selon l’invention comprend une quantité massique de brodifacoum telle que le rapport de cette quantité massique de brodifacoum sur la quantité massique d’appât rodonticide est compris entre 1 ppm et 50 ppm (1 mg à 50 mg de brodifacoum par kilogramme d’appât rodonticide), notamment compris entre 1 ppm et 25 ppm (1 mg à 25 mg de brodifacoum par kilogramme d’appât rodonticide), plus préférentiellement comprise entre 2 ppm et 15 ppm (2 mg à 15 mg de brodifacoum par kilogramme d’appât), encore plus préférentiellement comprise entre 5 ppm et 10 ppm (5 mg à 10 mg de brodifacoum par kilogramme d’appât). Avantageusement et selon l’invention, l’appât comprend du brodifacoum avec une proportion massique de l’ordre de 3 ppm.
Avantageusement, un appât rodonticide selon l’invention comprend une quantité dudit énantiomère E3 telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du brodifacoum dans l’appât rodonticide est supérieur à 70%, plus particulièrement supérieur à 80%, de préférence supérieur à 90%, particulièrement préférentiellement supérieur à 95%, plus préférentiellement supérieur à 98%, encore plus préférentiellement supérieur à 99% ou de l’ordre de 100%, et du brodifacoum en proportion massique inférieure à 50 ppm par rapport à l’appât rodonticide.
Avantageusement et selon l’invention, l’excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles est choisi pour permettre une consommation de l’appât rodonticide par des rongeurs cibles nuisibles. Avantageusement et selon l’invention, chaque excipient comestible est non létal pour des rongeurs cibles nuisibles. L’excipient comestible n’est pas rodonticide en lui-même.
Avantageusement et selon l’invention, l’excipient comestible comprend au moins un aliment choisi dans le groupe formé des graines de céréale -notamment des graines de céréale décortiquées-, des moutures de graines de céréale, des farines de graines de céréale, des flocons de graines de céréale, du son de céréales et des graines non céréalières, par exemple des graines de luzerne -notamment sous forme décortiquée, sous forme de mouture, sous forme de farine, sous forme de flocons ou de son-. L’excipient comestible peut comprendre tout support susceptible d'être consommé par des rongeurs cibles nuisibles.
Avantageusement, l’excipient comestible comprend au moins un aliment choisi dans le groupe formé des aliments d’origine végétale et des aliments d’origine animale. Avantageusement, l’excipient comestible comprend au moins un aliment choisi pour pouvoir stimuler l’appétit des rongeurs cibles nuisibles. En particulier, cet aliment est choisi dans le groupe formé de graines d’une ou de plusieurs céréales, de graines décortiquées d’une ou de plusieurs céréales, des moutures de graines d’une ou de plusieurs céréales, des flocons de graines d’une ou de plusieurs céréales, du son d’une ou de plusieurs céréales et des farines de graines d’une ou de plusieurs céréales. À titre d’exemple, on choisit les céréales dans le groupe formé de l'avoine, du blé, de l'orge, du maïs, du soja et du riz.
Avantageusement, l’aliment est choisi dans le groupe formé des aliments sucrés. Par exemple, il peut s’agir d’aliments comprenant au moins un sucre choisi dans le groupe formé du saccharose, du lactose, du fructose et du glucose. Il peut s’agir d’un sirop de sucre -par exemple, d’un sirop de sucre obtenu par hydrolyse de l'amidon- ou d’un sirop de sucre obtenu par hydrolyse de saccharose (sirop de sucre inverti), ou d’un sirop de sucre de betterave, ou d’un sirop d'érable ou d’un sirop de canne à sucre, ou d’un sirop obtenu à partir d’une plante du genre stevia.
Avantageusement, l’aliment est choisi dans le groupe formé des flocons et de la farine de l’albumen de noix de coco (coprah).
Avantageusement, l’aliment est choisi dans le groupe formé des noix, des noisettes et des amandes -râpées et/ou en poudre-.
Avantageusement, l’aliment est choisi dans le groupe formé des graisses végétales, des huiles végétales (par exemple huile de colza, graisse de soja, huile de tournesol, beurre de cacao, huile d'arachides, beurre d'arachides, huile de maïs, huile de palme), des graisses animales et des huiles animales (beurre, saindoux, huile de poisson).
Avantageusement, l’aliment est choisi dans le groupe formé des protéines d’origine végétale et des protéines d’origine animale. À titre d’exemple, on peut citer par exemple le lait en poudre -notamment le lait écrémé en poudre-, les œufs -notamment les œufs en poudre-, les hydrolysats de protéines d’origine animale et les hydrolysats de protéines d’origine végétale.
Avantageusement et selon l’invention, l’appât rodonticide est choisi dans le groupe formé des appâts solides comprenant du brodifacoum et un excipient comestible solide. Avantageusement, l’appât rodonticide est un solide à l’état divisé, par exemple sous forme de boulettes ou de granulés. Avantageusement, l’appât rodonticide peut être un solide sous forme de bloc ou de pâte susceptibles d’être consommés par les rongeurs cibles nuisibles ou d’un matériau solide susceptible d’être rongé par les rongeurs cibles nuisibles. Avantageusement, l’appât rodonticide solide selon l’invention peut se présenter sous forme d’un bloc rigide, d’un bloc semi-rigide, d’une mousse, d’une poudre ou d’un gel.
Avantageusement, l’appât rodonticide se présentant sous forme d’une poudre, sous forme d’une mousse ou sous forme d’un gel est adapté pour pouvoir souiller la fourrure du(de) rongeur(s) cible(s) nuisible(s) et pour pouvoir être ingérée par celui(ceux)-ci lors de son(leur) toilettage.
Il peut s’agir d’un appât rodonticide solide comprenant du brodifacoum, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E2. Il peut aussi s’agir d’un appât rodonticide solide comprenant du brodifacoum et dans lequel ledit diastéréoisomère D2 3 est majoritairement sous forme dudit énantiomère E3. Il peut aussi s’agir d’un appât rodonticide solide comprenant du brodifacoum dans lequel le brodifacoum est majoritairement sous forme dudit énantiomère E3.
Avantageusement et selon l’invention, l’appât rodonticide est choisi dans le groupe formé des appâts liquides comprenant du brodifacoum et un excipient comestible liquide. L’appât rodonticide est alors une boisson pour des rongeurs cibles nuisibles. Il peut s’agir d’une solution de brodifacoum dans un solvant du brodifacoum, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E2. Il peut aussi s’agir d’une solution de brodifacoum dans un solvant du brodifacoum et dans laquelle ledit diastéréoisomère D23 est majoritairement sous forme dudit énantiomère E3. Il peut aussi s’agir d’une solution de brodifacoum dans un solvant du brodifacoum et dans laquelle le brodifacoum est majoritairement sous forme dudit énantiomère E3.
Il peut aussi s’agir d’une suspension de brodifacoum à l’état solide dans un milieu liquide. Il peut aussi s’agir d’une émulsion de brodifacoum dans un milieu liquide. L’invention concerne donc aussi un appât rodonticide comprenant dudit énantiomère E3, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E2, le brodifacoum de l’appât rodonticide étant optiquement actif. Il n’est cependant pas exclu que le brodifacoum de l’appât rodonticide selon l’invention, comprenant dudit énantiomère E3, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E2, soit optiquement inactif.
Avantageusement, l’appât rodonticide comprend au moins un colorant. Un tel colorant permet en particulier de donner audit appât rodonticide une couleur aisément détectable et identifiable par une personne manipulant l’appât rodonticide.
Avantageusement, l’appât rodonticide comprend au moins un conservateur apte à assurer sa conservation lors de son stockage. Avantageusement, l’appât rodonticide comprend au moins un composé amérisant de type benzoate de dénatonium, aussi connu sous le nom de « Bitrex® » destiné à réduire les risques de consommation accidentelle par des organismes non cibles.
Avantageusement, dans une variante particulière, l’appât rodonticide selon l’invention comprend exclusivement du brodifacoum, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E2, à titre de substance rodonticide. En particulier, l’appât rodonticide selon l’invention est exempt de toute autre substance anticoagulante à usage rodonticide distincte du brodifacoum. Cependant, dans cette variante selon l’invention, l’appât rodonticide peut comprendre toute substance anti-nuisible autre qu’un rodonticide, telle qu’une substance insecticide et/ou acaricide.
