FR3024780A1

FR3024780A1 - Reactif pret a l'emploi

Info

Publication number: FR3024780A1
Application number: FR1457667A
Authority: FR
Inventors: Luc Grislain; Sophie Champlot; Jerome Hecq
Original assignee: Bertin Pharma SAS
Current assignee: Bertin Pharma SAS
Priority date: 2014-08-07
Filing date: 2014-08-07
Publication date: 2016-02-12
Anticipated expiration: 2034-08-07
Also published as: FR3024780B1

Abstract

L'invention concerne une composition sous forme de lyophilisat sphérique ou conique de diamètre compris entre 2 et 40 mm, présentant une friabilité de 1, comprenant au moins un réactif biologique ou chimique et au moins un agent de charge, le pourcentage en poids d'agent de charge par rapport au volume total du lyophilisat est compris entre 5 et 80% (poids/volume). L'invention couvre également un procédé d'obtention de cette composition, son utilisation et des kits en contenant.

Description

1 REACTIF PRET A L'EMPLOI La présente invention concerne une composition sous forme de lyophilisat et son utilisation comme réactif prêt à l'emploi. La plupart des réactifs utilisés en chimie et en biologie se présentent sous forme liquide, ce qui pose de nombreux problèmes, notamment en termes de stabilité, de transport et de stockage. En effet, la stabilité limitée des produits sous forme liquide impose en particulier une température de conservation contraignante (entre -80°C et -20°C) et des précautions de manipulations importantes comme l'aliquotage, des allers retours entre laboratoire et chambre froide, une température de manipulation à -4°C et des dilutions répétées impliquant des risques d'erreur, de contamination et de dégradation du réactif.

Pour répondre à ces problématiques, des réactifs sous forme de sphères ou billes lyophilisées ont été développés. Les demandes W02006132886, EP0641389 (produits commercialisés sous le nom de « Smart mix® »), EP0820521 ou W02008036544 (produits commercialisés sous le nom de « Ready to go® ») décrivent de tels produits. Néanmoins les produits existant actuellement ne sont pas satisfaisants car ils sont très friables et présentent une mauvaise résistance mécanique, rendant difficile leur manipulation et leur transport et nécessitant des dispositifs de conditionnement et de distribution spécifiques. L'attrition des billes lors de leur transport ou de leur manipulation implique des risques de perte de produit et une moins bonne efficacité des réactifs. En outre ces sphères présentent un diamètre trop important pour certaines applications et ne permettent pas d'utiliser des très faibles volumes de réactifs. L'objectif de la présente invention est de proposer des réactifs lyophilisés pouvant s'adapter à de très faibles volumes de réactifs, performants en termes d'efficacité, présentant une bonne résistance mécanique et stables dans le temps. A cet effet, l'invention vise une composition se présentant sous forme de lyophilisat sphérique ou conique de diamètre compris entre 2 et 40 mm, présentant une friabilité de 1 suivant une échelle de 1 à 3 avec 1 correspondant à un caractère non fiable, 2 moyennement 3024780 2 friable et 3 extrêmement friable, ceci étant conforme au paragraphe 2.9.7 de la Pharmacopée Européenne Sème édition. Cette composition comprend au moins un réactif biologique ou chimique et au moins un agent de charge, le pourcentage en poids d'agent de charge par rapport au volume total du 5 lyophilisat étant compris entre 5 et 80% (poids/volume). Avantageusement es produits selon l'invention n'adhèrent pas au support, présentent une très bonne résistance mécanique, une bonne stabilité dans le temps, de bonnes performances et sont facilement solubles, permettant ainsi une utilisation optimisée pour de nombreuses applications. 10 L'invention vise également un procédé de fabrication d'une telle composition ainsi que son utilisation comme réactif de laboratoire prêt à l'emploi. D'autres caractéristiques et avantages ressortiront de la description en détails de l'invention qui va suivre. L'invention vise donc une composition se présentant sous forme de lyophilisat sphérique ou 15 conique de diamètre compris entre 2 et 40 mm, présentant une friabilité de 1 sur l'échelle mentionnée ci-avant, comprenant au moins un réactif biologique ou chimique et au moins un agent de charge, le pourcentage en poids d'agent de charge par rapport au volume total du lyophilisat est compris entre 5 et 80% (poids/volume). Par lyophilisat au sens de l'invention, on entend une forme sèche déshydratée par un 20 procédé de lyophilisation. Le lyophilisat se présente sous forme sphérique ou conique de diamètre compris entre 2 et 40 mm, préférentiellement de diamètre compris entre 2 et 5 mm. Préférentiellement, il se présente sous forme conique. Par friabilité au sens de l'invention on entend une résistance à l'attrition au test de friabilité 25 décrit ci-avant. Par réactif biologique ou chimique au sens de l'invention, on entend une substance biologique ou chimique utilisée pour la réalisation d'expérimentations analytiques. Préférentiellement, le réactif biologique est choisi parmi des molécules d'ADN, des bactéries, des enzymes, des protéines et des composés chimiques.

