FR3028867A1

FR3028867A1 - Procede et dispositif de detection d'ensemencement et installation automatisee d'ensemencement equipee d'un tel dispositif de detection

Info

Publication number: FR3028867A1
Application number: FR1461492A
Authority: FR
Inventors: Christian Curel; Michel Roch
Original assignee: INTELLIGENCE ARTIFICIELLE APPLICATIONS
Current assignee: INTELLIGENCE ARTIFICIELLE APPLICATIONS
Priority date: 2014-11-26
Filing date: 2014-11-26
Publication date: 2016-05-27
Anticipated expiration: 2034-11-26
Also published as: US20170267965A1; FR3028867B1; CN107003237A; WO2016083703A1

Abstract

Procédé de détection d'ensemencement pour la détection de l'ensemencement avec un échantillon d'un milieu (21) de culture solide présent en couche sur une plaque (20) de culture, ladite plaque (20) de culture étant positionnée sur un support (2), Ce procédé comprend une étape de de projection d'un flux de lumière incidente en direction dudit support (2) pour permettre un éclairage oblique de la surface appelée surface (22) d'ensemencement dudit milieu (21) de culture de la plaque (20) de culture à l'état disposé de la plaque (20) de culture sur ledit support (2), une étape d'affichage sur une zone (41) d'affichage d'un écran (4) d'affichage d'une image en deux dimensions du flux de lumière incidente réfléchi par la surface (22) d'ensemencement de la plaque (20) de culture à l'état éclairé par les moyens (3) de projection d'un flux de lumière et une étape de prise de vue de la zone (41) d'affichage de l'écran (4).

Description

1 La présente invention concerne un procédé et un dispositif de détection d'ensemencement, ainsi qu'une installation automatisée d'ensemencement équipée d'un tel dispositif de détection.

Dans les domaines du diagnostic médical et du contrôle microbiologique industriel, agroalimentaire, pharmaceutique ou cosmétique, les milieux de culture gélosés en plaques de culture, en particulier en boîte de Pétri constituent depuis plusieurs décennies un outil indispensable à la détection et l'identification des microorganismes, éventuellement pathogènes.

L'ensemencement de tels milieux de culture se fait de manière classique, manuellement, à l'aide d'un outil d'ensemencement qui peut être une cese, une anse généralement de platine qu'il est nécessaire de chauffer à fins de stérilisation entre deux utilisations, un écouvillon ou une boule Trigalski. L'ensemencement peut également être réalisé à l'aide d'une pipette à usage unique. L'ensemencement peut également se faire de manière automatique, à l'aide de systèmes développés et commercialisés à cette fin. L'ensemencement comprend généralement une opération ou étape de dépose d'un échantillon biologique à analyser en surface du milieu de culture solide, tel qu'une gélose, et une opération ou étape de répartition de cet échantillon biologique sur ladite surface, à l'aide d'un outil d'ensemencement. Cette opération de répartition assure une dilution de l'échantillon. Cette opération de répartition peut s'opérer sur ladite surface à l'aide d'un outil d'ensemencement du type précité, qui peut se déplacer sur ladite surface suivant un tracé fonction de la méthode d'isolement retenue. Ainsi, l'une des techniques d'isolement les plus connues est la méthode d'isolement par cadran, qui consiste à former des stries suivant une méthodologie prédéterminée sur la surface dudit milieu de culture solide. D'autres méthodes telles que la méthode d'isolement en spirale ou la méthode d'isolement par numérotation peuvent également être utilisées.

