FR3016630A1 - Reactif comprenant quatre fonctions orthogonales et ses utilisations - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne un réactif comprenant quatre fonctions orthogonales, c'est-à-dire un réactif ayant quatre fonctions capables de réagir chacune sélectivement avec un partenaire ciblé sans étapes de protection ou déprotection intermédiaires, ainsi que les diverses utilisations du réactif, notamment pour la préparation d'une cassette de transfert d'énergie, d'une cascade FRET, d'une sonde permettant de détecter simultanément plusieurs activités enzymatiques, d'une sonde multimodale pour l'imagerie médicale, d'un système théranostique ou d'une biopuce capable de détecter un analyte, mais également pour la vectorisation d'un principe actif.

Description

RÉACTIF COMPRENANT QUATRE FONCTIONS ORTHOGONALES ET SES UTILISATIONS DOMAINE TECHNIQUE La présente invention concerne un réactif comprenant quatre fonctions orthogonales et bio-orthogonales, c'est-à-dire un réactif ayant quatre fonctions capables de réagir chacune sélectivement avec un partenaire ciblé, celui-ci pouvant être une biomolécule, et ce sans étape de protection ou déprotection intermédiaires, ainsi que les diverses utilisations du réactif, notamment pour la préparation d'une cassette de transfert d'énergie, d'une cascade FRET, d'une sonde permettant de détecter simultanément plusieurs activités enzymatiques, d'une sonde multimodale pour l'imagerie médicale, d'un système théranostique ou d'une biopuce capable de détecter un analyte, mais également pour le ciblage et la vectorisation d'un principe actif. ARRIERE-PLAN DE L'INVENTION De nombreuses applications mettant en jeu des bioconjugués dérivés de biopolymères (acides nucléiques, protéines, polysaccharides,...) impliquent de pouvoir fixer de façon covalente (fixation réversible ou non) ces bioconjugués à une seconde architecture moléculaire (biopolymère, support solide,...) et de les détecter et/ou les quantifier avec précision (détection optique, radioactive,...). Ainsi, il est indispensable de disposer d'outils permettant d'associer facilement et efficacement un biopolymère à d'autres (macro)molécules sans trop altérer les propriétés de chacun des partenaires impliqués dans l'architecture moléculaire résultante et ciblée.

Dans ce but, de nombreuses petites molécules bifonctionnelles (plus connues sous l'expression anglaise de "bifunctional cross-linking reagents") ont été développées. Un grand nombre est commercialisé par la société Pierce (groupe ThermoFisher). Cependant, il est intéressant de noter que plusieurs groupes académiques continuent de travailler au développement de nouveaux réactifs bifonctionnels toujours plus sophistiqués et permettant l'élaboration de bioconjugués toujours plus complexes. On connait également des réactifs trifonctionnels. C'est ainsi qu'il a déjà été décrit, par exemple dans les articles de Alley, S. C. et al., J. Am. Chem. Soc., 2000, 122, 6126-6127 et de Sinz, A. et al., J. Am. Soc. Mass Spectrom., 2005, 16, 1921-1931, l'utilisation de différents types de réactifs trifonctionnels parmi lesquels figure notamment le sulfo-SBED disponible auprès de la société Pierce, répondant à la structure suivante : Site de l'amis SCitt1/2a Il a également déjà été décrit, notamment dans la demande internationale WO 00/02050, des réactifs trifonctionnels 20 permettant de préparer des bioconjugués constitués d'un motif central trifonctionnel choisi parmi le triaminobenzène, le tricarboxybenzène, la dicarboxyaniline et l'acide diaminobenzoïque, sur lequel sont rattachées, par l'intermédiaire de trois bras de liaisons distincts, un 25 ligand d'affinité, un groupement réactif vis-à-vis d'une biomolécule et un agent effecteur. Ce réactif présente cependant l'inconvénient de posséder un motif central trifonctionnel constitué d'au moins deux fonctions chimiques identiques (i.e., fonctions acide carboxylique ou amine) ce qui restreint le choix des fonctions complémentaires portées par les bras de liaison et qui peut donc avoir un effet limitant.

Les inventeurs ont également décrit, dans la demande de brevet FR 2 918 664, des réactifs pseudopeptidiques trifonctionnels comprenant trois unités A, B, C où : -l'unité A comprend une fonction terminale choisie parmi une amine, un carbamate activé ou un ester activé ; -l'unité B comprend sur sa chaîne latérale au moins une fonction oxyamine protégée par un groupement protecteur ou au moins une fonction aldéhydique masquée ; et -l'unité C comprend sur sa chaîne latérale au moins un motif thiol, maléimide, iodo-acétyle, azoture, alcyne vrai, phosphane ou cyclooctyne. On connait enfin des synthons tétrafonctionnels décrits par Welle et al., Synthesis, 2012, 44, 2249-2254 répondant à la formule suivante : où n est égal à 1 ou 2 et R représente un groupe comprenant une fonction azoture ou un groupement trifluorométhyldiazirine. Cependant, ce réactif présente quatre fonctions identiques ce qui ne permet pas de l'associer à quatre partenaires biomoléculaires différents.

Le développement des nouvelles technologies toujours plus pointues nécessite la création et l'utilisation de bioconjugués toujours plus sophistiqués qu'il n'est pas facile (voir impossible) d'atteindre avec les réactifs bifonctionnels, trifonctionnels ou tétrafonctionnels actuellement disponibles sur le marché. C'est donc afin de remédier à l'ensemble de ces inconvénients et de proposer en particulier une nouvelle 5 famille de réactifs tétrafonctionnels prêts à l'usage, pouvant réagir sélectivement avec quatre partenaires (bio)moléculaires différents dans des conditions douces, de façon séquentielle et sans étapes de protection, de déprotection ni de purifications intermédiaires, que les 10 inventeurs ont mis au point ce qui fait l'objet de la présente invention. RESUME DE L'INVENTION La présente invention a précisément pour objet un composé répondant à la formule générale (I) suivante : 15 F, I L2 FF-1_--1 k-1_--F 3 3 1_4 1 F4 (I) dans laquelle : - A représente un groupe central ; - Ll, L2, L3, L4 sont identiques ou différents et 20 représentent chacun indépendamment une chaîne hydrocarbonée pouvant être interrompue par une ou plusieurs fonctions choisies parmi amide (-NRCO-), carbamide (-NRCONR-), sulfonamide (-SO2NR-), éther (-0-), thioéther (-S-), disulfure (-S-S-), sulfone (-SO2-), 25 ester (-000-), thioamide (-CS-NR-), thioester (-CO-S-), carbamate (-NH-COO-), carbonate (-O-CO-O-), thiocarbamate (-O-CS-NR-), thiocarbonate (-S-CO-O- ou -O-CS-O-), xanthate (-O-CS-S-), phosphate (-0-PO(OR)-0-), phosphonate (-PO(OR)-0-) et leurs mélanges, et/ou ladite chaîne hydrocarbonée pouvant également comprendre un cycloalkyle, un hétérocycloalkyle, un aryle, un hétéroaryle et leurs mélanges; - Fi représente un groupe comprenant un azoture (-N3), isonitrile (-NC), borane (-BR'2), trifluoroborate de potassium (-BF3K), acide boronique (-B(OH)2) ou boronate (-B(OR")2) - F2 représente un groupe comprenant une amine (-NR2), oxyamine (-0-NR2), hydrazine (-NR-NR2), ou hydrazide (-CO-NR-NR2) : - F3 représente un groupe comprenant au moins une liaison carbone-carbone insaturée ; F4 représente un groupe comprenant un thiol (-SH), sélénol (-SeH), alcool (-OH), diol vicinal (-C(OH)R-C(OH)R2), béta-aminoalcool (-C(NR2)R-C(OH)R2 ou -C (OH) R-C (NR2) R2) , borane (-BR'2), trifluoroborate de potassium (-BF3K), acide boronique (-B(OH)2), boronate (-B(OR")2) ou disulfure (-S-S-R) ; où chaque R est indépendamment choisi parmi un atome d'hydrogène, un groupe alkyle en C1-C6, ou un groupe aryle ; où chaque R' est indépendamment un alkyle en C1-C6 ou un cycloalkyle ou bien les groupes R' forment ensemble un bicyclononane ; et où chaque R" est indépendamment un alkyle en C1-C6 ou bien les groupes R" forment ensemble avec les atomes d'oxygène et de bore un cycle à 5 ou 6 chaînons éventuellement substitué par un ou plusieurs groupes alkyle en C1-C2 ou bien les groupes R" forment ensemble un cycle phénylène ; à condition que : - Fl, F2 ,F3 et F4 sont différents les uns des autres ; - lorsque F1 représente un groupe comprenant un borane, F4 ne représente pas un groupe comprenant un trifluoroborate de potassium ; - lorsque F1 représente un groupe comprenant un trifluoroborate de potassium, F4 ne représente pas un groupe comprenant un borane ; - lorsque F1 représente un groupe comprenant un acide boronique, F4 ne représente pas un groupe comprenant un boronate, diol vicinal ni béta-aminoalcool ; - lorsque F1 représente un groupe comprenant un boronate, F4 ne représente pas un groupe comprenant un acide boronique, diol vicinal ni béta-aminoalcool ; - lorsque F1 représente un groupe comprenant un azoture, F3 ne représente pas un groupe comprenant un cycloctyne ; - lorsque F1 représente un groupe comprenant un isonitrile, F3 ne représente pas un norbornène ni un cycloctène.

Un autre objet de l'invention est l'utilisation du composé de formule (I) pour : - la préparation d'une cassette de transfert d'énergie ou d'une cascade FRET ; - la préparation d'une sonde multimodale pour l'imagerie médicale ; - la préparation d'une sonde permettant de détecter simultanément plusieurs activités enzymatiques ; - la préparation d'un système théranostique ; - la préparation d'une biopuce capable de détecter un analyte ; - la sectorisation d'un principe actif. DESCRIPTION DETAILLE DE L'INVENTION Réactif tétrafonctionnel Le réactif tétrafonctionnel de formule (I) objet de la 30 présente invention comprend un groupe central (A) portant quatre bras espaceurs Ll, L2, L3 et L4 auxquels sont respectivement attachés quatre groupes fonctionnels Fl, F2, F3 et F4. Les quatre groupes fonctionnels Fl, F2, F3 et F4 sont différents et peuvent chacun réagir sélectivement avec un partenaire différent. Le groupe central (A) peut notamment comprendre un motif 5 aromatique, un motif dérivé d'un acide aminé, un motif dérivé d'un saccharide ou d'un sucre-alcool, et leurs mélanges. Au sens de la présente invention, par motif dérivé d'un acide aminé, on entend un motif comprenant un acide aminé 10 racémique, de série L ou de série D qui peut être substitué par un ou plusieurs groupes sur les fonctions dudit acide aminé, notamment sur les fonctions amine et acide carboxylique de l'acide aminé. Ainsi la (ou les) fonction(s) amine(s) de l'acide aminé peu(ven)t notamment 15 être transformée(s) en fonction amide après réaction avec un groupe portant une fonction acide et la (ou les) fonction(s) acide(s) de l'acide aminé peu(ven)t notamment être transformée(s) en fonction amide après réaction avec un groupe portant une fonction amine. 20 Au sens de la présente invention, par motif dérivé d'un saccharide ou d'un sucre-alcool, on entend un motif comprenant un saccharide ou un sucre-alcool qui peut être substitué par un ou plusieurs groupes sur les fonctions desdits saccharide ou sucre-alcool, notamment les fonctions 25 hydroxyles du saccharide ou sucre-alcool. Ainsi, une ou plusieurs fonctions hydroxyles du saccharide ou du sucre-alcool peuvent notamment être transformées : -en fonction éther, par exemple après réaction avec un groupe portant une fonction -OH (condensation avec perte 30 d'une molécule d'eau) ou avec un groupe portant un bon groupe partant comme un halogénure ; -en fonction ester d'acide sulfonique, par exemple après réaction avec un chlorure d'acide sulfonique pour conduire à un mésylate ou un tosylate par exemple ; -en fonction ester, par exemple après réaction avec un groupe portant une fonction chlorure d'acide ou anhydride d'acide ou une fonction acide activé par un carbodiimide ; -en fonction acétal, par exemple après réaction entre 2 fonctions hydroxyles du sucre ou du sucre-alcool avec un composé portant une fonction cétone ou aldéhyde. Par exemple, le groupe A peut comprendre un benzène. Selon un autre exemple, le groupe A peut comprendre un motif dérivé d'une lysine. D'après encore un autre exemple, le groupe A peut comprendre un motif dérivé d'un glucopyranose tel que l'acide 2-aminoglucuronique. Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, le groupe A comprend un motif dérivé d'une lysine de série L. De manière encore plus préférentielle, le groupe A est : 0 HN 0 0 H N NN,r H -- H 0 où chaque trait en pointillé représente un point d'attache à un bras espaceur. Les bras espaceurs Ll, L2, L3 et L4 sont identiques ou différents et représentent chacun indépendamment une chaîne hydrocarbonée pouvant être interrompue par une ou plusieurs fonctions choisies parmi amide (-NRCO-), carbamide (-NRCONR-), sulfonamide (-SO2NR-), éther (-0-), thioéther (-S-), disulfure (-S-S-), sulfone (-S02-), ester (-000-), thioamide (-CS-NR-), thioester (-CO-S-), carbamate (-NH-COO-), carbonate (-0-00-0-), thiocarbamate (-O-CS-NR-), thiocarbonate (-S-00-0- ou -O-CS-O-), xanthate (-O-CS-S-), phosphate (-0-PO(OR)-0-), phosphonate (-PO(OR)-0-), et leurs mélanges, ladite chaîne hydrocarbonée pouvant également comprendre un cycloalkyle, un hétérocycloalkyle, un aryle, un hétéroaryle et leurs mélanges ; où chaque R est indépendamment choisi parmi un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C6.

Au sens de la présente invention, le terme chaîne hydrocarbonée désigne un enchaînement de 1 à 50 atomes de carbone, ladite chaîne pouvant être linéaire ou ramifiée et ladite chaîne pouvant comprendre une ou plusieurs insaturations telles qu'une double liaison carbone-carbone, une triple liaison carbone-carbone et leurs combinaisons. Au sens de la présente invention, le terme alkyle en C1-C6 désigne un groupe hydrocarbyle linéaire ou ramifié de formule Cr,H2n+1 où n est un entier allant de 1 à 6. Au sens de la présente invention, le terme cycloalkyle 20 désigne un hydrocarbyle cyclique, insaturé ou saturé, présentant un ou 2 cycles et comportant 3 à 10 atomes de carbone. Au sens de la présente invention, le terme hétérocycloalkyle désigne un cycloalkyle dans lequel au 25 moins un atome de carbone est remplacé par un atome d'oxygène, d'azote et/ou de soufre. Au sens de la présente invention, le terme aryle désigne un groupe hydrocarbyle polyinsaturé aromatique, ayant un seul cycle (c'est-à-dire phényle) ou plusieurs cycles accolés 30 (par exemple naphtyle) ou plusieurs cycles reliés par une liaison covalente (par exemple biphényle), qui contiennent typiquement 5 à 12 atomes de carbone, préférentiellement 6 à 10, et où au moins un cycle est aromatique. Le cycle aromatique peut optionnellement comprendre un à deux cycles supplémentaires (soit cycloalkyle, hétérocycloalkyle ou hétéroaryle) accolés. Le terme aryle comprend également les dérivés partiellement hydrogénés des systèmes carbocycliques décrits ci-dessus. Au sens de la présente invention, le terme hétéroaryle désigne un cycle ou deux cycles accolés ou reliés par une liaison covalente, comprenant 5 à 12 atomes de carbone, préférentiellement 6 à 10 atomes de carbone, où au moins l'un des cycles est aromatique et où au moins un ou plusieurs atomes de carbone sont remplacés par de l'oxygène, de l'azote et/ou du soufre. Le terme hétéroaryle comprend également des systèmes décrits ci-dessus ayant un groupe aryle, cycloalkyle, hétéroaryle ou hétérocycloalkyle accolé. Selon un mode de réalisation préférentiel, les bras espaceurs Llr L2, L3 et L4 sont indépendamment choisis parmi un radical alkanediyle, tel que le méthanediyle (-CH2-), une chaîne (poly)(éthylène glycol) (chaîne PEG) et leurs mélanges. Au sens de la présente invention, le terme alkanediyle ou alkylène désigne un groupe alkyle qui présente deux liaisons simples comme point d'attache à d'autres groupes.

