FR2984719A1

FR2984719A1 - Non-invasive method for analyzing progression of cicatrization of wound of e.g. mouse, involves fixing sampling device on circumference of skin around wound, making macroscopic observation of wound and/or exudate and removing exudate

Info

Publication number: FR2984719A1
Application number: FR1162344A
Authority: FR
Inventors: Christophe Dardenne; Bernard Pipy; Agnes Coste; Marielle Bouschbacher; Christelle Laurensou
Original assignee: Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM; Laboratoires Urgo SAS; Universite Toulouse III Paul Sabatier; Societe de Developpement et de Recherche Industrielle SAS
Current assignee: Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM; Universite Toulouse III Paul Sabatier
Priority date: 2011-12-22
Filing date: 2011-12-22
Publication date: 2013-06-28
Anticipated expiration: 2031-12-22
Also published as: FR2984719B1

Abstract

The method involves creating wound on animal skin by mechanical, chemical, thermical and/or by radiation process. A non-invasive sampling device (1) is fixed on circumference of the skin around the wound, using an interface. A macroscopic observation is made for the wound and/or exudate. The exudate contained in the sampling device is removed and the exudate is analyzed. Cellular metabolites and/or micro-organisms contained in the exudate are determined. Physicochemical parameters of the wound or the exudate are determined.

Description

METHODE D'ANALYSE DE LA PROGRESSION DE LA CICATRISATION D'UNE PLAIE A DES NIVEAUX MICROSCOPIQUES ET MACROSCOPIQUES. Domaine d'application : La présente invention concerne une méthode d'analyse de la 5 progression de la cicatrisation d'une plaie en temps réel grâce à un dispositif médical, non invasif et adapté, qui protège la plaie et permet d'observer macroscopiquement la progression de la cicatrisation d'une plaie ainsi que de recueillir les exsudats de la plaie afin de réaliser un suivi cellulaire, mais aussi des 10 analyses biochimiques et moléculaires des métabolites et des microorganismes contenus dans lesdits exsudats. Art Antérieur : La cicatrisation d'une plaie est un processus physiopathologique naturel, les tissus humains et animaux étant 15 capables de réparer des lésions localisées par des processus de réparation et de régénération qui leur sont propres. La rapidité et la qualité de la cicatrisation d'une plaie dépendent de l'état général de l'organisme atteint, de l'étiologie de la plaie, de l'état et de la localisation de la plaie, et de la 20 survenue ou non d'une infection, ainsi que des facteurs génétiques prédisposant ou non à des troubles de la cicatrisation. La cicatrisation naturelle d'une plaie se déroule principalement selon trois phases successives, chacune de ces phases étant caractérisée par des activités cellulaires 25 spécifiques qui font progresser le processus de réparation selon des séquences chronologiques précises : la phase inflammatoire, la phase de granulation (ou phase proliférative), et la phase de maturation, donnant l'aspect définitif de la cicatrice. La première phase, la phase inflammatoire, débute dès la 30 rupture des vaisseaux sanguins qui déclenche la formation d'un caillot (coagulation du sang) principalement composé de fibrine et de fibronectine, et qui va constituer une matrice provisoire. Cette matrice comble en partie la lésion et va permettre la migration au sein de la zone lésée des cellules inflammatoires 35 recrutées pour assurer la détersion de la plaie. Les plaquettes présentes vont également libérer des facteurs (par exemple des cytokines, des facteurs de croissance) permettant le recrutement de cellules impliquées dans le processus cicatriciel. Cette phase se caractérise par l'infiltration et l'activation sur le site de la lésion, de nombreuses cellules inflammatoires (tels les polynucléaires neutrophiles), mais aussi des cellules assurant le nettoyage de la plaie ou détersion (tels les macrophages). La seconde phase correspond au développement du tissu de granulation. On observe d'abord une colonisation de la blessure par prolifération des fibroblastes. Puis, la migration des cellules endothéliales à partir des vaisseaux sains va permettre la néovascularisation, ou angiogenèse, du tissu lésé. Dans le tissu de granulation, les fibroblastes sont activés et vont se différencier en myofibroblastes présentant des propriétés contractiles importantes, générées par les microfilaments d'actine, permettant la contraction de la plaie. Ces microfilaments sont exprimés par une protéine : l'actine oc-musculaire lisse. Ces myofibroblastes jouent donc un rôle majeur dans la formation et la maturation du tissu de granulation qui va conduire à la cicatrisation de la lésion. Il y a ensuite migration des kératinocytes et reconstruction de l'épiderme. METHOD OF ANALYZING THE PROGRESSION OF WOUND HEALING AT MICROSCOPIC AND MACROSCOPIC LEVELS. FIELD OF INVENTION: The present invention relates to a method of analyzing the progress of wound healing in real time by means of a non-invasive and adapted medical device which protects the wound and enables macroscopic observation of the wound. progression of healing of a wound as well as collecting the exudates of the wound in order to carry out cell monitoring, but also biochemical and molecular analyzes of the metabolites and microorganisms contained in said exudates. Background Art: Wound healing is a natural pathophysiological process, with human and animal tissues capable of repairing localized lesions by their own repair and regeneration processes. The speed and quality of healing of a wound depends on the general condition of the afflicted organism, the etiology of the wound, the condition and location of the wound, and the occurrence or onset of the wound. not an infection, as well as genetic factors predisposing or not to disorders of healing. The natural healing of a wound takes place mainly in three successive phases, each of these phases being characterized by specific cellular activities which advance the repair process according to precise chronological sequences: the inflammatory phase, the granulation phase (or proliferative phase), and the maturation phase, giving the final appearance of the scar. The first phase, the inflammatory phase, begins with the rupture of the blood vessels which triggers the formation of a clot (blood coagulation) mainly composed of fibrin and fibronectin, and which will constitute a temporary matrix. This matrix partially fills the lesion and will allow the migration within the lesion area of the inflammatory cells 35 recruited to ensure the debridement of the wound. The platelets present will also release factors (for example cytokines, growth factors) allowing the recruitment of cells involved in the scar process. This phase is characterized by infiltration and activation on the site of the lesion, numerous inflammatory cells (such as neutrophils), but also cells ensuring the cleaning of the wound or debridement (such as macrophages). The second phase corresponds to the development of the granulation tissue. We first observe a colonization of the wound by proliferation of fibroblasts. Then, migration of endothelial cells from healthy vessels will allow neovascularization, or angiogenesis, of the injured tissue. In the granulation tissue, fibroblasts are activated and will differentiate into myofibroblasts with significant contractile properties, generated by actin microfilaments, allowing contraction of the wound. These microfilaments are expressed by a protein: the smooth oc-muscular actin. These myofibroblasts therefore play a major role in the formation and maturation of the granulation tissue that will lead to the healing of the lesion. There is then migration of keratinocytes and reconstruction of the epidermis.

