FR2955593A1 - Signature moleculaire peau agee - Google Patents

Abstract

La présente invention est relative à une méthode d'évaluation de l'homéostasie épidermique de la peau d'un sujet comprenant la détermination du caractère significativement modulé ou non du niveau d'expression d'au moins un gène choisi parmi les gènes ADAM 15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, H2AFB2, ICAM1, IFNAR2, IL3RA, ITGAM, KHDRBS1, LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4, XRCC1, ANXA6, ARPC4, ATP1A1, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYC1, DAPK3, FGA, HSD17B10, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPA1, SSBP1, TLE4, TSPAN3 et UQCRQ, au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum. Elle concerne également différentes méthodes d'évaluation et de diagnostic de l'état de l'épiderme d'un individu, ainsi que des méthodes d'évaluation et de criblage de produits ou procédés susceptibles d'améliorer l'homéostasie épidermique. L'invention a également trait à des kit pour la mise en œuvre de ces différentes méthodes.

Description

La présente invention est dans le domaine cosmétique, et plus particulièrement dans le domaine du soin et du traitement cosmétique de la peau. L'invention repose sur l'identification, par les inventeurs de 45 gènes dont le caractère modulé ou non de leur niveau d'expression au sein de l'épiderme après une agression, reflète l'homéostasie épidermique de la peau et permet de distinguer une peau dite « âgée » d'une peau dite « jeune ». Le stratum corneum, ou couche cornée, est la couche superficielle de l'épiderme située à l'interface entre l'organisme et son environnement. Il est composé de cornéocytes, cellules anucléées résultant de la différenciation des kératinocytes épidermiques. Les cornéocytes sont riches en kératines et sont entourés d'une matrice lipidique imperméable. De par sa composition protéique et lipidique le stratum corneum joue un rôle essentiel de barrière cutanée. Il empêche l'intrusion d'agents microbiologiques et permet de préserver l'hydratation de la peau et donc du corps en général. Toutes les atteintes physiques ou chimiques à l'intégrité du stratum corneum ont pour conséquence une augmentation de la perte en eau au travers de la peau. Ainsi, l'application topique d'acétone ou de détergents provoquant une délipidation superficielle du stratum corneum, ou le tape stripping qui consiste à éliminer les cornéocytes à l'aide d'un ruban adhésif, augmentent de manière très importante la perte insensible en eau (Grubauer G. et al, 1989; Kuss O. et al, 1998; Pinnagoda J. et al, 1990; Tanaka M. et al, 1997; Zhai H. et al, 1998). De telles altérations perturbent en fait toute l'homéostasie épidermique et induisent une réponse physiologique dans le but de restaurer l'intégrité de la fonction barrière du stratum corneum. Ainsi, les kératinocytes des couches superficielles de l'épiderme activent la sécrétion extracellulaire de corps lipidiques afin d'apporter rapidement à la peau une nouvelle membrane imperméable et ainsi de réduire de façon superficielle la perte en eau (Grubauer G. et al., 1987; Menon G.K. et al., 1985). D'autre part, la prolifération des kératinocytes de la couche basale est activée pour remplacer les cellules du stratum corneum qui auraient été endommagées (Proksch E. et al., 1991; Wood L.C. et al, 1992). La mesure de la « Perte Insensible en Eau » (PIE) est la méthode la plus fréquemment utilisée pour évaluer l'intégrité de la fonction barrière du stratum corneum (Piepkorn M. et al., 1994). La PIE se mesure à l'aide d'un évaporimètre. Cet appareil -2- possède un détecteur d'humidité et de température qui lui permet de mesurer le gradient d'évaporation de l'eau à la surface de la peau. Cette technologie présente les avantages d'être macroscopique, rapide et non invasive. Cependant, les mesures de PIE sont soumises à de nombreux facteurs de variation qui en limitent la précision. La température ambiante, l'hygrométrie souvent inhérente à la saison où est menée l'étude, la turbulence de l'air ou encore la pression avec laquelle est appliqué l'appareil induisent en effet des variations notables au niveau de ces mesures (Barel A.O. et al, 1995). L'état de stress du volontaire lors des mesures a également une influence non négligeable, un temps de repos suffisant avant lecture est d'ailleurs conseillé (Van S., V et al, 1994). Même sur des régions aussi semblables que les avant-bras, il a été montré une nécessité indispensable de randomisation des mesures, la PIE étant significativement accrue sur l'avant-bras dominant (Treffel P. et al, 1994). Dans ce contexte, la mise au point d'une méthode d'évaluation simple, fiable, reproductible et précise de l'état de la fonction barrière épidermique et par conséquence de la dynamique de sa fonction homéostasique, serait particulièrement avantageuse. Concernant le vieillissement de la peau et en dehors des conséquences bien connues de l'âge sur le relief de la peau, de nombreux inconforts sont rapportés par les personnes âgées. Ces inconforts trouvent leur origine dans une altération de la fonction barrière et de l'homéostasie épidermique de leur peau. En particulier, il est fréquemment observé chez les personnes âgées une plus forte prévalence aux xéroses chroniques, caractérisées par une perte en eau accrue au travers de la peau. En fait, le stratum corneum des peaux âgées a une teneur en lipides intercellulaires décrue par rapport aux peaux jeunes, particulièrement pendant la période hivernale (Rogers J. et al., 1996; Saint Leger D. et al 1988). Ce changement de composition du stratum corneum perturbe ses propriétés physico-chimiques de barrière cutanée. Le stratum corneum devient notamment plus sensible avec l'âge aux agressions physiques ou chimiques telles que le tape stripping ou l'application d'acétone (Ghadially R. et al, 1995) et sa perméabilité aux médicaments et en particulier aux composés hydrophiles est décrue (Roskos K.V. et al, 1989). D'autre part, la sévérité des allergies de contact est exacerbée sur les peaux âgées à cause d'un turnover épidermique plus lent et donc moins fréquent (Piaserico S. et al, 2004). Enfin, la vitesse de récupération de la fonction barrière après altération du stratum corneum est ralentie avec l'âge laissant supposer un dysfonctionnement de la fonction homéostatique de l'épiderme (Denda M., 2002; Ghadially R. et al, 1995; Leveque J.L.,2001). Cependant, malgré ces perturbations fonctionnelles dues au vieillissement de la peau, il a été montré que le stratum corneum des personnes âgées a une épaisseur équivalente à celle des peaux jeunes (Lock-Andersen, J. et al, 1997) et une PIE constitutive peu différente (Ghadially, R. et aI, 1996). Ceci démontre que la PIE ne permet pas, dans le cas précis du vieillissement, une évaluation complète de la fonctionnalité de la barrière cutanée et de l'homéostasie épidermique de la peau d'un sujet. Or, la plupart des études cliniques décrites à ce jour se basent sur des mesures de PIE pour objectiver l'effet de traitements sur la fonction barrière cutanée ou pour suivre le 10 retour de l'épiderme à un état homéostatique normal après agression. Lors d'une étude visant à déterminer l'action de divers traitements cosmétiques sur la fonction barrière de l'épiderme humain, une analyse transcriptomique de la réponse de l'épiderme et des mesures de PIE ont été réalisées simultanément (Marionnet C. et aI, 2003). L'utilisation de microarray a ainsi permis d'identifier à la fois des marqueurs reproductibles et communs 15 aux différentes agressions ainsi que des marqueurs spécifiques à chacune des agressions. Cependant la PIE n'a pas permis d'apporter des éléments de comparaison des traitements cosmétiques effectués. Dans ces conditions, il existe un besoin d'identification de marqueurs pertinents, reproductibles et significatifs qui reflètent l'homéostasie épidermique et qui permettent de 20 mettre en évidence un éventuel déséquilibre de la fonction barrière de la peau dû à l'homéostasie épidermique, tel que le déséquilibre dû à l'âge. Dans cette optique, les inventeurs ont réalisé une étude transcriptomique comparative des niveaux de modulation de l'expression génique et de la cinétique de retour à l'homéostasie épidermique de l'épiderme humain après altération du stratum 25 corneum par tape stripping, entre des individus sains jeunes et âgés. Brièvement, des volontaires masculins sains ont été recrutés afin de participer à une étude transcriptomique de plus de 4000 gènes connus pour être exprimés dans la peau. 5 groupes de 6 individus jeunes (25 +/- 4 ans) et 5 groupes de 6 individus âgés (67+1- 4 ans) ont été établis. Au temps t = 0, un tape stripping a été réalisé sur la face 30 interne de l'un de leurs avant bras, choisi de façon randomisée, jusqu'à ce que le stratum corneum soit entièrement enlevé (48 +1- 7 strips en moyenne quelque soit l'âge des patients). L'autre avant bras témoin n'a subit aucun traitement. Aux temps 02h, 06h, 18h, 30h et 72h après le tape stripping, des prélèvements d'épiderme d'environ 1.5 cm X 1.5 cm ont été effectués sur les deux avant bras d'un groupe d'individus jeunes et d'un groupe d'individus âgés à l'aide d'un dermatome. Les ARN totaux de ces prélèvements ont été extraits et utilisés pour hybridation sur membranes DermArray® cDNA microarrays (IntegriDerm, Birmingham, AL, USA). L'expression de plusieurs centaines de gènes a varié au cours du temps après tape stripping. Mais de façon surprenante et inattendue, les inventeurs ont observé que 22 gènes en particulier ont montré une modulation significative chez les sujets jeunes alors qu'aucune variation significative de leur expression n'était visible chez les sujets âgés. Il s'agit des gènes ADAM15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, H2AFB2, ICAMI, IFNAR2, IL3RA, ITGAM, KHDRBS1, LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4 et XRCC1 (groupe A). Inversement, 23 gènes ont montré une modulation significative chez les sujets âgés alors qu'aucune variation significative de leur expression n'était visible chez les sujets jeunes. Il s'agit des gènes ANXA6, ARPC4, ATPIA1, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYC1, DAPK3, FGA, HSD17B10, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPAI, SSBP1, TLE4, TSPAN3 et UQCRQ (groupe B). Cette réponse différentielle est le reflet moléculaire des spécificités d'expressions géniques dues à l'âge. Les 45 gènes identifiés par les inventeurs permettent donc de distinguer une peau de type « jeune » d'une peau de type « âgée » en réponse à une agression, et donc par là d'évaluer la capacité homéostasique de l'épiderme d'un individu. II s'agit d'une signature représentative des différences d'expression génique existant entre la peau humaine de type « jeune » et la peau de type « âgée » suite à une altération de la fonction barrière par une agression. Enfin, 108 gènes n'ont montré aucune différence d'expression dans le temps ni selon l'âge du volontaire. Les 19 d'entre eux dont le profil est le plus semblable entre volontaires jeunes et âgés ont été sélectionnés en tant que gènes de ménage. Par « Tape stripping » ou « décollement de la couche cornée par un adhésif », on entend une méthode pour réaliser une agression physique de la peau consistant à éliminer les cornéocytes à l'aide d'un ruban adhésif, le cas échéant en reproduisant -5- plusieurs fois le décollement de l'adhésif. Le tape stripping est dit `contrôlé' lorsqu'il n'altère que le stratum corneum et éventuellement les couches superficielles de l'épiderme malpighiens, sans altérer les couches plus profondes de l'épiderme. L'« homéostasie épidermique » caractérise l'ensemble des fonctions de régulation de l'épiderme qui lui confèrent la capacité de maintenir un équilibre physiologique et un bon fonctionnement en dépit des contraintes extérieures. L'homéostasie de l'épiderme est entre autre assurée par sa fonction barrière qui permet notamment d'empêcher l'intrusion d'agents microbiologiques et de préserver l'hydratation de la peau en empêchant la perte en eau. Cette capacité peut être excellente ou bonne quand, en réponse à une agression, l'épiderme réagit immédiatement ou rapidement pour reconstituer l'équilibre de fonctionnement, elle peut être déficiente ou inexistante quand le retour à l'équilibre est tardif ou n'est pas atteint. Cette capacité homéostasique de la peau peut donc être pleinement assurée, cas de la peau jeune normale, ou défective, cas de la peau âgée ou de toutes autres peaux présentant un déséquilibre de fonctionnement.

