FR2958546A1 - USE OF GLYCOPEPTIDES RICH IN SOYA HYDROXYPROLINE TO FIGHT THE APPEARANCE OF WRINKLES - Google Patents
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Abstract
L'objet de l'invention est un principe actif cosmétique comprenant des glycopeptides riches en hydroxyproline (HRGPs) issus de fibres de soja, et les compositions cosmétiques anti-rides l'incluant. L'invention se rapporte également à l'utilisation cosmétique de HRGPs de fibres de soja ou d'un principe actif en contenant, pour lutter contre l'apparition des rides.The subject of the invention is a cosmetic active ingredient comprising glycopeptides rich in hydroxyproline (HRGPs) derived from soy fibers, and the anti-wrinkle cosmetic compositions including it. The invention also relates to the cosmetic use of HRGPs of soy fibers or of an active ingredient containing them, to fight against the appearance of wrinkles.
Description
UTILISATION DE GLYCOPEPTIDES RICHES EN HYDROXYPROLINE DE SOJA POUR LUTTER CONTRE L'APPARITION DES RIDES USE OF GLYCOPEPTIDES RICH IN SOYA HYDROXYPROLINE TO FIGHT THE APPEARANCE OF WRINKLES
La présente invention se rapporte à l'utilisation de molécules spécifiques issues de fibres de soja, ainsi qu'à un principe actif particulier contenant de telles molécules, pour combler et lutter efficacement contre l'apparition des rides. L'invention concerne également un procédé d'obtention de ce principe actif, les compositions l'incluant, et un procédé de traitement cosmétique anti-rides. La recherche du bien être et la quête de la jeunesse restent des préoccupations majeures dans nos sociétés. Beaucoup de personnes veulent pouvoir paraître jeunes le plus longtemps possible et cherchent à retarder et limiter l'apparition des signes extérieurs du vieillissement cutané : peau plus fine, sèche, ridée et qui perd son élasticité. Pour lutter contre les effets du temps sur la peau, il existe aujourd'hui de nombreux produits cosmétiques. Parmi ces produits, on peut citer notamment le palmitoyl-pentapeptide-3 ou le rétinol, qui présentent une efficacité anti-rides tout à fait satisfaisante. The present invention relates to the use of specific molecules derived from soybean fibers, as well as to a particular active ingredient containing such molecules, to fill and effectively fight against the appearance of wrinkles. The invention also relates to a process for obtaining this active ingredient, the compositions including it, and a cosmetic anti-wrinkle treatment method. The search for well-being and the quest for youth remain major concerns in our societies. Many people want to be able to look young as long as possible and try to delay and limit the appearance of the external signs of skin aging: skin that is thinner, dry, wrinkled and loses its elasticity. To combat the effects of time on the skin, there are many cosmetic products today. Among these products, there may be mentioned in particular palmitoyl-pentapeptide-3 or retinol, which have an anti-wrinkle efficacy quite satisfactory.
Toutefois, ces produits sont obtenus par synthèse chimique. Ils ne correspondent donc pas forcément aux exigences actuelles pour des produits d'origine naturelle. Des soins anti-âge d'origine naturelle ont donc été développés en parallèle, en particulier des extraits de plantes, mais leur efficacité n'est pas toujours satisfaisante, et les consommateurs attendent un résultat anti-rides plus performant. However, these products are obtained by chemical synthesis. They do not necessarily correspond to the current requirements for products of natural origin. Naturally occurring anti-aging treatments have therefore been developed in parallel, in particular plant extracts, but their effectiveness is not always satisfactory, and consumers expect a better anti-wrinkle result.
Il subsiste donc un besoin pour une solution cosmétique d'origine naturelle qui, appliquée sur la peau, procure un effet anti-rides au moins aussi performant que celui obtenu avec des produits de synthèse. Pour y répondre, la présente invention propose d'utiliser des molécules 5 spécifiques obtenues à partir de fibres de soja. On connaît déjà des principes actifs issus de soja pour des applications cosmétiques anti-âge. A titre d'exemple, on peut citer les demandes JP-2009084169, JP2008056664, JP-2008024703, JP2006213649 qui décrivent des compositions comprenant des hydrolysats de protéines de soja et 10 leur utilisation cosmétique pour lutter contre les signes du vieillissement cutané. Toutefois, l'objectif de la présente invention est de proposer un principe actif cosmétique spécifique différent, avec des molécules particulières, qui présente des performances anti-rides beaucoup plus importantes que celles jamais atteintes avec les actifs issus de soja de l'art antérieur, et ce même à plus faible 15 concentration. A cet effet, l'invention vise l'utilisation de glycopeptides riches en hydroxyproline (HRGPs) issus de fibres de soja, ou d'un actif issu de fibres de soja contenant des glycopeptides riches en hydroxyproline (HRGPs), en tant que principe actif cosmétique anti-rides. 20 Par « glycopeptide » on entend un peptide portant un groupement de polysaccharides, et une chaîne peptidique. Cette chaîne peptidique est constituée de moins de 100 acides aminés. Par « glycopeptides riches en hydroxyproline » ou « HRGPs » on entend des glycopeptides dont la chaîne peptidique contient de l'hydroxyproline parmi les 25 acides aminés qui la constitue. La chaîne est fortement ramifiée sur l'hydroxyproline par des substituts carbohydrate o-glycosylés de longueur variable. Outre l'hydroxyproline, la chaîne peptidique contient aussi les acides aminés sérine, thréonine, alanine, lysine, tyrosine, valine et histidine, qui peuvent apparaître en courtes séquences répétitives. L'invention vise également un principe actif cosmétique comprenant des glycopeptides riches en hydroxyproline (HRGPs) issus de fibres de soja. There remains therefore a need for a cosmetic solution of natural origin which, applied to the skin, provides an anti-wrinkle effect at least as good as that obtained with synthetic products. In order to meet them, the present invention proposes the use of specific molecules obtained from soybean fibers. Active ingredients derived from soy are already known for anti-aging cosmetic applications. By way of example, mention may be made of applications JP-2009084169, JP2008056664, JP-2008024703 and JP2006213649 which describe compositions comprising hydrolysates of soy proteins and their cosmetic use for combating the signs of cutaneous aging. However, the objective of the present invention is to provide a different specific active cosmetic principle, with particular molecules, which has anti-wrinkle performance much greater than those never achieved with the assets derived from soy of the prior art, and this even at lower concentration. For this purpose, the invention is directed to the use of hydroxyproline-rich glycopeptides (HRGPs) derived from soybean fibers, or an active ingredient derived from soybean fibers containing hydroxyproline-rich glycopeptides (HRGPs), as the active ingredient. cosmetic anti-wrinkle. By "glycopeptide" is meant a peptide carrying a group of polysaccharides, and a peptide chain. This peptide chain consists of less than 100 amino acids. By "glycopeptides rich in hydroxyproline" or "HRGPs" is meant glycopeptides whose peptide chain contains hydroxyproline among the 25 amino acids that constitutes it. The chain is strongly branched on hydroxyproline by o-glycosylated carbohydrate substitutes of variable length. In addition to hydroxyproline, the peptide chain also contains the amino acids serine, threonine, alanine, lysine, tyrosine, valine and histidine, which can appear in short repetitive sequences. The invention also relates to a cosmetic active ingredient comprising glycopeptides rich in hydroxyproline (HRGPs) derived from soybean fibers.
