FR2973246A1 - COMPOSITION BASED ON CAMELLIA JAPONICA FOR SKIN PROTECTION. - Google Patents
COMPOSITION BASED ON CAMELLIA JAPONICA FOR SKIN PROTECTION. Download PDFInfo
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Abstract
L'invention concerne une composition utilisable en dermatologie et/ou en cosmétique La composition comprend une quantité efficace d'un extrait de Camellia japonica et d'un extrait de Polygonum hydropiper, en association. Application aux compositions cosmétiques et dermatologiques destinées au traitement ou à la prévention des signes du vieillissement cutané et des vergetures.The invention relates to a composition that can be used in dermatology and / or in cosmetics. The composition comprises an effective amount of an extract of Camellia japonica and an extract of Polygonum hydropiper, in combination. Application to cosmetic and dermatological compositions for the treatment or prevention of signs of skin aging and stretch marks.
Description
1 La présente invention concerne une nouvelle composition cosmétique et/ou dermatologique destinée à assurer la protection de l'épiderme, et plus particulièrement une composition à base d'extrait de Camellia japonica présentant un effet de protection de la peau, plus particulièrement un effet de prévention et de traitement des vergetures. La peau constitue un véritable organe comprenant plusieurs couches intégrées, allant de la couche superficielle, l'épiderme, jusqu'aux couches plus profondes, le derme et l'hypoderme, et chacune possède des propriétés spécifiques permettant à l'ensemble de réagir et de s'adapter aux conditions de son environnement. L'épiderme, principalement composé de kératinocytes (90% des cellules épidermiques), de mélanocytes (2 à 3% des cellules épidermiques) et des cellules de Langerhans, a une épaisseur variable selon les différentes parties du corps. Etant donné qu'il constitue la couche externe de la peau, l'épiderme joue un rôle fondamental pour assurer la protection et le maintien d'une bonne trophicité. C'est pourquoi de nombreuses compositions ont été mises au point afin de le protéger et d'améliorer ses fonctions, et notamment de renforcer son élasticité et sa fermeté. Le derme, plus épais, solide, riche en nerfs, en vaisseaux sanguins et en glandes sudoripares, se compose principalement de collagène, d'élastine et de protéoglycanes. Ces trois types de molécules sont synthétisés par les fibroblastes dermiques. Les fibres de collagène, qui représentent 70% du poids sec du derme, assurent la résistance mécanique et la texture de la peau, l'élastine est responsable de l'élasticité, et les protéoglycanes jouent un rôle majeur de structure et d'hydratation de la peau. D'autres cellules comme les macrophages et les leucocytes sont également présentes dans la couche du derme. L'hypoderme, qui est la couche la plus profonde de la 35 peau, contient les adipocytes qui produisent des lipides pour The present invention relates to a novel cosmetic and / or dermatological composition intended to ensure the protection of the epidermis, and more particularly to a composition based on Camellia japonica extract having a protective effect on the skin, more particularly a protective effect. prevention and treatment of stretch marks. The skin is a real organ comprising several integrated layers, ranging from the superficial layer, the epidermis, to the deeper layers, the dermis and the hypodermis, and each has specific properties allowing the whole to react and adapt to the conditions of its environment. The epidermis, composed mainly of keratinocytes (90% of epidermal cells), melanocytes (2 to 3% of epidermal cells) and Langerhans cells, has a variable thickness depending on the different parts of the body. Since it constitutes the outer layer of the skin, the epidermis plays a fundamental role in ensuring the protection and maintenance of good trophicity. This is why many compositions have been developed to protect and improve its functions, including strengthening its elasticity and firmness. The dermis, thicker, solid, rich in nerves, blood vessels and sweat glands, consists mainly of collagen, elastin and proteoglycans. These three types of molecules are synthesized by dermal fibroblasts. Collagen fibers, which account for 70% of the dry weight of the dermis, provide the mechanical strength and texture of the skin, elastin is responsible for elasticity, and proteoglycans play a major role in the structure and hydration of the skin. the skin. Other cells such as macrophages and leucocytes are also present in the dermis layer. The hypodermis, which is the deepest layer of the skin, contains fat cells that produce lipids for the skin.
B10056FR 2 que le tissu sous-cutané fabrique une couche grasse protégeant les muscles, les os et les organes internes contre les chocs. La peau, et chacune de ses couches constitutives, peut subir des dégradations provoquées par des causes internes ou externes, par exemple le vieillissement et des étirements excessifs. Le vieillissement de la peau se manifeste par des signes tels que la formation de rides plus ou moins profondes et étendues, outre une perte d'élasticité et un amincissement. B10056EN 2 that the subcutaneous tissue makes a fat layer protecting muscles, bones and internal organs from shock. The skin, and each of its constituent layers, can suffer damage caused by internal or external causes, for example aging and excessive stretching. The aging of the skin is manifested by signs such as the formation of more or less deep and extensive wrinkles, in addition to a loss of elasticity and thinning.
L'apparition des premières rides est un phénomène qui peut être aggravé par des agressions physiques ou chimiques provenant de la pollution, de l'exposition aux rayons ultra-violets ou des modes de vie qui accélèrent le vieillissement cutané. The appearance of first wrinkles is a phenomenon that can be aggravated by physical or chemical aggression from pollution, exposure to ultraviolet rays or lifestyles that accelerate skin aging.
Un équilibre entre dégradation et synthèse tissulaire existe chez les sujets normaux. Ainsi, la matrice extra-cellulaire peut être dégradée par des métallo-protéinases qui se répartissent essentiellement en trois groupes principaux qui sont les collagénases, les gélatinases et stromelysines. A balance between degradation and tissue synthesis exists in normal subjects. Thus, the extracellular matrix can be degraded by metalloproteinases which are essentially divided into three main groups which are collagenases, gelatinases and stromelysins.
Par exemple, la fibroblaste collagénase (MMP-1) fait partie des collagénases, la gélatinase A (MMP-2) et la gélatinase B (MMP-9) sont des gélatinases, et la stromelysine-1 (MMP-3) et la matrilysine (MMP-7) sont des stromelysines. Un excès de métallo-protéinases entraîne une dégradation de biomolécules telles que collagène, protéoglycanne et gélatine, qui peut avoir des conséquences néfastes sur le tissu épidermique. Aussi, de nombreuses études ont été consacrées aux propriétés inhibitrices des métallo-protéinases de diverses substances. Outre le vieillissement, une autre cause de dégradation de la peau est la formation de vergetures, ou striae distensae ou striae atrophicae, qui sont des petites stries ou déchirures de forme allongée, de longueur souvent comprise entre 5 et 15 cm environ, dues à une atrophie du réseau cutané qui résiste mal à des distensions importantes auxquelles la peau peut être soumises dans des conditions particulières. 3 Cette affection de la peau se rencontre principalement chez les femmes enceintes, au niveau de l'abdomen, mais elle peut aussi apparaître chez des personnes obèses dans le cas de prise de poids rapide. Elle a longtemps été considérée comme provoquée par un effet mécanique provoquant la distension de la peau, mais on estime aujourd'hui qu'elle peut aussi être due à un hyperfonctionnement des glandes surrénales (syndrome de Cushing). Un traitement par des corticoïdes peut avoir pour effet secondaire la formation de vergetures en perturbant la biosynthèse des fibroblastes dermiques, entraînant une diminution de la formation de collagène, d'élastine et de protéoglycanes, une inhibition partielle de la synthèse de l'acide hyaluronique et du chondroitine sulfate, ainsi qu'une altération de la production de protéines. La formation des vergetures s'accompagne généralement d'un phénomène inflammatoire. Ces effets ont pour conséquence une rupture du tissu conjonctif. Les vergetures peuvent affecter des zones relativement étendues de la peau, se présentant sous forme de stries de couleur rouge violacée qui évolue avec le temps vers une couleur plus claire. Elles procurent un effet inesthétique qui peut avoir des conséquences psychologiques néfastes chez certains sujets et il est donc important de pouvoir mettre au point des traitements susceptibles de les prévenir, de les masquer ou de les éliminer. On propose parfois le traitement des vergetures au moyen d'un laser mais les résultats sont souvent peu satisfaisants. Divers traitements de nature essentiellement cosmétique, agissant sur l'épiderme, ont aussi été utilisés, afin de masquer les vergetures, par exemple au moyen de compositions à base de silicium organique, d'acides aminés tels que la proline, des huiles polyinsaturées et insaponifiables, des vitamines à action antiradicalaire, des dérivés de Centella asiatica, ou encore des dérivés d'acide rétinoïque tels que la trétinoïne, etc. Ces traitements permettent au mieux 4 d'atténuer les effets disgracieux des vergetures mais ne les font pas disparaître. Ainsi, la demande de brevet WO 0019974 décrit l'utilisation de peptides de soja et de tripeptides constitués de glycine, histidine et lysine, pour la prévention et le traitement des vergetures de la peau. Le brevet US 7429386 décrit le traitement des vergetures par administration locale de toxine botulique par voie intradermique. De nombreux extraits végétaux ont été proposés dans des compositions cosmétiques et dermatologiques susceptibles de procurer des effets utiles dans diverses applications. Par exemple, le brevet FR-A-2 848 116 décrit une composition cosmétique et/ou dermatologique à base d'extrait de Siegesbeckia agissant comme inhibiteur de métallo- protéinases matricielles, en association avec des lipopeptides pour le traitement et la prévention des rides et de la perte d'élasticité de la peau. La demande WO-A-2007/144518 décrit l'utilisation d'un extrait de graines de mimosa, provenant en particulier des espèces Acacia dealbata, Acacia farnesiana ou Acacia decurrens, qui a pour effet de favoriser fortement la synthèse des collagènes. Dans le cas du traitement des vergetures, il est souhaitable de disposer de plantes susceptibles d'avoir une activité générale sur les radicaux libres, sur la protection de la matrice extra-cellulaire (les métalloprotéinases) et sur la protection de l'élastine (effet anti-élastasique). Une telle activité peut en effet annihiler une des principales causes de la formation des vergetures rappelées ci-dessus tout en renforçant l'élasticité et la fermeté de la peau. For example, collagenase fibroblast (MMP-1) is a collagenase, gelatinase A (MMP-2) and gelatinase B (MMP-9) are gelatinases, and stromelysin-1 (MMP-3) and matrilysin (MMP-7) are stromelysins. Excess metallo-proteinases cause degradation of biomolecules such as collagen, proteoglycan and gelatin, which can have adverse effects on epidermal tissue. Also, many studies have been devoted to the inhibitory properties of metalloproteinases of various substances. In addition to aging, another cause of skin degradation is the formation of stretch marks, or striae distensae or striae atrophicae, which are small streaks or tears of elongated shape, often between 5 and 15 cm long, due to atrophy of the cutaneous network which does not withstand important distensions to which the skin can be subjected in particular conditions. 