FR2861392A1 - New 3-acylamino-1,2-propanediol biscarbamate derivatives useful for preparing liposomes for use as carriers for therapeutic, cosmetic or diagnostic agents - Google Patents

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Abstract

3-Acylamino-1,2-propanediol biscarbamate derivatives (III) are new. 3-Acylamino-1,2-propanediol biscarbamate derivatives of formula (III) are new. [Image] X : S or CH2; n : 0-10; R : 4-24C hydrocarbyl, 4-24C fluorinated hydrocarbyl or 4-24C thioalkyl; R3A1 or A2; A1 : (CH2)mCONHC(CH2OH)3; A2 : (CHR1)x(CH2CHQ)yH; m : 1-10; Q : CONHZR2 or CONH(CH2)4CH(COOH)N(CH2COOH)2; x : 0-30; y : 0-10; R1a hydrophilic group; R2a recognition group with affinity for a biological target; Z : a peptide, omega -amino acid, ethanolamine, propanolamine or NH(CH2)pNH group linked to R2 through OCO, CONH, NHCONH, NHCOO, OCOO, O, CH=N or S function or by nickel complexation; p : 2-6; and provided that m+n is 2-6 when X is CH2. Independent claims are also included for: (1) producing liposomes by dissolving a compound (III; R3 = A1) in an alcohol or chlorinated solvent, evaporating the solvent, adding water (0.5-10 mg/ml) at 40-80[deg]C and treating the mixture with ultrasound at a temperature above the phase transition temperature of (III) or by extrusion through porous filters until a bluish translucent solution is obtained; (2) liposome (L1) comprising (III; R3 = A1) as wall constituents; (3) combination of (L1) and a therapeutic, cosmetic or diagnostic agent; and (4) therapeutic, cosmetic or diagnostic composition comprising at least one active ingredient in combination with (L1).

Description

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La présente invention a pour objet de nouveaux tensioactifs, leur utilisation pour la préparation de systèmes supramoléculaires métastables, ou liposomes, de forme allongée. L'invention a également pour objet les liposomes obtenus à partir de ces tensio-actifs et leur utilisation comme vecteurs de principes actifs, notamment de principes actifs thérapeutiques.  The present invention relates to novel surfactants, their use for the preparation of metastable supramolecular systems, or liposomes, of elongated form. The subject of the invention is also the liposomes obtained from these surfactants and their use as vectors of active principles, in particular of therapeutic active principles.

Certaines molécules amphiphiles, les phospholipides naturels, ont la propriété de s'associer dans l'eau en formant des organisations supramoléculaires métastables de formes sphériques appelées liposomes qui renferment un compartiment aqueux interne. Ces liposomes sont capables de renfermer des actifs thérapeutiques au sein de ce compartiment interne et peuvent ainsi servir à véhiculer ces actifs vers des cellules ou des tissus cibles. L'étude de ces vecteurs particulaires a fait l'objet d'une littérature abondante dans laquelle les problèmes ainsi que les potentialités de leur utilisation ont été largement abordés (Barenholz, Curr. Opin. In Coll. and Int. Sci. 6 (2001) 66-77).  Some amphiphilic molecules, natural phospholipids, have the property of associating in water by forming metastable supramolecular organizations of spherical forms called liposomes that enclose an internal aqueous compartment. These liposomes are capable of containing therapeutic assets within this internal compartment and can thus be used to convey these active agents to target cells or tissues. The study of these particulate vectors has been the subject of an abundant literature in which the problems as well as the potential for their use have been widely discussed (Barenholz, Curr Opin, In Coll, and Int Sci, 6, 2001). ) 66-77).

Toutefois, l'utilisation des liposomes pour le transport de principes actifs thérapeutiques présente quelques inconvénients majeurs :
Ces nanostructures ont généralement une stabilité relativement faible dans le temps, car dans le milieu dans lequel elles sont dispersées, elles fusionnent pour former des objets plus larges qui précipitent ensuite rapidement. Ce comportement limite fortement leur capacité de conservation et de stockage. However, the use of liposomes for the transport of therapeutic active principles has some major drawbacks:
These nanostructures generally have a relatively low stability in time, because in the medium in which they are dispersed, they merge to form larger objects which then precipitate rapidly. This behavior greatly limits their storage and storage capacity.

La stabilité biologique de ces vecteurs, c'est-à-dire leur temps de rétention dans la circulation sanguine, est étroitement associée à leur taille qui doit être inférieure à 200 nm pour leur permettre d'atteindre une cible potentielle (Nagayasu et al, Adv. Drug Del. Rev. 40 (1999) 75-87). Toutefois, les candidats les plus efficaces de ce point de vue : les liposomes uni lamellaires de petites tailles, présentent l'inconvénient d'être dotés d'un rapport médicament encapsulé / lipides plus faible que les liposomes uni lamellaires de grandes tailles (Vemuri et al., Pharm. Acta Helv. 70 (1995) 95-111). Les lipides formant ces nanostructures présentent généralement un coût de production élevé. La faible capacité d'encapsulation de principes actifs de certains de ces liposomes représente alors un problème économique.  The biological stability of these vectors, i.e., their retention time in the bloodstream, is closely associated with their size which must be less than 200 nm to enable them to reach a potential target (Nagayasu et al, Adv Drug Del Rev. 40 (1999) 75-87). However, the most effective candidates from this point of view: uni-lamellar liposomes of small size, have the disadvantage of having a lower ratio of encapsulated drug / lipids than large uni-lamellar liposomes (Vemuri et al. al., Pharm Acta Helv 70 (1995) 95-111). The lipids forming these nanostructures generally have a high production cost. The low capacity of encapsulation of active principles of some of these liposomes then represents an economic problem.

En effet, la formulation du support pharmaceutique ne doit pas dépasser de manière exagérée le prix de l'actif véhiculé si l'on veut permettre l'utilisation de tels vecteurs dans des formulations à usage thérapeutique.  Indeed, the formulation of the pharmaceutical carrier must not exceed the price of the conveyed asset in an exaggerated manner if it is desired to allow the use of such vectors in formulations for therapeutic use.

Enfin, il est indispensable de pouvoir disposer d'un vecteur qui puisse libérer son contenu de manière progressive et continue. De telles propriétés nécessitent d'avoir recours à des membranes hautement organisées et imperméables qui sont constituées de formulations de lipides complexes et coûteuses.  Finally, it is essential to have a vector that can release its content gradually and continuously. Such properties require the use of highly organized and impermeable membranes that are complex and expensive lipid formulations.

Malgré ces difficultés un certain nombre de préparations pharmaceutiques à base de liposomes sont disponibles actuellement sur le marché ou sont  Despite these difficulties, a number of liposome-based pharmaceutical preparations are currently available on the market or are

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en phase clinique. L'avantage le plus appréciable de ces préparations est leur excellente tolérance par rapport à l'utilisation d'un principe actif libre. Leur efficacité à dose équivalente est cependant à peine supérieure. C'est le cas de l'amphotéricine B encapsulée en liposome (Ambisome). L'amphotéricine B est un agent antifongique à très large spectre qui provoque des réactions secondaires importantes et notamment des insuffisances rénales. Son encapsulation dans des formulations lipidiques augmente considérablement son index thérapeutique (Andres et al., Rev. Méd. Interne, 22 (2001) 141-150).  in clinical phase. The most appreciable advantage of these preparations is their excellent tolerance with respect to the use of a free active ingredient. Their equivalent dose effectiveness, however, is barely superior. This is the case of amphotericin B encapsulated in liposome (Ambisome). Amphotericin B is a broad-spectrum antifungal agent that causes significant side reactions, including renal failure. Its encapsulation in lipid formulations considerably increases its therapeutic index (Andres et al., Rev. Inner Med., 22 (2001) 141-150).

Afin de diminuer leur élimination rapide par le système réticuloendothélial, des systèmes de protection des liposomes ont été mis en place. Le plus efficace consiste à utiliser des phospholipides substitués par des polyéthylène glycols de masse moléculaire comprise entre 1000 et 5000 dans une proportion de 5 à 10% du mélange total de phospholipides. Les groupements polyéthylène glycol se répartissent à la surface des liposomes pour former une barrière hydrophile imperméable aux protéines plasmatiques ce qui empêche les phénomènes d'opsonisation. Les liposomes invisibles , dits furtifs, ainsi formés (commercialisés sous le nom de marque Stealth liposomes) ont des temps de rétention sanguins supérieurs aux liposomes conventionnels (45h contre quelques minutes à quelques heures). L'augmentation du temps de circulation sanguine de ces liposomes favorise leur accumulation dans les tissus cancéreux qui sont particulièrement irrigués, et leur utilisation pour le transport de composés anticancéreux est particulièrement appropriée (Gabizon et al., Cancer Res. 54 (1994) 987-992). Une formulation de Stealth liposomes à base de dauxorubicine (Doxil, Alza Corp. ) est actuellement commercialisée pour lutter contre le syndrome de Kaposi. Cependant certaines formulations constituées de liposomes de très petites tailles (50 nm) peuvent aussi être considérées comme des préparations à longue circulation. C'est le cas de la formulation anticancéreuse de daunorubicine commercialisée par NeXstar (DaunoXome).  In order to reduce their rapid elimination by the reticuloendothelial system, liposome protection systems have been put in place. The most effective is to use phospholipids substituted with polyethylene glycols of molecular weight between 1000 and 5000 in a proportion of 5 to 10% of the total mixture of phospholipids. The polyethylene glycol groups are distributed on the surface of the liposomes to form a hydrophilic barrier impervious to plasma proteins which prevents opsonization phenomena. The invisible, so-called stealth liposomes thus formed (marketed under the brand name Stealth Liposomes) have higher blood retention times than conventional liposomes (45 hours versus a few minutes to a few hours). Increased blood circulation time of these liposomes promotes their accumulation in cancerous tissues that are particularly irrigated, and their use for the transport of anti-cancer compounds is particularly appropriate (Gabizon et al., Cancer Res 54 (1994) 987- 992). A formulation of Stealth liposomes based on dauxorubicin (Doxil, Alza Corp.) is currently marketed to fight Kaposi syndrome. However, some liposome formulations of very small size (50 nm) can also be considered as long-circulating preparations. This is the case of the anti-cancer formulation of daunorubicin marketed by NeXstar (DaunoXome).