Avantageusement, il s'agit d'un principe actif qui présente une efficacité antirides jusqu'alors jamais constatée avec des produits d'origine naturelle. Il ne s'agit pas d'une simple concentration de produits existants, mais bien d'un principe actif à part, susceptible d'être obtenu par la mise en oeuvre d'un procédé spécifique. Advantageously, it is an active ingredient that has anti-wrinkle effectiveness hitherto never found with products of natural origin. It is not a simple concentration of existing products, but rather a separate active ingredient, obtainable by the implementation of a specific process.
La présente invention concerne donc également un procédé d'obtention d'un principe actif anti-rides efficace, comprenant des glycopeptides riches en hydroxyproline (HRGPs), à partir de fibres de soja. Avantageusement le procédé d'obtention selon l'invention est simple à mettre en oeuvre. The present invention therefore also relates to a process for obtaining an effective anti-wrinkle active ingredient, comprising glycopeptides rich in hydroxyproline (HRGPs), from soybean fibers. Advantageously, the method of obtaining according to the invention is simple to implement.
Selon un autre aspect, l'invention vise aussi des compositions cosmétiques incluant entre 0,01 et 20% d'un principe actif cosmétique comprenant des glycopeptides riches en hydroxyproline (HRGPs) issus de fibres de soja. Ces compositions peuvent se présenter sous toutes formes permettant l'application par voie topique. According to another aspect, the invention also relates to cosmetic compositions including between 0.01% and 20% of a cosmetic active ingredient comprising hydroxyproline-rich glycopeptides (HRGPs) derived from soybean fibers. These compositions may be in any form allowing the application topically.
Enfin, l'invention a également pour objet un procédé cosmétique de soin de la peau, destiné à lutter contre l'apparition des rides, en particulier à lisser le microrelief de la peau et à combler les rides, comprenant l'application topique d'une composition renfermant des HRGPs de soja ou un principe actif issu de soja contenant des HRGPs. Finally, the subject of the invention is also a cosmetic skin care method intended to combat the appearance of wrinkles, in particular to smooth the microrelief of the skin and to fill wrinkles, including the topical application of the skin. a composition comprising soybean HRGPs or a soybean-derived active ingredient containing HRGPs.
La présente invention est maintenant décrite en détail. UTILISATION Selon un premier aspect, l'invention vise l'utilisation de glycopeptides riches en hydroxyproline (HRGPs) issus de fibres de soja, ou d'un actif issu de fibres de soja contenant des glycopeptides riches en hydroxyproline, en tant que principe actif cosmétique anti-rides. Selon l'invention des glycopeptides riches en hydroxyproline issus de fibres de soja, ou un actif obtenu à partir de fibres de soja contenant des glycopeptides riches en hydroxyproline, peuvent être utilisés comme agent cosmétique pour lutter contre l'apparition des rides, en particulier pour lisser le microrelief cutané et combler les rides. De façon avantageuse, l'utilisation sur la peau de glycopeptides de soja riches en hydroxyproline, acide aminé rare des protéines, ou d'un principe actif issu de soja contenant des glycopeptides riches en hydroxyproline, assure une efficacité performante sur le collagène I, marqueur universellement reconnu pour son importance dans les soins anti-vieillissement. Le collagène I est une structure hélicoïdale constituée de trois chaînes polypeptidiques riches en glycine, proline et hydroxyproline. Le collagène est caractérisé par une séquence en acides aminés spécifiques (Gly-X-Y)n où la glycine est présente tous les 3 résidus, où X correspond à la proline et Y est fréquemment de l'hydroxyproline. Ce dernier acide aminé est particulièrement important car il permet l'arrangement des chaînes de collagène en triple-hélice et il est également essentiel à la stabilité de celle-ci. The present invention is now described in detail. USE According to a first aspect, the invention is directed to the use of hydroxyproline-rich glycopeptides (HRGPs) derived from soybean fibers, or an active ingredient derived from soybean fibers containing glycopeptides rich in hydroxyproline, as a cosmetic active ingredient. anti wrinkle. According to the invention, hydroxyproline-rich glycopeptides derived from soybean fibers, or an active ingredient obtained from soybean fibers containing glycopeptides rich in hydroxyproline, can be used as a cosmetic agent to combat the appearance of wrinkles, in particular for smooth the skin microrelief and fill in the wrinkles. Advantageously, the use on the skin of soybean glycopeptides rich in hydroxyproline, a rare amino acid protein, or a soy-based active ingredient containing glycopeptides rich in hydroxyproline, provides effective performance on collagen I, marker universally recognized for its importance in anti-aging care. Collagen I is a helical structure consisting of three polypeptide chains rich in glycine, proline and hydroxyproline. Collagen is characterized by a sequence of specific amino acids (Gly-X-Y) n where glycine is present every 3 residues, where X is proline and Y is frequently hydroxyproline. This latter amino acid is particularly important because it allows the arrangement of collagen chains in triple-helix and is also essential to the stability of the latter.
Avec l'âge ou au cours du vieillissement prématuré, le réseau tridimensionnel de collagène subit de profondes altérations caractérisées par une diminution de la synthèse de collagène d'une part et par sa dégradation excessive d'autre part. Ces changements se traduisent à la surface cutanée par un relâchement, une perte de fermeté et l'apparition de rides. With age or during premature aging, the three-dimensional network of collagen undergoes profound alterations characterized by a decrease in collagen synthesis on the one hand and by its excessive degradation on the other hand. These changes are reflected on the skin surface by loosening, loss of firmness and the appearance of wrinkles.
Selon l'invention, l'utilisation sur la peau de glycopeptides de soja riches en hydroxyproline, acide aminé rare dans les protéines, ou d'un principe actif issu de fibres de soja contenant des HRGPs, permet d'agir fortement sur la synthèse de collagène I. According to the invention, the use on the skin of glycopeptides of soybeans rich in hydroxyproline, a rare amino acid in proteins, or of an active principle derived from soybean fibers containing HRGPs, makes it possible to act strongly on the synthesis of collagen I.
En boostant fortement la synthèse naturelle de collagène I, biomarqueur essentiel et incontournable pour la lutte contre le vieillissement cutané, l'utilisation d'HRGPs de fibres de soja ou d'un principe actif issu de fibres de soja contenant des HRGPs, renforce l'armature de la peau et sa densité pour un effet anti-rides. Le matelas dermique est consolidé et les rides défroissées. L'effet obtenu est supérieur à celui des principes actifs d'origine naturelle existants, et comparable à celui des actifs de synthèse de référence, la vitamine C, le rétinol et le palmitoyl-pentapeptide-3. Grâce à l'efficacité ciblée et puissante de l'invention les rides sont visiblement atténuées. By strongly boosting the natural synthesis of collagen I, an essential and essential biomarker for the fight against skin aging, the use of HRGPs of soy fibers or of an active ingredient derived from soy fibers containing HRGPs reinforces frame of the skin and its density for an anti-wrinkle effect. The dermal mattress is consolidated and wrinkles wrinkles. The effect obtained is greater than that of existing natural active ingredients, and comparable to that of the reference synthesis active ingredients, vitamin C, retinol and palmitoyl-pentapeptide-3. Thanks to the targeted and powerful efficacy of the invention the wrinkles are visibly reduced.
Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, l'invention vise l'utilisation d'un principe actif issu de fibres soja contenant des HRGPs, tel que décrit en suivant. PRINCIPE ACTIF L'invention concerne également un principe actif cosmétique particulier obtenu à 15 partir de fibres de soja comprenant des glycopeptides riches en hydroxyproline (HRGPs). Le principe actif selon l'invention peut également comprendre d'autres molécules, en particulier des protéines et des carbohydrates sous forme libre. Préférentiellement, le principe actif comprend : 20 - une teneur en sucres totaux supérieure à 37% en poids de matière sèche, - une teneur en protéines totales comprise entre 5 et 7% en poids de matière sèche. Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, la teneur en sucres totaux du principe actif selon l'invention est supérieure à 50% du poids total de la 25 matière sèche, en particulier elle est comprise entre 50 et 70%. According to a particularly suitable embodiment, the invention relates to the use of an active principle derived from soy fibers containing HRGPs, as described below. ACTIVE INGREDIENT The invention also relates to a particular cosmetic active ingredient obtained from soybean fibers comprising hydroxyproline-rich glycopeptides (HRGPs). The active ingredient according to the invention may also comprise other molecules, in particular proteins and carbohydrates in free form. Preferably, the active ingredient comprises: a total sugar content greater than 37% by weight of dry matter, a total protein content of between 5 and 7% by weight of dry matter. According to a particularly suitable embodiment, the total sugar content of the active ingredient according to the invention is greater than 50% of the total weight of the dry matter, in particular it is between 50 and 70%.
Préférentiellement le principe actif selon l'invention comprend entre 8 et 30% de glycopeptides en poids de matière sèche. De façon préférée, le principe actif selon l'invention présente une teneur en hydroxyproline d'au moins 18mg/g de protéines, encore plus préférentiellement 5 environ égale à 30mg/g de protéines. De même, les glycopeptides présentent une masse molaire comprise entre 1440Da et 60000Da, préférentiellement une masse moléculaire moyenne de 13600 Da environ. La partie glycosylée des glycopeptides est de façon préférée composée au moins 10 de galactose, d'acide galacturonique et de mannose. Le principe actif selon l'invention est un hydrolysat de fibres de soja. Il se présente préférentiellement sous forme de liquide limpide de couleur ambrée. Il peut être défini par au moins une des caractéristiques exposées ci-après, préférentiellement toutes. 15 Matières sèches : Le taux de matières sèches d'un principe actif selon l'invention (mesuré par passage à l'étuve à 105°C en présence de sable d'un échantillon de poids ini ial donné jusqu'à obtention d'un poids constant) peut être compris entre 22 et 32 g/I. 20 Mesure du pH : Le pH (mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante) peut être compris entre 5,0 et 6,0. Détermination de la teneur en azote : La teneur en azote total (déterminée par la méthode de KJELDHAL - 25 Official method of analysis of the A.O.C. 1975, 12th ed. W Horwitz, E.D., New-York, p. 15-60), est préférentiellement comprise entre 1,3 et 2,2g/l, soit 5 à 7% en poids par rapport à la matière sèche. Preferably, the active ingredient according to the invention comprises between 8 and 30% of glycopeptides by weight of dry matter. Preferably, the active ingredient according to the invention has a hydroxyproline content of at least 18 mg / g of proteins, more preferably approximately equal to 30 mg / g of proteins. Similarly, the glycopeptides have a molar mass of between 1440Da and 60000Da, preferably an average molecular mass of about 13600 Da. The glycosylated part of the glycopeptides is preferably composed of at least galactose, galacturonic acid and mannose. The active ingredient according to the invention is a hydrolyzate of soybean fibers. It is preferably in the form of limpid liquid of amber color. It can be defined by at least one of the features described below, preferably all. Dry matter: The solids content of an active principle according to the invention (measured by passing in an oven at 105 ° C. in the presence of sand of a sample of initial weight given until a constant weight) can be between 22 and 32 g / I. PH measurement: The pH (measured by the potentiometric method at room temperature) can be between 5.0 and 6.0. Determination of nitrogen content: The total nitrogen content (determined by the method of KJELDHAL - 1975, 12th ed., W Horwitz, ED, New York, pp. 15-60), is preferably between 1.3 and 2.2 g / l, ie 5 to 7% by weight relative to the dry matter.
Détermination de la teneur en hydroxyproline : Le dosage de l'hydroxyproline est réalisé selon la méthode de Stegemann et Stalder (Stegemann H., et Stalder K, (1967), Clinica Chimica Acta, 18, 260). Après action de la chloramine T, l'hydroxyproline oxydée réagit avec le paradiméthylaminobenzaldéhyde pour donner une coloration jaune-orangée, détectable au spectrophotomètre à 550 nm. La teneur en hydroxyproline est préférentiellement supérieure à 18mg/g de protéines, encore plus préférentiellement environ égale à 30mg/g de protéines. Determination of hydroxyproline content: The hydroxyproline assay is carried out according to the method of Stegemann and Stalder (Stegemann H., and Stalder K, (1967), Clinica Chimica Acta, 18, 260). After the action of chloramine T, the oxidized hydroxyproline reacts with the paradimethylaminobenzaldehyde to give a yellow-orange color, detectable spectrophotometer at 550 nm. The hydroxyproline content is preferably greater than 18 mg / g of proteins, still more preferably approximately equal to 30 mg / g of proteins.
Carbohydrates: Dosage de la teneur en sucres totaux : Le dosage de la teneur en sucres totaux peut être réalisé par la méthode de DUBOIS (DUBOIS M. et al., (1956), Analytical chemistry, 28, n°3 p. 350-356). En présence d'acide sulfurique concentré et de phénol, les sucres réducteurs donnent un composé jaune orangé. A partir d'une gamme étalon, on peut déterminer le taux de sucres totaux d'un échantillon. Le taux de sucres totaux d'un principe actif issu de fibres de soja selon l'invention est préférentiellement compris entre 12 et 22g/l. La teneur en sucres totaux peut aussi être exprimée en pourcentage par rapport à la matière sèche. Elle est préférentiellement supérieure à 37%, encore plus préférentiellement comprise entre 50% et 70%. Caractérisation des carbohydrates Les masses moléculaires des carbohydrates présents dans le principe actif selon l'invention sont déterminées grâce à la chromatographie en phase liquide haute performance (CLHP). La composition en sucres simples est déterminée par chromatographie liquide ionique. Carbohydrates: Determination of the total sugar content: The determination of the total sugar content can be carried out by the DUBOIS method (DUBOIS M. et al., (1956), Analytical Chemistry, 28, No. 3, 356). In the presence of concentrated sulfuric acid and phenol, the reducing sugars give an orange-yellow compound. From a standard range, the total sugar content of a sample can be determined. The total sugar content of an active principle derived from soybean fibers according to the invention is preferably between 12 and 22 g / l. The total sugar content can also be expressed as a percentage relative to the dry matter. It is preferably greater than 37%, even more preferably between 50% and 70%. Characterization of Carbohydrates The molecular weights of the carbohydrates present in the active principle according to the invention are determined by high performance liquid chromatography (HPLC). The composition of simple sugars is determined by ionic liquid chromatography.