3 This skin condition is mainly found in pregnant women in the abdomen, but it can also occur in obese people in the case of rapid weight gain. It has long been considered as caused by a mechanical effect causing the distention of the skin, but it is now estimated that it may also be due to hyperfunctioning of the adrenal glands (Cushing's syndrome). Treatment with corticosteroids may result in the formation of stretch marks by disrupting the biosynthesis of dermal fibroblasts, resulting in a decrease in collagen, elastin and proteoglycan formation, partial inhibition of hyaluronic acid synthesis, and chondroitin sulfate, as well as impaired protein production. The formation of stretch marks is usually accompanied by an inflammatory phenomenon. These effects result in rupture of the connective tissue. Stretch marks can affect relatively large areas of the skin, appearing as purplish-red streaks that evolve over time to a lighter color. They provide an unsightly effect that can have negative psychological consequences in some subjects and it is therefore important to be able to develop treatments that can prevent, mask or eliminate them. It is sometimes proposed to treat stretch marks with a laser but the results are often unsatisfactory. Various treatments of essentially cosmetic nature, acting on the epidermis, have also been used, in order to mask stretch marks, for example by means of compositions based on organic silicon, amino acids such as proline, polyunsaturated and unsaponifiable oils. vitamins with antiradical action, derivatives of Centella asiatica, or retinoic acid derivatives such as tretinoin, etc. These treatments at best 4 mitigate the unsightly effects of stretch marks but do not make them disappear. Thus, patent application WO 0019974 describes the use of soy peptides and tripeptides consisting of glycine, histidine and lysine, for the prevention and treatment of stretch marks of the skin. US Pat. No. 7,429,386 describes the treatment of stretch marks by local administration of botulinum toxin intradermally. Many plant extracts have been proposed in cosmetic and dermatological compositions capable of providing effects useful in various applications. For example, FR-A-2 848 116 discloses a cosmetic and / or dermatological composition based on Siegesbeckia extract acting as an inhibitor of matrix metalloproteinases, in combination with lipopeptides for the treatment and prevention of wrinkles and loss of elasticity of the skin. The application WO-A-2007/144518 describes the use of a mimosa seed extract, in particular from the Acacia dealbata, Acacia farnesiana or Acacia decurrens species, which has the effect of strongly promoting the synthesis of collagens. In the case of treatment of stretch marks, it is desirable to have plants likely to have a general activity on free radicals, on the protection of the extracellular matrix (metalloproteinases) and on the protection of elastin (effect anti-elastase). Such activity can indeed annihilate one of the main causes of the formation of stretch marks mentioned above while strengthening the elasticity and firmness of the skin.
Camellia japonica, communément dénommé camélia, est une plante de la famille des théaceaes originaire de l'Asie de l'est et du sud-est, notamment le Japon, la Corée et la Chine, se présentant sous forme d'un arbuste pouvant atteindre 6 à 7 m. Parmi les nombreuses espèces du genre Camellia, Camellia japonica est bien connue pour la qualité et la beauté de ses fleurs de couleur rouge ou rose. En médecine traditionnelle chinoise, les graines de Camellia japonica ont été utilisées pour leur activité anti-inflammatoire, et les fleurs pour leur effet hémostatique dans le traitement de l'hématémèse. Des études ont montré la présence de saponines dans les fruits et 5 les graines, de triterpénoïdes dans les racines, et de glucosides de flavonol dans les feuilles, présentant des propriétés anti-oxydantes, comme décrit par K. Onodera et al., Biosc. Biotech. Biochem. 70, 1995-1998 (2006). La plante est également riche en polyphénols et contient une essence aromatique. L'activité anti-herpétique de feuilles de Camellia japonica est décrite dans US 5.411.733. Polygonum hydropiper, communément dénommé poivre d'eau, est une plante de la famille des polygonacées riche en tanins et dérivés flavoniques. Elle contient aussi une huile essentielle et des aldéhydes sesquiterpéniques qui lui confèrent sa saveur brûlante justifiant sa dénomination commune de poivre d'eau. Elle a été décrite comme ayant une activité hémostatique, diurétique et hypotenseur. Des extraits de racine de Polygonum hydropiper auraient une activité contre la fertilité, comme écrit par S.K. Garg et al., J. Reprod. Fert. 29, 521-423 (1972). Bien que de nombreuses compositions dermatologiques et cosmétiques aient été proposées, il existe toujours un besoin de pouvoir disposer de nouvelles compositions topiques alternatives permettant de protéger la peau en luttant efficacement contre les signes du vieillissement cutané et contre les vergetures, et notamment des compositions topiques à base d'extraits végétaux appropriés provenant plus particulièrement de plantes connues pour leurs propriétés favorables à une telle activité. Les études effectuées par la demanderesse ont montré qu'il est possible de protéger l'épiderme et d'agir effica- cement contre les signes du vieillissement cutané et contre les vergetures, en utilisant des compositions topiques à base d'extraits d'une plante de l'espèce Camellia japonica, additionnées d'extraits d'une plante de l'espèce Polygonum 6 hydropiper. En effet, les études ont montré que les extraits de Camellia japonica possèdent une action efficace contre les rides de vieillissement cutané et contre les vergetures, tant préventive que curative, et que cette action se trouve potentialisée par l'addition d'extraits végétaux provenant de Polygonum hydropiper. Les compositions de l'invention se distinguent en ce qu'elles comprennent un extrait d'une plante de l'espèce Camellia japonica en association avec un extrait d'une plante de l'espèce Polygonum hydropiper en une quantité efficace pour procurer une protection de l'épiderme contre les signes du vieillissement cutané et contre les vergetures, ainsi que des supports et excipients acceptables en dermatologie et en cosmétologie. Camellia japonica, commonly known as camellia, is a plant of the family Theaceae native to East and Southeast Asia, including Japan, Korea and China, in the form of a shrub that can reach 6 to 7 m. Among the many species of the genus Camellia, Camellia japonica is well known for the quality and beauty of its red or pink flowers. In traditional Chinese medicine, the seeds of Camellia japonica have been used for their anti-inflammatory activity, and the flowers for their haemostatic effect in the treatment of hematemesis. Studies have shown the presence of saponins in fruits and seeds, triterpenoids in the roots, and flavonol glycosides in the leaves, exhibiting antioxidant properties, as described by K. Onodera et al., Biosc. Biotech. Biochem. 70, 1995-1998 (2006). The plant is also rich in polyphenols and contains an aromatic essence. The anti-herpes activity of Camellia japonica leaves is described in US 5,411,733. Polygonum hydropiper, commonly known as water pepper, is a plant of the family of polygonaceae rich in tannins and flavonic derivatives. It also contains an essential oil and sesquiterpene aldehydes which give it its burning flavor justifying its common name of water pepper. It has been described as having hemostatic, diuretic and hypotensive activity. Polygonum hydropiper root extracts would have activity against fertility, as written by S.K. Garg et al., J. Reprod. Fert. 29, 521-423 (1972). Although numerous dermatological and cosmetic compositions have been proposed, there is still a need to be able to have new alternative topical compositions that make it possible to protect the skin by effectively combating the signs of cutaneous aging and against stretch marks, and in particular topical compositions with base of appropriate plant extracts derived more particularly from plants known for their favorable properties for such activity. The studies carried out by the applicant have shown that it is possible to protect the epidermis and to act effectively against the signs of skin aging and against stretch marks, by using topical compositions based on extracts of a plant. of the species Camellia japonica, supplemented with extracts of a plant of the species Polygonum 6 hydropiper. Studies have shown that extracts of Camellia japonica have an effective action against wrinkles of skin aging and against stretch marks, both preventive and curative, and that this action is potentiated by the addition of plant extracts from Polygonum hydropiper. The compositions of the invention are distinguished in that they comprise an extract of a plant of the species Camellia japonica in association with an extract of a plant of the species Polygonum hydropiper in an amount effective to provide a protection of the epidermis against the signs of skin aging and against stretch marks, as well as acceptable carriers and excipients in dermatology and cosmetology.