Au sens de la présente invention, le terme chaîne PEG désigne l'enchaînement suivant : ii, où n est un entier de 1 à 10. Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, L2 et L3 représentent chacun un méthanediyle (-CH2-) et L1 et L4 30 représentent chacun une chaîne PEG où n est égal à 2.

F1 est un groupe qui comprend un azoture (-N3), un isonitrile (-NC), un borane (-BR'2), un trifluoroborate de potassium (-BF3K), un acide boronique, (-B(OH)2) ou un boronate (-B(CR'')2) : où chaque R' est indépendamment un alkyle en C1-C6 ou un cycloalkyle ou bien les groupes R' forment ensemble un bicyclononane ; et où chaque R" est indépendamment un alkyle en C1-C6 ou bien les groupes R" forment ensemble avec les atomes d'oxygène et de bore un cycle à 5 ou 6 chaînons éventuellement substitué par un ou plusieurs groupes alkyle en C1-C2 ou bien les groupes R" forment ensemble un cycle phénylène. Lorsque le groupe F1 comprend un borane (-BR'2), ledit borane peut notamment être le dicyclohexylborane, le bis(1,2-diméthylpropyl)borane (également appelé disiamylborane) ou le 9-borabicyclo[3.3.1]nonane (9-BBN). Lorsque le groupe F1 comprend un boronate (-B(OR")2), ledit boronate peut notamment être le diméthoxyborane, le diéthoxyborane, le diisopropoxyborane, l'ester boronique du 1,3-propanediol, l'ester boronique du 1,1,2,2- tétraméthylène-1,2-diol (pinacol), l'ester boronique du 2- méthy1-2,4-pentanediol ou l'ester boronique du 2-hydroxy phénol (catéchol). Lorsque le groupe F1 comprend un isonitrile, le groupe F1 CH INC peut notamment répondre à la formule CH3 où le trait en pointillé représente le point d'attache au bras espaceur L1. Selon un mode de réalisation préféré, F1 représente un azoture (-N3).

F2 est un groupe qui comprend une amine (-NR2), une oxyamine (-0-NR2), une hydrazine (-NR-NR2), ou un hydrazide (-CO-NR-NR2), où chaque R est indépendamment choisi parmi un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C6.

Lorsque le groupe F2 comprend une amine (-NR2), ladite amine peut notamment être une amine primaire (-NH2) ou bien le NH, groupe F2 peut répondre à la formule où le trait en pointillé représente le point d'attache au bras espaceur L2.

Lorsque le groupe F2 comprend une oxyamine (-0-NR2), ladite oxyamine peut notamment être une oxyamine dans laquelle tous les groupes R sont des atomes d'hydrogène ou bien le CH / 3 HN groupe F2 peut répondre à la formule -k- où le trait en pointillé représente le point d'attache au bras espaceur L2. Lorsque le groupe F2 comprend une hydrazine (-NR-NR2), ladite hydrazine peut notamment être une hydrazine dans laquelle tous les groupes R sont des atomes d'hydrogène ou /CH3 bien le groupe F2 peut répondre à la formule où le trait en pointillé représente le point d'attache au bras espaceur L2. - k - Lorsque le groupe F2 comprend un hydrazide (-CO-NR-NR2), ledit hydrazide peut notamment être un hydrazide dans lequel tous les groupes R sont des atomes d'hydrogène. Selon un mode de réalisation préféré, F2 représente une 5 oxyamine (-0-NR2) dans laquelle tous les groupes R sont des atomes d'hydrogène. F3 est un groupe qui comprend au moins une liaison carbone-carbone insaturée. Selon un mode de réalisation préféré, le groupe F3 comprend 10 une double liaison carbone-carbone, deux doubles liaisons carbone-carbone conjuguées, une triple liaison carbone-carbone, un oxazole, une benzophénone, une anthraquinone ou un phényle substitué par un groupe diazirine. Lorsque le groupe F3 comprend une double liaison carbone-15 carbone, le groupe F3 peut notamment être un alcène terminal, un éther allylique ou un thioéther vinylique. Selon un mode de réalisation préféré, le groupe F3 peut être un alcène -'k terminal répondant à la formule R , un éther allylique )r(:) répondant à la formule ou un thioéther vinylique 20 répondant à la formule l'S où R représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en Ci-C6 et où les traits en pointillé représentent le point d'attache au bras espaceur L3. Lorsque le groupe F3 comprend une double liaison carbone- 25 carbone, le groupe F3 peut notamment être un cycle comprenant une double liaison carbone-carbone. Selon un mode de réalisation préféré, le groupe F3 peut être un norbornène ou un cyclooctène. En particulier, le groupe F3 peut être un norbornène répondant à la formule suivante ou un cyclooctène répondant à la formule suivante où les traits en pointillé représentent le point d'attache au bras espaceur L3.

Lorsque le groupe F3 comprend deux doubles liaisons carbone-carbone conjuguées, le groupe F3 peut notamment être un diène. En particulier, le groupe F3 peut être un diène R R répondant à la formule générale suivante où chaque R est indépendamment choisi parmi un atome 10 d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C6, où X représente -00-0-CH2-, -PO4-CH2-CH2-, -CO-NH-, -NH-CO-, -NH-CO-NH-, -NH-CS-NH-, -O-CO-NH- ou -NH-00-0- et où le trait en pointillé représente le point d'attache au bras espaceur L3. Ainsi, le groupe F3 peut notamment être un diène répondant à 0 .4".........*.'"0............-"*"..- 15 l'une des formules suivantes OU 0 H 0 -P -0-i O où les traits en pointillé représentent le point d'attache au bras espaceur L3. Lorsque le groupe F3 comprend deux doubles liaisons carbone-carbone conjuguées, le groupe F3 peut notamment être un 20 cycle comprenant deux doubles liaisons carbone-carbone conjuguées Selon un mode de réalisation préféré, le groupe F3 peut être un cyclopentadiène ou un furane. En particulier le groupe F3 peut être un cyclopentadiène répondant à la formule suivante ou un furane répondant à la formule suivante où les traits en pointillé représentent le point d'attache au bras espaceur L3. Lorsque le groupe F3 comprend une triple liaison carbone-carbone, le groupe F3 peut notamment être un alcyne vrai ou 5 un cyclooctyne. En particulier, le groupe F3 peut être un H alcyne vrai répondant à la formule ou un RR\// \,2'IR R\ /R cyclooctyne répondant à la formule R X-Y R ou à la R' R' formule où X et Y représentent indépendamment CR2, CO, NR ou X et Y forment ensemble avec 10 un atome de carbone un motif cyclopropyle accolé au cyclooctyne ; où chaque R représente indépendamment un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe alkyle en C1-C6, un groupe alkoxy en C1-C6 ou un hydroxyle ; où un des groupes R représente le point d'attache au groupe espaceur 15 L3 et où chaque R' représente indépendamment un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe alkyle en C1-C6 ou un groupe alkoxy en C1-C6. Lorsque le groupe F3 comprend un oxazole, ledit oxazole peut N \ notamment répondre à la formule suivante R 0 OR' où R est 20 choisi parmi un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C6, où R' est un groupe alkyle en C1-C6 et où le trait en pointillé représente le point d'attache au bras espaceur L3. De préférence, R est un méthyle et R' est un éthyle.

Lorsque le groupe F3 comprend une benzophénone, ladite benzophénone peut notamment répondre à la formule suivante R O R où chaque R représente indépendamment un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe alkyle, 5 un groupe haloalkyle, un groupe perfluoroalkyle ou un groupe alkoxy et où un des groupes R représente le point d'attache au bras espaceur L3. Par haloalkyle on entend, au sens de la présente invention, un groupe alkyle dans lequel un (ou plusieurs) atomes 10 d'hydrogène sont remplacés par un halogène. Par perfluoroalkyle on entend, au sens de la présente invention, un groupe alkyle dans lequel tous les atomes d'hydrogène sont remplacés par des atomes de fluor. Par alkoxy on entend, au sens de la présente invention, un 15 groupe -0-alkyle. Lorsque le groupe F3 comprend une anthraquinone, ladite anthraquinone peut notamment répondre à la formule suivante R O R où chaque R représente indépendamment un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe alkyle, 20 un groupe haloalkyle, un groupe perfluoroalkyle ou un groupe alkoxy et où un des groupes R représente le point d'attache au bras espaceur L3. Lorsque le groupe F3 comprend un phényle substitué par un groupe diazirine, ledit phényle substitué par un groupe 25 diazirine peut notamment répondre à la formule suivante où chaque R représente indépendamment un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe alkyle, un groupe haloalkyle, un groupe perfluoroalkyle ou un groupe alkoxy et où un des groupes R représente le point d'attache au bras espaceur L3. Selon un mode de réalisation préféré, F3 représente un norbornène répondant à la formule suivante où le trait en pointillé représente le point d'attache au bras espaceur L3.

F4 est un groupe qui comprend un thiol (-SH), un sélénol (-SeH), un alcool (-OH), un diol vicinal (-C(OH)R-C(OH)R2), un béta-aminoalcool (-C(NR2)R-C(OH)R2 ou -C(OH)R-C(NR2)R2), un borane (-BR'2), un trifluoroborate de potassium (-BF3K), un acide boronique (-B(OH)2), un boronate (-B(OR")2) ou un disulfure (-S-S-R) ; où chaque R est indépendamment choisi parmi un atome d'hydrogène, un groupe alkyle en Ci-C6 ou un groupe aryle ; où chaque R' est indépendamment un alkyle en C1-C6 ou un cycloalkyle ou bien les groupes R' forment ensemble un bicylononane ; et où chaque R" est indépendamment un alkyle en C1-C6 ou bien les groupes R" forment ensemble avec les atomes d'oxygène et de bore un cycle à 5 ou 6 chaînons éventuellement substitué par un ou plusieurs groupes alkyle en Ci-C2 ou bien les groupes R" forment ensemble un cycle phénylène. Lorsque le groupe F4 comprend un alcool, le groupe F4 peut notamment être un phénol. En particulier, le groupe F4 peut être un phénol répondant à la formule OH où le trait en pointillé représente le point d'attache au bras espaceur L4. Lorsque le groupe F4 comprend un diol vicinal (-C(OH)R-C(OH)R2), ledit diol vicinal peut notamment être un diol vicinal dans lequel tous les groupes R sont des atomes d'hydrogène ou bien le groupe F4 peut être un motif dérivé d'un saccharide tel qu'un glucopyranose ou un furanose comprenant un diol vicinal.

Lorsque le groupe F4 comprend un béta-aminoalcool (-C(NR2)R-C(OH)R2 ou -C(OH)R-C(NR2)R2), ledit béta- aminoalcool peut notamment être un béta-aminoalcool dans lequel chaque R est indépendamment choisi parmi un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C6 ou bien le groupe F4 peut être un motif dérivé d'un acide aminé racémique, de série L ou de série D comprenant un béta-aminoalcool tel que la sérine ou la thréonine. Lorsque le groupe F4 comprend un borane (-BR'2), ledit borane peut notamment être le dicyclohexylborane, le bis(1,2-diméthylpropyl)borane (également appelé disiamylborane) ou le 9-borabicyclo[3.3.1]nonane (9-BBN). Lorsque le groupe F4 comprend un boronate (-B(OR")2), ledit boronate peut notamment être le diméthoxyborane, le diéthoxyborane, le diisopropoxyborane, l'ester boronique du 1,3-propanediol, l'ester boronique du 1,1,2,2- tétraméthylène-1,2-diol (pinacol), l'ester boronique du 2- méthy1-2,4-pentanediol ou l'ester boronique du 2-hydroxy phénol (catéchol). Lorsque le groupe F4 comprend un disulfure (-S-S-R), le 30 groupe R peut notamment être un groupe alkyle en C1-C6 ou un groupe aryle tel qu'un phényle, une pyridine par exemple le groupe 2-pyridinyl, ou une nitropyridine par exemple le groupe 2-(5-nitropyridiny1). Selon un mode de réalisation préféré, F4 représente un thiol (-SH). Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, le composé selon la présente invention répond à la formule (I) dans laquelle : - A comprend un motif dérivé d'un acide aminé - F1 représente un azoture ; - F2 représente une oxyamine ; - F3 représente un norbonène ; - F4 représente un thiol. Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, le 15 composé selon la présente invention répond à la formule (II) suivante : 0 NH2 .........'......'0'.',........... N 0 H N3.,,,,,,,,e"\o/'',,0 Utilisation 20 Le composé de formule (I) objet de la présente invention peut être utilisé dans de nombreuses applications telles que la préparation d'une cassette de transfert d'énergie, d'une cascade FRET, d'une sonde multimodale pour l'imagerie médicale, d'une sonde permettant de détecter simultanément 25 plusieurs activités enzymatiques, d'un système théranostique ou d'une biopuce capable de détecter un analyte, mais également la vectorisation d'un principe actif. Par cassette de transfert d'énergie, on entend un système 5 luminescent comprenant un composé luminescent et un composé accepteur de luminescence, qui transmet l'énergie du composé luminescent au composé accepteur de luminescence lorsqu'il est excité à une certaine longueur d'onde, ledit composé accepteur de luminescence restituant une partie de 10 l'énergie à une longueur d'onde plus élevée. Par cascade FRET, on entend un système luminescent comprenant un composé luminescent, un composé accepteur de luminescence et un composé accepteur de luminescence intermédiaire qui relaie le transfert d'énergie entre le 15 composé donneur et le composé accepteur. Par sonde multimodale pour l'imagerie médicale, on entend un système permettant d'observer in vivo, ex vivo ou in cellulo le fonctionnement des cellules et les processus moléculaires par au moins deux techniques différentes 20 telles que la tomodensitométrie (TDM ou CT), l'imagerie par résonance magnétique (IRM ou MRI), les ultra-sons, l'imagerie optique, l'imagerie nucléaire (tomographie par émission de positons TEP ou PET, tomographie d'émission monophotonique TEMP ou SPECT). 25 Par sonde permettant de détecter simultanément plusieurs activités enzymatiques, on entend un système permettant de fixer plusieurs substrats de molécules d'intérêt biologiques telles que des enzymes ou des ribozymes et de les analyser par une technique permettant de vérifier la 30 présence et/ou l'activité des molécules d'intérêt biologique telle que, par exemple, la mesure de la fluorescence, de la luminescence, de l'absorbance dans le domaine UV-visible, de la radioactivité, la spectrométrie de masse, la résonance magnétique nucléaire. Par système théranostique, on entend un système capable d'effectuer un test diagnostique et de délivrer une 5 thérapeutique ciblée, basée sur le résultat de ce test. Par biopuce capable de détecter un analyte, on entend un système fixé sur phase solide capable de réaliser une réaction (bio)chimique avec un analyte tel qu'une molécule d'intérêt biologique, un polluant, une enzyme ou un métal 10 qui se trouve dans le milieu que l'on souhaite analyser et de fournir une information à l'utilisateur permettant de vérifier la présence et/ou la nature de la molécule fixée sur la biopuce par exemple par mesure de la fluorescence, de la luminescence, de l'absorbance dans le domaine UV- 15 visible, de la radioactivité, par spectrométrie de masse, par résonance magnétique nucléaire. Le composé de formule (I) objet de la présente invention peut notamment être utilisé en faisant réagir chaque groupe Fl, F2, F3 et F4 du composé de formule (I) avec un partenaire 20 M1, M2, M3 et M4 différent. Selon un mode de réalisation préféré de l'utilisation selon la présente invention, on fait réagir : - le groupe F1 du composé de formule (I) avec un partenaire M1 ; 25 - le groupe F2 du composé de formule (I) avec un partenaire M2 ; - le groupe F3 du composé de formule (I) avec un partenaire M3 ; - le groupe F4 du composé de formule (I) avec un 30 partenaire M4 ; dans laquelle M1, M2, M3 et M4 sont différents les uns des autres ; à condition que : - si le groupe F1 comprend un azoture et le groupe F3 comprend un alcyne vrai, on réalise la réaction entre le groupe F1 et le partenaire M1 avant la réaction entre le groupe F3 et le partenaire M3 ; - si le groupe F1 comprend un borane ou un trifluoroborate de potassium et le groupe F4 comprend un acide boronique ou un boronate, on réalise la réaction entre le groupe F4 et le partenaire M4 avant la réaction entre le groupe F1 et le partenaire M1 ; - si le groupe F4 comprend un borane ou un trifluoroborate de potassium et le groupe F1 comprend un acide boronique ou un boronate, on réalise la réaction entre le groupe F1 et le partenaire M1 avant la réaction entre le groupe F4 et le partenaire M4. Lorsque le groupe F1 du composé de formule (I) comprend un azoture, le partenaire M1 comprend un alcyne vrai ou un cyclooctyne. La réaction correspondante est une cycloaddition 1,3-dipolaire de type « click » et conduit à un 1,2,3-triazole. Lorsque le groupe F1 du composé de formule (I) comprend un isonitrile, le partenaire M1 comprend une tétrazine. La réaction correspondante est une cycloaddition [4+1] et conduit à un dérivé 4H-pyrazol-4-imine.