3028867 2 Selon l'outil d'ensemencement utilisé, l'étape de dépose de l'échantillon biologique peut s'opérer simultanément ou de manière distincte par rapport à l'étape de répartition de l'échantillon à l'aide dudit outil d'ensemencement. Dans le cas d'ensemencement réalisé à l'aide d'un dispositif d'ensemencement 5 automatisé, il existe un risque important de faux négatif résultant de l'absence d'ensemencement. Cette absence d'ensemencement peut résulter, soit de l'absence de dépôt de l'échantillon sur la surface d'ensemencement du milieu de culture, notamment lorsque la dépose et l'isolement s'opèrent suivant deux opérations distinctes successives, soit de l'absence d'isolement de l'échantillon 10 pouvant résulter d'un dysfonctionnement de l'outil d'ensemencement ou d'un défaut, par exemple, de hauteur du milieu de culture solide. L'absence de dépose d'échantillon ou d'isolement entraîne nécessairement une absence de croissance des microorganismes après incubation de la plaque de culture, de sorte qu'il est conclu à un résultat négatif. Les 15 conséquences peuvent être dramatiques lorsqu'il s'agit d'un faux négatif, c'est-à-dire que l'absence de croissance de microorganismes résulte d'une absence d'ensemencement et non d'une absence de microorganismes dans l'échantillon. Un but de la présente invention est donc de proposer un procédé et un 20 dispositif de détection d'ensemencement ainsi qu'une installation d'ensemencement dont les conceptions permettent d'éviter la présence de faux négatifs. Un autre but de la présente invention est de proposer un procédé et un dispositif de détection d'ensemencement ainsi qu'une installation 25 d'ensemencement dont les conceptions permettent l'obtention d'images précises, aptes à être traitées, en particulier par des méthodes de traitement d'images basiques en un temps court. À cet effet, l'invention a pour objet un procédé de détection d'ensemencement 3028867 3 pour la détection de l'ensemencement avec un échantillon d'un milieu de culture solide présent en couche sur une plaque de culture, ladite plaque de culture étant positionnée sur un support, caractérisé en ce que ledit procédé comprend une étape de projection d'un flux de lumière incidente en direction 5 dudit support pour permettre un éclairage oblique de la surface appelée surface d'ensemencement dudit milieu de culture de la plaque de culture à l'état disposé de la plaque de culture sur ledit support, une étape d'affichage sur une zone d'affichage d'un écran d'affichage d'une image en deux dimensions du flux de lumière incidente réfléchi par la surface 10 d'ensemencement de la plaque de culture à l'état éclairé par les moyens de projection d'un flux de lumière et une étape de prise de vue de la zone d'affichage de l'écran, ladite prise de vue étant apte à être traitée pour déterminer l'état d'ensemencement du milieu de culture. La surface d'ensemencement du milieu de culture solide, et en particulier dans 15 le cas d'un milieu de culture gélose, est avant ensemencement une surface lisse. L'ensemencement, que ce soit par dépose et isolement simultanés ou successifs, génère une modification de l'état de ladite surface. Comme la surface du milieu de culture est lisse et relativement plane, la réflexion de ladite surface peut être assimilée à une réflexion spéculaire. De ce fait, il est 20 aisé de positionner l'écran sur la trajectoire suivie par le faisceau de rayons réfléchis par ladite surface d'ensemencement et d'obtenir une image en 2D extrêmement précise, où les motifs en surépaisseur ou en creux de la surface apparaissent en sombre ou en clair par rapport aux zones planes qui sont plus uniformes. Cette modification provient de la modification de la planéité de la 25 surface de la gélose qui provoque une modification des angles de réflexion du flux de lumière incident. Il en résulte la possibilité d'identifier, notamment dans le cas d'un ensemencement en deux temps, à la fois la dépose de l'échantillon qui se traduit par une surépaisseur de la surface et une zone sombre sur ladite prise de vue, et l'isolement dudit échantillon qui se traduit par un motif en creux de la surface et un motif en clair sur ladite prise de vue.

3028867 4 De préférence, ledit procédé comprend une étape de traitement de prise de vue en fonction de données de référence pour déterminer l'état (conforme/non conforme) de l'ensemencement. De préférence, ledit procédé comprend encore une étape de stockage desdites 5 prises de vue et d'identification desdites prises de vue en lien avec un marquage de l'échantillon ensemencé et/ou de la plaque de culture. L'invention a encore pour objet un dispositif de détection d'ensemencement pour la détection de l'ensemencement avec un échantillon d'un milieu de culture solide présent en couche sur une plaque de culture, caractérisé en ce 10 que le dispositif comprend un support de réception de la plaque de culture à ensemencer, des moyens de projection d'un flux de lumière incidente en direction dudit support pour permettre un éclairage oblique de la surface appelée surface d'ensemencement dudit milieu de culture de la plaque de culture à l'état disposé de la plaque de culture sur ledit support, un écran 15 d'affichage comportant une zone d'affichage apte à afficher une image en deux dimensions du flux de lumière incidente réfléchi par la surface d'ensemencement de la plaque de culture à l'état éclairé par les moyens de projection d'un flux de lumière et des moyens de prise de vue de la zone d'affichage de l'écran.

20 Grâce à la conception du dispositif, outre la possibilité d'obtenir une image en 2D précise pour les raisons mentionnées ci-dessus, le dispositif peut être disposé au-dessus et à écartement du support pour permettre un déplacement sans gêne du support. De préférence, le dispositif comprend des moyens de stockage desdites prises 25 de vue de la zone d'affichage de l'écran et des moyens de traitement desdites prises de vue pour déterminer l'état d'ensemencement. De préférence, les moyens de traitement desdites prises de vue comprennent des moyens d'analyse des niveaux de gris d'au moins une partie de la prise de 3028867 5 vue. La partie de la prise de vue à analyser en niveaux de gris, appelée région d'intérêt, correspond à la partie de la prise de vue permettant la visualisation de la zone de la surface d'ensemencement dont l'apparence de la surface est 5 susceptible d'être modifiée par ledit ensemencement. Cette modification de la surface peut résulter de la présence d'une goutte d'échantillon suite à la dépose dudit échantillon sur la surface d'ensemencement, de stries ou autres. Le traitement d'image peut, en raison de la simplicité et la précision des images, s'opérer à l'aide de logiciels de traitement d'image connus. io De préférence, le support de réception présente une surface de réception de la plaque de culture de couleur sombre, de préférence noire. Cette couleur sombre du support permet d'accentuer le contraste entre le milieu de culture solide qui est généralement transparent ou translucide dans le cas d'une gélose, et ledit support et d'éviter la formation de réflexions parasites sur 15 l'écran. De préférence, l'écran d'affichage est un écran de couleur claire, de préférence blanc. À nouveau, ce choix permet d'améliorer la qualité des images en deux dimensions obtenues sur ledit écran. De préférence, les moyens de prise de vue comprennent une caméra, ladite 20 caméra étant de préférence équipée d'un filtre passe-bande centré sur la longueur d'onde du flux de lumière incidente. De préférence, les moyens de prise de vue sont positionnés en regard de l'écran. De préférence encore, les moyens de prise de vue sont positionnés à un 25 niveau inférieur aux moyens de projection d'un flux de lumière, de préférence au-dessous desdits moyens de projection. Il en résulte un encombrement réduit 3028867 6 du dispositif. En particulier, de préférence, les moyens de projection de lumière, l'écran et les moyens de prise de vue sont montés sur un bâti support et sont disposés au-dessus du support.