La composition selon l'invention peut comprendre un ou plusieurs réactif(s) biologique(s) ou chimique(s).

3024780 3 Par agent de charge au sens de l'invention, on entend un excipient inerte capable après lyophilisation de conférer une tenue mécanique au lyophilisat. Selon une variante particulièrement adaptée, l'agent de charge est choisi parmi les polyols. Il peut également être choisi parmi : 5 - des polyols, en particulier le mannitol, le sorbitol, l'isomalt ou un mélange d'au moins deux de ces polyols, - des sucres, en particulier le glucose, le lactose, la maltose, le sucrose, le tréhalose, le raffinose, le maltotriose ou un mélange d'au moins deux de ces sucres, - des acides aminés, en particulier la lysine, la glycine, l'arginine, l'histidine, la proline, la 10 sérine, la glycocolle ou un mélange d'au moins deux de ces acides aminés, - des polymères, en particulier le dextran, les dérivés de povidone, les dérivés d'amidon, les dérivés de cellulose ou un mélange d'au moins deux de ces polymères. Dans la composition selon l'invention, le pourcentage en poids d'agent de charge par rapport au volume total du lyophilisat est compris entre 5 et 80% (poids/volume), en 15 particulier entre 15 et 30%. Selon un mode de réalisation adapté, le réactif biologique/chimique est choisi parmi des molécules d'ADN, des bactéries et des enzymes, et le ratio entre le réactif et l'agent de charge est compris : - pour l'ADN : entre 0,5.1040 et 1.10-2 mol d'ADN pour 1 à 60 mg d'agent de charge, 20 préférentiellement entre 1,6 1040 et 10-6 mol d'ADN pour 1 à 7 mg d'agent de charge, - pour les bactéries : entre 50 à 100 000 spores pour 1 à 600 mg d'agent de charge, préférentiellement entre 150 et 10 000 spores pour 1 à 3 mg d'agent de charge, - pour les enzymes : entre 2 et 100 U pour 1 à 600 mg d'agent de charge, 25 préférentiellement entre 4 et 20 U pour 1 à 5 mg d'agent de charge, Selon une variante, la composition selon l'invention peut comprendre un agent stabilisant. Par agent stabilisant au sens de l'invention, on entend un excipient permettant de s'opposer à une dégradation physique ou chimique pendant le procédé de lyophilisation. L'agent stabilisant est préférentiellement choisi parmi les polyols, les sucres, les polymères, les 30 acides aminés, les protéines, les surfactants et les méthylamines. Encore plus préférentiellement, il est choisi parmi le tréhalose ou les polysaccharides de poids 3024780 4 moléculaire compris entre 10 000 et 100 000 Da. Selon un mode de réalisation adapté il s'agit du dextran 70 000. Dans la composition, l'agent stabilisant et l'agent de charge sont différents. Le ratio agent de charge / agent stabilisant est compris entre 100/0 et 10/90, 5 préférentiellement entre 70/30 et 30/70. Le produit selon l'invention peut également comprendre un agent tampon et/ou un électrolyte. Par agent tampon au sens de l'invention on entend un excipient permettant de réguler la valeur du pH de la solution avant lyophilisation et après solubilisation du lyophilisat. Il est 10 préférentiellement choisi parmi les tampons phosphate, citrate, citrique, maléate, maléique, tartrate, tartrique, acétate, acétique, sulfonate, histidine, tris-HCI, Tris-EDTA, tris base, HEPES, triethanolamine, glycine, arginine. L'électrolyte peut être choisi parmi les ions chlorure, bromure, fluorure, potassium, sodium, calcium, hydrogène, magnésium, zinc, cuivre, manganèse.