La présente invention est relative à l'utilisation d'une nouvelle méthode d'évaluation de l'état de l'épiderme d'un sujet au travers des déficiences de sa fonction homéostatique par le biais de la détermination du caractère significativement modulé ou non du niveau d'expression de tout ou partie des 45 gènes identifiés par les inventeurs en réponse à une agression du stratum corneum. Cette invention s'inscrit également dans le cadre du traitement du vieillissement chronologique de la peau. En effet, ces 45 gènes peuvent être utilisés comme marqueurs des différences d'expression génique au niveau de l'épiderme existant entre individus jeunes et individus âgés après altération forte du stratum corneum. L'utilisation de plusieurs de ces gènes, en particulier l'utilisation d'au moins un gène du groupe A et d'au moins un gène du groupe B, constitue une signature moléculaire des différences d'expression génique au niveau de l'épiderme existant entre individus jeunes et individus âgés après altération forte du stratum corneum. Cette signature constitue également un avantage évident pour mesurer l'effet bénéfique d'un produit (actif, molécule, extrait naturel), mais aussi d'un procédé (lumière, injection, voie orale) sur la peau. La présente invention permettra en particulier l'évaluation de l'efficacité d'un produit ou procédé anti-âge susceptible d'améliorer le renouvellement ou l'homéostasie épidermique en modulant chez les individus âgés l'expression de tout ou partie des gènes décrits de sorte que leur profil d'expression se rapproche de celui de peaux jeunes. Selon un premier aspect, la présente demande est relative à une méthode d'évaluation de l'homéostasie épidermique de la peau d'un sujet comprenant la détermination du caractère significativement modulé ou non du niveau d'expression d'au moins un gène au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum, où ledit gène est choisi parmi les gènes ADAM15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, H2AFB2, ICAMI, IFNAR2, IL3RA, ITGAM, KHDRBSI, LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4, XRCC1, ANXA6, ARPC4, ATP1A1, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYC1, DAPK3, FGA, HSD17B10, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPAI, SSBP1, TLE4, TSPAN3 et UQCRQ. Ledit sujet ou individu est par exemple un mammifère. De préférence, le sujet est un sujet humain.

Les 45 gènes précédemment cités, à savoir ADAM15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, H2AFB2, ICAMI, IFNAR2, IL3RA, ITGAM, KHDRBSI, LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4, XRCC1, ANXA6, ARPC4, ATPIA1, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYC1, DAPK3, FGA, HSD17B10, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPAI, SSBP1, TLE4, TSPAN3 et UQCRQ, sont dénommés les gènes de l'invention. La présente invention concerne donc l'évaluation de l'homéostasie épidermique et la mise en évidence de ses dysfonctionnements grâce à l'analyse du caractère modulé ou non du niveau d'expression au sein de l'épiderme d'un ou plusieurs gènes de l'invention en réponse à une agression.

Le niveau d'expression d'un gène au sein de l'épiderme en réponse à une agression du stratum corneum est considéré comme « significativement modulé » s'il diffère d'au moins 30% du niveau d'expression dudit gène en l'absence d'agression. Préférentiellement, ce niveau d'expression diffère d'au moins 40%, préférentiellement encore d'au moins 50%, par exemple d'au moins 60 ou 70% du niveau d'expression dudit gène en l'absence d'agression. La modulation du niveau d'expression peut être négative, auquel cas on parle d'un effet répressif, ou positive, auquel cas on parle d'un effet inducteur. S'il s'agit d'une modulation positive, le niveau d'expression d'un gène au sein de l'épiderme en réponse à une agression du stratum corneum est notamment considéré comme « significativement modulé » s'il est au moins 1,3 fois, voire 1,5 fois supérieur au niveau d'expression dudit gène en l'absence d'agression. Selon certaines mises en oeuvre, ce niveau d'expression est 2 ou 3 fois supérieur au niveau d'expression dudit gène en l'absence d'agression. S'il s'agit d'une modulation négative, le niveau d'expression d'un gène au sein de l'épiderme en réponse à une agression du stratum corneum est notamment considéré comme « significativement modulé » s'il est inférieur à 70%, voir à 50%, du niveau d'expression dudit gène en l'absence d'agression. Selon certaines mises en oeuvre, ce niveau d'expression est 2 ou 3 fois inférieur au niveau d'expression dudit gène en l'absence d'agression. De préférence, les zones de peau agressée et non agressée sont des zones de peau équivalentes, en termes d'emplacement et de fonction. Par exemple, il s'agit de zones de peau situées sur des membres gauche et droit, en des endroits équivalents, notamment l'intérieur de l'avant bras. Le caractère « significativement modulé » du niveau d'expression d'un gène en réponse à une agression peut également être normalisé par rapport à un niveau de référence. L'utilisation des 45 gènes selon l'invention est avantageuse dans la mesure où le caractère significativement modulé ou non est déterminant. Il n'est par conséquent pas nécessaire de comparer le niveau de modulation observé au niveaux de modulation moyens observés dans les deux populations « jeunes » et âgés » afin d'évaluer l'homéostasie épidermique. Selon une première mise en oeuvre, une telle méthode comprend l'analyse différentielle de l'expression d'au moins un gène de l'invention en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum. Par « analyse différentielle » de l'expression d'un gène donné, on entend l'analyse des différences entre l'expression d'un gène au sein d'une région de peau ayant subi une agression par rapport à une région de peau du même individu n'ayant pas subi d'agression.

Selon une mise en oeuvre particulière, ladite méthode comprend une étape de réalisation d'une agression du stratum corneum sur une région de la peau d'un individu, puis la détermination du niveau d'expression d'au moins un des gènes selon l'invention au sein de l'épiderme correspondant à la région agressée et au sein de l'épiderme correspondant à une région non agressée, et une étape de comparaison du niveau d'expression dudit gène au sein de l'épiderme correspondant aux régions agressée et non agressée. Selon une autre mise en oeuvre, ladite méthode comprend une étape de réalisation d'une agression du stratum corneum sur une région de la peau d'un individu, puis la détermination du niveau de modulation de l'expression d'au moins un gène de l'invention au sein de l'épiderme correspondant à la région agressée et une étape de comparaison de du niveau de modulation observé au niveau de référence pour la modulation de l'expression du gène choisi. Par « niveau de modulation » de l'expression d'un gène donné, on entend la différence entre le niveau d'expression du gène au sein d'une peau agressée et celui au sein d'une peau non agressée. La peau agressée et non agressée est celle du même individu. Selon encore une autre mise en oeuvre, ladite méthode comprend la comparaison du niveau de modulation de l'expression d'au moins un gène de l'invention au sein de l'épiderme correspondant à une région de la peau après une agression du stratum corneum, ladite comparaison se faisant par rapport au niveau de référence pour la modulation de l'expression du gène choisi. Pour les différents gènes de l'invention, dans certaines mises en oeuvre des méthodes de l'invention, il est fait mention d'un « niveau de référence » pour la modulation de l'expression du gène. Ce niveau de référence correspond à la modulation du niveau d'expression d'un gène de l'invention, qui est observée, après agression physique ou chimique de la peau, et caractérisant une homéostasie épidermique normale, c'est-à-dire une fonction barrière normale de l'épiderme, telle qu'on la trouve en général pour le peau de sujets jeunes. Typiquement, dans le cadre de la présente invention un sujet de moins de 40 ans, plus particulièrement un sujet âgé de 18 à 30 ans est considéré comme jeune.

De préférence, le niveau de référence pour la modulation des gènes de l'invention correspond à celui observé normalement pour la peau d'un sujet âgé d'environ 25 ans. Par « normalement », on entend le niveau correspondant à la moyenne plus ou moins 10% des niveaux de modulation d'au moins cinq, de préférence une dizaine, voire d'au moins une vingtaine voire une centaine d'individus âgés d'environ 25 ans. Ce niveau de référence pour la modulation d'un gène de l'invention peut être déterminé sur des volontaires jeunes, de préférence de moins de 25 ans, en fonction de l'agression réalisée. Les volontaires ont de préférence plus de 18 ans. La partie expérimentale de la présente demande montre la détermination du caractère modulé ou non des 45 gènes de l'invention chez des individus âgés de 25 ans (+/- 4 ans). Le niveau moyen de modulation observé au sein de ce groupe d'individus peut constituer, au sens de la présente invention, un niveau de référence, pour la modulation des gènes de l'invention en réponse à un tape stripping. A l'inverse, il est possible de définir le « niveau de référence » pour la modulation des gènes de l'invention, par rapport à la modulation desdits gènes chez des individus présentant une peau dite âgée c'est-à-dire dont l'homéostasie épidermique, ou fonction barrière homéostasique, est altérée. Typiquement, une peau de type dite âgée correspond à la peau d'un individu de plus de 50 ans, préférentiellement d'un individu âgé de 60 à 80 ans.

