FR3025802A1

FR3025802A1 - ANAEROBIC BIOREACTOR DEVICE WITH REMOVABLE OBSERVATION MODULE

Info

Publication number: FR3025802A1
Application number: FR1402077A
Authority: FR
Inventors: Mohamed Jebbar; Mickael Beauverger; Haridon Stephane L; Gregoire Michoud
Original assignee: Ubo Cnrs; Univerdite de Bretagne Occidentale
Current assignee: Ubo Cnrs; Univerdite de Bretagne Occidentale
Priority date: 2014-09-16
Filing date: 2014-09-16
Publication date: 2016-03-18
Anticipated expiration: 2034-09-16
Also published as: FR3025802B1

Abstract

L'invention concerne un dispositif bioréacteur (AB1) comprenant un conteneur principal (R1) adapté à une culture de micro-organismes soumis à une première pression (P1), le conteneur principal (R1) comprend une ouverture principale (MI1), une première ouverture secondaire (SI1) et une seconde ouverture secondaire (SI2), le bioréacteur (AB1) comprend, entre la première ouverture secondaire (SI1) et la seconde ouverture (SI2) une circuiterie (CIR1) comprenant une cellule d'observation (VC1) adaptée à la circulation d'un contenu sous une lentille (VCL) d'observation translucide, à une seconde pression (P2) sensiblement identique à la première pression (P1), et au moins deux éléments d'isolement (ISO1, ISO2) adaptés une séparation mécanique de la cellule d'observation (VC1).The invention relates to a bioreactor device (AB1) comprising a main container (R1) adapted to a culture of microorganisms subjected to a first pressure (P1), the main container (R1) comprises a main opening (MI1), a first secondary opening (SI1) and a second secondary opening (SI2), the bioreactor (AB1) comprises, between the first secondary opening (SI1) and the second opening (SI2) a circuitry (CIR1) comprising an observation cell (VC1) adapted to the circulation of a content under a translucent observation lens (VCL), at a second pressure (P2) substantially identical to the first pressure (P1), and at least two adapted isolation elements (ISO1, ISO2) a mechanical separation of the observation cell (VC1).

Description

1 DISPOSITIF BIOREACTEUR ANAEROBIE AVEC MODULE D'OBSERVATION ESCAMOTABLE. 1. Domaine de l'invention. L'invention se rapporte au domaine des équipements de culture et d'études de micro-organismes en milieux extrêmes et plus particulièrement à aux dispositifs bioréacteurs anaérobies. 2. Etat de l'art. La biosphère océanique profonde représente l'écosystème le plus vaste de notre planète. Elle se caractérise par des conditions physiques et chimiques extrêmes et notamment par des fortes pressions hydrostatiques. Des procaryotes, organismes unicellulaires dépourvus de noyau, de différents types métaboliques ont été isolés de différents types d'environnement, froids, tièdes et chauds. Très peu sont piézophiles, c'est-à-dire n'étant adaptés qu'à vivre en pression hyperbare, avec des très grands niveaux de pression, de l'ordre de plusieurs centaines de bars. Des organismes piézophiles appartiennent aux domaines du vivant Archaea et Bacteria. Parmi les soixante procaryotes piézophiles isolés à ce jour, plus de 88% sont des bactéries psychrophiles. Des travaux de recherche ont permis d'arriver à l'isolement de procaryotes piézophiles hyper/thermophiles. En 1999, a été isolée l'archée hyperthermophile piézophile Thermococcus barophilus. En 2002, c'est l'unique bactérie thermophile et piézophile Marinitoga piezophila qui a été obtenue en culture pure par une équipe de recherche et, enfin, en 2009, a été isolée la première et l'unique archée hyperthermophile piézophile stricte Pyrococcus yayanosii CH1. La présence des procaryotes piézophiles dans les environnements chauds et froids des fonds océaniques pose des questions relatives à leur métabolisme et à des physiologies particulières leur permettant de jouer un 3025802 2 rôle dans les cycles biogéochimiques des environnements océaniques profonds, leur processus d'évolution et d'adaptation, ainsi qu'aux mécanismes d'adaptation à la pression.ANAEROBIC BIOREACTOR DEVICE WITH REMOVABLE OBSERVATION MODULE. 1. Field of the invention The invention relates to the field of culture equipment and studies of microorganisms in extreme environments and more particularly to anaerobic bioreactor devices. 2. State of the art The deep ocean biosphere is the largest ecosystem on our planet. It is characterized by extreme physical and chemical conditions and particularly by high hydrostatic pressures. Prokaryotes, unicellular organisms without nuclei, of different metabolic types have been isolated from different types of environment, cold, warm and hot. Very few are piezophiles, that is to say they are adapted only to live in hyperbaric pressure, with very high levels of pressure, of the order of several hundred bars. Piezophilic organisms belong to the domains of the living Archaea and Bacteria. Of the sixty piezophilic prokaryotes isolated to date, more than 88% are psychrophilic bacteria. Research has resulted in the isolation of hyper / thermophilic piezophilic prokaryotes. In 1999, was isolated the hyperthermophilic archeae piezophile Thermococcus barophilus. In 2002, it was the only thermophilic and piezophilic bacterium Marinitoga piezophila that was obtained in pure culture by a research team and, finally, in 2009, was isolated the first and only hyperthermophilic archer piezophile strict Pyrococcus yayanosii CH1 . The presence of piezophilic prokaryotes in hot and cold ocean bottom environments raises questions about their metabolism and particular physiologies that allow them to play a role in the biogeochemical cycles of deep ocean environments, their evolutionary processes and their evolution. adaptation, as well as the mechanisms of adaptation to pressure.