La présente invention a donc pour objet une nouvelle composition cosmétique et/ou dermatologique à base de Camellia japonica, et plus particulièrement à base d'extrait de Camellia japonica, en association avec des extraits de Polygonum hydropiper. The subject of the present invention is therefore a new cosmetic and / or dermatological composition based on Camellia japonica, and more particularly based on Camellia japonica extract, in association with extracts of Polygonum hydropiper.
Une telle composition présente d'excellentes propriétés utilisables en cosmétique et en dermatologie pour la protection de la peau, non seulement contre les signes du vieillissement cutané mais aussi contre les vergetures. La présente invention a également pour objet une composition topique à base de l'association d'un extrait de Camellia japonica et d'un extrait de Polygonum hydropiper pour la prévention et le traitement des signes du vieillissement cutané et des vergetures. La présente invention a encore pour objet un procédé cosmétique non thérapeutique pour prévenir et combattre les signes du vieillissement cutané et les vergetures de la peau, consistant à appliquer sur les zones de la peau concernées une composition topique contenant une quantité efficace de l'association d'extrait de Camellia japonica et d'extrait de Polygonum hydropiper selon la présente invention. 7 L'invention a également pour objet une composition pharmaceutique à base d'un extrait de Camellia japonica et d'un extrait de Polygonum hydropiper pour la protection de l'épiderme et plus particulièrement la prévention et le traitement des vergetures. Les compositions suivant la présente invention se distinguent en ce qu'elles comprennent un extrait de Camellia japonica en association avec un extrait de Polygonum hydropiper en une quantité efficace pour procurer une protection de la peau, ainsi que des supports et excipients acceptables en dermatologie et en cosmétologie. Ainsi, les compositions topiques de l'invention à base d'extraits de Camellia japonica et d'extrait de Polygonum hydropiper peuvent être utilisées avantageusement en dermatologie et en cosmétologie pour le traitement ou la prévention des signes du vieillissement cutané et des vergetures. Les essais effectués par la demanderesse ont montré que, parmi les diverses parties de la plante, il est préférable d'utiliser les parties aériennes et en particulier les feuilles. L'espèce Camellia japonica est facilement disponible et la conservation des feuilles ne soulève généralement pas de difficulté technique. Les extraits de Camellia japonica utilisés dans les compositions suivant la présente invention sont de préférence obtenus sous forme d'extrait aqueux provenant des parties aériennes de la plante préalablement séchées, broyées en poudre fine que l'on laisse macérer dans de l'eau pendant environ 12 à 14 heures. Such a composition has excellent properties used in cosmetics and dermatology for the protection of the skin, not only against the signs of skin aging but also against stretch marks. The present invention also relates to a topical composition based on the combination of an extract of Camellia japonica and an extract of Polygonum hydropiper for the prevention and treatment of signs of skin aging and stretch marks. The present invention also relates to a non-therapeutic cosmetic method for preventing and combating the signs of skin aging and stretch marks on the skin, comprising applying to the areas of the skin concerned a topical composition containing an effective amount of the combination of extract of Camellia japonica and Polygonum hydropiper extract according to the present invention. The invention also relates to a pharmaceutical composition based on an extract of Camellia japonica and an extract of Polygonum hydropiper for the protection of the epidermis and more particularly the prevention and treatment of stretch marks. The compositions according to the present invention are distinguished in that they comprise an extract of Camellia japonica in combination with an extract of Polygonum hydropiper in an amount effective to provide protection of the skin, as well as acceptable carriers and excipients in dermatology and cosmetology. Thus, the topical compositions of the invention based on extracts of Camellia japonica and extract of Polygonum hydropiper can be advantageously used in dermatology and cosmetology for the treatment or prevention of signs of skin aging and stretch marks. The tests carried out by the applicant have shown that among the various parts of the plant, it is preferable to use the aerial parts and in particular the leaves. The species Camellia japonica is readily available and leaf conservation does not usually raise technical difficulties. The extracts of Camellia japonica used in the compositions according to the present invention are preferably obtained in the form of an aqueous extract from the aerial parts of the plant previously dried, crushed to a fine powder that is left to macerate in water for about 12 to 14 hours.
Suivant une forme avantageuse de réalisation, l'extrait utilisable dans l'invention est obtenu par macération à partir de feuilles de Camellia japonica broyées et réduites en poudre laissée macérer dans de l'eau dans un rapport poudre/eau de 40% en poids. Le produit est ensuite décanté, exprimé puis filtré. 8 L'extrait aqueux de Camellia japonica se présente sous la forme d'un liquide de couleur jaune à ambré, d'odeur caractéristique, soluble dans l'eau et dans l'éthanol, se caractérisant par : pH compris entre 3,4 - 4,0 densité 0,990 - 1,050 indice de réfraction 1,325 - 1,345 matière sèche (%) 0,5 - 2,5 polyphénols (%/matière sèche) 1,7 La quantité de polyphénols pour 100 g d'extrait est comprise entre 0,0085 et 0,0425. Les extraits de Polygonum hydropiper utilisés dans l'invention sont obtenus à partir des parties aériennes de la plante, de préférence sous forme d'extraits aqueux après macération de la plante préalablement séchée et broyée. Suivant une forme préférentielle de réalisation, on utilise les sommités (feuilles et tiges) ou les feuilles de Polygonum hydropiper, qui sont séchées, broyées et réduites en poudre que l'on fait macérer dans l'eau, le rapport poudre / eau étant de 40%, environ 24 heures. Après décantation, expression et filtration, le filtrat est atomisé et la poudre obtenue est diluée à 50% avec de la maltodextrine. L'extrait aqueux de Polygonum hydropiper se présente sous la forme d'une poudre de couleur beige à brun, d'odeur 25 caractéristique, soluble dans l'eau, se caractérisant par : pH (solution 1%) entre 4,9 - 6,9 densité 0,990 - 1,050 indice de réfraction 1,325 - 1,345 matière sèche (%) 0,5 - 2,5 30 acide gallique (HPLC) présence polyphénols (%/matière sèche) 4,4 Les extraits utilisés dans les compositions de l'invention sont de l'ordre de 0,05 à 2,0% pour le Polygonum hydropiper et 0,1 à 10,0% pour Camellia japonica par rapport 35 au poids total de la composition. Les extraits peuvent être mélangés pour être incorporés dans la composition et la 9 quantité de mélange utilisée est généralement comprise entre 0,1 et 12% en poids par rapport au poids total de la composition. Les extraits de feuilles de Camellia japonica et les extraits de Polygonum hydropiper inclus dans les compositions suivant la présente invention ont montré dans des tests in vitro des effets de protection de l'épiderme, et plus particulièrement . - une activité sur les métalloprotéinases montrant un 10 effet protecteur et régénérant sur le collagène et l'élastine ; - une activité anti-élastase significative, impliquant une protection de l'élastine assurant une plus grande fermeté de la peau et une protection contre les vergetures ; 15 - un effet anti-radicalaire important assurant une protection efficace des cellules contre les effets de stress. Les tests ont été effectués en utilisant des échantillons dosés à 0,5% d'extrait de Polygonum piper, 5% de Camellia japonica, et une association des deux extraits, sur des 20 fibroblastes humains en culture et sur des épidermes reconstitués (Skinethic®) . Les résultats, détaillés ci-après, ont mis en évidence l'effet protecteur sans effet secondaire néfaste, et en particulier . 