Lorsque le groupe F1 du composé de formule (I) comprend un borane ou un trifluoroborate de potassium, le partenaire M1 comprend un halogène. La réaction correspondante est une réaction de couplage et conduit à la formation d'une nouvelle liaison carbone-carbone entre le groupe portant l'atome de bore et le groupe portant l'halogène.

Lorsque le groupe F1 du composé de formule (I) comprend un acide boronique ou un boronate, le partenaire M1 comprend soit un halogène soit un diol vicinal soit un bétaaminoalcool. Lorsque le partenaire M1 comprend un halogène, la réaction correspondante est une réaction de couplage et conduit à la formation d'une nouvelle liaison carbone-carbone entre le groupe portant l'atome de bore et le groupe portant l'halogène. Lorsque le partenaire M1 comprend un diol vicinal, la réaction correspondante est une réaction de substitution et conduit à un cycle à 5 chaînons comprenant deux atomes de carbone, un atome de bore et deux atomes d'oxygène. Lorsque le partenaire M1 comprend un bétaaminoalcool, la réaction correspondante est une réaction de substitution et conduit à un cycle à 5 chaînons comprenant deux atomes de carbone, un atome de bore, un atome d'oxygène et un atome d'azote. Lorsque le groupe F2 du composé de formule (I) comprend une amine, une oxyamine, une hydrazine ou un hydrazide, le partenaire M2 comprend un aldéhyde ou une cétone. Les réactions correspondantes sont des réactions de condensation et conduisent à la formation : - d'une imine lorsque F2 comprend une amine primaire, ladite imine étant réduite in situ en une amine par le borohydrure de sodium ou le cyanoborohydrure de sodium (amination réductrice) ; - d'une oxime lorsque F2 comprend une oxyamine de type (-0-NH2) - d'une hydrazone lorsque F2 comprend une hydrazine de type (-NH-NH2) ou un hydrazide ; - d'un composé tricyclique lorsque F2 est un groupe de formule NH, ou un groupe de formule ou un groupe de formule réaction de Pictet-Spangler. par Lorsque le groupe F3 du composé de formule (I) comprend un norbornène ou un cycloctène, le partenaire M3 comprend une tétrazine. La réaction correspondante est une cycloaddition de Diels-Alder à demande inverse et conduit à un composé bicyclique de type dihydropyridazine.

Lorsque le groupe F3 du composé de formule (I) comprend un alcène terminal, le partenaire M3 est un alcène terminal. La réaction correspondante est une métathèse croisée et conduit à la formation d'une double liaison carbone-carbone entre les groupes portés par chaque alcène terminal.

Lorsque le groupe F3 du composé de formule (I) comprend un éther allylique, le partenaire M3 comprend un tétrazole. La réaction correspondante est une cycloaddition activée photo-chimiquement à une longueur d'onde comprise entre 315 et 400 nm, par exemple 365 nm (également appelée réaction « photo-click ») et conduit à un pyrazole. Lorsque le groupe F3 du composé de formule (I) comprend un thioéther vinylique, le partenaire M3 est un diène ou un hétéro-diène. La réaction correspondante est une cycloaddition de Diels-Alder et conduit à un cycle à 6 chaînons.

Lorsque le groupe F3 du composé de formule (I) comprend un alcyne vrai ou un cyclooctyne, le partenaire M3 comprend un azoture. La réaction correspondante est une cycloaddition 1,3-dipolaire et conduit à un 1,2,3-triazole.

Lorsque le groupe F3 du composé de formule (I) comprend deux doubles liaisons carbone-carbone conjuguées, le partenaire M3 est un diénophile activé, c'est-à-dire qu'il comprend une double liaison carbone-carbone appauvrie en électrons, par exemple le partenaire M3 comprend un maléimide. La réaction correspondante est une cycloaddition de Diels-Alder et conduit à un produit cyclique. Lorsque le groupe F3 du composé de formule (I) comprend un oxazole, le partenaire M3 est un diénophile activé, c'est-à-dire qu'il comprend une double liaison carbone-carbone appauvrie en électrons, par exemple le partenaire M3 comprend un maléimide. La réaction correspondante est une cycloaddition de Diels-Alder et conduit à un produit cyclique. Lorsque le groupe F3 du composé de formule (I) comprend une benzophénone, une anthraquinone ou un phényle substitué par un groupe diazirine, le partenaire M3 est un composé présentant une liaison C-H. La réaction photochimique correspondante doit être conduite sous irradiation UV (UV-A ou UV-B).

Lorsque le groupe F4 du composé de formule (I) comprend un thiol, le partenaire M4 comprend un iodo-acétyle, un bromoacétyle ou un maléimide. Lorsque M4 comprend un iodo-acétyle ou un bromo-acétyle, la réaction correspondante est une substitution nucléophile de l'iode ou du brome pour conduire à un thioéther. Lorsque M4 comprend un maléimide, la réaction correspondante est une addition de type Michael et conduit à un thioéther. Lorsque le groupe F4 du composé de formule (I) comprend un sélénol, le partenaire M4 comprend un iodo-acétyle, un 5 bromo-acétyle ou un maléimide. Lorsque M4 comprend un iodoacétyle ou un bromo-acétyle, la réaction correspondante est une substitution nucléophile de l'iode ou du brome pour conduire à un sélénoéther. Lorsque M4 comprend un maléimide, la réaction correspondante est une addition de type Michael 10 et conduit à un sélénoéther. Lorsque le groupe F4 du composé de formule (I) comprend un phénol, le partenaire M4 comprend un diazodicarboxamide. La réaction correspondante est une substitution électrophile aromatique et conduit à un phénol substitué en ortho par le 15 cycle diazodicarboxamide. Lorsque le groupe F4 du composé de formule (I) comprend un diol vicinal, le partenaire M4 comprend un acide boronique ou un boronate. La réaction correspondante est une réaction de substitution et conduit un cycle à 5 chaînons 20 comprenant deux atomes de carbone, un atome de bore et deux atomes d'oxygène. Lorsque le groupe F4 du composé de formule (I) comprend un béta-aminoalcool, le partenaire M4 comprend un acide boronique ou un boronate. La réaction correspondante est 25 une réaction de substitution et conduit à un cycle à 5 chaînons comprenant deux atomes de carbone, un atome de bore, un atome d'oxygène et un atome d'azote. Lorsque le groupe F4 du composé de formule (I) comprend un borane ou un trifluoroborate de potassium, le partenaire M4 30 comprend un halogène. La réaction correspondante est une réaction de couplage et conduit à la formation d'une nouvelle liaison carbone-carbone entre le groupe portant l'atome de bore et le groupe portant l'halogène. Lorsque le groupe F4 du composé de formule (I) comprend un acide boronique ou un boronate, le partenaire M4 comprend soit un halogène soit un diol vicinal soit un bétaaminoalcool. Lorsque le partenaire M4 comprend un halogène, la réaction correspondante est une réaction de couplage et conduit à la formation d'une nouvelle liaison carbone-carbone entre le groupe portant l'atome de bore et le groupe portant l'halogène. Lorsque le partenaire M4 comprend un diol vicinal, la réaction correspondante est une réaction de substitution et conduit à un cycle à 5 chaînons comprenant deux atomes de carbone, un atome de bore et deux atomes d'oxygène. Lorsque le partenaire M4 comprend un béta- aminoalcool, la réaction correspondante est une réaction de substitution et conduit à un cycle à 5 chaînons comprenant deux atomes de carbone, un atome de bore, un atome d'oxygène et un atome d'azote. Lorsque le groupe F4 du composé de formule (I) comprend un 20 disulfure, le partenaire M4 comprend un thiol ou un sélénol. La réaction correspondante est une réaction d'échange et conduit un nouveau produit disulfure lorsque le partenaire M4 comprend un thiol et à un produit sélénosulfure lorsque le partenaire M4 comprend un sélénol. 25 Selon un mode de réalisation préféré, les partenaires M1, M2, M3 et M4 qui réagissent avec le composé de formule (I) dans l'utilisation objet de la présente sont indépendamment choisis parmi une molécule d'intérêt biologique, un marqueur, un support et leurs mélanges. 30 Parmi les analytes pouvant réagir avec le composé de formule (I) on peut notamment citer les molécules d'intérêt biologique telles que les anticorps, les acides nucléiques et leurs analogues, les polysaccharides, les protéines, les peptides, les enzymes, les inhibiteurs d'enzyme, les haptènes, etc. ; les polluants tels que les métaux, les toxines, les composés organiques volatils (COV), les pesticides, les insecticides, les solvants halogénés, etc. Parmi les marqueurs pouvant réagir avec le composé de formule (I) on peut notamment citer les chromophores UV ou visibles non luminescents, les composés luminescents, les composés accepteurs de luminescence, les composés radioactifs, les composés présentant des propriétés magnétiques, les composés enrichis isotopiquement et les composés facilitant la purification. Par chromophore UV ou visible non luminescent, on entend 15 toute substance non luminescente comprenant des doubles liaisons conjuguées pouvant absorber un rayonnement incident dans le domaine de l'UV-visible. Parmi les chromophores UV ou visible non luminescents pouvant réagir avec le composé de formule (I) on peut 20 notamment citer les colorants diazoïques tels que le DABCYL, les dérivés du dansyle tels que l'EDANS (Eurogentec, BE) et les composés vendus sous les dénominations commerciales Black Hole Quencher® (BHQ) comme par exemple les BHQ-0, BHQ-1, BHQ-2 et BHQ-3 (Biosearch Technologies). 25 Par composé luminescent, on entend toute substance qui, lorsqu'elle est excitée à une longueur d'onde donnée ou par un composé chimique donné ou par une enzyme donnée, est capable d'émettre un photon. Les composés luminescents incluent les composés fluorescents, les composés 30 phosphorescents et les composés chimiluminescents.

Parmi les composés luminescents pouvant réagir avec le composé de formule (I) on peut notamment citer les fluorophores à chaînes polyméthine (i.e. chaîne polyénique) ; les cyanines fluorescentes telles que celles commercialisées sous les références Cy3, Cy3.5, Cy3B, Cy5, Cy5.5 et Cy7 par la société GE Healthcare ; la fluorescéine (fluorescéinate de sodium) et ses dérivés tels que l'isothiocyanate de fluorescéine (FITC) et la 6- carboxyfluorescéine (6-FAM) ; la rhodamine et ses dérivés tels que la tetraméthylrhodamine isothiocyanate (TMRITC) ; les dérivés hydrosolubles de la rhodamine sous forme d'ester de N-hydroxysuccinimide tels que les produits vendus sous la dénomination commerciale Alexa Fluor® par la société Invitrogen comme par exemple les Alexa Fluor® 488, 500, 514, 532, 546, 555, 568, 594, 610-X, 633, 647, 660, 680, 700, 750 et 790 ; les rhodols et leurs dérivés ; les dérivés de coumarine tels que la 7-aminocoumarine et la 7- hydroxycoumarine ; la 9-aminoacridine et l'acide 9- acridinecarboxylique ; les colorants fluorescents à amines 20 réactives tels que l'ester succinimidylique de l'acide 6- ((7-amino-4-méthylcoumarin-3-acétyl)amino) hexanoïque (AMCA) ; les difluorures de bore de dipyrrométhène vendus sous les dénominations commerciales BODIPY® tels que BODIPY® FR-Br2, BODIPY® R6G, BODIPY® TMR, BODIPY® TR et les 25 BODIPY® 530/550 (longueur d'onde d'excitation/longueur d'onde d'émission, en nm), 558/567, 564/570, 576/589, 581/591, 630/650 et 650/665 vendus par la société Bio-Rad Inc. (USA) ; les fluorophores dérivés du pyrène tels que par exemple les colorants Cascade® Blue (vendus par exemple 30 par les sociétés Trilink BioTechnologies (USA) ou Invitrogen) ; l'éosine ; l'érythrosine et les dérivés de sulforhodamine tels que le chlorure de sulfonyl de sulforhodamine 101 également connu sous le nom de Texas Red®.

Par composé accepteur de luminescence, on entend toute molécule permettant la diminution ou la disparition de la luminescence d'un groupement luminescent dans certaines conditions. Les composés accepteurs de luminescence incluent certains composés luminescents, colorants, atomes lourds ou nanoparticules. Parmi les composés accepteurs de luminescence pouvant réagir avec le composé de formule (I) on peut notamment citer les composés fluorescents tels que ceux cités ci- dessus, en particulier la rhodamine et ses dérivés tels que la tetraméthylrhodamine (TMR), la Rhodamine 6G (R6G) et les colorants QSYC, 7, QSYC, 9, QSYC, 21 ou QSYC, 35 (Molecular Probes) ; mais également des molécules non-fluorescentes de la famille des colorants diazoïques telles que les composés vendus sous les dénominations commerciales Black Hole Quencher® (BHQ) comme par exemple les BHQ-0, BHQ-1, BHQ-2 et BHQ-3 (Biosearch Technologies), le DABCYL et les dérivés du dansyle tels que l'EDANS (Eurogentec, BE) ; les particules d'or telles que celles ayant un diamètre de 1,5 nm vendues sous la dénomination commerciale Nanogold® Particules (Nanoprobes) ; les produits vendus sous les dénominations commerciales Eclipse® Dark Quencher (Epoch Bioscience) ; le produit commercial ElleQuencher® (Eurogentec) ; le vert de malachite et les composés accepteurs ("Quenchers") de la famille des cyanines tels que les composés vendus sous les dénominations commerciales Cy3Q, Cy5Q ou Cy7Q par la société GE Healthcare. Par composé radioactif, on entend un composé comprenant un noyau atomique instable, également appelé radioisotope, qui se transforme spontanément en dégageant de l'énergie sous forme de rayons cx, de rayons 13 et/ou de rayons y, en un noyau atomique plus stable ayant perdu une partie de sa masse.