Pour effectuer un chargement optimal d'actifs à l'intérieur des liposomes, la méthodologie la plus efficace consiste à mettre en place un gradient de pH ou d'ammonium entre les compartiments intérieurs et extérieurs. Si ces méthodes s'avèrent efficaces pour le chargement d'actifs elles nécessitent l'utilisation de pH internes acides (2- 3) qui peuvent induire l'hydrolyse des phospholipides membranaires. Afin de limiter ce phénomène il est possible d'utiliser des alkylamines susceptibles de traverser la membrane phospholipidique mais cette méthode rend encore plus complexe la formulation à mettre en place.  To perform optimal loading of actives within liposomes, the most effective methodology is to set up a pH or ammonium gradient between the inner and outer compartments. If these methods prove effective for the loading of assets they require the use of internal pH acids (2- 3) which can induce the hydrolysis of membrane phospholipids. In order to limit this phenomenon, it is possible to use alkylamines capable of passing through the phospholipid membrane, but this method makes the formulation even more complex to put in place.

Afin d'assurer la stabilité mécanique des liposomes que ce soit lors de leur stockage ou de leur utilisation in vivo, plusieurs stratégies impliquant l'utilisation de polymères peuvent être envisagées :  In order to ensure the mechanical stability of liposomes either during storage or in vivo use, several strategies involving the use of polymers can be envisaged:

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La polymérisation des tensioactifs constitutifs de la membrane du liposome après sa formation (Bader et al., Adv. Polym. Sci. 64 (1985) 1-62) et Hotz et al., Adv. Mater. 10 (1998) 1387-1390). Polymerization of the liposome membrane-forming surfactants after its formation (Bader et al., Adv Polym Sci 64 (1985) 1-62) and Hotz et al., Adv. Mater. 10 (1998) 1387-1390).

L'interaction de polymères ioniques amphiphiles ou non à la surface de la membrane externe des liposomes (Hayashi et al., Biochim. Biophys. Acta, 1280 (1996) 120-126, Ishihara et al., Coll. and Surf., B : Biointerfaces 25 (2002) 325-333).  The interaction of amphiphilic or nonionic ionic polymers on the surface of the outer membrane of liposomes (Hayashi et al., Biochim Biophys Acta, 1280 (1996) 120-126, Ishihara et al., Coll and Surf., B Biointerfaces 25 (2002) 325-333).

Enfin, la polymérisation d'un monomère hydrophile à l'intérieur de la cavité aqueuse interne du liposome est une méthode qui a été peu étudiée et qui a été décrite sommairement par Torchilin et al. (Makromol. Chem., Rapid communication, 8 (1987) 457-460). Elle a été utilisée comme outil de fabrication d'empreinte moléculaire polymérisée dans un brevet américain (Perrot et al., US patent n 6217901,17 avril 2001).  Finally, the polymerization of a hydrophilic monomer within the internal aqueous cavity of the liposome is a method that has been poorly studied and which has been described briefly by Torchilin et al. (Makromol Chem., Rapid Communication, 8 (1987) 457-460). It has been used as a polymerized molecular fingerprinting tool in a US patent (Perrot et al., US Patent No. 6217901, April 17, 2001).

La limitation essentielle liée à l'utilisation de polymères pour stabiliser les liposomes est la toxicité potentielle induite par leur accumulation dans le lysosome ou par la toxicité propre du monomère hydrophile non polymérisé (cas de l'acrylamide). Afin de limiter ce phénomène il est crucial d'utiliser des polymères de bas poids moléculaires plus facilement biodégradables.  The essential limitation related to the use of polymers to stabilize liposomes is the potential toxicity induced by their accumulation in the lysosome or by the inherent toxicity of the unpolymerized hydrophilic monomer (case of acrylamide). In order to limit this phenomenon it is crucial to use low molecular weight polymers that are more easily biodegradable.

L'objectif de la présente invention est la mise au point de vecteurs nano particulaires à très faible coût de production et ayant la capacité de transporter à l'intérieur de leur cavité aqueuse interne une famille très large d'actifs hydrophiles. Les vecteurs nano particulaires de l'invention permettent Fencapsulation, la rétention et la libération de substances dosables. Les applications visées incluent le transport de principes actifs, notamment de principes actifs thérapeutiques, la délivrance épidermique de substances cosmétiques, le diagnostic médical. Notamment le transport d'actifs anticancéreux, d'actifs à usage vaccinal, de matériel génétique, d'enzymes, d'hormones, de vitamines, de sucres, de protéines et de peptides, de lipides, de molécules organiques et inorganiques.  The objective of the present invention is the development of nanoparticle vectors with a very low production cost and having the capacity to transport within their internal aqueous cavity a very large family of hydrophilic active agents. The particulate nanoparticles of the invention allow encapsulation, retention and release of dosable substances. Targeted applications include the transport of active ingredients, including therapeutic active ingredients, epidermal delivery of cosmetic substances, medical diagnosis. In particular the transport of anticancer active ingredients, vaccines, genetic material, enzymes, hormones, vitamins, sugars, proteins and peptides, lipids, organic and inorganic molecules.

Cet objectif a été atteint grâce à la conception et à la synthèse de nouveaux tensioactifs qui permettent de préparer des vecteurs nano particulaires ou liposomes dotés de propriétés avantageuses par rapport aux liposomes de l'art antérieur.  This objective has been achieved through the design and synthesis of novel surfactants which make it possible to prepare nanoparticles or liposomes having advantageous properties with respect to the liposomes of the prior art.

La présente invention a pour objet les composés répondant à la formule (I)--  The subject of the present invention is the compounds corresponding to formula (I) -

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Figure img00040001

dans laquelle :
X représente un atome de soufre S ou un groupement -CH2- ; n est un entier allant de 0 à 10, tel que par exemple 0, 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 ; m est un entier allant de 1 à 10, tel que par exemple 1,2, 3,4, 5 ou 6 ; lorsque X=CH2 alors 1 <m+n<7 ;
R représente un groupement choisi parmi : les radicaux hydrocarbonés en C4-C24 ; les radicaux hydrocarbonés fluorés en C4-C24 ; les radicaux thioalkyls en C4-C24.
Figure img00040001

in which :
X represents a sulfur atom S or a group -CH2-; n is an integer from 0 to 10, such as for example 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6; m is an integer from 1 to 10, such as for example 1,2, 3,4, 5 or 6; when X = CH2 then 1 <m + n <7;
R represents a group chosen from: C4-C24 hydrocarbon radicals; fluorinated C4-C24 hydrocarbon radicals; C4-C24 thioalkyl radicals.

Le groupement R peut notamment être choisi parmi les radicaux suivants : - Le radical thiooctyl - Les radicaux hydrocarbonés en C4-C24 tels que le n-butyle, le terbutyle, l'isobutyle, le n-pentyle, l'isopentyle, le n-hexyle, le n-heptyle, le n-octyle, le nnonyle, le n-décyle, le n-undécyle, le n-dodécyle, le n-tridécyle, le n-tétradécyle, le npentadécyle, le n-hexadécyl, le n- heptadécyle, le n-octadécyle, le radical phytyl (CH3[CH(CH3)(CH2)3]3CH(CH3)CH2CH2), - Les radicaux hydrocarbonés fluorés en C4-C24 tels que ceux répondant à la formule -(CH2)t-(CF2)rF, dans laquelle r et t représentent deux entiers avec : 14 # r+t #4, comme par exemple : -(CF2)4F; -(CF2)5F; -(CF2)6F ; -(CF2)7F; -(CF2)8F ; -(CF2)9F; - (CF2)10F ; -(CF2)nF; -(CF2)12F ; -(CF2)13F ; -(CF2)14F ; -CH2-(CF2)3F ; -CH2-(CF2)4F ; - CH2-(CF2)5F; -CH2-(CF2)6F ; -CH2-(CF2)7F; -CH2-(CF2)sF; -CH2-(CF2)9F ; -CH2- (CF2)IOF; -CH2-(CF2)nF; -CH2-(CF2)12F; -CH2-(CF2)13F ; -(CH2)2-(CF2)2F; -(CH2)2- (CF2)3F ; - (CH2)2-(CF2)4F ; -(CH2)2-(CF2)5F ; -(CH2)2-(CF2)6F ; -(CH2)2-(CF2)7F ; -(CH2)2- (CF2)8F; -(CH2)2-(CF2)9F; -(CH2)2-(CF2)10F ; -(CH2)2-(CF2)nF ; -(CH2)2-(CF2)12F; -

Figure img00040002

(CH2)3-(CF2OF -(CH2),3-(CFZ)F ; -(CH2)4(CF2)6F ; -(CH2)4(CF2)8F ; (CH2)4(CF2)lOF ; -(CH2)1o(CF2)6F , -(CH2)lo(CFz)8F ; -(CH2)io(CF2)ioF............ The group R may in particular be chosen from the following radicals: - thiooctyl radical - C4-C24 hydrocarbon radicals such as n-butyl, terbutyl, isobutyl, n-pentyl, isopentyl, n- hexyl, n-heptyl, n-octyl, n-nyl, n-decyl, n-undecyl, n-dodecyl, n-tridecyl, n-tetradecyl, npentadecyl, n-hexadecyl, n heptadecyl, n-octadecyl, the phytyl radical (CH 3 [CH (CH 3) (CH 2) 3] 3 CH (CH 3) CH 2 CH 2), - fluorinated C 4 -C 24 hydrocarbon radicals such as those corresponding to the formula - (CH 2) t- (CF2) rF, in which r and t represent two integers with: ## EQU1 ##, for example: - (CF2) 4F; - (CF2) 5F; - (CF2) 6F; - (CF2) 7F; - (CF2) 8F; - (CF2) 9E; - (CF2) 10F; - (CF2) nF; - (CF2) 12F; - (CF2) 13F; - (CF2) 14F; -CH2- (CF2) 3F; -CH2- (CF2) 4F; - CH 2 - (CF 2) 5F; -CH2- (CF2) 6F; -CH2- (CF2) 7F; -CH2- (CF2) sF; -CH2- (CF2) 9F; -CH2- (CF2) IOF; -CH2- (CF2) nF; -CH2- (CF2) 12F; -CH2- (CF2) 13F; - (CH2) 2- (CF2) 2F; - (CH2) 2- (CF2) 3F; - (CH2) 2- (CF2) 4F; - (CH2) 2- (CF2) 5F; - (CH2) 2- (CF2) 6F; - (CH2) 2- (CF2) 7F; - (CH2) 2- (CF2) 8F; - (CH2) 2- (CF2) 9E; - (CH2) 2- (CF2) 10F; - (CH2) 2- (CF2) nF; - (CH2) 2- (CF2) 12F; -
Figure img00040002

(CH2) 3- (CF2OF - (CH2), 3- (CFZ) F; - (CH2) 4 (CF2) 6F; - (CH2) 4 (CF2) 8F; (CH2) 4 (CF2) 1F-; CH 2) 10 (CF 2) 6F, - (CH 2) lo (CF 2) 8F; - (CH 2) io (CF 2) ioF ............

