FR3019897A1 - Procede de generation de lumiere par electro-chimiluminescence par une dispersion de particules electriquement conductrices dans un solvant - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne un procédé de génération de lumière par électrochimiluminescence (généralement désignée par l'acronyme ECL), dans lequel on induit une émission ECL par un ensemble de particules (notamment micro- ou nanométriques) électriquement conductrices en solution. La présente invention concerne également l'utilisation d'un tel procédé pour l'immunodosage d'une molécule présente dans le milieu solvant.

Description

PROCEDE DE GENERATION DE LUMIERE PAR ELECTRO- CHIMILUMINESCENCE PAR UNE DISPERSION DE PARTICULES ELECTRIQUEMENT CONDUCTRICES DANS UN SOLVANT La présente invention concerne de manière générale un procédé de génération de lumière par électrochimiluminescence (généralement désignée par l'acronyme ECL), dans lequel on induit une émission ECL par un ensemble de particules (notamment micro- ou 10 nanométriques) électriquement conductrices en solution. L'électrochimiluminescence (ECL) est une technique analytique dans laquelle, à l'heure actuelle, la luminescence (ou émission ECL) produite par une substance luminophore résulte d'une réaction initiale 15 électrochimique (par transfert d'électrons), à la surface d'une électrode se trouvant à l'intérieur d'un réacteur électrochimique rempli d'une solution électrolytique, l'émission ECL se produisant uniquement au voisinage immédiat de cette électrode, donc dans un espace 20 bidimensionnel. L'électrochimiluminescence diffère de la photoluminescence classique, dans laquelle la génération de l'état émissif se produit par absorption de photons. En électrochimiluminescence, la réaction de 25 transfert d'électrons à la surface de l'électrode va générer des espèces très réactives qui vont porter la substance luminophore à l'état excité. Il s'agit donc d'une méthode où la lumière est typiquement générée à la surface de l'électrode. L'intensité lumineuse constitue 30 le signal analytique et dépend directement de la concentration du luminophore.

La substance luminophore la plus employée est le complexe de ruthénium Ru(bpy)32+, qui est généralement associé à la tripropylamine en tant que co-réactif. Ce complexe de ruthénium est actuellement employé 5 commercialement pour marquer des biomolécules, notamment pour l'immunodosage. Dans ce cas, l'intensité ECL est proportionnelle à la concentration du marqueur et donc de l'antigène dans un format de type « sandwich ». Du fait de sa remarquable sensibilité et de l'ensemble de ses 10 performances analytiques, la technologie ECL est commercialisée principalement par les sociétés Roche Diagnostics (commercialisant des dispositifs notamment sous la dénomination commerciale Cobas) et Mesoscale Discovery (ou MSD). 15 La société Roche domine actuellement le marché des applications en diagnostic de la technologie ECL. En effet, elle commercialise notamment un grand nombre d'immunodosages basés sur cette technologie pour la détection de biomarqueurs dans des pathologies aussi 20 variées que les maladies cardiaques ou infectieuses, les dysfonctionnements de la thyroïde, l'oncologie, etc... La technologie commercialisée par la société Roche est illustrée par la figure 1. Cette technologie utilise des billes magnétiques de 3 pm de diamètre, qui sont 25 fonctionnalisées avec un antigène de capture. Les billes sont incubées avec un échantillon, puis avec un anticorps de détection marqué avec le complexe de ruthénium Ru(bpy)32+. Les billes doivent être immobilisées à la surface de l'électrode pour induire l'émission ECL qui 30 permet le dosage. Seules les billes au contact de l'électrode produisent de l'ECL, donc il s'agit d'une technique de surface bidimensionnelle.

La société Mesoscale Discovery (également désignée par l'acronyme MSD) commercialise également des appareils pour l'immunodosage basé sur l'ECL. Dans ces dispositifs, les surfaces de réseaux d'électrodes sont modifiées par des anticorps de capture et un dosage de type « sandwich » est réalisé avec le même complexe de ruthénium comme marqueur. La localisation spatiale de l'émission ECL dans ces dispositifs permet de réaliser des immunodosages multiplexés.

