FR2887773A1 - Utilisation d'un acide amine en tant qu'agent actif inducteur de la synthese des proteines sirt dans les cellules de la peau. - Google Patents

Abstract

La présente invention a pour objet l'utilisation d'au moins un acide aminé isoleucine, mono ou polyhydroxylé, et/ou d'un de ces dérivés, en tant qu'agent actif inducteur de la synthèse endogène des protéines SIRT dans les cellules de la peau, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique.

Description

L'invention concerne le domaine de la cosmétique et de la pharmaceutique,

notamment le domaine de la dermatologie. La présente invention a pour objet l'utilisation d'au moins un acide aminé isoleucine, mono ou polyhydroxylé, et/ou d'un de ces dérivés, en tant qu'agent actif inducteur de la synthèse endogène des protéines

SIRT dans les cellules de la peau, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique.

Les protéines SIRT font partie de la famille des Sirtuines, ce sont des protéines nucléaires, NAD+ dépendantes, jouant un rôle important dans la désacétylation des histones. Les gènes SIR (Silent Information Régulators) , codant pour les protéines SIR, ont, pour la première fois, été décrits chez S. cerevisiae en 1979 (Bine J et Al., Genetics 1979). Plus tard, il a été démontré qu'une surexpression de la protéine SIR2P, chez C. elegans, permettait d'augmenter la durée de vie de cet organisme (Tissenbaum et Al., Nature 2001). Cette étude émettant ainsi l'hypothèse selon laquelle ces protéines seraient liées à la longévité.

La protéine SIRT1 est la sirtuine humaine la mieux caractérisée, interagissant avec de nombreux régulateurs de la transcription. La protéine humaine SIRT1 a été décrite comme étant impliquée dans la régulation de p53 (Cheng HL et Al. Proc Nat/ Acad Sci U S A. 2003) ; et, plus récemment, comme un modulateur de la sénescence cellulaire (Langley E et Al., EMBO J. 2002). D'autres protéines humaines Sir ont été découvertes (SIRT2, SIRT3, SIRT4-7). La protéine humaine SIRT2 a été peu étudiée, quelques études ont cependant démontré son rôle dans le contrôle de l'activité mitotique (Dryden SC et Al., Mol Cell Biol. 2003) ainsi que son implication dans la régulation de la protéine p53 (Vaziri H et Al., Cell. 2001). A ce jour, les sirtuines désacétylases sont considérées comme une famille d'enzymes occupant un rôle important dans la régulation de la mort cellulaire et dans son cycle de vie (Porcu M and Chiarugi A., Trends Pharmacol Sci., 2005).

Il a récemment été démontré que cette protéine est présente de manière significative dans la peau et qu'elle occupe un rôle très important. Ces résultats ont démontré que la protéine SIRT, et plus précisément la protéine SIRT1, est exprimée dans les cellules de la peau et que son expression est en relation avec les différents stress que rencontrent les cellules cutanées. Il a plus particulièrement été mis en évidence que l'induction de l'expression de cette protéine, par différents agents, permettait de protéger les cellules et de mieux les aider à lutter contre le stress et le vieillissement intrinsèque de celles-ci.

La protéine SIRT1 occupe ainsi une fonction très importante dans le vieillissement et la protection cellulaire. Ainsi, une augmentation de son expression permet à la peau de mieux résister au stress qui l'entoure, c'est-à-dire de mieux lutter contre les phénomènes d'oxydation et donc, plus généralement, de mieux lutter contre le vieillissement. Plus globalement, l'induction de l'expression de cette protéine dans les cellules de la peau apporte une amélioration générale des mécanismes de protection cellulaire et permet d'augmenter la durée de vie cellulaire.

La présence de cette protéine au niveau de la peau, ainsi que les bénéfices de sa surexpression, mettent donc en perspective de nouveaux modes d'action et de nouveaux moyens afin d'améliorer la survie cellulaire, et notamment la survie cellulaire des cellules cutanées; mais aussi, plus généralement des moyens afin d'améliorer les propriétés de la peau. Par améliorer les propriétés de la peau, on entend tous les moyens destinés à conserver ou à rétablir un bon fonctionnement de la peau ou encore tout moyen qui sert à préserver ou à améliorer son apparence et/ou son aspect.