5 De préférence, les moyens de projection d'un flux de lumière sont configurés pour produire une lumière collimatée, de préférence monochromatique. De préférence, les moyens de projection d'un flux de lumière sont des moyens de type laser comprenant de préférence deux diodes lasers montées en parallèle.

10 De préférence, l'écran est rétractable. Cette rétractation, qui peut s'opérer par enroulement de l'écran ou déplacement en monte et baisse de l'écran permet de libérer de manière supplémentaire l'accès au support. De préférence, le dispositif comprend un module de communication et de commande configuré pour commander les moyens de prise de vue et les 15 moyens de traitement de prise de vue en fonction de consignes reçues d'une unité de pilotage de moyens d'ensemencement et pour recevoir les résultats des moyens de traitement de prise de vue et transmettre lesdits résultats à ladite unité de pilotage. La présence dudit module permet un fonctionnement automatisé, en lien avec une installation d'ensemencement.

20 L'invention a encore pour objet une installation automatisée d'ensemencement de milieu de culture solide présent en couche sur une plaque de culture, ladite installation comprenant des moyens d'ensemencement de ladite plaque de culture, une unité de pilotage des moyens d'ensemencement, et un dispositif de détection d'ensemencement, caractérisé en ce que l'unité de pilotage 25 comprend des consignes d'ensemencement, de prise de vue et de traitement de prise de vue et est configurée pour piloter les moyens d'ensemencement en fonction desdites consignes, et en ce que le dispositif de détection 3028867 7 d'ensemencement comprend un module de communication et de commande configuré pour communiquer avec l'unité de pilotage et commander les moyens de prise de vue et les moyens de traitement de prise de vue en fonction des consignes de prise de vue et de traitement de prise de vue reçues de ladite 5 unité de pilotage et pour recevoir les résultats des moyens de traitement de prise de vue et transmettre lesdits résultats à ladite unité de pilotage. De préférence, les consignes d'ensemencement de prise de vue et de traitement de prise de vue se présentent sous forme de jeux d'instructions avec au moins l'un des jeux correspondant aux étapes suivantes : 10 - A) Vérifier la présence de la plaque de culture sur le support ; - B) Exécuter une étape d'ensemencement à l'aide des moyens d'ensemencement ; - C) Faire une prise de vue à l'aide des moyens de prise de vue ; - D) Analyser la prise de vue à l'aide des moyens de traitement de prise 15 de vue. L'invention sera bien comprise à la lecture de la description suivante d'exemples de réalisation, en référence aux dessins annexés dans lesquels : - La figure 1 représente une vue schématique de principe du dispositif de 20 détection d'ensemencement conforme à l'invention ; - La figure 2 représente une vue partielle en perspective d'une installation d'ensemencement équipée d'un dispositif de détection d'ensemencement conforme à l'invention ; - La figure 3 représente, de manière schématique, une partie des étapes d'un 25 programme d'ensemencement. Comme mentionné ci-dessus, le dispositif 1 de détection d'ensemencement, objet de l'invention, est plus particulièrement destiné à la détection de l'ensemencement avec un échantillon biologique quelconque d'un milieu 21 de 3028867 8 culture solide présent en couche sur une plaque 20 de culture. L'échantillon à analyser peut être issu de l'industrie alimentaire, pharmaceutique, cosmétique ou autre. Cet échantillon dit biologique est susceptible de contenir des microorganismes vivants dont par exemple la présence et/ou le nombre doivent être 5 analysés Dans l'exemple représenté, la plaque 20 de culture est formée par le corps d'une boîte de Pétri, ce qui est le cas le plus fréquemment rencontré, même si d'autres types de plaques de culture, se présentant généralement sous forme d'un plateau à rebord, peuvent être utilisés.