5 L'étude des mécanismes d'adaptation à la pression se fait sur les différents modèles hyper/thermophiles piézophiles. Leur manipulation est bien maitrisée par des laboratoires de recherche spécialisés dans ce domaine. La culture est l'observation de ces organismes en laboratoire, 10 c'est-à-dire dans un environnement où la pression atmosphérique est bien en deçà de la pression propre au milieu d'origine, requiert des équipements spécifiques. Des bioréacteurs anaérobies sont utilisés pour la culture des micro-organismes. Les microorganismes prélevés dans des fonds sous- 15 marins peuvent être introduits sous pression dans le conteneur de ces bioréacteurs. Les micro-organismes sont ensuite extraits du bioréacteur à l'issue d'une phase de culture, aux fins d'être observés au moyen de dispositifs d'observation connus, tels que, par exemple un microscope électronique, un spectromètre ou encore des outils d'analyse biologique ou 20 de révélation d'éléments constituants. L'observation des micro-organismes après extraction implique toutefois aujourd'hui d'opérer à une pression environnante moindre que la pression du milieu d'origine ou encore de la pression à l'intérieur du 25 conteneur du bioréacteur utilisé pour la culture. Cet abaissement de la pression est préjudiciable aux microorganismes sans que l'on puisse déterminer précisément dans quelle mesure, le cas échéant.The study of the mechanisms of adaptation to the pressure is made on the different models hyper / thermophilic piezophiles. Their manipulation is well mastered by specialized research laboratories in this field. Culture is the observation of these organisms in the laboratory, that is to say in an environment where the atmospheric pressure is well below the pressure proper to the environment of origin, requires specific equipment. Anaerobic bioreactors are used for the culture of microorganisms. The microorganisms taken from underwater bottoms can be introduced under pressure into the container of these bioreactors. The microorganisms are then extracted from the bioreactor at the end of a culture phase, for the purpose of being observed by means of known observation devices, such as, for example, an electron microscope, a spectrometer or tools. biological analysis or revealing of constituent elements. However, the observation of the microorganisms after extraction today implies operating at a lower environmental pressure than the pressure of the medium of origin or even the pressure inside the container of the bioreactor used for the culture. This lowering of pressure is detrimental to microorganisms without it being possible to determine precisely to what extent, if any.

30 Les solutions existantes présentent donc des inconvénients. 3025802 3 3. Résumé de l'invention.Existing solutions therefore have disadvantages. 3. Summary of the invention.