Ainsi une augmentation de la synthèse des protéines SIRT permettra à la peau de prévenir les manifestations cutanées du vieillissement, d'être mieux protégée contre les agressions extérieures et contre les stress auxquels elle est soumise. Par ailleurs, et selon une vision plus globale de l'invention, une induction des protéines SIRT permettra d'avoir des effets anti-inflammatoires et anti-irritants tout comme une rôle positif sur la régénération tissulaire et sur la cicatrisation par une action, par exemple, sur l'augmentation de la synthèse de protéines constitutives de la matrice extra-cellulaire.

La présente invention se rapporte ainsi à l'utilisation d'une quantité efficace d'au moins un acide aminé isoleucine, mono ou polyhydroxylé, et/ou d'un de ces dérivés, en tant qu'agent actif inducteur de la synthèse endogène des protéines SIRT dans les cellules de la peau. Cet actif pourra être utilisé seul ou en association avec au moins un autre agent actif, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermo-pharmaceutique et/ou dermatologique.

En effet, par leur activité inductrice de la synthèse des protéines SIRT, ces acides aminés particuliers, et plus particulièrement la 4hydroxyisoleucine, présentent des activités biologiques spécifiques qui les rendent directement utilisables dans des préparations ou compositions cosmétiques, dermatologiques ou pharmaceutiques.

1:.ut14ation de l'isoleucine et/ou de ses dérivés, mono ou polyhydroxylé, dans le domaine de la cosmétique et de la pharmaceutique est connue, notamment au niveau des soins de la peau ainsi que le décrit le brevet FR 2 852 841. Toutefois, son utilisation en tant qu'agent activateur de la synthèse des protéines SIRT n'a jamais été exposée.

A ce jour, très peu d'utilisations de composés inducteurs de synthèse de protéines de la famille des SIRT, dans les cellules de la peau, ont été décrites. Parmi les composés apte à activer la synthèse des protéines SIRT de la peau, on peut citer différentes molécules dont, par exemple, les polyphénols. Plus particulièrement, on peut citer: des dérivés de trans-stilbène (resveratrol, piceatannol), des dérivés des chalcones (isoliquiritigenine, butéine), les dérivés de flavones (fisteine, luteoline, quercetine).

Ainsi, le principal objet de la présente invention concerne l'utilisation d'un nouveau composé capable d'induire la synthèse des protéines SIRT. L'invention concerne l'utilisation d'une quantité efficace d'au moins un acide aminé isoleucine, mono ou polyhydroxylé, et/ou d'un de ces dérivés, en tant qu'agent actif inducteur de la synthèse endogène des protéines SIRT dans les cellules de la peau, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique. Préférentiellement selon d'invention, les composés activeront une classe de protéines SIRT particulière, les protéines SIRT1.

Par agent actif inducteur ou activateur de la synthèse des protéines SIRT, on entend un agent actif apte à induire la synthèse des protéines SIRT dans les cellules de la peau. C'est-à-dire des agents aptes à augmenter la quantité de ces protéines dans les cellules, mais plus particulièrement, on entend essentiellement désigner tous les agents actifs susceptibles de favoriser la production endogène des protéines SIRT; et tout particulièrement les molécules impliquées dans le contrôle positif des précurseurs tels que l'ADN ou l'ARN.

L'agent actif peut se définir comme étant une molécule ou un ensemble de 5 molécules susceptibles d'apporter des modifications ou des modulations au fonctionnement d'un système biologique.

Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'acide aminé est la 4-hydroxyisoleucine de formule: CH3 - CH - CH - CH - COOH 1 1 1 OH CH3 NH2 Par ailleurs, les composés selon l'invention sont relatifs aux dérivés d'isoleucine et aux dérivés de la 4-hydroxyisoleucine. Par " dérivés d'isoleucine", on entend aussi bien ces dérivés chimiques que ces dérivés biologiques. Par "dérivé", on entend tous les dérivés d'acide aminé leucine ou isoleucine auxquels un groupement aurait été ajouté. Ce groupement étant susceptible d'apporter de meilleures propriétés à l'agent actif défini selon l'invention. Ainsi, par exemple, les groupements pourront être ajoutés en vue de faciliter une meilleure pénétration dans la peau, ces dérivés étant par exemple des radicaux de type "oléyl", "stéaryl", "palmityl"...