10 Dans l'exemple représenté, le milieu 21 de culture solide est un milieu gélosé formé d'une gélose coulée dans ladite boîte de Pétri. L'avantage du milieu gélosé est de former, après solidification, une couche de milieu de culture généralement transparente ou translucide dont la surface destinée à former la surface 22 d'ensemencement du milieu est lisse, cette surface 22 s'étendant 15 sensiblement parallèlement au plan moyen de la plaque formé ici par le fond du corps de boîte. Le dispositif 1 comprend encore un support 2 de réception de la plaque 20 de culture à ensemencer. Ce support 2 se présente généralement sous forme d'un plateau qui peut être équipé de moyens de retenue de la plaque de culture sur 20 ledit support, dans une position dans laquelle la surface 22 d'ensemencement du milieu de culture de la plaque s'étend sensiblement parallèlement au plan moyen dudit plateau. Généralement, ce support 2 est, comme dans l'exemple représenté, un support rotatif tournant sur lui-même, notamment pour faciliter la méthode d'isolement 25 par cadran mentionnée ci-dessus. La surface de réception de la plaque 20 de culture du support formée, dans le cas d'un support de type plateau, par la face du dessus du plateau sur laquelle la plaque 20 de culture est destinée à être posée, est de couleur sombre. Dans 3028867 9 l'exemple représenté, cette surface de réception est noire, pour accentuer les contrastes et faciliter la réflexion de lumière. Dans l'exemple représenté, le support 2 est intégré à une installation automatisée d'ensemencement. Cette installation automatisée comprend des 5 moyens d'entraînement en déplacement de la plaque 20 de culture à ensemencer pour le positionnement de la plaque 20 de culture sur ledit support et des moyens d'enlèvement de la plaque 20 de culture dudit support. Ces moyens n'ont pas été représentés. Le support 2 est par ailleurs ici représenté sous forme d'un support mobile en monte et baisse et en translation.

10 L'installation d'ensemencement comprend donc, pour la réalisation de l'opération d'ensemencement, un support de la plaque 20 de culture, ce support étant commun avec le support de la plaque de culture du dispositif de détection d'ensemencement. Dans l'exemple représenté, l'installation d'ensemencement comprend encore 15 des moyens 11 d'ensemencement de la plaque 20 de culture et une unité 12 de pilotage des moyens 11 d'ensemencement. Cette unité 12 de pilotage comprend des consignes d'ensemencement, de prise de vue et de traitement de prise de vue et est configurée pour piloter les moyens 11 d'ensemencement en fonction desdites consignes.

20 Ladite unité de pilotage est de préférence un système de type électronique et/ou informatique comprenant par exemple un microcontrôleur ou un microprocesseur associé à une mémoire. Ainsi, lorsqu'il est précisé que ladite unité de pilotage, ou des moyens de ladite unité de pilotage sont configurés pour réaliser une opération donnée, cela signifie que le système comprend des 25 instructions informatiques et les moyens d'exécution correspondants qui permettent de réaliser ladite opération. Les moyens 11 d'ensemencement peuvent affecter un grand nombre de formes, car il existe différentes installations automatisées d'ensemencement, 3028867 10 comme l'illustrent par exemple les documents WO 98/41 610, WO 92/11 538 ou US 3 850 754. Dans l'exemple représenté, ces moyens 11 d'ensemencement comprennent une zone de stockage d'outils d'ensemencement non représentée, des moyens 5 tels qu'une pince de saisie et d'entraînement en déplacement dudit outil d'ensemencement, l'unité 12 de pilotage étant notamment configurée pour déplacer les moyens de saisie et d'entraînement en déplacement de l'outil d'ensemencement à la surface du milieu de culture solide, suivant un tracé prédéfini correspondant aux consignes d'ensemencement.

10 L'unité de pilotage peut comprendre une pluralité de séquences de consignes d'ensemencement, chaque séquence étant fonction du type d'ensemencement souhaité. L'unité de pilotage est donc configurée pour piloter les moyens d'ensemencement en fonction des consignes d'ensemencement sélectionnées.

15 Pour permettre la détection de la ou des phases d'ensemencement telles que décrites ci-dessus, le dispositif de détection d'ensemencement comprend des moyens 3 de projection en direction du support 2 d'un flux de lumière incidente dont le faisceau de rayons incidents forme un angle non nul avec la normale audit support, et en particulier au plan de réception de la plaque 20 de culture 20 dudit support 2 et par suite, un angle non nul avec la normale à ladite surface 22 d'ensemencement du milieu 21 de culture de la plaque 20 de culture, pour permettre un éclairage oblique de la surface 22 d'ensemencement dudit milieu 21 de culture de la plaque 20 de culture, à l'état disposé de la plaque 20 de culture sur ledit support 2.