Avantageusement, dans une autre variante particulière, l’appât rodonticide selon l’invention comprend du brodifacoum à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E2 et au moins une autre substance distincte du brodifacoum à titre de substance rodonticide. Cette autre substance rodonticide distincte du brodifacoum peut être une autre substance anticoagulante -notamment du type anti-vitamine K ou non-ou toute autre substance rodonticide non anticoagulante. L’invention concerne donc aussi un procédé chromatographique de séparation des stéréo-isomères de configuration -notamment dudit énantiomère E3 et dudit énantiomère E2 d’un diastéréoisomère, dit diastéréoisomère D2 3- du brodifacoum et, le cas échéant, dudit énantiomère Ei et dudit énantiomère E4 d’un autre diastéréoisomère, dit diastéréoisomère DL4, du brodifacoum. L’invention concerne en particulier un procédé chromatographique d’obtention dudit énantiomère E3, dans lequel : - on choisit une colonne pour chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et comprenant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(4-méthylbenzoate), lesdites particules étant d’une taille moyenne de 3 pm et présentant une taille moyenne de pores de 1000 À ; - on choisit, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé de méthanol (A) et d’eau comprenant 0,1% en volume d’acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 95/5 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 ml7min ; - on réalise une séparation des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum à température ambiante lors de laquelle ; - on introduit en tête de la colonne pour chromatographie une composition liquide comprenant dudit énantiomère E3, puis ; - on entraîne la composition liquide avec la phase mobile dans la colonne pour chromatographie dans des conditions propres à entraîner une séparation dudit énantiomère E2 et dudit énantiomère E3, et on collecte une fraction de la phase mobile comprenant ledit énantiomère E3 avec un temps de rétention t3 de valeur telle que E < t2 < t3 < t4, E, t2 et t4 représentant les temps de rétention des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum distincts dudit énantiomère E3, séparément dudit énantiomère E2, et ; - on élimine la phase mobile liquide de ladite fraction de façon à obtenir ledit énantiomère E3. L’invention concerne également un stéréo-isomère de configuration du brodifacoum obtenu par un procédé selon l’invention. L’invention concerne aussi un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles dans lequel on dissémine une quantité d’appât rodonticide comprenant : - au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles, et ; - un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E3, du brodifacoum, à l’exclusion d’un mélange racémique dudit énantiomère E3 et d’un autre stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E2, du brodifacoum distinct dudit énantiomère E3 ; o ledit énantiomère E3 présentant, par analyse chromatographique d’une composition de brodifacoum comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du brodifacoum effectuée dans des conditions décrites ci-après et à la température de 21,5°C, un temps de rétention t3 ; o ledit énantiomère E2 présentant, par analyse chromatographique d’une composition de brodifacoum comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du brodifacoum effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de rétention t2 ; les temps de rétention t2 et t3 étant de valeurs telles que b < t2 < t3 < t4 ; b et t4 représentant des temps de rétention de stéréo-isomères de configuration du brodifacoum distincts dudit énantiomère E2 et dudit énantiomère E3, ladite analyse étant effectuée : - sur une colonne pour chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et comprenant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(4-méthylbenzoate), lesdites particules étant d’une taille moyenne de 3 pm et présentant une taille moyenne de pores de 1000 À; - en utilisant, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé de méthanol (A) et d’eau comprenant 0,1% en volume d’acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 95/5 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mE/min ; - par injection dans la colonne pour chromatographie d’un volume de 1 pL de composition de brodifacoum à une concentration de 1 pg de brodifacoum par millilitre d’acétonitrile. L’invention concerne aussi un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles dans lequel on dissémine une quantité d’appât rodonticide selon l’invention, ladite quantité d’appât disséminé étant suffisante pour être rodonticide.
Dans un tel procédé, avantageusement et selon l’invention, on dissémine un appât rodonticide comprenant une quantité dudit énantiomère E3 supérieure à la quantité dudit énantiomère E2. Ledit diastéréoisomère D2 3 est donc majoritairement sous forme dudit énantiomère E3 dans l’appât rodonticide. Dans un tel procédé, avantageusement et selon l’invention, le brodifacoum est majoritairement sous forme dudit énantiomère E3.
Avantageusement et en variante selon l’invention, on choisit en combinaison : - l’excipient comestible ; - une quantité dudit énantiomère E3 distincte de la quantité dudit énantiomère E2 dans l’appât rodonticide ; - une proportion dudit énantiomère E3 par rapport au brodifacoum ; - une proportion massique de brodifacoum dans l’appât rodonticide, et ; - une quantité d’appât rodonticide disséminé ; de façon que des rongeurs cibles nuisibles consomment une quantité du brodifacoum suffisante pour être létale pour lesdits rongeurs cibles nuisibles consommant dudit appât rodonticide au cours d’une période unique de 24 heures consécutives.
Un appât rodonticide selon cette variante de l’invention est un appât rodonticide mortel en une seule prise ou « one-shot » en anglais. Avantageusement et selon cette variante de l’invention, la proportion massique du brodifacoum dans l’appât rodonticide est comprise entre 5 ppm et 50 ppm, notamment comprise entre 10 ppm et 50 ppm, de préférence comprise entre 15 ppm et 50 ppm.
Avantageusement et dans une autre variante selon l’invention, on choisit en combinaison : - l’excipient comestible ; - une quantité dudit énantiomère E3 distincte de la quantité dudit énantiomère E2 dans l’appât rodonticide ; - une proportion dudit énantiomère E3 par rapport au brodifacoum ; - une proportion massique de brodifacoum dans l’appât rodonticide, et ; - une quantité d’appât rodonticide disséminé ; de façon que des rongeurs cibles nuisibles consomment une quantité du brodifacoum ; o non létale pour des rongeurs cibles nuisibles, c’est-à-dire généralement non létale pour les rongeurs cibles nuisibles, consommant dudit appât rodonticide pendant une période de 24 heures consécutives, et ; o suffisante pour être létale pour des rongeurs cibles nuisibles consommant dudit appât rodonticide pendant plusieurs périodes de 24 heures.
Avantageusement et selon l’invention, lesdites périodes de 24 heures sont consécutives.
Cette autre variante de l’invention vise donc aussi un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles dans lequel on dissémine une quantité d’appât rodonticide létale pour des rongeurs cibles nuisibles consommant durablement cet appât rodonticide et généralement non létale pour les rongeurs ou des animaux non cibles consommant accidentellement cet appât rodonticide. On parle alors d’un procédé de lutte « multi-doses » ou, en anglais, « multi-feeding ». Dans un tel procédé selon l’invention, la consommation d’appât rodonticide par un rongeur cible nuisible pendant une durée de 24 heures peut être insuffisante pour entraîner la mort dudit rongeur, alors qu’une consommation répétée d’appât rodonticide pendant au moins deux jours consécutifs permet d’entraîner la mort du rongeur cible nuisible.
Cette autre variante de l’invention vise donc un procédé de lutte contre une population de rongeurs cibles nuisibles dans lequel on met à disposition des rongeurs cibles nuisibles une quantité d’appât rodonticide susceptible d’être ingérée par les rongeurs cibles nuisibles, ladite quantité d’appât rodonticide étant suffisante pour tuer des rongeurs cibles nuisibles consommant ledit appât rodonticide pendant plusieurs jours.
Avantageusement et dans cette autre variante selon l’invention la proportion massique de brodifacoum peut être comprise entre 3 ppm et 50 ppm, notamment comprise entre 5 ppm et 30 ppm -notamment de l’ordre de 15 ppm- par rapport à l’appât rodonticide.
Avantageusement, dans cette autre variante d’un procédé selon l’invention, on adapte la quantité d’appât rodonticide disséminé, la proportion massique du brodifacoum dans l’appât rodonticide, la proportion dudit énantiomère E3 par rapport à la proportion dudit énantiomère E2, et la proportion dudit énantiomère E3 par rapport au brodifacoum pour que la consommation de l’appât rodonticide soit létale pour des rongeurs cibles nuisibles consommant quotidiennement de l’appât rodonticide pendant au moins 2 périodes de 24 heures -notamment de 3 à 7 périodes-, lesdites périodes pouvant être consécutives.
Avantageusement, dans cette autre variante d’un procédé selon l’invention, la proportion dudit énantiomère E3 étant supérieure à 95% -notamment de l’ordre de 100%- par rapport au brodifacoum dans l’appât, la proportion massique du brodifacoum par rapport à l’appât rodonticide est comprise entre 1 ppm et 15 ppm -notamment de l’ordre de 10 ppm-.
Dans un procédé selon l’invention, on met à disposition des rongeurs cibles nuisibles une quantité d’appât rodonticide suffisante pour satisfaire quotidiennement l’appétit des rongeurs cibles nuisibles.