La fraction glucidique du principe actif selon l'invention est composée de polysaccharides constitués majoritairement de galactose, mannose et acide galacturonique. Les carbohydrates sont soit sous forme libre et soit ils constituent la partie glycosylée de glycopeptides. Caractérisation des Glycopeptides : Une électrophorèse en conditions dénaturantes du principe actif selon l'invention a été réalisée en utilisant un gel de polyacrylamide 15%. La coloration du gel a été faite à l'aide du kit « Glycoprotein betection Kit » (Sigma), qui permet la coloration sélective des glycopeptides en rose. Une coloration rose apparaît pour le principe actif selon l'invention, ce qui montre la présence de glycopeptides. La teneur en glycopeptides est comprise entre 8 et 30% en poids par rapport à la matière sèche. En outre, le dosage de l'hydroxyproline, réalisé par spectrophotométrie, montre la présence d'hydroxyproline. Le principe actif selon l'invention comprend donc bien des glycopeptides riches en hydroxyproline. Teneur en cendres brutes : La teneur en cendres brutes est déterminée par la pesée des résidus issus de l'incinération à 550°C dans un four à moufle électrique (VULCANTM 3.550-NDI). Le poids du résidu est calculé en déduisant la tare. La teneur en minéraux est exprimée en pourcentage par rapport à la matière sèche. The glucidic fraction of the active principle according to the invention is composed of polysaccharides consisting mainly of galactose, mannose and galacturonic acid. The carbohydrates are either in free form and either they constitute the glycosylated portion of glycopeptides. Characterization of Glycopeptides: An electrophoresis under denaturing conditions of the active principle according to the invention was carried out using a 15% polyacrylamide gel. Gel staining was done using the "Glycoprotein Betection Kit" kit (Sigma), which allows the selective staining of glycopeptides in pink. A pink color appears for the active ingredient according to the invention, which shows the presence of glycopeptides. The content of glycopeptides is between 8 and 30% by weight relative to the dry matter. In addition, the determination of hydroxyproline, carried out by spectrophotometry, shows the presence of hydroxyproline. The active ingredient according to the invention thus comprises many glycopeptides rich in hydroxyproline. Crude ash content: The raw ash content is determined by the weighing of residues from incineration at 550 ° C in an electric muffle furnace (VULCANTM 3.550-NDI). The weight of the residue is calculated by deducting the tare. The mineral content is expressed as a percentage of the dry matter.
Teneur en composés phénoliques La teneur en polyphénols totaux est mesurée selon le principe suivant. Les polyphénols forment en présence de ferricyanure de potassium des composés colorés, l'intensité de cette coloration étant proportionnelle à la quantité de polyphénols. En se rapportant à une gamme étalon d'acide gallique, en l'occurrence de 40 à 120 mg/I, on peut déduire la quantité de polyphénols présents dans l'extrait. Dosage des acides uroniques La teneur en acides uroniques est déterminée par le principe suivant : le produit de la réaction de l'acide galacturonique avec le tétraborate de sodium, donne en présence du méta-hydroxydiphényl, une coloration rose permettant le dosage au spectrophotomètre à 520 nm. L'intensité de coloration est proportionnelle à la quantité d'acides uroniques. En se rapportant à une gamme étalon d'acide galacturonique, en l'occurrence de 10 à 100 mg/I, on peut déduire la quantité d'acides uroniques présents dans le principe actif. Identification de la fraction active Afin de déterminer la fraction majoritairement active du principe actif selon l'invention, une étude a été réalisée. Cette étude consiste à réaliser la précipitation à l'éthanol du principe actif, et à fractionner par chromatographie le culot récupéré afin de séparer les différentes espèces moléculaires présentes. Phenolic content The total polyphenol content is measured according to the following principle. In the presence of potassium ferricyanide, polyphenols form colored compounds, the intensity of this coloration being proportional to the amount of polyphenols. With reference to a standard range of gallic acid, in this case from 40 to 120 mg / l, it is possible to deduce the amount of polyphenols present in the extract. Determination of uronic acids The content of uronic acids is determined by the following principle: the product of the reaction of galacturonic acid with sodium tetraborate gives, in the presence of meta-hydroxydiphenyl, a pink coloring allowing the determination with a spectrophotometer at 520 nm. The intensity of staining is proportional to the amount of uronic acids. Referring to a standard range of galacturonic acid, in this case from 10 to 100 mg / l, it is possible to deduce the quantity of uronic acids present in the active principle. Identification of the active fraction In order to determine the predominantly active fraction of the active ingredient according to the invention, a study has been carried out. This study consists in carrying out the ethanol precipitation of the active principle, and in chromatographically fractionating the recovered pellet in order to separate the different molecular species present.
Sur la base des relations structure-fonction, la structure de la fraction active du principe actif selon l'invention a ensuite été identifiée puis caractérisée. Elle correspond à des glycopeptides riches en hydroxyproline (HRGPs), en particulier des HRGPs comprenant des chaînes glycosylées majoritairement composées de galactose, acide galacturonique et mannose. On the basis of structure-function relationships, the structure of the active fraction of the active ingredient according to the invention was then identified and characterized. It corresponds to glycopeptides rich in hydroxyproline (HRGPs), in particular HRGPs comprising glycosylated chains mainly composed of galactose, galacturonic acid and mannose.
PROCEDE D'OBTENTION Le principe actif selon l'invention peut être obtenu préférentiellement par un procédé comprenant une hydrolyse enzymatique avec une carbohydrase, et une hydrolyse enzymatique avec une protéase. PROCESS OF OBTAINING The active principle according to the invention can be obtained preferentially by a process comprising an enzymatic hydrolysis with a carbohydrase, and an enzymatic hydrolysis with a protease.
Un procédé particulièrement adapté comprend au moins la succession des étapes suivantes - solubilisation de fibres de soja dans l'eau, - deux hydrolyses enzymatiques successives ou simultanées, l'une en présence d'une carbohydrase et l'autre en présence d'une protéase, - séparation des phases soluble et insoluble par décantation, - inactivation par traitement thermique, et - ultrafiltration entre 5000 Da et 18000 Da et récupération du rétentat. Cette dernière étape permet de retenir les molécules et de les sélectionner en 15 fonction de leur taille, mais également en fonction de leur configuration dans l'espace. Préférentiellement, le procédé comprend les étapes suivantes : - solubilisation de fibres de soja dans l'eau, - deux hydrolyses enzymatiques successives ou simultanées, l'une en 20 présence d'une carbohydrase et l'autre en présence d'une protéase, - séparation des phases soluble et insoluble par décantation, - inactivation par traitement thermique, - ajustement du pH, - filtration presse,et 25 - ultrafiltration entre 5000 Da et 18000 Da et récupération du rétentat. A particularly suitable method comprises at least the succession of the following steps - solubilization of soybean fibers in water, - two successive or simultaneous enzymatic hydrolyses, one in the presence of a carbohydrase and the other in the presence of a protease separation of the soluble and insoluble phases by decantation, inactivation by thermal treatment, and ultrafiltration between 5000 Da and 18000 Da and recovery of the retentate. This last stage makes it possible to retain the molecules and to select them according to their size, but also according to their configuration in space. Preferably, the process comprises the following steps: solubilization of soybean fibers in water, two successive or simultaneous enzymatic hydrolyses, one in the presence of a carbohydrase and the other in the presence of a protease, separation of the soluble and insoluble phases by decantation, inactivation by heat treatment, pH adjustment, press filtration, and ultrafiltration between 5000 Da and 18000 Da and recovery of the retentate.