Cette phase est initiée par une diminution de l'état inflammatoire de la lésion s'accompagnant d'une apoptose des cellules inflammatoires. La troisième phase du processus est une étape principalement de maturation visant à reconstruire un tissu fonctionnel le plus identique possible au tissu d'origine. Le tissu de granulation précédemment formé subit donc un remodelage. Une partie de la matrice extracellulaire est digérée par des protéases (essentiellement des métallo-protéases matricielles et des élastases), et on observe une réorganisation progressive de la matrice extracellulaire. Progressivement, le collagène de type III, majoritaire dans le tissu de granulation, est remplacé par le collagène de type I, principal composant matriciel du derme. A la fin de la phase de maturation, les fibroblastes, myofibroblastes et cellules vasculaires voient leur prolifération et/ou leur activité réduites. Puis, les cellules excédentaires meurent par apoptose. Parallèlement au remodelage de la matrice extracellulaire et à l'apoptose des cellules excédentaires. La phase inflammatoire est une phase essentielle de la cicatrisation et doit être transitoire. Dans certains cas, elle peut être prolongée par la présence de certains agents infectieux comme Staphylococcus aureus ou Pseudomonas aeruginosa ou par une pathologie préexistante comme le diabète, une déficience immunitaire ou encore une insuffisance veineuse. La résolution de l'inflammation est un point critique qui conditionne l'amorçage de la réparation tissulaire. Une perturbation de cette phase va engendrer un prolongement anormal de la phase inflammatoire et aboutir à la chronicité de la lésion en retardant la réparation tissulaire. La résolution de l'inflammation est un phénomène dynamique qui implique l'apoptose des cellules inflammatoires, leur élimination et l'apparition de médiateurs anti-inflammatoires, chimiotactiques et angiogéniques. Une manière d'évaluer le bon déroulement de cette période critique, qu'est la phase de résolution, est d'analyser les exsudats provenant de la plaie (cellules, médiateurs et métabolites). En effet, la chronicité inflammatoire se traduit par un afflux plus important de cellules inflammatoires, une production excessive de nombreuses cytokines et chimiokines inflammatoires et de protéases qui dégradent la matrice cellulaire. Inversement la phase de résolution implique l'apparition d'un certain type de macrophages responsables de la phagocytose des cellules inflammatoires apoptotiques. Ces macrophages sont aussi impliqués dans la production de médiateurs favorisant la phase de granulation ainsi que la réparation tissulaire. L'analyse de l'exsudat permettra au médecin d'évaluer la phase inflammatoire et sa résolution, et permettra ainsi de choisir de traiter la plaie par un agent thérapeutique adapté de manière à favoriser une meilleure cicatrisation. Traditionnellement, les plaies sont recouvertes par un pansement pour empêcher une contamination par des agents infectieux présents dans l'environnement, mais également pour maintenir la plaie dans un milieu humide favorisant la cicatrisation. Cependant, ce système de protection ne permet pas d'analyser les exsudats et de visualiser la cicatrisation en temps réel. De plus, l'exsudat s'accumule dans le pansement et sature le milieu absorbant du pansement. Le pansement doit donc être changé régulièrement pour éviter la macération de la plaie, ce qui implique un risque de contamination de la plaie qui est exposée momentanément à l'air libre. De plus, les pansements peuvent également adhérer, même faiblement à la plaie, et induire ainsi des lésions à la plaie lors de leur retrait. Ces nouvelles agressions engendrent une poursuite de l'inflammation, qui a pour conséquence de prolonger la phase inflammatoire et donc de modifier de façon substantielle la cinétique de cicatrisation. Des chambres implantables ont été mises au point pour étudier la cicatrisation de plaies du derme sur des animaux de laboratoires tels que la souris ou le porc. Cependant, ces chambres implantables sont insérées en partie sous la peau de l'animal et sont maintenues en place par des points de suture. Cette méthode est donc invasive, c'est à dire qu'elle présente comme inconvénient majeur de nécessiter un acte chirurgical d'implantation de la chambre en partie sous la peau de l'animal et risque donc de provoquer une réaction inflammatoire chez le sujet en question, en créant des agressions tissulaires lors de son implantation. Ces agressions tissulaires auront des conséquences néfastes sur le bon déroulement de la cicatrisation de l'animal. De plus, elles ont essentiellement été mises au point pour modéliser les mécanismes de cicatrisation chez l'animal comme par exemple, une souris ou le porc. Ainsi, avec de telles chambres invasives, il est impossible de réaliser un suivi visuel, cellulaire, biochimique et moléculaire fiable des plaies notamment durant les premiers jours qui suivent l'implantation de ces chambres. This phase is initiated by a decrease in the inflammatory state of the lesion accompanied by apoptosis of the inflammatory cells. The third phase of the process is a mainly maturation stage aimed at reconstructing a functional tissue that is as identical as possible to the original tissue. The previously formed granulation tissue is therefore remodeled. Part of the extracellular matrix is digested by proteases (essentially matrix metalloproteases and elastases), and progressive reorganization of the extracellular matrix is observed. Gradually, type III collagen, predominant in the granulation tissue, is replaced by type I collagen, the main matrix component of the dermis. At the end of the maturation phase, the fibroblasts, myofibroblasts and vascular cells see their proliferation and / or their activity reduced. Then, the excess cells die by apoptosis. Parallel to the remodeling of the extracellular matrix and to the apoptosis of the surplus cells. The inflammatory phase is an essential phase of healing and must be transient. In some cases, it may be prolonged by the presence of certain infectious agents such as Staphylococcus aureus or Pseudomonas aeruginosa or by a pre-existing pathology such as diabetes, an immune deficiency or even venous insufficiency. The resolution of inflammation is a critical point that conditions the initiation of tissue repair. Disturbance of this phase will result in an abnormal prolongation of the inflammatory phase and result in the chronicity of the lesion by delaying tissue repair. The resolution of inflammation is a dynamic phenomenon that involves the apoptosis of inflammatory cells, their elimination and the appearance of anti-inflammatory, chemotactic and angiogenic mediators. One way to evaluate the success of this critical period, the resolution phase, is to analyze exudates from the wound (cells, mediators and metabolites). Indeed, inflammatory chronicity results in a larger influx of inflammatory cells, an excessive production of many cytokines and inflammatory chemokines and proteases that degrade the cell matrix. Conversely, the resolution phase involves the appearance of a certain type of macrophages responsible for the phagocytosis of apoptotic inflammatory cells. These macrophages are also involved in the production of mediators favoring the granulation phase as well as the tissue repair. The analysis of the exudate will allow the doctor to evaluate the inflammatory phase and its resolution, and thus allow to choose to treat the wound with a suitable therapeutic agent so as to promote better healing. Traditionally, wounds are covered by a dressing to prevent contamination by infectious agents in the environment, but also to keep the wound in a moist environment that promotes healing. However, this protection system does not allow analysis of exudates and visualization of healing in real time. In addition, the exudate accumulates in the dressing and saturates the absorbent medium of the dressing. The dressing must therefore be changed regularly to prevent maceration of the wound, which implies a risk of contamination of the wound that is temporarily exposed to the open air. In addition, the dressings may also adhere, even weakly to the wound, and thus induce lesions to the wound during their removal. These new aggressions cause a continuation of the inflammation, which has the consequence of prolonging the inflammatory phase and thus substantially modifying the kinetics of healing. Implantable chambers have been developed to study the healing of dermal wounds in laboratory animals such as mice and pigs. However, these implantable chambers are inserted partially under the skin of the animal and are held in place by stitches. This method is therefore invasive, ie it has the major disadvantage of requiring a surgical procedure for implantation of the chamber partly under the skin of the animal and may therefore cause an inflammatory reaction in the subject in question. question, by creating tissue aggression during implantation. These tissue attacks will have harmful consequences on the good progress of the healing of the animal. In addition, they have essentially been developed to model the mechanisms of healing in animals such as, for example, a mouse or pig. Thus, with such invasive chambers, it is impossible to perform reliable visual, cellular, biochemical and molecular monitoring of wounds, especially during the first days following the implantation of these chambers.

Il existe donc un réel besoin en une méthode non-invasive de prélèvement d'exsudats purs à des fins d'analyse en temps réel utilisant un dispositif non invasif et permettant de visualiser la progression de la cicatrisation sans être nécessairement obligé d'ouvrir ledit dispositif, ni de le retirer. There is therefore a real need for a non-invasive method for taking pure exudates for real-time analysis using a non-invasive device that can visualize the progress of healing without necessarily having to open the device. or remove it.

Invention : Un premier objet de la présente invention est une méthode non-invasive d'analyse de la progression de la cicatrisation d'une plaie qui met en oeuvre un dispositif tel que décrit dans la demande de brevet N°FR 11 62295 déposée le 22 décembre 2011. Invention: A first object of the present invention is a non-invasive method for analyzing the progression of wound healing which uses a device as described in patent application No. FR 11 62295 filed on the 22 December 2011.

Ledit dispositif comprend notamment: une chambre ayant une paroi latérale, une extrémité inférieure ouverte et une extrémité supérieure, une ouverture d'accès étant disposée sur l'extrémité supérieure et/ou sur la paroi latérale de ladite chambre, ledit dispositif étant destiné à être en contact avec la peau et à circonscrire la plaie lors de son utilisation par l'intermédiaire d'une interface. Said device comprises in particular: a chamber having a side wall, an open bottom end and an upper end, an access opening being disposed on the upper end and / or on the side wall of said chamber, said device being intended to be in contact with the skin and circumscribing the wound during its use via an interface.

Préférentiellement, ledit dispositif comprend un moyen de fermeture amovible de la chambre, destiné à être disposé en position fermée, sur l'ouverture d'accès de la chambre. Cette méthode comprend les étapes suivantes: - fixer le dispositif non invasif sur le pourtour de la plaie ; - faire une observation macroscopique de la plaie et/ou de l'exsudat ; et/ou - prélever l'exsudat contenu dans ledit dispositif et analyser ledit exsudat. Preferably, said device comprises a removable closure means of the chamber, intended to be arranged in closed position, on the access opening of the chamber. This method comprises the following steps: - fixing the non-invasive device around the wound; - make a macroscopic observation of the wound and / or exudate; and / or - taking the exudate contained in said device and analyzing said exudate.