Dans un procédé selon l’invention, on adapte la quantité d’appât rodonticide disséminé, la quantité dudit énantiomère E3 par rapport à la quantité dudit énantiomère E2, la quantité dudit énantiomère E3 par rapport à la quantité du brodifacoum et la proportion massique du brodifacoum dans l’appât rodonticide de façon à permettre une consommation d’appât rodonticide pendant plusieurs jours par des rongeurs cibles nuisibles, tout en limitant : - les risques d’intoxication primaire de mammifères et oiseaux non cibles susceptibles de ne consommer qu’occasionnellement et accidentellement un tel appât rodonticide ; - les risques d’intoxication secondaire, par exemple des prédateurs des rongeurs cibles, susceptibles de consommer des rongeurs -morts ou vifs- cibles ayant ingéré une quantité dudit appât. L'invention concerne également un appât rodonticide comprenant du brodifacoum, un procédé de séparation des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum et un procédé de lutte contre les rongeurs cibles nuisibles caractérisés en combinaison par tout ou partie des caractéristiques mentionnées ci-dessus ou ci-après. D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront à la lecture de la description suivante et des exemples donnés à titre uniquement non limitatif et qui se réfèrent aux figures annexées, dans lesquelles : - la figure 1 est un chromatogramme représentatif de la séparation des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum sur colonne chirale ; - la figure 2 est une représentation en histogramme de la rémanence dudit énantiomère E3, dudit énantiomère E2 et des énantiomères Ei et E4 dudit diastéréoisomère D14 dans le foie de rats.
Extraction du brodifacoum de foies de rats gavés avec du brodifacoum
Homogénéisation de l’échantillon de foie
On pèse avec précision de l’ordre de 0,525 g (±0,025 g) de foie de rat que l’on place dans un tube en polypropylène de 50 mL. On ajoute 10 mL d’acétone et on soumet la suspension à une homogénéisation au moyen d’un homogénéisateur/disperseur Ultra-Turrax® pendant une durée de l’ordre de 30 secondes. On rince la tige de l’homogénéisateur/disperseur à l’eau chaude puis 2 fois avec 20 mL d’acétone dans un tube en polypropylène. On centrifuge l’homogénat pendant 5 min à une vitesse de centrifugation de 3000 rpm (rotation par minute). On collecte et on transvase le surnageant dans un tube à essai. On soumet l’échantillon à une évaporation sous un flux d’azote (N2) à la température de 40°C de façon à former un extrait sec. a
Elimination des lipides
Dans le tube contenant l’extrait sec, on ajoute 1 mL d’acétonitrile de façon à solubiliser l’extrait sec. On lave la solution d’acétonitrile 2 fois successivement avec 1 mL d’hexane. L’extrait débarrassé des lipides est séché sous un flux d’azote (N2) à la température de 40°C, puis repris avec 0,5 mL de méthanol et solubilisé par agitation sous vortex. On ajoute ensuite 0,5 mL d’eau ultra-pure (Milli-Q). L’échantillon est homogénéisé sous vortex.
Extraction du brodifacoum sur phase solide (« SPE, Solid
Phase Extraction »)
On fait passer 1 mL de dichlorométhane (CH2Cf2), puis 1 mL de méthanol (CH3OH), puis 1 mL d’eau ultra-pure (Milli-Q) sur une cartouche Oasis HLB lcc (WAT094225, Waters). On dépose ensuite en tête de la cartouche préalablement conditionnée l’extrait de foie débarrassé des lipides (lmL CH30H/H20 Milli-Q) et contenant le brodifacoum. L’extrait de foie pénètre dans la cartouche par gravité au contact de la phase solide de la cartouche. On dépose en tête de cartouche 1 mL de solution de lavage formée de méthanol (CH3OH) et d’eau ultra-pure (H20) en proportion volumique de 90/10. On sèche la colonne par aspiration sous vide connectée en partie basse de la cartouche. On dépose ensuite en tête de cartouche 1 mL de solution d’élution formée de dichlorométhane (CH2Cf2) et de méthanol (CH3OH) en proportion volumique de 90/10 et on collecte en bas de cartouche un éluat comprenant le brodifacoum. On évapore le solvant de l’éluat sous un flux d’azote (N2) à la température de 40°C. On reprend l’échantillon dans avec 0,5 mL d’acétonitrile (NC-CH3) et on filtre la solution d’acétonitrile contenant le brodifacoum sur filtre de porosité 0,2 pm.
Analyse des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum
On sépare les stéréo-isomères de configuration du brodifacoum dans les extraits de foie. On réalise une telle séparation des énantiomères de chaque diastéréoisomère du brodifacoum par chromatographie liquide à haute pression en utilisant une colonne chirale LUX® Cellulose-3 (00F-4492-BO, phenomenex, Le Pecq, France) à titre de phase stationnaire et un mélange formé de méthanol (A) et d’eau comprenant 0,1% en volume d’acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 95/5 à titre de phase mobile avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mL/min. On injecte sur la colonne 1 pL de l'extrait hépatique de foie préparé comme préalablement décrit. La détection est effectuée par spectrométrie de masse en tandem (MS/MS) en mode d’ionisation négative par électronébulisation (ESI, « ElectroSpray Ionization »). La température du gaz nébuliseur est de 350°C et son débit est de 8 L/min. La pression du gaz nébuliseur est portée à 2700 hPa. En particulier, on détecte les transitions MRM («Multiple Reaction Monitoring » m/z 521,1 —» 78,9 et m/z 521,1 —» 135,1 correspondants aux signaux du brodifacoum. Le chromatogramme obtenu est représenté en figure 1 à titre d’exemple.
Les valeurs des temps de rétention de chacun des énantiomères du brodifacoum sont, dans les conditions décrites, de : - ti = 15,4 min pour l’énantiomère E, dudit diastéréoisomère Dl4 ; - Î2 = 17,2 min pour ledit énantiomère E2 ; - t3 = 19,9 min pour ledit énantiomère E3 selon l’invention, et ; - t4 = 26,3 min pour l’énantiomère E4 dudit diastéréoisomère Dl4.
Les valeurs des temps de rétention ti, t2, t3 et t4 sont susceptibles de varier selon les conditions chromatographiques et avec la température de la colonne de chromatographie. Cependant, dans ces conditions chromatographiques, l’ordre d’élution des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum reste inchangé. Â titre indicatif, pour une variation de température de quelques degrés Celsius, la valeur du temps de rétention (ti) de l’énantiomère Ei dudit diastéréoisomère D] 4 peut varier entre 15,0 min et 15,7 min, la valeur du temps de rétention (t2) dudit énantiomère E2 peut varier entre 16,9 min et 17,5 min, la valeur du temps de rétention (t3) dudit énantiomère E3 peut varier entre 18,8 min et 20,0 min et la valeur du temps de rétention (t4) de l’énantiomère E4 dudit diastéréoisomère Dl 4 peut varier entre 26,0 min et 27,5 min. Rémanence hépatique des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum chez le rat
On administre par voie orale («peros ») à des rats de laboratoire (rats Sprague Dawley, Charles River, Saint germain sur l’Arbresle, Lrance) mâles et femelles, âgés de 8 semaines et pesant entre 180 et 200 g, une solution comprenant du brodifacoum dans un mélange d’huile végétale et de DMSO à 5 % de façon que la quantité de brodifacoum ingérée par chaque rat soit de l’ordre de 3,4 mg de brodifacoum par kilogramme de rat. Les rats gavés sont traités quotidiennement par administration par voie sous cutanée d’une dose de vitamine Kl à raison de 1U par rat.
Le rapport de la quantité dudit diastéréoisomère D2,3 sur la quantité de brodifacoum dans la solution de gavage comprenant du brodifacoum est de 70% et le rapport de la quantité dudit diastéréoisomère D14 sur la quantité de brodifacoum dans la solution de gavage comprenant du brodifacoum est de 30%. À 1 jour (J+l), 2 jours (J+2), 5 jours (J+5), 7 jours (J+7) et 9 jours (J+9) après le gavage, on euthanasie 6 rats préalablement anesthésiés à l’isoflurane, on prélève le foie des rats euthanasiés puis on extrait du foie et on dose les quantités de chacun des énantiomères du brodifacoum présents dans le foie des rats gavés. Les résultats obtenus sur les rats (mâles et femelles) sont donnés au tableau 1 ci-après dans lequel les valeurs de la concentration de chacun des énantiomères du brodifacoum dans le foie sont la moyenne des valeurs mesurées sur 6 rats et exprimées en nanogramme (ng) par gramme de foie.
Tableau 1
La figure 2 représente l’évolution du pourcentage de la quantité massique de chaque énantiomère (Ei et E4) dudit diastéréoisomère DJ4 et de chaque énantiomère (E2 et E3) dudit diastéréoisomère D2 3 par rapport à la quantité de brodifacoum retenue dans le foie des rats gavés et sacrifiés à J+l, J+2, J+5, J+7 et J+9. Le pourcentage de l’énantiomère E3 est représenté par des colonnes à hachures obliques, le pourcentage de l’énantiomère E4 est représenté par des colonnes blanches, le pourcentage dudit énantiomère E2 est représenté par des colonnes à hachures horizontales et le pourcentage dudit énantiomère E3 est représenté par des colonnes noires. Les proportions respectives de chacun des énantiomères (Ei et E4) dudit diastéréoisomère D] 4 et desdits énantiomères (E2 et E3) dudit diastéréoisomère D2 3 dans le brodifacoum de la composition de gavage sont représentées en colonne « X » figure 2 et sont de 15% pour les énantiomères Ei et E4 dudit diastéréoisomère D, 4 et de 35% pour les énantiomères E2 et E3 dudit diastéréoisomère D2 3.