25 - un effet significatif, potentialisé par l'association des deux extraits, sur l'expression des métalloprotéinases 1 (MMP1), 2 (MMP2) et 9 (MMP9) permettant de stimuler la régénération du collagène et de l'élastine ; - un effet important de réduction de l'élastase au niveau 30 des fibroblastes humains en culture, avec une potentialisation de l'effet par l'association des deux extraits, montrant l'effet de protection contre les vergetures ; - un effet anti-radicalaire aussi bien dans des conditions physiologiques que dans des conditions d'induction 35 par l'hypoxanthine / xanthine oxydase, montrant l'efficacité 10 sur la protection des cellules cutanées sous l'effet du stress qui est un facteur déclenchant de la formation des vergetures. Les résultats sont explicités dans les exemples ci-après. Les compositions selon l'invention peuvent contenir, outre un extrait de feuilles de Camellia japonica et un extrait de Polygonum hydropiper, des actifs secondaires complétant avantageusement leur activité, et compatibles, c'est-à-dire non susceptibles de réagir les uns sur les autres ou de masquer ou limiter leurs effets respectifs. Plus particulièrement, les actifs secondaires peuvent être choisis parmi un extrait de graines de mimosa et un extrait de graines de souci agissant favorablement sur la stimulation des collagènes néoformés, de la Centella asiatica, du monométhylsilanol, de la proline, ou encore du beurre de Karité. According to an advantageous embodiment, the extract that can be used in the invention is obtained by maceration from crushed and reduced Camellia japonica leaves into a powder which is left to macerate in water in a powder / water ratio of 40% by weight. The product is then decanted, expressed and filtered. The aqueous extract of Camellia japonica is in the form of a yellow to amber colored liquid with a characteristic odor, soluble in water and in ethanol, characterized by: 4.0 density 0.990 - 1.050 refractive index 1.325 - 1.345 dry matter (%) 0.5 - 2.5 polyphenols (% / dry matter) 1.7 The amount of polyphenols per 100 g of extract is between 0, 0085 and 0.0425. The extracts of Polygonum hydropiper used in the invention are obtained from the aerial parts of the plant, preferably in the form of aqueous extracts after maceration of the previously dried and ground plant. According to a preferred embodiment, the tips (leaves and stems) or the leaves of Polygonum hydropiper are used, which are dried, crushed and reduced to powder which is macerated in water, the powder / water ratio being 40%, about 24 hours. After decantation, expression and filtration, the filtrate is atomized and the powder obtained is diluted to 50% with maltodextrin. The aqueous extract of Polygonum hydropiper is in the form of a beige-to-brown powder of characteristic odor, soluble in water, characterized by: pH (1% solution) between 4.9 - 6 , 9 density 0.990 - 1.050 refractive index 1.325 - 1.345 dry matter (%) 0.5 - 2.5 gallic acid (HPLC) polyphenol presence (% / dry matter) 4.4 The extracts used in the compositions of the The invention is in the range of 0.05 to 2.0% for Polygonum hydropiper and 0.1 to 10.0% for Camellia japonica based on the total weight of the composition. The extracts may be mixed for incorporation into the composition and the amount of the mixture used is generally from 0.1 to 12% by weight based on the total weight of the composition. The extracts of Camellia japonica leaves and the extracts of Polygonum hydropiper included in the compositions according to the present invention have shown, in vitro tests, protective effects of the epidermis, and more particularly. an activity on metalloproteinases showing a protective and regenerating effect on collagen and elastin; a significant anti-elastase activity, implying protection of elastin ensuring greater firmness of the skin and protection against stretch marks; An important anti-radical effect ensuring effective protection of the cells against the effects of stress. The tests were performed using samples assayed at 0.5% Polygonum piper extract, 5% Camellia japonica, and a combination of both extracts, on human fibroblasts in culture and on reconstituted epidermis (Skinethic®). ). The results, detailed below, have shown the protective effect without harmful side effects, and in particular. A significant effect, potentiated by the combination of the two extracts, on the expression of metalloproteinases 1 (MMP1), 2 (MMP2) and 9 (MMP9) for stimulating the regeneration of collagen and elastin; a significant effect of reducing elastase at the level of human fibroblasts in culture, with a potentiation of the effect by the combination of the two extracts, showing the effect of protection against stretch marks; an anti-radical effect both under physiological conditions and under conditions of induction by hypoxanthine / xanthine oxidase, showing the efficacy on the protection of cutaneous cells under the effect of stress which is a triggering factor of the formation of stretch marks. The results are explained in the examples below. The compositions according to the invention may contain, in addition to an extract of Camellia japonica leaves and an extract of Polygonum hydropiper, secondary active agents which advantageously complement their activity, and which are compatible, that is to say, not capable of reacting on each other. others or to mask or limit their respective effects. More particularly, the secondary active agents may be chosen from a mimosa seed extract and a marigold extract that act favorably on the stimulation of neoformed collagens, Centella asiatica, monomethylsilanol, proline, or shea butter. .
La composition selon l'invention peut comprendre par exemple entre 0,1 et 2% en poids d'extrait de Polygonum piper, entre 0,1 et 6% en poids d'extrait de Camellia japonica, et, le cas échéant, entre 1 et 5% en poids d'extrait de graines de mimosa et/ou entre 2 et 6% en poids de Centella asiatica, et/ou entre 0,5 et 2% en poids de monométhylsilanol et de proline par rapport au poids total de la composition. Suivant une forme préférentielle, ces concentrations sont respectivement de 0,2 à 1% en poids d'extrait de Polygonum hydropiper, 1 à 6% en poids d'extrait de Camellia japonica, 2 à 5% en poids d'extrait de graines de mimosa et entre 3 et 5% en poids de Centella asiatica par rapport au poids total de la composition. Comme indiqué ci-dessus, les compositions de l'invention peuvent comprendre entre 0,1% et 10% en poids d'extrait de feuilles de Camellia japonica, tel que défini ci-dessus, par rapport au poids total de la composition, et de préférence entre 1 et 6% en poids. La concentration en extrait de Polygonum hydropiper est comprise généralement entre 0,05 et 2,0%, et de préférence entre 0,1 et 1,0%. The composition according to the invention may comprise, for example, between 0.1 and 2% by weight of Polygonum piper extract, between 0.1 and 6% by weight of Camellia japonica extract, and, where appropriate, between 1 and and 5% by weight of mimosa seed extract and / or between 2 and 6% by weight of Centella asiatica, and / or between 0.5 and 2% by weight of monomethylsilanol and proline relative to the total weight of the composition. In a preferred form, these concentrations are respectively from 0.2 to 1% by weight of Polygonum hydropiper extract, from 1 to 6% by weight of Camellia japonica extract, from 2 to 5% by weight of seed extract. mimosa and between 3 and 5% by weight of Centella asiatica with respect to the total weight of the composition. As indicated above, the compositions of the invention may comprise between 0.1% and 10% by weight of Camellia japonica leaf extract, as defined above, relative to the total weight of the composition, and preferably between 1 and 6% by weight. The concentration of Polygonum hydropiper extract is generally between 0.05 and 2.0%, and preferably between 0.1 and 1.0%.
Le choix de la concentration en chacun des composants dans la composition peut être fait en fonction de l'utili- 11 sation envisagée. Pour un traitement protecteur prolongé, on utilise de préférence des doses plus faibles, sous forme de lait ou de crème dosée à environ 1 à 6% (total des deux composants), tandis qu'un traitement ponctuel peut nécessiter des doses plus élevées, par exemple un sérum dosé entre 6 et 12%, où, de préférence, les doses d'extraits de Camellia japonica et de Polygonum hydropiper sont plus élevées. Ainsi, ces compositions topiques peuvent être utilisées avantageusement en dermatologie et en cosmétologie pour le traitement ou la prévention des signes du vieillissement cutané ainsi que pour la prévention et le traitement des vergetures. L'association d'extrait de Camellia japonica, d'extrait de Polygonum hydropiper suivant la présente invention, complétée le cas échéant par des extraits de graines de mimosa et des extraits de Centella asiatica comme indiqué ci-dessus, utilisée dans des conditions normales d'emploi pendant 20 à 30 jours consécutifs, pour traiter des vergetures, a démontré une excellente tolérance cutanée. The choice of the concentration of each of the components in the composition can be made according to the use envisaged. For prolonged protective treatment, lower doses, in the form of milk or cream dosed at about 1 to 6% (total of the two components), are preferably used, while spot treatment may require higher doses, for example for example a serum dosed between 6 and 12%, where, preferably, the doses of extracts of Camellia japonica and Polygonum hydropiper are higher. Thus, these topical compositions can be used advantageously in dermatology and cosmetology for the treatment or prevention of signs of skin aging as well as for the prevention and treatment of stretch marks. The combination of Camellia japonica extract and Polygonum hydropiper extract according to the present invention, supplemented if necessary by extracts of mimosa seeds and extracts of Centella asiatica as indicated above, used under normal conditions. use for 20 to 30 consecutive days, to treat stretch marks, has demonstrated excellent skin tolerance.