De plus, par exemple, il se peut, pour des motifs de résistance ou d'efficacité, que l'acide aminé soit modifié sur ses fonctions acides carboxyliques et/ou sur ses fonctions amines. Ainsi, selon un autre aspect de l'invention, les acides aminés selon l'invention peuvent être modifiés par acylation ou acétylation sur leur fonction amine, et/ou ils peuvent être modifiés par amidation ou estérification sur leur fonction carboxylique. Par ailleurs, selon un mode particulier de réalisation de l'invention, les acides aminés pourront se trouver sous la forme de lactone.

Les acides aminés selon la présente invention pourront se trouver sous toutes les formes isomériques existantes. Cependant on utilisera, de manière préférentielle, la 4-hydroxyisoleucine sous la forme de ses isomères (2S, 3R, 4S) et/ou (2R, 3R, 4S). Ces isomères particuliers étant les isomères que l'on obtient majoritairement à partir du procédé d'obtention de la 4-hydroxyisoleucine utilisé pour obtenir l'agent actif selon l'invention. Plus particulièrement selon l'invention, la 4hydroxyisoleucine est sous la forme de l'isomère (2S, 3R, 4S).

Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, l'agent actif est d'origine végétale. Préférentiellement, le principe actif selon l'invention est obtenu à partir de végétaux appartenant au genre Trigonella. Bien entendu l'acide aminé peut être obtenu à partir d'au. moins l'une quelconque des nombreuses variétés et espèces appartenant au genre T'rigoxella.

Plus particulièrement la. substance active est obtenue à partir d'au moins un végétal de l'espèce Trigonella foenum graecum, communément appelé fenugrec. Le fenugrec est une plante herbacée annuelle, elle appartient au sous-ordre des légumineuses, à la famille des Papilionacées et au genre Trigonella. C'est une plante cultivée essentiellement dans les régions méditerranéennes et connue depuis l'antiquité pour ses vertus thérapeutiques.

Cette plante a la particularité de posséder une teneur élevée de matière protéique dans la graine et surtout de posséder un acide aminé libre particulier, l'hydroxisoleucine. Cet acide aminé a été identifié pour la première fois en 1973 par Fowden et al., il représente plus de 60 % des acides aminés libres présents dans la graine. L'hydroxyisoleucine est aussi présente mais en plus faible quantité dans les feuilles et dans les tiges du fenugrec.

Ainsi, selon un mode de réalisation préféré de l'invention, les principes actifs seront extraits des graines de végétaux du genre Trigonella, et plus particulièrement à partir de graines du végétal de l'espèce Trigonella foenum graecum.

Il est à noter que la 4-hydroxyisoleucine est aussi présente dans quelques autres espèces végétales; ainsi Raffauf et al. (1984) ont montré la présence de cet acide aminé particulier dans le Quararibea funebris, arbre de la famille des Bombacaceae. La. présence de 4-hydroxyisoleuacine a aussi été signalée dans des espèces telles que "octanes cwnphara as (Dardenne et al., 1986), Dioscoreae deltoïdea et Balanites aegyptia (IIardman et Abu-Al-Futuh, 1976). Il est bien entendu que le composé actif selon l'invention, notamment la 4-hydroxyisoleucine, peut être obtenu à partir de l'une quelconque des espèces végétales en contenant.

Les acides aminés, objets du présent brevet, peuvent être obtenus soit par synthèse chimique classique, soit par extraction ou purification à partir de substance d'origine naturelle ou synthétique. Préférentiellement selon l'invention, le principe actif est obtenu par extraction et/ou purification à partir d'une matière première naturelle, notamment végétale. Toute méthode d'extraction ou de purification connue de l'homme du métier peut être utilisée pour préparer le principe actif selon l'invention.