Ledit énantiomère E3 est plus rémanent dans le foie des rats que ne le sont lesdits énantiomères Ei, E2 et E4. L’énantiomère E3 du brodifacoum est plus rémanent dans le foie de rongeurs cibles nuisibles, est plus efficace à titre de substance anticoagulante et peut donc être utilisé à moindre dose dans des appâts rodonticides. Un appât rodonticide et un procédé de lutte contre une population de rongeurs cibles nuisibles selon l’invention permettent de réduire la quantité de brodifacoum dans les appâts pour une efficacité rodonticide maintenue.
Il va de soi que l’invention peut faire l’objet de nombreuses variantes de réalisation et d’applications. En particulier, un appât rodonticide et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles sont sujets à des infinités de variantes tant dans la formulation de l’appât rodonticide que dans les modes de mise en œuvre du procédé.
The invention relates to a rodenticide bait comprising brodifacoum and a method for controlling harmful target rodents. BACKGROUND OF THE INVENTION The invention also relates to a method for separating configuration stereoisomers from brodifacoum. The invention thus relates to the technical field of the fight against the development of rodent populations of harmful rodents.
It is known from EP 0 147 052 that the "trans" stereoisomer of brodifacoum is metabolized more rapidly than the "cis" stereoisomer in tissues of non-target and non-rodent species and that this "trans" stereoisomer is »Brodifacoum reduces the risk of poisoning of these non-target species. In particular EP 0 147 052 describes a rodenticide bait comprising brodifacoum in the form of a "trans" stereoisomer in a proportion of 50 ppm.
Such bait is likely to be consumed by animals other than harmful target rodents when made available to harmful target rodents. It can be consumed directly (primary consumption) by pets or pets. It can also be accidentally consumed by humans. Such consumption may produce poisoning in these pets, pets, or humans that can be lethal.
In addition, a fraction of the brodifacoum of these rodenticide baits can be ingested (secondary consumption) by animals - in particular by bird-predators or scavengers of rodent pests, including weak rodent harmful rodents having consumed such rodenticide bait. This secondary consumption is likely to eventually lead to the death of these predatory animals or scavengers that may be animals - especially birds - belonging to protected species. The invention therefore aims to overcome these drawbacks by proposing a rodenticide bait comprising brodifacoum and a method for controlling harmful target rodents which are at the same time effective for controlling target rodent harmful populations and which also make it possible to limit the risks of rodents. poisoning of non-target animals - especially domestic or farm animals, pets or humans - accidentally consuming such rodenticide bait. The invention therefore aims to overcome these drawbacks by proposing a rodenticide bait comprising brodifacoum and a method of controlling harmful target rodents which are at the same time effective for controlling the target rodent harmful populations and which also make it possible to limit the risks of rodents. secondary poisoning of animals - for example foxes or wild birds - predators of weakened target rodents that have consumed rodenticide bait or wild animals scavenging poisoned target rodent carcasses. The invention also aims at providing a rodenticide bait comprising brodifacoum and a method for controlling harmful rodent rodents whose implementation is in accordance with the rules of good practice -especially with respect to the protection of birds, and particular raptors-. The invention also aims at providing a rodenticide bait comprising brodifacoum and a method for controlling harmful target rodents which are respectful of the environment, human health and non-target animals - especially birds, and in particular raptors -. The invention also aims at providing a rodenticide bait comprising brodifacoum and a method for controlling harmful rodent rodents which do not require, to control a target rodent rodent population, to use a high dose rodenticide agent and which are respectful environment, human health and non-target animals - especially birds. It is also an object of the invention to provide a rodenticide bait comprising brodifacoum and a method of controlling harmful rodent rodents which are capable of being used to control target rodent rodents resistant to known baits against target rodent pests. The invention therefore also aims to provide an alternative to known rodenticide baits.
To do this, the invention relates to a rodenticide bait comprising: - at least one edible carrier for harmful target rodents, and; a configuration stereo-isomer, referred to as the enantiomer E3, of the brodifacoum, excluding a racemic mixture of said enantiomer E3 and of a configuration stereoisomer, referred to as the E2 enantiomer, of the brodifacoum distinct from said enantiomer E3; o said enantiomer E3 having, by chromatographic analysis of a composition of brodifacoumoum comprising four stereoisomers embroidery configuration made under the conditions described below and at a temperature of 21.5 ° C, a retention time t3; o said enantiomer E2 having, by chromatographic analysis of an embroidery composition comprising four stereoisomers of brodifacoum configuration performed under these same conditions, a retention time t2; the retention times t2 and t3 being of values such that ti <t2 <t3 <t4; ti and t4 represent retention times of embossifacoum configuration stereoisomers distinct from said enantiomer E2 and said enantiomer E3, said analysis being carried out: on a column for high pressure liquid chromatography of dimensions 150 x 2 mm, and comprising a chiral stationary phase consisting of tris (4-methylbenzoate) cellulose particles, said particles being of an average size of 3 μm and having an average pore size of 1000 Å; by using, as liquid mobile phase, a mixture formed of methanol (A) and water comprising 0.1% by volume of formic acid (B), with a ratio by volume A / B of 95/5 and with a flow rate of the liquid mobile phase in the chromatography column of 0.25 mE / min; by injection into the column for chromatography of a volume of 1 μl of brodifacoumoum composition at a concentration of 1 μg of brodifacoum per milliliter of acetonitrile.
Throughout the text: - the term "brodifacoum" means the compound of formula 3- (4'-bromobiphenyl-4-yl) -1- (4-hydroxycoumarin-3-yl) -1,2,3,4-tetrahydronaphthalene or 4-hydroxy-3- (3- (4'-bromo-4-biphenylyl) -1,2,3,4-tetrahydro-1-naphthyl) coumarin of formula (I) below:
(I); in which the numbers of carbons 1 and 3 of the 1,2,3,4-tetrahydronaphthalene group are represented; the term "stereoisomers" denotes isomers of the same semi-developed formula, but whose relative position of atoms differs in space. The term "configuration stereo-isomers" refers to stereoisomers whose conversion of these configuration stereoisomers into one another requires a break / reformation of an interatomic covalent bond. Thus, the term "configuration stereo-isomers" refers to stereoisomers which are not conformational isomers (or "rotamers", whose conversion of the one to the other of the conformational isomers is accompanied only by a rotation of a part of the molecule along the axis of a bond σ (sigma) formed by axial overlap of orbitals); the term "diastereoisomers" denotes stereoisomers of configuration which are not enantiomers, that is to say stereoisomers of configuration which have the same sequence of atoms, but whose structures are not superimposable neither image of one another in a mirror; the term "quantity" means a molar amount, a mass quantity or a volume quantity. The proportions are therefore proportions of a molar amount relative to a molar amount, of a mass quantity relative to a mass quantity, or of a volume quantity referred to a volume quantity; - the term "substantially" indicates, in the usual way, that a structural or functional characteristic should not be taken as marking an abrupt discontinuity, which would have no physical meaning, but covers not only that structure or function, but also slight variations of this structure or function which produce, in the technical context considered, an effect of the same nature, if not of the same degree; the terms "high pressure liquid chromatography" or "high performance liquid chromatography"("HPLC") refer to "HPLC" or "High Performance Liquid Chromatography" chromatography, and; the expression "retention time" designates the duration measured at the top of the chromatogram peak during which a compound is retained on the chromatography column.
The inventors have observed that the analysis of brodifacoum by high pressure liquid chromatography under the conditions described above reveals four signals or peaks corresponding to four compounds of the same chemical formula developed and corresponding to the formula (I) of brodifacoum. They determined, by the analysis of brodifacumoum preparations comprising varying proportions of diastereoisomers of brodifacoum, that the two compounds corresponding to the signal having a retention time ti of a value of the order of 15.4 min and to the signal having a retention time t4 of a value of the order of 26.3 min are the enantiomers, called enantiomers E, and enantiomer E4, of one of the two diastereoisomers, called diastereoisomer DL4, of brodifacoum and that the two compounds corresponding to the signal having a retention time t2 of a value of the order of 17.2 min and the signal having a retention time t3 of a value of the order of 19.9 min are the enantiomers, called enantiomers E2 and enantiomer E3, of another diastereoisomer, said diastereoisomer D2 3 of brodifacoum distinct from said diastereoisomer D14. One of the two diastereoisomers of brodifacoum is a configuration stereoisomer of brodifacoum in which carbons 1 and 3 of the 1,2,3,4-tetrahydronaphthalene group of brodifacoum are of the same absolute configuration and the other of the two diastereoisomers of brodifacoum is a configuration stereoisomer of brodifacoum in which carbons 1 and 3 of the 1,2,3,4-tetrahydronaphthalene group of brodifacoum are of distinct absolute configurations, the absolute configurations being determined according to the sequential rules of priority and the nomenclature of Cahn, Ingold and Prelog (CIP).