Dans la première étape de mise en oeuvre de cette méthode, le dispositif de prélèvement est positionné de manière à circonscrire la plaie, ainsi ledit dispositif est fixé sur la peau saine autour de la plaie, par exemple grâce à une interface qui est adhésive. L'interface adhésive peut consister en un adhésif qui est appliqué soit directement sur le dispositif juste avant de le positionner autour de la plaie, soit sur une jupe en matériau souple conformable, ou bien le dispositif ou la jupe peuvent être pré-enduits par un adhésif lors de leur fabrication. Dans ce cas, l'interface adhésive est avantageusement protégée par une barrière protectrice qui devra être enlevée avant de positionner le dispositif autour de la plaie. Une fois le dispositif positionné au-dessus de la plaie, il convient d'exercer une pression suffisante sur la partie supérieure du dispositif jusqu'à la prise complète de l'adhésif et 30 à la fixation totale du dispositif autour de la plaie. Lors de l'étape de positionnement, et afin d'améliorer la tenue du dispositif autour de la plaie, on peut éventuellement enduire le pourtour de l'interface du dispositif ainsi que la peau au voisinage de la plaie et à proximité du dispositif par de 35 l'adhésif. Afin de faciliter l'étape de positionnement, il est préférable de visualiser la plaie afin de placer le dispositif sur la peau saine autour de la plaie. Pour cela, on peut notamment retirer le moyen de fermeture du dispositif avant de positionner ce dernier. En effet, le dispositif de prélèvement utilisé dans la méthode selon l'invention comprend un moyen de fermeture qui permet d'accéder facilement à la plaie sans avoir à retirer le dispositif. Ledit moyen de fermeture est fixé sur la partie supérieure de la chambre du dispositif ou sur la paroi latérale de la chambre du dispositif, notamment par un pas de vis, un clip, une goupille, un moyen de sertissage et/ou un système de baïonnette. Une fois que le dispositif est fixé sur la peau autour de la plaie par son interface adhésive, le moyen de fermeture du dispositif est replacé sur la chambre dudit dispositif, par exemple en le vissant ou à l'aide d'une goupille insérée dans des orifices adaptés placés sur le moyen de fermeture et sur la chambre du dispositif. In the first step of implementing this method, the sampling device is positioned to circumscribe the wound, and said device is attached to the healthy skin around the wound, for example through an interface that is adhesive. The adhesive interface may consist of an adhesive which is applied either directly to the device just before positioning it around the wound, or on a skirt of conformable compliant material, or the device or skirt may be pre-coated by a adhesive during their manufacture. In this case, the adhesive interface is advantageously protected by a protective barrier which must be removed before positioning the device around the wound. Once the device is positioned above the wound, sufficient pressure should be exerted on the upper portion of the device until the adhesive is fully set and the device is fully secured around the wound. During the positioning step, and in order to improve the behavior of the device around the wound, it is possible to coat the periphery of the interface of the device as well as the skin in the vicinity of the wound and close to the device by The adhesive. In order to facilitate the positioning step, it is best to visualize the wound in order to place the device on the healthy skin around the wound. For this, one can in particular remove the closure means of the device before positioning the latter. Indeed, the sampling device used in the method according to the invention comprises a closure means which allows easy access to the wound without removing the device. Said closing means is fixed on the upper part of the chamber of the device or on the side wall of the chamber of the device, in particular by a screw thread, a clip, a pin, a crimping means and / or a bayonet system . Once the device is attached to the skin around the wound by its adhesive interface, the closing means of the device is placed back on the chamber of said device, for example by screwing it or by means of a pin inserted into adapted orifices placed on the closure means and on the chamber of the device.

La visualisation de la plaie permettant un bon positionnement du dispositif peut également être réalisée sans ouvrir le dispositif, en regardant à travers le moyen de fermeture dudit dispositif, notamment lorsque le moyen de fermeture est réalisé en matériau transparent et/ou est muni d'une lentille transparente, éventuellement grossissante. Cette étape de positionnement du dispositif permet de le fixer autour de la plaie de manière temporaire et non-invasive. Le dispositif doit être fixé à la peau de manière suffisante pendant toute la durée de la cicatrisation. Il est à noter de plus que le dispositif est étanche au niveau de la zone d' interaction dispositif/peau du sujet. Ainsi, l'exsudat recueilli dans la chambre ne peut pas s'échapper par les bords dudit dispositif. La deuxième étape de la méthode selon l'invention est l'observation macroscopique de la plaie et/ou de l'exsudat. The visualization of the wound allowing a good positioning of the device can also be performed without opening the device, looking through the closure means of said device, in particular when the closure means is made of transparent material and / or is provided with a transparent lens, possibly magnifying. This positioning step of the device makes it possible to fix it around the wound temporarily and non-invasively. The device must be attached to the skin sufficiently for the duration of the healing. It should also be noted that the device is sealed at the level of the device / skin interaction zone of the subject. Thus, the exudate collected in the chamber can not escape through the edges of said device. The second step of the method according to the invention is the macroscopic observation of the wound and / or the exudate.

Par observation macroscopique, la demanderesse entend toute analyse réalisée de manière externe, c'est-à-dire de manière non-invasive ou encore sans intervention sur le site en question, de la plaie et/ou de l'exsudat. Selon un mode de réalisation préféré, l'observation macroscopique de la plaie et/ou de l'exsudat comprend la détermination des paramètres physico-chimiques de ladite plaie et/ou dudit exsudat. Par paramètres physico-chimiques, on entend, au sens de la présente invention, différentes caractéristiques sensorielles de la plaie et/ou de l'exsudat, telles que notamment l'aspect de la plaie (couleur, texture, profondeur, superficie, odeur) et/ou l'aspect de l'exsudat (couleur, odeur, limpidité, viscosité). L'observation macroscopique de la plaie peut ainsi consister en un suivi visuel, voire olfactif, de l'état et de la progression de la cicatrisation de la plaie. Ainsi, une observation simple de la plaie pourra être effectuée à l'aide d'un appareil photographique, d'une caméra vidéo, ou bien tout simplement grâce à l'oeil humain. Une observation grossie pourra quant à elle être réalisée à l'aide d'une loupe, d'un dermoscope ou bien dans un autre registre, via une application pour « smartphone » comme par exemple l'application MOWA (« Mobile Wound Analyser »). Enfin, une observation offrant encore de meilleures résolutions visuelles pourra être mise en oeuvre à l'aide d'une microscopie biphotonique, d'une diffusion Raman, d'une microscopie confocale, d'un IRM, d'une échographie haute fréquence, ou encore par capillaroscopie. Ce dernier type de technologies permet une observation en profondeur de la plaie, de l'ordre de quelques centaines de micromètres, ce qui est impossible à l'oeil nu. Il est à noter que des moyens de suivi étalons seront envisagés pour chaque type de technique de visualisation macroscopique utilisé. Un des modes de réalisation préféré de la présente invention réside en une prise de photographie qui peut notamment être effectuée sans ouvrir le dispositif lorsque celui-ci est réalisé en matériau transparent et/ou est muni d'une lentille transparente, éventuellement grossissante. Ce mode de réalisation est particulièrement aisé à mettre en oeuvre. Dans le cas contraire, la prise de photographie est réalisée après avoir retiré le moyen de fermeture du dispositif, ledit moyen de fermeture étant remis en position fermée sur le dispositif une fois la photographie prise. La fréquence de la prise de photographie peut notamment être d'une photographie par jour, ce qui permet de visualiser la cinétique de la progression de la cicatrisation de la plaie. Les différentes photographies sont préférentiellement prises avec les mêmes réglages afin de pouvoir comparer les photographies entre elles. Ainsi, selon un mode de réalisation particulier, l'appareil photographique est positionné à la même distance de la plaie et avec le même angle pour chaque photographie, en utilisant par exemple un banc de photographie. By macroscopic observation, the Applicant hears any analysis performed externally, that is to say non-invasively or without intervention on the site in question, the wound and / or exudate. According to a preferred embodiment, the macroscopic observation of the wound and / or the exudate comprises the determination of the physicochemical parameters of said wound and / or said exudate. By physico-chemical parameters is meant, in the sense of the present invention, different sensory characteristics of the wound and / or exudate, such as in particular the appearance of the wound (color, texture, depth, area, odor) and / or the appearance of the exudate (color, odor, clarity, viscosity). The macroscopic observation of the wound can thus consist of a visual or even olfactory follow-up of the state and progress of the healing of the wound. Thus, a simple observation of the wound can be performed using a camera, a video camera, or simply thanks to the human eye. A magnified observation can be performed using a magnifying glass, a dermoscope or in another register, via an application for "smartphone" as for example the application MOWA ("Mobile Wound Analyzer") . Finally, an observation offering even better visual resolutions can be implemented using a two-photon microscopy, a Raman scattering, a confocal microscopy, an MRI, a high-frequency ultrasound, or still by capillaroscopy. This last type of technology allows a deep observation of the wound, of the order of a few hundred micrometers, which is impossible to the naked eye. It should be noted that standard monitoring means will be considered for each type of macroscopic visualization technique used. One of the preferred embodiments of the present invention resides in a photograph that can in particular be made without opening the device when it is made of transparent material and / or is provided with a transparent lens, possibly magnifying. This embodiment is particularly easy to implement. In the opposite case, the photographing is carried out after removing the closure means of the device, said closing means being returned to the closed position on the device once the photograph is taken. The frequency of taking photographs can be one photograph per day, which makes it possible to visualize the kinetics of the progression of the healing of the wound. The different photographs are preferably taken with the same settings in order to be able to compare the photographs with each other. Thus, according to a particular embodiment, the camera is positioned at the same distance from the wound and with the same angle for each photograph, for example using a photography bench.