Les compositions conformes à la présente invention peuvent être présentées sous les formes galéniques classiquement utilisées pour une application topique, c'est-à-dire sous forme de lotion, gel, émulsion (en particulier crème ou lait), masque, pommade, nanocapsules, liposomes ou encore des patches transdermiques, contenant des excipients et supports usuels compatibles et pharmaceutiquement acceptables. Elles sont utilisées de préférence sous forme de crèmes, lait sérum et lotion. Ces formes d'administration par voie topique sont préparées par les techniques usuelles, et par exemple, dans le cas d'une crème, par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse pour obtenir une émulsion huile dans eau, ou inversement pour préparer une émulsion eau dans huile. Dans le cas de crèmes, on préfère utiliser des émulsions à structure lamellaire contenant peu de produits éthoxylés ou n'en contenant pas du tout. 12 Dans le cas des nanocapsules et des liposomes, il peut être avantageux d'utiliser un extrait aqueux de préférence à un extrait hydroglycolique. Les compositions topiques selon l'invention peuvent comprendre des excipients appropriés pour une administration topique externe, en particulier des excipients acceptables sur le plan dermatologique et cosmétologique. Ces excipients appropriés pour la formulation sont bien connus de l'homme du métier et comprennent en particulier des agents de pénétration tels que l'éthoxydiglycol, le phytantriol, l'octyl dodécanol et l'escine ; les épaississants tels que les gommes naturelles et les polymères de synthèse ; les émollients et les tensio-actifs tels que l'octanoate de cétéaryle, le myristate d'isopropyle, l'isononanoate de cétéaryle, la diméthicone, la cyclométhicone, le 3-diisostéarate de polyglycéryle, le polyisobutène hydrogéné, l'alcool cétylique, le palmitate cétylique, le phosphate cétylique ; les émulsifiants ; les conservateurs tels que le phénoxyéthanol, le parahydroxybenzoate de méthyle (méthylparaben), le parahydroxybenzoate d'éthyle (éthylparaben) et le Phenonip® associant du phénoxyéthanol et des parahydroxybenzoates ; les colorants ; les parfums ; etc. D'autres ingrédients peuvent être utilisés dans les compositions : les agents hydratants tels que le propylène glycol, la glycérine, le butylène glycol, le sel de sodium de l'acide pyrrolidone carboxylique (sodium PCA), et également les vitamines antioxydantes telles que la vitamine E, par exemple l'acétate de tocophérol ou le tocotriénol, la vitamine C, les polyphénols naturels. On peut également ajouter à la composition des agents conditionneurs de la peau tels que le nylon et le nitrure de bore, ainsi que des agents de protection contre les rayons ultraviolets, et par exemple des filtres solaires UV-A et UV-B hydrophiles ou lipophiles, choisis parmi la benzophénone ou un dérivé de benzophénone tel que la 2-hydroxy-4-méthoxy-benzophénone (Eusolex® 4360), ou un ester d'acide cinnamique et plus particulièrement le méthoxycinnamate d'octyle (Eusolex® 2292), le méthoxycinnamate 13 d'éthyl-2-hexyle (Parsol MCXO), ou encore un cyano-(3,P-diphénylacrylate tel que l'octocrylène (Eusolex® OCR), le 4-méthylbenzylidène camphre (Eusolex 6300®), et des dérivés du dibenzoylméthane tels que le 4-isopropyl dibenzoylméthane (Eusolex 8020), le t-butyl-méthoxy dibenzoylméthane (Parsol 1789®), et le 4-méthoxy-dibenzoylméthane. On peut aussi utiliser des pigments formant écran anti-ultraviolet, comme par exemple le dioxyde de titane, l'oxyde de zinc, l'oxyde de zirconium ou encore l'oxyde d'aluminium. The compositions in accordance with the present invention may be presented in the galenical forms conventionally used for topical application, that is to say in the form of a lotion, gel, emulsion (in particular cream or milk), mask, ointment, nanocapsules, liposomes or transdermal patches, containing compatible and pharmaceutically acceptable excipients and common carriers. They are preferably used in the form of creams, milk serum and lotion. These forms of topical administration are prepared by the usual techniques, and for example, in the case of a cream, by dispersion of a fatty phase in an aqueous phase to obtain an oil-in-water emulsion, or conversely to prepare a water-in-oil emulsion. In the case of creams, it is preferred to use lamellar structure emulsions containing little or no ethoxylated products. In the case of nanocapsules and liposomes, it may be advantageous to use an aqueous extract, preferably a hydroglycolic extract. The topical compositions according to the invention may comprise excipients suitable for external topical administration, in particular dermatologically and cosmetologically acceptable excipients. These excipients suitable for the formulation are well known to those skilled in the art and include in particular penetrating agents such as ethoxydiglycol, phytantriol, octyl dodecanol and escin; thickeners such as natural gums and synthetic polymers; emollients and surfactants such as cetearyl octanoate, isopropyl myristate, cetearyl isononanoate, dimethicone, cyclomethicone, polyglyceryl 3-diisostearate, hydrogenated polyisobutene, cetyl alcohol, cetyl palmitate, cetyl phosphate; emulsifiers; preservatives such as phenoxyethanol, methyl parahydroxybenzoate (methylparaben), ethyl parahydroxybenzoate (ethylparaben) and Phenonip® associating phenoxyethanol and parahydroxybenzoates; dyes; the perfumes ; etc. Other ingredients may be used in the compositions: moisturizing agents such as propylene glycol, glycerin, butylene glycol, sodium salt of pyrrolidone carboxylic acid (PCA sodium), and also antioxidant vitamins such as vitamin E, for example tocopherol acetate or tocotrienol, vitamin C, natural polyphenols. It is also possible to add skin conditioning agents such as nylon and boron nitride to the composition, as well as agents for protecting against ultraviolet rays, and for example hydrophilic or lipophilic UV-A and UV-B sunscreens. , chosen from benzophenone or a benzophenone derivative such as 2-hydroxy-4-methoxy-benzophenone (Eusolex® 4360), or a cinnamic acid ester and more particularly octyl methoxycinnamate (Eusolex® 2292), 2-ethylhexyl methoxycinnamate 13 (Parsol MCXO), or a cyano- (3, P-diphenylacrylate such as octocrylene (Eusolex® OCR), 4-methylbenzylidene camphor (Eusolex 6300®), and derivatives thereof. dibenzoylmethane such as 4-isopropyl dibenzoylmethane (Eusolex 8020), t-butyl-methoxy dibenzoylmethane (Parsol 1789®), and 4-methoxy-dibenzoylmethane can also be used as anti-ultraviolet screen pigments, for example titanium dioxide, zinc oxide, zirconium oxide or aluminum oxide.
Les exemples suivants illustrent l'invention plus en détail sans en limiter la portée. Dans tous les exemples de compositions qui suivent, les parties sont exprimées en poids, sauf indication contraire. The following examples illustrate the invention in more detail without limiting its scope. In all of the following examples of compositions, parts are by weight unless otherwise indicated.
Exemple 1 Suivant les techniques classiques, on prépare un lait anti-vergeture ayant la composition pondérale suivante. Phase A Huile d'amandes douces 2,00 Beurre de karité 2,00 Octyldodécanol 2,00 PEG 6/32 stéarate 5,00 Capryl/caprique triglycérides 5,00 Tocophérol 0,50 Ester glycérique de Vitamine F 1,00 Undécylénate de glycéryle 0,50 Phase B Eau déminéralisée qsp 100,00 Pentylène glycol 5,00 Acide anisique 0,10 Monométhylsilanol 1,00 Hydroxyproline 0,50 Gomme xanthane 0,50 Extrait de Camellia japonica 5,00 Extrait de Centella asiatica 5,00 Extrait de Polygonum hydropiper (sec) Parfums 0,50 0,50 L'extrait de Camellia japonica utilisé dans la composition ci-dessus est un extrait aqueux obtenu par traitement de feuilles broyées et réduites en poudre. L'extrait de Polygonum hydropiper est un extrait sec. La phase grasse A est chauffée à 70-75°C tandis que la phase aqueuse B est chauffée à 75°C, puis les deux phases sont mélangées soigneusement sous agitation. Les extraits et les parfums sont ajoutés au mélange à la température de 40°C et le pH est ajusté à 6,2 par addition de potasse ou d'acide citrique. Le lait ayant la composition indiquée ci-dessus peut être utilisé en application sur les vergetures, une à deux fois par 15 jour. Example 1 According to conventional techniques, an anti-stretch mark milk having the following weight composition is prepared. Phase A Sweet almond oil 2.00 Shea butter 2.00 Octyldodecanol 2.00 PEG 6/32 stearate 5.00 Capryl / capric triglycerides 5.00 Tocopherol 0.50 Glycerol ester of Vitamin F 1.00 Glyceryl undecylenate 0.50 Phase B Demineralised water qs 100.00 Pentylene glycol 5.00 Anisic acid 0.10 Monomethylsilanol 1.00 Hydroxyproline 0.50 Xanthan gum 0.50 Camellia japonica extract 5.00 Centella asiatica extract 5.00 Extract from Polygonum hydropiper (dry) Fragrances 0.50 0.50 The extract of Camellia japonica used in the above composition is an aqueous extract obtained by treatment of crushed leaves and reduced to powder. The extract of Polygonum hydropiper is a dry extract. The fatty phase A is heated to 70-75 ° C while the aqueous phase B is heated to 75 ° C, then the two phases are thoroughly mixed with stirring. The extracts and perfumes are added to the mixture at a temperature of 40 ° C and the pH is adjusted to 6.2 by adding potassium hydroxide or citric acid. The milk having the composition indicated above can be used in application on stretch marks, once or twice a day.
Exemple 2 Suivant les techniques classiques, on prépare une lotion raffermissante ayant la composition pondérale suivante. Eau déminéralisée qsp 100,00 20 Carboxy vinyl polymère 0,20 Pentylène glycol 5,00 Butylène glycol-1,3 2,50 Extrait de Centella asiatica 5,00 Extrait de Camellia japonica 3,00 25 Extrait de Polygonum hydropiper 0,20 Proline 1,00 Amandate de polyglycéryl-10 2,50 Acide levulinique et levulinate de sodium 0,60 Parfums 0,10 30 La lotion est préparée en réalisant le gel de polymère dans l'eau, en neutralisant et en ajoutant le reste des composants à froid. Example 2 According to conventional techniques, a firming lotion having the following weight composition is prepared. Demineralised water qs 100.00 20 Carboxy vinyl polymer 0.20 Pentylene glycol 5.00 Butylene glycol-1.3 2.50 Centella asiatica extract 5.00 Camellia japonica extract 3.00 25 Polygonum hydropiper extract 0.20 Proline 1.00 Polyglyceryl-10 Amandate 2.50 Levulinic Acid and Sodium Levulinate 0.60 Perfumes 0.10 The lotion is prepared by making the polymer gel in water, neutralizing and adding the remaining components to cold.