Parmi les composés radioactifs pouvant réagir avec le composé de formule (I) on peut notamment citer un composé comprenant un des radioisotopes suivants : l'iode-125 (125i, demi-vie de 60 jours), le carbone-14 (14C, demi-vie de 5730,4 ans), le tritium (3H, demi-vie de 12,26 ans), le phosphore-32 (32P, demi-vie de 14,3 jours), le soufre-35 (35S, demi-vie de 87,5 jours), le cobalt-57 (57Co, demi-vie de 271,8 jours), le fluor-18 (18F, demi-vie de 109,77 minutes), l'indium-111 (n'In, demi-vie de 2,8 jours) et le cuivre-64 (64Cu, demi-vie de 12,7 jours). Par composé présentant des propriétés magnétiques, on entend un composé qui réagit par un changement d'orientation d'un ou plusieurs moments magnétiques nucléaires lorsqu'il est soumis à un champ magnétique. En particulier, pour une détection par imagerie par résonance magnétique on utilise des traceurs capables de raccourcir les temps de relaxation T1 et T2 des protons des tissus ce qui modifie l'intensité de leur signal. Parmi les composés présentant des propriétés magnétiques pouvant réagir avec le composé de formule (I) on peut notamment citer des complexes métalliques, tels que notamment des complexes de gadolinium, des complexes de fer et des complexes de manganèse. Par composé enrichi isotopiquement, on entend toute substance dans laquelle on a enrichi la proportion d'un isotope par rapport à l'état naturel. Cela permet notamment d'obtenir une détection spécifique par spectrométrie de masse ou par résonance magnétique nucléaire. Parmi les composés enrichi isotopiquement pouvant réagir 30 avec le composé de formule (I) on peut notamment citer un composé comprenant un enrichissement en isotope suivant : deutérium, carbone-13, azote-15, oxygène-17, oxygène-18, fluor-19. Par composé capable de faciliter la purification, on entend toute substance qui, lorsqu'elle est fixée au composé de formule (I), facilite sa purification par chromatographie d'affinité. Les composés capables de faciliter la purification (également appelés étiquette ou « tag ») incluent de courtes séquences d'acides aminés ou d'acides nucléiques et des sucres.

Parmi les composés capable de faciliter la purification pouvant réagir avec le composé de formule (I) on peut notamment citer la biotine, l'étiquette poly-histidine, la protéine fixant la chitine (chitin-binding-protein (CBP)), la protéine fixant le maltose (maltose-binding-protein (MBP)) ou la glutathione-S-transférase (GST). Par support, on entend toute surface possédant, naturellement ou après modification chimique, un ou plusieurs groupements étant aptes à réagir avec une des fonctions du composé de formule (I).

Parmi les supports pouvant réagir avec le composé de formule (I), on peut notamment citer le verre, le plastique, et les métaux. De tels supports peuvent notamment être utilisés pour immobiliser de manière covalente le réactif tétrafonctionnel selon l'invention ce qui permet, par exemple, de détecter des analytes en milieu liquide. Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, les réactions entre le composé de formule (I) et les partenaires M1, M2, M3 et M4 de l'utilisation objet de la présente invention sont réalisées sans aucune étape de purification intermédiaire. Ainsi, il n'est pas nécessaire de purifier chaque intermédiaire réactionnel issu de la réaction entre une des quatre fonctions du composé de formule (I) avec un des partenaires M1, M2, M3 et M4 avant de réaliser la réaction suivante. Selon un autre mode de réalisation particulièrement préféré, les réactions entre le composé de formule (I) et les partenaires M1, M2, M3 et M4 de l'utilisation objet de la présente invention sont réalisées sans aucune étape de protection et/ou de déprotection intermédiaire. Ainsi, il n'est pas nécessaire de protéger et/ou de déprotéger une ou plusieurs des quatre fonctions du composé de formule (I) avant de réaliser les réactions avec les partenaires M1. M2. M3 et M4. En effet, puisque les groupes fonctionnels Flr F2. F3 et F4 sont orthogonaux, ils réagissent sélectivement avec le partenaire MI, M2. M3 et M4 ayant la fonction correspondante. Lorsque le composé de formule (I) est utilisé pour préparer une cassette de transfert d'énergie, on peut notamment faire réagir une fonction du composé de formule (I) avec un composé luminescent, une autre fonction du composé de formule (I) avec un composé accepteur de luminescence. Les deux autres fonctions du composé de formule (I) peuvent réagir avec des molécules d'intérêt biologique, telles que des protéines ou bien avec un support. Cette cassette de transfert d'énergie peut notamment être utilisée pour réaliser le séquençage des acides nucléiques. Lorsque le composé de formule (I) est utilisé pour préparer une cascade FRET, on peut notamment faire réagir une fonction du composé de formule (I) avec un composé luminescent, une autre fonction du composé de formule (I) avec un composé accepteur de luminescence et une troisième fonction avec un composé accepteur de luminescence intermédiaire. La quatrième fonction du composé de formule (I) peut réagir avec une molécule d'intérêt biologique, telle qu'une protéine ou bien avec un support. Cette cascade FRET peut notamment être utilisée pour augmenter artificiellement le déplacement de Stokes d'un fluorophore afin de diminuer les interférences entre la longueur d'onde d'excitation et celle d'observation. Lorsque le composé de formule (I) est utilisé pour préparer une sonde multimodale pour l'imagerie médicale, on peut notamment faire réagir deux ou trois des quatre fonctions du composé de formule (I) avec deux ou trois marqueurs différents permettant de réaliser au moins deux types de détection différentes, tel que notamment un composé fluorescent, un composé radioactif, un composé présentant des propriétés magnétiques ou bien un composé enrichi isotopiquement. La (ou les deux) fonction(s) restante(s) pourra(ont) donc réagir avec une protéine, un anticorps, un acide nucléique, un polysaccharide, un peptide, un inhibiteur d'enzyme, présent dans le corps humain ou animal. Cette sonde multimodale pourra notamment être utilisée pour détecter certaines pathologies, telles que les cancers. Lorsque le composé de formule (I) est utilisé pour préparer sonde permettant de détecter simultanément plusieurs activités enzymatiques on peut notamment faire réagir une ou deux des quatre fonctions du composé de formule (I) avec un ou deux marqueurs de la même famille tel que notamment un composé fluorescent, un composé radioactif, un composé présentant des propriétés magnétiques ou bien un composé enrichi isotopiquement. Les fonction(s) restante(s) pourra(ont) donc réagir avec une protéine, un anticorps, un acide nucléique, un polysaccharide, un peptide, un inhibiteur d'enzyme, une enzyme présent dans le corps humain ou animal.

Lorsque le composé de formule (I) est utilisé pour préparer un système théranostique, on peut notamment faire réagir une ou deux des quatre fonctions du composé de formule (I) avec un ou deux marqueurs, on fait réagir une autre fonction du composé de formule (I) avec un principe actif et on fait réagir la quatrième fonction du composé de formule (I) avec une biomolécule qui est avantageusement un ligand spécifique de la cible où l'on souhaite délivrer le principe actif. Selon un mode de réalisation préféré, le principe actif est lié au composé de formule (I) avec un lien covalent clivable sous l'effet d'un stimulus biologique ce qui permet de libérer le principe actif au voisinage de la cible. Lorsque le composé de formule (I) est utilisé pour préparer une biopuce capable de détecter un analyte, on peut notamment faire réagir une des quatre fonctions du composé de formule (I) avec un support et une ou deux des quatre autres fonctions du composé de formule (I) avec des marqueurs. On fait réagir la quatrième fonction du composé de formule (I) avec un motif de reconnaissance spécifique de l'analyte que l'on souhaite détecter. La biopuce est alors introduite dans le milieu que l'on souhaite analyser, par exemple dans un milieu liquide ou dans l'alimentation humaine et/ou animale.