Selon un mode de réalisation préféré, la prise de la photographie peut être suivie ou simultanée à une comparaison avec un ou des moyens de suivi macroscopiques étalons. Ainsi, avant de prendre la photographie, on peut positionner à proximité du dispositif un moyen d'étalonnage tel que notamment un objet comprenant des graduations, et/ou un nuancier de teintes bien définies. Une fois les différentes photographies prises, le moyen d'étalonnage permet notamment de comparer les photographies, même lorsque les réglages de l'appareil photographique diffèrent, et de réaliser des mesures de la plaie sur les photographies. Selon un mode de réalisation préféré, des analyses biologiques sont réalisées sur l'exsudat pour caractériser et/ou quantifier les différentes populations cellulaires contenues. Il est également possible de déterminer la présence mais aussi de quantifier les métabolites et/ou les microorganismes contenus dans ledit exsudat. Afin de réaliser ces analyses pour le suivi de la progression de la plaie grâce à la méthode selon l'invention, l'exsudat contenu dans le dispositif peut être prélevé et ledit exsudat est analysé. L'analyse peut notamment être une évaluation plus spécifique des paramètres physico-chimiques de l'exsudat prélevé par rapport aux mêmes paramètres observés sans prélèvement de l'exsudat. Ainsi on pourra déterminer avec plus de précision le volume d'exsudat produit par la plaie, mais aussi tous les paramètres ayant trait aux propriétés propres dudit exsudat (pH, 1°C, couleur, odeur, limpidité, viscosité). Ledit prélèvement de l'exsudat peut notamment être effectué au moyen d'une pipette, munie d'un moyen d'aspiration tel qu'un cône, et/ou d'une seringue, soit après ouverture du moyen de fermeture du dispositif, soit au travers d'un septum positionné sur la paroi latérale de la chambre du dispositif ou sur le moyen de fermeture du dispositif. Le prélèvement de l'exsudat au travers du septum permet de conserver la stérilité du milieu interne du dispositif vis-à-vis du milieu extérieur dudit dispositif. According to a preferred embodiment, the taking of the photograph can be followed or simultaneous with a comparison with one or more standard macroscopic tracking means. Thus, before taking the photograph, it is possible to position near the device calibration means such as in particular an object comprising graduations, and / or a color chart of well-defined hues. Once the various photographs have been taken, the calibration means makes it possible in particular to compare the photographs, even when the camera settings differ, and to make measurements of the wound on the photographs. According to a preferred embodiment, biological analyzes are performed on the exudate to characterize and / or quantify the different cell populations contained. It is also possible to determine the presence but also to quantify the metabolites and / or microorganisms contained in said exudate. In order to carry out these analyzes for monitoring the progression of the wound using the method according to the invention, the exudate contained in the device can be taken and said exudate is analyzed. The analysis may in particular be a more specific evaluation of the physicochemical parameters of the exudate taken with respect to the same parameters observed without removal of the exudate. Thus, it will be possible to determine more precisely the volume of exudate produced by the wound, but also all the parameters relating to the specific properties of said exudate (pH, 1 ° C., color, odor, clarity, viscosity). Said removal of the exudate may in particular be carried out by means of a pipette, provided with a suction means such as a cone, and / or a syringe, either after opening of the closure means of the device, or through a septum positioned on the side wall of the device chamber or on the closure means of the device. The removal of the exudate through the septum makes it possible to preserve the sterility of the internal medium of the device vis-à-vis the external environment of said device.

Lorsque l'exsudat contenu dans le dispositif est trop visqueux pour pouvoir être facilement prélevé à la seringue, on peut avantageusement rendre l'exsudat moins visqueux en injectant dans le dispositif une solution physiologique, comme par exemple du sérum physiologique ou encore une solution diluée de chlorure de sodium. Selon un mode de réalisation préféré, on peut aspirer et réinjecter plusieurs fois la solution composée d'exsudat dilué par la solution physiologique afin de bien laver le site de la plaie et de récupérer le maximum de cellules, métabolites et/ou microorganismes afin de faciliter les analyses ultérieures. Par métabolite, la demanderesse entend tous les composés organiques susceptibles d'être retrouvés dans une plaie, tels que par exemple, des protéines (protéines inflammatoires ou anti-inflammatoires, des facteurs de croissance, des protéines de la matrice extracellulaire comme le collagène ou la fibrine), des lipides (tels que des acides gras, des leucotriènes), de acides aminés, des hormones, de l'albumine, de l'urée. Par microorganismes, la demanderesse entend tous les microorganismes susceptibles d'être retrouvés sur une plaie, 15 infectée ou non, tels que par exemple, des bactéries (telles que celles composées par le genre Staphylococcus comme par exemple, S.aureus, S.epidermidis, S.pyogenes, par le genre Enterococcus, comme par exemple E.faecalis, par le genre Pseudomonas, comme par exemple P.aeruginosa, par la famille des Entérobactéries, du type 20 E.coli, Enterobacter species, Proteus species, Serratia species, ou encore par des bactéries du type anaérobique, comme Clostrium species ou Bacteroïdes species), des levures(Candida albicans), des virus (rétrovirus, adénovirus), ou encore des parasites (ectoparasites, endoparasites, mesoparasites), 25 Par cellules, la demanderesse entend toutes les cellules susceptibles d'être retrouvées sur une plaie, telles que notamment des cellules inflammatoires (granulocytes), des fibroblastes, ou encore des kératinocytes. L'exsudat prélevé est alors transféré dans un contenant 30 adapté, tel que notamment un tube à essai ou un flacon muni d'un septum. Selon un mode de réalisation particulier, lorsque le prélèvement de l'exsudat dans le dispositif est réalisé au travers d'un septum et que l'exsudat est transféré dans un flacon muni d'un septum, l'exsudat n'est pas en contact avec l'air libre ce 35 qui empêche sa contamination par des agents pathogènes extérieurs. Si le moyen de fermeture a été retiré pour réaliser le prélèvement de l'exsudat, ledit moyen de fermeture est remis en position fermée sur le dispositif après le prélèvement. When the exudate contained in the device is too viscous so that it can be easily removed by syringe, the exudate can advantageously be rendered less viscous by injecting into the device a physiological solution, for example physiological saline or a dilute solution of sodium chloride. According to a preferred embodiment, the diluted exudate solution may be aspirated and reinjected several times with physiological saline so as to wash the wound site and recover the maximum number of cells, metabolites and / or microorganisms in order to facilitate subsequent analyzes. By metabolite, the Applicant hears all organic compounds likely to be found in a wound, such as for example, proteins (inflammatory or anti-inflammatory proteins, growth factors, extracellular matrix proteins such as collagen or fibrin), lipids (such as fatty acids, leukotrienes), amino acids, hormones, albumin, urea. By microorganisms, the applicant hears all the microorganisms likely to be found on a wound, infected or not, such as, for example, bacteria (such as those composed by the genus Staphylococcus, for example S.aureus, S.epidermidis , S.pyogenes, by the genus Enterococcus, for example E. faecalis, by the genus Pseudomonas, for example P. aeruginosa, by the Enterobacteriaceae family, of the E. coli, Enterobacter species, Proteus species, Serratia species type. or by bacteria of the anaerobic type, such as Clostrium species or Bacteroides species), yeasts (Candida albicans), viruses (retroviruses, adenovirus), or parasites (ectoparasites, endoparasites, mesoparasites). Applicant hears all the cells likely to be found on a wound, such as in particular inflammatory cells (granulocytes), fibroblasts, or even keratinocytes. The collected exudate is then transferred to a suitable container, such as in particular a test tube or a septum-filled bottle. According to a particular embodiment, when the removal of the exudate in the device is carried out through a septum and the exudate is transferred to a septum-filled bottle, the exudate is not in contact. with open air which prevents its contamination by external pathogens. If the closure means has been removed to take the exudate sample, said closure means is returned to the closed position on the device after sampling.

Les analyses biologiques qui peuvent être réalisées sur l'exsudat sont multiples et variées. Ainsi, dès le premier jour de la mise en oeuvre de la méthode selon l'invention, on peut effectuer un suivi phénotypique et fonctionnel des populations cellulaires, telles que notamment les cellules inflammatoires ou les cellules cutanées. Ces analyses, réalisées notamment à l'aide de la cytométrie en flux, permettent de suivre les différentes étapes de la cicatrisation dont plus particulièrement la phase inflammatoire, bien que le suivi de la deuxième phase, dite phase de granulation ou d'épidermisation (appelée également phase de prolifération) puisse également être réalisé. Ces analyses permettent de vérifier que la phase de granulation commence et que la phase inflammatoire ne persiste pas dans le temps, ce qui pourrait nuire à une bonne cicatrisation. Ainsi si l'on réalise un suivi par cytométrie en flux du nombre de granulocytes présents dans l'exsudat, on verra, au tout début de la phase inflammatoire que les granulocytes sont majoritaires. Si la phase inflammatoire se déroule correctement, quelques jours après la survenue de la plaie, le nombre de granulocytes aura fortement diminué, avec parallèlement une augmentation du nombre de monocytes et de fibroblastes qui permettent la formation du tissu de granulation. Si l'on constate que les granulocytes sont encore très nombreux trois jours après la survenue de la plaie, il est possible que la plaie présente un défaut dans la phase de résolution de l'inflammation qui peut trouver sa cause dans une infection bactérienne par exemple. Si le type de bactérie est identifié par l'analyse appropriée, le médecin pourra alors prescrire un traitement antibiotique, qui sera avantageusement injecté dans le dispositif afin d'être en contact avec la plaie et d'éliminer l'infection avant que des complications n'apparaissent. Les analyses réalisées sur l'exsudat peuvent également permettre d'établir un suivi des médiateurs produits pendant la cicatrisation, tels que notamment les cytokines inflammatoires IL12, ILl-(3, IL6...) et anti-inflammatoires (TGF-(3 et IL-35 10), les médiateurs lipidiques comme les leucotriènes, les prostaglandines ou encore les facteurs de croissance (VEGF, PDGF). Ces médiateurs peuvent notamment être quantifiés par un dosage ELISA. L'analyse de métabolites, et plus particulièrement de médiateurs contenus dans l'exsudat permet également de suivre l'avancée de la cicatrisation. Ainsi, par exemple, si l'exsudat contient un taux anormalement élevé en quantité de cytokines inflammatoires, cela indique que la phase inflammatoire n'est pas terminée ce qui peut nuire à la bonne cicatrisation de la plaie. The biological analyzes that can be performed on the exudate are multiple and varied. Thus, from the first day of the implementation of the method according to the invention, phenotypic and functional monitoring of cell populations, such as in particular inflammatory cells or cutaneous cells, can be carried out. These analyzes, carried out in particular using flow cytometry, make it possible to follow the various stages of the cicatrization, more particularly the inflammatory phase, although the follow-up of the second phase, called the granulation or epidermization phase (called also proliferation phase) can also be realized. These analyzes make it possible to verify that the granulation phase begins and that the inflammatory phase does not persist over time, which could hinder good healing. Thus, if flow cytometry is followed by the number of granulocytes present in the exudate, it will be seen at the very beginning of the inflammatory phase that the granulocytes are the majority. If the inflammatory phase proceeds correctly, a few days after the onset of the wound, the number of granulocytes will have greatly decreased, along with an increase in the number of monocytes and fibroblasts that allow the formation of granulation tissue. If it is found that the granulocytes are still very numerous three days after the onset of the wound, it is possible that the wound has a defect in the phase of resolution of the inflammation that can find its cause in a bacterial infection for example . If the type of bacteria is identified by the appropriate analysis, the doctor can then prescribe an antibiotic treatment, which will be advantageously injected into the device in order to be in contact with the wound and eliminate the infection before complications. 'appear. The analyzes carried out on the exudate can also make it possible to establish a follow-up of the mediators produced during the cicatrization, such as in particular inflammatory cytokines IL12, IL1- (3, IL6) and anti-inflammatory (TGF- (3 and IL-35 10), lipid mediators such as leukotrienes, prostaglandins or growth factors (VEGF, PDGF) These mediators can in particular be quantified by an ELISA assay The analysis of metabolites, and more particularly of mediators contained in the exudate also makes it possible to follow the progress of the cicatrization, for example, if the exudate contains an abnormally high level of inflammatory cytokine quantity, this indicates that the inflammatory phase is not complete which can harm the good healing of the wound.