5 L'invention permet d'améliorer l'état de l'art en proposant un dispositif bioréacteur comprenant un conteneur principal adapté à une culture de micro-organismes soumis à une première pression, le conteneur principal comprenant au moins une ouverture principale, ledit dispositif bioréacteur. Le conteneur principal du bioréacteur comprend en outre une première 10 ouverture secondaire et une seconde ouverture secondaire, et le bioréacteur comprend, entre la première ouverture secondaire et la seconde ouverture, une circuiterie comprenant une cellule d'observation adaptée à la circulation d'un contenu de microorganismes sous une lentille d'observation translucide, à une seconde pression sensiblement identique à la première pression, et au 15 moins deux éléments d'isolement adaptés à une séparation mécanique de la cellule d'observation de sorte que la cellule d'observation puisse être détachée du bioréacteur tout en contenant une partie des micro-organismes soumis à la seconde pression.The invention makes it possible to improve the state of the art by proposing a bioreactor device comprising a main container adapted to a culture of microorganisms subjected to a first pressure, the main container comprising at least one main opening, said device bioreactor. The main container of the bioreactor further comprises a first secondary opening and a second secondary opening, and the bioreactor comprises, between the first secondary opening and the second opening, a circuitry comprising an observation cell adapted to the circulation of a content. microorganisms under a translucent observation lens, at a second pressure substantially identical to the first pressure, and at least two isolation elements adapted to a mechanical separation of the observation cell so that the observation cell can be detached from the bioreactor while containing a part of the microorganisms subjected to the second pressure.

20 Selon un mode de réalisation de l'invention, le dispositif bioréacteur comprend un dispositif mélangeur adapté au mélange et/ou brassage des microorganismes. Avantageusement, le dispositif bioréacteur est un bioréacteur 25 anaérobie. Selon un mode de réalisation de l'invention, chacun des deux éléments d'isolement comprend au moins une vanne ainsi qu'au moins un dispositif mécanique fixation d'éléments de la circuiterie comprenant la 30 cellule d'observation.According to one embodiment of the invention, the bioreactor device comprises a mixing device suitable for mixing and / or stirring the microorganisms. Advantageously, the bioreactor device is an anaerobic bioreactor. According to one embodiment of the invention, each of the two isolation elements comprises at least one valve and at least one mechanical device fixing elements of the circuitry comprising the observation cell.

302 5 802 4 Selon un mode de réalisation de l'invention, la cellule d'observation et la circuiterie du bioréacteur disposée entre les ouvertures secondaires sont adaptées à contenir une mélange de microorganisme sous une pression supérieure 1000 bars.According to one embodiment of the invention, the observation cell and the circuitry of the bioreactor disposed between the secondary openings are adapted to contain a microorganism mixture at a pressure greater than 1000 bar.

5 Selon un mode de réalisation de l'invention, la lentille de la cellule d'observation est constituée d'un verre traité pour supporter des pressions de plusieurs centaines de bars.According to one embodiment of the invention, the lens of the observation cell consists of a glass treated to withstand pressures of several hundred bar.

10 Avantageusement, la circuiterie est constituée d'un matériau inoxydable et/ou traité pour résister à une oxydation provenant des conditions intérieures au bioréacteur pendant la culture de micro-organismes prélevés dans des fonds marins et cultivés à une pression supérieure à plusieurs centaines de bars. 15 4. Liste des figures. L'invention sera mieux comprise, et d'autres particularités et 20 avantages apparaîtront à la lecture de la description qui va suivre, la description faisant référence aux dessins annexés parmi lesquels : La figure 1 représente un bioréacteur anaérobie adapté à la culture de micro-organismes selon l'état de l'art. La figure 2 représente un bioréacteur anaérobie adapté à la culture et à l'observation de micro-organismes selon un mode particulier et non limitatif de l'invention. MM 25 30 5. Description détaillée de modes de réalisation de l'invention.Advantageously, the circuitry is made of a material that is stainless and / or treated to withstand oxidation from the internal conditions of the bioreactor during the cultivation of microorganisms taken from the seabed and grown at a pressure greater than several hundred bars. . 4. List of Figures. The invention will be better understood, and other features and advantages will become apparent on reading the description which follows, the description referring to the appended drawings in which: FIG. 1 represents an anaerobic bioreactor adapted to the microbial culture; organisms according to the state of the art. FIG. 2 represents an anaerobic bioreactor adapted to the cultivation and observation of microorganisms according to a particular and non-limiting embodiment of the invention. MM 25 5. Detailed description of embodiments of the invention.