Des étapes de décoloration et de désodorisation de la phase soluble, peuvent être envisagées sans modifier la partie active des principes actifs. Les différentes étapes sont usuelles dans le domaine des extractions d'actifs à partir de plantes, et l'homme du métier est à même d'en ajuster les paramètres réactionnels sur la base de ses connaissances générales, afin d'obtenir des extraits contenant au moins des glycopeptides riches en hydroxyproline. COMPOSITIONS COSMETIQUES ET PROCEDE COSMETIQUE DE SOIN DE LA PEAU La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques incluant des glycopeptides riches en hydroxyproline (HRGPs) de fibres de soja ou au moins un principe actif issu de fibres de soja comprenant des HRGPs, dans différentes formes galéniques, adaptées à l'administration par voie topique cutanée. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme d'émulsions huiledans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersions, gels aqueux ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide. Ces compositions sont préférentiellement des compositions contenant entre 0,01 et 20%, en poids de principe(s) actif(s) issu(s) de fibres de soja comprenant des HRGPs selon la présente invention, préférentiellement entre 0,1% et 2%. Ces compositions comprennent, outre l'actif, un milieu physiologiquement acceptable et de préférence cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire qui ne provoque pas de sensations d'inconfort inacceptables pour l'utilisateur tels que des rougeurs, tiraillements ou picotements. Ce milieu contient généralement de l'eau. Les compositions selon l'invention peuvent contenir comme adjuvant au moins un composé choisi parmi - les huiles, qui peuvent être choisies notamment parmi les huiles de silicone, linéaires ou cycliques, volatiles ou non volatiles ; - les cires, telles que l'ozokérite, la cire de polyéthylène, la cire d'abeille ou la cire de carnauba ; - les élastomères de silicone, - les tensioactifs, de préférence émulsionnants, qu'ils soient non ioniques, anioniques, cationiques ou amphotères ; - les co-tensioactifs, tels que les alcools gras linéaires ; - les épaississants et/ou gélifiants, - les humectants, tels que les polyols comme la glycérine ; - les filtres organiques, - les filtres inorganiques, - les colorants, les conservateurs, les charges, - les tenseurs, - les séquestrants, - les parfums, - et leurs mélanges, sans que cette liste soit limitative. Des exemples de tels adjuvants sont cités notamment dans le Dictionnaire CTFA (International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook publié par le Personal Gare Product Council). Ces compositions sont notamment destinées à la lutte contre l'apparition des rides. L'invention vise à cet effet un procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à lutter contre l'apparition des rides, en particulier à lisser le microrelief de la peau et/ou à combler les rides, comprenant l'application topique d'une composition renfermant des HRGPs issus de fibres de soja ou un principe actif en contenant, en particulier d'une composition renfermant entre 0,01 et 20% en poids de principe(s) actif(s) issu(s) de Soja selon la présente invention. Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et/ou leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'adjonction envisagée. EXEMPLES Un exemple non limitatif de procédé d'obtention, de principe actif obtenu à partir de fibres de Soja comprenant des HRGPs, est présenté en suivant, ainsi 10 que des exemples de composition incluant un tel principe actif. Exemple 1 : procédé d'obtention du principe actif selon l'invention Un exemple de procédé d'obtention d'un principe actif selon l'invention, comprend la mise en oeuvre des étapes suivantes : - solubilisation de poudre de fibres de soja dans l'eau à raison de 50g/l, 15 - deux hydrolyses enzymatiques successives, en présence d'une carbohydrase et d'une protéase, - séparation des phases soluble et insoluble par décantation, - inactivation par traitement thermique, - ajustement du pH, 20 - filtration, et - ultrafiltration entre 5000 Da et 18000 Da, et récupération du rétentat. Le principe actif obtenu présente les caractéristiques suivantes : - une teneur en matières sèches de 26,9 g/I, - un pH de 5,8 25 - une teneur en sucres totaux de 58,3% en poids par rapport à la matière sèche, - une teneur en protéines totales de 6,2% en poids par rapport à la matière sèche, dont la teneur en hydroxyproline est de 31mg/g de protéines, - une fraction glycopeptides contenant 0,64g/l de protéines et 4,8g/l de sucres, soit 20% de glycopeptides en poids de matière sèche ; la masse molaire moyenne des glycopeptides riches en hydroxyproline est de 13600 Da, - une teneur en cendres de 9,5% en poids par rapport à la matière sèche, - une teneur en polyphénols de 0,15% en poids par rapport à la matière sèche, et - une teneur en acides uroniques de 28,85% en poids par rapport à la matière sèche. Decolorization and deodorization stages of the soluble phase can be envisaged without modifying the active part of the active principles. The various steps are customary in the field of extraction of active ingredients from plants, and the skilled person is able to adjust the reaction parameters on the basis of his general knowledge, in order to obtain extracts containing the less glycopeptides rich in hydroxyproline. COSMETIC COMPOSITIONS AND COSMETIC SKIN CARE PROCESS The present invention also covers cosmetic compositions including hydroxyproline-rich glycopeptides (HRGPs) of soybean fibers or at least one active principle derived from soybean fibers comprising HRGPs, in different dosage forms. , adapted for topical administration to the skin. These compositions may especially be in the form of oil-in-water emulsions, water-in-oil emulsions, multiple emulsions (water / oil / water or oil / water / oil) which may be microemulsions or nanoemulsions, or in the form solutions, suspensions, hydrodispersions, aqueous gels or powders. They can be more or less fluid and have the appearance of a cream, a lotion, a milk, a serum, an ointment, a gel, a paste or a foam, or in solid form. These compositions are preferably compositions containing between 0.01 and 20% by weight of active principle (s) derived from soya fibers comprising HRGPs according to the present invention, preferentially between 0.1% and 2% by weight. %. These compositions comprise, in addition to the active agent, a physiologically acceptable and preferably cosmetically acceptable medium, that is to say which does not cause unacceptable sensations of discomfort for the user such as redness, tightness or tingling. This medium usually contains water. The compositions according to the invention may contain as adjuvant at least one compound chosen from: - oils, which may be chosen in particular from silicone oils, linear or cyclic, volatile or non-volatile; waxes, such as ozokerite, polyethylene wax, beeswax or carnauba wax; silicone elastomers; surfactants, preferably emulsifiers, whether they are nonionic, anionic, cationic or amphoteric; co-surfactants, such as linear fatty alcohols; thickeners and / or gelling agents, humectants, such as polyols such as glycerine; organic filters, inorganic filters, dyes, preservatives, fillers, tensors, sequestering agents, perfumes, and mixtures thereof, without this list being limiting. Examples of such adjuvants are cited in particular in the CTFA Dictionary (International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook published by the Personal Railway Product Council). These compositions are especially intended for the fight against the appearance of wrinkles. To this end, the invention aims at a cosmetic process for the care of human skin, intended to combat the appearance of wrinkles, in particular to smooth the microrelief of the skin and / or to fill wrinkles, comprising the topical application of a composition containing HRGPs derived from soy fibers or an active ingredient containing them, in particular a composition containing between 0.01 and 20% by weight of active ingredient (s) derived from soybeans according to the present invention. Of course, those skilled in the art will take care to choose any additional compounds, active or non-active, and / or their quantity, so that the advantageous properties of the mixture are not, or not substantially, altered by the addition considered. EXAMPLES A non-limiting example of a process for obtaining an active ingredient obtained from soybean fibers comprising HRGPs is presented following, as well as examples of compositions including such an active ingredient. EXAMPLE 1 Process for Obtaining the Active Ingredient According to the Invention An example of a process for obtaining an active ingredient according to the invention comprises the following steps: solubilization of soybean powder powder in the water at a rate of 50 g / l, two successive enzymatic hydrolyses in the presence of a carbohydrase and a protease, separation of the soluble and insoluble phases by decantation, inactivation by heat treatment, adjustment of the pH, filtration, and ultrafiltration between 5000 Da and 18000 Da, and recovery of the retentate. The active ingredient obtained has the following characteristics: a solids content of 26.9 g / l, a pH of 5.8 and a total sugar content of 58.3% by weight relative to the dry matter content. a total protein content of 6.2% by weight relative to the dry matter, the hydroxyproline content of which is 31 mg / g of proteins, a glycopeptide fraction containing 0.64 g / l of protein and 4.8 g 1% of sugars, ie 20% of glycopeptides by weight of dry matter; the average molar mass of glycopeptides rich in hydroxyproline is 13600 Da, an ash content of 9.5% by weight relative to the dry matter, a polyphenol content of 0.15% by weight relative to the material dry, and - an uronic acid content of 28.85% by weight relative to the dry matter.