Par exemple, dans certaines mises en oeuvre de méthodes de l'invention, le niveau de référence correspond au niveau de modulation de l'expression dudit gène observé normalement pour une peau d'un sujet âgé d'environ 60 ans ou plus. Par « normalement », on entend le niveau correspondant à la moyenne plus ou moins 10% des niveaux de modulation d'au moins cinq, de préférence une dizaine, voire d'au moins une vingtaine voire une centaine d'individus âgés de plus de 60 ans. Ce niveau de référence pour la modulation d'un gène de l'invention peut être déterminé sur des volontaires âgés, de préférence de plus de 60 ans, en fonction de l'agression réalisée. Les volontaires ont de préférence moins de 80 ans. La partie expérimentale de la présente demande montre la détermination du caractère modulé ou non des 45 gènes de l'invention chez des individus âgés de 67 ans (+/- 4 ans). Le niveau moyen de modulation observé au sein de ce groupe d'individus peut -10- constituer, au sens de la présente invention, un niveau de référence, pour la modulation des gènes de l'invention en réponse à un tape stripping. De manière particulièrement préférée, ledit sujet ou individu est un être humain, de préférence âgé d'au moins 20 ans, et tout particulièrement d'au moins 40 ans, de préférence d'au moins 60 ans, de préférence encore, d'au moins 65 ans. Il peut s'agir d'un homme ou d'une femme. La peau ou l'épiderme de ce sujet ou individu à laquelle il est fait référence peut correspondre à n'importe quelle région du corps; de préférence il s'agit de la peau ou de l'épiderme situé sur un des membres, et tout particulièrement de la peau ou de l'épiderme des bras, de préférence des avant-bras.

Selon un mode de réalisation préféré de la méthode de l'invention, la modulation du niveau de l'expression du ou des gène(s) choisi(s) est normalisée par référence à l'expression d'au moins un gène choisi parmi SI00A10, ACTRIA, RPL28, RPL5, RPL35, RPS13, RPS23, RPS16, RPL18, RPS15A, RPL7A, RPS28, G3BP1, TMSB4X, HLA-C, DYNLLI, NACA, ARHA, BAI2, UBA52 et GNAS au sein de l'épiderme correspondant à la région agressée. De préférence la normalisation est effectuée à l'aide d'au moins un gène parmi RPL28, RPL5, RPL35, RPS13, RPS23, RPS16, RPL18, RPS15A, RPL7A, RPS28, G3BP1, TMSB4X, HLA-C, DYNLL1, NACA, ARHA, BAI2, UBA52 et GNAS. Les inventeurs ont en effet montré que le niveau d'expression de ces gènes était non seulement constant dans le temps qui suit l'agression, mais également semblable quel que soit l'âge de l'individu. Par conséquent, le niveau d'expression de ces gènes est parfaitement indépendant de l'homéostasie épidermique. Le niveau d'expression de ces gènes est donc adapté pour effectuer la normalisation du niveau d'expression d'un gène selon la présente invention. Les 19 gènes RPL28, RPL5, RPL35, RPS13, RPS23, RPS16, RPL18, RPS15A, RPL7A, RPS28, G3BP1, TMSB4X, HLA-C, DYNLLI, NACA, ARHA, BAI2, UBA52 et GNAS sont qualifiés de « gènes de ménage ». Dans la méthode selon la présente invention, l'agression du stratum corneum qui est réalisée au niveau de la peau est une agression physique ou chimique. Selon une mise en oeuvre préférée plus particulièrement illustrée dans la section expérimentale de la demande, l'agression est réalisée par « tape stripping ». Selon d'autres mises en oeuvre, l'agression peut être chimique et consister par exemple en l'application d'acétone, d'un agent délipidant (par exemple SLS, SDS, ...) ou d'un agent chimique abrasif acide ou -11- basique. L'agression peut également être réalisée par une méthode mécanique telle que l'abrasion ou l'utilisation de micro-aiguilles. Elle peut également être réalisée par une méthode physique telle que la chaleur. D'autres moyens classiques pour effectuer une altération du stratum corneum sont bien connus de l'homme du métier dans le domaine de l'invention. De préférence, l'agression du stratum corneum réalisée dans les méthodes de l'invention, entraîne une altération forte du stratum corneum. De manière tout particulièrement préférée, la très grande majorité du stratum corneum est endommagée, voire totalement retirée, sur la zone subissant l'agression.

Afin de limiter l'inconfort pour l'individu, la zone subissant l'agression peut toutefois être limitée à quelques centimètres carrés, voire moins. De préférence, la zone a un diamètre minimal de 3 mm. De préférence, l'agression physique ou chimique du stratum corneum est limitée au stratum corneum et n'endommage pas les autres couches de l'épiderme, ni le derme.

Dans la partie expérimentale de cette demande, il est décrit la réalisation d'un « tape stripping » contrôlé permettant de n'altérer que le stratum corneum. Les couches superficielles de l'épiderme malpighiens peuvent éventuellement être touchées, mais de préférence, l'agression est contrôlée pour éviter d'agir sur des couches plus internes de l'épiderme.

Les présents inventeurs ont démontré qu'en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum, chacun de ces 45 gènes était ou non significativement modulé en fonction de la capacité homéostasique de l'épiderme de la peau examinée. Ces différences d'expression génique constituent donc une signature représentative de l'homéostasie de l'épiderme. Cependant, dans la mesure où les niveaux de modulation peuvent être différents selon les individus et où d'autres facteurs peuvent conduire à la modulation du niveau de l'expression d'un gène de l'invention sans rapport avec l'homéostasie épidermique, les méthodes de l'invention sont de préférence mises en oeuvre en déterminant le caractère significativement modulé ou non du niveau d'expression d'au moins deux gènes au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum, où lesdits gènes sont choisis parmi les gènes ADAM15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, H2AFB2, ICAMI, IFNAR2, IL3RA, -12- ITGAM, KHDRBSI, LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4, XRCC1, ANXA6, ARPC4, ATPIAI, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYC1, DAPK3, FGA, HSD17B10, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPAI, SSBP1, TLE4, TSPAN3 et UQCRQ.