Enfin, lorsque le composé de formule (I) est utilisé pour vectoriser un principe actif, on peut notamment faire réagir une des quatre fonctions avec le principe actif et une des trois autres fonctions avec un vecteur permettant de moduler et/ou de contrôler la distribution du principe actif à sa cible. De plus, si un ou plusieurs marqueurs sont fixés sur les fonctions restantes du composé de formule (I), on peut réaliser le suivi in vivo du devenir dudit principe actif par la technique d'imagerie correspondante. On peut ainsi notamment vectoriser et suivre un principe actif au-delà de la barrière hématoencéphalique. L'invention sera maintenant illustrée par les exemples non limitatifs suivants. EXEMPLES Exemple 1 : préparation d'un réactif tétrafonctionnel selon l'invention Dans cet exemple est décrite la synthèse du réactif tétrafonctionnel de formule (II) N3,,,,,,,........."\o/'.,......'...0 (II). La stratégie de synthèse consiste à préparer séparément les quatre entités fonctionnelles 1, 2, 3 et 4 suivantes (l'unité 2 étant accessible dans le commerce) puis de les assembler via des réactions de couplage pour obtenir le réactif tétrafonctionnel de formule (II) : 0 HNC)NO FmocHN 0 3 O H2N°0 N3 \c)/C)\OH 1 4 0 FmocHNOH STrt 2 1) Synthèse de l'entité 1 H2NC)C) 1 L'entité 1 est synthétisée selon le schéma réactionnel suivant : O a) b) / H CHO OH la lb H 2 N. C) 0 c) HO () OH N°0Ts 1f 1d le Le produit de départ la est le norbornène aldehyde commercial sous forme d'un mélange Endo/Exo : 3/1. Une séparation sur gel de silice (étape a)) conduit à 10 l'obtention du produit majoritaire endo pur lb. La 1c d) + réduction de l'aldéhyde en alcool correspondant par le NaBH4 (étape b)) permet d'obtenir le composé lc. L'azoture le est obtenu à partir du diol ld (étape c)) selon la procédure décrite dans Zhao et al. Org. Biomol. Chem. 2010, 8, 3923- 3927 : la tosylation d'un des deux hydroxyles par le chlorure de 4-toluènesulfonyle en présence de triéthylamine dans le dichlorométhane suivie du remplacement du groupe tosyle par l'azoture de sodium dans l'éthanol et enfin la tosylation de l'alcool restant par le chlorure de 4- toluènesulfonyle en présence de triéthylamine dans le dichlorométhane. La réaction entre lc et le (étape d)) en présence d'hydrure de sodium dans le diméthylformamide à 70°C pendant 6 heures conduit à l'éther correspondant lf. L'éther lf est alors transformé en entité 1 par une réduction de Staudinger (étape e)) en présence de triphénylphosphine dans un mélange eau/tétrahydrofuranne à reflux pendant 12 heures. Les étapes d) et e) sont décrites plus en détail ci-après. la) Etape d) : Synthèse du 5-((2-(2-azidoéthoxy)éthoxy)méthyl) 20 bicyclo[2.2.1]hept-2-ène (1f) 1f A une suspension d'hydrure de sodium (60% dans l'huile minérale, 0,27 g, 6,50 mmol) sous agitation, dans le diméthylformamide anhydre (10 mL) à 0°C, on ajoute le 25 composé lc (0,70 g, 5,6 mmol). Le mélange résultant est agité pendant 3 heures à 60°C avant d'y ajouter une solution du composé le (1,7 g, 6,0 mmol) dans le diméthylformamide anhydre (5 mL). Le mélange réactionnel résultant est agité pendant 3 heures à 60°C puis on ajoute de l'eau (50 mL). Les phases sont séparées et la phase aqueuse est extraite avec de l'acétate d'éthyle (3 x 25 mL). Les phases organiques sont rassemblées, lavées avec de l'eau (3 x 20 mL) puis avec une solution saturée de NaC1 (20 mL), séchées (sur Na2SO4 anhydre) et concentrées sous vide. La purification par chromatographie sur colonne Flash (gel de silice, cyclohexane/acétate d'ethyle : 90/10, v/v) conduit à l'azoture lf (350 mg, rendement 91% basé sur la quantité de produit de départ récupérée) sous la forme d'une huile incolore. Rapport frontal sur chromatographie sur couche mince = 0,20 (cyclohexane/acétate d'éthyle : 90/10, v/v) ; Analyse infrarouge (pure) ("Vntaxr CM il : 2099, 1660, 1345, 1107, 719, 554 ; Analyse RMN 'H (300 MHz, CDC13, ppm) : 5 = 6,13-6,10 (m, 1 H), 5,94-5,91 (m, 1 H), 3,70-3,62 (m, 4 H), 3,60-3,52 (m, 2 H), 3,41-3,36 (m, 2 H), 3,23-3,05(m, 2 H), 2,90 (s, 1 H), 2,78 (s, 1 H), 2,39-2,32 (m, 1 H), 1,85-1,76 (m, 1 H), 1,43-1,39 (m, 1 H), 1,28-1,24 (m, 1 H), 0,52-0,45 (m, 1 H) ; Analyse RMN 13C (75 MHz, CDC13, ppm) : 5 = 137,1, 132,4, 75,1, 70,7, 70,3, 70,0, 50,7, 49,4, 43,9, 42,2, 38,7, 29,1. lb) Etape e) : Synthèse du 2-(2-(bicyclo[2.2.1]hept-5-ène2-ylméthoxy)éthoxy)éthanamine (1) (--)''0 H2N 1 A une solution d'azoture lf (350 mg, 1,48 mmol) dans le tétrahydrofuranne (10 mL), on ajoute de l'eau déionisée (0,5 mL) et de la triphénylphosphine (700 mg, 2,66 mmol). Le mélange résultant est agité à reflux pendant 12 heures puis dilué avec de l'eau déionisée (15 mL) et extrait avec de l'acétate d'éthyle (3 x 15 mL). Les phases organiques combinées sont lavées avec une solution saturée de NaC1 (20 mL), séchées (sur Na2SO4 anhydre) et concentrées sous vide. La purification par chromatographie sur colonne Flash (gel de silice, CH2C12/MeOH : 90/10, v/v) conduit à l'amine 1 (270 mg, rendement 87%) sous la forme d'une huile incolore. Rapport frontal sur chromatographie sur couche mince = 0,10 (CH2C12/MeOH : 90/10, v/v) : Analyse infrarouge (film) (v,'', cm-1) 2942, 2866, 1660, 1345, 1107, 719 ; Analyse RMN 'H (300 MHz, CDC13, ppm) : 5 = 6,12-6,08 (m, 1 H), 5,92-5,89 (m, 1 H), 3,59-3,48 (m, 6 H), 3,17-3,06 (m, 2 H), 2,90-2,75 (m, 4 H), 2,35-2,33 (m, 1 H), 1,83-1,75 (m, 1 H), 1,67 (singulet large, 2 H), 1,41-1.20 (m, 2H), 0.500.43 (m, 1H) ; Analyse RMN 13C (75 MHz, CDC13, ppm) : 5 = 137,1, 132,4, 75,1, 73,2, 70,3, 70,1, 49,4, 43,9, 42,1, 41,7, 38,6, 20 29,1 ; Analyse de spectrométrie de masse (Electrospray, mode positif) : m/z = 212,13 [M + H]+, calculé pour Ci2H22NO2+ 212,13. 2) Synthèse de l'entité 3 0 HNC)NO FmocHN OH 25 O L'entité 3 est synthétisée selon le schéma réactionnel suivant décrit par Foillard et al., J. Org. Chem., 2008, 73, 983-991 : d L'acide iodoacétique 3a et la N-(1- éthoxyéthylidène)hydroxylamine 3b réagissent ensemble en présence de NaOH dans l'eau à 80°C pendant 4 heures (étape 5 a)) pour conduire au composé 3c avec un rendement de 70%. Le couplage entre l'acide 3c et la N-Fmoc-L-lysine 3d (étape b)) est réalisé en deux étapes : activation de l'acide 3c par le N,N'-dicyclohexylcarbodiimide en présence de N-hydroxysuccinimide dans un mélange acétate 10 d'éthyle/1,4-dioxane suivie du couplage avec la N-Fmoc-Llysine 3d en présence de N,N-diisopropyléthylamine dans le dichlorométhane qui conduit à l'entité 3 avec un rendement de 96% sur les deux étapes. 3) Synthèse de l'entité 4 0 N3(:)0101.1 15 4 L'entité 4 est synthétisée selon le schéma réactionnel suivant décrit par Clavé et al., Org. Biomol. Chem., 2008, 6, 3065-3078 : 0 a) N 0 0 b) OH 4a 4b 4 20 Le 2-(2-(2-chloroéthoxy)éthoxy)éthanol 4a est transformé en azoture correspondant 4b par l'azoture de sodium (étape a)). L'azoture 4b est alors oxydé en entité 4 avec le réactif de HO I + HO, N 0 HO a) 3a 3b 3c HN 41 O b) FmocHN FmocHN 3 Jones (étape b)). Les étapes a) et b) sont décrites plus en détail ci-après. 3a) Etape a) : Synthèse du 2 -(2 -(2 -azidoéthoxy)éthoxy)éthanol 4b N3,0,.,C)," OH 4b A une suspension de NaN3 (0,70 g, 10,7 mmol) et de NaI (0,14 g, 0,93 mmol) dans l'éthanol anhydre on ajoute le 2- (2-(2-chloroéthoxy)éthoxy)éthanol 4a (1,29 mL, 8,9 mmol). Le mélange jaune résultant est chauffé à reflux pendant 5 jours sous atmosphère d'argon. On vérifie que la réaction est terminée avec une chromatographie sur couche mince (CH2C12/MeOH : 9/1, v/v). Le mélange est filtré sur Celite® 545 pour enlever les sels de sodium puis concentré sous vide. L'huile résultante est dissoute dans le dichlorométhane (environ 10 mL) and stockée à 4 °C pendant 1 heure. Après filtration sur coton et concentration, on obtient le composé 4b (1,8 g, 10.7 mmol, rendement quantitatif) sous la forme d'une huile incolore. Rapport frontal sur chromatographie sur couche mince = 0,69 (CH2C12/MeOH : 90/10, v/v) : Analyse infrarouge (pur) ("Virtaxr cm -1 ) 935, 1118, 1287, 1346, 1453, 2110, 2874, 2915, 3390 (large) ; = 2,63 (t, J = 6,0 Analyse RMN 'H (300 MHz, CDC13, ppm) : 5 Hz, 1 H, OH), 3,43 (t, J = 4,9 Hz, 2 H), 3,61-3,77 (m, 10 H). 3b) Etape b) : Synthèse de l'acide 2-(2-(2-azidoéthoxy)éthoxy) acétique 4 0 kl,c100H 4 Le 2-(2-(2-azidoéthoxy)éthoxy)éthanol 4b (1,56 g, 8,9 mmol) est dissout dans l'acétone (90 mL) et la solution résultante est refroidie à 4°C. On ajoute au goutte à goutte une solution de réactif de Jones 3,0 M (8,9 mL) fraichement préparée. Un précipité vert se forme immédiatement. Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 1 heure. On vérifie que la réaction est terminée avec une chromatographie sur couche mince (CH2C12/MeOH : 9/1, v/v). On arrête la réaction en ajoutant du propan-2-ol (environ 4 mL). 15 minutes plus tard, on ajoute de l'acétone (100 mL) et le mélange est filtré sur Celite® 545 pour enlever les sels de chrome (III) puis concentré sous vide. L'huile résultante est immédiatement purifiée par chromatographie sur colonne Flash (gel de silice, gradient CH2C12 pur à CH2C12/MeOH: 95/5, v/v) pour conduire à l'acide 4 (1,53 g, rendement 91%) sous la forme d'un solide jaune. Rapport frontal sur chromatographie sur couche mince = 0,23 (CH2C12/MeOH : 90/10, v/v) : Analyse RMN 'H (300 MHz, CDC13, ppm) : 5 = 3,43 (t, J 4,9 Hz, 2 H), 3,66-3,80 (m, 6 H), 4,19 (s, 2 H) ; Analyse RMN 13C (75 MHz, CDC13, ppm) : 5 = 50,7, 68,6, 70,2, 70,6, 71,4, 174,2. 4) Synthèse du composé de formule (II) selon l'invention N3.,.0/\,0 (II) Le composé de formule (II) est synthétisé selon le schéma réactionnel suivant : '..--..,,O,'..-,..0 H2N 1 ± "",..STrt 2 0 ...'7"-...0 N'...---,,,O H STrt II-A 0 / ,,-...'...0.,...'----...0 H N STrt H B c) a) ->- FmocHN H2N FmocHN OH HN II-D II-C + N3,...........,-.., '..--...,,,,..0...,OH 0 4 HN ....k HN 0 0 H N 0,,,, N d) FmocHN e) 1\13.....,...,--,0,...--,'_'0 ,...--...,_'..0,,,, 0 N H f) N,---',0,,-.0 1\13...,..',-.,0,--.'..0 H 00 STrt SH Il-E Il Le couplage peptidique des entités 1 et 2 (étape a)) est effectué en présence d'hexafluorophosphate de (benzotriazol-1-yloxy)tris(diméthylamino)phosphonium (BOP) et de N,N-diisopropyléthylamine dans l'acétonitrile anhydre à température ambiante pendant 3 heures et conduit à l'amide II-A avec un rendement de 87%. Le groupe Fmoc de l'amide II-A est ensuite déprotégé (étape b)) en présence de pipéridine dans le tétrahydrofuranne à température ambiante pendant 3 heures pour conduire au composé II-B avec un rendement de 96%. Le couplage peptidique des entités II-B et 3 (étape c)) est effectué en présence BOP et de N,N-diisopropyléthylamine dans l'acétonitrile anhydre à température ambiante pendant 4 heures et conduit à l'amide II-C avec un rendement de 97%. Le groupe Fmoc de l'amide II-C est ensuite déprotégé (étape d)) en présence de pipéridine dans le tétrahydrofuranne à température ambiante pendant 2 heures pour conduire au composé II-D avec un rendement de 71%. Le couplage peptidique des entités II-D et 4 (étape e)) est effectué en présence BOP et de N,N-diisopropyléthylamine dans l'acétonitrile anhydre à température ambiante pendant 2 heures et conduit à l'amide II-E avec un rendement de 97%. La déprotection des groupes hydroxylamine et thiol de l'amide II-E (étape f)) est réalisée en présence d'un mélange acide trifluoroacétique/triéthylsilane/eau : 95/2,5/2,5 dans le dichlorométhane pour conduire au composé II selon la présente invention avec un rendement de 32%. Les étapes a) à f) sont décrites plus en détail ci-après. 4a) Etape a) : Synthèse du composé II-A FmocHN WA A une solution de l'entité 1 (270 mg, 1,28 mmol) dans de l'acétonitrile anhydre (15 mL) on ajoute l'agent de couplage BOP (570 mg, 1,29 mmol), l'entité 2 (0,75 g, 1,28 mmol) et de la N,N-diisopropyléthylamine (0,67 mL, 3,80 mmol). Le mélange résultant est agité à température ambiante pendant 3 heures puis concentré sous vide et dilué avec de l'acétate d'éthyle (50 mL). La phase organique est lavée avec une solution aqueuse d'acide citrique à 10% (3 x 20 mL), une solution saturée de NaHCO3 (3 x 20 mL), une solution saturée de NaC1 (20 mL), séchée (sur Na2SO4 anhydre) et concentrée sous vide. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne Flash (gel de silice, CH2C12/MeOH : 90/10, v/v) pour conduire à l'amide II-A (820 mg, rendement 87%) sous la forme d'une huile incolore. Rapport frontal sur chromatographie sur couche mince = 0,30 (CH2C12/MeOH : 90/10, v/v) : : 2984, 1739, 1373, Analyse infrarouge (pure) (v,'', cm-1) 1238, 1045, 702, 438 ; Analyse RMN 'H (300 MHz, CDC13, ppm) : 5 = 7,78-7,75 (m, 1 H), 7,60-7,57 (m, 1 H), 7,45-7,21 (m, 21 H), 6,27-6,25 (m, 1 H), 6,13-6,10 (m, 1 H), 5,93-5,89 (m, 1 H), 5,15-5,13 (m, 1 H), 4,39-4,35 (m, 2 H), 4,22-4,15 (m, 1 H), 3,90-3,80 (m, 1 H), 3,55-3,37 (m, 8 H), 3,17-3,01 (m, 2 H), 2,88 (s, 1 H), 2,78 (s, 1 H), 2,74-2,57 (m, 2 H), 2,35-2,32 (m, 1 H), 1,84-1,75 (m, 1 H), 1,45-1,40 (m, 1 H), 1,25-1,23 (m, 1 H), 0,50-0,45 (m, 1 H) ; Analyse RMN 13C (75 MHz, CDC13, ppm) : 5 = 169,9, 155,8, 144,4, 143,8, 143,7, 141,3, 137,2, 132,4, 129,6, 128,1, 127,7, 127,1, 126,9, 125,1, 119,9, 75,1, 70,3, 70,1, 69,6, 67,2, 67,0, 54,0, 49,4, 47,1, 43,9, 42,2, 39,5, 38,7, 34,3, 29,7, 29,2 ; Analyse de spectrométrie de masse (Electrospray, mode positif) : m/z = 778,80 [M + H]+, calculé pour C491-151N205S+ 779,35. 4b) Etape b) : Synthèse du composé II-B 0 N H STrt WB A une solution du composé II-A (820 mg, 1.05 mmol) dans du tétrahydrofuranne anhydre (10 mL), on ajoute de la pipéridine (1 mL). Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 3 heures puis concentré sous vide. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne Flash (gel de silice, CH2C12/MeOH : 90/10, v/v) pour conduire à l'amine II-B (560 mg, rendement 96%) sous la forme d'une huile incolore.

Rapport frontal sur chromatographie sur couche mince = 0,10 (CH2C12/MeOH : 90/10, v/v) : 3314, 3056, 2933, Analyse infrarouge (pure) ("Virtaxr CM il : 700, 407 ; (m, 15 2866, 1663, 1527, 1490, 1445, 1106, 743, = 7,54-7,25 Analyse RMN 'H (300 MHz, CDC13, ppm) : 5 H), 6,20-6,15 (m, 1 H), 6,00-5,95 (m, 1 H), 3,58-3,55 (m, 6 H), 3,48-3,42 (m, 2 H), 3,30-2,95 (m, 4 H), 2,85-2,57 (m, 3 H), 2,43-2,37 (m, 1 H), 1,89-1,81 (m, 1 H), 1,49-1,45 (m, 3 H), 1,34-1,26 (m, 2 H), 0,58-0,49, (m, 1 H) ; Analyse RMN 13C (75 MHz, CDC13, ppm) : 5 = 173,1, 144,7, 137,2, 132,5, 129,6, 128,0, 126,8, 126,7, 75,1, 70,3, 70,2, 69,8, 66,9, 54,1, 49,5, 43,9, 42,2, 38,9, 38,6, 37,5, 29,2 ; Analyse de spectrométrie de masse (Electrospray, mode positif) : m/z = 557,13 [M + H]+, calculé pour C341-141N203+ 557,28. 4c) Etape c) : Synthèse du composé II-C 0 HNC)NO FmocHN N H .....,,,,,'..0...',.......'/"..\.0 0 STrt WC A une solution de l'amine II-B (560 mg, 1,0 mmol) dans de l'acétonitrile anhydre (15 mL) on ajoute l'agent de couplage BOP (445 mg, 1,0 mmol), l'entité mmol) et de la N,N-diisopropyléthylamine mmol). Le mélange résultant est agité ambiante pendant 3 heures puis concentré sous vide et dilué 3 (514 mg, 1,01 (0,6 mL, 3,40 à température avec de l'acétate d'éthyle (50 mL). La phase organique est lavée avec une solution aqueuse d'acide citrique à 10% (3 x 20 mL), une solution saturée de NaHCO3 (3 x 20 mL), une solution saturée de NaC1 (20 mL), séchée (sur Na2SO4 anhydre) et concentrée sous vide. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne Flash (gel de silice, CH2C12/MeOH : 90/10, v/v) pour conduire à l'amide II-C (1,03 g, rendement 97%) sous la forme d'une huile incolore. Rapport frontal sur chromatographie sur couche mince = 0,10 (CH2C12/MeOH : 90/10, v/v) : 1710, Analyse infrarouge (pure) ("Vntaxr cm') : 2929, 2867, 1649, 1534, 1447, 1231, 1085, 844, 739, 701, 557 ; Analyse RMN 'H (300 MHz, CDC13, ppm) : 5 = 7,78 (d, J = 7,3 Hz, 2 H), 7,63 (d, J = 7,0 Hz, 2 H), 7,44-7,18 (m, 19 H), 6,71-6,46 (m, 3 H), 6,16-6,11 (m, 1 H), 5,96-5,91 (m, 2 H), 4,38-4,37 (m, 3 H), 4,21-4,10 (m, 2 H), 3,99 (q, J = 7,0 Hz, 2 H), 3,60-3,25 (m, 9 H), 3,20-3,10 (m, 2 H), 2,92-2,87 (m, 2 H), 2,82-2,75 (m, 2 H), 2,62-2,53 (m, 2 H), 2,41-2,28 (m, 2 H), 1,99 (s, 3 H), 1,87-1,75 (m, 2 H), 1,62-1,30 (m, 4 H), 1,27 (t, J = 7,0 Hz, 3 H), 0,53-0,46 (m, 1 H) ; Analyse RMN 13C (75 MHz, CDC13, ppm) : 5 = 171,4, 170,6, 169,5, 164,1, 156,4, 144,4, 143,8, 143,7, 141,3, 137,1, 132,4, 129,5, 127,9, 127,7, 127,0, 126,8, 125,1, 119,9, 75,1, 72,8, 70,3, 70,1, 69,5, 67,1, 62,6, 55,1, 52,3, 49,4, 47,2, 43,9, 42,2, 39,5, 38,7, 38,0, 33,8, 31,6, 29,3, 29,2, 22,3, 14,2, 13,8 ; Analyse de spectrométrie de masse (Electrospray, mode positif) : m/z = 1050,13 [M + H]+, calculé pour C611-172N509S+ : 1050,51. 4d) Etape d) : Synthèse du composé II-D 0 HN(:)NO N H ...."-,.',,,'.0"..,......7-^.0 0 STrt WD A une solution du composé II-C (1,03 g, 0,98 mmol) dans du tétrahydrofuranne anhydre (10 mL), on ajoute de la 5 pipéridine (1 mL). Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 3 heures puis concentré sous vide. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne Flash (gel de silice, CH2C12/MeOH : 90/10, v/v) pour conduire à l'amine II-D (580 mg, rendement 71%) sous la 10 forme d'une huile incolore. Rapport frontal sur chromatographie sur couche mince = 0,10 (CH2C12/MeOH : 90/10, v/v) : Analyse infrarouge (pure) ("Vntaxr cm') : 3309, 3057, 2943, 2865, 1652, 1535, 1492, 1307, 1095, 744, 701 ; 15 Analyse RMN 'H (300 MHz, CDC13, ppm) : 5 = 7,64 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,45-7,42 (m, 6 H), 7,33-7,20 (m, 9 H), 6,41-6,38 (m, 2 H), 6,15-6,12 (m, 1 H), 5,95-5,92 (m, 1 H), 4,35 (s, 3 H); 4,12-4,07(m, 1 H), 4,00 (q, J = 7,1 Hz, 2 H), 3,59- 3,48 (m, 6 H), 3,42-3,25 (m, 5 H), 3,20- 3,05 (m, 2 H), 20 2,91 (s, 1 H), 2,80 (s, 1 H), 2,70-2,58 (m, 2 H), 2,39-2,34 (m, 1 H), 1,87 (s, 3 H), 1,87-1,78 (m, 2 H), 1,65-1,43 (m, 8 H), 1,29-1,26 (t, J = 7,0 Hz, 3 H), 0,55-0,48 (m, 1 H) ; Analyse RMN 13C (75 MHz, CDC13, ppm) : 5 = 175,0, 170,2, 170,0, 164,0, 144,5, 137,1, 132,3, 129,6, 127,9, 126,8, 25 75,1, 72,9, 70,3, 70,1, 69,6, 67,0, 62,6, 54,9, 52,0, 49,4, 43,9, 42,2, 39,4, 38,7, 38,5, 34,4, 33,9, 29,5, 29,2, 22,9, 14,2, 13,8 Analyse de spectrométrie de masse (Electrospray, mode positif) : m/z = 828,20 [M + H]+, calculé pour C461-162N507S+ 828,44. 4e) Etape e) : Synthèse du composé II-E 0 HN N 0 0 STrt II-E A une solution de l'amine II-D (170 mg, 0,2 mmol) dans de l'acétonitrile anhydre (5 mL) on ajoute l'agent de couplage BOP (90 mg, 0,2 mmol), l'entité 4 (40 mg, 0,21 mmol) et de la N,N-diisopropyléthylamine (0,11 mL, 0,60 mmol). Le mélange résultant est agité à température ambiante pendant 3 heures puis concentré sous vide et dilué avec de l'acétate d'éthyle (50 mL). La phase organique est lavée avec une solution aqueuse d'acide citrique 1096 (3 x 20 mL), une solution saturée de NaHCO3 (3 x 20 mL), une solution saturée de NaC1 (20 mL), séchée (sur Na2SO4 anhydre) et concentrée sous vide. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne Flash (gel de silice, CH2C12/MeOH : 96/4, v/v) pour conduire à l'amide II-E (200 mg, rendement 97%) sous la forme d'une huile incolore.