Exemple 2 : utilisation d'un principe actif de l'invention dans un fluide jour anti- rides Phase A . Eau QSP 100% Carbopol Ultrez 20 (Noveon) 0,3% Glycérine 4% Phase B. RitaBate 20 (Cornelius) 4,5% DUB PTCC (Stéarinerie Dubois) 6% Montane 481 (Seppic) 3,2% Phase C. Beurre de karité (Sictia) 0,7% Conservateur Principe actif selon l'invention (exemple 1 ) Phase D. NaOH QSP pH 5,2 Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Cette émulsion fluide présente un pH de 5,2. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - Mélanger A, bien disperser le gel à 50°C sous agitation mécanique, - Mélanger B, chauffer A et B à 80°C, sous agitation mécanique, - Emulsionner B dans A sous émulseur rotor stator, - A 50°C, ajouter C, - A 30°C, ajuster le pH avec D, puis laisser sous émulseur jusqu'à ce que l'émulsion soit uniforme. Example 2: Use of an active ingredient of the invention in an anti-wrinkle day fluid Phase A. Water QSP 100% Carbopol Ultrez 20 (Noveon) 0.3% Glycerin 4% Phase B. RitaBate 20 (Cornelius) 4.5% DUB PTCC (Stéarinerie Dubois) 6% Montane 481 (Seppic) 3.2% Phase C. Butter of shea (Sictia) 0.7% Preservative Active ingredient according to the invention (example 1) Phase D. NaOH QSP pH 5.2 The amounts indicated are given as a percentage of weight. This fluid emulsion has a pH of 5.2. It can be obtained by carrying out the following steps: - Mix A, disperse the gel well at 50 ° C. with mechanical stirring, - Mix B, heat A and B at 80 ° C., with mechanical stirring, - Emulsify B in At 50 ° C, add C, at 30 ° C, adjust the pH with D, then leave under emulsifier until the emulsion is uniform.
Exemple 3 : utilisation d'un principe actif de l'invention dans une crème de nuit Phase A. Eau QSP 100 % Satiaxane CX930 (Degussa) 0,5 % Phase B. Pelemol 2014 (Cornelius) 2 °/G Ritabate 20 (Cornelius) 2 °/G Ritabate 165 (Cornelius) 4 °/G PhytoWax Olive 10L40 (Sophim) 3 % DC 73100 (Dow Corning) 1 % DUB PTCC (Stéarinerie Dubois) 1 °/G DUB BA (Stéarinerie Dubois) 2% Phase C. Conservateur 0,7 % Principe actif selon l'invention (exemple 1) 2% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Cette émulsion présente un pH de 6,2. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - Mélanger A, bien disperser le gel à 50°C sous agitation mécanique, - Mélanger B, chauffer A et B à 80°C, sous agitation mécanique, - Emulsionner B dans A sous émulseur rotor stator, - A 40°C, additionner C, dans l'ordre - Laisser sous agitation, jusqu'à complète homogénéisation. Example 3: Use of an active ingredient of the invention in a night cream Phase A. Water QSP 100% Satiaxane CX930 (Degussa) 0.5% Phase B. Pelemol 2014 (Cornelius) 2 ° / G Ritabate 20 (Cornelius ) 2 ° / G Ritabate 165 (Cornelius) 4 ° / G PhytoWax Olive 10L40 (Sophim) 3% DC 73100 (Dow Corning) 1% DUB PTCC (Stéarinerie Dubois) 1 ° / G DUB BA (Stéarinerie Dubois) 2% Phase C Preservative 0.7% Active ingredient according to the invention (example 1) 2% The amounts indicated are given as a percentage of weight. This emulsion has a pH of 6.2. It can be obtained by carrying out the following steps: - Mix A, disperse the gel well at 50 ° C. with mechanical stirring, - Mix B, heat A and B at 80 ° C., with mechanical stirring, - Emulsify B in At 40 ° C, add C, in order - Leave to stir until completely homogenized.
Exemple 4 : utilisation d'un principe actif de l'invention dans un sérum Phase A. Eau QSP 100% Carbopol 940 (Noveon) 2,5 % Phase B. Ritaphyl ICS (Cornelius) 6,3 % IPP 5,7 % Pelemol 2014 (Cornelius) 1 % Ritastearic (Cornelius) 2,5 % Montanov 202 (Seppic) 1,9 % Phase C. Conservateur 0,7 % Principe actif selon l'invention (exemple 1) 2% Phase D. NaOH Qsp pH 4,5 Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Ce sérum présente un pH de 4,5. EXAMPLE 4 Use of an Active Principle of the Invention in a Serum Phase A. Water QSP 100% Carbopol 940 (Noveon) 2.5% Phase B. Ritaphyl ICS (Cornelius) 6.3% IPP 5.7% Pelemol 2014 (Cornelius) 1% Ritastearic (Cornelius) 2.5% Montanov 202 (Seppic) 1.9% Phase C. Preservative 0.7% Active principle according to the invention (Example 1) 2% Phase D. NaOH Qsp pH 4 The amounts indicated are given as a percentage of weight. This serum has a pH of 4.5.
Il peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - Mélanger A, bien disperser le gel sous agitation mécanique, - Mélanger B, - Chauffer A et B à 80°C, - Emulsionner B dans A sous émulseur, - A 40°C ajouter C et homogénéiser, - Ajuster le pH avec D, sous forte agitation mécanique, et continuer l'homogénéisation sous émulseur jusqu'à complet refroidissement. It can be obtained by carrying out the following steps: - Mix A, disperse the gel well with mechanical stirring, - Mix B, - Heat A and B at 80 ° C, - Emulsify B in A under the emulsifier, - A 40 C. Add C and homogenise. Adjust the pH with D with vigorous mechanical stirring and continue homogenization in an emulsifier until complete cooling.
EVALUATION DE L'EFFET ANTI-RIDES Ces essais ont pour objet d'illustrer l'invention, en montrant l'efficacité antirides du principe actif selon l'invention, en comparaison à des substances de références, le palmitoyl pentapeptide-3 et la vitamine C, et en comparaison à d'autres principes actifs cosmétiques issus de fibres soja. EVALUATION OF THE ANTI-WRINKLE EFFECT The purpose of these tests is to illustrate the invention, by showing the anti-wrinkle efficacy of the active principle according to the invention, in comparison with reference substances, palmitoyl pentapeptide-3 and vitamin C, and in comparison with other cosmetic active ingredients derived from soya fibers.