Que ce soit dans les dispositifs pour l'immunodosage commercialisés par la société Roche ou dans ceux commercialisés par la société MSD, l'émission ECL est générée à l'interface entre la solution électrolytique et l'électrode. Il s'agit donc d'un processus bidimensionnel très limité spatialement et pour lequel, l'intensité du signal dépend directement de la surface géométrique de l'électrode de travail. L'ECL est une technique performante dont les applications en diagnostic clinique (immuno-analyse) sont connues de l'homme de l'art [1] [2] [3] [4] [5] [6] et largement commercialisées (notamment par Roche Diagnostics et Mesoscale Discovery). Les applications actuelles sont cependant limitées par : - la sensibilité qui est liée intrinsèquement au fait que l'ECL est une méthode de surface, - la nécessité d'immobiliser, à la surface des électrodes, le matériel biologique (les anticorps de capture et de détection) marqué avec un complexe induisant l'ECL.

Ces désavantages limitent l'extension des champs d'applications de l'ECL et la détection ultrasensible qui est requise pour détecter les étapes initiales de certaines pathologies. Pour ne citer qu'un exemple, la détection des biomarqueurs de la maladie d'Alzheimer requiert, pour un diagnostic précoce, une grande sensibilité puisque la concentration de ces biomarqueurs dans le sang est au moins 100 à 1000 fois plus faible que dans le fluide cérébrospinal. Pour résoudre ce problème de processus bidimensionnel d'émission ECL, les demandeurs ont mis au point un procédé de génération de lumière par ECL 10 utilisant les principes de l'électrochimie bipolaire [9] . L'électrochimie bipolaire (BE) est une technique permettant de polariser une particule conductrice placée dans un champ électrique. La polarisation est proportionnelle à l'intensité du champ appliqué et à la 15 dimension de l'objet. Si la polarisation est suffisante, des réactions électrochimiques se produisent aux 2 extrémités de l'objet qui agit donc comme une électrode bipolaire : réaction anodique à un pôle et réaction cathodique à l'autre pôle (Figure 2). 20 Il est connu de l'homme de l'art d'associer l'électrochimie bipolaire et l'ECL[8] [9] [10] [11] [12] [13] En particulier, l'électrochimie bipolaire et l'ECL ont été récemment associées par les demandeurs[8] pour fabriquer des "nageurs ECL bipolaires". Dans ce cas, 25 l'électrochimie bipolaire induit simultanément : la production de bulles de gaz pour propulser l'objet et l'émission ECL. Toutefois, cela ne concerne qu'une seule bille à l'intérieur du capillaire et non une pluralité de particules en dispersion stable dans un 30 solvant. Le but de la présente invention vise donc pallier tout ou partie des inconvénients de l'art antérieur, par la mise en place d'un procédé véritablement tridimensionnel, qui permet la génération d'une émission ECL au niveau d'un ensemble de particules conductrices stables en solution (et non plus d'une seule particule), afin d'induire une émission ECL tridimensionnelle, c'est-à-dire simultanément par tout un ensemble de micro/nano-objets conducteurs en solution sans qu'ils soient en contact avec les électrodes ; ces dernières servent à imposer le champ électrique et donc à polariser tous les objets conducteurs dispersés dans la solution. Plus particulièrement, la présente invention a pour objet un procédé de génération de lumière par ECL comprenant les étapes suivantes : - on introduit au moins une substance luminophore soluble dans un milieu solvant et un coréactif apte à s'oxyder au contact d'une électrode et à réagir avec ledit luminophore, dans un réacteur d'électrochimiluminescence