De préférence encore, au moins trois, quatre, cinq, six, huit ou dix gènes différents sont choisis et leur modulation suivie en réponse à une agression du stratum corneum. Les présents inventeurs ont notamment démontré qu'en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum, le niveau d'expression de 22 des gènes de l'invention était significativement modulé chez les peaux de type « jeune » (groupe A) mais pas chez les peaux de type « âgé », et inversement pour les 23 autres gènes de l'invention (groupe B). Ces différences d'expression génique constituent donc une signature représentative du caractère jeune ou âgé de l'épiderme. De préférence, la méthode selon la présente invention comprend la détermination du caractère significativement modulé ou non du niveau d'expression d'au moins un, deux, trois, quatre ou cinq gène(s) choisi(s) parmi les gènes ADAM15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, H2AFB2, ICAMI, IFNAR2, IL3RA, ITGAM, KHDRBSI, LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4 et XRCC1 au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum, et - la détermination du caractère significativement modulé ou non du niveau d'expression d'au moins un, deux, trois, quatre ou cinq gène(s) choisi(s) parmi les gènes ANXA6, ARPC4, ATPIA1, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYC1, DAPK3, FGA, HSD17B10, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPAI, SSBP1, TLE4, TSPAN3 et UQCRQ au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum. Selon un mise en oeuvre particulière, la méthode selon l'invention comprend la détermination du caractère significativement modulé ou non des 45 gènes de l'invention au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum. -13- De préférence, dans le cadre des méthodes selon l'invention la détermination du niveau de modulation est réalisée dans les 72 heures suivant l'agression chimique ou physique du stratum corneum, notamment quand ladite agression est un tape stripping. En effet, c'est sur cet intervalle de temps que les inventeurs ont mis en évidence les différences les plus importantes entre les peaux jeunes et âgées et reflétant donc les dysfonctionnements de l'homéostasie épidermique. De préférence les analyses différentielles ou comparaisons mentionnées ci-dessus sont réalisées dans les 36 heures suivant l'agression chimique ou physique du stratum corneum. Comme explicité dans la partie expérimentale de la demande, les inventeurs ont de plus remarqué que les différences les plus significatives étaient observées 6 heures et 30 heures après l'agression chimique ou physique du stratum corneum. Dans ces conditions, la détermination du niveau de modulation est de préférence réalisée 6 heures ou 30 heures après l'agression, ou bien successivement 6 et 30 heures après l'agression. Cette détermination peut sinon être réalisée à tout moment de préférence dans les 36 premières heures suivant l'agression du stratum corneum. La présente invention est également relative à l'utilisation d'un ou plusieurs gènes de l'invention, de préférence au moins un gène du groupe A et au moins un gène du groupe B, pour évaluer l'homéostasie épidermique de la peau d'un sujet, de préférence un sujet humain, comprenant la détermination du caractère significativement modulé ou non du niveau d'expression du ou desdits gènes au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum. Les différentes méthodes selon la présente invention nécessitent la détermination de la modulation du niveau d'expression d'au moins un gène choisi parmi les 45 gènes de l'invention. L'expression des gènes est de préférence quantifiée par analyse de l'ARN messager (ARNm) transcrit au sein de l'épiderme. La quantification de l'ARNm transcrit est réalisée par exemple à l'aide de la technique de Northern Blot, dot blot, RT-PCR, hybridation sur puces à ADN, méthode SAGE ou par utilisation de cartes microfluidiques. D'autres techniques permettant la quantification de l'ARNm peuvent bien entendu être utilisées. Toutes ces techniques sont bien connues de l'homme du métier. -14- Par exemple, des amorces sens (S) et antisens (AS) ayant les séquences illustrées dans les tableaux 1 et 2 pourront être utilisés pour l'analyse par RT-PCR du niveau d'expression génique. Tableau 1 : armoces pour les 22 gènes modulés chez les peaux jeunes Symbole du aène Amorces ADAM 15 S : Gacggtgacagtcatatcct (SEQ ID N°1) AS : aaagtgtgtccctcactgac (SEQ ID N°2) ARL4D S : Ggggaaccacttgactgaga (SEQ ID N°3) AS : aaaggagggaggtctttcca (SEQ ID N°4) CAP1 S : Gtgtcaacagccagcagaaa (SEQ ID N°5) AS : gcggcatcattcatttcttt (SEQ ID N°6) CDH1 S : Ggctcaagctatccttgcac (SEQ ID N°7) AS : cttgagcccaggagtttgag (SEQ ID N°8) GLG1 S : agtgtgccatcggagttacc (SEQ ID N°9) AS : caccacgtccaccttctttt (SEQ ID N°10) GOLGA4 S : ctgaggcaaagcaacatgaa (SEQ ID N°11) AS :tggacgtcgtcaaacacatt (SEQ ID N°12) H2AFB2 S : tctacctcgctgcggttatt (SEQ ID N°13) AS : gccacttgagagatggtggt (SEQ ID N°14) ICAMI S : Ggctggagctgtttgagaac (SEQ ID N°15) AS : actgtggggttcaacctctg (SEQ ID N°16) IFNAR2 S : Gagcacagtgatgagcaagc (SEQ ID N°17) AS : tcaagactttggggaggcta (SEQ ID N°18) -15- Symbole du cène Amorces IL3RA S : Ggacgtccagtacgacctgt (SEQ ID N°19) AS : actttgagaaccgctggaga (SEQ ID N°20) ITGAM S : Gcttcttcaagcggcaatac (SEQ ID N°21) AS : gtgcacacacttgcacacag (SEQ ID N°22) KHDRBS1 S : Ctgtattgggaaagggctca (SEQ ID N°23) AS : gggggtccaaagacttcaat (SEQ ID N°24) LMNA S : Ctacaccagccaacccagat (SEQ ID N°25) AS : ggtcgaaggacagagactgc (SEQ ID N°26) MMP7 S : Gagtgccagatgttgcagaa (SEQ ID N°27) AS : aaatgcagggggatctcttt (SEQ ID N°28) PLCL1 S : Caatggtgagcagaagcaaa (SEQ ID N°29) AS : gaatcgatcctcatggcact (SEQ ID N°30) PTGES S : Catgtgagtccctgtgatgg (SEQ ID N°31) AS : gactgcagcaaagacatcca (SEQ ID N°32) RNPS1 S : Cttataccccacccagctca (SEQ ID N°33) AS : acacagcatccaaaccaaca (SEQ ID N°34) SAP 18 S : Caggcaacacaatgagcact (SEQ ID N°35) AS : cgccactacctagcacacaa (SEQ ID N°36) SILV S : Ctggatggtacagccacctt (SEQ ID N°37) AS : ggcactttcaataccctgga (SEQ ID N°38) SLC31 Al S : Tgcccaactaaacccagaac (SEQ ID N°39) AS : gccagactggtctcgaactc (SEQ ID N°40) -16- Symbole du gène Amorces, TUBB4 S : Cagtgacctgcaactggaga (SEQ ID N°41) AS : gattggccaaacacgaagtt (SEQ ID N°42) XRCC1 S : Cagccctacagcaaggactc (SEQ ID N°43) AS :tagaagcctggagggtagca (SEQ ID N°44) Tableau 2 : armoces pour les 23 gènes modulés chez les peaux âgés Symbole du aène Amorces ANXA6 S Cggagggaattcattgagaa (SEQ ID N°45) AS : gcgtttcctaagctccactg (SEQ ID N°46) ARPC4 S Gctgtgaaacaggctgatga (SEQ ID N°47) AS : tggatcacaaagtccaccaa (SEQ ID N°48) ATP1 Al S : Tgtgattctggctgagaacg (SEQ ID N°49) AS : tgctcataggtccactgctg (SEQ ID N°50) CDC37 S Ccagaagtgcttcgatgtga (SEQ ID N°51) AS : tctgaaaaggggcacatagg (SEQ ID N°52) CLEC2B S : Aattgtggggatcaaggaca (SEQ ID N°53) AS : gtgccattcttgctctgtca (SEQ ID N°54) COX7B S : Agccaccagaaacgtacacc (SEQ ID N°55) AS : tttggggtaactctgccaac (SEQ ID N°56) COX7C S : Ccgtaggagccactatgagg (SEQ ID N°57) AS : ggctgcacctcttaaaatgc (SEQ ID N°58) -17- Symbole du perle Amorces CYC1 S : Ccagctaccatgtcccagat (SEQ ID N°59) AS : tatgccagcttccgactctt (SEQ ID N°60) DAPK3 S : Tgcacgacatcttcgagaac (SEQ ID N°61) AS : gttcttgtccagcagcatga (SEQ ID N°62) FGA S : Tgcagttcagcacctttgac (SEQ ID N°63) AS : tcccattcccacttcttcag (SEQ ID N°64) HSD17B10 S : Tcatcgagaacccattcctc (SEQ ID N°65) AS : aaatggctactgggcttcct (SEQ ID N°66) ITPKC S : Agttccagcctccagactca (SEQ ID N°67) AS : tctcccaagaggcagtctgt (SEQ ID N°68) MDK S : Cctgcaactggaagaaggag (SEQ ID N°69) AS : ctttcccttccctttcttgg (SEQ ID N°70) NGB S : Gggtgacttcatcccagaga (SEQ ID N°71) AS : ctgctgctgccttctcttct (SEQ ID N°72) POLR2G S : Tctcgacattccatcccttc (SEQ ID N°73) AS : ctcagcttacaagccccaag (SEQ ID N°74) PSMA5 S : Ggctttgcagtttggagaag (SEQ ID N°75) AS : ctggggtcctttctcatcaa (SEQ ID N°76) PSME2 S : Caggagaaggtgctggagag (SEQ ID N°77) AS : tcttcaccctttgggttgac (SEQ ID N°78) SF3B2 S : Gccttcttcaagtggcagac (SEQ ID N°79) AS : ccaaaggaacagctctcagg (SEQ ID N°80) -18- Symbole du aène Amorces SNRPA1 S : Aaaatgttcaagggcaaacg (SEQ ID N°81) AS : agatggcccacctttctttt (SEQ ID N°82) SSBP1 S : Gcgatcaggggatagtgaag (SEQ ID N°83) AS : tggccaaagaagaatcatcc (SEQ ID N°84) TLE4 S : Gggatttgatccacaccatc (SEQ ID N°85) AS : catctgaccatctgcgctaa (SEQ ID N°86) TSPAN3 S : Agcagcttggcttttcatgt (SEQ ID N°87) AS : aaggacctggtgacatttcg (SEQ ID N°88) UQCRQ S : Agtgcagtggtgtgatctcg (SEQ ID N°89) AS : ccatggcttacgcctgtaat (SEQ ID N°90) Il est également possible de quantifier le taux de transcription des gènes par l'analyse du taux de traduction et donc la quantification de protéines produites. Des techniques appropriées à cet objectif sont également bien connues de l'homme du métier. Par conséquent les signatures moléculaires mise en évidence par les inventeurs se reflètent également au niveau des protéines codées par les 45 gènes de l'invention. L'analyse du taux de transcription des gènes de l'invention est réalisée au sein de l'épiderme, sous le stratum corneum ayant subi l'agression. A cet effet, des prélèvements d'épiderme ou de peau sont réalisés par exemple par la méthode décrite dans Marionnet C. et al, 2003, (prélèvements au dermatome, qui est un instrument permettant de prélever des bandes de peau très fines, de quelques dixièmes de millimètres d'épaisseur) ou toutes autres méthodes de prélèvement (biopsies, punch, kératome ou micro-kératome...). La présente invention a également pour objet une méthode d'évaluation de l'état de l'épiderme d'un individu humain comprenant l'évaluation de l'homéostasie épidermique 15 de la peau de cet individu selon l'une des méthodes de l'invention. -19- En particulier, la présente invention a pour objet l'utilisation d'une analyse du niveau d'expression de tout ou partie des gènes de l'invention dans un but de diagnostic de la fonction homéostasique de la peau, le niveau d'expression après tape stripping de tout ou partie de ces gènes après quelques heures, préférentiellement à 6h ou à 30h, étant caractéristique de l'âge de l'individu ou des déficiences de sa fonction homéostasique. La technique consiste à suivre après quelques heures, de préférence à 6h et/ou 30h le niveau d'expression de tout ou partie des gènes de l'invention par toutes technique de quantification de l'expression d'ARNm telles que le northern blot, dot blot, RT-PCR, hybridation sur puces à ADN, méthode SAGE, utilisation de cartes microfluidique... L'étude transcriptomique de ces gènes est rendue possible grâce à une standardisation à l'aide des gènes de ménage identifiés par les inventeurs consistant en SIOOA10, ACTRIA, RPL28, RPL5, RPL35, RPS13, RPS23, RPS16, RPL18, RPS15A, RPL7A, RPS28, G3BP1, TMSB4X, HLA-C, DYNLLI, NACA, ARHA, BAI2, UBA52 et GNAS. Par exemple, des amorces pourront être utilisés pour l'analyse par RT-PCR du niveau de l'expression génique correspondant à celles illustrées dans les tableaux 1 et 2. La présente invention concerne également des méthodes de diagnostic, permettant de mettre en évidence des déficiences au niveau de l'homéostasie épidermique d'une peau humaine, telles que les déficiences observées pour une peau âgée. Un tel diagnostic de l'état de l'épiderme d'un individu humain comprend l'évaluation de la fonction homéostasique ou homéostasie épidermique de la peau dudit individu selon l'une des méthodes décrites plus haut. Par cette méthode, les signatures géniques mises en évidence par les inventeurs permettent de déceler des individus dont la fonction barrière et/ou l'homéostasie de la peau présentent des déficiences et qui de ce fait sont fragilisées. Un tel diagnostic peut donc permettre de conclure à la nécessité de traiter la peau pour en renforcer l'homéostasie et/ou la fonction barrière épidermique et ainsi les préserver. En effet, une déficience dans l'homéostasie épidermique est synonyme de fragilisation de la peau, et d'inconforts comme ceux dont souffrent les personnes âgées.

De préférence, le diagnostic est réalisé sur un individu âgé d'au moins 20, voire d'au moins 30, 40, 50, 55, 60 ou 65 ans. La méthode de diagnostic selon la présente - 20 - invention peut également être appropriée pour des personnes ayant subi des traitements importants susceptibles d'avoir modifié l'homéostasie épidermique, notamment des traitements topiques. Selon les méthodes d'évaluation et de diagnostic de la présente invention, la peau évaluée peut être qualifiée de peau de type « âgé » Si aucune modulation significative du niveau d'expression d'un ou plusieurs gène(s) choisi(s) parmi les gènes ADAM15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, H2AFB2, ICAMI, IFNAR2, IL3RA, ITGAM, KHDRBSI, LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4 et XRCC1 n'est observée au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum, et/ou une modulation significative du niveau d'expression d'un ou plusieurs gène(s) choisi(s) parmi les gènes ANXA6, ARPC4, ATPIA1, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYC1, DAPK3, FGA, HSD17B10, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPAI, SSBP1, TLE4, TSPAN3 et UQCRQ est observée au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum. La peau diagnostiquée peut également être qualifiée de peau de type « âgé » Si le niveau de modulation d'au moins l'un des gènes de l'invention au sein de l'épiderme en réponse à une agression du stratum corneum s'écarte de plus de 30%, de préférence de plus de 50% de la modulation moyenne normalement observée pour une peau d'un sujet âgé d'environ 25 ans, de préférence 30 heures après l'agression physique ou chimique. La modulation moyenne normalement observée pour un individu d'environ 25 ans correspond à la modulation dite de référence.