15 Avant lyophilisation, la composition selon l'invention se présente sous forme d'une solution ou d'une nano suspension. Cette solution/nano suspension avant lyophilisation a un volume par lyophilisat compris entre 1 et 1000 p.1_, préférentiellement entre 1 et 100 p.1_, encore plus préférentiellement entre 10 et 30 p.L. La composition selon l'invention peut être obtenue par un procédé de fabrication 20 comprenant la succession des étapes suivantes : - a) fabrication d'une solution par la mise en oeuvre de la succession des sous-étapes suivantes : o solubilisation de l'agent de charge dans l'eau o solubilisation des éventuels autres composants dans la solution 25 (agent stabilisant, tampon, électrolyte notamment) o solubilisation du réactif dans la solution - b) répartition de la solution obtenue à l'étape a) dans supports en polypropylène, en silicone, en verre, ou en aluminium - c) lyophilisation avec les paramètres suivants : 30 o une température de congélation comprise entre -40°C et -80°C o une température de dessiccations primaire et secondaire comprise entre 15 et 40°C 3024780 5 o une durée de dessiccation primaire comprise entre 1 et 5 heures o une durée de dessiccation secondaire comprise entre 1 et 5 heures. L'étape a) consiste donc à solubiliser les différents constituants solides, pour former une solution aqueuse. Elle peut être réalisée comme suit : 5 - solubilisation de l'agent de charge dans l'eau à raison de 100 à 300 g/I à une température comprise entre 20 et 25°C, - si un agent stabilisant est présent, solubilisation de l'agent solubilisant dans la solution à raison de 100 à 300 g/I à une température comprise entre 20 et 25°C - si un tampon est présent, solubilisation du tampon dans la solution à raison de 1 à 10 50 g/I à une température comprise entre 20 et 25°C - si un électrolyte est présent, solubilisation de l'électrolyte dans la solution à raison de 5 à 50 g/I à une température comprise entre 20 et 25°C - solubilisation du réactif dans la solution à raison de 10-6 à 0,5 10-1 g/I à une température comprise entre 15 et 30°C.

15 Une fois la solution obtenue, elle est répartie dans des supports en poplypropylène, en silicone, en verre ou en aluminium. La répartition peut être réalisée à partir de distripipettes ou de micropipettes. Préférentiellement les supports à l'étape b) sont choisis parmi : - des tubes de 0,5 à 5ml en polypropylène ou silicone, 20 - des plaques de 96 puits en polypropylène ou en silicone - des flacons en verre de 1 à 5 ml - des blisters en aluminium, en PVC, en PVDC ou en Alcar®. Avantageusement, l'utilisation de supports en polypropylène permet d'extraire facilement les lyophilisats.

25 Le support utilisé à l'étape b) peut constituer le conditionnement final des produits selon l'invention. L'étape c) consiste ensuite à lyophiliser la solution. La lyophilisation est réalisée avec les paramètres suivants : o une température de congélation comprise entre -40°C et -80°C, 30 préférentiellement entre -40°C et -50°C o une température de dessiccations primaire et secondaire comprise entre 15 et 40°C, préférentiellement entre 18°C et 27°C, 3024780 6 o une durée de dessiccation primaire comprise entre 1 et 5 heures, préférentiellement entre 2 heures et 4 heures 30 minutes, o une durée de dessiccation secondaire comprise entre 1 et 5 heures, préférentiellement entre 2heures et 4 heures.

5 Ces paramètres sont importants car ils permettent d'obtenir un produit de qualité, avec une caractéristique de friabilité de 1 sur l'échelle définie ci-avant. Le procédé selon l'invention est utilisable à l'échelle industrielle. Avantageusement il évite la manipulation d'azote liquide dont la dangerosité entraîne des contraintes en termes de manipulation et de gestion des stocks.