The values of the retention times t 1, t 2, t 3 and t 4 are likely to vary, in particular with the temperature of the chromatography column. However, in these chromatographic conditions, the elution order of the embroidery stereoisomers configuration remains unchanged.
The inventors have made such a separation of the configuration stereoisomers of brodifacoum by high-pressure liquid chromatography on a chiral column LUX® Cellulose-3 (00F-4492-B0, phenomenex, Le Pecq, France). If necessary, it is possible to successively carry out several stages of high-pressure liquid chromatography on a chiral column in order to obtain the quantity of said desired E 3 enantiomer with the desired purity level. The inventors have obtained said purified E3 enantiomer and separated from the E2 enantiomer and separated from the E1 enantiomer and the E4 enantiomer of said D14 diastereoisomer of the brodifacoum by elimination of the mobile phase of the fraction collected and containing said E3 enantiomer. It is possible to carry out such a separation by high pressure liquid chromatography on a preparative chiral column, that is to say on a chiral column of larger dimensions - in particular with an internal diameter greater than 2 mm - and in which the stationary phase has a particle size greater than 3 μm.
It was not previously known to be able to separate said enantiomer E3 from said enantiomer E2 and enantiomers (E, and E4) from diastereoisomer D1> 4 of brodifacoum.
The inventors who managed to separate said enantiomer E3 and said enantiomer E2 and to isolate said E3 enantiomer also discovered that said E3 enantiomer has a higher persistence in the liver of harmful target rodents than the remanence of said E2 enantiomer, and also more high that the remanence of each of the two enantiomers Ei and E4 of said diastereoisomer D] 4.
A rodenticide bait according to the invention thus comprises said enantiomer E3, excluding a racemic mixture of said enantiomer E3 and said enantiomer E2, said enantiomer E3 being the enantiomer of said diastereoisomer D2 which is the most selected (time of retention of greater value) in chromatography under the aforementioned conditions, said enantiomers E2 and E3.
A rodenticide bait according to the invention therefore comprises an amount of said enantiomer E3 different from the amount of said enantiomer E2. The invention therefore also relates to such a rodenticidal bait comprising said E3 enantiomer, excluding a racemic mixture of said enantiomer E3 and said enantiomer E2, that is to say excluding a mixture in which said enantiomer E3 and said enantiomer E2 are in equal amounts (molar, mass or volume) in the rodenticide bait. The invention thus relates to a rodenticide bait comprising said enantiomer E3, excluding a racemic mixture of said enantiomer E3 and said non-optically active enantiomer E2.
The enantiomer E3 and said enantiomer E2 are dosed with any composition comprising brodifacoum after analysis and separation by liquid chromatography using a chiral stationary phase and a liquid mobile phase as described above for the analysis of the configuration stereoisomers. brodifacoum, by carrying out a quantitative detection of the enantiomers at the outlet of the separating column, for example by absorption photometry, by adjusting the concentration of brodifacoum and the injection volume in order to obtain an optimal detection and by measuring the value of the area under the peak of each enantiomer E3 and E2. It is also possible to assay said enantiomer E2 and said enantiomer E3 of any composition comprising brodifacoum by performing a mass spectrometric detection at the outlet of the separating column.
According to the invention, it is possible to produce a rodenticide bait comprising predetermined proportions of each of the embroidery-configuration stereoisomers-in particular of said enantiomer E3 and said enantiomer E2 of said diastereoisomer D2 3 and enantiomers E, and E4 of said diastereoisomer Di > 4- making it possible to optimize the rodenticide efficacy of this rodenticide bait and to limit its toxicity with respect to the environment.
Advantageously and according to the invention, said enantiomer E3 is present in the rodenticide bait in an amount greater than the amount of said enantiomer E2 in the rodenticide bait. Advantageously, said diastereoisomer D2 3 of brodifacoum is therefore mainly in the form of said enantiomer E3 in the rodenticide bait. Advantageously, a rodenticide bait according to the invention comprises diastereoisomer D23 of brodifacoum mainly in the form of said enantiomer E3.
Throughout the text, the expression "said diastereoisomer D2 3 is predominantly in the form of said enantiomer E3" means that the ratio of the quantity (mass, molar or volume) of said enantiomer E3 to the quantity (mass, molar or corresponding volume) of said diastereoisomer D2 3 of brodifacoum (in all its enantiomeric forms E2 and E3) is greater than 50%.
Thus, in particular in a rodenticide bait according to the invention: the ratio of the amount of said enantiomer E 3 to the sum of the amount of said enantiomer E 2 and the amount of said enantiomer E 3 is greater than 0.5 (greater than 50%); the ratio of the concentration of said enantiomer E3 to the sum of the concentration of said enantiomer E2 and the concentration of said enantiomer E3 is greater than 0.5 (greater than 50%), and; the proportion of said enantiomer E3 in the rodenticide bait is greater than the proportion of said E2 enantiomer in the rodenticide bait.
Advantageously and according to the invention, the rodenticide bait comprises an amount of said enantiomer E3 such that the ratio of this amount to the sum of the amount of said enantiomer E2 and the amount of said enantiomer E3 in the rodenticide bait is greater than 50%. , in particular greater than 60%, in particular greater than 70%, more particularly greater than 80%, preferably greater than 90%, more preferably greater than 95%, particularly preferably greater than 98%, still more preferably greater than 99% or of the order of 100%.
In a particular embodiment, advantageously and according to the invention, the rodenticidal bait comprises an amount of said enantiomer E3 such that the ratio of this amount to the sum of the amount of said enantiomer E2 and the amount of said enantiomer E3 in the rodenticide bait is greater than 75%, preferably between 85% and 100%, more preferably between 90% and 98%.
In another embodiment, advantageously and according to the invention, the rodenticidal bait comprises an amount of said enantiomer E3 such that the ratio of this quantity to the sum of the amount of said enantiomer E2 and the amount of said enantiomer E3 in the rodenticide bait is between 98% and 100%. The rodenticide bait may also comprise an amount of said enantiomer E2 such that the ratio of this amount to the sum of the amount of said enantiomer E2 and the amount of said E3 enantiomer in the rodenticide bait is less than 50%, especially less than 25%. %, preferably between 0% and 25%, in particular less than 10%.
Advantageously and according to the invention, the brodifacoum is mainly in the form of said enantiomer E3 in the rodenticide bait. The rodenticide bait therefore comprises an amount of said enantiomer E3 such that the ratio of this quantity to the amount of brodifacoum in the rodenticide bait is greater than the ratio of the amount of said enantiomer E2 to the amount of brodifacoum in the rodenticide bait, is greater than the ratio of the amount of said enantiomer Ej to the amount of brodifacoum in the rodenticide bait and is greater than the ratio of the amount of said enantiomer E4 to the amount of brodifacoum in the rodenticide bait.
Thus, in particular, in a rodenticide bait according to the invention: the ratio of the amount of said enantiomer E3 to the amount of brodifacoum is greater than 0.25 (greater than 25%); the ratio of the amount of said enantiomer E3 to the sum of the amount of said enantiomer E2, the amount of said enantiomer E3 and the amounts of each of the enantiomers E1 and E4 of said diastereoisomer D4 of the brodifacoum is greater than 0.25 (greater than 25%); the ratio of the concentration of said E3 enantiomer in the rodenticide bait to the concentration of brodifacoum in the rodenticide bait is greater than 0.25 (greater than 25%); the proportion of said E3 enantiomer in the rodenticide bait is greater than the proportion of the E2 enantiomer in the rodenticide bait and greater than the proportion of each of the E1 and E4 enantiomers of Di diesteroisomer Di; 4 of the brodifacoum in the rodenticide bait.
The inventors have also observed that a rodenticide bait according to the invention comprising brodifacoum mainly in the form of said enantiomer E3 may be used to control populations of rodent harmful target resistant to known rodenticide treatments.
Advantageously and according to the invention, the rodenticide bait comprises an amount of said enantiomer E3 such that the ratio of this quantity to the amount of brodifacoum in the rodenticide bait is greater than 25%, especially greater than 50%, in particular greater than 70%, more preferably greater than 80%, preferably greater than 90%, particularly preferably greater than 95%, more preferably greater than 98%, still more preferably greater than 99% or of the order of 100%.