25 Dans l'exemple représenté, cet angle entre le faisceau de rayons incidents et la surface d'ensemencement est voisin de 45°. Comme la surface d'ensemencement du milieu de culture est une surface lisse sensiblement plane, la réflexion de ladite surface peut être assimilée à une réflexion 3028867 11 spéculaire. Les rayons réfléchis par ladite surface d'ensemencement forment donc un angle avec la normale à ladite surface de valeur numérique similaire à celle de l'angle formé par le faisceau de rayons incidents avec ladite normale. Dans l'exemple représenté, les moyens 3 de projection d'un flux de lumière 5 sont des moyens de type laser comprenant deux diodes laser montées en parallèle, à la manière des optiques d'une paire de jumelles. Ces moyens de projection d'un flux de lumière sont configurés pour produire une lumière collimatée monochromatique. Le dispositif de détection comprend encore un écran 4 d'affichage comportant 10 une zone 41 d'affichage apte à afficher une image en deux dimensions du flux de lumière incidente réfléchi par la surface 22 d'ensemencement de la plaque 20 de culture à l'état éclairé par les moyens 3 de projection d'un flux de lumière. Cet écran 4 d'affichage est ici représenté sous forme d'un écran vertical 15 rétractable par déplacement en monte et baisse. Cet écran d'affichage aurait pu, de manière similaire, être réalisé sous forme d'un écran enroulable. Cet écran d'affichage est un écran de couleur claire, représenté ici sous forme d'un écran blanc. Cet écran est un écran non réfléchissant, pour se distinguer d'un miroir. En l'occurrence, l'écran peut être formé par une simple feuille de papier.

20 Cet écran est positionné à un niveau supérieur au support 2 pour ne pas gêner un déplacement dudit support 2. Le dispositif 1 de détection d'ensemencement comprend encore des moyens 5 de prise de vue de la zone 41 d'affichage de l'écran. Ces moyens 5 de prise de vue comprennent une caméra équipée d'un filtre 10 passe-bande dont la 25 fréquence de bande choisie permet uniquement le passage de la bande de fréquences correspondant à celle du flux de lumière incidente produit par les moyens de projection de lumière. Généralement, la plage de longueur d'onde retenue est proche de 650 nm, ce 3028867 12 qui est la longueur d'onde de la lumière incidente. Dans l'exemple représenté, les moyens de prise de vue sont positionnés en regard de l'écran, à un niveau inférieur aux moyens 3 de projection d'un flux de lumière, en particulier au-dessous des moyens 3 de projection de flux de 5 lumière. Les moyens 3 de projection de lumière, l'écran 4 et les moyens 5 de prise de vue sont montés sur un bâti 9 support et sont disposés au-dessus dudit support 2. Au moins les moyens 5 de prise de vue sont montés de manière réglable en position sur le bâti 9 support pour optimiser la prise de vue.

10 Le dispositif 1 de détection comprend encore des moyens 7 de stockage desdites prises de vue de la zone 41 d'affichage de l'écran 4 et des moyens 8 de traitement desdites prises de vue en fonction de données de référence pour déterminer l'état d'ensemencement. Enfin, le dispositif 1 de détection comprend un module 6 de communication et 15 de commandes configuré pour communiquer avec l'unité 12 de pilotage et commander les moyens 5 de prise de vue et les moyens 8 de traitement de prise de vue en fonction des consignes de prise de vue et de traitement de prise de vue reçues de ladite unité 12 de pilotage, et pour recevoir les résultats des moyens 8 de traitement de prise de vue et transmettre lesdits résultats à 20 ladite unité 12 de pilotage. À nouveau, le module 6 de communication et de commande est un système de type électronique et/ou informatique comprenant par exemple un microcontrôleur ou un microprocesseur associé à une mémoire. Ainsi, lorsqu'il est précisé que le module, ou des moyens dudit module sont configurés pour 25 réaliser une opération donnée, cela signifie que le système comprend des instructions informatiques et des moyens d'exécution correspondants, qui permettent de réaliser ladite opération.

3028867 13 D'une manière générale, les consignes d'ensemencement, de prise de vue et de traitement de prise de vue se présentent sous forme de jeux d'instructions, au moins l'un des jeux correspondant aux étapes suivantes : - A) Vérifier la présence de la plaque 20 de culture sur le support 2 ; 5 - B) Exécuter une étape d'ensemencement à l'aide des moyens 11 d'ensemencement ; - C) Faire une prise de vue à l'aide des moyens 5 de prise de vue ; - D) Analyser la prise de vue à l'aide des moyens 8 de traitement de prise de vue.