Exemple 3 Suivant une technique usuelle, on prépare une crème raffermissante ayant la composition pondérale suivante. Phase A Eau déminéralisée qsp 100,00 Tetrasodium glutamate diacétate (sol) 0,10 Pentylène glycol 5,00 Gomme de sclerotium et gomme xanthane 0,20 Alcools C12-C16 et acide palmitique 5,00 et lécithine hydrogénée Phase B Tocophérol 0,50 Capryl/caprique triglycérides 5,00 Squalane 8,00 Octyl dodécanol 5,00 Alcool béhénylique 2,00 Ethyl hexyl glycérine 0,30 Palmitoyl proline 1,00 Phase C Eau déminéralisée 10,00 Matrixyl 3000 1,00 Monométhylsilanol 2,00 Madécassoside 0,20 Extrait de Polygonum hydropiper 0,50 Extrait de Camellia japonica 5,00 Sodium PCA 1,00 Phase D Silicate de magnésium 0,50 Phase E Parfums 0,10 La lécithine hydrogénée est hydratée dans l'eau à 75°C puis les autres ingrédients de la phase A sont ajoutés et mélangés. La phase B, préalablement homogénéisée sous turbine refroidie, est ajoutée à 78°C, puis les autres phases sont ajoutées successivement à 40°C, l'ensemble est mélangé et refroidi progressivement. 16 La crème ayant la composition indiquée ci-dessus est utilisée en application sur le visage, une fois par jour au coucher pendant une période de 1 à 3 mois. Example 3 According to a conventional technique, a firming cream having the following weight composition is prepared. Phase A Demineralized water qs 100.00 Tetrasodium glutamate diacetate (sol) 0.10 Pentylene glycol 5.00 Sclerotium gum and xanthan gum 0.20 C12-C16 alcohols and palmitic acid 5.00 and hydrogenated lecithin Phase B Tocopherol 0.50 Capryl / capric triglycerides 5.00 Squalane 8.00 Octyl dodecanol 5.00 Behenyl alcohol 2.00 Ethyl hexyl glycerin 0.30 Palmitoyl proline 1.00 Phase C Demineralized water 10.00 Matrixyl 3000 1.00 Monomethylsilanol 2.00 Madecassoside 0 , 20 Polygonum hydropiper extract 0.50 Camellia japonica extract 5.00 Sodium PCA 1.00 Phase D Magnesium silicate 0.50 Phase E Perfumes 0.10 Hydrogenated lecithin is hydrated in water at 75 ° C and then other ingredients of phase A are added and mixed. Phase B, previously homogenized under a cooled turbine, is added at 78 ° C., then the other phases are successively added at 40 ° C., the mixture is mixed and cooled progressively. The cream having the composition indicated above is used in application on the face, once a day at bedtime for a period of 1 to 3 months.
Exemple 4 L'étude in vitro des effets des extraits de Camellia japonica et de Polygonum hydropiper utilisés dans la présente invention sur la protection de l'épiderme a été faite sur des fibroblastes humains en culture et sur des épidermes reconstitués (Skinethic®), comme indiqué plus haut. EXAMPLE 4 The in vitro study of the effects of the extracts of Camellia japonica and Polygonum hydropiper used in the present invention on the protection of the epidermis was made on human fibroblasts in culture and on reconstituted epidermides (Skinethic®), such as indicated above.
Les cultures de fibroblastes ont été établies de manière usuelle, les fibroblastes ayant été ensemencés dans des plaques 6 puits à raison de 105 cellules par ml, puis incubation pendant 24 heures. Quatre lots de fibroblastes ont été constitués pour les tests. Lot 1 : témoin ne recevant aucun produit Lot 2 : traitement par Polygonum hydropiper 0,5% Lot 3 : traitement par Camellia japonica 5% Lot 4 : traitement par l'association Polygonum hydropiper 0,5% + Camellia japonica 5%. Etude de la viabilité cellulaire : Après 24 heures d'incubation des cellules de fibroblastes, la viabilité cellulaire a été déterminée par le test de réduction au bleu de Formazan (test MTT). Après incubation des cellules de chaque lot, les puits les contenant sont vidés et le tapis cellulaire est rincé avec le milieu de culture. On distribue dans tous les puits 200 pl d'une solution de MTT (bromure de 3-(4,5-diméthylthiazol-2-yl)-2,5-diphényltétrazolium) à 5 mg/ml, et les plaques sont incubées à 37°C pendant 3 heures. Les puits sont à nouveau vidés par retournement, et le tapis cellulaire est fixé pendant 1 minute par 200 pl de solution de formo-calcium. Les cellules sont ensuite lysées et les cristaux de bleu de Formazan sont dissous par 200 pl de diméthylsulfoxyde. La densité optique (DO) des plaques est lue, après homogénéisation de la coloration par agitation, au 17 moyen d'un spectrophotomètre à 570 nm, permettant ainsi de connaître la quantité relative de cellules vivantes et actives métaboliquement. La densité optique (DO) après 24 heures de contact est 5 indiquée dans le tableau ci-dessous. Substance Densité optique DO % Témoin 0,410 ± 0,03 - P. hydropiper 0,5% 0,440 ± 0,03 ns C. japonica 5% 0,420 ± 0,02 ns P. hydropiper 0,5% 0,410 ± 0,04 ns + C. japonica 5% La viabilité cellulaire a aussi été contrôlée au moyen des mêmes lots 1 à 4 sur un modèle in vitro d'épidermes reconstitués (Skinethic®). 10 Des kératinocytes d'origine humaine ont été ensemencés sur des filtres en polycarbonate de 0,5 cm2 dans un milieu défini (MCDB 153 modifié) et supplémenté. Les cellules ont été cultivées pendant 14 jours à l'interface air/liquide, le milieu de culture étant changé tous les deux jours. Les 15 épidermes ainsi formés ont été utilisés dans l'étude à partir du 17ème jour de culture. L'essai a été effectué en duplicate pour chaque temps expérimental de 6 et 24 heures. La viabilité cellulaire a été testée par réaction 20 colorimétrique au sel de tetrazolium (MTT). La couleur est notée après incubation de 30 minutes à température ambiante. Une couleur bleue - pourpre démontre la viabilité des cellules de l'épiderme. Les produits testés (lots 1, 3 et 4 ci-dessus) ont été 25 déposés à raison de 10 pl / cm2 sur les épidermes reconstitués pendant 24 heures. Les résultats sont indiqués au tableau ci-après. The fibroblast cultures were established in the usual manner, the fibroblasts having been seeded in 6-well plates at the rate of 105 cells per ml, then incubation for 24 hours. Four batches of fibroblasts were made for the tests. Lot 1: control not receiving any product Lot 2: treatment with Polygonum hydropiper 0.5% Lot 3: treatment with Camellia japonica 5% Lot 4: treatment with the combination Polygonum hydropiper 0.5% + Camellia japonica 5%. Cell Viability Study: After 24 hours of fibroblast cell incubation, cell viability was determined by the Formazan blue reduction assay (MTT assay). After incubation of the cells of each batch, the wells containing them are emptied and the cell mat is rinsed with the culture medium. 200 μl of a solution of MTT (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide) at 5 mg / ml are dispensed into all wells, and the plates are incubated at 37. ° C for 3 hours. The wells are again emptied by inversion, and the cell mat is fixed for 1 minute with 200 μl of formo-calcium solution. The cells are then lysed and Formazan blue crystals are dissolved with 200 μl of dimethylsulfoxide. The optical density (OD) of the plates is read, after homogenization of the staining by stirring, by means of a spectrophotometer at 570 nm, thus making it possible to know the relative quantity of living and metabolically active cells. The optical density (OD) after 24 hours of contact is indicated in the table below. Substance Optical Density OD% Control 0.410 ± 0.03 - P. hydropiper 0.5% 0.440 ± 0.03 ns C. japonica 5% 0.420 ± 0.02 ns P. hydropiper 0.5% 0.410 ± 0.04 ns + C. japonica 5% Cell viability was also monitored using the same batches 1-4 on an in vitro model of reconstituted epidermis (Skinethic®). Keratinocytes of human origin were seeded on 0.5 cm 2 polycarbonate filters in defined medium (modified MCDB 153) and supplemented. The cells were cultured for 14 days at the air / liquid interface, the culture medium being changed every two days. The epidermals thus formed were used in the study from the 17th day of culture. The test was performed in duplicate for each experimental time of 6 and 24 hours. Cell viability was assayed by colorimetric reaction with tetrazolium salt (MTT). The color is noted after incubation for 30 minutes at room temperature. A blue - purple color demonstrates the viability of the cells of the epidermis. The tested products (lots 1, 3 and 4 above) were deposited at 10 μl / cm 2 on the reconstituted epidermis for 24 hours. The results are shown in the table below.