In a particular embodiment, advantageously and according to the invention, the rodenticidal bait comprises an amount of said enantiomer E3 such that the ratio of this amount to the amount of brodifacoum in the rodenticide bait is greater than 70%, preferably comprised between 80% and 100%, more preferably between 90% and 100%.
In another embodiment, advantageously and according to the invention, the rodenticide bait comprises an amount of said enantiomer E3 such that the ratio of this amount to the amount of brodifacoum in the composition is between 95% and 99%.
In another particular embodiment, advantageously and according to the invention, the rodenticide bait comprises an amount of said enantiomer E3 such that the ratio of this amount to the amount of brodifacoum in the rodenticide bait is greater than 95%.
In another embodiment, advantageously and according to the invention, the rodenticide bait comprises an amount of said enantiomer E3 such that the ratio of this amount to the amount of brodifacoum in the rodenticide bait is between 98% and 100%. included terminals-.
In another particularly advantageous embodiment according to the invention, the rodenticide bait comprises an amount of said enantiomer E3 such that the ratio of this amount to the amount of the embroidered rodent bait is substantially of the order of 100%.
A rodenticide bait according to the invention may be substantially free of said enantiomer E2, that is to say that said enantiomer E2 may possibly be present in the rodenticide bait but only in the form of traces. A rodenticide bait according to the invention may also be substantially free of said DL4 diastereoisomer, that is to say that the DL4 diastereoisomer may possibly be present in the rodenticide bait but only in the form of traces. The rodenticide bait according to the invention may also be substantially free of the Ei enantiomer of said DK4 diastereoisomer, that is to say that the E enantiomer may possibly be present in the rodenticide bait but only in the form of traces. . The rodenticide bait according to the invention may also be substantially free of the E4 enantiomer of said diastereoisomer D, 4, ie the E4 enantiomer may optionally be present in the rodenticide bait but only in the form of traces.
Advantageously, a rodenticide bait according to the invention comprises a mass quantity of brodifacoum such that the ratio of this mass quantity of brodifacoum to the mass quantity of rodenticide bait is less than 50 ppm-that is to say less than 50 mg of brodifacoum per kilogram of rodenticide bait. Advantageously, it comprises a mass quantity of brodifacoum such that the ratio of this mass quantity of brodifacoum to the mass quantity of rodenticide bait is greater than 1 ppm. Advantageously, a rodenticide bait according to the invention comprises a mass quantity of brodifacoum such that the ratio of this mass quantity of brodifacoum to the mass quantity of rodenticide bait is between 1 ppm and 50 ppm (1 mg to 50 mg of brodifacoum per kilogram of rodenticide bait), in particular between 1 ppm and 25 ppm (1 mg to 25 mg of brodifacoum per kilogram of rodenticide bait), more preferably between 2 ppm and 15 ppm (2 mg to 15 mg of brodifacoum per kilogram bait), more preferably between 5 ppm and 10 ppm (5 mg to 10 mg of brodifacoum per kilogram of bait). Advantageously and according to the invention, the bait comprises brodifacoum with a mass proportion of the order of 3 ppm.
Advantageously, a rodenticide bait according to the invention comprises an amount of said enantiomer E3 such that the ratio of this amount to the amount of brodifacoum in the rodenticide bait is greater than 70%, more particularly greater than 80%, preferably greater than 90%. %, particularly preferably greater than 95%, more preferably greater than 98%, still more preferably greater than 99% or of the order of 100%, and brodifacoum in a mass proportion of less than 50 ppm relative to the rodenticide bait.
Advantageously and according to the invention, the edible excipient for harmful target rodents is chosen to allow consumption of the rodenticide bait by harmful target rodents. Advantageously and according to the invention, each edible excipient is non-lethal for harmful target rodents. The edible carrier is not a rodenticide in itself.
Advantageously and according to the invention, the edible excipient comprises at least one food selected from the group consisting of cereal seeds-notably dehulled cereal seeds-cereal seed mills, cereal seed flours, flakes cereal seeds, cereal bran and non-cereal seeds, eg alfalfa seeds - in particular in the form of husks, in the form of milling, in the form of flour, in the form of flakes or of ses-. The edible carrier may include any carrier that may be consumed by harmful target rodents.
Advantageously, the edible carrier comprises at least one food selected from the group consisting of plant foods and foods of animal origin. Advantageously, the edible carrier comprises at least one food chosen to be able to stimulate the appetite of harmful target rodents. In particular, this food is selected from the group consisting of seeds of one or more cereals, seeds of one or more grains, seeds of one or more grains, seed flakes of one or more cereals, the sound of one or more cereals, and the grain meal of one or more cereals. For example, cereals are selected from the group consisting of oats, wheat, barley, corn, soybeans and rice.
Advantageously, the food is selected from the group consisting of sweet foods. For example, these may be foods comprising at least one sugar selected from the group consisting of sucrose, lactose, fructose and glucose. It may be a sugar syrup-for example, a sugar syrup obtained by hydrolysis of the starch-or a sugar syrup obtained by hydrolysis of sucrose (invert sugar syrup), or beet sugar syrup, or maple syrup or sugar cane syrup, or syrup obtained from a plant of the genus stevia.
Advantageously, the food is chosen from the group consisting of flakes and coconut albumen flour (copra).
Advantageously, the food is selected from the group consisting of nuts, hazelnuts and almonds-shredded and / or powdered.
Advantageously, the food is selected from the group consisting of vegetable fats, vegetable oils (for example rapeseed oil, soy fat, sunflower oil, cocoa butter, peanut oil, peanut butter, corn oil palm oil), animal fats and animal oils (butter, lard, fish oil).
Advantageously, the food is selected from the group consisting of proteins of plant origin and proteins of animal origin. By way of example, mention may be made, for example, of powdered milk, particularly powdered skimmed milk, eggs, in particular powdered eggs, protein hydrolysates of animal origin and protein hydrolysates of origin. vegetable.
Advantageously and according to the invention, the rodenticide bait is chosen from the group consisting of solid baits comprising brodifacoum and a solid edible excipient. Advantageously, the rodenticide bait is a solid in the divided state, for example in the form of pellets or granules. Advantageously, the rodenticide bait can be a solid in the form of a block or paste that can be consumed by the target harmful rodents or a solid material that can be eaten by the target harmful rodents. Advantageously, the solid rodenticide bait according to the invention can be in the form of a rigid block, a semi-rigid block, a foam, a powder or a gel.
Advantageously, the rodenticide bait in the form of a powder, in the form of a foam or in the form of a gel is adapted to be able to soil the fur of the target rodent (s) harmful (s) ) and to be ingested by him (them) during his (their) grooming.
It may be a solid rodenticide bait comprising brodifacoum, excluding a racemic mixture of said enantiomer E3 and said enantiomer E2. It may also be a solid rodenticide bait comprising brodifacoum and wherein said diastereoisomer D2 3 is predominantly in the form of said enantiomer E3. It may also be a solid rodenticide bait comprising brodifacoum in which the brodifacoum is predominantly in the form of said enantiomer E3.
Advantageously and according to the invention, the rodenticide bait is chosen from the group consisting of liquid baits comprising brodifacoum and a liquid edible excipient. The rodenticide bait is then a drink for harmful target rodents. It may be a solution of brodifacoum in a solvent of brodifacoum, excluding a racemic mixture of said enantiomer E3 and said enantiomer E2. It may also be a solution of brodifacoum in a solvent of brodifacoum and wherein said diastereoisomer D23 is predominantly in the form of said enantiomer E3. It may also be a solution of brodifacoum in a solvent of brodifacoum and wherein brodifacoum is mainly in the form of said enantiomer E3.
It can also be a suspension of brodifacoum in the solid state in a liquid medium. It may also be an emulsion of brodifacoum in a liquid medium. The invention therefore also relates to a rodenticide bait comprising said enantiomer E3, excluding a racemic mixture of said enantiomer E3 and said enantiomer E2, the brodifacoum of the rodenticide bait being optically active. However, it is not excluded that the brodifacoum of the rodenticide bait according to the invention, comprising said enantiomer E3, excluding a racemic mixture of said enantiomer E3 and said enantiomer E2, is optically inactive.
Advantageously, the rodenticide bait comprises at least one dye. Such a dye makes it possible in particular to give said rodenticide bait a color easily detectable and identifiable by a person handling the rodenticide bait.
Advantageously, the rodenticide bait comprises at least one preservative able to ensure its conservation during storage. Advantageously, the rodenticide bait comprises at least one denatonium benzoate bittering compound, also known as "Bitrex®" intended to reduce the risk of accidental consumption by non-target organisms.
Advantageously, in a particular variant, the rodenticide bait according to the invention comprises exclusively brodifacoum, excluding a racemic mixture of said enantiomer E3 and said enantiomer E2, as a rodenticide substance. In particular, the rodenticide bait according to the invention is free of any other anticoagulant substance for rodenticide use distinct from brodifacoum. However, in this variant according to the invention, the rodenticide bait may comprise any harmful substance other than a rodenticide, such as an insecticide and / or acaricide.