Les chaînes R préférées sont celles qui contribuent à donner au tensioactif de formule (I) une température de transition de phase supérieure à 37 C. En  The preferred R chains are those which contribute to giving the surfactant of formula (I) a phase transition temperature greater than 37 C.

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effet, lorsque de tels tensioactifs sont utilisés pour la fabrication de liposomes, ces tensioactifs, possédant une structure cristalline à température physiologique, apportent à la membrane des liposomes une rigidité supérieure et un degré de rétention plus important des solutés encapsulés dans le compartiment aqueux interne. De préférence R représente une chaîne hydrocarbonée en C]2-C24 ou une chaîne hydrocarbonée fluorée en C8-C24.  indeed, when such surfactants are used for the manufacture of liposomes, these surfactants, having a crystalline structure at physiological temperature, provide the liposome membrane with greater rigidity and a higher degree of retention of encapsulated solutes in the internal aqueous compartment. Preferably, R represents a C 1 -C 24 hydrocarbon-based chain or a C 8 -C 24 fluorinated hydrocarbon chain.

Préférentiellement l'une ou plusieurs des conditions suivantes sont vérifiées : X=S ;n=2, m=2.  Preferably one or more of the following conditions are satisfied: X = S, n = 2, m = 2.

Les composés de formule (I) préférés sont ceux répondant à la formule A dans laquelle R a la même définition que ci-dessus n=2, X=S, m=2 :

Figure img00050001
The preferred compounds of formula (I) are those corresponding to formula A in which R has the same definition as above n = 2, X = S, m = 2:
Figure img00050001

Formule A
Parmi ceux-ci, un composé particulièrement préféré est AI représenté cidessous :

Figure img00050002
Formula A
Among these, a particularly preferred compound is AI shown below:
Figure img00050002

La synthèse des molécules de formule (I) peut être faite de façon simple en utilisant les méthodes classiques de la synthèse organique. Plusieurs exemples de synthèse sont illustrés dans la partie expérimentale. The synthesis of the molecules of formula (I) can be made in a simple manner using conventional methods of organic synthesis. Several examples of synthesis are illustrated in the experimental part.

Un second objet de l'invention consiste dans l'utilisation des molécules de formule (I) pour la fabrication de liposomes. Les liposomes sont des dispersions aqueuses de vésicules dont les parois sont formées d'une ou de plusieurs bicouches d'agents amphiphiles, renfermant un espace interne aqueux. Les liposomes de l'art antérieur ont leurs parois généralement constituées de phospholipides.  A second object of the invention consists in the use of the molecules of formula (I) for the manufacture of liposomes. Liposomes are aqueous dispersions of vesicles whose walls are formed of one or more bilayers of amphiphilic agents, enclosing an aqueous internal space. The liposomes of the prior art have their walls generally consisting of phospholipids.

Les liposomes sont fabriqués à partir des tensioactifs de formule (I) très facilement par la méthode du film (liposomes, a practical approach, R. R.C. New, Ed.,  Liposomes are made from the surfactants of formula (I) very easily by the film method (liposomes, a practical approach, R. R. C. New, Ed.

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Oxford University Press, New-York, 1990). Ce procédé peut être résumé de la façon suivante : - Dissolution d'un composé de formule (I) dans un alcool ou dans un solvant chloré ; - Evaporation du solvant ; - Addition d'eau à une température allant de 40 à 80 C à une concentration allant de 0,5 à 10 mg/ml ; - Traitement : - soit aux ultrasons à une température supérieure à la température de transition de phase du composé (1) - soit par extrusion de la solution à travers un ou plusieurs filtres de porosité appropriée, jusqu'à l'obtention d'une solution translucide bleutée.  Oxford University Press, New York, 1990). This process can be summarized as follows: Dissolving a compound of formula (I) in an alcohol or in a chlorinated solvent; - Evaporation of the solvent; - Addition of water at a temperature ranging from 40 to 80 C at a concentration ranging from 0.5 to 10 mg / ml; - Treatment: - either with ultrasound at a temperature above the phase transition temperature of the compound (1) - or by extrusion of the solution through one or more filters of appropriate porosity, until a solution is obtained translucent bluish.

De façon plus détaillée : une solution de tensioactif dissous dans du méthanol ou du chloroforme est évaporée lentement dans un ballon afin de former un film fin sur la paroi du ballon. De l'eau distillée à 65 C est additionnée afin de réhydrater le film, à une concentration de 2,5 mg/ml. La solution obtenue est ensuite soumise aux ultrasons pendant 30 minutes dans un bain de sonication à une température supérieure à la température de transition de phase du tensioactif dispersé jusqu'à obtention d'une solution translucide bleutée. On peut également pour cette dernière étape remplacer la sonication par une extrusion répétée de la solution au travers de deux filtres de polycarbonate de porosité 200nm, montés en série. Un double traitement de sonication et d'extrusion peut également être prévu.  In more detail: a solution of surfactant dissolved in methanol or chloroform is slowly evaporated in a flask to form a thin film on the wall of the flask. Distilled water at 65 ° C is added to rehydrate the film at a concentration of 2.5 mg / ml. The resulting solution is then sonicated for 30 minutes in a sonic bath at a temperature above the phase transition temperature of the dispersed surfactant until a bluish translucent solution is obtained. It is also possible for this last step to replace the sonication by a repeated extrusion of the solution through two polycarbonate filters of porosity 200 nm, mounted in series. A dual sonication and extrusion treatment may also be provided.

D'autres méthodes classiques de préparation de liposomes peuvent être utilisés pour la préparation des liposomes de l'invention. On peut à cet effet se reporter à S.  Other conventional liposome preparation methods can be used for the preparation of the liposomes of the invention. One can for this purpose refer to S.

Vemuri et C. T.Rhodes, Pharmaceutica Acta Helvetiae 70, (1995), 95-111. Vemuri and C. T. Rhodes, Pharmaceutica Acta Helvetiae 70, (1995), 95-111.

De façon étonnante on observe la formation de vésicules de forme allongée, désignées vésicules tubulaires en raison de leur taille, qui est de l'ordre de quelques dizaines de nanomètre, et de leur forme qui rappelle celle d'un tube fermé à ses deux extrémités.  Surprisingly, we observe the formation of elongated vesicles, designated tubular vesicles because of their size, which is of the order of a few tens of nanometers, and their shape reminiscent of a tube closed at both ends. .

La taille et la stabilité mécanique dans le temps des particules obtenues dans la solution ont été mesurées après filtration par diffraction dynamique de la lumière (High Performance Particle Sizer, Malvern). La nature des particules obtenues a été étudiée par microscopie électronique par transmission après coloration négative de l'échantillon ou après cryofracture (figure 4).  The size and the mechanical stability over time of the particles obtained in the solution were measured after filtration by dynamic light scattering (High Performance Particle Sizer, Malvern). The nature of the particles obtained was studied by transmission electron microscopy after negative staining of the sample or after cryofracture (FIG. 4).

Les mesures de forme et de taille établies par l'observation des clichés de microscopie électronique ont permis de mettre en évidence la formation de liposomes de forme allongée dénommés vésicules tubulaires, refermés à leurs extrémités, dont la section  Measurements of shape and size established by the observation of electron microscope micrographs made it possible to demonstrate the formation of elongated liposomes called tubular vesicles, closed at their ends, whose section

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moyenne est comprise entre 20 et 80 nm et la longueur moyenne est comprise entre 200 et 500 nm (figure 3). Les analyses en cryofracture ont confirmé la formation de ces vésicules tubulaires et leurs caractéristiques morphologiques à savoir la présence d'une cavité aqueuse interne isolée du milieu extérieur (figure 5).  average is between 20 and 80 nm and the average length is between 200 and 500 nm (Figure 3). The cryofracture analyzes confirmed the formation of these tubular vesicles and their morphological characteristics, namely the presence of an internal aqueous cavity isolated from the external medium (FIG. 5).

Pour un tensioactif de formule (I) donné la taille des particules est sensiblement homogène : elle varie dans une fourchette de valeur de + 10%, préférentiellement de + 5%, autour d'une valeur centrale de longueur et de diamètre.  For a surfactant of formula (I), the particle size is substantially homogeneous: it varies within a range of + 10%, preferably + 5%, around a central value of length and diameter.

Ces vésicules tubulaires ont une stabilité relativement élevée puisque l'on n'observe aucune évolution de la taille des particules après un an de stockage tandis que des liposomes formés de phosphatidyl choline de jaune d'#uf montrent une évolution après seulement 5 jours de stockage.  These tubular vesicles have a relatively high stability since there is no change in particle size after one year of storage while liposomes formed of phosphatidyl choline of egg yolk show an evolution after only 5 days of storage .

La mise en évidence de la cavité interne aqueuse a été prouvée indirectement par des mesures spectrofluorimétriques de l'encapsulation et des cinétiques de relargage d'une sonde fluorescente hydrophile, la carboxyfluorescéine. Les mesures montrent clairement une cinétique de relargage plus lente de la sonde fluorescente comparée à une encapsulation traditionnelle dans un mélange de phosphatidyl choline de jaune d'#uf (figure 1).  The detection of the internal aqueous cavity has been proven indirectly by spectrofluorimetric measurements of the encapsulation and release kinetics of a hydrophilic fluorescent probe, carboxyfluorescein. The measurements clearly show slower release kinetics of the fluorescent probe compared with traditional encapsulation in a mixture of phosphatidyl choline of egg yolk (FIG. 1).