Rapport frontal sur chromatographie sur couche mince = 0,10 (CH2C12/MeOH : 90/10, v/v) Analyse infrarouge (pure) ("Vntaxr cm') : 3301, 3056, 2929, 2865, 2104, 1651, 1524, 1444, 1306, 1106, Analyse RMN 'H (300 MHz, CDC13, ppm) : 5 H) , 6,44-6,42 (m, 2 H), 4,36-3,34 (m, 3 H), 3,40-2,91 (m, 10 H), 2,79- 2,28 (m, 0 H N H H) , 6,76-6,72 (m, 1 H), 5,95-5,92 (m, 1 H), 3,70-3,48 (m, 12 735, 700 ; = 7,45-7,20 (m, 16 H) ; 6,14-6,10 (m, 1 H); 4,05-3,90 (m, 5 5 H), 1,99 (s, 3 H), 1,88-1,35 (m, 7 H), 1,27 (t, J 7,0 Hz, 3 H), 0,53-0,46 (m, 1 H) ; Analyse RMN 13C (75 MHz, CDC13, ppm) : 5 = 170,9, 170,2, 169,5, 164,0, 144,3, 137,1, 132,3, 129,5, 128,0, 126,8, 75,1, 72,8, 70,9, 70,4, 70,3, 70,2, 70,1, 70,0, 69,4, 67,0, 62,6, 52,5, 52,3, 50,5, 49,4, 43,9, 42,6, 42,1, 39,4, 38,7, 38,4, 33,9, 31,4, 29,2, 22,7, 14,2, 13,8 ; Analyse de spectrométrie de masse (Electrospray, mode positif) : m/z = 999,13 [M + H]+, calculé pour C521-171N8010S+ 999,50. 4f) Etape f) : Synthèse du composé II 0 IHNI--C)NH, ..........,....'.0........'....---.0 N H Nr',....,,,,,,o/".'......'.O.'.../"\N H 0 0 -SH Il Le compose II-E (50 mg, 0.05 mmol) est dissout dans du dichlorométhane (4,5 mL) et le mélange est refroidi à 0°C. 15 On ajoute 0,5 mL d'un mélange acide trifluoroacétique/triéthylsilane/eau (50/25/25, v/v/v). Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 1 heure. Le produit II a été isolé après concentration sous vide, precipitation dans l'éther 20 diéthylique et purification semi-préparative par RP-HPLC (chromatographie liquide haute performance sur phase inverse) dans les conditions du système B décrit ci-après pour conduire au sel trifluoroacétate du composé II sous la forme d'une poudre blanche amorphe (11 mg, rendement 32%). 25 RP-HPLC dans les conditions du système A: tR = 24,6 min, pureté >90%.

Analyse infrarouge (pure) (vmax, cm-1) : 3286, 2937, 2108, 1648, 1531, 1199, 1127, 720 ; Analyse RMN 'H (300 MHz, D20, ppm) : 5 = 6,25-6,21 (m, 1 H), 6,01-5,98 (m, 1 H), 4,55 (s, 2 H), 4,51-4,39 (m, 2 H), 4,17 (s, 2 H), 3,81-3,75 (m, 6 H), 3,67-3,63 (m, 6 H), 3,55-3,52 (m, 2 H), 3,47-3,44 (m, 2 H), 3,31-3,18 (m, 3 H), 2,96-2,82 (m, 3 H), 2,39-2,26 (m, 1 H), 1,91-1,81 (m, 4 H), 1,62-1,27 (m, 7 H), 0,53-0,47 (m, 1 H) ; Analyse RMN 13C (75 MHz, D20, ppm) : 5 = 173,7, 172.8, 171,5 10 169,1 137,8, 132,2, 74,8, 72,1, 70,4, 69,4, 69,4, 69,3, 68,7,55,7, 53,3, 50,1, 48,9, 43,7, 42,0, 39,1, 38,9, 37,9, 30,6, 28,5, 27,8, 25,3, 22,4 ; Analyse de spectrométrie de masse (Electrospray, mode positif) : m/z = 687,27 [M + H]+, calculé pour C29H50N809S+ : 15 687,13. Exemple 2 : préparation d'une cassette de transfert d'énergie avec le réactif tétrafonctionnel selon l'invention 20 Afin de valider l'orthogonalité des quatre fonctions du réactif tétrafonctionnel selon l'invention, il a été choisi de synthétiser un cassette de transfert d'énergie X issue des réactions entre le composé de formule II, et un composé luminescent III-B, un composé accepteur de luminescence 25 IV-C et deux biomolécules différentes, à savoir deux peptides V-A et VI-A. Les différents partenaires III-B, IV-C, V-A et VI-A sont représentés dans les schémas ci-dessous : a) III-A III-B + rNH HN,.......'--1 + HO HO b) HO O IV-A + rNH HN,....) + IV-C HO =N N=N NI_ N N IV-B H2N NH H N,,,CONH2 H2N V-A HN0 HN..... . 0 I/ 0Ph OHO ---', 0 NH2 OH VI-A H2 H2NOC 0 H NN E H OH ...I NH2 Le composé III-B est obtenu à partir du composé III-A en deux étapes (étape a)) : un premier couplage peptidique avec la pipérazine en présence de tétrafluoroborate de O- (N-succinimidyl)-N,N,N',N'-tétraméthyluronium (TSTU) et de N,N-diisopropyléthylamine dans le diméthylformamide anhydre suivi d'un deuxième couplage peptidique avec l'acide 4- formylbenzoïque en présence de l'agent de couplage BOP et de N,N-diisopropyléthylamine dans l'acétonitrile anhydre.

Le composé IV-C est obtenu à partir du composé IV-A en deux étapes (étape b)) : un premier couplage peptidique avec la pipérazine en présence de N,N'-dicyclohexylcarbodiimide, d'hydroxybenzotriazole et de N,N-diisopropyléthylamine dans le N-méthylpyrrolidone suivi d'un deuxième couplage avec l'acide IV-B en présence d'hexafluorophosphate de 0-(7- azabenzotriazol-1-y1)-N,N,N',N'-tetraméthyluronium (HATU) et de N,N-diisopropyléthylamine dans le diméthylformamide 5 anhydre. Les réactions entre le composé de formule II et les composés III-B, IV-C, V-A et VI-A se fait selon les schémas réactionnels suivants : o N30...----,,,,..',0 o "SH H + N3.........'.....0,...---.....',,,0 VII N N=N N-N IV-C + N_ N3..........'....-,,0'...--........',0 Nr.'......'--..'0'...--.........',0 N3-',,,..-^,'0,--......'.'..0 HN O, ....'.' VI-A X Nz-..N , 0-----ÇN.,.....'....,o/-..,_,-0 56 On réalise tout d'abord la réaction de condensation entre la fonction oxyamine du composé de formule II et la fonction aldéhyde du composé III-B pour conduire à l'oxime VII. Puis on réalise la réaction de Diels-Alder entre la fonction norbornène du composé VII et la tétrazine du composé IV-C pour conduire au composé VIII. Ensuite on réalise la réaction de substitution nucléophile SN2 entre la fonction thiol du composé VIII et la fonction iodo-acétyle du composé V-A pour conduire au composé IX. Enfin, on réalise la réaction de cycloaddition 1,3-dipolaire catalysée par le cuivre (CuAAC) entre la fonction azoture du composé IX et la fonction alcyne vrai du composé VI-A pour conduire au composé X. La synthèse des composés VII à X est décrite plus en détail ci-après. a) Synthèse du composé VII 0 N3\,....,'''....cy..."-"--,/°-....../-"---N H 0 -SH VII Le composé II (2.5 mg, 4.48 pmol) est dissout dans un mélange de solution tampon aqueuse NaOAc à 0,1 M (pH 4,2, 1,0 mL) et d'acétonitrile (1 mL). L'aldéhyde III-B (2,8 mg, 3,38 pmol) est ajouté et le mélange résultant est agité à température ambiante pendent 4 heures. On vérifie que la réaction est terminée à l'aide d'une analyse RP-HPLC effectuée dans les conditions du système A puis on arrête la réaction en ajoutant une solution aqueuse d'acide trifluoroacétique à 0,1% (2 mL). Ensuite, le mélange est purifié par RP-HPLC semi-préparative dans les conditions du système G. Les fractions contenant le produit sont lyophilisées pour conduire au produit VII sous la forme d'une poudre amorphe rouge (1,5 mg, rendement 32%). RP-HPLC dans les conditions du système A: tR = 31,3 min, pureté >95%.

Analyse de spectrométrie de masse basse résolution (Electrospray, mode positif) : m/z = 1341,40 [M + H]+, calculé pour C69H89N12014S : 1340,63. b) Synthèse du composé VIII 0 N'/'(-y-\,/°,/.N H Le composé VII (0.42 mg, 313 pmol) est dissout dans le diméthylformamide anhydre (2 mL) et on ajoute le composé VI-C (0,24 mg, 321 pmol). Le mélange résultant est agité à température ambiante pendant 1 heure. Le mélange est purifié par RP-HPLC semi-préparative dans les conditions du système H (2 injections). Les fractions contenant le produit sont lyophilisées pour conduire au produit VIII sous la forme d'une poudre amorphe orange (0,31 mg, rendement 48%). RP-HPLC dans les conditions du système A: tR = 27,9 min, pureté >90%. Analyse de spectrométrie de masse basse résolution (Electrospray, mode positif) : m/z = 1031,33 [M + 2H]2+, calculé pour C11oH119N190205 : 2057,86. c) Synthèse du composé IX 0 N3,(),,C-_:N H Le composé VIII (0,1 mg, 48 nmol) est dissout dans un mélange d'acétonitrile et d'une solution tampon aqueuse de 5 NaHCO3 à 0,1 M (2/3, v/v, 0,5 mL, pH 8,5). Le peptide V-A (0,17 mg, 0,13 pmol) est ajouté et le mélange résultant est agité à température ambiante pendant 2 heures. On vérifie que la réaction est terminée à l'aide d'une analyse RP-HPLC effectuée dans les conditions du système A et on purifie 10 par RP-HPLC semi-préparative dans les conditions du système I. Les fractions contenant le produit sont lyophilisées pour conduire au produit IX sous la forme d'une poudre amorphe orange (0,1 mg, rendement 63%). RP-HPLC dans les conditions du système A: tR = 27,1 min, 15 pureté >90%. Analyse de spectrométrie de masse basse résolution (Electrospray, mode positif) : m/z = 811,00 [M + 4H] 4+, 1081,13 [M + 3H]3+, calculé pour C1581-1195N3503553 : 3238,37. d) Synthèse du composé X Le composé IX (0,16 pg, 5 nmol) et le peptide VI-A (0,45 pg, 0,05 pmol) sont dissous dans de l'eau de qualité Milli-Q 5 (0,1 mL) et du DMSO (0,2 mL). On ajoute 10 pL d'une solution aqueuse de Cu504 à 10 mM et 10 pL d'une solution aqueuse d'ascorbate de sodium à 10 mM. Le mélange résultant est agité à température ambiante pendant 4 heures. On vérifie que la réaction est terminée à l'aide d'une analyse 10 RP-HPLC effectuée dans les conditions du système A. Le mélange est purifié par RP-HPLC semi-préparative dans les conditions du système J (1 injection). Les fractions contenant le produit sont lyophilisées pour conduire à la cassette de transfert d'énergie X sous la forme d'une 15 poudre amorphe orange (4,2 pg, rendement 20%). RP-HPLC dans les conditions du système A: tR = 25,9 min, pureté >95%. Analyse de spectrométrie de masse basse résolution (Electrospray, mode positif) : m/z = 831,00 [M + 5H]5+, 20 1038,67 [M + 4H]4+, 1383,80 [M + 3H]3+, calculé pour C200H254N4604753 : 4147,81 .

Conditions utilisées pour les analyses et les purifications effectuées par RP-HPLC Système A: RP-HPLC (colonne Thermo Hypersil GOLD C18, 5 Pm, 2,1 X 100 mm) avec comme éluants CH3CN et acide trifluoroacétique aqueux à 0,1% (TFA aq., 0,1%, v/v, pH 2,2) [100% TFA (5 min) suivi d'un gradient linéaire de 0 à 100% (35 min) de CH3CN] à un débit de 0,25 mL/min. Détection UV-visible avec le mode "Max Plot" (i.e., chromatogramme à absorbance maximum pour chaque composé (220-750 nm).