Pour extraire la 4-hydroxyisoleucine du fenugrec, on utilisera, par exemple, la méthode décrite par Hardman et Abu-Al-Futuh (Planta Medica, 36, 79-80, 1979) ou toute autre méthode d'extraction d'acide aminé connu de l'homme du métier.

Ainsi, on peut dans une première étape, broyer les graines, à l'aide d'un broyeur à plantes par exemple. Puis les graines de fenugrec sont "délipidées" par extraction des corps gras avec des solvants organiques classiques pour cet usage comme, par exemple, l'hexane, le chloroforme, un alcool ou l'acétone. Selon une variante du procédé de l'invention, il est possible d'utiliser des graines en cours de germination, ou encore d'utiliser seulement une partie de la graine contenant l'embryon et/ou les cotylédons. L'extraction proprement dite est réalisée sous agitation, à une température comprise entre 4 et 100 C, dans une solution aqueuse, c'est-à-dire composée d'eau, ou par une solution comprenant un mélange d'eau et d'un solvant organique miscible à l'eau, préférentiellement un alcool (méthanol, éthanol ou encore isopropanol). La proportion d'eau du mélange pouvant varier entre 10 et 100 %. L'extraction est réalisée à un pH compris entre 2 et 12.

Selon une variante de procédé d'extraction, celle-ci peut être réalisée dans un mélange d'eau et de polyol; c'est-à-dire du propylène, dipropylène, butylène ou hexylène glycol, ou encore du glycérol. Selon une autre variante du procédé d'extraction de l'agent actif selon l'invention, l'extraction peut être réalisée à l'aide d'un mélange hydroalcoolique, préférentiellement dans un mélange contenant environ 70 % d'éthanol. L'extrait alcoolique étant une première forme utilisable de l'extrait contenant l'agent actif. Une étape d'évaporation de l'alcool peut facilement être envisagée. La fraction soluble est, par la suite, récupérée par centrifugation et par filtration. Les composants de faible poids moléculaire, c'est-à-dire les acides aminés libres, sont séparés par dialyse des autres composés de poids moléculaire plus important. Par ailleurs, aprés l'étape d'extraction, il est possible de faire subir à l'extrait un traitement de purification afin de réduire la quantité de composés non désirables, comme par exemple les composés responsables de l'odeur ou encore de la couleur du produit. Ce traitement peut consister à mettre en contact notre solution avec divers absorbants tels que le charbon actif, les terres décolorantes ou la silice; puis, par la suite, à effectuer une étape de filtration. Dans une autre étape, l'extrait obtenu peut être encore purifié par fractionnement, notamment par une méthode classique de chromatographie sur résine échangeuse d'ions, comme par exemple par la technique de Moore, Syein et Spackman (1958). L'extrait peut également être purifié et concentré par un procédé de dialyse. L'une quelconque des formes plus ou moins purifiées de l'extrait est alors s h biiis danse l'eau ou dans tout mélange contenant de l'eau, puis stérilisée par ultrafiltration. Il est ainsi possible d'obtenir facilement un extrait contenant la 4- hydroxyisoleucine à un très haut degré de pureté.

L'utilisation de l'extrait selon l'invention apte à activer la synthèse des protéines SIRT1 dans les cellules de la peau, se fera préférentiellement sous la forme d'une composition adaptée à l'administration par voie topique externe, principalement sur la peau, les muqueuses et/ou les phanères, comprenant un milieu cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable.

La quantité efficace de principe actif correspond à la quantité nécessaire pour obtenir le résultat désiré. Ainsi, selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, le principe actif précité est utilisé, dans les compositions, à une concentration comprise entre 0, 00001 % et 20 % environ, et préférentiellement à une concentration comprise entre 0,001 % et 10 % environ en poids par rapport au poids total de la composition finale.

Ces extraits, aptes à activer la synthèse endogène des protéines SIRT, pourront être utilisés, d'une manière plus générale, afin de traiter des affections 25 dermatologiques.