Substance Couleur Densité optique DO Témoin Bleu 0,880 ± 0,02 C. japonica 5% Bleu 0,910 ± 0,01 P. hydropiper 0,5% Bleu 0,878 ± 0,03 + C. japonica 5% La viabilité cellulaire a aussi été contrôlée par examen histologique. Les épidermes reconstitués sont fixés dans une solution à 10% de formaldéhyde et inclus dans des blocs de paraffine. Des coupes verticales de 4 }gym ont été colorées à l'hématoxyline / éosine et photographiées sous microscope optique. L'essai a montré que l'extrait de Camellia japonica (5%) et l'association des extraits de Camellia japonica (5%) et de Polygonum hydropiper (0,5%) suivant l'invention, déposés à raison de 10 pl/cm2, sur des épidermes reconstitués traités pendant 24 heures, comparativement à des épidermes témoins, n'ont induit aucune toxicité. Après coloration HES, les images histologiques des épidermes traités sont similaires à celles des épidermes témoins. Ces résultats mettent en évidence l'absence de cytotoxicité des extraits utilisés dans l'invention. Substance Color Optical Density OD Blue Control 0.880 ± 0.02 C. japonica 5% Blue 0.910 ± 0.01 P. hydropiper 0.5% Blue 0.878 ± 0.03 + C. japonica 5% Cell viability was also monitored by histological examination. The reconstituted epidermis are fixed in a 10% solution of formaldehyde and included in paraffin blocks. Vertical sections of 4} gym were stained with hematoxylin / eosin and photographed under an optical microscope. The test showed that the extract of Camellia japonica (5%) and the combination of extracts of Camellia japonica (5%) and Polygonum hydropiper (0.5%) according to the invention, deposited at a rate of 10 μl. / cm2, on reconstituted epidermis treated for 24 hours, compared with control epidermis, induced no toxicity. After HES staining, the histological images of the treated epidermis are similar to those of the control epidermis. These results demonstrate the absence of cytotoxicity of the extracts used in the invention.
Exemple 5 L'étude de l'effet antiradicalaire de l'association d'extraits suivant la présente invention a été faite sur un modèle in vitro d'épidermes reconstitués (Skinethic®). L'activité antiradicalaire a été mise en évidence par dosage du malondialdéhyde (MDA) après son induction par l'hypoxanthine / xanthine oxydase. Le MDA est en effet l'un des marqueurs essentiels de la cytotoxicité par les processus oxydatifs et le stress, et peut donc renseigner sur l'activité antiradicalaire d'une substance donnée (indice de lipoperoxydation). Le protocole expérimental est le même que celui de 30 l'Exemple 4 ci-dessus, à l'exception de la constitution des 19 lots, chaque essai étant réalisé en duplicate après 24 heures de contact des extraits étudiés avec l'épiderme reconstitué. Lot 1 : épiderme témoin ne recevant aucun produit Lot 2 : épiderme témoin positif traité par l'hypoxan- thine/xanthine oxydase. Lot 3 : épiderme traité par la vitamine E + hypoxanthine/xanthine oxydase. Lot 4 : épiderme traité par Camellia japonica 5% Lot 5 : épiderme traité par Polygonum hydropiper 0,5% + Camellia japonica 5%. Lot 6 : épiderme traité par Camellia japonica 5% + hypoxanthine/xanthine oxydase (HXO) Lot 7 : épiderme traité par Polygonum hydropiper 0,5% + Camellia japonica 5% + hypoxanthine/xanthine oxydase (HXO). Après 24 heures de traitement des épidermes reconstitués, les homogénats cellulaires sont remis en suspension dans : 250 pl de tampon Tris 50 mM, pH 8, contenant NaCl 0,1M et EDTA 20 mM. 25 pl de SDS à 7% 300 pl de HC1 0,1N 38 pl d'acide phosphotungstique à 1% dans l'eau 300 pl d'acide thiobarbiturique à 0,67% dans l'eau Après 1 heure d'incubation dans l'obscurité à 50°C puis refroidissement dans l'eau glacée, 300 pl de n-butanol sont ajoutés dans chaque tube. Les tubes sont centrifugés à 10000 g à 0°C pendant 10 minutes. La phase supérieure est récupérée pour le dosage du MDA. Le MDA est dosé par mesure de la fluorescence, après séparation du complexe MDA-TBA par chromatographie HPLC, au moyen d'un détecteur Jasco 821-FI avec une excitation à 515 nm et une émission à 553 nm, avec un éluant méthanol : eau (40:60 v/v), le pH étant ajusté à 8,3 par KOH 1M. Le dosage des protéines est réalisé selon la méthode de 35 Bradford. L'augmentation de l'absorbance à 595 nm est propor- 20 tionnelle à la concentration des protéines déterminées à l'aide d'un spectrophotomètre Unicam 8625. Lipoperoxydation physiologique : Les résultats sont regroupés dans le tableau ci-après. Substance MDA (pM/mg protéine) diminution MDA (%) Témoin 669 ± 33 - C. japonica 5% 570 ± 40 -15 P. hydropiper 0,5% 534 ± 62 -20 + C. japonica 5% Ces résultats montrent une protection significative des extraits de l'invention, notamment de l'association d'extraits, vis-à-vis de la lipoperoxydation physiologique. Lipoperoxydation provoquée : Les résultats sont regroupés dans le tableau ci-après. Substance MDA (pM/mg protéine) variation MDA (%) Témoin 669 ± 33 - HXO 950 ± 46 +42 Vitamine E + HXO 598 ± 55 -37 C. japonica 5% + HXO 765 ± 61 -19 P. hydropiper 0,5% + 680 ± 50 -28 C. japonica 5% + HXO HXO = hypoxanthine/xanthine oxydase Ces résultats montrent une protection significative des extraits de l'invention, et plus particulièrement de l'asso- ciation d'extraits, vis-à-vis de la lipoperoxydation provoquée par l'hypoxanthine/xanthine oxydase. Ces résultats démontrent l'effet antiradicalaire des extraits de la présente invention. La comparaison des résultats obtenus avec Camellia japonica avec ou sans Poly- gonum hydropiper montre que l'association potentialise l'effet antiradicalaire. 21 Exemple 6 L'évaluation de l'activité des extraits de l'invention sur la régénération cutanée a été faite par étude de la matrice extracellulaire et dosage des métalloprotéinases (MMP1, MMP2 et MMP9) sur des fibroblastes humains en culture. Les cultures de fibroblastes sont identiques à celles de l'Exemple 4 ci-dessus. Les quatre lots utilisés sont les mêmes que dans l'Exemple 4. L'essai a été conduit en triplicate après 24 heures de 10 contact des produits étudiés avec les fibroblastes humains en culture. Le dosage de la MMP1 a été réalisé par le kit ELISA au niveau du milieu de culture. Les résultats sont regroupés dans le tableau ci-dessous. Substance concentration MMP1 % (pg/ml) Témoin 135,4 ± 9,2 - P. hydropiper 0,5% 112,3 ± 10,0 -17 C. japonica 5% 105,9 ± 11,7 -22 P. hydropiper 0,5% 98,7 ± 8,5 -27 + C. japonica 5% 15 Ces résultats montrent que les deux extraits de Camellia japonica et de Polygonum hydropiper diminuent significativement l'expression de la métalloprotéinase 1 (MMP1) et que cet effet est potentialisé dans l'association. 20 Le dosage de la MMP2 a été réalisé par le kit ELISA au niveau du milieu de culture. Les résultats sont regroupés dans le tableau ci-dessous. Substance concentration MMP2 % (pg/ml) Témoin 32,8 ± 2,2 - P. hydropiper 0,5% 27,0 ± 1,5 -18 C. japonica 5% 26,4 ± 2,3 -20 P. hydropiper 0,5% 25,0 ± 3,2 -24 + C. japonica 5% 22 Ces résultats montrent que les deux extraits de Camellia japonica et de Polygonum hydropiper diminuent significativement l'expression de la métalloprotéinase 2 (MMP2) et que cet effet est potentialisé dans l'association puisque chaque extrait provoque une diminution très proche (-18 et -20% respectivement) tandis que l'association procure une plus forte diminution (-24%). Les résultats du dosage de la MMP9, réalisé par le kit ELISA au niveau du milieu de culture, sont regroupés dans le Io tableau ci-dessous. Substance concentration MMP9 % (pg/ml) Témoin 97,8 ± 7,3 - P. hydropiper 0,5% 82,6 ± 5,0 -16 C. japonica 5% 83,0 ± 6,1 -15 P. hydropiper 0,5% 75,0 ± 8,0 -23 + C. japonica 5% Ces résultats montrent que les deux extraits de Camellia japonica et de Polygonum hydropiper diminuent significativement l'expression de la métalloprotéinase 9 (MMP9) et que 15 cet effet est potentialisé dans l'association puisque chaque extrait isolément provoque une diminution très proche (-15 et -16% respectivement) tandis que l'association procure une diminution (-23%) significativement plus importante. Example 5 The study of the antiradical effect of the combination of extracts according to the present invention was made on an in vitro model of reconstituted epidermis (Skinethic®). The antiradical activity was demonstrated by assaying malondialdehyde (MDA) after induction with hypoxanthine / xanthine oxidase. MDA is indeed one of the essential markers of cytotoxicity by oxidative processes and stress, and can therefore provide information on the antiradical