A. Etudes in Vitro : effet sur la synthèse de collagène I Le but de cette étude est d'évaluer l'effet d'un principe actif selon l'invention sur la synthèse de collagène I, composant majeur du derme, en comparaison : - à deux molécules de référence, la vitamine C et un palmitoyl pentapeptide-3, et - aux produits A et B issus de fibres de soja, présentant des propriétés différentes et obtenus par la mise en oeuvre de procédés différents. Le principe actif selon l'invention est celui de l'exemple 1. Le produit A est un principe actif issu de fibres de soja présentant les caractéristiques suivantes - taux de matière sèche : 17,6 g/I - teneur en protéines : 5,3 g/I, soit 30,1% par rapport à la matière sèche, - teneur en sucres : de 8,3g/l soit 41,2% par rapport à la matière sèche. Le produit A est obtenu par la mise en oeuvre du procédé comprenant les étapes suivantes : - solubilisation de fibres de soja dans l'eau, - hydrolyse(s) enzymatique(s) simultanées ou successives, - ajustement du pH, - séparation des phases soluble et insoluble par filtration, centrifugation, décantation, - concentration de la fraction active par filtration, ultrafiltration, osmose inverse, ou nanofiltration, et - filtration stérilisante. Le produit B est un principe actif issu de fibres de soja présentant les caractéristiques suivantes : - taux de matière sèche : 82,8g/l - teneur en protéines : 45,4g/l - pH:6,9. A. In Vitro Studies: Effect on Collagen Synthesis I The aim of this study is to evaluate the effect of an active ingredient according to the invention on the synthesis of collagen I, a major component of the dermis, in comparison: two reference molecules, vitamin C and palmitoyl pentapeptide-3, and - products A and B derived from soybean fibers, having different properties and obtained by the implementation of different processes. The active principle according to the invention is that of Example 1. Product A is an active ingredient derived from soybean fibers having the following characteristics: dry matter content: 17.6 g / I - protein content: 5, 3 g / I, or 30.1% relative to the dry matter, - sugar content: 8.3 g / l or 41.2% relative to the dry matter. Product A is obtained by carrying out the process comprising the following steps: solubilization of soybean fibers in water, simultaneous or successive enzymatic hydrolysis (s), pH adjustment, separation of the phases soluble and insoluble by filtration, centrifugation, decantation, concentration of the active fraction by filtration, ultrafiltration, reverse osmosis, or nanofiltration, and sterilizing filtration. Product B is an active ingredient derived from soybean fibers having the following characteristics: dry matter content: 82.8 g / l; protein content: 45.4 g / l; pH: 6.9.
Le produit B est obtenu par la mise en oeuvre du procédé comprenant les étapes suivantes : - obtention d'un produit X : - solubilisation de tourteau de soja à raison d'au moins 50 g/I en poids, dans de l'eau à pH acide, - hydrolyses enzymatiques simultanées ou successives en présence de protéases, - filtration, décantation ou centrifugation afin de séparer la phase solubilisée et les produits insolubles, et - concentrations successives de la phase active par filtration, ultrafiltration, osmose ou nanofiltration. - obtention d'un produit Y - solubilisation de fibres de soja dans de l'eau à pH basique, - au moins une hydrolyse enzymatique à l'aide d'au moins une protéase, - filtration, décantation ou centrifugation afin de séparer la phase solubilisée et les produits insolubles, et - concentrations successives - mélange de X et Y. 20 L'étude a été réalisée sur fibroblastes humains normaux par dosage ELISA et par immunocytologie. Le protocole opératoire est le suivant. A JO, les fibroblastes humains sont ensemencés dans un milieu de culture 25 adapté et les cellules sont incubées à 37°C. A J2, Le milieu de culture est éliminé et remplacé par un milieu contant un principe actif de l'exemple 1 selon l'invention à 0,01% - 0,05% - 0,10% 10 15 et 0,25% (V/V) ou la vitamine C à 0,25,ug/ml ou un palmitoyl pentapeptide-3 à 1% ou le produit A à 0,10% ou encore le produit B à 1 ou 2%. Les cellules sont ensuite incubées à 37°C. A J3, les surnageants sont récupérés et stockés à -80°C en attente du 5 dosage ELISA. Par ailleurs, un marquage immunocytologique est également réalisé. Les résultats obtenus du taux de collagène I synthétisé en pourcentage par rapport à un témoin négatif sont présentés dans le tableau ci-après Taux de collagène I / témoin (%) Témoin Vitamine C 0,25,ug/ml + 1064 Palmitoyl pentapeptide-3 1% + 157 Produit A l% +62 Produit A 2% +120 Produit B 0,10% +496 Principe actif selon l'invention Exemplel 0,01% + 66 Principe actif selon l'invention Exemplel 0,02% + 190 Principe actif selon l'invention Exemplel 0,05% + 428 Principe actif selon l'invention Exemplel 0,10% + 1062 Principe actif selon l'invention Exemplel 0,25% + 1190 10 On constate que le principe actif selon l'invention stimule la synthèse du collagène I par les fibroblastes humains normaux, même à très faible concentration. Ces résultats montrent notamment que testé à 0,25%, le principe actif selon l'invention stimule la synthèse du collagène I par les fibroblastes humains normaux de 1190%. Cet effet est dose dépendant et comparable à celui de la vitamine C testée à 0,25pg/ml. On constate enfin, que l'efficacité observée est bien supérieure à celle d'autres hydrolysats de soja, ne présentant pas les caractéristiques particulières de la présente invention, et comparable à celle obtenue avec les molécules de synthèse de référence. B. Etudes in Vivo : Etude des propriétés anti-rides L'objectif de cette étude est d'évaluer in vivo l'effet anti-rides d'un principe actif selon l'invention formulé à 2% en émulsion contre placebo au niveau de la patte d'oie par projection de franges. Cette étude a été réalisée sur deux groupes de volontaires sains, de sexe féminin, présentant des rides au niveau de la zone d'étude : l'un testant le placebo, l'autre le principe actif selon l'invention (principe actif de l'exemple 1). Product B is obtained by carrying out the process comprising the following steps: obtaining a product X: solubilizing soybean meal at a rate of at least 50 g / l by weight, in water with acid pH, - simultaneous or successive enzymatic hydrolyses in the presence of proteases, - filtration, decantation or centrifugation in order to separate the solubilized phase and the insoluble products, and - successive concentrations of the active phase by filtration, ultrafiltration, osmosis or nanofiltration. - Obtaining a product Y - Solubilization of soybean fibers in water at basic pH, - At least one enzymatic hydrolysis using at least one protease, - Filtration, decantation or centrifugation to separate the phase solubilized and insoluble products, and - successive concentrations - mixture of X and Y. The study was carried out on normal human fibroblasts by ELISA assay and by immunocytology. The operating protocol is as follows. At 0, human fibroblasts are seeded in a suitable culture medium and the cells are incubated at 37 ° C. At day 2, the culture medium is removed and replaced with a medium containing an active principle of Example 1 according to the invention at 0.01% - 0.05% - 0.10% and 0.25% ( V / V) or vitamin C at 0.25 μg / ml or palmitoyl pentapeptide-3 at 1% or product A at 0.10% or product B at 1 or 2%. The cells are then incubated at 37 ° C. On D3, the supernatants are recovered and stored at -80 ° C pending the ELISA assay. In addition, immunocytological labeling is also performed. The results obtained of the level of collagen I synthesized as a percentage relative to a negative control are presented in the table below. Collagen I level / control (%) Control Vitamin C 0.25, ug / ml + 1064 Palmitoyl pentapeptide-3 1% + 157 Product A l% +62 Product A 2% +120 Product B 0.10% +496 Active ingredient according to the invention Exemplel 0.01% + 66 Active ingredient according to the invention Exemplel 0.02% + 190 Active ingredient according to the invention Exemplel 0.05% + 428 Active ingredient according to the invention Exemplel 0.10% + 1062 Active ingredient according to the invention Exemplel 0.25% + 1190 It is found that the active ingredient according to the invention stimulates the synthesis of collagen I by normal human fibroblasts, even at very low concentration. These results show in particular that tested at 0.25%, the active ingredient according to the invention stimulates the synthesis of collagen I by normal human fibroblasts of 1190%. This effect is dose dependent and comparable to that of vitamin C tested at 0.25 μg / ml. Finally, it is found that the observed efficiency is much higher than that of other soy hydrolysates, not having the particular characteristics of the present invention, and comparable to that obtained with the reference synthetic molecules. B. In Vivo Studies: Study of anti-wrinkle properties The objective of this study is to evaluate in vivo the anti-wrinkle effect of an active ingredient according to the invention formulated at 2% in emulsion against placebo at the level of the crow's feet by projection of fringes. This study was conducted on two groups of healthy volunteers, female, with wrinkles in the study area: one testing the placebo, the other the active ingredient according to the invention (active ingredient of the Example 1).