Par affections dermatologiques, on entend toutes les maladies affectant la peau et ayant eu non des conséquences visibles. A ce titre, on peut citer par exemple: des désordres liés à des problèmes de différenciations et de proliférations cellulaires, des problèmes liés à la kératinisation, des troubles inflammatoires ou allergiques, des troubles liés aux fonctions sébacées, des proliférations dermiques ou épidermiques (bénignes ou malignes) ; des désordres cutanés dus à une exposition aux rayonnements UN., des pathologies associées au vieillissement chronologique ou actinique.

Ainsi selon un autre aspect, les composés selon l'invention, tels que décrits précédemment, destinée à activer la synthèse endogène des protéines SIRT dans les cellules de la peau, pourront être utilisés pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement des affections dermiques.

Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'agent actif précité est préalablement solubilisé dans un ou plusieurs solvants cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptables comme l'eau, l'éthanol, le propanol ou l'isopropanol, le propylène glycol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés ou tout mélange de ces solvants.

Selon encore un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, l'agent actif précité est préalablement solubilisé dans un vecteur cosmétique ou pharmaceutique comme les liposomes ou adsorbés sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites, et plus généralement solubilisés dans ou fixés sur, tout vecteur cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable.

Quelle que soit la forme de l'invention, la composition selon l'invention peut être ingérée, injectée ou appliquée sur la peau (sur toute zone cutanée du corps), les cheveux, les ongles ou les muqueuses. Selon le mode d'administration, la composition selon l'invention peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées. Préférentiellement, les compositions selon la présente invention se présenteront sous une forme galénique adaptée à l'administration par voie topique cutanée. Elles couvrent toutes les formes cosmétiques ou dermatologiques. Ces compositions doivent donc contenir un milieu cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec la peau, les poils ou les cheveux.

Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé de traitement cosmétique pour les soins de la peau destiné à augmenter la synthèse endogène des protéines SIRT dans les cellules de la peau, caractérisé par le fait que l'on applique sur la peau une composition contenant l'agent actif tel que défini précédemment, afin d'obtenir l'action désirée.

2887773 9 Des modes de réalisation particuliers de ce procédé de traitement cosmétique résultent également de la description précédente.

Le procédé de traitement cosmétique de l'invention peut être mis en oeuvre notamment en appliquant les compositions cosmétiques telles que définies ci-dessus, selon la technique d'utilisation habituelle de ces compositions, par exemple: application de crèmes, de gels, de sérums, de lotions, de laits, de shampooings ou de compositions anti-soles, sur la peau ou sur les cheveux, ou encore application de otifrice sur ls gencives.

D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples donnés à titre illustratif et non limitatif.

Exemple 1: Préparation de la 4-hydroxyisoleucine.

Une quantité de 100 grammes de graines délipidées du végétal de l'espèce Trigonella foenum graecum est broyée dans un broyeur à couteaux, à une granulométrie de 200mm. Une extraction est réalisée à température ambiante, par une solution acide à un pH égal à 2, d'un tampon acétate contenant 0,1 % d'acide ascorbique. Le milieu est ensuite clarifié par centrifugation. Ces deux opérations sont répétées trois fois. Les trois fractions clarifiées sont ensuite réunies et filtrées sur un filtre à plaque. L'extrait est ensuite dialysé à l'aide d'un appareil équipé de membranes possédant un seuil de coupure de 1000 Dalton; le dialysât est concentré, filtré stérilement puis séché par lyophilisation. Cinq grammes d'une poudre de couleur jaune sont alors recueillis, cette poudre est ensuite remise en solution dans un solvant cosmétiquement ou pharmaceutiquement approprié. La fraction de l'extrait contenant les acides aminés libres, et plus particulièrement la 4-hydroxyisoleucine, peut être isolée et concentrée par la technique classique de chromatographie échangeuse d'ions. Le concentrât est passé sur une colonne contenant une résine échangeuse de cation de façon à retenir l'acide aminé 4-hydroxyisoleucine, celle-ci est ensuite éluée en utilisant, par exemple, une solution d'ammoniaque. La solution ainsi obtenue est concentrée dans de l'éthanol à 70 %, puis une nouvelle étape de purification est effectuée en passant le mélange sur une chromatographie d'adsorption sur gel de silice. La colonne est éluée avec de l'éthanol à 70%. Le mélange récupéré est concentré de façon à obtenir une solution contenant un taux optimal de 4-hydroxyisoleucine.