10 L'étape d'ensemencement peut comporter une étape de dépose à l'aide de l'outil d'ensemencement d'une goutte d'échantillon biologique à ensemencer sur la surface d'ensemencement. L'étape d'ensemencement peut comporter une étape de balayage de la surface d'ensemencement à l'aide de l'outil d'ensemencement, à partir de la surface de 15 la zone de dépose de la goutte. En variante, l'étape d'ensemencement peut comporter une étape simultanée de dépose de l'échantillon et de balayage de la surface d'ensemencement à l'aide de l'outil d'ensemencement chargé en échantillon. En fonction des consignes de prise de vue et de traitement reçues par les 20 moyens de prise de vue et de traitement de prise de vue, ces derniers peuvent être commandés pour effectuer une prise de vue avant dépôt. Dans ce cas, la prise de vue réalisée correspond à la surface d'ensemencement avant toute opération d'ensemencement. Les moyens de prise de vue et de traitement de prise de vue peuvent 25 également être commandés à partir des consignes de prise de vue et de traitement de prise de vue reçues pour réaliser une prise de vue après dépôt de la goutte. Dans ce cas, les moyens de traitement de prise de vue, configurés pour traiter ladite prise de vue pour déterminer l'état conforme ou 3028867 14 non conforme d'ensemencement, peuvent être de type variable selon que la zone de dépose de l'échantillon appelée goutte est à la périphérie ou à l'intérieur de l'image formée par la réflexion de la gélose. Dans tous les cas, ces moyens de traitement de prise de vue reposent de manière générale sur 5 une analyse de niveaux de gris d'au moins une partie de la prise de vue. Ces moyens de traitement de prise de vue comprennent donc des moyens d'analyse de niveaux de gris d'au moins une partie de prise et généralement des moyens de définition d'une région d'intérêt formant la partie de la prise de vue à analyser en niveaux de gris. La définition de la région d'intérêt est 10 variable en fonction du type d'ensemencement et du type d'analyse en niveaux de gris. Dans le cas où le traitement d'image est destiné à valider la dépose de la goutte d'échantillon, ces moyens de traitement d'image comprennent des moyens de définition d'une région d'intérêt formant ladite partie de la prise de vue à analyser. Cette région d'intérêt correspond généralement à une zone de 15 la prise de vue de surface supérieure à la surface présumée couverte par la goutte d'échantillon déposée et venant à recouvrement au moins partiel de ladite surface. Dans le premier cas décrit ci-dessous, cette région d'intérêt présente une aire au moins égale à trois fois l'aire présumée de la surface occupée par la goutte d'échantillon déposée. Dans le second cas décrit ci- 20 dessous, la région d'intérêt peut présenter une aire sensible égale à l'aire présumée de la surface occupée par la goutte. Ainsi, si la goutte est à la périphérie de l'image formée par la réflexion de la gélose, on peut prévoir de détecter les transitions de niveaux de gris dans la 25 région d'intérêt correspondant à la frontière de la goutte dans la prise de vue puis d'effectuer une interpolation linéaire puis circulaire des points détectés pour identifier l'absence ou la présence de la goutte. Si la goutte est à l'intérieur de l'image formée par la réflexion de la gélose, on 30 peut prévoir de : -mesurer les intensités de gris de chaque pixel de la prise de vue dans la région d'intérêt (c'est-à-dire la région de la prise de vue supposée 3028867 15 contenir la goutte), la localisation de cette zone d'intérêt formant une donnée de référence ; -effectuer la moyenne desdites intensités de gris dans ladite région d'intérêt ; 5 -comparer la moyenne desdites intensités de gris à une valeur seuil formant une donnée de référence ; -transmettre le résultat de la comparaison via le module de communication à l'unité de pilotage. En d'autres termes, dans ce second cas, les données de référence 10 comprenant des données de localisation correspondant à la localisation présumée de la goutte sur la prise de vue appelée région d'intérêt et une valeur seuil de niveau de gris, les moyens de traitement de prise de vue peuvent comprendre des moyens de mesure du niveau de gris de la zone de région d'intérêt, des moyens de comparaison de la valeur mesurée avec la 15 valeur seuil de référence, et des moyens de détermination de l'état conforme ou non conforme de l'ensemencement, en fonction du résultat de la comparaison. Le résultat conforme correspond à la présence d'une tache sombre formée par la goutte dans ladite région d'intérêt. Si le résultat de la comparaison est tel que la valeur mesurée des moyennes 20 de gris est supérieure à la valeur seuil de référence, l'unité de pilotage est configurée pour continuer l'exécution du programme d'ensemencement tel que prévu initialement. Si le résultat de la comparaison est tel que la valeur mesurée des moyennes de gris est inférieure à la valeur seuil prédéterminée, l'unité de pilotage est 25 configurée pour lancer une procédure d'incident qui peut revêtir un grand nombre de formes d'exécution. Cette procédure d'incident peut ainsi consister en un arrêt de l'installation ou en une reprise de l'étape d'ensemencement non réalisée correctement. Cette procédure d'incident ne sera donc pas décrite en détail.