Advantageously, in another particular variant, the rodenticide bait according to the invention comprises brodifacoum excluding a racemic mixture of said enantiomer E3 and said enantiomer E2 and at least one other substance distinct from brodifacoum as rodenticide substance. This other rodenticide substance, distinct from brodifacoum, may be another anticoagulant, particularly anti-vitamin K or non-anticonagulant, or any other non-anticoagulant rodenticide. The invention thus also relates to a chromatographic process for the separation of configuration stereoisomers-in particular from said enantiomer E3 and to said enantiomer E2 of a diastereoisomer, said D2-diastereoisomer of brodifacoum and, if appropriate, said enantiomer Ei and said enantiomer. E4 another diastereoisomer, said diastereoisomer DL4, brodifacoum. The invention relates in particular to a chromatographic process for obtaining said enantiomer E3, in which: a column for high pressure liquid chromatography of dimensions 150 x 2 mm is selected, and comprising a chiral stationary phase consisting of particles of tris cellulose ( 4-methylbenzoate), said particles being of average size of 3 μm and having an average pore size of 1000 Å; a mixture of methanol (A) and water comprising 0.1% by volume of formic acid (B) is chosen as a liquid mobile phase, with a volume ratio A / B of 95/5 and with a flow rate of the liquid mobile phase in the chromatography column of 0.25 ml7min; a separation of the configuration stereo-isomers of the embroidery at ambient temperature is carried out; a liquid composition comprising said E 3 enantiomer is introduced at the top of the chromatography column, and then; the liquid composition is entrained with the mobile phase in the column for chromatography under conditions suitable for causing separation of said enantiomer E2 and said enantiomer E3, and a fraction of the mobile phase comprising said enantiomer E3 is collected with a retention time t3 of value such as E <t2 <t3 <t4, E, t2 and t4 representing the retention times of the configuration stereoisomers of embodifacoum distinct from said enantiomer E3, separately from said enantiomer E2, and; the liquid mobile phase of said fraction is removed so as to obtain said enantiomer E3. The invention also relates to a configuration stereo-isomer of brodifacoum obtained by a method according to the invention. The invention also relates to a method of controlling harmful target rodents in which a quantity of rodenticide bait comprising: - at least one edible carrier for harmful target rodents is disseminated, and; a configuration stereo-isomer, referred to as the enantiomer E3, of the brodifacoum, excluding a racemic mixture of said enantiomer E3 and another configuration stereoisomer, referred to as the E2 enantiomer, of the distinct brodifacoum of said enantiomer E3; o said enantiomer E3 having, by chromatographic analysis of a composition of brodifacoumoum comprising four stereoisomers embroidery configuration made under the conditions described below and at a temperature of 21.5 ° C, a retention time t3; o said enantiomer E2 having, by chromatographic analysis of an embroidery composition comprising four stereoisomers of brodifacoum configuration performed under these same conditions, a retention time t2; the retention times t2 and t3 being of values such that b <t2 <t3 <t4; b and t4 represent retention times of embossifacoum configuration stereoisomers distinct from said enantiomer E2 and said enantiomer E3, said analysis being carried out: on a column for high pressure liquid chromatography of dimensions 150 x 2 mm, and comprising a chiral stationary phase consisting of tris (4-methylbenzoate) cellulose particles, said particles being of an average size of 3 μm and having an average pore size of 1000 Å; by using, as liquid mobile phase, a mixture formed of methanol (A) and water comprising 0.1% by volume of formic acid (B), with a ratio by volume A / B of 95/5 and with a flow rate of the liquid mobile phase in the chromatography column of 0.25 mE / min; by injection into the column for chromatography of a volume of 1 μl of brodifacoumoum composition at a concentration of 1 μg of brodifacoum per milliliter of acetonitrile. The invention also relates to a method for controlling harmful target rodents in which a quantity of rodenticide bait according to the invention is disseminated, said quantity of disseminated bait being sufficient to be rodenticide.
In such a process, advantageously and according to the invention, a rodenticidal bait comprising an amount of said enantiomer E3 greater than the amount of said enantiomer E2 is dispersed. Said diastereoisomer D2 3 is therefore mainly in the form of said enantiomer E3 in the rodenticide bait. In such a process, advantageously and according to the invention, the brodifacoum is mainly in the form of said enantiomer E3.
Advantageously and alternatively according to the invention, the following is chosen in combination: the edible excipient; an amount of said enantiomer E3 distinct from the quantity of said enantiomer E2 in the rodenticide bait; a proportion of said enantiomer E3 with respect to brodifacoum; - a mass proportion of brodifacoum in the rodenticide bait, and; - a quantity of disseminated rodenticide bait; so that harmful target rodents consume an amount of brodifacoum sufficient to be lethal to said harmful target rodents consuming said rodenticide bait within a single 24-hour period.
A rodenticide bait according to this variant of the invention is a deadly rodenticide bait in a single dose or "one-shot" in English. Advantageously and according to this variant of the invention, the mass proportion of brodifacoum in the rodenticide bait is between 5 ppm and 50 ppm, especially between 10 ppm and 50 ppm, preferably between 15 ppm and 50 ppm.
Advantageously and in another variant according to the invention, the following are chosen in combination: the edible excipient; an amount of said enantiomer E3 distinct from the quantity of said enantiomer E2 in the rodenticide bait; a proportion of said enantiomer E3 with respect to brodifacoum; - a mass proportion of brodifacoum in the rodenticide bait, and; - a quantity of disseminated rodenticide bait; so that harmful target rodents consume a quantity of brodifacoum; o non-lethal for harmful target rodents, ie generally non-lethal to harmful target rodents, consuming said rodenticide bait for a period of 24 consecutive hours, and; o sufficient to be lethal to harmful target rodents consuming said rodenticide bait for several 24-hour periods.
Advantageously and according to the invention, said periods of 24 hours are consecutive.
This other variant of the invention therefore also relates to a method for controlling harmful target rodents in which a quantity of lethal rodenticide bait is dispersed for harmful target rodents consuming this rodenticide bait and generally non-lethal for rodents or animals. non-targets accidentally consuming this rodenticide bait. This is called a "multi-dose" or "multi-feeding" control method. In such a method according to the invention, the consumption of rodenticide bait by a target rodent harmful for a period of 24 hours may be insufficient to cause the death of said rodent, while a repeated consumption of rodenticide bait for at least two consecutive days can lead to the death of the rodent harmful target.
This other variant of the invention therefore relates to a method for controlling a population of harmful target rodents in which harmful rodent rodents are provided with a quantity of rodenticide bait capable of being ingested by the target harmful rodents, said quantity of rodenticide. rodenticide bait being sufficient to kill harmful target rodents consuming said rodenticide bait for several days.
Advantageously and in this other variant according to the invention the mass proportion of brodifacoum may be between 3 ppm and 50 ppm, in particular between 5 ppm and 30 ppm -particularly of the order of 15 ppm- compared to the rodenticide bait .
Advantageously, in this other variant of a process according to the invention, the quantity of disseminated rodenticide bait, the mass proportion of brodifacoum in the rodenticide bait, the proportion of said enantiomer E3 relative to the proportion of said enantiomer E2, are adjusted. and the proportion of said enantiomer E3 relative to brodifacoum so that the consumption of the rodenticide bait is lethal to harmful target rodents consuming daily rodenticide bait for at least 2 periods of 24 hours - especially 3 to 7 periods, said periods being consecutive.
Advantageously, in this other variant of a process according to the invention, the proportion of said E 3 enantiomer being greater than 95% - in particular of the order of 100% - with respect to the brodifacoum in the bait, the mass proportion of the brodifacoum by compared to the rodenticide bait is between 1 ppm and 15 ppm -particularly of the order of 10 ppm-.
In a method according to the invention, harmful target rodents are provided with a quantity of rodenticide bait sufficient to daily satisfy the appetite of the target harmful rodents.
In a process according to the invention, the amount of disseminated rodenticide bait, the amount of said E 3 enantiomer relative to the amount of said E 2 enantiomer, the amount of said E 3 enantiomer relative to the amount of brodifacoum and the mass proportion of brodifacoum are adjusted. in rodenticide bait so as to allow consumption of rodenticide bait for several days by harmful target rodents, while limiting: - the risk of primary intoxication of mammals and non-target birds that may consume only occasionally and accidentally such rodenticide bait; the risks of secondary intoxication, for example predators of target rodents, likely to consume rodents-dead or alive-targets having ingested a quantity of said bait. The invention also relates to a rodenticide bait comprising brodifacoum, a method for separating brodifacoum configuration stereoisomers and a method for controlling harmful target rodents characterized in combination by all or some of the characteristics mentioned above or above. after. Other objects, features and advantages of the invention will appear on reading the following description and examples given solely by way of non-limiting example and which refer to the appended figures, in which: FIG. 1 is a chromatogram representative of the separation of configuration stereoisomers from chiral embroidery; FIG. 2 is a histogram representation of the remanence of said enantiomer E3, of said enantiomer E2 and of the enantiomers E1 and E4 of said diastereoisomer D14 in the liver of rats.