10 Selon une variante, les étapes b) et c) peuvent être remplacées par un système d'obtention de sphères par goutte à goutte à l'aide d'un système de dispension mono tête ou multi tête de type micropipette / distripipette à l'échelle laboratoire (par volume réglable correspondant au dépôt de solution souhaité avant lyophilisation) ou un système automatisé à échelle industrielle (par réglage du débit de solution et du diamètre de tête).

15 Avantageusement les compositions sous forme de lyophilisats selon l'invention, sont des produits solides et stables. Ils peuvent être stockés et manipulés à température ambiante. Le lyophilisat selon l'invention peut être utilisé comme réactif à façon, prêt à l'emploi. Selon la réaction souhaitée, le lyophilisat est mis en solution au moment de l'utilisation, à température ambiante dans un volume d'eau adapté dépendant de la réaction et du réactif 20 utilisé. La composition selon l'invention peut donc être utilisée pour la stabilisation de molécules biologiques ou chimiques, pour usage au laboratoire. Elle peut être utilisée en particulier pour des réactions biologiques de type : - enzymatique, comme par exemple la détection et la quantification d'ADN/ARN par 25 amplification qPCR (PCR quantitative en temps réel) : la composition selon l'invention peut permettre de conditionner l'ensemble des réactifs impliqués dans les réactions impliquées : amorces/sondes couplées à un fluorophore, Taq polymérase, reverse transcriptase, dNTPs, additifs. - bactérienne, comme par exemple l'ensemencement. 30 - protéique, comme par exemple la stabilisation protéique pour analyse LC/MS/MS. La composition selon l'invention peut être utilisée comme réactif de laboratoire prêt à l'emploi pour des réactions de type chimique comme le dosage colorimétrique.

3024780 7 Avantageusement, le produit selon l'invention est adapté à tout type de réactif. Il est prêt à l'emploi, ne nécessite pas d'additifs, pas d'aliquotage ni de dilutions répétées. Sa forme solide non fragile limite les risques de pertes de produit lors du transport et de la manipulation.