Système B: RP-HPLC semi-préparative (colonne Thermo Hypersil GOLD CH, 5 pm, 21,2 X 250 mm) avec comme éluants CH3CN et TFA aq. (0,1%, v/v, pH 2,2) [100% TFA (5 min) suivi d'un gradient linéaire de 0 à 20% (10 min) et 20 à 60% (40 min) de CH3CN] à un débit de 15 mL/min. Double détection UV à 227 et 280 nm. Système G: RP-HPLC semi-préparative (colonne Thermo Hypersil GOLD CH, 5 pm, 10 X 250 mm) avec comme éluants CH3CN et TFA aq. (0,1%, v/v, pH 2,2) [80% TFA (5 min) suivi d'un gradient linéaire de 20 à 40% (10 min) et 40 à 80% (120 min) de CH3CN] à un débit de 4.0 mL/min. Double détection visible à 470 et 510 nm. Système H: RP-HPLC semi-préparative (colonne Thermo Hypersil GOLD CH, 5 pm, 10 X 250 mm) avec comme éluants CH3CN et TFA aq. (0,1%, v/v, pH 2,2) [100% TFA (5 min) suivi d'un gradient linéaire de 0 à 40% (20 min) et 40 à 80% (80 min) de CH3CN] à un débit de 4.0 mL/min. Double détection visible à 420 et 510 nm. Système I: RP-HPLC semi-préparative (colonne Thermo Hypersil GOLD CH, 5 pm, 10 X 250 mm) avec comme éluants CH3CN et TFA aq. (0,1%, v/v, pH 2,2) [100% TFA (5 min) suivi d'un gradient linéaire de 0 à 20% (10 min) et 20 à 10% (80 min) de CH3CN] à un débit de 4 mL/min. Double détection UV à 275 et 350 nm. Système J: RP-HPLC semi-préparative (colonne Thermo Hypersil GOLD CH column, 5 pm, 4,6 X 100 mm) avec comme éluants CH3CN et TFA aq. (0,1%, v/v, pH 2,2) [100% TFA (5 min) suivi d'un gradient linéaire de 0 à 20% (10 min) et 20 à 60% (40 min) de CH3CN] à un débit de 1.0 mL/min. Détection UV à 247 nm.

Exemple 2 : préparation d'un réactif tétrafonctionnel selon l'invention Dans cet exemple est décrite la synthèse du réactif tétrafonctionnel de formule (III) N3 0/10 (III). La stratégie de synthèse consiste à préparer séparément les cinq entités fonctionnelles 4, 5, 6, 7 et 8 suivantes (les unités 4 et 7 étant accessibles dans le commerce) puis de les assembler via des réactions de couplage pour obtenir le réactif tétrafonctionnel de formule (III) : o H2N HO N,Boc 1 Boc 6 o 0 N3,No.-.N..0 )-LOH 0 2NH2 H2N BocHN 0 OH S-S\ 1 7 o 8 1) Synthèse de l'entité 6 o HO N,Boc Boc 6 5 L'entité 6 est synthétisée selon le schéma réactionnel suivant décrit par Brask et Jensen, J. Pept. Sci., 2000, 6, 290-299: a) N"Boc > BnO H N"Boc H Bn0 N,Boc i Boc 0 HO b) 6a 6b 6c y o HO N"Boc 1 Boc 610 Le produit de départ 6a est l'acide tert-butyloxycarbonylaminooxyacétique commercial, qui est transformé en l'ester benzylique 6b en présence de bromure de benzyle et de carbonate de césium dans le DMF (étape a)). L'azote est 5 ensuite protégé par un deuxième groupement tertbutyloxycarbonyle avec le dicarbonate de di-tert-butyle et la 4-N,N-diméthylaminopyridine dans l'acétonitrile (étape b)) qui permet d'obtenir le composé 6c. L'acide 6 est obtenu par hydrogénation au palladium sur charbon dans le 10 méthanol du composé 6c (étape c)). 2) Synthèse de l'entité 8 8c a) 8b b) O + BocHN OH OH O BocHN O OH 8d c) d) O -.I NH2 BocHN NH2 O O 8 8e NH2 0 8 L'entité 8 est synthétisée selon le schéma réactionnel suivant : o 8a 15 Le produit de départ 8a est la 4-méthylbenzophénone commerciale qui est bromée par du bromure d'hydrogène en présence de peroxyde d'hydrogène dans l'eau pour obtenir le composé 8b. La substitution du brome par la fonciton alcool d'une serine commerciale avec l'hydrure de sodium dans le DMF permet d'obtenir le composé 8d selon la procédure de Shin et al. Org. Lett. 2005, 7, 5477-5480. Le composé 8e est obtenu par amidification du produit 8d en présence de carbonate d'ammonium et du dicarbonate de di-tert-butyle selon la procedure de Macdonald et al. J. Org. Chem. 1999, 64, 5166-5175. L'azote du composé 8e est ensuite déprotégé grâce à l'acide trifluoracétique pour donner le composé 8 utilisé tel quel dans la suite de la synthèse. Les étapes b), c) sont décrites plus en détails ci-après. 2a) étape a) : synthèse du composé 8d 0 BocHN OH O 8d A une solution de Boc-L-Ser-OH (0,89 g, 4,33 mmol) dans le N,N-diméthylformamide est ajouté de l'hydrure de sodium 60% 20 dans l'huile (0.38 g, 9,5 mmol) à 0°C. Après 15 minutes à la même température, une solution de 4- bromométhylbenzophénone (1.1 g, 4,00 mmol) dans le N,Ndiméthylformamide (20 mL) est additionné et la réaction est laissée sous agitation à température ambiante pendant toute 25 la nuit. Le milieu réactionnel est ensuite dilué avec de l'eau, acidifié à pH=2 et extrait avec de l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont ensuite lavées avec de l'eau, avec une solution saturée de NaC1, séchées sur MgSO4 anhydre et évaporées sous vide. Le brut est ensuite redissous dans l'éther diéthylique et la cyclohexylamine (0.396 g, 4 mmol) est ajouté au milieu. Le milieu réactionnel est agité pendant une heure et le précipité est filtré. Le précipité est ensuite dissous à nouveau dans le dichlorométhane, lavé avec une solution d'acide chlorhydrique 1N , avec de l'eau et une solution aqueuse de NaC1 saturé, séché sur MgSO4 anhydre et évaporé sous vide pour obtenir le produit attendu 8d (0.66 g, rendement 41%).

Analyse RMN 'H (300 MHz, CDC13, ppm) 10,6 (ls, 1 H), 7,83- 7,71 (m, 5 H), 7,60-7,22 (m, 4 H), 5,56 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 4,66-4,47 (m, 3 H), 4,03-3,82 (m, 1 H), 3,83-3,64 (m, 1 H), 1,41 (s, 9 H). 2b) étape b) : synthèse du composé 8e 0 BocHN NH2 0 8e A une solution du composé 8d (0.4 g, 1,0 mmol) dans le 1,4- dioxanne (10 mL) est ajoutée le dicarbonate de di-tertbutyle (224 mg, 1,0 mmol) et le carbonate d'ammonium (118 mg, 1,2 mmol). La solution est agitée toute la nuit. Le lendemain matin, le milieu réactionnel est évaporé sous pression réduite et ensuite purifié par chromatographie sur colonne Flash (gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle : 7030/3070, v/v) pour conduire au produit 8e (330 mg, rendement 83%). Analyse RMN 'H (300 MHz, CDC13, ppm) : â= 7,83-7,61 (m, 4 H), 7,61-7,22 (m, 5 H),6,64 (s, 1 H), 6,42 (s, 1 H), 5,56 (d, 1 H J = 6,6 Hz), 4,58 (s, 2 H) 4,43-4,25(m, 1 H), 3,94-3,77 (m, 1 H), 3,71-3,54 (m, Analyse RMN 13H (75 MHz, 142,3, 137,4, 136,9, 80,3, 77,4, 72,6, 70,2, 3) Synthèse du compose de formule (III) selon l'invention 1 H), 1,40 (s, 9 H); CDC13, ppm) : â= 196,4, 173,1, 155,6, 132,5, 130,2, 130,0, 128,3, 127,3, 53,8, 28,3 ; N3 0/10 (III).

Le composé de formule (III) est synthétisé selon le schéma réactionnel suivant.

BocHN,?1cH 5-51 * * a) b) d) Ho NHBoc NHBoc III-D 112 C) e) 0 f) Bac, N.° Boo 6 No H III-C 2 g) h) H IIIG III Le produit de départ 7 est l'acide (2R)-2-[(tert- butoxycarbonyl)amino]-3-(éthyldisulfanyl)propanoique qui est couplé au produit 8 en présence d'hexafluorophosphate de (benzotriazol-1-yloxy) tris(diméthylamino)phosphonium (BOP) et de N,N-diisopropyléthylamine dans l'acétonitrile à température ambiante pendant 3 heures et conduit à l'amide III-A avec un rendement de 73%. Le groupe Boc de l'amide III-A est ensuite déprotégé (étape b)) en présence d'acide trifluoroacétique dans le dichlorométhane pour donner le composé III-B avec un rendement quantitatif. La sous-unité III-C est synthétisé par couplage peptidique (étape c)) entre le composé 2 et 5 en présence du N,N'- dicyclohexylcarbodiimide (DCC) et du 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) dans un mélange acetonitrile / N,N-diméthylformamide avec un rendement de 61%. Le couplage peptidique des entités III-B et III-C (étape d)) est effectué en présence d'hexafluorophosphate de (benzotriazol-1- yloxy)tris(diméthylamino)phosphonium (BOP) et de N,Ndiisopropyléthylamine dans l'acétonitrile à température ambiante et conduit à l'amide III-D avec un rendement de 64%. Le groupe Boc de l'amide III-D est ensuite éliminé (étape e)) en présence d'acide trifluoroacétique dans le dichlorométhane pour donner le composé III-E avec un rendement quantitatif. Le tripeptide III-E est ensuite couplé à l'oxyamine 6 (étape f)) en présence de N,N'- dicyclohexylcarbodiimide (DCC), d'hydroxybenzotriazole (HOBt) et de N,N-diisopropyléthylamine dans l'acétonitrile pour donner le composé III-F avec un rendement de 42%. Le groupement thiol du pseudo-tétrapeptide III-F est ensuite déprotégé (étape g)) en présence de dithiothréitol (DTT) dans un mélange méthanol, diméthylsulfoxyde et une solution tampon d'acide borique(pH =8,9) pour obtenir le composé III-G avec un rendement de 70%. La dernière étape (étape h)) pour l'obtention du composé hétérotétrafonctionnel III est la déprotection du groupement oxyamine en présence d'acide trifluoroacétique dans le dichlorométhane avec un rendement quantitatif. Les étapes a) à h) sont décrites plus en détails ci -après. 4a) Synthèse du composé III-A 0 0 BocHN,)LN4NI-12 Fi S-S\ ° I III-A A une solution de l'acide (2R)-2-[(tert- butoxycarbonyl)amino]-3-(éthyldisulfanyl)propanoique 7 (300 mg, 1,07 mmol) et du composé 8 (443 mg, 1,07 mmol) dans l'acétonitrile (10 mL) à température ambiante est ajoutée la N,N-diisopropyléthylamine (0,38 mL, 2,15 mmol) et l' agent de couplage BOP (0,6 g, 1,17 mmol) et agitée pendant toute la nuit. Le mélange résultant est concentré sous vide et dilué avec de l'acétate d'éthyle (50 mL). La phase organique est lavée avec une solution aqueuse d'acide 5 citrique à 10% (3 x 20 mL), une solution saturée de NaHCO3 (3 x 20 mL), une solution saturée de NaC1 (20 mL), séchée (sur Na2SO4 anhydre) et concentrée sous vide. Le milieu réactionnel est ensuite purifié par chromatographie sur colonne Flash (gel de silice, cyclohexane/acétate 10 d'éthyle : 30/70, v/v) pour conduire au produit III-A (442 mg, rendement 73%). Analyse RMN 'H (300 MHz, CDC13, ppm): â= 7,83-7,61 (d, 4 H, J = 8,1 Hz), 7,53-7,25 (m, 5 H), 7,08 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 6,86 (ls, 1 H), 5,50 (ls, 1 H), 5,43 (ls, 1 H), 4,66-4,46 15 (m, 3 H), 4,33 (q, 1 H, J = 6,4 Hz), 4,13-3,99 (m, 1 H), 3,64-3,52 (m, 1 H), 3,10-2,86 (m, 2 H), 2,65 (q, 2 H, J = 7,2 Hz), 1,34 (s, 9 H), 1,25 (t, 3 H, J = 7,2 Hz) ; Analyse RMN 13H (75 MHz, CDC13, ppm) : â= 196,3, 172,0, 170,3, 156,1, 142,2, 137,5, 137,0, 132,5, 130,4, 130,0, 128,3, 20 127,2, 81,4, 77,2, 72,8, 68,4, 54,7, 52,8, 39,0, 32,3, 28,2, 14,2 ; RP-HPLC dans les conditions du système X1: tR = 22.9 min, pureté = 90% (détection à 260 nm). 25 4b) Synthèse du composé III-B A une solution du composé III-A (290 mg, 0,5 mmol) dans le dichlorométhane (10 mL) est ajouté l'acide trifluoroacétique (1 mL) et agitée pendant 3 heures. Le 30 milieu réactionnel est évaporé sous pression réduite pour obtenir le sel de trifluoroacétate du composé III-B (300 mg, rendement quantitatif)utilisé tel quel dans la réaction suivante. 4c) Synthèse du composé III-C NHBoc ec Les composés 2 (189 mg, 1,87 mmol) et la H-L-Lys(Boc-OH 5 (500 mg, 2,03 mmol) sont dissous dans un mélange d'acétonitrile (20 mL) et de N,N-diméthylformamide (1 mL) et ensuite ajoutée le HOBt (274 mg, 2,02 mmol) et le DCC (418 mg, 2,02 mmol). Le milieu réactionnel est ensuite agité toute la nuit. Le lendemain, la N,N'-dicyclohexylurée est filtrée et le filtrat est évaporé sous pression réduite. Le milieu réactionnel est purifié par chromatographie sur colonne Flash (gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 500/50100 puis CH2C12/MeOH 90/10, v/v) pour conduire à l'amide III-C (500 mg, rendement 61%). 4d) Synthèse du composé III-D Les composés III-B (300 mg, 0,52 mmol) et III-C (200 mg, 0,48 mmol) sont dissous dans l'acétonitrile (10 mL). A la solution, la N,N-diisopropyléthylamine (180 pL, 1,02 mmol) 25 puis l'hexafluorophosphate de (benzotriazol-1-yloxy)tris(diméthylamino)phosphonium (262 mg, 0.59 mmol) sont ajoutés et le milieu réactionnel est agité durant toute la nuit. Le milieu est ensuite concentré sous vide et dilué avec de l'acétate d'éthyle (20 mL). La phase organique est lavée avec une solution aqueuse d'acide citrique à 10% (3 x 10 mL), une solution saturée de NaHCO3 (3 x 10 mL), une solution saturée de NaC1 (10 mL), séchée (sur Na2SO4 anhydre) et concentrée sous vide. Le milieu réactionnel est purifié par chromatographie sur colonne Flash (gel de silice, AcOEt 100%) pour conduire à l'amide III-D (280 mg, rendement 64%) Analyse RMN 'H (300 MHz, CDC13, ppm) : â= 7,88-7,66 (m, 5 H), 7,64-7,28 (m, 7 H), 6,80 (ls, 1 H), 5,68 (ls, 1 H), 4,95 (ls, 1 H), 4,78-4,54 (m, 4 H), 4,41 (s, 2 H) 4,32-4,23 (m, 1 H), 4,07-3,93 (m, 3 H), 3,80-3,58 (m,7 H), 3,46-3,29 (t, 2 H, J = 4,8 Hz), 3,27 (q, 2H, J = 6,6 Hz), 3,16-3,08 (m, 2 H), 2,70 (q, 2 H, J = 7,2 Hz), 2,03-1,60 (m, 4 H), 1,65- 1,35 (m, 20 H),1,30 (t, 3 H, J = 7,2 Hz) ; Analyse RMN 13H (75 MHz, CDC13, ppm) : â= 196,4, 172,5, 171,9, 171,3, 167,7, 157,8, 150,4, 142,6, 136,9, 132,5, 130,3, 130,0, 128,3, 127,1, 85,2, 72,6, 70,9, 70,2, 70,1, 70,0, 69,5, 53,9, 53,8, 53,2, 50,4, 38,5, 38,4, 32,3, 30,6, 29,0, 28,1, 28,0, 23,0 ; RP-HPLC dans les conditions du système X1: tR = 23,1 min, pureté >95% (détection à 260 nm). Analyse de spectrométrie de masse basse résolution (Electrospray, mode positif): m/z = 860,93 [M + H]+, 878.00 [M + H2O]'+ (cluster d'eau formé au cours de l'ionisation) et 883.20 [M + Na],+ masse calculée pour C391-156N80l0S2 860,36. 4e) Synthèse du composé III-E N3,,,-.0-......'0 A une solution du composé III-D (150 mg, 0,17 mmol) dans le dichlorométhane (2 mL) est ajouté l'acide trifluoroacétique (0,5 mL) et agitée pendant 3 heures. Le milieu réactionnel est évaporé sous pression réduite pour obtenir le sel de 5 trifluoroacétate du composé III-E (155 mg, rendement quantitatif)utilisé tel quel dans la réaction suivante. 4f) Synthèse du composé III-F Boc.N.0,)NH Boc N3 0 0 N Hfy NH2 0 0 III-F H - H s_s 0 1 0 10 A l'oxyamine 6 (11 mg, 0,04 mmol) dissous dans l'acétonitrile (3 mL) est ajoutée successivement l'amine III-E (34 mg, 0,04 mmol), le HOBt (23,5 mg, 0,17 mmol), le DCC (30,5 mg, 0,15 mmol) et enfin la N,N- diisopropyléthylamine (7 pL, 0.04 mmol). Le mélange 15 résultant est agitée à température ambiante pendant 3 heures puis concentré sous vide. Le brut est purifié par RP-HPLC semi préparative dans les conditions du système Y1. Les fractions contenant le produit sont lyophilisées pour conduire au produit III-F (17 mg, rendement 42%). 20 Analyse RMN 'H (300 MHz, CDC13, ppm) : â= 7,88-7,66 (m, 5 H), 7,64-7,28 (m, 7 H), 6,80 (ls, 1 H), 5,68 (ls, 1 H), 4,95 (ls, 1 H), 4,78-4,54 (m, 4 H), 4,41 (s, 2 H), 4,32-4,23 (m, 1 H), 4,07-3,93 (m, 3 H), 3,80-3,58 (m, 7 H), 3,46-3,29 (t, 2 H), 3,27 (q, 2 H, J = 6,6 Hz), 3,16-3,08 (m, 2 H), 2,70 25 (q, 2 H, J = 7,2 Hz), 2,03-1,60 (m, 4 H), 1,65-1,35 (m, 20 H), 1,30 (t, 3 H, J = 7,2 Hz); Analyse RMN 13H (75 MHz, CDC13, ppm) : â= 196,4, 172,5, 171,9, 171,3, 167,7, 157,8, 150,4, 142,6, 136,9, 132,5, 130,3, 130,0, 128,3, 127,1, 85,2, 72,6, 70,9, 70,2, 70,1, 70,0, 69,5, 53,9, 53,8, 53,2, 50,4, 38,5, 38,4, 32,3, 30,6, 29,0, 28,1, 28,0, 23,0; RP-HPLC dans les conditions du système X1: tR = 25,2 min, pureté >95% (détection à 260 nm); Analyse de spectrométrie de masse basse résolution (Electrospray, mode positif): m/z = 1034,87 [M + H]+, masse calculée pour C46H7N9014S2 : 1033,42. 4g) Synthèse du composé III-G o Boc.N °,,....11-NH Boc N3 ,e,..ce,...'0,,,eLLN N '..11...Nf...ir, NH2 H 0 H - H ... 0 sH III-G A une solution du composé III-F (30 mg, 29 pmol) dans un mélange Me0H (1 mL), tampon borate (4 mL) et DMSO (1 mL) est ajouté du DTT (45 mg, 0,3 mmol). Le milieu réactionnel est agitée pendant 3 heures. Le milieu réactionnel est alors directement purifié par RP-HPLC semi-préparative dans les conditions du système Y2. Les fractions contenant le produit sont lyophilisées pour conduire au produit III-G (20 mg, rendement 70%). Remarque : il est à noter que l'on récupère aussi le produit déprotégé (7 mg, rendement : 24%) ne contenant qu'un groupement Boc sur l'oxyamine, pouvant être aussi utilisé dans l'étape h.