Nous avons pu mettre en évidence que les liaisons hydrogène intermoléculaires entre les tensioactifs constituant les vésicules tubulaires étaient à l'origine de leur morphologie et de leur stabilité particulière. En effet, les fonctions alcool du tris (hydroxyméthyl) ainsi que les fonctions carbamate ont la propriété de pouvoir générer un réseau de liaisons hydrogène entre les tensioactifs constituant la membrane, stabilisant ainsi les vésicules tubulaires. Ceci a pu être mis en évidence par spectroscopie infra-rouge à transformée de Fourier en phase liquide (dans CCI4). On note en effet, sur le spectre une augmentation de l'intensité de la bande à 1691 cm-1 caractéristique des fonctions carbonyles liées à un atome d'hydrogène, lorsque la concentration en tensioactif dans la solution augmente au détriment de son homologue non lié (figure 2).  We have shown that the intermolecular hydrogen bonds between the surfactants constituting the tubular vesicles were at the origin of their particular morphology and stability. Indeed, the alcohol functions of tris (hydroxymethyl) and the carbamate functions have the property of being able to generate a network of hydrogen bonds between the surfactants constituting the membrane, thus stabilizing the tubular vesicles. This could be demonstrated by liquid-phase Fourier transform infra-red spectroscopy (in CCI4). Indeed, the spectrum shows an increase in the intensity of the 1691 cm-1 band characteristic of the carbonyl functions bonded to a hydrogen atom, when the concentration of surfactant in the solution increases to the detriment of its unbound counterpart. (Figure 2).

Il est à noter que la substitution dans le tensioactif de formule (I) des liaisons carbamate par des liaisons ester entre les chaînes grasses et le motif glycérol, comme illustré dans la structure B, conduit à la formation dans l'eau de liposomes de structures traditionnelles dont la stabilité mécanique est seulement de quelques heures, confirmant ainsi l'hypothèse émise de stabilisation et d'organisation des vésicules tubulaires par l'établissement de liaisons hydrogène particulières (figure 6).  It should be noted that the substitution in the surfactant of formula (I) for carbamate linkages by ester bonds between the fatty chains and the glycerol unit, as illustrated in structure B, leads to the formation in water of liposomes of structures traditional mechanical stability is only a few hours, confirming the hypothesis of stabilization and organization of the tubular vesicles by the establishment of specific hydrogen bonds (Figure 6).

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Figure img00080001
Figure img00080001

L'invention a en outre pour objet des liposomes, ou dispersions aqueuses de vésicules, caractérisés en ce qu'ils comportent un ou plusieurs composés de formule (I) comme constituants de leurs parois.  The invention further relates to liposomes, or aqueous dispersions of vesicles, characterized in that they comprise one or more compounds of formula (I) as constituents of their walls.

Ces liposomes présentent des caractéristiques de structure originales qui leurs confèrent des propriétés inattendues, en particulier une stabilité améliorée par rapport aux liposomes de l'art antérieur. Les liposomes de l'invention ont également montré une capacité à libérer un principe actif sur une plus longue durée par rapport aux liposomes de l'art antérieur.  These liposomes have original structural characteristics which give them unexpected properties, in particular an improved stability compared to the liposomes of the prior art. The liposomes of the invention have also shown an ability to release an active ingredient over a longer period compared to the liposomes of the prior art.

Outre les composés de formule (I), les liposomes de l'invention comportent en outre de préférence au moins un composé répondant à la formule (II) ci-

Figure img00080002

dessous : o -i H R-NH /O HN (CH2)n-X L C J NH-Z-R2 y Y NH-Z# R2 o R# NHXO (II) dans laquelle : - X représente un atome de soufre S ou un groupement -CH2- ; de préférence X représente S ; - n est un entier allant de 0 à 10, tel que par exemple 0, 1, 2,3, 4,5 ou 6 ; de préférence n=2 ; - x représente 0 ou un entier allant de 1 à 30 ; tel que par exemple 1, 2, 3, 4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15...; - y représente 0 ou un entier allant de 1 à 10, tel que par exemple 1, 2,3, 4, 5 ou 6 ; - R1 représente un groupement hydrophile. De préférence RI peut être choisi parmi les radicaux suivants : In addition to the compounds of formula (I), the liposomes of the invention preferably comprise at least one compound corresponding to formula (II)
Figure img00080002

below: ## STR1 ## in which: X represents a sulfur atom S or a grouping -CH2-; preferably X is S; n is an integer ranging from 0 to 10, for example 0, 1, 2,3, 4,5 or 6; preferably n = 2; x represents 0 or an integer ranging from 1 to 30; as for example 1, 2, 3, 4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15 ...; y represents 0 or an integer ranging from 1 to 10, such as for example 1, 2, 3, 4, 5 or 6; - R1 represents a hydrophilic group. Preferably RI may be chosen from the following radicals:

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Figure img00090001

dans lesquels R' représente H ou un groupement destiné à favoriser la solubilisation de la molécule (II) dans l'eau. R' peut par exemple être un composé hydrocarboné polyhydroxylé en C4-C24, notamment il peut être choisi parmi les sucres comme par exemple le galactose, le glucose, le mannose, l'acide sialique, lié par son carbone anomère.
Figure img00090001

in which R 'represents H or a group intended to promote the solubilization of the molecule (II) in water. R 'can for example be a C4-C24 polyhydroxy hydrocarbon compound, in particular it can be chosen from sugars such as for example galactose, glucose, mannose, sialic acid, bound by its anomeric carbon.

- R2 représente un groupement de reconnaissance qui est choisi en fonction de la cible cellulaire, de préférence il est choisi parmi les groupements ayant une affinité prononcée pour la cible biologique du principe actif véhiculé dans le vésicule tubulaire.  - R2 represents a recognition group which is chosen according to the cellular target, preferably it is selected from the groups having a pronounced affinity for the biological target of the active principle carried in the tubular vesicle.

R2 peut être de nature saccharidique (ciblage des lectines membranaires spécifiques qui se retrouvent dans des tissus particuliers et qui reconnaissent sélectivement soit le galactose-cas du foie, des os, de certaines tumeurs cancéreuses-, soit le mannose - cas des macrophages, du c#ur-, soit l'acide sialique- cas des érythrocytes -...), de nature hormonale (tels que des stéroïdes), de nature synthétique tel que le gleevek pour cibler les kinases, des anticorps spécifiques, la biotine qui se lie à certaines protéines spécifiques, ...et plus généralement tous substrats dont les recherches antérieures ont démontré la spécificité de reconnaissance.  R2 can be of a saccharide nature (targeting of specific membrane lectins found in particular tissues and which selectively recognize either the galactose-case of the liver, bones, certain cancerous tumors- or mannose-the case of macrophages # ur-, or sialic acid-case of erythrocytes -...), of a hormonal nature (such as steroids), of a synthetic nature such as gleevek to target kinases, specific antibodies, biotin that binds to certain specific proteins, and more generally all substrates whose previous research has demonstrated the specificity of recognition.

R2 peut être choisi parmi des anticorps ou des fragments d'anticorps, des petites molécules effectrices permettant l'interaction avec des récepteurs de surface cellulaires, des antigènes, des sucres, des peptides et d'autres composés qui permettent d'assurer le ciblage spécifique de certaines cellules ou tissus cibles. On peut citer, par exemple, parmi les peptides utilisables dans la présente invention : la séquence RGD, connue pour son affinité pour les intégrines [alpha]Vss3, l'acide folique, le thalidomide connu pour son affinité pour les sites d'angiogénèse.  R2 may be selected from antibodies or antibody fragments, small effector molecules for interaction with cell surface receptors, antigens, sugars, peptides and other compounds that provide for specific targeting. certain cells or target tissues. For example, among the peptides that may be used in the present invention, there may be mentioned: the RGD sequence, known for its affinity for [alpha] Vss3 integrins, folic acid, thalidomide known for its affinity for angiogenesis sites.

On peut prévoir qu'une même molécule de formule (II) comporte un ou plusieurs groupements R2 de reconnaissance identiques ou plusieurs groupements de reconnaissance R2 différents, ce qui permet de diriger les liposomes vers plusieurs cibles biologiques distinctes.  It can be provided that the same molecule of formula (II) comprises one or more identical recognition R2 groups or several different R2 recognition groups, which makes it possible to direct the liposomes towards several distinct biological targets.

- R représente un groupement choisi parmi : les radicaux hydrocarbonés en C4-C24 ; radicaux hydrocarbonés fluorés en C4-C24 ; les radicaux thioalkyls en C4C24-
Le groupement R peut notamment être choisi parmi les radicaux suivants : - Le radical thiooctyl R represents a group chosen from: C4-C24 hydrocarbon radicals; C4-C24 fluorinated hydrocarbon radicals; thioalkyl radicals at C4C24-
The group R can in particular be chosen from the following radicals: - The thiooctyl radical

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Les radicaux hydrocarbonés en C4-C24 : le n-butyle, le ter-butyle, l'isobutyle, le n-pentyle, l'isopentyle, le n-hexyle, le n-heptyle, le n-octyle, le n-nonyle, le n-décyle, le n-undécyle, le n-dodécyle, le n-tridécyle, le n-tétradécyle, le n-pentadécyle, le n-hexadécyl, le n- heptadécyle, le n-octadécyle, radical phytyl (CH3[CH(CH3)(CH2)3]3CH(CH3)CH2CH2) ... C4-C24 hydrocarbon radicals: n-butyl, tert-butyl, isobutyl, n-pentyl, isopentyl, n-hexyl, n-heptyl, n-octyl, n-nonyl , n-decyl, n-undecyl, n-dodecyl, n-tridecyl, n-tetradecyl, n-pentadecyl, n-hexadecyl, n-heptadecyl, n-octadecyl, phytyl radical (CH 3 [CH (CH 3) (CH 2) 3] 3CH (CH 3) CH 2 CH 2) ...