5 L'invention vise également un kit pour la détection de microorganismes par la technique de la qPCR. Ce kit contient : - des lyophilisats selon l'invention, préférentiellement des lyophilisats comprenant des amorces /sondes couplées à un fluorophore ou à de l'ADN génomique, 10 - un intercalent ADN sous forme liquide, - un mix permettant e réaliser la réaction de qPCR contenant Taq polymérase, dNTP (désoxy adénine triphosphates), sels et stabilisateurs sous forme liquide, - eau qsp 15 L'invention est à présent illustrée par des exemples de compositions et des résultats d'essais démontrant ses caractéristiques. A. Exemples de composition selon l'invention 1. Exemple 1 La composition de l'exemple 1 est la suivante : Composition Quantité / lyoc Mannitol 1,07 mg Dextran 70000 1,07 mg ADN 0.16x10.-9 mol Solution d'ADN qs Total 10,00 pl 20 Elle présente les caractéristiques suivantes : - forme et taille des lyophilisats : forme conique - friabilité : 1 3024780 8 La composition est obtenue par la mise en oeuvre du procédé suivant : - peser du mannitol et du dextran - ajouter la solution d'ADN - solubiliser le mélange à l'aide de flux/reflux à la micropipette 5 - déposer les solutions à la micropipette sur un support préalablement refroidi à -40°C. L'étape de lyophilisation est caractérisée par les paramètres suivants : Etape Température du fluide (°C) Vide (mbar) Temps (h) Congélation (rampe) -40 NA 00:45 Congélation (plateau) -40 NA 02:00 Mise sous vide NA 0,5 NA Dessiccation primaire +36 0,5 01:15 Dessiccation primaire +36 0,5 01:15 Dessiccation secondaire + 36 NA 00:01 Dessiccation secondaire + 36 NA 02:15 NA : non applicable 2. Exemple 2 10 La composition de l'exemple 2 est la suivante : Composition Quantité / lyoc Mannitol 3,21 mg Trehalose 4,80 mg BSA (Bovine Serum Albumin) 0,02 mg Polysorbate 20 0,17 ul Eau qs Total 20,00 III Elle présente les caractéristiques suivantes : - forme et taille des lyophilisats : forme conique - friabilité : 1 3024780 9 La composition est obtenue par la mise en oeuvre du procédé suivant : - réaliser une solution de grand volume (10m1), - mélanger le mannitol avec l'eau, et incuber le mélange à 40°C jusqu'à dissolution, 5 - ajouter à la solution précédente le tréhalose préalablement mis en solution, - ajouter à la solution précédente le dextran, - ajouter à la solution précédente du tween20, - ajouter à la solution précédente de la BSA, - homogénéiser par flux/reflux 10 - déposer les solutions à la distripipette sur un support préalablement refroidi à -40°C. L'étape de lyophilisation est caractérisée par les paramètres suivants : Etape Température du fluide (°C) Vide (mbar) Temps (h) Congélation (rampe) -40 NA 00:45 Congélation (plateau) -40 NA 02:00 Mise sous vide NA 0,5 NA Dessiccation primaire +20 0,5 03:00 Dessiccation primaire +20 0,5 01:15 Dessiccation secondaire +20 NA 00:01 Dessiccation secondaire +20 NA 02:15 NA : non applicable 3024780 10 3. Exemple 3 La composition de l'exemple 3 est la suivante : Composition Quantité / lyoc Mannitol 2,14 mg Dextran 2,14 mg Sucrose 1,37 mg Chlorure de potassium 3M 1,33 pl Enzymel 20 U Enzyme 2 4 U Eau (mg) qs Total 20,00111 Elle présente les caractéristiques suivantes : - forme et taille des lyophilisats : forme conique 5 - friabilité : 1 La composition est obtenue par la mise en oeuvre du procédé suivant : - mélanger le chlorure de potassium avec l'eu (environ 3 flux/reflux à la micropipette) - ajouter le mannitol à la solution de chlorure de potassium (mélanger avec 8 10 flux/reflux à la micropipette) et incuber 10 min, à 40°C - ajouter le dextran à la solution précédente (mélanger avec 8 flux/reflux à la micropipette) et incuber 15 min à 40°C - ajouter le saccharose à la solution précédente (mélanger avec 8 flux/reflux à la micropipette) et incuber 10 min à 40°C 15 - laisser refroidir - ajouter l'enzyme 1 (mélanger avec 5 flux/reflux) - ajouter l'enzyme 2 (mélanger avec 7 flux/reflux) - les solutions sont déposées à la micropipette sur un support préalablement refroidi à -40°C.

20 3024780 11 L'étape de lyophilisation est caractérisée par les paramètres suivants : Etape Température du fluide (°C) Vide (mbar) Temps (h) Congélation (rampe) -40 NA 00:45 Congélation (plateau) -40 NA 02:00 Mise sous vide NA 0,5 NA Dessiccation primaire +20 0,5 01:15 Dessiccation primaire +20 0,5 01:15 Dessiccation secondaire +20 NA 00:01 Dessiccation secondaire +20 NA 02:15 NA : non applicable 4. Exemple 4 La composition de l'exemple 4 est la suivante : Composition Quantité / lyoc Mannitol 1,07 mg Dextran 7000 1,07 mg Nombre de bactéries en solution 10 000 Eau (mg) qs Total 10,00111 Elle présente les caractéristiques suivantes : 5 - forme et taille des lyophilisats : forme en "diamant", diamètre de 0,35 à 0,5 mm, hauteur de 0,2 à 0,3 mm. - friabilité : 1 La composition est obtenue par la mise en oeuvre du procédé suivant : - peser le mannitol et le dextran 10 - ajouter au mélange la solution bactérienne - solubiliser à l'aide de flux/reflux à la micropipette - déposer les solutions à la micropipette sur un support préalablement refroidi à -40°C.