En parallèle, une autre étude a été menée pour évaluer l'effet de deux molécules de référence (molécules de synthèse) dans les mêmes conditions, contre placebo : - un palmitoyl pentapeptide-3 formulé à 3% en émulsion - le rétinol formulé à 0,075% en émulsion. In parallel, another study was conducted to evaluate the effect of two reference molecules (synthetic molecules) under the same conditions, against placebo: - palmitoyl pentapeptide-3 formulated at 3% in emulsion - retinol formulated at 0.075 % in emulsion.
L'étude des molécules de référence a été réalisée en hémi-visage. Les produits ont été randomisés sur 43 volontaires répartis de la façon suivante : - 31 hémi-visages pour l'étude du placebo, volontaires d'âge moyen 55 ± 9 ans, - 27 hémi-visages pour l'étude du palmitoyl pentapeptide-3, volontaires d'âge moyen 54 ± 10 ans, - 28 hémi-visages pour l'étude du rétinol, volontaires d'âge moyen 52 ± 9 ans. The study of the reference molecules was carried out in half-face. The products were randomized to 43 volunteers distributed as follows: - 31 half-faces for the study of placebo, middle-aged volunteers 55 ± 9 years, - 27 half-faces for the study of palmitoyl pentapeptide-3 , volunteers of mean age 54 ± 10 years, - 28 half-faces for the study of retinol, volunteers of average age 52 ± 9 years.
La méthode d'analyse utilisée pour l'étude consiste à réaliser des acquisitions en 3D par projection de franges de la patte d'oie. Les acquisitions sont réalisées à l'aide d'un appareil de projection de franges dédié à la mesure 3D du relief cutané. L'effet du produit est mesuré sur une région d'intérêt de 15x15mm découpée automatiquement sur l'acquisition originale. Les paramètres les plus pertinents retenus pour cette étude sont : - des paramètres de rugosité en 3D Sq : moyenne quadratique de rugosité de surface Sa : moyenne arithmétique de rugosité de surface - Des paramètres de volume volume positif : volume supérieur à la surface de la peau volume négatif : volume inférieur à la surface de la peau Une diminution de ces différents paramètres est caractéristique d'une amélioration du relief de la surface étudiée et d'une diminution des rides. Le protocole opératoire de l'étude est décrit en suivant. Entre J-14 et JO, les volontaires appliquent une crème placebo deux fois par jour sur l'ensemble du visage. A JO, on réalise une acquisition en 3D de la patte d'oie par projection de franges. Entre JO et J55, les volontaires appliquent bi quotidiennement les produits. A J56, on réalise à nouveau une acquisition en 3D de la patte d'oie par projection de franges. Les résultats obtenus en pourcentage de variation par rapport au résultats obtenus pour le placebo, sont présentés dans les tableaux suivants : * Paramètres de rugosité 3 D : Variation / Placebo (%) Paramètre Sa Paramètre Sq Principe actif selon l'invention -9,8% -9,5% (Exemple 1) 2% Palmitoyl pentapeptide-3 3% -8,9% -8,4% Rétinol 0,075% -11,6% -10,9% * Paramètres de volume : Variation / Placebo (%) Paramètre volume Paramètre volume positif négatif Principe actif selon l'invention -27,0% -21,1% (Exemple 1) 2% Palmitoyl pentapeptide-3 3% -25,3% -19,4% Rétinol 0,075% -27,4% -25,0% On constate que le principe actif selon l'invention permet de lisser le relief cutané au niveau des pattes d'oie et de réduire les rides en diminuant le volume négatif et le volume positif. En particulier, dans les conditions de cette étude, après 56 jours d'applications biquotidiennes, le principe actif selon l'invention formulé à2%: - lisse le relief cutané au niveau des pattes d'oie : il diminue le paramètre Sa de 9,8% et le paramètre Sq de 9,5%, - réduit les rides en permettant une diminution des paramètres : de volume négatif de 21,1% et de volume positif de 27,0%.The analysis method used for the study consists in making 3D acquisitions by projection of fringing crow's feet. The acquisitions are made using a fringe projection device dedicated to the 3D measurement of the cutaneous relief. The effect of the product is measured on a region of interest of 15x15mm cut automatically on the original acquisition. The most relevant parameters selected for this study are: - roughness parameters in 3D Sq: root mean square of surface roughness Sa: arithmetic average of surface roughness - Positive volume volume parameters: volume greater than the surface of the skin negative volume: volume below the surface of the skin A decrease in these different parameters is characteristic of an improvement in the relief of the studied surface and a reduction of wrinkles. The operating protocol of the study is described following. Between D-14 and OJ, volunteers apply a placebo cream twice a day on the entire face. At OJ, we realize a 3D acquisition of crow's feet by fringe projection. Between OJ and J55, the volunteers apply bi products daily. At J56, we realize again a 3D acquisition of crow's feet by fringe projection. The results obtained as a percentage of variation with respect to the results obtained for the placebo, are presented in the following tables: * Roughness parameters 3 D: Variation / Placebo (%) Parameter Sa Parameter Sq Active principle according to the invention -9.8 % -9.5% (Example 1) 2% Palmitoyl Pentapeptide-3% -8.9% -8.4% Retinol 0.075% -11.6% -10.9% * Volume Parameters: Variation / Placebo ( %) Volume parameter Positive negative volume parameter Active principle according to the invention -27.0% -21.1% (Example 1) 2% Palmitoyl pentapeptide-3% -25.3% -19.4% Retinol 0.075% - 27.4% -25.0% It is found that the active ingredient according to the invention makes it possible to smooth the cutaneous relief at the crow's feet and reduce wrinkles by decreasing the negative volume and the positive volume. In particular, under the conditions of this study, after 56 days of twice-daily application, the active ingredient according to the invention formulated at 2%: smoothes the cutaneous relief at the crow's feet: it decreases the parameter Sa by 9, 8% and the Sq parameter of 9.5%, - reduces wrinkles by allowing a decrease in the parameters: negative volume of 21.1% and positive volume of 27.0%.
22 On constate enfin, que l'efficacité observée est comparable à celle obtenue avec les molécules de synthèse de référence, sur tous les paramètres après 56 jours de traitement. Finally, it can be seen that the efficacy observed is comparable to that obtained with the reference synthetic molecules, on all parameters after 56 days of treatment.
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