- Les radicaux hydrocarbonés fluorés en C4-C24 : on peut citer ceux répondant à la formule -(CH2)t-(CF2)rF, dans laquelle r et t représentent deux entiers avec : 14 # r+t # 4, tels que par exemple : -(CF2)4F ; -(CF2)5F ; -(CF2)6F ; -(CF2)7F ; - (CF2)8F ; - (CF2)9F; -(CF2)IOF ; -(CF2)nF ; -(CF2)12F ; -(CF2)13F ; -(CF2)14F , -CH2-(CF2)3F ; -CH2- (CF2)4F ; -CH2-(CF2)5F ; -CH2-(CF2)6F ; -CH2-(CF2)7F ; -CH2-(CF2)8F ; -CH2-(CF2)9F ; - CH2-(CH2)10F ; -CH2-(CF2)nF; -CH2-(CF2)12F; -CH2-(CF2)13F; -(CH2)2-(CF2)2F; - (CH2)2-(CF2)3F ; -(CH2)2-(CF2)4F ; -(CH2)2-(CF2)5F ; -(CH2)2-(CF2)6F ; -(CH2)2-(CF2)7F ; -

Figure img00100001

(CH2)2-(CF2)8F ; -(CH2)2-(CF2)9F ; -(CH2)2-(CF2)IOF ; -(CH2)2-(CFZ)1F ; -(CH2)2- (CF2)12F , -(CH2)3-(CF2)iF ;....-(CH2)13-(CF2)F ; -(CH2)4(CF2)6F ; -(CH2)4(CF2)8F ; (CH2)4(CF2)I0F ; -{CHZOo(CFa)6F -(CHzOo(CFa)sF -(CHZOo(CFZOoF........ C4-C24 fluorinated hydrocarbon radicals which may be mentioned are those corresponding to the formula - (CH2) t- (CF2) rF, in which r and t represent two integers with: ## EQU1 ## for example: - (CF2) 4F; - (CF 2) 5F; - (CF2) 6F; - (CF2) 7F; - (CF2) 8F; - (CF2) 9F; - (CF2) IOF; - (CF2) nF; - (CF2) 12F; - (CF2) 13F; - (CF2) 14F, -CH2- (CF2) 3F; -CH2- (CF2) 4F; -CH2- (CF2) 5F; -CH2- (CF2) 6F; -CH2- (CF2) 7F; -CH2- (CF2) 8F; -CH2- (CF2) 9F; - CH 2 - (CH 2) 10F; -CH2- (CF2) nF; -CH2- (CF2) 12F; -CH2- (CF2) 13F; - (CH2) 2- (CF2) 2F; - (CH2) 2- (CF2) 3F; - (CH2) 2- (CF2) 4F; - (CH2) 2- (CF2) 5F; - (CH2) 2- (CF2) 6F; - (CH2) 2- (CF2) 7F; -
Figure img00100001

(CH2) 2- (CF2) 8F; - (CH2) 2- (CF2) 9F; - (CH2) 2- (CF2) IOF; - (CH2) 2- (CFZ) 1F; - (CH2) 2- (CF2) 12F, - (CH2) 3- (CF2) 1F; ....- (CH2) 13- (CF2) F; - (CH2) 4 (CF2) 6F; - (CH2) 4 (CF2) 8F; (CH2) 4 (CF2) 10F; - {CH 2 O (CFa) 6F - (CH 2 O) (CFa) sF - (CH 2 O 3 (CF 2 OOF ........

- Z est un bras espaceur qui relie le groupement de reconnaissance R2 à la chaîne polymérique. Z est lié à R2 au moyen d'une liaison qui peut être choisie parmi les fonctions -O-CO-, -CO-NH-,-NH-CO-NH-, -NH-CO-O-, O-CO-O-, -O-, -CH=N-, -Sou par complexation d'un atome de nickel (Chikh et al., Biochim. Biophys. Acta, 1567 (2002) 204-212). Celui ci peut se lier d'une part à un tag de polyhistidine fixé sur l'agent de ciblage et d'autre part à un polyacide de type NTA fixé sur la chaîne polymérique.  Z is a spacer arm which connects the recognition group R2 to the polymer chain. Z is bonded to R2 by means of a bond which may be selected from -O-CO-, -CO-NH-, -NH-CO-NH-, -NH-CO-O-, O-CO- O-, -O-, -CH = N-, -Si by complexation of a nickel atom (Chikh et al., Biochim Biophys Acta, 1567 (2002) 204-212). This can bind on the one hand to a polyhistidine tag attached to the targeting agent and on the other hand to a polyacid NTA type fixed on the polymer chain.

Le bras espaceur Z peut être constitué d'une chaîne peptidique. Celle-ci peut être fixée sur la chaîne oligomérique par l'intermédiaire de la chaîne latérale ou principale de l'aminoacide situé en extrémité. Ce bras espaceur comprend 1 à 5 acides aminés, préférentiellement 1 à 3 acides aminés.  The spacer arm Z may consist of a peptide chain. This can be attached to the oligomeric chain via the side or main chain of the amino acid located at the end. This spacer arm comprises 1 to 5 amino acids, preferably 1 to 3 amino acids.

Les acides aminés constituant le bras espaceur Z, sont choisis parmi les acides aminés naturels comme l'alanine, l'arginine, l'asparagine, l'acide aspartique, la cystéine, la glutamine, l'acide glutamique, la glycine, l'histidine, l'isoleucine, la leucine, la lysine, la méthionine, la phénylalanine, la proline, la sérine, la thréonine, le tryptophane, la tyrosine, la valine, ou les acides aminés non naturels tels que l'hydroxyproline, la norleucine, l'ornithine, la citrulline, la cyclohexylalanine. Ce bras écarteur Z peut être constitué d'un résidu tyrosine permettant le suivi in vivo du vésicule tubulaire après marquage à 125I ou 1311.  The amino acids constituting the spacer arm Z are chosen from natural amino acids such as alanine, arginine, asparagine, aspartic acid, cysteine, glutamine, glutamic acid, glycine, histidine, isoleucine, leucine, lysine, methionine, phenylalanine, proline, serine, threonine, tryptophan, tyrosine, valine, or unnatural amino acids such as hydroxyproline, norleucine , ornithine, citrulline, cyclohexylalanine. This spreader arm Z may consist of a tyrosine residue allowing the in vivo follow-up of the tubular vesicle after 125I or 1311 labeling.

On peut également envisager d'employer comme groupement Z des acides Q-aminés tels que l'acide 3-aminopropionique et l'acide 4-amino-butyrique, mais également l'éthanolamine, la 3-propanolamine ou des diamines de formule -NH-(CH2)pNH- dans laquelle p représente un entier allant de 2 à 6.  Q-amino acids such as 3-aminopropionic acid and 4-amino-butyric acid, but also ethanolamine, 3-propanolamine or diamines of formula -NH can also be envisaged as Z-groups. - (CH2) pNH- in which p represents an integer ranging from 2 to 6.

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Lors d'une liaison par complexation d'un atome de nickel, le groupement -Z-R2 est constitué par un groupement NTA de formule :

Figure img00110001
During a bonding by complexation of a nickel atom, the group -Z-R2 is constituted by an NTA group of formula:
Figure img00110001

De préférence, les liposomes ou vésicules tubulaires de l'invention comportent de 1 à 5% d'un ou plusieurs composés de formule (II) ce qui permet de favoriser le ciblage de ces liposomes vers leur cible biologique sans altérer leur organisation. Preferably, the liposomes or tubular vesicles of the invention comprise from 1 to 5% of one or more compounds of formula (II) which makes it possible to promote the targeting of these liposomes towards their biological target without altering their organization.

Ces télomères lipidiques (II) présentent l'avantage grâce à leur partie hydrophile oligomérique de pouvoir éloigner les agents de reconnaissance greffés de la surface des vésicules tubulaires, favorisant ainsi leur reconnaissance par les cellules ou les tissus cibles. L'autre avantage lié à l'utilisation de ces lipides de ciblage (II) est la possibilité de multiplier les motifs de reconnaissance sur un seul composé grâce à la technique de télomérisation. Les facteurs x et y sont en effet faciles à contrôler et vont dépendre assez étroitement de la proportion de monomères et d'agent télogène mis en réaction.  These lipid telomers (II) have the advantage thanks to their oligomeric hydrophilic part to be able to remove grafted recognition agents from the surface of the tubular vesicles, thus promoting their recognition by the cells or the target tissues. The other advantage related to the use of these targeting lipids (II) is the possibility of multiplying the recognition motifs on a single compound by means of the telomerization technique. The factors x and y are indeed easy to control and will depend quite closely on the proportion of monomers and telogen agent reacted.

La ligation des agents de reconnaissance peut être réalisée avant la télomérisation de la tête hydrophile si il y a compatibilité avec les conditions réactionnelles. Les agents de reconnaissance peuvent également être fixés sur la tête polaire oligomérique après formation des vésicules tubulaires. La partie hydrophile télomérisée est alors fonctionnalisée par des groupements susceptibles d'assurer le couplage avec ces agents de reconnaissance. Les différentes techniques de couplage susceptibles d'être utilisées sont bien connues de l'homme du métier et elles sont notamment décrites dans: Allen et al., Biochim. Biophys. Acta, 1237 (1995) 99-108 ; Sapra, Prog. Lipids Res., 42 (2003) 439-462, Hansen et al., Biochim. Biophys. Acta, 1239 (1995) 133-144.  The ligation of the recognition agents can be carried out before the telomerization of the hydrophilic head if there is compatibility with the reaction conditions. The recognition agents may also be attached to the oligomeric polar head after formation of the tubular vesicles. The hydrophilic telomerized portion is then functionalized with groups capable of coupling with these recognition agents. The various coupling techniques that may be used are well known to those skilled in the art and they are described in particular in: Allen et al., Biochim. Biophys. Acta, 1237 (1995) 99-108; Sapra, Prog. Lipids Res., 42 (2003) 439-462, Hansen et al., Biochim. Biophys. Acta, 1239 (1995) 133-144.

Les composés de formule (II) constituent un autre objet de l'invention.  The compounds of formula (II) constitute another subject of the invention.

Les composés de formule (I) et de formule (II) peuvent être regroupés sous une formule commune (III) :  The compounds of formula (I) and of formula (II) can be grouped under a common formula (III):

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Figure img00120001

(III) dans laquelle X, n et R ont la même définition que dans les formules (I) et (II) et R3 représente un groupement choisi parmi :
Figure img00120002

m ayant la même signification que dans la formule (I)
RI, R2, Z, x et y ayant la même signification que dans la formule (II)
Selon une variante préférée de l'invention, les liposomes ou vésicules tubulaires de l'invention sont stabilisés par télomérisation ou polymérisation d'un monomère de type acrylique contenu dans leur cavité aqueuse interne.
Figure img00120001

(III) wherein X, n and R have the same definition as in formulas (I) and (II) and R3 represents a group chosen from:
Figure img00120002

m having the same meaning as in formula (I)
R1, R2, Z, x and y having the same meaning as in formula (II)
According to a preferred variant of the invention, the tubular liposomes or vesicles of the invention are stabilized by telomerization or polymerization of an acrylic-type monomer contained in their internal aqueous cavity.