3024780 12 L'étape de lyophilisation est caractérisée par les paramètres suivants : Etape Température du fluide (°C) Vide (mbar) Temps (h) Congélation (rampe) -40 NA 00:45 Congélation (plateau) -40 NA 02:00 Mise sous vide NA 0,5 NA Dessiccation primaire +36 0,5 01:15 Dessiccation primaire +36 0,5 01:15 Dessiccation secondaire +36 NA 00:01 Dessiccation secondaire +36 NA 02:15 NA : non applicable B. Evaluation des caractéristiques de la composition selon l'invention Des essais ont été réalisés, en particulier des essais comparatifs réalisés en comparaison avec les produits Smart mix® et Ready to go®, pour évalués les avantages de la composition 5 selon l'invention. Pour évaluer la résistance mécanique de la composition selon l'invention, un test de friabilité, un test de solidité lié à la densité et un test de comportement sous la contrainte ont été réalisés. Test de friabilité 10 Le test est réalisé selon le test de friabilité décrit dans la pharmacopée européenne, roue de friabilité 100 tours à 25tours par minute sur 10 lyophilisats, avec évaluation de la perte en masse et de l'aspect.

3024780 13 Les résultats sont présentés ci-après : Composition selon Smart mix® Ready to go product® l'invention (exemples 1 à 4) Lyocs intacts, Billes écrasées Billes dégradées et Test de niveau de Test de niveau de déformées friabilité 1 friabilité 3 Test de niveau de friabilité 3 Test de porosité Le protocole opératoire consiste à utiliser la méthode BET de mesure de surface spécifique par adsorption physique.

5 Les résultats sont présentés ci-après : Composition Smart mix® Ready to go selon l'invention product® Exemple 1 0,3880 9,2731 0,4339 C. Exemples d'utilisation Les lyophilisats selon l'invention peuvent être utilisés comme réactifs prêts à l'emploi, en particulier utiles pour la réalisation de qPCR en multiplex : 3024780 14 Désignation Informations techniques Quantité dans le lyoc (mol) Volume masse Amorce BGR02 18 pb. PM : 5542,7 g/mol 2,13.1041 Amorce BGF02 22 pb. PM : 6790,5 g/mol 2,13.1041 Sonde BGP02 28 pb. PM : 9779,7 g/mol 1,28.1041 FAM Fluorophore en 5' : [FAM] Quencher en 3' : [BHQ1] Amorce BGR04 22 pb. PM : 6709,4 g/mol 1,70.1041 Amorce BGF04 23 pb. PM : 7067,7 g/mol 2,13.1041 Sonde BGP04 7u.1_ 2,13.10-11 Atto590 25 pb. PM : 8942,4 g/mol Fluorophore en 5' : [Atto590] Quencher en 3' : [BHQ2] Amorce BTRO2 16 pb. PM : 4836,2 g/mol 2,13.1041 Amorce BTF02 18 pb. PM : 5432,6 g/mol 1,28.10-11 Sonde BTP02 26 pb. PM : 9204,4 g/mol 1,28.1011 Atto647N Fluorophore en 5' : [Atto647N] Quencher en 3' : [BHQ3] MgC12 (1M) 0,86.10-6 0,86 u.1_ Mannitol 1,07 mg Dextran 1,07 mg pb : paire de base PM : poids moléculaire 3024780 15 D. Exemples de kits On peut ainsi concevoir 1/ Un kit de mesure de l'ADN utilisant des sondes ADN stabilisées, marquées par un fluorophore selon la présente invention contenant : 5 - Au moins un duplex-oligonucléotides lyophilisé selon l'invention, - Un tampon d'hybridation lyophilisé, - Un tampon d'excision de l'ADN lyophilisé, - Un tampon de lavage lyophilisé, - Tween 20 sous forme liquide. 10 2/ un kit de mesure de protéines transmembranaire par LC-Masse utilisant une protéine de référence stabilisée selon l'invention, contenant : - Une protéine de référence lyophilisée selon l'invention, - Au moins une solution de préparation de l'échantillon, - Au moins une enzyme de digestion protéique sous forme liquide 15 - Standards internes sous forme liquide.