Exemple 2: Mise en évidence de l'effet de l'extrait selon l'invention sur les fibroblastes.

Le but de l'étude est de déterminer l'influence de l'extrait de l'exemple 1 sur la synthèse des protéines SIRT1 par les fibroblastes, par la technique d'immunofluorescence et par la technique de western-blotting. Les techniques d'immunofluorescence et de western-blot sont des techniques semi-quantitatives qui permettent d'apprécier le taux des protéines présentes dans les cellules.

Des fibroblastes humains sont maintenus en culture à 37 C dans une atmosphère humidifiée contenant 5 % de CO2. Pour les études d'immunofluorescence, les fibroblastes ont été cultivés sur des lames 8 puits; pour le western-blot, les cellules ont été cultivées dans boîtes de 100 mm de diamètre. Les cellules sont ensuite incubées durant 24 ou 48 heures avec l'extrait selon l'invention mis en solution à 0,5 % ou à 1 % ; une condition contrôle ne contenant pas d'extrait est réalisée.

É Etudes par immunofluorescence Après élimination des surnageants et rinçage des cultures, les cellules sont fixées avec du méthanol pendant 4 minutes à 4 C puis rincées avec du tampon PBS. Des anticorps de lapin anti-SIRTI humaine, dilués à 1/100, sont alors ajoutés (Santa Cruz Biotechnology). L'incubation dure 3 heures à température ambiante; les surnageants sont ensuite éliminés et les cellules sont rincées au PBS. Puis un anticorps secondaire (anti-lapin, Molecular Probes), couplé à un marqueur fluorescent (Alexa 488) est additionné. Après 1 heure d'incubation à température ambiante, les surnageants sont éliminés et les cellules sont rincées au PBS. Les lames sont alors montées puis examinées au microscope à Epi-fluorescence (Nikon Eclipse E600 microscope).

La quantité de protéines SIRT1, synthétisées par les cellules, est proportionnelle à l'intensité de la fluorescence. Les résultats ainsi obtenus démontrent une augmentation significative de l'expression des protéines SIRT1 au niveau du noyau de la cellule après application de l'actif selon l'invention durant 24 et 48 heures. Par ailleurs, plus la concentration d'actif appliquée au niveau des cellules est importante, plus l'intensité est élevée.

Etudes par Western-blot Les cellules sont lavées et scrapées à l'aide d'un tampon d'extraction (20mM Tris, 150mM NaCl, 10mM EDTA, 0,2 % Triton X100) et d'un cocktail d'inhibiteur de protéases (Sigma). Les protéines ainsi extraites sont centrifugées à 4 C à 10000 rpm durant 10 minutes et les échantillons ainsi obtenus sont stockés à -80 C.

Amis sttandardisation des échantillons avec un kit de dosage de protéines BCA (Pierce), les lysats cellulaires sont séparés par électrophorèse sur un gel NuPAGE 4- 12% (Invitrogen) et transférés sur une membrane de nitrocellulose (PAL corporation). Les membranes sont incubées toute une nuit avec un anticorps de lapin anti-SIRT1 humaine (Santa Cruz Biotechnology), dilué à 1/200, suivi par une incubation avec un anticorps anti-lapin IgG-peroxydase, dilué à 1/5000, (Beckman Coulter). La révélation est effectuée avec un substrat chemiluminescent.

Afin d'évaluer quantitativement les protéines exprimées dans les cellules, les bandes présentes dans le gel sont quantifiées en utilisant un logiciel ChimiImager (Alpha Innotech Corporation, USA).