De manière à limiter le relargage des solutés encapsulés dans ces vésicules tubulaires et à augmenter leur stabilité mécanique il est possible d'introduire à l'intérieur du compartiment aqueux interne des vésicules tubulaires une matrice oligomérique ou polymérique. La matrice oligomérique est fabriquée après encapsulation du ou des monomères constitutifs dans les vésicules tubulaires et élimination des monomères non encapsulés par des techniques de séparation sur gel d'exclusion de taille.  In order to limit the release of solutes encapsulated in these tubular vesicles and to increase their mechanical stability it is possible to introduce an oligomeric or polymeric matrix inside the internal aqueous compartment of the tubular vesicles. The oligomeric matrix is manufactured after encapsulation of the constituent monomer (s) in the tubular vesicles and removal of unencapsulated monomers by size exclusion gel separation techniques.

La télomérisation, qui consiste à former le polymère en présence d'un agent de transfert de chaîne, permet d'accéder à des petits polymères de taille contrôlée. La masse moléculaire réduite de ce polymère favorise son élimination par voie rénale. En évitant l'accumulation de polymère dans le lysosome on évite également des problèmes de toxicité. Telomerization, which consists in forming the polymer in the presence of a chain transfer agent, makes it possible to access small polymers of controlled size. The reduced molecular weight of this polymer promotes its elimination by the renal route. By avoiding the accumulation of polymer in the lysosome, toxicity problems are also avoided.

Les liposomes ou vésicules tubulaires comprenant, outre les tensioactifs de formule (I), au moins un oligomère ou télomère tel que décrit ci-dessous constituent un autre objet de l'invention.  Liposomes or tubular vesicles comprising, in addition to the surfactants of formula (I), at least one oligomer or telomere as described below constitute another subject of the invention.

L'oligomère ou le télomère est constitué de blocs de construction monomériques, hydrophiles, ioniques ou non ioniques, choisis parmi les dérivés acide acrylique, acide méthacrylique, méthacrylamide, ainsi que les dérivés acrylate,  The oligomer or the telomer consists of monomeric, hydrophilic, ionic or nonionic building blocks chosen from acrylic acid, methacrylic acid and methacrylamide derivatives, as well as acrylate derivatives.

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méthacrylate, acrylamide et méthacrylamide d'alcools en Ci -Ce, de polyols en C2-C]2, de sucres et d'aminoacides.  methacrylate, acrylamide and methacrylamide of C1-C6 alcohols, C2-C12 polyols, sugars and amino acids.

Ces sucres peuvent être - Des sucres simples tels que : le glucose, ribose, arabinose, xylose, lyxose, allose, altrose, mannose, galactose, fructose, talose.  These sugars can be - simple sugars such as: glucose, ribose, arabinose, xylose, lyxose, allose, altrose, mannose, galactose, fructose, talose.

- Des disaccharides tels que le maltose, le saccharose, ou le lactose
Les aminoacides peuvent être choisis parmi les acides aminés naturels comme l'alanine, l'arginine, l'asparagine, l'acide aspartique, la cystéine, la glutamine, l'acide glutamique, la glycine, l'histidine, l'isoleucine, la leucine, la lysine, la méthionine, la phénylalanine, la proline, la sérine, la thréonine, le tryptophane, la tyrosine, la valine, ou les acides aminés non naturels tels que l'hydroxyproline, la norleucine, l'omithine, la citrulline, la cyclohexylalanine. - Disaccharides such as maltose, sucrose, or lactose
The amino acids may be chosen from natural amino acids such as alanine, arginine, asparagine, aspartic acid, cysteine, glutamine, glutamic acid, glycine, histidine, isoleucine, leucine, lysine, methionine, phenylalanine, proline, serine, threonine, tryptophan, tyrosine, valine, or non-natural amino acids such as hydroxyproline, norleucine, ornithine, citrulline, cyclohexylalanine.

Parmi les monomères commercialement disponibles utilisables dans le procédé de l'invention, on peut mentionner par exemple : Le Tris(hydroxy)méthyl acrylamidométhane, l'acrylate de sodium, l'hydroxyéthyl acrylate, le glucose

Figure img00130001

monoacrylate, le glucose-I-(N-méthyl)acrylamide, le glucose 2-acrylamide, le maltose 1- acrylamide, le monoacrylate de sorbitol. Among the commercially available monomers that can be used in the process of the invention, there may be mentioned, for example: Tris (hydroxy) methyl acrylamidomethane, sodium acrylate, hydroxyethyl acrylate, glucose
Figure img00130001

monoacrylate, glucose-I- (N-methyl) acrylamide, glucose 2-acrylamide, maltose-1-acrylamide, sorbitol monoacrylate.

Afin de modifier les capacités de rétention et de stabilisation du télomère il est possible d'utiliser dans la fabrication du télomère des agents de réticulation hydrosolubles tels que : le glucose-1,2-diacrylamide, le sorbitol diacrylate, le saccharose diacrylate, le saccharose di(éthylènediamine acrylamide), le kanamycin tétracrylamide, le kanamycin diacrylamide, ou d'autres sucres di ou polyfonctionnalisés par des acrylates ou des acrylamides. En règle générale tous les composés hydrophiles susceptibles de recevoir au moins deux groupements acrylate ou acrylamide peuvent être utilisés. C'est le cas par exemple du dérivé acrylate de tris (hydroxyméthyl) (composé C):

Figure img00130002
In order to modify the telomere retention and stabilization capacities, it is possible to use in the manufacture of the telomer water-soluble crosslinking agents such as: glucose-1,2-diacrylamide, sorbitol diacrylate, sucrose diacrylate, sucrose di (ethylenediamine acrylamide), kanamycin tetracrylamide, kanamycin diacrylamide, or other di or polyfunctionalized sugars by acrylates or acrylamides. As a rule, all the hydrophilic compounds capable of receiving at least two acrylate or acrylamide groups may be used. This is the case, for example, of the tris (hydroxymethyl) acrylate derivative (compound C):
Figure img00130002

Ces agents de réticulation sont utilisés dans des proportions allant de 1 à 5% en poids par rapport au poids du ou des monomères. These crosslinking agents are used in proportions ranging from 1 to 5% by weight relative to the weight of the monomer or monomers.

La taille du télomère est contrôlée en utilisant un ou plusieurs agents de transfert hydrophiles ou hydrophobes qui sont insérés dans la membrane ou la cavité aqueuse interne des vésicules tubulaires. L'agent de transfert de chaîne peut être hydrophile ou hydrophobe, de type thiol ou phosphite, il est préférentiellement radicalaire. Les agents de transfert de chaîne employés sont choisis parmi les thiols hydrophiles tels que l'acide thiol acétique, l'acide mercaptopropionique, le thioéthylene glycol...la  The size of the telomere is monitored using one or more hydrophilic or hydrophobic transfer agents that are inserted into the membrane or internal aqueous cavity of the tubular vesicles. The chain transfer agent may be hydrophilic or hydrophobic, thiol or phosphite type, it is preferably radical. The chain transfer agents employed are chosen from hydrophilic thiols such as thiol acetic acid, mercaptopropionic acid, thioethylene glycol, and the like.

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cystamine, la cystéine...ou les thiols hydrophobes tels que les alcane thiols de C2 à C30, comme par exemple le composé D (dérivé du cholestérol) qui est connu pour sa capacité à s'intégrer dans les membranes phospholipidiques.

Figure img00140001
cystamine, cysteine ... or hydrophobic thiols such as C2-C30 alkane thiols, for example compound D (cholesterol derivative) which is known for its ability to integrate into phospholipid membranes.
Figure img00140001

L'agent de transfert de chaîne peut encore être choisi parmi les thiols bicatenaires précédemment décrits. Les phosphites peuvent quant à eux être hydrophiles tels que le phosphite de diéthyle ou hydrophobes tels que les phosphites de dioctyle, didodécyle, dihexadécyle.  The chain transfer agent may be further selected from the previously described double-chain thiols. The phosphites can in turn be hydrophilic such as diethyl phosphite or hydrophobic such as dioctyl phosphites, didodecyl, dihexadecyl.

Afin d'éviter de désorganiser la membrane des vésicules tubulaires il est préférable que la structure hydrophobe de ces thiols hydrophobes se rapproche de celle des tensioactifs la constituant. Le motif commun de ces agents télogènes est avantageusement constitué d'un motif aminoglycérol sur lequel sont greffées des chaînes grasses par des liaisons carbamate suivant la formule (IV) :

Figure img00140002

(IV) dans laquelle R a la même signification que dans les formules (I) (II) et (III) ci-dessus. In order to avoid disorganizing the membrane of the tubular vesicles, it is preferable for the hydrophobic structure of these hydrophobic thiols to approach that of the surfactants constituting it. The common unit of these telogenic agents advantageously consists of an aminoglycerol unit on which fatty chains are grafted with carbamate bonds according to formula (IV):
Figure img00140002

(IV) wherein R has the same meaning as in formulas (I) (II) and (III) above.

Afin de moduler le degré de polymérisation il est possible de faire varier la proportion d'agent de transfert de chaîne incorporée dans la membrane par rapport à la quantité de monomères encapsulés. Cette proportion est toutefois limitée par la solubilité maximale de l'agent de transfert de chaîne dans la membrane lipidique dans le cas où l'agent de transfert de chaîne est hydrophobe. Le rapport de l'agent de transfert de chaîne/ tensioactif lipidique (I) varie préférentiellement de 1 à 10% en poids/poids. Le rapport agent de transfert de chaîne/ monomère varie de 0,1à 10 % en poids/poids.  In order to modulate the degree of polymerization it is possible to vary the proportion of chain transfer agent incorporated in the membrane with respect to the amount of encapsulated monomers. This proportion is however limited by the maximum solubility of the chain transfer agent in the lipid membrane in the case where the chain transfer agent is hydrophobic. The ratio of the chain transfer agent / lipid surfactant (I) preferably varies from 1 to 10% w / w. The ratio of chain transfer agent / monomer ranges from 0.1 to 10% w / w.

La polymérisation peut être initiée de façon connue par irradiation ultraviolette ou par des photoinitiateurs, par des couples d'initiateurs redox, par la chaleur ou par des initiateurs radicalaires thermiques et plus généralement par toutes les techniques  The polymerization can be initiated in a known manner by ultraviolet irradiation or by photoinitiators, by pairs of redox initiators, by heat or by free radical initiators and more generally by all techniques.

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classiques décrites dans la littérature (G. Odian, Principles of polymerization, 3. sup.rd Ed, Wiley, New York, 1991).  classics described in the literature (G. Odian, Principles of Polymerization, Ed. Ed., Wiley, New York, 1991).