En effet, la présence prolongée de cytokines inflammatoires dans la plaie peut provoquer la dégradation de la matrice cellulaire et induire une chronicité de la plaie. La méthode selon l'invention peut également comprendre une étape supplémentaire de lavage de la plaie, par exemple par une solution physiologique classique du type sérum physiologique, Chlorure de Sodium, eau stérile, eau savonneuse, ou encore une solution de Lacate de Ringer mais aussi éventuellement par une solution comprenant un agent antibactérien et/ou un agent thérapeutique, auquel cas, la mise en contact de ces solutions sur le site cicatriciel sera prolongée, en comparaison à la mise en contact d'une solution de lavage dite classique sur le site cicatriciel. Ainsi, si l'on souhaite nettoyer la plaie, on peut mettre au contact de la plaie une solution physiologique classique, par exemple après l'étape de positionnement du dispositif. On laisse la solution agir quelques minutes et on l'enlève du dispositif. D'une autre façon, si l'on souhaite traiter la plaie, on peut mettre au contact de la plaie une solution contenant un agent thérapeutiquement actif, par exemple tous les jours après l'étape d'observation macroscopique de la plaie et/ou de l'exsudat ou bien éventuellement après l'étape d'analyse de l'exsudat. On laisse la solution agir plusieurs minutes voire heures ou encore jours et on l'enlève ensuite du dispositif si et seulement si la solution n'a pas été totalement absorbée au niveau de la plaie. Indeed, the prolonged presence of inflammatory cytokines in the wound can cause degradation of the cell matrix and induce chronicity of the wound. The method according to the invention may also comprise an additional step of washing the wound, for example with a physiological saline solution, sodium chloride, sterile water, soapy water or a solution of Ringer's Lacate, but also optionally by a solution comprising an antibacterial agent and / or a therapeutic agent, in which case, bringing these solutions into contact with the scar site will be prolonged, in comparison with bringing into contact a so-called conventional washing solution on the site scar. Thus, if it is desired to clean the wound, a conventional physiological solution may be brought into contact with the wound, for example after the step of positioning the device. The solution is allowed to act for a few minutes and removed from the device. In another way, if it is desired to treat the wound, a solution containing a therapeutically active agent may be brought into contact with the wound, for example every day after the macroscopic wound observation step and / or exudate or possibly after the exudate analysis step. The solution is left to act for several minutes to hours or days and then removed from the device if and only if the solution has not been fully absorbed into the wound.

Selon un autre mode de réalisation de la présente invention, la méthode comprend une étape supplémentaire dans laquelle une solution de lavage ou une solution comprenant un ou plusieurs agents thérapeutiquement actifs est mise en contact avec la plaie à l'aide dudit dispositif. Ainsi, le dispositif utilisé dans la méthode permet de tester de nouveaux actifs, notamment des actifs cicatrisants ou antimicrobiens, directement au contact de la plaie. Ainsi, il sera possible d'utiliser diverses formes galéniques d'actifs, telles que notamment des solutions d'actifs permettant une action plus localisée sur la lésion, et plusieurs concentrations d'actifs. Ceci permettra donc de tester l'efficacité de certains actifs ainsi que de tester la tolérance de la plaie par rapport à la concentration de chacun des actifs. L'avantage majeur résidant bien évidemment dans la possibilité de tester une forme galénique particulière et atypique sur le site cicatriciel, c'est-à-dire non envisageable en temps normal sans l'aide dudit dispositif de la demanderesse, telle qu'une solution liquide d'agents actifs. De manière générale, les actifs sont choisis parmi : -les antibactériens tels que la polymyxine B, les pénicillines, l'acide clavulanique, les tétracyclines, la minocycline, la chlorotétracycline, les aminoglycosides, l'amikacine, la gentamicine, la néomycine, l'argent et ses sels (sulfadiazine argentique). -les antiseptiques tels que le mercurothiolate de sodium, l'éosine, la chlorhexidine, le borate de phénylmercure, l'eau oxygénée, la liqueur de Dakin, le triclosan, le biguanide, l'hexamidine, le thymol, le lugol, la povidone iodée, le merbromine, le chlorure de benzalkonium et de benzéthonium, l'éthanol et l'isopropanol. -les antiviraux tels l'acy clovir, la famciclovir, le ritonavir. -les antifongiques tels que l'amphotéricine B, la natamycine, 25 kétoconazole, clotrimazole, éconazole, bifonazole, fenticonazole, isoconazole, sulconazole, thiabendazole, tioconazole), les triazolés, les allylamines, la terbinafine, l'amorolfine, la naftifine, la buténafine. 30 -les antidouleurs tels que le paracétamol, la codéine, le dextropropoxyphène, le tramadol, la morphine et ses dérivés, les corticoïdes et ses dérivés. - les cicatrisants : le KSOS, le sucralfate, l'allantoïne, le collagène ou l'acide hyaluronique. 35 Un autre objet de l'invention est une méthode d'analyse de la cicatrisation d'une plaie chez un animal comprenant les étapes suivantes: - créer une plaie; oxiconazole, les polyènes, le nystatin, les imidazolés (miconazole, butoconazole, sertoconazole, - fixer le dispositif de prélèvement sur le pourtour de la plaie ; - faire une observation macroscopique de la plaie et/ou de l'exsudat ; et/ou - prélever l'exsudat contenu dans ledit dispositif et analyser ledit exsudat. La présente méthode, de même que la méthode précédemment décrite supra, sont réalisées sur l'animal. Par animal, on entend, au sens de la présente invention, un animal ou l'être humain. According to another embodiment of the present invention, the method comprises a further step wherein a wash solution or a solution comprising one or more therapeutically active agents is contacted with the wound using said device. Thus, the device used in the method makes it possible to test new assets, in particular healing or antimicrobial active agents, directly in contact with the wound. Thus, it will be possible to use various galenic forms of assets, such as in particular asset solutions allowing a more localized action on the lesion, and several concentrations of active ingredients. This will test the effectiveness of certain assets and test the tolerance of the wound in relation to the concentration of each asset. The major advantage obviously resides in the possibility of testing a particular and atypical dosage form on the scar site, that is to say not possible in normal time without the aid of said device of the applicant, such as a solution liquid of active agents. In general, the active agents are chosen from: antibacterials such as polymyxin B, penicillins, clavulanic acid, tetracyclines, minocycline, chlorotetracycline, aminoglycosides, amikacin, gentamicin, neomycin, silver and its salts (silver sulfadiazine). antiseptics such as sodium mercurothiolate, eosin, chlorhexidine, phenylmercury borate, hydrogen peroxide, Dakin liquor, triclosan, biguanide, hexamidine, thymol, lugol, povidone iodine, merbromine, benzalkonium and benzethonium chloride, ethanol and isopropanol. antivirals such as acy clovir, famciclovir, ritonavir. antifungal agents such as amphotericin B, natamycin, ketoconazole, clotrimazole, econazole, bifonazole, fenticonazole, isoconazole, sulconazole, thiabendazole, tioconazole), triazoles, allylamines, terbinafine, amorolfine, naftifine, butenafine. Painkillers such as paracetamol, codeine, dextropropoxyphene, tramadol, morphine and its derivatives, corticosteroids and its derivatives. - cicatrizants: KSOS, sucralfate, allantoin, collagen or hyaluronic acid. Another object of the invention is a method of analyzing wound healing in an animal comprising the steps of: - creating a wound; oxiconazole, polyenes, nystatin, imidazoles (miconazole, butoconazole, sertoconazole, - fix the sampling device around the wound, - make a macroscopic observation of the wound and / or exudate, and / or - take the exudate contained in said device and analyze said exudate.The present method, as well as the method previously described above, are carried out on the animal.An animal is meant, within the meaning of the present invention, an animal or the 'To be human.