Claims

REVENDICATIONS1. Composition sous forme de lyophilisat sphérique ou conique de diamètre compris entre 2 et 40 mm, présentant une friabilité de 1, comprenant au moins un réactif biologique ou chimique et au moins un agent de charge, le pourcentage en poids d'agent de charge par rapport au volume total du lyophilisat est compris entre 5 et 80% (poids/volume).
2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'agent de charge est choisi parmi les polyols.
3. Composition selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que l'agent de charge est choisi parmi le mannitol, le sorbitol, l'isomalt ou un mélange d'au moins deux de ces polyols.
4. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'agent de charge est un sucre choisi parmi le glucose, le lactose, la maltose, le sucrose, le tréhalose, le raffinose, le maltotriose ou un mélange d'au moins deux de ces sucres.
5. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'agent de charge est un acide aminé choisi parmi la lysine, la glycine, l'arginine, l'histidine, la proline, la sérine, la glycocolle ou un mélange d'au moins deux de ces acides aminés.
6. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'agent de charge est un polymère choisi parmi le dextran, les dérivés de povidone, les dérivés d'amidon, les dérivés de cellulose ou un mélange d'au moins deux de ces polymères.
7. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce qu'elle comprend également un agent stabilisant différent de l'agent de charge.
8. Composition selon la revendication 7, caractérisée en ce que l'agent stabilisant est choisi parmi les polyols, les sucres, les polymères, les acides aminés, les protéines, les surfactants et les méthylamines.
9. Composition selon la revendication 7 ou 8, caractérisée en ce que l'agent stabilisant est choisi parmi le tréhalose ou les polysaccharides de poids moléculaire compris entre 10 000 et 100 000 Da.
10. Composition selon la revendication 9, caractérisée en ce que l'agent stabilisant est du dextran 70 000. 3024780 17
11. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que le réactif biologique est choisi parmi des molécules d'ADN, des bactéries, des enzymes, des protéines et des composés chimiques.
12. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce 5 qu'elle comprend également un agent tampon et/ou un électrolyte.
13. Composition selon la revendication 12, caractérisée en ce que l'agent tampon est choisi parmi les tampons phosphate, citrate, citrique, maléate, maléique, tartrate, tartrique, acétate, acétique, sulfonate, histidine, tris-HCI, Tris-EDTA, tris base, HEPES, triethanolamine, glycine, arginine. 10
14. Composition selon la revendication 12 ou 13, caractérisée en ce que l'électrolyte est choisi parmi les ions chlorure, bromure, fluorure, potassium, sodium, calcium, hydrogène, magnésium, zinc, cuivre, manganèse.
15. Composition selon l'une des précédentes revendications caractérisée en ce que la composition avant lyophilisation se présente sous forme d'une solution ou d'une 15 nanosuspension et que ladite solution/nanosuspension avant lyophilisation a un volume par lyophylisat compris entre 1 et 1000g.
16. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que le réactif biologique est choisi parmi des molécules d'ADN, des bactéries et des enzymes, et en ce que le ratio entre le réactif et l'agent de charge est compris : 20 - pour l'ADN : entre 0,5.104° et 1.10-2 mol d'ADN pour 1 à 60 mg d'agent de charge - pour les bactéries : entre 50 à 100 000 spores pour 1 à 600 mg d'agent de charge - pour les enzymes : entre 2 et 100 U pour 1 à 600 mg d'agent de charge.
17. Procédé de fabrication d'une composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il comprend la succession des étapes suivantes : 25 - a) fabrication d'une solution par la mise en oeuvre de la succession des sous- étapes suivantes : o solubilisation de l'agent de charge dans l'eau, o solubilisation des éventuels autres composants dans la solution, o solubilisation du réactif dans la solution. - b) répartition de la solution obtenue à l'étape a) dans des supports en polypropylène, en silicone, en verre, ou en aluminium - c) lyophilisation avec les paramètres suivants : 3024780 18 o une température de congélation comprise entre -40°C et -80°C, o des températures de dessiccation primaire et secondaire comprises entre 15 et 40°C, o une durée de dessiccation primaire comprise entre 1 et 5 heures, 5 o une durée de dessiccation secondaire comprise entre 1 et 5 heures.
18. Procédé de fabrication selon la revendication 17, caractérisé en ce que les supports sont choisis parmi : - des tubes de 0,5 à 5m1 en polypropylène ou silicone, - des plaques de 96 puits en polypropylène ou en silicone 10 - des flacons en verre de 1 à 5 ml - des blisters en aluminium, en PVC, en PVDC ou en alcar,
19. Utilisation d'une composition selon l'une des revendications 1 à 16, comme réactif de laboratoire prêt à l'emploi.