A la fin de la polymérisation, la cavité aqueuse interne des vésicules tubulaires comporte un télomère hydrophile muni éventuellement d'une partie hydrophobe télogène intégrée dans le feuillet membranaire interne. La description physico-chimique de ces vésicules tubulaires stabilisées est donnée dans la partie expérimentale et leur capacité de rétention supérieure d'un soluté encapsulé et leur stabilité mécanique accrue sont démontrées.  At the end of the polymerization, the internal aqueous cavity of the tubular vesicles comprises a hydrophilic telomer optionally provided with a telogenic hydrophobic part integrated into the inner membrane sheet. The physicochemical description of these stabilized tubular vesicles is given in the experimental part and their superior retention capacity of an encapsulated solute and their enhanced mechanical stability are demonstrated.

Les applications visées incluent le transport de principes actifs, notamment de principes actifs thérapeutiques, la délivrance épidermique de substances cosmétiques, les agents de diagnostic médical. Notamment le transport d'actifs anticancéreux, de vaccins, de matériel génétique, d'enzymes, d'hormones, de vitamines, de sucres, de protéines et de peptides, de lipides, de molécules organiques et inorganiques.  Targeted applications include the transport of active ingredients, including therapeutic active ingredients, epidermal delivery of cosmetic substances, medical diagnostic agents. In particular, the transport of anticancer agents, vaccines, genetic material, enzymes, hormones, vitamins, sugars, proteins and peptides, lipids, organic and inorganic molecules.

Dans le cadre d'une utilisation vaccinale, les épitopes et peptides pourront être incorporés dans la matrice aqueuse interne ou exprimés à la surface des vésicules tubulaires par un système de liaison covalente afin d'améliorer la réponse immunitaire des épitopes.  In the context of vaccine use, the epitopes and peptides may be incorporated in the internal aqueous matrix or expressed on the surface of the tubular vesicles by a covalent binding system in order to improve the immune response of the epitopes.

La présente invention a donc en outre pour objet toute composition, notamment toute composition thérapeutique, de diagnostic ou cosmétique comprenant au moins un principe actif en association avec un liposome tel que décrit ci-dessus, et en particulier toute composition comprenant au moins un principe actif encapsulé dans un liposome ou vésicule tubulaire selon la présente invention.  The subject of the present invention is therefore any composition, in particular any therapeutic, diagnostic or cosmetic composition comprising at least one active principle in combination with a liposome as described above, and in particular any composition comprising at least one active principle. encapsulated in a liposome or tubular vesicle according to the present invention.

PARTIE EXPERIMENTALE
FIGURES :
La figure 1 illustre la cinétique de libération de la carboxyfluorescéine encapsulée dans des liposomes de phosphatidyl choline (+) et des vésicule tubulaires constitués du composé A1 (#) mesurée en spectrofluorimétrie. EXPERIMENTAL PART
FIGURES:
Figure 1 illustrates the release kinetics of carboxyfluorescein encapsulated in liposomes of phosphatidyl choline (+) and tubular vesicles consisting of compound A1 (#) measured in spectrofluorimetry.

La figure 2 représente le spectre infra rouge en phase liquide d'une solution du composé Al dans CCl4 à différentes concentrations (1.10-2 à 2,5.10-4M).  Figure 2 shows the liquid-phase infrared spectrum of a solution of compound Al in CCl4 at different concentrations (1.10-2 to 2.5 × 10 -4M).

La figure 3 représente la courbe de distribution en taille par volume des vésicules tubulaires, mesurée par microscopie électronique.  Figure 3 shows the size-by-volume distribution curve of the tubular vesicles as measured by electron microscopy.

La figure 4 est une photographie obtenue par microscopie électronique par transmission de phase après coloration négative à l'acétate d'uranyle 2% de vésicules tubulaires formées par dispersion du composé Al (2,5 mg/ml-1) dans l'eau.  Figure 4 is a photograph obtained by phase transmission electron microscopy after uranyl acetate 2% negative staining of tubular vesicles formed by dispersing the compound Al (2.5 mg / ml-1) in water.

La figure 5 est une photographie obtenue par microscopie électronique par transmission de phase après cryofracture d'un échantillon de vésicules tubulaires formées par dispersion du composé Al (2,5 mg.ml-1) dans l'eau.  FIG. 5 is a photograph obtained by phase-transmission electron microscopy after cryofracture of a sample of tubular vesicles formed by dispersing the compound Al (2.5 mg.ml-1) in water.

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La figure 6 est une photographie obtenue par microscopie électronique par transmission de phase après coloration négative à l'acétate d'uranyle 2% d'un échantillon de vésicules tubulaires formées par dispersion du composé de structure B (2,5 mg.ml-1) dans l'eau.  FIG. 6 is a photograph obtained by phase transmission electron microscopy after negative staining with 2% uranyl acetate of a sample of tubular vesicles formed by dispersing the compound of structure B (2.5 mg.ml-1 ) in water.

Exemple 1 : synthèse du dérivé Al
La synthèse du dérivé Al est résumée dans le schéma 1 # Acide trityl mercaptopropionique (1)
5 g d'acide mercaptopropionique (47,16 mmoles) sont dissous dans 15 mL de dichlorométhane fraîchement distillé. Une solution de chlorure de trityle (15,7 g, 56,6 mmoles) dans 10 mL de dichlorométhane est additionnée goutte à goutte. Le milieu réactionnel est maintenu à température ambiante pendant 3h. Le précipité formé est filtré et rincé abondamment avec de l'éther. On obtient après séchage le produit pur sous la forme d'une poudre blanche (15,6 g, Rdt : 95 %). Example 1 Synthesis of Al Derivative
The synthesis of Al derivative is summarized in Scheme 1 # trityl mercaptopropionic acid (1)
5 g of mercaptopropionic acid (47.16 mmol) are dissolved in 15 ml of freshly distilled dichloromethane. A solution of trityl chloride (15.7 g, 56.6 mmol) in 10 mL of dichloromethane is added dropwise. The reaction medium is maintained at ambient temperature for 3 hours. The precipitate formed is filtered and rinsed thoroughly with ether. After drying, the pure product is obtained in the form of a white powder (15.6 g, yield: 95%).

# rac-N-(2,3-Dihydroxy-propyl)-3-(tritylmercapto) propionamide (2)
2 g d'acide 3-(tritylmercapto) propanoique (5,75 mmol), 0,523 g d'aminopropane diol (1 éq) et 1,7 g de N-(Ethoxycarbonyl)-2-ethoxy-1,2-dihydroquinoline (EEDQ) (6,9 mmol, 1,2 éq) sont solubilisés dans 50 mL de dichlorométhane. Le milieu réactionnel est chauffé à reflux durant 16 heures. Le brut réactionnel est ensuite lavé avec une solution de bicarbonate de sodium saturée puis avec une solution d'acide chlorhydrique normale, saturée en chlorure de sodium avant d'être séché sur sulfate de sodium. Après filtration sur verre fritté, le produit est purifié par chromatographie sur gel de silice avec élution par un gradient d'acétate d'éthyle pur à acétate d'éthyle/méthanol 9 :1 (v :v)). Le produit pur est obtenu sous la forme d'une poudre blanche (2,12 g, Rdt : 87%). # rac-N- (2,3-Dihydroxypropyl) -3- (tritylmercapto) propionamide (2)
2 g of 3- (tritylmercapto) propanoic acid (5.75 mmol), 0.523 g of aminopropane diol (1 eq) and 1.7 g of N- (ethoxycarbonyl) -2-ethoxy-1,2-dihydroquinoline ( EEDQ) (6.9 mmol, 1.2 eq) are solubilized in 50 ml of dichloromethane. The reaction medium is refluxed for 16 hours. The reaction crude is then washed with saturated sodium bicarbonate solution and then with a standard hydrochloric acid solution, saturated with sodium chloride before being dried over sodium sulfate. After filtration on sintered glass, the product is purified by chromatography on silica gel with elution with a gradient of pure ethyl acetate / ethyl acetate / methanol 9: 1 (v: v)). The pure product is obtained in the form of a white powder (2.12 g, yield: 87%).

Le produit peut aussi être obtenu pur, avec un rendement identique, par cristallisation à température ambiante du brut réactionnel dans un mélange acétate d'éthyle/méthanol 8 :2 (v : v) en 8 jours.  The product can also be obtained pure, with identical yield, by crystallization at room temperature of the crude reaction product in a mixture of ethyl acetate / methanol 8: 2 (v: v) in 8 days.

RMN 1H(/CDCl3) : 8 (ppm) 7,40-7,25 (15H, m, aromatiques du trityle) ; 5,86 (1H, t, NH) ; 3,7 (1H, m, CHOH) ; 3,51 (2H, m, CH2OH) ; 3,31 (2H, m, CH2NH) ; 3,09 (2H, m, OH) ; 2,50 (2H, t, CH2S) ; 2,04 (2H, m, SCH2CH2CO).

Figure img00160001
1H NMR (/ CDCl 3): δ (ppm) 7.40-7.25 (15H, m, trityl aromatics); 5.86 (1H, t, NH); 3.7 (1H, m, CHOH); 3.51 (2H, m, CH 2 OH); 3.31 (2H, m, CH 2 NH); 3.09 (2H, m, OH); 2.50 (2H, t, CH 2 S); 2.04 (2H, m, SCH2CH2CO).
Figure img00160001

RMN 13 C(/CDC13) : 8 (ppm) 172,9 (CH2CONH) ; 144,6 (SCC phényl) ; 129,6 (Cpara phényl) ; 128,0 (Cortho phényl) ; 126,8 (Cméta phényl) ; 70,9 (CHOH) ; 66,9

Figure img00160002

(SÇPh3) ; 63,6 (CH20H) ; 42,1 (NHCH2CH) ; 35,3 (SCHZÇH2C0) ; 27,6 (ÇH2S). a Rac-2,3-di[N (heptadécyl}carbamoyloxy-propyl]-3-(tritylmercapto) propionamide (3) 13 C NMR (/ CDCl3): δ (ppm) 172.9 (CH2CONH); 144.6 (SCC phenyl); 129.6 (Cpara phenyl); 128.0 (Cortho phenyl); 126.8 (C, phenyl); 70.9 (CHOH); 66.9
Figure img00160002

(SJPh3); 63.6 (CH 2 OH); 42.1 (NHCH2CH); 35.3 (SCH 2 H 2 CO); 27.6 (CH2S). Rac-2,3-di [N (heptadecyl) carbamoyloxypropyl] -3- (tritylmercapto) propionamide (3)

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2 g de rac-N-(2,3-Dihydroxy-propyl)-3-(tritylmercapto) propionamide (4,75 mmol) et 2,8 g de 1-Isocyanato-heptadecane (9,97 mmol, 2,1 éq) sont solubilisés dans 50 mL de toluène fraîchement distillé, à température ambiante et sous bullage d'argon. Le milieu réactionnel est porté au reflux et une pointe de spatule de 1,4-diaza bicyclo-[2,2,2]-octane (DABCO) (cat. ) est ajoutée au mélange. Au bout de 6 heures, le brut est évaporé à sec et repris dans un minimum d'éther où le produit cristallise à température ambiante. Après filtration, le produit est obtenu pur sous la forme d'une poudre blanche (4,04 g, Rdt : %). 2 g of rac-N- (2,3-dihydroxypropyl) -3- (tritylmercapto) propionamide (4.75 mmol) and 2.8 g of 1-isocyanatoheptadecane (9.97 mmol, 2.1 eq. ) are solubilized in 50 mL of freshly distilled toluene, at room temperature and under argon bubbling. The reaction mixture is heated to reflux and a spatula tip of 1,4-diaza bicyclo [2,2,2] octane (DABCO) (cat.) Is added to the mixture. After 6 hours, the crude is evaporated to dryness and taken up in a minimum of ether, where the product crystallizes at room temperature. After filtration, the product is obtained pure in the form of a white powder (4.04 g, yield%).