L'animal chez lequel on veut étudier la progression de la cicatrisation peut notamment être une souris, un porc et/ou un rat. Il peut également s'agir de l'être humain, en particulier des personnes souffrant d'un trouble métabolique ou d'une pathologie (tel que un diabète, une immunodéficience, une malnutrition, ou encore une insuffisance veineuse) qui influence le phénomène de cicatrisation. Dans le cas du murin, avant de créer la plaie, ledit animal doit être préparé pour l'opération. Ainsi, on procède tout d'abord à l'anesthésie locale ou générale de l'animal. L'anesthésie peut notamment être réalisée par injection d'une solution anesthésiante pouvant être un mélange de kétamine et de xylazine. Après anesthésie de l'animal, on attend le temps nécessaire pour que l'anesthésie fasse effet. Si besoin, l'animal est ensuite tondu sur la zone où l'on souhaite créer la plaie. Cette étape-là est une étape dont on peut s'affranchir dans le cas de l'être humain. Néanmoins, selon les cas, elle peut être adaptée, et ceci au moyen d'une anesthésie locale de la zone de création de la plaie. On procède alors à la création d'une plaie sur l'animal. La plaie peut notamment être superficielle ou profonde c'est-à-dire 30 qu'elle va jusqu'à l'hypoderme ou jusqu'au tissu musculaire. Qu'elles soient superficielles ou profondes, la littérature décrit déjà plusieurs manières de réaliser une plaie. Les plaies peuvent être de natures différentes selon les domaines d'études qui sont privilégiés. 35 Dans la méthode selon l'invention, la plaie est créée mécaniquement, chimiquement, thermiquement et/ou par rayonnement. La plaie peut être créée mécaniquement à l'aide d'outils tels que des ciseaux, un emporte-pièce ou « biopsy punch ». Dans ce cas-là, on peut tracer la délimitation de la future lésion cutanée, en utilisant par exemple un marqueur et un patron. La peau de l'animal peut alors être pincée pour être coupée au ciseau ou à l'aide d'un scalpel, en suivant la ligne délimitant la lésion cutanée ou alors la peau peut être tendue afin d'y exercer une pression à l'aide d'un emporte-pièce ou « biopsy punch ». Des plaies superficielles peuvent également être créées mécaniquement. On peut notamment faire un « stripping » en apposant un adhésif puis en le retirant de la future zone de création de la plaie. En ainsi possible de à la surface de la également possible épiderme à l'aide création de lésion répétant l'opération plusieurs fois, il est créer une lésion plus ou moins superficielle peau. D'une manière semblable, il est d'effectuer un frottement prolongé sur l' d'outils tel qu'une râpe. D'autres moyens de peuvent également être considérés tels que chimiques. Une solution caustique (soude, notamment les produits acide nitrique...) peut être déposée sur la partie de la peau à léser. La concentration de l'agent utilisé ainsi que la durée d'exposition détermineront la profondeur des plaies. Ce type de blessure s'apparente aux brûlures (source chaude et/ou froide, électrique, rayonnement...) qu'il est également possible de reproduire. Ainsi, tout comme l'emploi de produits chimiques, la profondeur et l'étendue de la brûlure dépendra essentiellement de la durée et des propriétés physico-chimiques des outils ou solutions employés. De manière plus particulière, des systèmes de dépression pourront être employés afin de produire des décollements (bulles de succion) ou phlyctènes. On peut également envisager des procédures d'écrasement de la peau, mais aussi des procédures de ligature ou de section vasculaire, afin d'obtenir des plaies ischémiques. Il sera également possible de créer une plaie avec un appareil émettant un rayonnement, tel que le LASER ou des rayons ionisants de type p ou gamma. Le dispositif de prélèvement est alors fixé sur la peau saine autour de la plaie au moyen de son interface adhésive comme décrit 35 précédemment. L'observation macroscopique de la plaie est réalisée de façon préférentielle en prenant des photographies de la plaie comme décrit précédemment. Le suivi biologique de la plaie par prélèvement de l'exsudat contenu dans le dispositif et son analyse est réalisé comme décrit précédemment. Ainsi, on peut notamment réaliser le suivi phénotypique et fonctionnel de diverses populations cellulaires, telles que notamment les granulocytes, les lymphocytes, les monocytes, les fibroblastes, et/ou réaliser le suivi de métabolites contenus dans l'exsudat tels que notamment les cytokines, les médiateurs lipidiques, les facteurs de croissance, voire également le suivi de microorganismes, tel que décrit précédemment. De plus, il peut être intéressant d'étudier l'influence de divers facteurs pathologiques ou physiologiques sur la cicatrisation de la plaie sur l'animal. Ainsi, on peut comparer la cicatrisation d'un animal présentant un état physiologique particulier par rapport à celle d'un animal sain. De plus, puisque la méthode selon l'invention met en oeuvre un dispositif non- invasif, on peut réaliser un suivi fiable des médiateurs et des métabolites produits dès la création de la plaie chez l'animal, ce qui n'était pas possible avec les dispositifs invasifs implantés sous la peau de l'art antérieur. La méthode selon l'invention peut également comprendre une étape supplémentaire de lavage de la plaie par une solution physiologique comprenant un agent antibactérien et/ou un agent thérapeutique, telle que décrite précédemment. Ainsi, si l'on souhaite nettoyer la plaie, on peut mettre au contact de la plaie une solution comprenant un agent antibactérien, par exemple après l'étape de positionnement du dispositif. On laisse la solution agir quelques minutes et on l'enlève du dispositif. Au contraire, si l'on souhaite traiter la plaie, on peut mettre au contact de la plaie une solution contenant un agent thérapeutiquement actif, par exemple plusieurs minutes voire heures ou encore jours et ce tous les jours après l'étape de prise de la photographie et/ou après l'étape d'analyse de l'exsudat. On laisse la solution agir sur le site cicatriciel et on l'enlève du dispositif si et seulement si elle n'a pas été totalement absorbée au niveau de la plaie. Cette étape supplémentaire peut notamment permettre d'étudier l'influence et l'efficacité d'un agent thérapeutiquement actif sur la cicatrisation de la plaie de l'animal. Il sera ainsi possible, par exemple, d'appliquer la méthode selon l'invention à deux groupes d'animaux, un groupe de contrôle d'animaux qui n'est pas traité par un agent thérapeutiquement actif et un groupe test d'animaux qui reçoit un traitement avec agent thérapeutiquement actif, et ce tous les jours. En comparant les photographies prises entre les deux groupes d'animaux, et/ou en comparant les analyses biologiques des exsudats, on pourra vérifier si l'agent thérapeutiquement actif améliore la cicatrisation des plaies et adapter le dosage ou la fréquence d'administration du traitement. L'invention sera mieux comprise à la lumière des figures suivantes qui ne sont qu'illustratives et ne sauraient en rien 10 limiter l'invention. La figure 1 est une vue en coupe transversale d'un dispositif permettant la mise en oeuvre de l'invention. La figure 2 est une photographie d'une souris sur laquelle on a créé une plaie dorsale. 15 La figure 3 est une photographie de la souris de la figure 2 sur laquelle on a fixé la chambre d'un dispositif de prélèvement sur la peau saine autour de la plaie par un adhésif. La figure 4 est une photographie de la souris de la figure 3 sur laquelle on a fixé le moyen de fermeture sur la chambre du 20 dispositif au moyen d'une goupille. La figure 5 représente différentes photographies d'une plaie sur une souris saine, les photographies étant prises à différents intervalles de temps à partir du jour de la création de la plaie (JO) jusqu'au 14ème jour après la création de la plaie (J14). 25 La figure 6 représente les différents résultats de l'analyse par cytométrie en flux des populations cellulaires contenues dans l'exsudat issu d'une plaie sur une souris saine, les analyses étant réalisées à différents intervalles de temps à partir du ler jour après la création de la plaie (J1) jusqu'au 7ème jour après 30 la création de la plaie (J7). La figure 7 est un graphique représentant la quantité d'une cytokine anti-inflammatoire (TGF-(3), mesuré par dosage ELISA, contenues dans les exsudats issus de plaies dorsales chez des souris saines. 35 L'invention va être décrite plus en détails à l'aide des exemples suivants qui sont donnés à titre purement illustratif et non limitatif. The animal in which it is desired to study the progression of cicatrization may especially be a mouse, a pig and / or a rat. It may also be the human being, in particular people suffering from a metabolic disorder or pathology (such as diabetes, immunodeficiency, malnutrition, or venous insufficiency) which influences the phenomenon of healing. In the case of murine, before creating the wound, said animal must be prepared for the operation. Thus, it proceeds first to the local or general anesthesia of the animal. In particular, anesthesia can be performed by injecting an anesthetic solution that can be a mixture of ketamine and xylazine. After anesthesia of the animal, we wait for the time necessary for the anesthesia to take effect. If necessary, the animal is then mowed on the area where it is desired to create the wound. This step is a step that can be overcome in the case of the human being. Nevertheless, depending on the case, it can be adapted, and this by means of local anesthesia of the wound creation zone. We then proceed to the creation of a wound on the animal. In particular, the wound may be superficial or deep, that is to say it goes as far as the hypodermis or to the muscle tissue. Whether superficial or deep, the literature already describes several ways to achieve a wound. The wounds can be of different natures according to the fields of study which are privileged. In the method according to the invention, the wound is created mechanically, chemically, thermally and / or by radiation. The wound can be created mechanically using tools such as scissors, a cookie cutter or "biopsy punch". In this case, we can trace the delineation of the future skin lesion, using for example a marker and a pattern. The skin of the animal can then be pinched to be cut with a chisel or with a scalpel, following the line delimiting the cutaneous lesion or the skin can be stretched to exert a pressure on the skin. using a cookie cutter or "biopsy punch". Superficial wounds can also be created mechanically. In particular, a "stripping" can be done by affixing an adhesive and then removing it from the future area of creation of the wound. In thus possible to the surface of the also possible epidermis using lesion creation repeating the operation several times, it is creating a more or less superficial skin lesion. In a similar way, it is to perform a prolonged friction on the tool such as a rasp. Other means of can also be considered as chemical. A caustic solution (sodium hydroxide, in particular nitric acid products, etc.) may be deposited on the part of the skin to be injured. The concentration of the agent used and the duration of exposure will determine the depth of the wounds. This type of injury is similar to burns (hot and / or cold, electrical, radiation ...) that can also be reproduced. Thus, just like the use of chemicals, the depth and extent of the burn will depend essentially on the duration and physicochemical properties of the tools or solutions used. In particular, depression systems may be employed to produce detachments (suction bubbles) or phlyctenes. Skin crush procedures, but also ligation or vascular section procedures may also be considered in order to obtain ischemic wounds. It will also be possible to create a wound with a radiation emitting device, such as LASER or p or gamma ionizing radiation. The sampling device is then attached to the healthy skin around the wound by means of its adhesive interface as described above. Macroscopic observation of the wound is preferentially performed by taking photographs of the wound as previously described. The biological monitoring of the wound by sampling the exudate contained in the device and its analysis is performed as described above. Thus, it is possible in particular to carry out the phenotypic and functional monitoring of various cell populations, such as in particular granulocytes, lymphocytes, monocytes, fibroblasts, and / or monitor the metabolites contained in the exudate, such as in particular cytokines, lipid mediators, growth factors, or even the monitoring of microorganisms, as described above. In addition, it may be interesting to study the influence of various pathological or physiological factors on the healing of the wound on the animal. Thus, one can compare the healing of an animal with a particular physiological state compared to that of a healthy animal. Moreover, since the method according to the invention implements a non-invasive device, reliable monitoring of mediators and metabolites produced as soon as the wound is created in the animal, which was not possible with invasive devices implanted under the skin of the prior art. The method according to the invention may also comprise an additional step of washing the wound with a physiological solution comprising an antibacterial agent and / or a therapeutic agent, as described above. Thus, if it is desired to clean the wound, a solution comprising an antibacterial agent may be placed in contact with the wound, for example after the step of positioning the device. The solution is allowed to act for a few minutes and removed from the device. On the other hand, if it is desired to treat the wound, a solution containing a therapeutically active agent may be brought into contact with the wound, for example for several minutes or even hours or days, and this every day after the treatment stage. photograph and / or after the exudate analysis step. The solution is allowed to act on the scar site and removed from the device if and only if it has not been fully absorbed into the wound. This additional step can in particular make it possible to study the influence and the effectiveness of a therapeutically active agent on the healing of the wound of the animal. It will thus be possible, for example, to apply the method according to the invention to two groups of animals, an animal control group which is not treated with a therapeutically active agent and a test group of animals which receives treatment with a therapeutically active agent every day. By comparing the photographs taken between the two groups of animals, and / or by comparing the biological analyzes of the exudates, it will be possible to check whether the therapeutically active agent improves wound healing and to adapt the dosage or the frequency of administration of the treatment. . The invention will be better understood in the light of the following figures which are illustrative only and can not in any way limit the invention. Figure 1 is a cross sectional view of a device for carrying out the invention. Figure 2 is a photograph of a mouse on which a dorsal wound has been created. Figure 3 is a photograph of the mouse of Figure 2 on which the chamber of a sampling device was placed on the healthy skin around the wound by an adhesive. Figure 4 is a photograph of the mouse of Figure 3 on which the closure means was fixed to the device chamber by means of a pin. Figure 5 shows different photographs of a wound on a healthy mouse, the photographs being taken at different time intervals from the day of the wound creation (OJ) to the 14th day after wound creation (J14 ). FIG. 6 shows the different results of the flow cytometric analysis of the cell populations contained in the exudate from a wound on a healthy mouse, the analyzes being carried out at different time intervals starting from the first day after the creation of the wound (J1) until the 7th day after the creation of the wound (J7). Figure 7 is a graph showing the amount of an anti-inflammatory cytokine (TGF- (3), measured by ELISA assay, contained in exudates from dorsal wounds in healthy mice The invention will be described further in details with the aid of the following examples which are given purely by way of illustration and not limitation.