3025802 5 Sur les figures 1 à 2, les modules représentés sont des unités fonctionnelles, qui correspondent ou non à des unités physiquement distinguables. Par exemple, ces modules ou certains d'entre eux sont 5 regroupés dans un unique composant. A contrario, selon d'autres modes de réalisation, certains modules sont composés d'entités physiques séparées. La figure 1 représente un bioréacteur AB1 adapté à la culture de micro-organismes selon l'état de l'art. La culture de micro-organismes dans 10 ce type de bioréacteur est réalisée entre des opérations d'insertion sous pression, par une ouverture principale MI1 d'un conteneur principal R,1 et une extraction ultérieur de tout ou partie des micro-organismes cultivés, par la même ouverture MI1, notamment à des fins d'observation et en utilisant un ou plusieurs types de microscopes (microscopes électroniques, par 15 exemple). Un tel bioréacteur permet de cultiver les micro-organismes à une pression P1 de plusieurs dizaines de bars. Le mécanisme de verrouillage et de déverrouillage de l'ouverture MI1 est adapté à assurer une bonne étanchéité du conteneur R1 à ce niveau de pression. Le plus généralement, un tel bioréacteur comprend un dispositif de mixage et de brassage MIX1 , 20 mû par un moteur MOT1 associé. Les éventuelles parties mobiles traversant la cloison du conteneur R1 sont associées à des éléments garantissant le maintien de la pression P1 et la mobilité des pièces concernées (par exemple, des joints et/ou des paliers ou encore des coussinets sont utilisés autour d'un arbre tournant. Selon des variantes, d'autres types de systèmes 25 de brassage peuvent comprendre des éléments adaptés à un couplage magnétique de pièces tournantes dont l'une ou plusieurs peuvent être extérieures au conteneur R1 et l'une ou plusieurs autres peuvent êtres intérieures au conteneur R1. Des sondes PROB sont utilisées pour caractériser le milieu à 30 l'intérieur du conteneur R1, notamment et par exemple, la pression et la température. Avantageusement, un jeu de sondes peut comprendre un capteur d'hygrométrie ou encore un ou plusieurs capteurs sensibles à la 302 5 802 6 présence et/ou à la concentration de gaz émis par la culture des microorganismes. Les sondes PROB sont reliées à un dispositif extérieur de contrôle et de monitoring CTRL1. Un tel dispositif CTRL1 comprend usuellement un ou plusieurs indicateurs représentatifs de grandeurs 5 mesurées par les sondes PROB, parfois regroupés dans un module de monitoring MON1 du dispositif CTRL1. Selon des variantes, une unité de monitoring telle que l'unité MON1 peut être interne ou externe au dispositif de contrôle CTR1. On entend ici, par le terme « monitoring », un mise à disposition 10 d'informations utiles à la surveillance du milieu intérieur au conteneur R1, et notamment une pression et une température, ainsi que, par exemple, une présence et une concentration d'un ou plusieurs gaz susceptibles d'être générés par la culture des micro-organismes placés à l'intérieur du conteneur R1 du bioréacteur AB1.In Figures 1 to 2, the modules shown are functional units, which may or may not correspond to physically distinguishable units. For example, these modules or some of them are grouped into a single component. In contrast, according to other embodiments, some modules are composed of separate physical entities. FIG. 1 represents an AB1 bioreactor adapted to the culture of microorganisms according to the state of the art. The culture of microorganisms in this type of bioreactor is carried out between pressure insertion operations, by a main opening MI1 of a main container R, 1 and a subsequent extraction of all or part of the cultivated microorganisms, by the same MI1 aperture, especially for observation purposes and using one or more types of microscopes (electron microscopes, for example). Such a bioreactor makes it possible to cultivate microorganisms at a pressure P1 of several tens of bars. The mechanism for locking and unlocking the opening MI1 is adapted to ensure a good seal of the container R1 at this pressure level. Most generally, such a bioreactor comprises a mixing and stirring device MIX1, 20 driven by an engine MOT1 associated. Any moving parts passing through the partition of the container R1 are associated with elements ensuring the maintenance of the pressure P1 and the mobility of the parts concerned (for example, seals and / or bearings or pads are used around a tree According to variants, other types of stirring systems may comprise elements adapted for magnetic coupling of rotating parts, one or more of which may be external to the container R1 and one or more others may be internal to the container. Container R1 PROB probes are used to characterize the medium inside the container R1, in particular, for example, pressure and temperature, Advantageously, a set of probes may comprise a humidity sensor or one or more Sensors sensitive to the presence and / or concentration of gas emitted by the culture of microorganisms PROB probes are connected to an external control and monitoring device CTRL1. Such a device CTRL1 usually comprises one or more indicators representative of quantities measured by probes PROB, sometimes grouped in a MON1 monitoring module of the device CTRL1. According to variants, a monitoring unit such as the unit MON1 may be internal or external to the control device CTR1. The term "monitoring" here refers to the provision of information useful for monitoring the internal environment of the container R1, and in particular a pressure and a temperature, as well as, for example, a presence and a concentration of one or more gases capable of being generated by the culture of the microorganisms placed inside the container R1 of the AB1 bioreactor.