3028867 16 Dans le cas où le programme d'ensemencement est poursuivi, les moyens de prise de vue et de traitement de prise de vue peuvent être commandés à partir des consignes de prise de vue et de traitement de prise de vue pour réaliser une prise de vue après balayage de la surface d'ensemencement à l'aide de 5 l'outil d'ensemencement et formation de stries à ladite surface. Pour faciliter le traitement d'image, il est préférable que les stries s'étendent verticalement dans la prise de vue, c'est-à-dire dans l'image capturée par les moyens de prise de vue. Pour obtenir un tel résultat, il est possible d'orienter le support 2 de manière appropriée par rapport aux moyens 5 de prise de vue, ce qui est 10 aisé lorsque le support est rotatif. Le traitement ultérieur de la prise de vue pour détecter les stries peut comprendre par exemple : - la définition d'une région d'intérêt où les stries sont supposées être 15 présentes. - la projection verticale des valeurs de niveaux de gris sur un axe horizontal - l'obtention d'un profil dont les valeurs correspondent à la somme des valeurs de niveau de gris selon l'axe vertical de l'image : 20 Le profil obtenu est une représentation en une dimension de la Région d'intérêt de la prise de vue qui, elle, est en deux dimensions. Sur ce profil les parties claires sont les sommets, les parties sombres sont les vallées. En analysant la dérivée du profil, il est possible de détecter les transitions sommet vallée (clair/sombre), ou vallée sommet (sombre/clair) et donc de détecter la présence 25 ou l'absence de stries. Un nombre de stries minimal est ajusté pour éliminer les artefacts dans la prise de vue. Bien évidemment, à nouveau, d'autres modes de réalisation de l'analyse des niveaux de gris de la région d'intérêt peuvent être envisagés sans sortir du 30 cadre de l'invention. Les procédures décrites ci-dessus s'appliquent lorsque l'ensemencement 3028867 17 s'opère en deux temps avec, dans un premier temps, une dépose d'une goutte d'échantillon à l'aide de l'outil d'ensemencement préalablement à l'étape de répartition de la goutte sur la surface d'ensemencement à l'aide de l'outil d'ensemencement. Ainsi, la prise de vue avant ensemencement permet de 5 visualiser l'état de surface de la gélose avant ensemencement. La prise de vue pendant l'ensemencement permet de s'assurer de la dépose de l'échantillon par apparition d'une tache sombre sur la prise de vue, en un emplacement correspondant à la zone de dépose de la goutte. La prise de vue après ensemencement permet de visualiser des traits plus clairs correspondant aux 10 stries formées par le balayage de la surface d'ensemencement à l'aide de l'outil d'ensemencement. Lorsque l'outil d'ensemencement est un écouvillon, la prise de vue pendant l'ensemencement est supprimée, car il n'y a pas d'étape de dépose de goutte distincte de l'étape de balayage.

15 Dans certains cas, l'étape de prise de vue avant ensemencement est également supprimée. L'homme du métier comprend aisément que les différentes étapes en fonction des modes de réalisation présentés ci-dessus peuvent être réalisées sous forme de programmes d'ordinateur. En particulier, les étapes décrites ci-dessus 20 peuvent être réalisées sous forme d'instructions électroniques et/ou informatiques exécutables par un ou plusieurs processeurs. Ces programmes d'ordinateur ou instructions informatiques peuvent être contenus dans des dispositifs de stockage de programmes, par exemple des supports de stockage de données numériques lisibles par ordinateur ou des programmes 25 exécutables. Les programmes ou instructions peuvent également être exécutés à partir de périphériques de stockage de programmes. À l'issue de l'ensemencement, la (ou les) prise(s) de vue mémorisée(s) est (sont) mémorisée(s) en corrélation avec des données relatives à l'échantillon ou à la plaque de culture ensemencée.

3028867 18 À cet effet l'installation peut comprendre de manière en soi connue des moyens d'identification d'un marquage de l'échantillon et/ou de la plaque de culture, ces moyens d'identification étant raccordés à l'unité de pilotage pour fournir à ladite unité des informations relatives audit marquage. 5