Dans le cadre de la présente invention, la peau évaluée est qualifiée de peau de type « jeune » Si sa fonction homéostatique est normale et de peau de type « âgée » Si elle est altérée. Plus particulièrement, selon les méthodes d'évaluation et de diagnostic de la présente invention, la peau évaluée est qualifiée de peau de type « jeune » Si - une modulation significative du niveau d'expression d'un ou plusieurs gène(s) choisi(s) parmi les gènes ADAM15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, - 21 - H2AFB2, ICAMI, IFNAR2, IL3RA, ITGAM, KHDRBSI, LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4 et XRCC1 est observée au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum, et/ou - aucune modulation significative du niveau d'expression d'un ou plusieurs gène(s) choisi(s) parmi les gènes ANXA6, ARPC4, ATP1A1, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYC1, DAPK3, FGA, HSD17B10, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPAI, SSBP1, TLE4, TSPAN3 et UQCRQ n'est observée au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum. La peau diagnostiquée peut également être qualifiée de peau de type « jeune » Si le niveau de modulation d'au moins l'un des gènes de l'invention au sein de l'épiderme en réponse à une agression du stratum corneum s'écarte de plus de 30%, de préférence de plus de 50% de la modulation moyenne normalement observée pour une peau d'un sujet âgé d'environ 60 ou 65 ans, de préférence 30 heures après l'agression physique ou chimique. La modulation moyenne normalement observée pour un individu d'environ 60 ou 65 ans correspond à la modulation dite de référence. La variation entre la modulation d'un gène de l'invention au niveau de la peau diagnostiquée et la modulation moyenne est calculée de la façon suivante : [Niveau de modulation observée û Niveau de modulation de référence] / Niveau de modulation de référence. Comme expliqué dans les parties précédentes, l'intensité de modulation peut être normalisée à l'aide du niveau d'expression des gènes dits de ménage qui sont choisis parmi les gènes : S100AI0, ACTRIA, RPL28, RPL5, RPL35, RPS13, RPS23, RPS16, RPL18, RPS15A, RPL7A, RPS28, G3BP1, TMSB4X, HLA-C, DYNLLI, NACA, ARHA, BAI2, UBA52 et GNAS, de préférence choisis parmi RPL28, RPL5, RPL35, RPS13, RPS23, RPS16, RPL18, RPS15A, RPL7A, RPS28, G3BP1, TMSB4X, HLA-C, DYNLLI, NACA, ARHA, BAI2, UBA52 et GNAS. De préférence la modulation de l'expression d'au moins l'un des gènes de l'invention s'écarte de plus de 60% de la modulation de référence, voire de plus de 90% de la modulation de référence. - 22 - De préférence, afin de parvenir à un diagnostic fiable, il est préférable d'analyser les différences de modulation d'au moins 2, 3, 4 voire 5 ou 6 gènes parmi les gènes mentionnés. Selon des modes de réalisation tout particulièrement préférés, il est conclu à une peau ayant un comportement de type « peau âgée » Si au moins 8 ou 10 des gènes de l'invention présentent une modulation fortement différente de la modulation de référence. Un autre but de la présente invention est relatif à l'utilisation d'une analyse du niveau d'expression des gènes décrits dans la présente invention pour évaluer l'effet anti-âge d'un produit (actif, molécule, extrait naturel), mais aussi d'un procédé (lumière, 10 injection, voie orale), seul ou combinés, en testant leur capacité à normaliser la réponse de l'épiderme de type « âgé » à une agression. Par « capacité à normaliser », on entend plus particulièrement la capacité à rapprocher le profil d'expression génique d'un ou plusieurs gènes de l'invention en réponse à une agression du srtatum corneum du profil de référence d'une peau jeune et saine. L'apport bénéfique d'un tel produit ou procédé 15 anti-âge se caractérise par sa capacité à moduler le profil d'expression génique des individus âgés afin de le rapprocher du profil d'expression génique d'un individu jeune. L'apport bénéfique d'un tel produit ou procédé anti-âge se caractérise notamment par sa capacité à modifier le niveau d'expression au niveau de l'épiderme en réponse à une agression du stratum corneum d'un ou plusieurs gènes du groupe A et/ou du groupe 20 B, de sorte à tendre vers une modulation significative du niveau de modulation du ou des gènes du groupe A, et/ou à tendre vers une absence de modulation significative du niveau de modulation du ou des gènes du groupe B. En outre, l'apport bénéfique d'un produit ou procédé anti-âge se caractérise également par sa capacité à 25 i) induire chez les individus âgés l'expression de tout ou partie des gènes ADAM15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, H2AFB2, ICAMI, IFNAR2, IL3RA, ITGAM, KHDRBSI, LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4, XRCC1 ou DAPK3 après une agression du stratum corneum, et/ou 30 ii) réprimer chez les individus âgés l'expression de tout ou partie des gènes ANXA6, ARPC4, ATPIA1, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYC1, FGA, -23- HSD17B10, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPA1, SSBP1, TLE4, TSPAN3, UQCRQ après une agression du stratum corneum. De préférence, l'effet inducteur ou répresseur est observé 30h après tape stripping ou dès 6h pour le gène LMNA.