15 La figure 2 représente un bioréacteur adapté à la culture et à l'observation de micro-organismes selon un mode particulier et non limitatif de l'invention. Le bioréacteur AB1 est architecturé de sorte qu'il comprend un 20 conteneur principal R1 similaire à celui du bioréacteur de la figure 1 (bioréacteur selon l'état de l'art), également équipé d'une ouverture principale MI1 et d'un dispositif de mixage et de brassage MIX1, ainsi que de sondes PROB reliées à un ou plusieurs dispositifs de contrôle et/ou de monitoring CTR1. Avantageusement, et selon un mode de réalisation 25 particulier et non limitatif de l'invention, le bioréacteur AB1 comprend en outre une circuiterie CIR1 comprenant une cellule d'observation VC1, entre deux ouvertures secondaires 511 et SI2 du conteneur principal R1. La circuiterie CIR1 comprend également au moins deux modules d'isolation (ou isolement) IS01 et ISO2 opérant comme des vannes et respectivement 30 disposés entre la première ouverture secondaire SI1 et la cellule d'observation VC1, d'une part, et la seconde ouverture secondaire S12 et la cellule d'observation VC1, d'autre part. Avantageusement, les éléments 3025802 7 d'isolation / isolement (modules) ISO1 et IS02 comprennent chacun, outre une vanne adaptée à garantir une étanchéité entre l'intérieur et l'extérieur de la cellule d'observation VC1, des éléments de fixation et de verrouillage mécanique adaptés à permettre une séparation (et un couplage) mécanique 5 de la cellule de culture et d'observation VC1 du reste (ou avec le reste) de la circuiterie CIR1. On entend ici par isolation (ou isolement) une capacité à séparer mécaniquement la cellule de culture et d'observation VC1 du reste de la circuiterie CIR1 tout en maintenant le niveau de pression intérieure à la cellule à une pression P2 sensiblement identique à la pression P1 présente 10 dans le conteneur principale R1. Avantageusement, une isolation pneumatique et mécanique (donc une étanchéité de la cellule VC1 ainsi qu'une séparation mécanique par désaccouplement) permet l'observation à travers une lentille d'observation translucide VCL du contenu de la cellule VC1 du contenu de la cellule 15 soumis à une pression P2 sensiblement identique à la pression P1. Selon un mode de réalisation particulier et non limitatif de l'invention, des caractéristiques mécaniques de la cellule VC1 et de sa lentille VCL sont telles que l'observation des micro-organismes soumis à la pression P2 soit réalisable au moyen d'un microscope électronique. On entend ici par 20 pression P2 sensiblement identique à la pression P1 une pression éventuellement légèrement inférieure ou supérieure à la pression P1, du fait de variations liées à des pertes de charge ou à des gradients de température ou de concentration de micro-organismes en fonction de leur localisation précise au sein du conteneur principal R1 ou de la circuiterie CIR1.FIG. 2 represents a bioreactor adapted to the cultivation and observation of microorganisms according to a particular and non-limiting embodiment of the invention. The AB1 bioreactor is architected so that it comprises a main container R1 similar to that of the bioreactor of FIG. 1 (state of the art bioreactor), also equipped with a main opening MI1 and a device MIX1 mixer and mixer, as well as PROB probes connected to one or more CTR1 control and / or monitoring devices. Advantageously, and according to a particular and non-limiting embodiment of the invention, the bioreactor AB1 further comprises CIR1 circuitry comprising an observation cell VC1, between two secondary openings 511 and SI2 of the main container R1. CIR1 circuitry also comprises at least two isolation modules (or isolation) IS01 and ISO2 operating as valves and respectively disposed between the first secondary opening SI1 and the observation cell VC1, on the one hand, and the second opening secondary S12 and the observation cell VC1, on the other hand. Advantageously, the insulation / isolation elements (modules) ISO1 and IS02 each comprise, in addition to a valve adapted to guarantee a seal between the inside and the outside of the observation cell VC1, fixing elements and mechanical locking adapted to allow mechanical separation (and coupling) 5 of the culture and observation cell VC1 from the remainder (or with the rest) of CIR1 circuitry. Is meant here by isolation (or isolation) a capacity to mechanically separate the culture and observation cell VC1 from the rest of CIR1 circuitry while maintaining the pressure level inside the cell at a pressure P2 substantially identical to the pressure P1 present 10 in the main container R1. Advantageously, a pneumatic and mechanical insulation (thus a sealing of the VC1 cell as well as a mechanical separation by uncoupling) allows the observation through a translucent observation lens VCL of the contents of the cell VC1 of the contents of the cell 15 submitted. at a pressure P2 substantially identical to the pressure P1. According to a particular and non-limiting embodiment of the invention, the mechanical characteristics of the cell VC1 and its lens VCL are such that the observation of the microorganisms subjected to the pressure P2 is achievable by means of an electron microscope . Here, the pressure P2 is understood to be substantially identical to the pressure P1, a pressure possibly slightly smaller or greater than the pressure P1, due to variations related to pressure drops or to temperature or concentration gradients of microorganisms depending on the pressure. their precise location within the main container R1 or CIR1 circuitry.