comprenant un système de photo-détection, deux électrodes et dont l'intérieur est rempli d'une solution électrolytique comprenant un milieu solvant, disposé entre les deux électrodes ; - on applique une différence de potentiel AU entre les deux électrodes qui crée un champ électrique E, de manière à porter la ou les substance(s) luminophore(s) un état excité par transfert d'électrons à l'une des électrodes et générer de la lumière ; ledit procédé étant caractérisé en ce qu'il comporte en outre les étapes suivantes : - on introduit dans ledit réacteur, des particules électriquement conductrices formant dans le milieu solvant une dispersion, de sorte que lesdites particules électriquement conductrices constituent chacune une électrode bipolaire (31) grâce à leur polarisation générée par le champ électrique E ; - le champ électrique E est compris entre 2 kV/m et 5 40 MV/m, pour polariser lesdites particules électriquement conductrices et provoquer à leur surface le transfert d'électrons permettant de porter à un état excité la ou les substance(s) luminophore(s), qui sont immobilisées sur les électrodes bipolaires ou en solution 10 à proximité desdites électrodes bipolaires et générer ainsi de la lumière dans la solution électrolytique. Par substance luminophore, on entend, au sens de la présente invention, toute substance produisant de l'électrochimiluminescence. 15 Le procédé de génération de lumière ECL selon l'invention permet une émission tridimensionnelle d'ECL par une multitude de particules électriquement conductrices (notamment des micro- ou des nano-objets) en dispersion stable dans un solvant, conduisant 20 l'obtention d'un signal ECL nettement plus intense que celui que l'on obtient habituellement à la surface d'une électrode, comme c'est généralement le cas dans les dispositifs bidimensionnels commerciaux. Du fait de son caractère tridimensionnel, le 25 procédé de génération de lumière ECL selon l'invention présente, par rapport aux procédés bidimensionnels actuels, les avantages suivants : - l'émission 3D d'ECL conduit à une amélioration conséquente de la sensibilité de 30 la mesure, - il n'y a pas d'immobilisation à la surface de l'électrode des substances luminophores portées à un état excité, - le procédé selon l'invention est adapté à la mesure en continu dans un système microfluidique, - le procédé selon l'invention permet des durées d'analyse courtes, et - enfin, il s'agit d'un procédé en phase homogène. L'intensité du champ électrique E, comprise entre 2 kV/m et 40 MV/m, est suffisamment élevée pour polariser lesdites particules électriquement conductrices et provoquer à leur surface le transfert d'électrons. En- dessous de 2 kV/m, les particules électriquement conductrices ne se polarisent pas de façon suffisante et seules les substances luminophores au voisinage de l'une des électrodes sont portées à un état excité et génèrent une émission ECL. Au-dessus de 40 MV/m, des réactions parasites d'oxydation ou de réduction du solvant ou de l'électrolyte support peuvent se produire au niveau des électrodes bipolaires ce qui va fortement diminuer ou annihiler l'émission ECL. Le milieu solvant du réacteur d'électro- chimiluminescence utilisé dans le procédé selon l'invention peut être un milieu aqueux, ou un milieu non aqueux. S'il s'agit d'un milieu non aqueux, il est de préférence constitué d'un solvant organique ou d'un mélange de solvants organiques ou d'un mélange eau/solvant organique. A titre de solvants organiques utilisables dans le cadre de la présente invention, on peut notamment citer le méthanol, l'éthanol, l'acétonitrile, le diméthylsulfoxyde, le