activity of a given substance (lipoperoxidation index). The experimental protocol is the same as that of Example 4 above, with the exception of the constitution of the 19 batches, each test being performed in duplicate after 24 hours of contact of the extracts studied with the reconstituted epidermis. Lot 1: control epidermis receiving no product Lot 2: positive control epidermis treated with hypoxanthine / xanthine oxidase. Lot 3: epidermis treated with vitamin E + hypoxanthine / xanthine oxidase. Lot 4: epidermis treated with Camellia japonica 5% Lot 5: epidermis treated with Polygonum hydropiper 0.5% + Camellia japonica 5%. Lot 6: epidermis treated with Camellia japonica 5% + hypoxanthine / xanthine oxidase (HXO) Lot 7: epidermis treated with Polygonum hydropiper 0.5% + Camellia japonica 5% + hypoxanthine / xanthine oxidase (HXO). After 24 hours of treatment of the reconstituted epidermis, the cell homogenates are resuspended in: 250 μl of 50 mM Tris buffer, pH 8, containing 0.1M NaCl and 20 mM EDTA. 25 μl 7% SDS 300 μl 0.1 N HCl 38 μl 1% phosphotungstic acid in water 300 μl 0.67% thiobarbituric acid in water After 1 hour incubation in water at 50 ° C. and then cooling in ice water, 300 μl of n-butanol is added to each tube. The tubes are centrifuged at 10,000 g at 0 ° C for 10 minutes. The upper phase is recovered for the determination of MDA. The MDA is assayed by fluorescence measurement, after separation of the MDA-TBA complex by HPLC chromatography, using a Jasco 821-FI detector with excitation at 515 nm and emission at 553 nm, with eluent methanol: water (40:60 v / v), the pH being adjusted to 8.3 by 1M KOH. The protein assay is performed according to the Bradford method. The increase in absorbance at 595 nm is proportional to the concentration of the proteins determined using a Unicam 8625 spectrophotometer. Physiological lipoperoxidation: The results are summarized in the table below. MDA substance (pM / mg protein) MDA decrease (%) Control 669 ± 33 - C. japonica 5% 570 ± 40 -15 P. hydropiper 0.5% 534 ± 62 -20 + C. japonica 5% These results show a significant protection of the extracts of the invention, especially the combination of extracts, vis-à-vis physiological lipoperoxidation. Lipoperoxidation caused: The results are summarized in the table below. MDA substance (pM / mg protein) MDA variation (%) Control 669 ± 33 - HXO 950 ± 46 +42 Vitamin E + HXO 598 ± 55 -37 C. japonica 5% + HXO 765 ± 61 -19 P. hydropiper 0, 5% + 680 ± 50 -28 C. japonica 5% + HXO HXO = hypoxanthine / xanthine oxidase These results show a significant protection of the extracts of the invention, and more particularly the combination of extracts, vis-à-vis hypoxanthine / xanthine oxidase-induced lipoperoxidation. These results demonstrate the antiradical effect of the extracts of the present invention. The comparison of the results obtained with Camellia japonica with or without Polyglut hydropiper shows that the combination potentiates the antiradical effect. EXAMPLE 6 The evaluation of the activity of the extracts of the invention on cutaneous regeneration was made by study of the extracellular matrix and assay of the metalloproteinases (MMP1, MMP2 and MMP9) on human fibroblasts in culture. The fibroblast cultures are identical to those of Example 4 above. The four batches used are the same as in Example 4. The test was conducted in triplicate after 24 hours of contact of the products studied with human fibroblasts in culture. The MMP1 assay was performed by the ELISA kit at the level of the culture medium. The results are summarized in the table below. Substance concentration MMP1% (μg / ml) Control 135.4 ± 9.2 - P. hydropiper 0.5% 112.3 ± 10.0 -17 C. japonica 5% 105.9 ± 11.7 -22 P. These results show that the two extracts of Camellia japonica and Polygonum hydropiper significantly reduce the expression of metalloproteinase 1 (MMP1) and that this effect is potentiated in the association. The MMP2 assay was performed by the ELISA kit at the level of the culture medium. The results are summarized in the table below. Substance concentration MMP2% (μg / ml) Control 32.8 ± 2.2 - P. hydropiper 0.5% 27.0 ± 1.5 -18 C. japonica 5% 26.4 ± 2.3 -20 P. hydropiper 0.5% 25.0 ± 3.2-24 + C. japonica 5% 22 These results show that the two extracts of Camellia japonica and Polygonum hydropiper significantly reduce the expression of metalloproteinase 2 (MMP2) and that effect is potentiated in the combination since each extract causes a very close decrease (-18 and -20% respectively) while the association provides a greater decrease (-24%). The results of the MMP9 assay, performed by the ELISA kit at the level of the culture medium, are grouped in the table below. Substance concentration MMP9% (μg / ml) Control 97.8 ± 7.3 - P. hydropiper 0.5% 82.6 ± 5.0 -16 C. japonica 5% 83.0 ± 6.1 -15 P. These results show that the two extracts of Camellia japonica and Polygonum hydropiper significantly reduce the expression of metalloproteinase 9 (MMP9) and that effect is potentiated in the combination since each single extract causes a very close decrease (-15 and -16% respectively) while the association provides a decrease (-23%) significantly higher.
Exemple 7 20 L'évaluation de l'activité anti-élastase des extraits de l'invention a été faite sur les mêmes fibroblastes humains en culture que ceux de l'Exemple 4 ci-dessus. L'essai a été conduit en triplicate après 24 heures de contact des produits étudiés avec les fibroblastes humains en 25 culture, en présence de substrat N-succinyl trialanine para- nitro-anilide (SANA). Les quatre lots utilisés sont les mêmes que dans l'Exemple 4 mais du SANA a été ajouté aux lots 1 à 4.Example 7 The evaluation of the anti-elastase activity of the extracts of the invention was made on the same human fibroblasts in culture as those of Example 4 above. The test was conducted in triplicate after 24 hours of contact of the studied products with the human fibroblasts in culture, in the presence of substrate N-succinyl triananine paranothroanilide (SANA). The four batches used are the same as in Example 4 but SANA has been added to batches 1 to 4.
23 Les fibroblastes ont été ensemencés dans des plaques multipuits à raison de 105 cellules par puits. Ils ont ensuite été incubés avec 2% de SVF et RMPI pendant 24 heures, puis le SVF a été remplacé par 0,2% de BSA et les cellules ont été incubées pendant 24 heures en présence des produits étudiés. En fin de traitement, les cellules ont été récupérées par grattage et les enzymes ont été extraites du culot cellulaire en utilisant 0,1% de Triton X-100 dans un tampon Tris-HCL à pH 8, Brij 35 0,1% et 20 pl d'une solution de SANA (125mM) dans la N-éthyl pyrrolidone. La réaction a été initiée à 37°C et stoppée par ajout de 50 pl d'acide acétique. Les résultats sont regroupés dans le tableau ci-après. Substance Activité de Inhibition (%) l'élastase (nM de SANA hydrolysé / heure / 105 cellules Témoin + SANA 56,2 ± 2,8 - P. hydropiper 0,5% + 48,7 ± 3,3 -13 SANA C. japonica 5% + SANA 47,6 ± 4,1 -15 P. hydropiper 0,5% + 45,0 ± 2,9 -20 C. japonica 5% + SANA Ces résultats montrent que les extraits de Camellia japonica et de Polygonum hydropiper inhibent significativement l'activité de l'élastase au niveau des fibroblastes humains en culture et que cet effet est potentialisé dans l'association des extraits. Fibroblasts were seeded in multiwell plates at 105 cells per well. They were then incubated with 2% FCS and RMPI for 24 hours, then the FCS was replaced by 0.2% BSA and the cells were incubated for 24 hours in the presence of the products studied. At the end of treatment, the cells were scraped off and the enzymes were extracted from the cell pellet using 0.1% Triton X-100 in Tris-HCL buffer at pH 8, 0.1% Brij and 20%. pl of a solution of SANA (125mM) in N-ethyl pyrrolidone. The reaction was initiated at 37 ° C and stopped by addition of 50 μl of acetic acid. The results are summarized in the table below. Substance Inhibition Activity (%) elastase (nM of SANA hydrolyzed / hour / 105 cells Control + SANA 56.2 ± 2.8 - P. hydropiper 0.5% + 48.7 ± 3.3 -13 SANA C japonica 5% + SANA 47.6 ± 4.1 -15 P. hydropiper 0.5% + 45.0 ± 2.9 -20 C. japonica 5% + SANA These results show that extracts of Camellia japonica and Polygonum hydropiper significantly inhibits the activity of elastase in human fibroblasts in culture and this effect is potentiated in the combination of extracts.
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