25 Avantageusement, et grâce à l'utilisation du bioréacteur AB1 selon un mode de réalisation de l'invention, il est possible d'observer des microorganismes au cours d'une culture sous des pressions équivalentes à leur environnement d'origine et sans altération possible du fait de leur extraction du bioréacteur en vue d'une phase d'observation. En effet, les micro- 30 organismes peuvent être injectés dans le bioréacteur AB1 en conservant la pression de leur environnement d'origine (fonds sous-marins, par exemple) par le biais de l'ouverture principale MI1 du conteneur R1.Advantageously, and thanks to the use of the AB1 bioreactor according to one embodiment of the invention, it is possible to observe microorganisms during culture under pressures equivalent to their original environment and without possible alteration. because of their extraction of the bioreactor for an observation phase. Indeed, the microorganisms can be injected into the AB1 bioreactor while maintaining the pressure of their original environment (eg seafloor) through the main opening MI1 of the container R1.

3025802 8 Selon un mode de réalisation particulier et non limitatif de l'invention, les éléments ISO1 et IS02 comprennent une ou plusieurs vannes d'étanchéités éventuellement assemblées en série et au moins un système de fixation par vis/écrou couplé à un ou plusieurs joints et susceptibles d'être 5 manoeuvrés manuellement ou au moyen d'un outil classique ou encore d'un outil spécifique. L'usage d'un outil spécifique permet de s'affranchir de manoeuvre accidentelle dès lors que l'outil est maintenu disponible uniquement pour un ou plusieurs utilisateurs habilités à agir sur la circuiterie CIR1 du bioréacteur AB1 et notamment aux fins de séparer la cellule VC1 10 d'observation. Ainsi et selon le mode de réalisation décrit, il est possible de détacher physiquement la cellule de culture et d'observation VC1 pour observer les micro-organismes contenus au moyen d'un microscope électronique et à travers la lentille translucide VCL.According to one particular and non-limiting embodiment of the invention, the elements ISO1 and IS02 comprise one or more sealing valves possibly assembled in series and at least one fastening system by screw / nut coupled to one or more joints. and likely to be maneuvered manually or by means of a conventional tool or a specific tool. The use of a specific tool eliminates accidental maneuvering when the tool is kept available only for one or more users authorized to act on circuit CIR1 AB1 bioreactor and in particular for the purpose of separating cell VC1 10 observation. Thus and according to the embodiment described, it is possible to physically detach the culture and observation cell VC1 to observe the microorganisms contained by means of an electron microscope and through the translucent lens VCL.