tétrahydrofurane, l'acétone, l'acide acétique, l'acétate d'éthyle, l'éther, le 5 pentane, le cyclopentane, l'hexane, le cyclohexane, le benzène, le toluène, le 1,4-dioxane, le chloroforme, le dichlorométhane, le diméthylformamide, le diméthylsulfoxyde, le carbonate de propylène, l'isopropanol ou un mélange d'au moins un de ces 10 solvants, y compris avec l'eau. De manière avantageuse, le solvant est un milieu aqueux constitué d'une solution tampon dont le pH est compris entre 4 et 12. A titre de tampons aqueux utilisables dans le cadre 15 de la présente invention, on peut notamment citer le tampon PBS (phosphate), le tampon HEPES (acide 4-(2- Hydroxyéthyl)piperazine-1-ethanesulfonique), le tampon TRIS-HC1, le tampon TRIS-borate, le tampon TRIS-acétate, le tampon HPCE (acide citrique-NaOH), le tampon 20 triéthylammonium acétate, et le tampon triéthylammonium bicarbonate. De manière avantageuse, ou pourra utiliser un solvant se présentant sous une forme sensiblement gélifiée dont la viscosité est comprise entre 5.10-4 Pa.s 25 et 10 Pa.s. La forme sensiblement gélifiée permet de maintenir les particules, notamment celles de dimension micrométrique plus longtemps en suspension en évitant leur sédimentation trop rapide. De plus, cela permet d'améliorer l'efficacité de l'étape de séparation du 30 luminophore libre. Les particules électriquement conductrices utilisables dans le cadre de la présente invention peuvent être avantageusement choisies parmi : - les billes magnétiques, - les billes métalliques, d'oxydes métalliques et les billes de semi-conducteurs, - les microfils et les nanofils métalliques ou de semi-conducteurs, - les microtubes ou nanotubes métalliques ou de semi-conducteurs, et - les feuillets métalliques ou de semi-conducteurs, De préférence, les particules électriquement conductrices peuvent être choisies parmi : - les billes des éléments suivants : Au, Pt, C, Ag, ITO, ATO (oxydes d'étain et d'antimoine), FTO (oxydes d'étain et de fluorine,Cu, Fe, Ir, Ni, Pd, - les microfils ou les nanofils des éléments suivants : Au, Pt, C, Ag, ITO, ATO, FTO (oxydes d'étain et de fluorine), Cu, Fe, Ir, Ni, Pd, et - les microtubes ou les nanotubes des éléments suivants : Au, Pt, C, Ag, ITO, ATO, FTO, Cu, Fe, Ir, Ni, 20 Pd, - les feuillets de carbone (graphite, oxyde de graphite, graphène, oxydes de graphène et analogues dopés à l'azote ou au bore). A titre de substance luminophores utilisables dans 25 le cadre de la présente invention, on peut notamment citer : - les complexes moléculaires comprenant les composés suivants : tris(2,2'-bipyridine) ruthénium, tris(2,2'-bipyridine) iridium, tris(2,2'-bipyridine) 30 osmium, tris(1,10-phenanthroline) ruthénium, tris(1,10-phenanthroline) iridium, tris(2,2'- bipyridine) osmium, 5-Amino-2,3-dihydro-1,4- phthalazinedione, tris(2-phenylpyridine)iridium, bis(2,2'-bipyridine) (2,2'-bipyridine-biotine) ruthénium, bis(2,2'-bipyridine) (2,2'-bipyridine- biotine) iridium, bis(2,2'-bipyridine) (2,2'- bipyridine-biotine) osmium, bis(2,2'-bipyridine) (2,2'-bipyridine-streptavidine) ruthénium, bis(2,2'- bipyridine) (2,2'-bipyridine- streptavidine) iridium, bis(2,2'-bipyridine) (2,2'-bipyridine- streptavidine) osmium, tris(2,2'-bipyridine) ruthénium - NHS ester, tris(2,2'-bipyridine) ruthénium - phosphoramadite, tris(2,2'-bipyrazine) ruthénium, et leurs dérivés et/ou mélanges, - les particules de silice dopées avec lesdits complexes moléculaires, et - les nanoparticules d'un matériau semi-conducteur choisi parmi le germanium Ge, le sulfure de cadmium CdS, le sélénure de cadmium CdSe, le sulfure de plomb PbS, et les particules à structure coeur-écorce CdSe/ZnS.