La présente invention concerne donc également une méthode de détermination de l'efficacité d'un traitement de l'épiderme d'un individu, comprenant l'évaluation de la fonction homéostasique de la peau avant et après traitement par une méthode telle que décrite plus haut. En effet, la signature représentative des différences d'expression génique suite à une altération du stratum corneum peut être utilisée pour déterminer l'efficacité d'un traitement de l'épiderme. A cette fin, il faut déterminer ladite signature avant et après la mise en oeuvre du traitement dont on cherche à déterminer l'efficacité, de préférence sur une peau âgée. De préférence, le procédé de détermination de l'efficacité d'un traitement est mis en oeuvre sur la peau d'un individu âgé d'au moins 20 ou 30 ans, de préférence d'au moins 40 ou 50 ans, voire d'au moins 60 ou 65 ans. Grâce à cette méthode, il est ainsi possible de déterminer la capacité de certains traitements, notamment des compositions cosmétiques pour application topique sur la peau ou des compléments alimentaires, ou de certains procédés de cosmétique instrumentale (lumière, injection, iontophorèse,...) à renforcer l'homéostasie épidermique et donc leur capacité à réaliser un « rajeunissement » de la peau. Par « rajeunissement » de la peau, on entend l'amélioration de l'homéostasie épidermique telle que le comportement de la peau en réponse à une agression redevient plus proche du comportement d'une peau de type « jeune » en réponse à cette même agression. La présente invention concerne également une méthode de criblage de molécules pour leur action bénéfique sur l'homéostasie de l'épiderme humain, comprenant l'évaluation de l'homéostasie épidermique de la peau d'un individu humain par une méthode telle que décrite précédemment, avant et après application de la molécule à cribler. Comme détaillé plus haut, les signatures représentatives mises en évidence par les inventeurs permettent en effet de mettre en évidence l'amélioration de l'homéostasie épidermique et/ou la fonction barrière des peaux âgées. Une telle amélioration se 2955593 - 24 - caractérise précisément par un niveau de modulation après traitement plus proche du niveau de modulation observé pour la peau d'un sujet jeune. La présente invention a également pour objet une méthode pour tester des traitements pour leur effet bénéfique sur l'homéostasie épidermique humaine, comprenant 5 l'évaluation de l'homéostasie épidermique de la peau d'un individu par une méthode telle que décrite plus haut, avant et après mise en oeuvre du traitement à tester. L'utilisation des signatures moléculaires définies par les inventeurs à cette fin, est identique à celle détaillée plus haut pour le procédé de criblage de molécules pour leur action bénéfique sur l'homéostasie épidermique. 10 De préférence, un procédé de test tel que décrit est mis en oeuvre sur un individu âgé d'au moins 20 ou 30 ans, de préférence d'au moins 40 ou 50 ans, et encore préférentiellement d'au moins 60 voire 65 ans. Les procédés de test et de criblage selon la présente demande peuvent être réalisés in vivo ou in vitro sur des échantillons de peau. De préférence, les échantillons de 15 peau sont dans ce cas prélevés sur un individu âgé d'au moins 20 ou 30 ans, de préférence d'au moins 40 ou 50 ans, et encore préférentiellement d'au moins 60 voire 65 ans. Les traitements qui peuvent ainsi être évalués pour leur action positive sur l'homéostasie épidermique sont par exemple l'application locale d'ondes 20 électromagnétiques ou de toutes composition, produit ou molécule chimique, ou bien l'injection ou l'ingestion d'une composition, produit ou molécule chimique. De préférence, il s'agit d'un traitement local topique. Par produit, on entend aussi bien un ingrédient ou un principe actif sous une forme plus ou moins purifiée, notamment une molécule chimique, présentant une activité 25 intrinsèque in vitro ou in vivo, qu'une formulation comprenant un ou plusieurs de ces ingrédients et un support et des adjuvants adaptés à l'application visée. Dans les méthodes d'évaluation de l'efficacité selon la présente invention, le traitement ou la molécule testée est considéré comme efficace s'il est observé : l'augmentation du niveau de modulation du niveau d'expression d'au moins un 30 gène choisi parmi les gènes ADAM15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, - 25 - H2AFB2, ICAMI, IFNAR2, IL3RA, ITGAM, KHDRBSI, LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4 et XRCC1, et/ou - la diminution du niveau de modulation du niveau d'expression d'au moins un gène ANXA6, ARPC4, ATPI A1, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYC1, DAPK3, FGA, HSD17BIO, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPAI, SSBP1, TLE4, TSPAN3 et UQCRQ, au sein de l'épiderme, en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum, et après mise en oeuvre dudit traitement ou application de ladite molécule. De préférence, l'augmentation ou la diminution du niveau de modulation de l'expression est observée 30 heures après l'agression physique ou chimique du stratum corneum. Dans les méthodes d'évaluation de l'efficacité selon la présente invention, le traitement ou la molécule testée est également considéré comme efficace s'il est observé : i) l'induction de l'expression de tout ou partie des gènes ADAM15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, H2AFB2, ICAMI, IFNAR2, IL3RA, ITGAM, KHDRBSI, LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4, XRCC1 ou DAPK3, et/ou ii) la répression de l'expression de tout ou partie des gènes ANXA6, ARPC4, ATPIA1, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYC1, FGA, HSD17BIO, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPAI, SSBP1, TLE4, TSPAN3, UQCRQ, au sein de l'épiderme, en réponse à une agression du stratum corneum, et après mise en oeuvre dudit traitement ou application de ladite molécule. De préférence, l'effet inducteur ou répresseur est observé 30h après tape stripping 25 ou dès 6h pour le gène LMNA. De préférence, pour être évalué positivement, il est préférable que la molécule ou le traitement testé entraîne une modification du niveau d'expression d'au moins deux gènes, de préférence d'au moins 3 ou 4 gènes voire d'au moins 5 ou 10 gènes parmi les 45 gènes de l'invention. 30 De préférence également, l'effet inducteur ou répressif observé après traitement représente une variation d'au moins 30% après application de la molécule ou du - 26 - traitement. De préférence, les différences observées sont même supérieures, de préférence au moins 50%, voire plus, par exemple au moins 60%. Du fait que les inventeurs ont déterminé deux signatures représentatives respectivement de l'homéostasie épidermique d'une peau de type « jeune » et « agé », il est également possible, par les méthodes d'évaluation de la présente demande, d'objectiver l'action bénéfique d'un traitement, notamment d'un produit cosmétique, par exemple d'une composition cosmétique. Les méthodes d'évaluation décrites plus haut peuvent en effet être utilisées dans un protocole de test permettant de déterminer les produits susceptibles d'être qualifiés de « actifs sur la fonction barrière de la peau » ou bien « ayant un effet anti-âge » ou « effet de rajeunissement de la peau ». Par ailleurs, au moyen de ce test, il est possible de promouvoir le produit auprès de consommateurs, en mettant en avant les résultats obtenus avec ce produit dans les méthodes d'évaluation de l'homéostasie épidermique décrites dans la présente invention. L'évaluation de l'homéostasie épidermique sera basée sur l'étude du niveau d'expression des gènes de l'invention ou des protéines encodées par ces gènes. La présente invention fournit donc également une méthode permettant de recommander un produit en signalant son effet dans un protocole de test constitué par une méthode d'évaluation telle que décrite précédemment. L'invention a donc également pour objet une méthode pour la promotion d'un produit cosmétique consistant à faire état d'une efficacité, action ou propriété dudit produit démontrée par au moins un test opéré tel que décrit précédemment. Une telle promotion du produit pourra se faire par n'importe quel canal de communication. Elle pourra être faite notamment par la vendeuse, directement sur le point de vente, par la radio et la télévision, notamment dans le cadre de spots publicitaires. Elle pourra être faite également par le canal de la presse écrite, ou par le biais de tout autre document, en particulier à des fins publicitaires (prospectus). Elle pourra se faire également par INTERNET, ou par tout autre réseau informatique adéquat. Elle pourra être faite également directement sur le produit, notamment sur son packaging ou sur toute notice explicative qui peut lui être associée. Les méthodes d'évaluation selon la présente invention peuvent être mises en oeuvre à des fins cosmétiques ou thérapeutiques. De préférence, les méthodes d'évaluation selon la présente invention sont mises en oeuvre à des fins du traitement - 27 - cosmétique de la peau. Selon une mise en oeuvre particulière, les méthodes d'évaluation selon la présente invention ne sont pas mises en oeuvre à des fins thérapeutiques. La présente invention a également pour objet un kit permettant de déterminer l'état plus ou moins performant de la fonction homéostatique d'une peau sur la base de l'analyse de l'expression des gènes constituant la signature représentative des différences d'expression génique existant entre la peau humaine jeune et la peau âgée, suite à une altération de la fonction barrière, par exemple par tape stripping. Ledit kit pour l'évaluation de l'homéostasie épidermique de la peau d'un sujet, comprend un moyen pour réaliser une agression physique ou chimique du stratum corneum, un moyen pour réaliser un prélèvement d'épiderme et un moyen pour déterminer le niveau d'expression d'au moins un gène de l'invention. De préférence, pour les raisons mentionnées précédemment dans la demande, le kit comprend des moyens permettant de déterminer le niveau d'expression d'au moins 2, 3, 4, 5, 6, 8 ou 10 voire au moins 20, 30 ou 45 des gènes de l'invention. Le kit peut bien entendu comprendre des éléments supplémentaires, tels que différents contrôles, positifs ou négatifs. Avantageusement, un kit selon l'invention comprend également un moyen pour déterminer le niveau d'expression d'au moins un gène choisi parmi les gènes dits de ménage, c'est-à-dire parmi les gènes SI00A10, ACTRIA, RPL28, RPL5, RPL35, RPS13, RPS23, RPS16, RPL18, RPS15A, RPL7A, RPS28, G3BP1, TMSB4X, HLA-C, DYNLLI, NACA, ARHA, BAI2, UBA52 et GNAS. De préférence, un kit selon l'invention permet de réaliser deux prélèvements épidermiques et permet de déterminer au moins deux fois le niveau d'expression du gène choisi, avant altération du corneum stratum et après, ou bien sur une zone agressée et sur une zone non-agressée. Le kit de l'invention peut également comprendre des instructions concernant son utilisation et les temps à respecter entre les différents prélèvements et l'altération du stratum corneum. A la lecture des différentes méthodes selon l'invention, il apparaît clairement à l'homme du métier ce que doit contenir un tel kit pour mettre en oeuvre lesdites méthodes. - 28 - L'invention va maintenant être décrite plus en détails dans une de ces mises en oeuvre. Partie exaérimentale 1. Méthodologie Recrutement des volontaires : des volontaires masculins sains ont été recrutés afin de participer à une étude transcriptomique de plus de 4000 gènes connus pour être exprimés dans la peau. 5 groupes de 6 individus jeunes (25 +/- 4 ans) et 5 groupes de 6 individus âgés (67+/- 4 ans) ont été recrutés pour cette étude, après signature d'un consentement éclairé. Altération du stratum corneum : un tape stripping a été réalisé sur la face interne de l'un de leurs avant-bras, choisi de façon randomisée, jusqu'à ce que le stratum corneum soit entièrement enlevé et que la peau présente un aspect lisse et brillant (48 +/-7 strips en moyenne). Pour cela, un ruban adhésif 3MTM BlendermTMa été utilisé (St Paul, MI, USA). Le second avant-bras n'a subi aucun traitement. Prélèvements d'épiderme : des échantillons d'épiderme d'une superficie de 1.5 cm X 1.5 cm ont été prélevés sous anesthésie locale à l'aide d'un dermatome GA630 (AESCULAP, Melsungen, Allemagne). Les prélèvements ont eu lieu sur peaux strippées et non strippées. L'épaisseur de prélèvement a été fixée à 200 pm selon le protocole décrit par Marionnet et al en 2003, afin de ne prélever que l'épiderme et réduire au minimum la contamination dermique. Les prélèvements ont été effectués sur les deux avant-bras 02h, 06h, 19h, 30h et 72h après stripping. Extraction d'ARNs : les échantillons d'épiderme ont été placés dans le tampon de lyse Rneasy (Qiagen, Courtaboeuf,France) immédiatement après prélèvement. Les tissus ont alors été broyés à l'aide d'un mortier stérile. Le lysat tissulaire a été homogénéisé (colonnes QlAshredder, Qiagen, Courtaboeuf, France) et les ARN totaux ont été extraits selon la méthode Rneasy (Qiagen, Courtaboeuf, la France). Une digestion de l'ADN a été effectuée pour éliminer toute contamination génomique (DNAse1, Qiagen, Courtaboeuf, France). La concentration et la pureté des ARN totaux ont été déterminées par mesure d'absorbance à 260 nm et 280 nm. L'intégrité de l'ARN a été vérifiée par l'électrophorèse - 29 - sur gel d'agarose après marquage au bromure d'Ethidium. Les échantillons d'ARN ont alors été précipités à l'aide d'une solution acide fortement saline (0.1 volume d'acétate de sodium 2M, pH4) et d'éthanol (2.5 volumes d'éthanol froid 100 %). Les échantillons ont été stockés à -80°c jusqu'à leur utilisation.

Hybridations sur Dermarrav cDNA microarrav : des aliquotes correspondants à 2.5 pg d'ARN ont été prélevés et précipités par centrifugation. Les ARN ont été lavés, séchés puis solubilisés dans de l'eau stérile RNAse free. Des Oligos (dT) 12-18 mer, un mélange de dATP, dTTP et dGTP, l'AMV reverse transcriptase (Invitrogen SARL, Cergy Pontoise, la France) et du dCTP marqué au 33P (Amersham) et ont été utilisés pour la reverse transcription des mRNA selon les recommandations des fabricants. Les échantillons d'épiderme témoins ont été retro transcrits simultanément aux échantillons strippés. Les sondes ainsi réalisées ont été purifiées sur colonne de chromatographie biospin6 (Bio-Rad, Hercule, CA, USA). L'incorporation aux sondes de 33P a été mesurée par c-scintillation. La même quantité de sonde des échantillons d'épidermes contrôles et strippés a été utilisée pour l'hybridation sur membranes DermArray ® cDNA microarray (IntegriDerm, Birmingham, AL-, USA) selon les recommandations du fabricant. Quantification et correction du sianal : les puces ont été analysées en utilisant un scanner Cyclone Phosphore Imager 16 bits permettant une analyse à haute résolution (Packard Instruments, Perkin-Elmer Life Sciences, Boston, MA, USA). Les images ont alors été importées dans le logiciel Imagene 5 (Biodiscovery, El Segundo, CA, USA) pour la quantification du signal puis les signaux ont été corrigés à l'aide du logiciel Genesight (Biodiscovery, El Segundo, CA, USA). Une correction locale du bruit de fond a été exécutée et les signaux positifs ont été normalisés d'une membrane contrôle par rapport à son témoin.