La quantité des protéines est exprimée en pourcentage d'intensité lumineuse, comparée à la condition contrôle, c'est-à-dire comparée aux cellules qui n'ont pas reçu 20 l'extrait selon l'invention.

intensité % Incubation durant 24 heures Incubation durant 48 heures Contrôle 100 100 Extrait à 0,5 % 253 885 Extrait à 1 % 296 1012 Les résultats, présentés dans le tableau ci-dessus, nous permettent de conclure que l'ajout de l'exit selon l'invention dans le milieu de culture des fibroblastes a pour effet d'augmenter la synthèse des protéines SIRT1 par les cellules. Cette stimulation a été observée de manière importante. En effet, lorsque les cellules sont incubées en présence de la composition contenant l'actif selon l'invention, on assiste au bout de 24 ou de 48 heures à une augmentation de l'intensité de la fluorescence, par rapport aux cellules non traitées, traduisant ainsi une stimulation de la synthèse de protéine SIRT1, cette augmentation étant vraisemblablement dose-dépendante.

Exemple2: Mise en évidence ex vivo de l'effet selon l'extrait selon l'invention. 5 Des études ex vivo ont permis, par immunomarquage, de mettre en évidence l'expression des protéines SIRT1 sur des échantillons de peau.

Des échantillons de peau humaine sont mis en culture à l'interface air/liquide. L'extrait selon l'invention est appliqué topiquement sur ces échantillons, au niveau de 10 l'épithélium, puis les échantillons sont incubés durant 24 heures.

Ces échantillons de peau sont ensuite fixés avec du formaldéhyde puis inclus dans la paraffine. Des coupes de 2 à 3 m sont alors réalisées. L'immunomarquage est effectué après différentes étapes de lavage et d'incubation de ces coupes. L"immunomarquage proprement dit est réalisé avec un anticorps polyclonal de lapin anti-SIRT1 humaine (IBL Co), dilué au 1/50, puis avec un anticorps secondaire (antilapin, Molecular Probes), couplé à un marqueur fluorescent. Les coupes de peau sont alors examinées au microscope à à Epi-fluorescence (Nikon Eclipse E600 microscope).

Les résultats obtenus démontrent que les peaux traitées avec l'extrait selon l'invention expriment une quantité de protéines SIRT1 nettement supérieure aux peaux non traitées avec l'extrait. Ainsi, l'extrait selon l'invention permet, au niveau cutané, d'augmenter l'expression des protéines SIRT1.

Claims (13)

REVENDICATIONS

1. Utilisation d'une quantité efficace d'au moins un acide aminé isoleucine, mono ou polyhydroxylé, et/ou d'un de ces dérivés, en tant qu'agent actif inducteur de la synthèse endogène des protéines SIRT dans les cellules de la peau, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique.

2. Utilisation selon la reveication 1 caractérisée en ce que l'acide aminé est la 4-hydroxyisoleucine de formule: CH3-CH-CH-CH-0OOH I l OH CH3 NH2

3. Utilisation selon la revendication 2 caractérisée en ce que l'acide aminé est sous la forme de l'isomère (2S, 3R, 4S) ou (2R, 3R, 4S).

4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que les acides aminés sont modifiés par acylation ou acétylation sur leur fonction amine, et/ou sont modifiés par amidation ou estérification sur leur fonction carboxylique.

5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2 caractérisée en ce que les acides aminés sont sous une forme lactonique.

6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que ragent actif est d'origine végétale.

7. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en 30 ce que l'agent actif est obtenu à partir de végétaux du genre Trigonella.

8. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que l'agent actif est obtenu à partir de l'espèce Trigonella foenum graecum.

9. Utilisation selon la revendication 6, 7 ou 8 caractérisée en ce que l'agent actif est obtenu à partir de la graine des végétaux.

10. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que les protéines SIRT sont des protéines SIRT1.

11. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que la composition contient des excipients cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptables.

12. Utilisation selon la revendication 11 caractérisé en ce que les excipients sont adaptés à une administration topique externe.

13. Procédé de traitement cosmétique de la peau destiné à augmenter la synthèse endogène des protéines SIRT dans les cellules de la peau, caractérisé par le fait que l'on applique sur la peau une composition contenant l'agent actif tel que

défini selon les revendications 1 à 9.