Les coréactifs associés à la substance luminophore et utilisables dans le cadre de la présente invention peuvent être avantageusement choisis parmi la tri-npropylamine, l'oxalate, la tri-n-éthanolamine, le 2- (dibutylamino) éthanol, la nicotinamide adénine dinucléotide, le peroxyde d'hydrogène, le peroxydisulfate, l'hydrazine, le peroxyde de benzoyle. Si l'on souhaite réaliser un dosage d'une molécule spécifique contenue dans un solvant donné à l'aide du procédé selon l'invention, la substance luminophore peut 30 être fixée sur un premier ligand spécifique d'une molécule à doser du milieu solvant.

Les particules électriquement conductrices peuvent être en outre avantageusement fonctionnalisées avec un second ligand spécifique d'une molécule à doser du milieu solvant.

Les premier et second ligands sont différents, savoir qu'ils se fixent à différentes parties de la même molécule. Par exemple dans le cas d'un ligand anticorps, il s'agit d'anticorps avec des paratopes différents donc liant des épitopes différents de la même molécule.

Le ligand peut être un anticorps et/ou la molécule à doser peut être choisie parmi le groupe constitué d'un antigène et d'une molécule ADN. Dans le cadre d'un dosage d'une molécule spécifique contenue dans un solvant donné, on pourra avantageusement utiliser comme substance luminophore le complexe [Ru(bpy)3]2+ ou l'un de ses dérivés et la tri-npropylamine (TPrA) en tant que coréactif. La présente invention a également pour objet l'utilisation du procédé selon l'invention pour 20 l'immunodosage d'une molécule du milieu solvant. De manière avantageuse, afin de réaliser un tel immunodosage, le procédé selon l'invention pourra avantageusement comporter les étapes suivantes : - mise en contact du milieu solvant contenant la 25 molécule à doser avec des particules électriquement conductrices fonctionnalisées avec un premier ligand spécifique de ladite molécule à doser et un second ligand spécifique de ladite molécule marqué avec la substance luminophore, pour la formation d'un complexe ; 30 - élimination de la substance luminophore libre ; ajout du coréactif réagissant avec ladite substance luminophore liée ; - application d'une différence de potentiel AU entre les deux électrodes de sorte à créer un champ électrique E compris entre 2 kV/m et 40 MV/m ; - mesure de la lumière générée.