Extraction of brodifacoum from livers of rats fed with brodifacoum
Homogenization of the liver sample
0.525 g (± 0.025 g) of rat liver are weighed accurately and placed in a 50 ml polypropylene tube. 10 ml of acetone are added and the suspension is subjected to homogenization using an Ultra-Turrax® homogenizer / disperser for a duration of the order of 30 seconds. The rod of the homogenizer / disperser is rinsed with hot water and then twice with 20 ml of acetone in a polypropylene tube. The homogenate is centrifuged for 5 minutes at a centrifugation rate of 3000 rpm (rotation per minute). The supernatant is collected and decanted into a test tube. The sample is evaporated under a stream of nitrogen (N 2) at a temperature of 40 ° C to form a dry extract. at
Elimination of lipids
In the tube containing the dry extract, 1 mL of acetonitrile is added so as to solubilize the dry extract. The acetonitrile solution is washed twice in succession with 1 mL of hexane. The lipid-freed extract is dried under a flow of nitrogen (N 2) at a temperature of 40 ° C., then taken up with 0.5 ml of methanol and solubilized by vortexing. 0.5 ml of ultrapure water (Milli-Q) is then added. The sample is homogenized under a vortex.
Extraction of brodifacoum on solid phase ("SPE, Solid
Extraction phase ")
1 ml of dichloromethane (CH 2 Cl 2), then 1 ml of methanol (CH 3 OH) and then 1 ml of ultrapure water (Milli-Q) are passed through an Oasis HLB lcc cartridge (WAT094225, Waters). The lipid-free liver extract (lmL CH3OH / H20 Milli-Q) containing the brodifacoum is then deposited at the top of the previously conditioned cartridge. The liver extract enters the cartridge by gravity in contact with the solid phase of the cartridge. 1 mL of washing solution formed of methanol (CH 3 OH) and ultrapure water (H 2 O) in a volume proportion of 90/10 is deposited at the top of the cartridge. The column is dried by vacuum suction connected at the bottom of the cartridge. 1 mL of elution solution consisting of dichloromethane (CH 2 Cl 2) and methanol (CH 3 OH) in a volume proportion of 90/10 is then deposited at the top of the cartridge and an eluate comprising brodifacoum is collected at the bottom of the cartridge. The solvent of the eluate is evaporated under a flow of nitrogen (N 2) at a temperature of 40 ° C. The sample is taken up in 0.5 ml of acetonitrile (NC-CH 3) and the acetonitrile solution containing the embroidery on a 0.2 μm porosity filter is filtered.
Analysis of configuration stereo-isomers of brodifacoum
Stereoisomers of configuration of brodifacoum are separated in liver extracts. Such a separation of the enantiomers of each diastereoisomer of brodifacoum by high pressure liquid chromatography is carried out using a LUX® Cellulose-3 chiral column (00F-4492-BO, phenomenex, Le Pecq, France) as a stationary phase and a mixture formed of methanol (A) and water comprising 0.1% by volume of formic acid (B), with a volume ratio A / B of 95/5 as a mobile phase with a flow rate of the liquid mobile phase in the chromatography column of 0.25 mL / min. 1 μl of hepatic liver extract prepared as previously described is injected onto the column. Detection is performed by tandem mass spectrometry (MS / MS) in Electrospray Ionization (ESI) mode. The nebulizer gas temperature is 350 ° C and its flow rate is 8 L / min. The nebulizer gas pressure is raised to 2700 hPa. In particular, it detects the MRM transitions ("Multiple Reaction Monitoring" m / z 521.1 - "78.9 and m / z 521.1 -" 135.1 corresponding to the signals of brodifacoum.The chromatogram obtained is shown in FIG. 1 as an example.
The values of the retention times of each of the enantiomers of brodifacoum are, under the conditions described, of: - ti = 15.4 min for the enantiomer E, of said diastereoisomer D14; - I2 = 17.2 min for said enantiomer E2; t3 = 19.9 min for said enantiomer E3 according to the invention, and; t4 = 26.3 min for the enantiomer E4 of said diastereoisomer D14.
The values of the retention times t 1, t 2, t 3 and t 4 are likely to vary according to the chromatographic conditions and with the temperature of the chromatography column. However, in these chromatographic conditions, the elution order of the embroidery stereoisomers configuration remains unchanged. As an indication, for a temperature variation of a few degrees Celsius, the value of the retention time (ti) of the enantiomer Ei of said diastereoisomer D] 4 can vary between 15.0 min and 15.7 min, the value of time of retention (t2) of said enantiomer E2 can vary between 16.9 min and 17.5 min, the value of the retention time (t3) of said enantiomer E3 can vary between 18.8 min and 20.0 min and the value of time the retention (t4) of the E4 enantiomer of said diastereoisomer D1 4 can vary between 26.0 min and 27.5 min. Hepatic remission of the stereoisomers of configuration of brodifacoum in rats
Oral ("peros") rats were administered to laboratory rats (Sprague Dawley rats, Charles River, Saint germain on the Arbresle, Lrance), male and female, aged 8 weeks and weighing between 180 and 200 g. comprising brodifacoum in a mixture of vegetable oil and 5% DMSO so that the amount of brodifacoum ingested by each rat is of the order of 3.4 mg of brodifacoum per kilogram of rat. The gaved rats are treated daily by subcutaneous administration of a dose of vitamin K at a rate of 1U per rat.
The ratio of the amount of said diastereoisomer D2,3 to the amount of brodifacoum in the feed solution comprising brodifacoum is 70% and the ratio of the amount of said diastereoisomer D14 to the amount of brodifacoum in the feed solution comprising brodifacoum is 30%. At 1 day (D + 1), 2 days (D + 2), 5 days (D + 5), 7 days (D + 7) and 9 days (D + 9) after force-feeding, six anesthetized rats were euthanized isoflurane, the liver is removed from the euthanized rats and then extracted from the liver and the amounts of each of the enantiomers of brodifacoum present in the liver of the gaved rats. The results obtained on the rats (males and females) are given in Table 1 below in which the values of the concentration of each of the enantiomers of brodifacoum in the liver are the average of the values measured on 6 rats and expressed in nanogram (ng ) per gram of liver.
Table 1
FIG. 2 represents the evolution of the percentage of the mass quantity of each enantiomer (Ei and E4) of said diastereoisomer DJ4 and of each enantiomer (E2 and E3) of said diastereoisomer D2 3 relative to the amount of brodifacoum retained in the liver of the rats. fed and sacrificed at D + 1, D + 2, D + 5, D + 7 and D + 9. The percentage of the E3 enantiomer is represented by oblique hatched columns, the percentage of the E4 enantiomer is represented by white columns, the percentage of said E2 enantiomer is represented by horizontal hatched columns and the percentage of said E3 enantiomer is represented by black columns. The respective proportions of each of the enantiomers (Ei and E4) of said diastereoisomer D] 4 and said enantiomers (E2 and E3) of said diastereoisomer D2 3 in the embossing of the booster composition are shown in column "X" in FIG. 2 and are 15 % for the enantiomers Ei and E4 of said diastereoisomer D, 4 and 35% for the enantiomers E2 and E3 of said diastereoisomer D2 3.
Said enantiomer E3 is more persistent in the liver of rats than are said enantiomers E1, E2 and E4. The E3 enantiomer of brodifacoum is more persistent in the liver of harmful target rodents, is more effective as an anticoagulant and can therefore be used at lower doses in rodenticide baits. A rodenticide bait and a method of controlling a population of rodent harmful target according to the invention can reduce the amount of brodifacoum in baits for maintained rodenticide effectiveness.
It goes without saying that the invention can be the subject of many variants and applications. In particular, a rodenticide bait and a method of controlling harmful target rodents are subject to infinite variations both in the formulation of the rodenticide bait and in the methods of implementation of the method.
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Non-Patent Citations (1)
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| VAN HEERDEN P S ET AL: "Efficient Asymmetric Synthesis of the Four Diastereomers of Diphenacoum and Brodifacoum", TETRAHEDRON, ELSEVIER SCIENCE PUBLISHERS, AMSTERDAM, NL, vol. 53, no. 17, 1 April 1997 (1997-04-01), pages 6045 - 6056, XP004105831, ISSN: 0040-4020, DOI: 10.1016/S0040-4020(97)00254-8 * |
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