RP-HPLC dans les conditions du système X1: tR = 22,1 min, pureté = 90% (détection à 260 nm) ; Analyse de spectrométrie de masse basse résolution (Electrospray, mode positif): m/z = 996,73 [M + Na],+ masse calculée pour C44H63N9014S2 : 973,42. o30 75 4h) Synthèse du composé III 0 . H2N0').L NH 0 N3 N N~N.,rNH2 0 H 0 HH 0 -SH III Le composé III-H (7 mg, 8 pmol) est dissous dans un mélange d'acide trifluoroacétique (0,5 mL) et de dichlorométhane (1 mL) puis agité durant 3 heures. Le milieu réactionnel est ensuite directement purifié par RPHPLC semi-préparative dans les conditions du système Y3. Les fractions contenant le produit sont lyophilisées pour conduire au produit III.

RP-HPLC dans les conditions du système X1: tR = 20,7 min, pureté = 90%. Analyse de spectrométrie de masse basse résolution (Electrospray, mode positif): m/z = 774,13 [M + H]+, masse calculée pour C34H47N9010S : 773,32.

Conditions utilisées pour les analyses et les purifications effectuées par RP-HPLC Système Xl: RP-HPLC (colonne Thermo Hypersil GOLD CH, 5 pm, 4.6 X 150 mm) avec comme éluants CH3CN et acide trifluoroacétique aqueux à 0,1% (TFA aq., 0,1%, v/v, pH 2,2) [80% TFA (5 min) suivi d'un gradient linéaire de 0 à 100% (40 min) de CH3CN] à un débit de 1,0 mL/min. Double détection UV à 220 et 260 nm.

Système Yl: RP-HPLC semi-préparative (colonne Thermo Hypersil GOLD C18, 5 pm, 21,2 X 250 mm) avec comme éluants CH3CN et TFA aq. (0,1%, v/v, pH 2,2) [80% TFA (5 min) suivi d'un gradient linéaire de 20 à 100% (40 min) de CH3CN] à un débit de 16 mL/min. Double détection UV à 265 et 290 nm. Système Y2: RP-HPLC semi-préparative (colonne Thermo Hypersil GOLD C18, 5 pm, 21,2 X 250 mm) avec comme éluants CH3CN et acide acétique (AcOH) aq. (0,1%, v/v) [80% AcOH (5 min) suivi d'un gradient linéaire de 20 à 100% (40 min) de CH3CN] à un débit de 14 mL/min. Double détection UV à 260 et 295 nm. Système Y3: idem au système Y2 avec un débit de 16 mL/min

Claims (14)

1. REVENDICATIONS1. Composé caractérisé en ce qu'il répond à la formule générale (I) suivante : Fr-LEA-L-3 F3 F4 ( I ) dans laquelle : - A représente un groupe central ; - Ll, L2, L3, L4 sont identiques ou différents et représentent chacun indépendamment une chaîne hydrocarbonée pouvant être interrompue par une ou plusieurs fonctions choisies parmi amide (-NRCO-), carbamide (-NRCONR-), sulfonamide (-SO2NR-), éther (-0-), thioéther (-S-), disulfure (-S-S-), sulfone (-SO2-), ester (-000-), thioamide (-CS-NR-), thioester (-CO-S-), carbamate (-NH-COO-), carbonate (-O-CO-O-), thiocarbamate (-O-CS-NR-), thiocarbonate (-S-CO-O- ou -O-CS-O-), xanthate (-O-CS-S-), phosphate (-0-PO(OR)-0-), phosphonate (-PO(OR)-0-) et leurs mélanges, ladite chaîne hydrocarbonée pouvant également comprendre un cycloalkyle, un hétérocycloalkyle, un aryle, un hétéroaryle et leurs mélanges; - F1 représente un groupe comprenant un azoture (-N3), isonitrile (-NC), borane (-BR'2), trifluoroborate de potassium (-BF3K), acide boronique (-B(OH)2) ou boronate (-B(OR'')2) - F2 représente un groupe comprenant une amine (-NR2), oxyamine (-0-NR2), hydrazine (-NR-NR2), ou hydrazide (-CO-NR-NR2) ; - F3 représente un groupe comprenant au moins une liaison carbone-carbone insaturée ;- F4 représente un groupe comprenant un thiol (-SH), sélénol (-SeH), alcool (-OH), diol vicinal (-C(OH)R-C(OH)R2), béta-aminoalcool (-C(NR2)R-C(OH)R2 ou -C(OH)R-C(NR2)R2), borane (-BRt2), trifluoroborate de potassium (-BF3K), acide boronique (-B(OH)2), boronate (-B(OR")2) ou disulfure (-S-S-R) ; où chaque R est indépendamment choisi parmi un atome d'hydrogène, un groupe alkyle en C1-C6 ou un groupe aryle ; où chaque R' est indépendamment un alkyle en C1-C6 ou un 10 cycloalkyle ou bien les groupes R' forment ensemble un bicyclononane ; et où chaque R" est indépendamment un alkyle en C1-C6 ou bien les groupes R" forment ensemble avec les atomes d'oxygène et de bore un cycle à 5 ou 6 chaînons éventuellement 15 substitué par un ou plusieurs groupes alkyl en C1-C2 ou bien les groupes R" forment ensemble un cycle phénylène ; à condition que : - Fl, F2 ,F3 et F4 sont différents les uns des autres ; - lorsque F1 représente un groupe comprenant un borane, F4 20 ne représente pas un groupe comprenant un trifluoroborate de potassium ; - lorsque F1 représente un groupe comprenant un trifluoroborate de potassium, F4 ne représente pas un groupe comprenant un borane ; 25 - lorsque F1 représente un groupe comprenant un acide boronique, F4 ne représente pas un groupe comprenant un boronate, diol vicinal ni béta-aminoalcool ; - lorsque F1 représente un groupe comprenant un boronate, F4 ne représente pas un groupe comprenant un acide 30 boronique, diol vicinal ni béta-aminoalcool ; - lorsque F1 représente un groupe comprenant un azoture, F3 ne représente pas un groupe comprenant un cycloctyne ;- lorsque F1 représente un groupe comprenant un isonitrile, F3 ne représente pas un norbornène ni un cycloctène.
2. 2. Composé selon la revendication 1 caractérisé en ce que le groupe A comprend un motif aromatique, un motif dérivé 5 d'un acide aminé, un motif dérivé d'un saccharide ou d'un sucre-alcool, et leurs mélanges.
3. 3. Composé selon la revendication 1 ou 2 caractérisé en ce que les bras espaceurs LI, L2, L3 et L4 sont indépendamment choisis parmi un radical alkanediyl, une chaîne 10 (poly)(éthylène glycol) et leurs mélanges.
4. 4. Composé selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que F3 représente un groupe comprenant une double liaison carbone-carbone, deux doubles liaisons carbone-carbone conjuguées, une triple liaison 15 carbone-carbone, un oxazole, une benzophénone, une anthraquinone ou un phényle substitué par un groupe diazirine.
5. 5. Composé selon la revendication 4 caractérisé en ce que le groupe comprenant une double liaison carbone-carbone est 20 un alcène terminal, un éther allylique ou un thioéther vinylique.
6. 6. Composé selon la revendication 4 caractérisé en ce que le groupe comprenant une double liaison carbone-carbone est un norbonène ou un cyclooctène. 25
7. 7. Composé selon la revendication 4 caractérisé en ce que le groupe comprenant une triple liaison carbone-carbone est un alcyne vrai ou un cyclooctyne.
8. 8. Composé selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que : 30 - A comprend un motif dérivé d'un acide aminé ;- F1 représente un azoture ; - F2 représente une oxyamine ; - F3 représente un norbonène ; - F4 représente un thiol.
9. 9. Composé selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'il répond à la formule (II) suivante : NH2 O .....--...,.....'0....'..'---, N 0 H N3,,,,,,,........."\o/'.,......'...0
10. 10. Utilisation du composé de formule (I) tel que défini 10 dans l'une quelconque des revendications 1 à 9 pour : - la préparation d'une cassette de transfert d'énergie ou d'une cascade FRET ; - la préparation d'une sonde multimodale pour l'imagerie médicale ; 15 - la préparation d'une sonde permettant de détecter simultanément plusieurs activités enzymatiques ; - la préparation d'un système théranostique ; - la préparation d'une biopuce capable de détecter un analyte ; 20 - la vectorisation d'un principe actif.
11. 11. Utilisation selon la revendication 10 caractérisée en ce que l'on fait réagir : - le groupe F1 du composé de formule (I) avec un partenaire M1 ; 25 - le groupe F2 du composé de formule (I) avec un partenaire M2 ;- le groupe F3 du composé de formule (I) avec un partenaire M3 ; - le groupe F4 du composé de formule (I) avec un partenaire M4 ; dans laquelle M1, M2, M3 et M4 sont différents les uns des autres ; à condition que : - si le groupe F1 comprend un azoture et le groupe F3 comprend un alcyne vrai, on réalise la réaction entre le groupe F1 et le partenaire M1 avant la réaction entre le groupe F3 et le partenaire M3 ; - si le groupe F1 comprend un borane ou un trifluoroborate de potassium et le groupe F4 comprend un acide boronique ou un boronate, on réalise la réaction entre le groupe F4 et le partenaire M4 avant la réaction entre le groupe F1 et le partenaire M1 ; - si le groupe F4 comprend un borane ou un trifluoroborate de potassium et le groupe F1 comprend un acide boronique ou un boronate, on réalise la réaction entre le groupe F1 et le partenaire M1 avant la réaction entre le groupe F4 et le partenaire M4.
12. 12. Utilisation selon la revendication 11, caractérisée en ce que M1, M2, M3 et M4 sont indépendamment choisis parmi une molécule d'intérêt biologique, un marqueur, un support et 25 leurs mélanges.
13. 13. Utilisation selon la revendication 11 ou 12, caractérisée en ce que les réactions entre le composé de formule (I) et les partenaires M1, M2, M3 et M4 sont réalisées sans aucune étape de purification intermédiaire. 30
14. 14. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 11 à 13 caractérisée en ce que les réactions entre le composé de formule (I) et les partenaires M1, M2, M3 et M4sont réalisées sans aucune étape de protection et/ou déprotection intermédiaire.