Analyse des données : un ratio d'expression a été calculé divisant le signal corrigé de l'échantillon traité par le signal corrigé de l'échantillon contrôle. Un ratio d'expression moyen R a été calculé à chaque temps pour chaque gène exprimé chez au moins 50% des individus de chaque groupe. Sélection des aènes modulés dans chaque population : il a été considéré qu'un gène était modulé si son expression est significativement différente entre épidermes strippés et épidermes contrôles (test de Student, p < 0.05) ; et si au moins 50 % des - 30 - volontaires du groupe présentent un ratio supérieur à 2 et aucun ne présente un ratio inférieur à 0.5 (gènes induits), et inversement pour des gènes réprimés. Enfin, ont été sélectionnés les gènes modulés au moins une fois dans le temps. Sélection des gènes différentiellement modulés selon l'âae : une liste de gènes exprimés a été établie chez les individus jeunes et âgés. Certains sont exprimés dans les deux populations mais avec une cinétique d'expression significativement différente. Ces gènes ont fait l'objet d'un premier dépôt de brevet (FR08/04169). D'autres sont exprimés dans les deux populations mais ne sont modulés de façon significative (selon les critères établis précédemment) que dans l'une ou l'autre des populations. Parmi ces gènes, les plus représentatifs de l'âge du patient ont été sélectionnés comme suit , puis filtrés : dans un premier temps tous les gènes EST ont été éliminés ; ensuite, la commercialisation des membranes Dermarray étant ancienne, les annotations de certains gènes étaient obsolètes. L'accession des gènes a été vérifiée et les gènes présentant une identification contradictoire ont été éliminés. un dernier tri a été établi afin de sélectionner parmi ces gènes ceux dont l'expression après tape stripping est la plus différente entre jeunes et âgés. Pour cela, une distance a été calculée prenant en compte les temps 06h et 30h (temps auxquels les profils étaient les plus différents entre jeunes et âgés) selon l'équation suivante : Distance jeunes/âgés = Abs [ Log2 (R J-06h) û Log2 (R A-°6h) + Log2 (RJ"30h) - Log2 (RA-'°» avec : R J-06h = Ratio d'expression moyen obtenu chez les individus jeunes à 06h R A-06h = Ratio d'expression moyen obtenu chez les individus âgés à 06h RJ-3Oh = Ratio d'expression moyen obtenu chez les individus jeunes à 30h 25 RA-3°h = Ratio d'expression moyen obtenu chez les individus âgés à 30h La distance moyenne (D) et l'écartype de cette moyenne (sem°) ont été calculés. Au final, les gènes modulés de façon spécifique chez les jeunes ou chez les âgés et dont la distance jeunes/âgés est d'au moins D + 2semD ont été sélectionnés comme étant les gènes dont l'expression après tape stripping est la plus différente entre jeunes et âgés. (i) (ii) 20 . Résultats 89 gènes sont modulés de façon significative chez les individus âgés et 81 gènes sont modulés de façon significative chez les individus jeunes. De façon surprenante et inattendue, les inventeurs ont identifié 22 cènes modulés de facon sgécifiaue chez les individus jeunes et dont l'expression est significativement différente de celle des individus âgés (tableau 3). De même, les inventeurs ont identifié 23 aènes modulés de facon sgécifiaue chez les individus âaés et dont l'expression est significativement différente de celle des individus jeunes (tableau 4).

Enfin, 108 gènes n'ont montré aucune différence significative d'expression en fonction du temps ni en fonction de l'âge (données non montrées). Ces derniers peuvent être considérés comme gènes de ménage. Seuls 2 d'entre eux, les gènes SIOOA10 et ACTRIA, ont vu leur niveau d'expression varier suite au tape stripping. Les autres gènes ne sont pas modulés. Les inventeurs en ont sélectionnés 19 dont le profil est proche entre jeunes et âgés. Ce sont pour la plupart des composants ribosomaux connus en tant que gènes de ménages (RPL28, RPL5, RPL35, RPS13, RPS23, RPS16, RPL18, RPS15A, RPL7A, RPS28). D'autres tels que G3BP1, TMSB4X, HLA-C, DYNLLI, NACA, ARHA, BAI2, UBA52, GNAS ne sont pas connus ni utilisés en tant que tel (tableau 5). 3. Conclusions Trois listes de gènes d'intérêts ont été établies : La Liste 1 (Tableau 3) regroupe 22 gènes dont l'expression est modulée de façon spécifique chez les individus jeunes. La Liste 2 (Tableau 4) regroupe 23 gènes dont l'expression est modulée de façon spécifique chez les individus âgés. La Liste 3 (Tableau 5) regroupe 21 gènes de ménage dont l'expression ne varie pas selon l'âge des volontaires. Le niveau d'expression des gènes de la liste 1 et de la liste 2 chez les sujets âgés après tape stripping est le reflet moléculaire du dysfonctionnement de la fonction homéostatique de l'épiderme dû à l'âge. L'analyse du niveau d'expression de ces gènes constitue une solution nouvelle au problème que pose l'évaluation de l'efficacité d'actifs ou de procédés anti-âge susceptibles d'améliorer le renouvellement et l'homéostasie - 31 - -32- épidermique, et au problème que pose le diagnostic de l'état plus ou moins âgé de la peau. L'analyse du niveau d'expression de ces gènes peut être menée et standardisée grâce à la présence de gènes de ménage listés dans le tableau 5.

Tableau 3 : Liste de 22 gènes dont l'expression est modulée de façon spécifique chez les individus jeunes et dont la distance Jeunes / âgés > D + 2semD Ratio moyen d'expression Jeunes Aaes N° Symbole Nom du •ène 6h 30h 6h 30h d'accession du aène NM_207196 ADAM15 a disintegrin and metalloproteinase 1.96 1.02 domain 15 (metargidin) NM_001661 ARL4D ADP-ribosylation factor-like 4D 3.89 1.22 NM 006367 CAPI CAP, adenylate cyclase-associated 2.46 1.13 - protein 1 NM 004360 CDHI cadherin 1, type 1, E-cadherin 2.87 1.47 - (epithelial) NM_012201 GLG1 golgi apparatus protein 1 2.06 0.82 NM_002078 GOLGA4 gol4gi autoantigen, golgin subfamily 2.27 1.28 NM_0010179 H2AFB2 H2A histone family, member B2 2.41 1.10 91 NM 000201 ICAMI intercellular adhesion molecule 1 2.76 1.45 NM 207585 IFNAR2 interferon (alpha, beta and omega) 2.69 1.44 - receptor 2 NM 002183 IL3RA interleukin 3 receptor, alpha (low 2.89 1.59 - affinity) NM 000632 ITGAM integrin, alpha M (complement 3.33 1.31 - component 3 receptor 3 subunit) NM_006559 KHDRBSI KH domain containing, RNA 2.95 1.03 binding, signal transduction associated 1 NM 170707 LMNA lamin A/C 3.40 2.08 1.84 1.64 NM_002423 MMP7 matrix metalloproteinase 7 1.90 0.98 NM_0011146 PLCL1 phospholipase C-like 1 2.99 1.70 61 NM_004878 PTGES prostaglandin E synthase 2.93 1.48 NM 080594 RNPSI RNA binding protein SI, serine-rich 2.69 1.06 - domain -33- NM 005870 SAP18 Sin3A-associated protein, 18kDa 3.17 1.73 NM 006928 SILV silver homolog (mouse) 2.66 0.98 NM 001859 SLC31A1 solute carrier family 31 (copper 2.90 1.32 - transporters), member 1 NM 006087 TUBB4 tubulin, beta 4 3.84 1.77 NM_006297 XRCC1 X-ray repair complementing 2.38 1.33 defective repair in Chinese hamster cells 1 Tableau 4 : Liste de 23 gènes dont l'expression est modulée de façon spécifique chez les individus âgés et dont la distance Jeunes / âgés > D + 2sem Ratio moyen d'expression Jeunes Aaés N° Symbole Nom du .ène 6h 30h 6h 30h d'accession du cène NM 001155 ANXA6 annexin A6 1.29 3.13 NM 005718 ARPC4 actin related protein 2/3 complex, 1.08 2.31 - subunit 4 (20 kD) NM 000701 ATP1A1 ATPase, Na+/K+ transporting, 1.53 3.47 - alpha 1 polypeptide NM 007065 CDC37 CDC37 (cell division cycle 37, S. 1.42 2.94 - cerevisiae, homolog) NM 005127 CLEC2B C-type lectin domain family 2, 1.22 2.62 - member B NM_001866 COX7B cytochrome c oxidase subunit Vllb 1.76 3.9 NM_001867 COX7C cytochrome c oxidase subunit VIIc 1.47 2.76 NM_001916 CYC1 cytochrome c-1 1.4 2.82 NM 001348 DAPK3 death-associated protein kinase 3 1.13 0.45 NM_000508 FGA fibrinogen, A alpha polypeptide 1.23 3.26 NM 004493 HSD17B10 hydroxysteroid (17-beta) 1.5 2.89 - dehydrogenase 10 NM 025194 ITPKC inositol 1,4,5-trisphosphate 3- 1.35 2.52 - kinase C NM 0010123 MDK midkine (neurite growth-promoting 1.41 2.57 34 factor 2) NM_021257 NGB neuroglobin 1.36 3.18 NM 002696 POLR2G polymerase (RNA) Il (DNA 1.36 2.87 - directed) polypeptide G NM_002790 PSMA5 proteasome (prosome, macropain) 2.23 1.54 2.40 3.72 -34- subunit, alpha type, 5 NM 002818 PSME2 proteasome (prosome, macropain) 1.62 2.97 û activator subunit 2 (PA28 beta) NM 006842 SF3B2 splicing factor 3b, subunit 2, 1.47 2.93 û 145kDa BC067846 SNRPA1 small nuclear ribonucleoprotein 1.17 2.55 polypeptide A' NM 003143 SSBPI single-stranded DNA binding 2.24 1.35 2.94 3.73 û protein 1 NM 007005 TLE4 transducin-like enhancer of split 4, 1 21 2 77 û homoloq of Drosophila E(spl) NM_005724 TSPAN3 tetraspanin 3 1.63 3.56 NM 014402 UQCRQ ubiquinol-cytochrome c reductase, 1.46 3.22 û complex III subunit VII, 9.5kDa Tableau 5 : Liste de 21 gènes de ménage N° d'accession Symbole Nom AA136500 G3BP1 ESTs AA423800 TMSB4X thymosin,_beta_4,_X_chromosome AA444051 S100A10 S100_calcium-binding_protein_A10_(annexin_I_ligand, _calpactin_I,_ight_polypeptide_(pl 1)) AA464246 HLA-C major histocompatibility_complex,_class_I,_C AA486746 RPL28 ribosomal_protein_L28 AA496880 RPL5 ribosomal_protein_L5 AA625634 RPL35 ribosomal_protein_L35 AA62964I RPS13 ribosomal_protein_SI 3 AA634008 RPS23 ribosomal_protein_S23 AA644679 DYNLLI dynein,_cytoplasmic,_ight_polypeptide AA66424I NACA -nascent-polypeptide-associated_complex_alpha_polypeptide AA668301 RPS16 ribosomal_protein_SI6 AA676955 ARHA ras_homolog_gene_family,_member_A AA775874 RPL18 ribosomal_protein_LI 8 AA 777034 BAl2 ESTs,_Highly_similar_to_BAI_2_[H.sapiens] AA856556 RPS28 ribosomal_protein_S28 AA872341 RPS15A ribosomal_protein_S15a -35-proteasome_(prosome,_macropain)_subunit,_alpha_type,_7 ri boso mal_protein_L7a H.sapiens_mRNA for alpha-centractin H uman_guanine_nucleotide-bind ing_protein_G-s,_alpha_subunit_mRNA,_partial_cds Références