Exemples: Exemple 1 : Création d'une plaie et mise en place du dispositif sur la plaie dorsale de la souris. Afin de créer une plaie sur une souris telle que photographiée sur la Figure 2, la souris est d'abord anesthésiée par injection d'un mélange de kétamine et de xylazine par voie intra-péritonéale. Ensuite, on coupe la peau de la souris avec un ciseau, sur sa partie dorsale. On va placer sur la souris le dispositif (1) de la figure 1. Examples: Example 1: Creation of a wound and placement of the device on the back wound of the mouse. In order to create a wound on a mouse as photographed in FIG. 2, the mouse is first anesthetized by injecting a mixture of ketamine and xylazine intraperitoneally. Then, cut the skin of the mouse with a chisel, on its dorsal part. The device (1) of FIG. 1 will be placed on the mouse.

Le dispositif (1) est constitué d'une chambre tubulaire (2) comprenant une paroi latérale (3), et deux extrémités, inférieure (4) et supérieure (5), ouvertes. Ladite extrémité inférieure (4) de la chambre tubulaire (2) présente une collerette (6) externe en matériau souple. L'interface (7) du dispositif (1) est constituée d'une couche mince de colle chirurgicale, appliquée sur la surface inférieure de la collerette (6) de la chambre tubulaire (2). Un moyen de fermeture (8) du dispositif (1) est fixé à la partie supérieure de la chambre tubulaire (2) au moyen d'une goupille (9) . The device (1) consists of a tubular chamber (2) comprising a side wall (3), and two ends, lower (4) and upper (5), open. Said lower end (4) of the tubular chamber (2) has an outer collar (6) of flexible material. The interface (7) of the device (1) consists of a thin layer of surgical glue applied to the lower surface of the collar (6) of the tubular chamber (2). A closing means (8) of the device (1) is fixed to the upper part of the tubular chamber (2) by means of a pin (9).

On retire le moyen de fermeture du dispositif en le dégoupillant. On enlève la goupille (9) afin de retirer le moyen de fermeture (8) du dispositif (1). On enduit la surface inférieure de la collerette (6) de la chambre tubulaire (2) d'une couche mince de colle chirurgicale afin de constituer l'interface (7) du dispositif. Le dispositif (1) est positionné au-dessus de la plaie de manière à la circonscrire. On exerce une pression suffisante sur la partie supérieure du dispositif (1) jusqu'à la prise complète de l'adhésif sur la peau de la souris selon la figure 2. On enduit la surface extérieure et le pourtour de la collerette (6) du dispositif (1) ainsi que la peau à proximité du dispositif de colle chirurgicale jusqu'à prise complète de l'adhésif tel que photographié sur la figure 3. On replace le moyen de fermeture (8) sur le dispositif en insérant une goupille (9) et en l'insérant dans des orifices placés sur la chambre (2) du dispositif (1) et sur le moyen de fermeture (8) afin de maintenir ces deux éléments ensemble. Le dispositif (1) est alors fixé sur le dos de la souris tel que photographié sur la figure 3. The closure means is removed from the device by unhooking it. The pin (9) is removed in order to remove the closure means (8) from the device (1). The lower surface of the flange (6) of the tubular chamber (2) is coated with a thin layer of surgical glue to form the interface (7) of the device. The device (1) is positioned above the wound so as to circumscribe it. Sufficient pressure is applied on the upper part of the device (1) until the adhesive is completely taken on the skin of the mouse according to FIG. 2. The outer surface and the periphery of the collar (6) are coated. device (1) as well as the skin near the surgical glue device until the adhesive is fully set as shown in FIG. 3. The closure means (8) are placed on the device by inserting a pin (9). ) and inserting it into orifices placed on the chamber (2) of the device (1) and on the closing means (8) in order to hold these two elements together. The device (1) is then fixed on the back of the mouse as photographed in FIG.