Claims

REVENDICATIONS1. Procédé de détection d'ensemencement pour la détection de l'ensemencement avec un échantillon d'un milieu (21) de culture solide présent 5 en couche sur une plaque (20) de culture, ladite plaque (20) de culture étant positionnée sur un support (2), caractérisé en ce que ledit procédé comprend une étape de projection d'un flux de lumière incidente en direction dudit support (2) pour permettre un éclairage oblique de la surface appelée surface (22) d'ensemencement dudit milieu (21) 10 de culture de la plaque (20) de culture à l'état disposé de la plaque (20) de culture sur ledit support (2), une étape d'affichage sur une zone (41) d'affichage d'un écran (4) d'affichage d'une image en deux dimensions du flux de lumière incidente réfléchi par la surface (22) d'ensemencement de la plaque (20) de culture à l'état éclairé par les moyens (3) de projection d'un flux de 15 lumière et une étape de prise de vue de la zone (41) d'affichage de l'écran (4), chaque prise de vue étant apte à être traitée pour déterminer l'état d'ensemencement dudit milieu (21) de culture.
2. Dispositif (1) de détection d'ensemencement pour la détection de 20 l'ensemencement avec un échantillon d'un milieu (21) de culture solide présent en couche sur une plaque (20) de culture, caractérisé en ce que le dispositif (1) comprend un support (2) de réception de la plaque (20) de culture à ensemencer, des moyens (3) de projection d'un flux de lumière incidente en direction dudit support (2) pour permettre un éclairage 25 oblique de la surface appelée surface (22) d'ensemencement dudit milieu (21) de culture de la plaque (20) de culture à l'état disposé de la plaque (20) de culture sur ledit support (2), un écran (4) d'affichage comportant une zone (41) d'affichage apte à afficher une image en deux dimensions du flux de lumière incidente réfléchi par la surface (22) d'ensemencement de la plaque (20) de 30 culture à l'état éclairé par les moyens (3) de projection d'un flux de lumière et des moyens (5) de prise de vue de la zone (41) d'affichage de l'écran (4). 3028867 20
3. Dispositif (1) selon la revendication 2, caractérisé en ce qu' il comprend des moyens (7) de stockage desdites prises de vue de la zone (41) d'affichage de l'écran (4) et des moyens (8) de traitement desdites prises de vue pour déterminer l'état d'ensemencement.
4. Dispositif (1) selon l'une des revendications 2 ou 3, caractérisé en ce que le support (2) de réception présente une surface de réception de la plaque (20) de culture de couleur sombre, de préférence noire.
5. Dispositif (1) selon l'une des revendications 2 à 4, caractérisé en ce que l'écran (4) d'affichage est un écran de couleur claire, de préférence blanc.
6. Dispositif (1) selon l'une des revendications 2 à 5, caractérisé en ce que les moyens (5) de prise de vue comprennent une caméra, ladite caméra étant de préférence équipée d'un filtre (10) passe-bande centré sur la longueur d'onde du flux de lumière incidente.
7. Dispositif (1) selon l'une des revendications 2 à 6, caractérisé en ce que les moyens (5) de prise de vue sont positionnés en regard de l'écran (4).
8. Dispositif (1) selon l'une des revendications 2 à 7, caractérisé en ce que les moyens (5) de prise de vue sont positionnés à un 25 niveau inférieur aux moyens (3) de projection d'un flux de lumière, de préférence au-dessous desdits moyens (3) de projection.
9. Dispositif (1) selon l'une des revendications 2 à 8, caractérisé en ce que les moyens (3) de projection de lumière, l'écran (4) et les 30 moyens (5) de prise de vue sont montés sur un bâti (9) support et sont disposés au-dessus du support (2). 3028867 21
10. Dispositif (1) selon l'une des revendications 2 à 9, caractérisé en ce que les moyens (5) de projection d'un flux de lumière sont configurés pour produire une lumière collimatée, de préférence monochromatique.
11. Dispositif (1) selon l'une des revendications 2 à 10, caractérisé en ce que les moyens (5) de projection d'un flux de lumière sont des moyens de type laser comprenant de préférence deux diodes lasers montées en parallèle.
12. Dispositif (1) selon l'une des revendications 2 à 11, caractérisé en ce que l'écran (4) est rétractable.
13. Dispositif (1) selon l'une des revendications 4 à 12, prise en combinaison 15 avec la revendication 3, caractérisé en ce qu'il comprend un module (6) de communication et de commande configuré pour commander les moyens (5) de prise de vue et les moyens (8) de traitement de prise de vue en fonction de consignes reçues d'une unité (12) de pilotage de moyens (11) d'ensemencement et pour recevoir 20 les résultats des moyens (8) de traitement de prise de vue et transmettre lesdits résultats à ladite unité (12) de pilotage.
14. Installation automatisée d'ensemencement de milieu (21) de culture solide présent en couche sur une plaque (20) de culture, ladite installation comprenant des moyens (11) d'ensemencement de ladite plaque (20) de culture, une unité (12) de pilotage des moyens (11) d'ensemencement, et un dispositif (1) de détection d'ensemencement, caractérisée en ce que l'unité (12) de pilotage comprend des consignes d'ensemencement, de prise de vue et de traitement de prise de vue et est configurée pour piloter les moyens (11) d'ensemencement en fonction desdites consignes, et en ce que le dispositif (1) de détection d'ensemencement est conforme à l'une des revendications 3, ou 4 à 12 prises en combinaison avec la revendication 3 et comprend un module (6) 5 10 3028867 22 de communication et de commande configuré pour communiquer avec l'unité (12) de pilotage et commander les moyens (5) de prise de vue et les moyens (8) de traitement de prise de vue en fonction des consignes de prise de vue et de traitement de prise de vue reçues de ladite unité (12) de pilotage et pour 5 recevoir les résultats des moyens (8) de traitement de prise de vue et transmettre lesdits résultats à ladite unité (12) de pilotage.
15. Installation selon la revendication 14, caractérisée en ce que les consignes d'ensemencement, de prise de vue, et de traitement de prise de vue se 10 présentent sous forme de jeux d'instructions avec au moins l'un des jeux correspondant aux étapes suivantes : - A) Vérifier la présence de la plaque (20) de culture sur le support (2) - B) Exécuter une étape d'ensemencement à l'aide des moyens (11) d'ensemencement 15 - C) Faire une prise de vue à l'aide des moyens (5) de prise de vue - D) Analyser la prise de vue à l'aide des moyens (8) de traitement de prise de vue.