De préférence, le procédé utilisé pour cet immunodosage pourra avantageusement comprendre en outre les étapes suivantes : - mise en contact du milieu solvant contenant une molécule à doser avec des particules électriquement conductrices et un ligand spécifique de ladite molécule marquée avec la substance luminophore, pour la formation d'un complexe ; - élimination de la substance luminophore libre ; - ajout du co-réactif réagissant avec ladite 15 substance luminophore liée ; - application d'une différence de potentiel AU entre les deux électrodes de manière à créer un champ électrique E compris entre 2 kV/m et 40 MV/m ; et - mesure de la lumière générée. 20 De préférence, l'étape d'élimination de la substance luminophore libre pourra être réalisée par application d'une différence de potentiel AU entre les deux électrodes créant un champ électrique compris entre 1 et 5000 V/m. 25 De préférence, si le procédé de l'invention est utilisé pour un immunodosage, le ligand peut être un anticorps et/ou la molécule à doser peut être choisie parmi le groupe constitué d'un antigène et d'une molécule ADN. 30 De préférence, si le procédé de l'invention est utilisé pour un immunodosage, on pourra avantageusement utiliser comme substance luminophore le complexe [Ru(bpy)3]2+ et la tri-n-propylamine (TPrA) en tant que coréactif. D'autres avantages et particularités de la présente invention résulteront de la description qui va suivre, donnée à titre d'exemple non limitatif et faite en référence aux exemples suivant et aux figures correspondantes annexées : o La figure 1 représente un schéma de principe du dispositif ECL commercialisé par la société Roche Diagnostics, o la figure 2 représente un schéma de principe du fonctionnement de l'électrochimie bipolaire utilisée pour polariser une bille en solution, o La figure 3a est une image en lumière blanche d'une dispersion de particules de carbone de diamètre 30 pm au sein d'un capillaire, et o La figure 3b est une image de l'émission ECL par l'ensemble de ces particules lors de la mise en oeuvre du procédé selon l'invention Les figures 1 et 2 sont commentées dans la description de l'art antérieur. EXEMPLES Nous avons réussi à provoquer l'émission ECL au niveau d'une dispersion de billes de carbone de diamètre 30 pm (comme illustré sur les figures 3a et 3b), en utilisant le procédé de génération de lumière selon l'invention dans lequel : - la distance entre les 2 électrodes de graphite est de 3 cm, - le diamètre externe du capillaire est de 6 mm, - le diamètre moyen des billes de carbone utilisées comme électrode bipolaire est de 30 pm, en plus des billes de carbone, la solution remplissant le capillaire est composée d'un tampon PBS 4 mM (pH = 7,4) contenant le complexe Ru(bpy)32+ à une concentration de 2 mM et le coréactif TPrA à une concentration de 100 mM. Le photodétecteur complétant le réacteur ECL est une caméra CCD. La tension appliquée est de 2500 V entre les 2 électrodes. Cette technologie ECL tridimensionnelle est applicable à la mesure de différents antigènes, par exemple, IL-8 (interleukine 8), TIMP-1 (tissue inhibitor of metalloproteinase 1) et PSA (prostate-specific antigen).20 Liste des références Immunodosage basé sur l'ECL : [1] Yang, H.; Leland, J. K.; Yost, D.; Massey, R. J. Nat. Biotechnol. 1994, 12, 193-194. [2] Blackburn, G. F.; Shah, H. P.; Kenten, J. H.; Leland, J.; Kamin, R. A.; Link, J.; Peterman, J.; Powell, M. J.; Shah, A.; Talley, D. B.; Tyagi, S. K.; Wilkins, E.; Wu, T.-G.; Massey, R. J. Clin. Chem. 1991, 37, 15341539. [3] Miao, W. Chem. Rev. 2008, 108, 2506-2553. [4] Miao, W.; Bard, A. J. Anal. Chem. 2004, 76, 71097113. [5] Deiss, F.; LaFratta, C. N.; Symer, M.; Blicharz, T. M.; Sojic, N.; Walt, D. R. J. Am. Chem. Soc. 2009, 131, 6088-6089. [6] Komori, K.; Takada, K.; Hatozaki, O.; Oyama, N. Langmuir 2007, 23, 6446-6452 Electrochimie bipolaire [7] PCT/FR2011/053001 de Kuhn et al.

Electrochimie bipolaire et ECL : [8] Sentic M., Loget G., Manojlovic D., Kuhn A., Sojic N. Angew. Chem. Int. Ed., 51, 11284-11288, 2012 [9] Loget G., Zigah D., Bouffier L., Sojic N., Kuhn A.

30 Acc. Chem. Res., 2013, 46, 2513-2523 [10] Bouffier L., Zigah D., Adam C., Sentic M., Fattah Z., Manojlovic D., Kuhn A., Sojic N. ChemElectroChem, 2014, 1, 95-98. [11] F. Mavré, R. K. Anand, D. R. Laws, K.-F. Chow, B.-Y.

5 Chang, J. A. Crooks, R. M. Crooks, Anal. Chem., 2010, 82, 8766-8774 [12] Kwok-Fan Chow, François Mavré and Richard M. Crooks. J. Am. Chem. Soc., 2008, 130, 7544-7545 [13] Kwok-Fan Chow, François Mavré, John A. Crooks, 10 Byoung-Yong Chang and Richard M. Crooks. J. Am. Chem. Soc., 2009, 131, 8364-8365

Claims (19)