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Claims (19)

1. Revendications1. Méthode d'évaluation de l'homéostasie épidermique de la peau d'un sujet humain comprenant la détermination du caractère significativement modulé ou non du niveau d'expression d'au moins un gène au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum, où ledit gène est choisi parmi les gènes ADAM15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, H2AFB2, ICAMI, IFNAR2, IL3RA, ITGAM, KHDRBSI, LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4, XRCC1, ANXA6, ARPC4, ATPIA1, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYC1, DAPK3, FGA, HSD17B10, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPAI, SSBP1, TLE4, TSPAN3 et UQCRQ.
2. 2. Méthode selon la revendication 1, comprenant la détermination du caractère significativement modulé ou non du niveau d'expression d'au moins 2, 3, 4, 5, 6, 8 ou 10 gènes au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum, où lesdits gènes sont choisis parmi les gènes ADAM15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, H2AFB2, ICAM1, IFNAR2, IL3RA, ITGAM, KHDRBSI, LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4, XRCC1, ANXA6, ARPC4, ATPIAI, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYC1, DAPK3, FGA, HSD17B10, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPAI, SSBP1, TLE4, TSPAN3 et UQCRQ.
3. 3. Méthode selon la revendication 2 comprenant la détermination du caractère significativement modulé ou non du niveau d'expression d'au moins un gène au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum, où ledit gène est choisi parmi les gènes ADAM15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, H2AFB2, ICAMI, IFNAR2, IL3RA, ITGAM, KHDRBSI, LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4 et XRCC1, et - la détermination du caractère significativement modulé ou non du niveau d'expression d'au moins un gène au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum, où ledit gène est choisi- 38 - parmi les gènes ANXA6, ARPC4, ATPIA1, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYC1, DAPK3, FGA, HSD17B10, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPAI, SSBP1, TLE4, TSPAN3 et UQCRQ.
4. 4. Méthode selon l'une quelconque des revendications précédentes où ladite agression physique ou chimique du stratum corneum est un tape stripping, l'application d'acétone, d'un agent délipidant, d'un agent chimique abrasif acide ou basique, ou bien une méthode physique telle que la chaleur.
5. 5. Méthode selon l'une quelconque des revendications précédentes où la modulation du niveau d'expression du ou des gène(s) choisi(s) au sein de l'épiderme est normalisé par référence à l'expression d'au moins un gène choisi parmi RPL28, RPL5, RPL35, RPS13, RPS23, RPS16, RPL18, RPS15A, RPL7A, RPS28, G3BP1, TMSB4X, HLA-C, DYNLLI, NACA, ARHA, BAI2, UBA52 et GNAS au sein de l'épiderme correspondant à la région agressée.
6. 6. Méthode selon l'une quelconque des revendications précédentes où le caractère significativement modulé ou non du niveau d'expression du ou des gène(s) choisi(s) au sein de l'épiderme est déterminée dans les 72 heures suivants l'agression physique ou chimique, de préférence dans les 36 heures.
7. 7. Méthode selon l'une quelconque des revendications précédentes où l'expression d'un gène est déterminée à l'aide de la quantification du niveau d'expression de l'ARNm ou de la protéine codée par ce gène.
8. 8. Méthode d'évaluation de l'état de l'épiderme d'un individu humain comprenant l'évaluation de l'homéostasie épidermique de la peau dudit individu selon l'une des revendications 1 à 7. 30
9. 9. Méthode selon la revendication 8, où la peau évaluée est qualifiée de peau de type « âgée » Si - aucune modulation significative du niveau d'expression d'un gène choisi parmi les gènes ADAM15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, H2AFB2, ICAM1,25- 39 - IFNAR2, IL3RA, ITGAM, KHDRBS1, LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4 et XRCC1 n'est observée au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum, et/ou une modulation significative du niveau d'expression d'un gène choisi parmi les gènes ANXA6, ARPC4, ATP1 Al, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYCI, DAPK3, FGA, HSD17BIO, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPAI, SSBP1, TLE4, TSPAN3 et UQCRQ est observée au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum.
10. 10. Méthode selon la revendication 8, où la peau évaluée est qualifiée de peau de type « jeune » Si une modulation significative du niveau d'expression d'un gène choisi parmi les gènes ADAM15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, H2AFB2, ICAMI, IFNAR2, IL3RA, ITGAM, KHDRBSI, LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4 et XRCC1 est observée au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum, et/ou - aucune modulation significative du niveau d'expression d'un gène choisi parmi les gènes ANXA6, ARPC4, ATP1 Al, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYC1, DAPK3, FGA, HSD17BIO, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPAI, SSBP1, TLE4, TSPAN3 et UQCRQ n'est observée au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum.
11. 11. Méthode de criblage de molécules pour leur action bénéfique sur l'homéostasie de l'épiderme humain, comprenant l'évaluation de l'homéostasie épidermique de la peau d'un individu humain par une méthode selon l'une des revendications 1 à 8, avant et après application de chacune des molécules à cribler.
12. 12. Méthode d'évaluation de l'effet bénéfique d'un traitement sur l'homéostasie épidermique de la peau humaine, comprenant l'évaluation de l'homéostasie30- 40 - épidermique de la peau d'un individu humain par une méthode selon l'une des revendications 1 à 8, avant et après mise en oeuvre dudit traitement.
13. 13. Méthode selon la revendication 11 ou 12, où le traitement ou la molécule testée est considéré comme efficace s'il est observé : - l'augmentation du niveau de modulation du niveau d'expression d'au moins un gène choisi parmi les gènes ADAM15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, H2AFB2, ICAMI, IFNAR2, IL3RA, ITGAM, KHDRBSI, LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4 et XRCC1, et/ou - la diminution du niveau de modulation du niveau d'expression d'au moins un gène ANXA6, ARPC4, ATPI A1, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYC1, DAPK3, FGA, HSD17B10, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPAI, SSBP1, TLE4, TSPAN3 et UQCRQ, au sein de l'épiderme, en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum, et après mise en oeuvre dudit traitement ou application de ladite molécule.
14. 14. Méthode selon la revendication 13 où ledit traitement ou ladite molécule testée est considéré comme efficace si ladite augmentation ou diminution du niveau de modulation de l'expression est observée 30 heures après l'agression physique ou chimique du stratum corneum.
15. 15. Méthode selon la revendication 11 ou 12, où le traitement ou la molécule testée est considéré comme efficace s'il est observé : l'induction du niveau d'expression d'au moins un gène choisi parmi les gènes ADAM15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, H2AFB2, ICAMI, IFNAR2, IL3RA, ITGAM, KHDRBSI, LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4, XRCC1 et DAPK3, et/ou la répression du niveau d'expression d'au moins un gène choisi parmi les gènes ANXA6, ARPC4, ATPI A1, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYC1, FGA, HSD17BIO, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPAI, SSBP1, TLE4, TSPAN3 et UQCRQ, au sein de l'épiderme, en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum, et après mise en oeuvre dudit traitement ou application de ladite molécule.-41 -
16. 16. Méthode selon la revendication 15 où ledit traitement ou ladite molécule testée est considéré comme efficace si ladite induction ou répression est observée 30 heures après un tape stripping, ou dès 6 heures pour le gène LMNA.
17. 17. Kit pour l'évaluation de l'homéostasie épidermique de la peau d'un sujet humain, comprenant : - un moyen pour réaliser une agression physique ou chimique du stratum corneum, un moyen pour réaliser un prélèvement d'épiderme, un moyen pour déterminer le niveau d'expression d'au moins un gène choisi parmi les gènes ADAM15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, H2AFB2, ICAMI, IFNAR2, IL3RA, ITGAM, KHDRBS1, LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4, XRCC1, ANXA6, ARPC4, ATPIA1, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYC1, DAPK3, FGA, HSD17BIO, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPA1, SSBP1, TLE4, TSPAN3 et UQCRQ, et un moyen pour déterminer le niveau d'expression d'au moins un gène choisi parmi les gènes RPL28, RPL5, RPL35, RPS13, RPS23, RPS16, RPL18, RPS15A, RPL7A, RPS28, G3BP1, TMSB4X, HLA-C, DYNLLI, NACA, ARHA, BAI2, UBA52 et GNAS.
18. 18. Utilisation d'au moins un gène choisi parmi les gènes ADAM15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, H2AFB2, ICAM1, IFNAR2, IL3RA, ITGAM, KHDRBSI, 25 LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4, XRCC1, ANXA6, ARPC4, ATPIA1, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYC1, DAPK3, FGA, HSD17BIO, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPAI, SSBP1, TLE4, TSPAN3 et UQCRQ pour évaluer l'homéostasie épidermique de la peau d'un sujet humain, comprenant la détermination du 30 caractère significativement modulé ou non du niveau d'expression du ou desdits gènes au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum. 10 15 20-42-
19. 19. Utilisation selon la revendication 18 comprenant la détermination du caractère significativement modulé ou non du niveau d'expression d'au moins un gène choisi parmi ADAM15, ARL4D, CAP1, CDH1, GLG1, GOLGA4, H2AFB2, ICAMI, IFNAR2, IL3RA, ITGAM, KHDRBSI, LMNA, MMP7, PLCL1, PTGES, RNPS1, SAP18, SILV, SLC31A1, TUBB4 et XRCC1, et d'au moins un gène choisi parmi les gènes ANXA6, ARPC4, ATPIAI, CDC37, CLEC2B, COX7B, COX7C, CYC1, DAPK3, FGA, HSD17BI0, ITPKC, MDK, NGB, POLR2G, PSMA5, PSME2, SF3B2, SNRPAI, SSBP1, TLE4, TSPAN3 et UQCRQ, au sein de l'épiderme en réponse à une agression physique ou chimique du stratum corneum.