Exemple 2 : Suivi photographique de l'avancée de la cicatrisation d'une plaie dorsale chez la souris. On réalise l'analyse de la progression de la cicatrisation d'une plaie chez une souris saine sur laquelle on a créé une plaie selon l'exemple 1 et positionné un dispositif (1) toujours selon l'exemple 1. La souris est anesthésiée avec un gaz et disposée sur un banc de photographie comprenant des graduations régulières afin de réaliser un étalonnage. On enlève la goupille (9) afin de retirer le moyen de fermeture (8) du dispositif (1). On prend la photographie avec un appareil photographique classique, que l'on peut trouver dans le commerce. On replace le moyen de fermeture (8) sur le dispositif en chauffant une goupille (9) et en l'insérant dans des orifices placés sur la chambre (2) du dispositif (1) et sur le moyen de fermeture (8) afin de maintenir ces deux éléments ensemble. Une photographie par jour est prise, et ce dès le jour de la création de la plaie et pendant 14 jours. Les différentes photographies prises sont présentées sur la figure 4. Comme on l'observe sur les photographies, de JO à J5, correspondant à la phase inflammatoire et au démarrage de la phase proliférative, la taille de la plaie ne varie pas mais l'on assiste à la formation d'un tissu de granulation recouvrant progressivement le fascia musculaire mis à nu lors de l'excision du tissu cutané. De J5 à J14 la taille de la plaie diminue grâce au développement du tissu de granulation contenant les myofibroblastes permettant la contraction de la plaie. A J14, la plaie est quasiment refermée. Exemple 3 : Suivi cellulaire de l'avancée de la cicatrisation d'une plaie dorsale chez une souris saine. On réalise l'analyse de la progression de la cicatrisation d'une plaie sur une souris saine sur laquelle on a créé une plaie selon l'exemple 1 et positionné un dispositif de prélèvement toujours selon l'exemple 1. Avant de prélever l'exsudat, la souris est anesthésiée avec un gaz. Une solution physiologique est injectée à la seringue au travers d'un septum placé sur le moyen de fermeture du dispositif. On aspire et on réinjecte à la seringue trois fois l'exsudat dilué par la solution physiologique afin de bien laver le site de la plaie et de récupérer le maximum de cellules pour l'analyse. Example 2: Photographic follow-up of the progress of wound healing of a dorsal wound in the mouse. The analysis of the progression of the cicatrization of a wound is carried out in a healthy mouse on which a wound has been created according to example 1 and positioned a device (1) still according to example 1. The mouse is anesthetized with a gas and arranged on a photography bench with regular graduations to perform a calibration. The pin (9) is removed in order to remove the closure means (8) from the device (1). We take photography with a conventional camera, which can be found on the market. The closure means (8) is replaced on the device by heating a pin (9) and inserting it into orifices placed on the chamber (2) of the device (1) and on the closing means (8) in order to maintain these two elements together. One photograph per day is taken, from the day of the creation of the wound and for 14 days. The different photographs taken are presented in Figure 4. As seen in the photographs, from OJ to D5, corresponding to the inflammatory phase and the start of the proliferative phase, the size of the wound does not vary, but assists in the formation of a granulation tissue gradually covering the exposed muscle fascia during excision of the cutaneous tissue. From day 5 to day 14 the wound size decreases thanks to the development of the granulation tissue containing the myofibroblasts allowing the contraction of the wound. At day 14, the wound is almost closed. Example 3: Cellular monitoring of the advanced healing of a dorsal wound in a healthy mouse. The analysis of the progression of the healing of a wound on a healthy mouse on which a wound was created according to Example 1 was carried out and a sampling device was still positioned according to Example 1. Before taking the exudate , the mouse is anesthetized with a gas. A physiological solution is injected into the syringe through a septum placed on the closure means of the device. The exudate diluted with the saline solution is aspirated and reinjected three times with the syringe so as to wash the wound site well and recover the maximum number of cells for analysis.

L'exsudat dilué est prélevé à la pipette et est transféré dans un flacon muni d'un septum. Afin de déterminer la cinétique d'infiltration des granulocytes, caractérisés par l'expression des antigènes Ly6G et 5 7/4 à leur surface, les cellules sont incubées durant 15 minutes avec des anticorps anti-souris Ly6g et 7/4 chacun couplés à des fluorochromes. Enfin les cellules de l'exsudat sont de nouveau lavées. Les populations cellulaires de l'exsudat sont analysées par cytométrie en flux. Les données sont acquises par un cytomètre 10 FACScalibur (BD Biosciences) en utilisant le logiciel CellQuest Pro. Le prélèvement de l'exsudat et son analyse par cytométrie en flux sont réalisés 24 heures après la création de la plaie et répétés chaque jour pendant une semaine. Les résultats, présentant 15 les différentes intensités de fluorescence pour chaque anticorps, sont regroupés sur la figure 6. A J1 post-lésion, on observe un exsudat composé essentiellement de granulocytes, représentés par un fort marquage Ly6G et 7/4. Dès J2 post-lésion, on observe une diminution progressive du marquage Ly6G jusqu'à sa disparition 20 totale, tandis que le marquage 7/4 est conservé. Cette analyse des populations cellulaires composant l'exsudat permet de suivre la progression de la phase inflammatoire, caractérisée par l'infiltration des granulocytes, puis par leur disparition lors du démarrage de la phase proliférative.The diluted exudate is pipetted and transferred to a septum vial. In order to determine the infiltration kinetics of the granulocytes, characterized by the expression of the Ly6G and 5 7/4 antigens on their surface, the cells are incubated for 15 minutes with anti-mouse Ly6g and 7/4 antibodies each coupled to fluorochromes. Finally the cells of the exudate are washed again. The cell populations of the exudate are analyzed by flow cytometry. The data is acquired by a FACScalibur cytometer (BD Biosciences) using the CellQuest Pro software. Exudate collection and flow cytometry analysis are performed 24 hours after wound creation and repeated daily for one week. The results, showing the different fluorescence intensities for each antibody, are grouped in FIG. 6. At post-lesion, an exudate consisting essentially of granulocytes, represented by a strong Ly6G and 7/4 marking, is observed. From D2 post-lesion, a gradual decrease in Ly6G labeling is observed until its total disappearance, while the 7/4 labeling is preserved. This analysis of the cell populations composing the exudate makes it possible to follow the progression of the inflammatory phase, characterized by the infiltration of the granulocytes, then by their disappearance at the start of the proliferative phase.

25 Exemple 4 : Comparaison du nombre de cytokines anti- inflammatoires contenues dans l'exsudat issu d'une plaie dorsale d'une souris saine On réalise le suivi de l'avancée de la cicatrisation d'une plaie sur un groupe de 2 souris saines. Sur chacune des deux 30 souris, on créé une plaie selon l'exemple 1 et on positionne un dispositif de prélèvement toujours selon l'exemple 1. Avant de prélever l'exsudat, chaque souris est anesthésiée avec un gaz. Une solution physiologique de volume connu est injectée à la seringue au travers d'un septum placé sur la chambre du dispositif. On 35 aspire et on réinjecte à la seringue trois fois l'exsudat dilué par la solution physiologique afin de bien laver le site de la plaie, d'homogénéiser l'exsudat. L'exsudat dilué est prélevé à la seringue et est transféré dans un flacon muni d'un septum puis centrifugée afin de ne récupérer que le surnageant contenant les cytokines. Les cytokines inflammatoires et anti-inflammatoires contenues dans l'exsudat sont analysées par dosage ELISA et sont réalisés 48 heures après la création de la plaie et répétés chaque 5 jour pendant une semaine. Le dosage de la cytokine TGF-p est représenté sur la figure 6. On observe une forte progression du taux de cytokines anti-inflammatoires du type TGF-p dès J2 post-lésion. Cette surproduction de cette cytokine anti-inflammatoire atteint son maximum à J5 post lésion, date de la fin de la phase 10 inflammatoire, avant de revenir à un stade normal, à la fin du processus de cicatrisation. Example 4: Comparison of the number of anti-inflammatory cytokines contained in the exudate from a dorsal wound of a healthy mouse The progress of wound healing on a group of 2 healthy mice is monitored . On each of the two mice, a wound was created according to example 1 and a sampling device was still positioned according to example 1. Before collecting the exudate, each mouse was anesthetized with a gas. A physiological solution of known volume is injected into the syringe through a septum placed on the chamber of the device. The exudate diluted with physiological saline is aspirated and reinjected three times with the syringe in order to thoroughly wash the site of the wound, to homogenize the exudate. The diluted exudate is taken by syringe and transferred to a septum vial and centrifuged to recover only the supernatant containing the cytokines. The inflammatory and anti-inflammatory cytokines contained in the exudate are analyzed by ELISA and are performed 48 hours after wound creation and repeated every day for one week. The cytokine TGF-β assay is shown in FIG. 6. A strong progression of the level of TGF-β-type anti-inflammatory cytokines is observed as of J2 post-lesion. This overproduction of this anti-inflammatory cytokine reaches its peak at day 5 post-injury, the date of the end of the inflammatory phase, before returning to a normal stage at the end of the healing process.

Claims

REVENDICATIONS1. A non-invasive method of analyzing the progress of wound healing, comprising the steps of: - securing a non-invasive collection device around the wound; - Make a macroscopic observation of the wound and / or exudate and / or - take the exudate contained in said device and analyze said exudate.

2. Method for analyzing the progression of a wound in an animal comprising the following steps: - creating a wound; - set a non-invasive device for sampling around the wound; - Make a macroscopic observation of the wound and / or exudate and / or - take the exudate contained in said device and analyze said exudate.

3. Method according to claim 1 or 2, characterized in that said sampling device is attached to the skin around the wound by means of an interface.

4. Method according to any one of claims 2 and 3, characterized in that the wound is created mechanically, chemically, thermally and / or radiation. 25

5. Method according to any one of claims 1 to 4, characterized in that the macroscopic observation of the wound and / or exudate comprises the determination of physico-chemical parameters of said wound or said exudate.

6. Method according to any one of claims 1 to 5, characterized in that the macroscopic observation is followed or simultaneous to a comparison with one or more standard macroscopic monitoring means.

7. Method according to any one of claims 1 to 6, characterized in that the exudate is taken through a septum positioned on the sampling device.

8. Method according to any one of claims 1 to 7, characterized in that the analysis of the exudate makes it possible to determine the metabolites, the cellular components, and / or the microorganisms contained in said exudate and comprises the determination of the parameters physico-chemical said exudate.