15 La cellule VC1 est de fait un élément escamotable du bioréacteur AB1. Avantageusement, l'invention peut s'appliquer à différents types de bioréacteur et notamment un bioréacteur anaérobie. En d'autres termes, le bioréacteur AB1 comprend un conteneur 20 principal R1 adapté à une culture de micro-organismes soumis à la première pression P1. Son conteneur principal R1 comprend au moins une ouverture principale MI1. Le conteneur principal R1 comprend en outre au moins une première ouverture secondaire SI1 et une seconde ouverture secondaire SI2.The VC1 cell is in fact a retractable element of the AB1 bioreactor. Advantageously, the invention can be applied to different types of bioreactor and in particular an anaerobic bioreactor. In other words, the AB1 bioreactor comprises a main container R1 adapted to a culture of microorganisms subjected to the first pressure P1. Its main container R1 comprises at least one main opening MI1. The main container R1 further comprises at least a first secondary opening SI1 and a second secondary opening SI2.

25 De plus, le bioréacteur AB1 comprend, entre la première ouverture secondaire SI1 et la seconde ouverture SI2 : - la circuiterie CIR comprenant la cellule d'observation VC1 adaptée à la circulation d'un contenu sous la lentille d'observation translucide (éventuellement transparente) VCL, à une seconde pression 30 P2 sensiblement identique à la première pression P1, - au moins les deux éléments d'isolement ISO1et IS02, lesquels sont adaptés à une séparation mécanique de la cellule 3025802 9 d'observation VC1 de sorte que cette cellule d'observation puisse être détachée du bioréacteur AB1 tout en contenant une partie des microorganismes soumis à la seconde pression P2 (à l'intérieur de la cellule).In addition, the bioreactor AB1 comprises, between the first secondary opening SI1 and the second opening SI2: the circuitry CIR comprising the observation cell VC1 adapted to the circulation of a content under the translucent observation lens (possibly transparent ) VCL, at a second pressure P2 substantially identical to the first pressure P1, - at least the two isolation elements ISO1 and IS02, which are adapted to a mechanical separation of the observation cell VC1 so that this cell of observation can be detached from the AB1 bioreactor while containing a portion of the microorganisms subjected to the second pressure P2 (inside the cell).

5 L'invention ne se limite pas au seul mode de réalisation décrit ci- avant mais à tout dispositif de culture de micro-organismes sous pression, à une pression pouvant dépasser plusieurs dizaines de bars, comprenant une cellule d'observation escamotable adaptée à être détachée et à permettre le maintien de la pression de culture lors d'une observation au moyen d'un 10 dispositif d'observation distant du dispositif de culture sans dégradation des micro-organismes contenus du fait de leur déplacement utile à une observation au moyen du dispositif d'observation.The invention is not limited to the single embodiment described above but to any device for culturing microorganisms under pressure, at a pressure that may exceed several tens of bars, comprising a retractable observation cell adapted to be detached and to allow the maintenance of the culture pressure during an observation by means of an observation device remote from the culture device without degradation of the microorganisms contained because of their displacement useful to an observation by means of the observation device.

Claims

REVENDICATIONS1. Bioreactor device (AB1) comprising a main container (R1) adapted to a culture of microorganisms subjected to a first pressure P1, said main container (R1) comprising at least one main opening (MI1), said bioreactor device (AB1) being characterized in that: said main container (R1) further comprises: a first secondary opening (SI1), a second secondary opening (SI2), and that said bioreactor (AB1) comprises between said first secondary opening (SI1) and said second opening (SI2), a circuitry (CIR1) comprising an observation cell (VC1) adapted to the circulation of a microorganism content under a transparent observation lens, at a second pressure (P2) substantially identical to said first pressure (P1), at least two isolation elements (ISO1, IS02) adapted for mechanical separation of said observation cell (VC1) so that said observation cell (VC1) can be detached from said bioreactor (AB1) while containing a portion of said microorganisms subjected to said second pressure (P2).

2. Device according to claim 1 characterized in that it comprises a mixing device (MIX1).

3. Device according to any one of claims 1 to 2, characterized in that said bioreactor (AB1) is an anaerobic bioreactor. 3025802 11

4. Device according to any one of claims 1 to 3, characterized in that each of said two isolation elements (ISO1, IS02) comprises at least one valve (V1, V2) and at least one mechanical device (M1 , M2) for fixing elements of said circuitry (CIR1). 5

5. Device according to any one of claims 1 to 4, characterized in that said circuitry (CIR 1) is adapted to contain a mixture under a pressure (P2) greater than 1000 bar.

6. Device according to any one of claims 1 to 5, characterized in that said lens is made of a glass material 10 treated to withstand pressures of several hundred bars.

7. Device according to any one of claims 1 to 6, characterized in that said circuitry (CIR1) is made of a stainless material.