1. REVENDICATIONS1. Procédé de génération de lumière par électrochimiluminescence comprenant les étapes suivantes : - on introduit au moins une substance luminophore soluble dans un milieu solvant et un coréactif apte à s'oxyder au contact d'une électrode et à réagir avec ledit luminophore, dans un réacteur d'électrochimiluminescence comprenant un système de photo- détection et deux électrodes et dont l'intérieur est rempli d'une solution électrolytique comprenant un milieu solvant, disposé entre les deux électrodes ; - on applique une différence de potentiel AU entre les deux électrodes qui crée un champ électrique E, de 15 manière à porter la ou les substance(s) luminophore(s) un état excité par transfert d'électrons à l'une des électrodes et générer de la lumière ; ledit procédé étant caractérisé en ce qu'il comporte en outre les étapes suivantes : 20 - on introduit dans ledit réacteur, des particules électriquement conductrices formant dans le milieu solvant une dispersion, de sorte que lesdites particules électriquement conductrices constituent chacune une électrode bipolaire grâce à leur polarisation générée par 25 le champ électrique E ; - le champ électrique E est compris entre 2 kV/m et 40 MV/m, pour polariser lesdites particules électriquement conductrices et provoquer à leur surface le transfert d'électrons permettant de porter à un état 30 excité la ou les substance(s) luminophore(s), qui sont immobilisées sur les électrodes bipolaires ou en solution à proximité desdites électrodes bipolaires et générerainsi de la lumière dans la solution électrolytique.
2. 2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel le milieu solvant dudit réacteur est un milieu aqueux. 5
3. 3. Procédé selon la revendication 1, dans lequel le milieu solvant dudit réacteur est un milieu non aqueux, et de préférence constitué d'un solvant organique ou d'un mélange de solvants organiques ou d'un mélange 10 eau/solvant organique.
4. 4. Procédé selon la revendication 2, dans lequel le milieu solvant aqueux se présente sous une forme sensiblement gélifiée dont la viscosité est comprise 15 entre
5. 5.10-4 Pa.s et 10 Pa.s. 5. Procédé selon la revendication 2, dans lequel le milieu solvant du réacteur d'électrochimiluminescence est un milieu aqueux constitué d'une solution tampon dont le 20 pH est compris entre 4 et 12.
6. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel les particules électriquement conductrices sont choisies parmi : 25 - les billes magnétiques, - les billes métalliques, d'oxydes métalliques et les billes de semi-conducteurs, - les microfils et les nanofils métalliques ou de semi-conducteurs, 30 - les microtubes ou nanotubes métalliques ou de semi-conducteurs, et - les feuillets métalliques ou de semi-conducteurs,- les microtubes ou nanotubes métalliques ou de semi-conducteurs, et - les feuillets métalliques ou de semi-conducteurs,
7. 7. Procédé selon la revendication 6, dans lequel les particules électriquement conductrices sont choisies parmi : - les billes des éléments suivants : Au, Pt, C, Ag, ITO, ATO (oxydes d'étain et d'antimoine), FTO (oxydes 10 d'étain et de fluorine),Cu, Fe, Ir, Ni, Pd, - les microfils ou les nanofils des éléments suivants : Au, Pt, C, Ag, ITO, ATO, FTO, Cu, Fe, Ir, Ni, Pd, et - les microtubes ou les nanotubes des éléments 15 suivants : Au, Pt, C, Ag, ITO, ATO, FTO, Cu, Fe, Ir, Ni, Pd, - les feuillets de carbone.
8. 8. Procédé selon l'une quelconque des 20 revendications 1 à 7, dans lequel la substance luminophore est choisie parmi : - les complexes moléculaires comprenant les composés suivants : tris(2,2'-bipyridine) ruthénium, tris(2,2'-bipyridine) iridium, tris(2,2'-bipyridine) 25 osmium, tris(1,10-phenanthroline) ruthénium, tris(1,10-phenanthroline) iridium, tris(2,2'- bipyridine) osmium, 5-Amino-2,3-dihydro-1,4- phthalazinedione, tris(2-phenylpyridine)iridium, bis(2,2'-bipyridine) (2,2'-bipyridine-biotine) 30 ruthénium, bis(2,2'-bipyridine) (2,2'-bipyridine- biotine) iridium, bis(2,2'-bipyridine) (2,2'- bipyridine-biotine) osmium, bis(2,2'-bipyridine) (2,2'-bipyridine-streptavidine) ruthénium, bis(2,2'-bipyridine) (2,2'-bipyridine- streptavidine) iridium, bis(2,2'-bipyridine) (2,2'-bipyridine- streptavidine) osmium, tris(2,2'-bipyridine) ruthénium - NHS ester, tris(2,2'-bipyridine) ruthénium - phosphoramadite, tris(2,2'-bipyrazine) ruthénium, et leurs dérivés et/ou mélanges, - les particules de silice dopées avec lesdits complexes moléculaires, et - des nanoparticules d'un matériau semi-conducteur choisi parmi le germanium Ge, le sulfure de cadmium CdS, le sélénure de cadmium CdSe, le sulfure de plomb PbS, et les particules à structure coeur-écorce CdSe/ZnS.
9. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, dans lequel le coréactif est choisi parmi la tri-n-propylamine, l'oxalate, la tri-néthanolamine, le 2-(dibutylamino)éthanol, la nicotinamide adénine dinucléotide, le peroxyde d'hydrogène, le peroxydisulfate, l'hydrazine, le peroxyde de benzoyle.
10. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans lequel ladite substance luminophore est fixée sur un premier ligand spécifique 25 d'une molécule à doser du milieu solvant.
11. 11. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, dans lequel lesdites particules électriquement conductrices sont en outre 30 fonctionnalisées avec un second ligand spécifique d'une molécule à doser du milieu solvant.
12. 12. Procédé selon l'une quelconque des revendications 10 ou 11, dans lequel le ligand est un anticorps et/ou la molécule à doser est choisie parmi le groupe constitué d'un antigène et d'une molécule ADN.
13. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications 10 à 12, dans lequel la substance luminophore est le complexe [Ru(bpy)3]2+ et son coréactif est la tri-n-propylamine (TPrA).
14. 14. Utilisation d'un procédé tel que défini dans l'une quelconque des revendications 11 à 13, pour l'immunodosage d'une molécule présente dans le milieu solvant. 15
15. 15. Utilisation d'un procédé selon la revendication 14, pour l'immunodosage d'une molécule présente dans le milieu solvant, ledit procédé comprenant en outre les étapes suivantes : 20 - mise en contact du milieu solvant contenant ladite molécule à doser avec des particules électriquement conductrices fonctionnalisées avec un premier ligand spécifique de ladite molécule à doser et un second ligand spécifique de ladite molécule marqué 25 avec la substance luminophore (4), pour la formation d'un complexe ; - élimination de la substance luminophore libre ; - ajout du coréactif réagissant avec ladite substance luminophore liée ; 30 - application d'une différence de potentiel AU entre les deux électrodes de sorte à créer un champ électrique E compris entre 2 kV/m et 40 MV/m ; 10- mesure de la lumière générée.
16. 16. Utilisation d'un procédé selon la revendication 14, pour l'immunodosage d'une molécule 5 présente dans le milieu solvant, ledit procédé comprenant en outre les étapes suivantes : - mise en contact du milieu solvant contenant une molécule à doser avec des particules électriquement conductrices et un ligand spécifique de ladite molécule 10 marqué avec la substance luminophore, pour la formation d'un complexe ; - élimination de la substance luminophore libre ; - ajout du co-réactif réagissant avec ladite substance luminophore liée ; 15 application d'une différence de potentiel AU entre les deux électrodes de sorte à créer un champ électrique E compris entre 2 kV/m et 40 MV/m ; - mesure de la lumière générée. 20
17. 17. Utilisation d'un procédé selon l'une quelconque des revendications 15 ou 16, dans lequel l'étape d'élimination de la substance luminophore libre est réalisée par application d'une différence de potentiel AU entre les deux électrodes créant un champ électrique 25 compris entre 1 V/m et 5000 V/m.
18. 18. Utilisation d'un procédé selon l'une quelconque des revendications 14 à 17, où le ligand est un anticorps et/ou la molécule à doser est choisie parmi le groupe 30 constitué d'un antigène et d'une molécule ADN.
19. 19. Utilisation d'un procédé selon l'une quelconque des revendications 14 à 18, où la substance luminophore est le complexe [Ru(bpy)3]2+ et son co-réactif est la trin-propylamine (TPrA).5