RMN 'H (CDC13) : # (ppm) 7,47-7,23 (15H, m, aromatiques du trityle) ; 6,02 ( 1 H, t, NH) ; 4,95-4,74 (3H, m, CHO, CH20) ; 4,18 (2H, m, NH) ; 3,44 (2H, t,

Figure img00170001

CH2NH) ; 3,12 (4H, q, CH 2NH); 2,51 (2H, t, CH2S) ; 2,06 (2H, t, SCHZCH2C0) ; 1,49 (4H, m, NHCH2CH2) ; 1,28 (54H, m, CH2 chaînes) ; 0,91 (6H, t, CH3). 1 H NMR (CDCl 3): # (ppm) 7.47-7.23 (15H, m, trityl aromatics); 6.02 (1H, t, NH); 4.95-4.74 (3H, m, CHO, CH 2 O); 4.18 (2H, m, NH); 3.44 (2H, t,
Figure img00170001

CH2NH); 3.12 (4H, q, CH 2 NH); 2.51 (2H, t, CH 2 S); 2.06 (2H, t, SCH 2 CH 2 CO); 1.49 (4H, m, NHCH2CH2); 1.28 (54H, m, CH 2 chains); 0.91 (6H, t, CH 3).

RMN 13C (CDCl3) : # (ppm) 171,2 (CH2CONH) ; 156,1-155,9 (OCONH) ; 144,7 (SCC phényl) ; 129,6 (Cpara phényl) ; 127,9 (Cortho phényl) ; 126,7 (Cméta phényl); 71,2 (CHO); 66,8 (SCPh3) ; 63,4 (CH20); 41,2 (NCH2CH2); 40,0 (NHCH2CH) ; 35,5 (SCH2ÇH2CO) ; 31,9 (NCH2CH2) ; 29,9-29,3 (chaînes) ; 27,6 (CH2S) : 22,7 (CH2CH3) ; 14,1 (CH3)

Figure img00170002

#Rac-2,3 -di [7Y-(heptadécyl)carbamoyloxy-propyl] -3 -mercapto propionamide (4)
2 g du composé 3 (2,03 mmol) et 0,236 g de triéthylsilane (2,03 mmol, 1 éq) sont solubilisés dans un minimum de dichlorométhane et refroidis à 0 C par un bain de glace. Une solution à 10 % d'acide trifluoroacétique dans le dichlorométhane est ajoutée, à froid, goutte à goutte, par l'intermédiaire d'une ampoule à brome. Dès la fin de l'addition, le milieu est ramené à température ambiante et laissé sous agitation durant 3 heures. Après évaporation à sec, reprise dans le dichlorométhane et lavages à l'eau distillée saturée en chlorure de sodium puis avec une solution saturée en bicarbonate de sodium, le brut est évaporé à sec et repris dans l'acétate d'éthyle où il cristallise à froid. Le produit pur est récupéré sous la forme d'une poudre blanche (1,3 g, Rdt : 86 %). 13 C NMR (CDCl 3): # (ppm) 171.2 (CH 2 CONH); 156.1-155.9 (OCONH); 144.7 (SCC phenyl); 129.6 (Cpara phenyl); 127.9 (Cortho phenyl); 126.7 (C, phenyl); 71.2 (CHO); 66.8 (SCPh3); 63.4 (CH 2 O); 41.2 (NCH2CH2); 40.0 (NHCH2CH); 35.5 (SCH2CH2CO); 31.9 (NCH2CH2); 29.9-29.3 (chains); 27.6 (CH 2 S): 22.7 (CH 2 CH 3); 14.1 (CH3)
Figure img00170002

# Rac-2,3-di [7Y- (heptadecyl) carbamoyloxy-propyl] -3-mercapto propionamide (4)
2 g of compound 3 (2.03 mmol) and 0.236 g of triethylsilane (2.03 mmol, 1 eq) are solubilized in a minimum of dichloromethane and cooled to 0 ° C. by an ice bath. A 10% solution of trifluoroacetic acid in dichloromethane is added, cold, dropwise, via a dropping funnel. As soon as the addition is complete, the medium is brought to room temperature and left stirring for 3 hours. After evaporation to dryness, taken up in dichloromethane and washed with distilled water saturated with sodium chloride and then with saturated sodium bicarbonate solution, the crude product is evaporated to dryness and taken up in ethyl acetate, where it crystallizes at room temperature. cold. The pure product is recovered in the form of a white powder (1.3 g, yield: 86%).

RMN 'H (CDCI3) : # (ppm) 6,46 (1H, t, NH) ; 4,97-4,95 (3H, m, CHO, CH2O) ; 4,21 (2H, m, NH) ; 3,50 (2H, t, CH2NH) ; 3,16 (4H, q, CH2NH) ; 2,81 (2H, q, CH2S) ; 2,51 (2H, t, SCH2CH2CO) ; 1,64 (1H, t, SH) ;1,50 (4H, m, NHCH2CH2); 1,27 (54H, m, CH2 chaînes) ; 0,89 (6H, t, CH3).  1H NMR (CDCl3): # (ppm) 6.46 (1H, t, NH); 4.97-4.95 (3H, m, CHO, CH2O); 4.21 (2H, m, NH); 3.50 (2H, t, CH 2 NH); 3.16 (4H, q, CH 2 NH); 2.81 (2H, q, CH 2 S); 2.51 (2H, t, SCH2CH2CO); 1.64 (1H, t, SH); 1.50 (4H, m, NHCH2CH2); 1.27 (54H, m, CH 2 chains); 0.89 (6H, t, CH 3).

RMN 13C (CDC13) : # (ppm) 170,9 (CH2CONH); 156,1-156,0 (OCONH); 71,3 (CHO); 63,5 (CH20); 41,2 (NCH2CH2); 40,4 (NHCH2CH); 35,5 (SCH2CH2CO); 31,9 (NCH2CH2); 29,9-29,4 (chaînes); 22,7 (CH2CH3); 20,4 (CH2S) ; 14,1 (CH3).  13 C NMR (CDCl3): # (ppm) 170.9 (CH2CONH); 156.1-156.0 (OCONH); 71.3 (CHO); 63.5 (CH 2 O); 41.2 (NCH2CH2); 40.4 (NHCH2CH); 35.5 (SCH2CH2CO); 31.9 (NCH2CH2); 29.9-29.4 (chains); 22.7 (CH 2 CH 3); 20.4 (CH 2 S); 14.1 (CH3).

# Composé Al acétylé  # Acetylated Al compound

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0,5 g de composé 4 (0,67 mmol) et 1,01 g de THAM triacétylé (3,37 mmol, 5 éq) sont solubilisés dans 30 mL de triéthylamine fraîchement distillée. Le mélange est porté à 50 C sous bullage d'Argon durant 2 heures puis ramené à température ambiante et évaporé à sec. Le brut est repris dans l'acétate d'éthyle pour être lavé avec une solution aqueuse normale d'acide chlorhydrique puis avec une solution aqueuse saturée en bicarbonate de sodium. Le produit est ensuite purifié par chromatographie sur gel de silice sur colonne éluée à l'acétate d'éthyle pur. Après évaporation et séchage, le produit est obtenu pur sous la forme d'une poudre blanche (0,33 g, Rdt : %). 0.5 g of compound 4 (0.67 mmol) and 1.01 g of triacetyl THAM (3.37 mmol, 5 eq) are solubilized in 30 ml of freshly distilled triethylamine. The mixture is heated to 50 ° C. under argon bubbling for 2 hours then cooled to room temperature and evaporated to dryness. The crude is taken up in ethyl acetate to be washed with a normal aqueous solution of hydrochloric acid and then with a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate. The product is then purified by chromatography on silica gel on a column eluted with pure ethyl acetate. After evaporation and drying, the product is obtained pure in the form of a white powder (0.33 g, yield%).

RMN 'H(/CDC13): # (ppm) 6,48 (1H, t, CONHCH2) ; 6,37 (1H, s, CONHC) ; 5,05-4,96 (3H, m, CHO, CH2O) ; 4,45 (6H, s, CH20) ; 4,22 (2H, m, NH) ; (2H, t, CH2NH) ; ' 3,17 (4H, q, CH2NH) ; 2,81 (2H, q, CH2S) ; 2,49 (4H, t, SCH2CH2CO) ; 2,10 (9H, s, CH3) ; 1,44 (4H, m, NHCH2CH2) ; 1,27 (54H, m, CH2 chaînes) ; 0,90 (6H, t, CH3).

Figure img00180001
1H NMR (CDCl3): # (ppm) 6.48 (1H, t, CONHCH2); 6.37 (1H, s, CONHC); 5.05-4.96 (3H, m, CHO, CH2O); 4.45 (6H, s, CH 2 O); 4.22 (2H, m, NH); (2H, t, CH 2 NH); 3.17 (4H, q, CH 2 NH); 2.81 (2H, q, CH 2 S); 2.49 (4H, t, SCH2CH2CO); 2.10 (9H, s, CH3); 1.44 (4H, m, NHCH2CH2); 1.27 (54H, m, CH 2 chains); 0.90 (6H, t, CH 3).
Figure img00180001

RMN 13 C(/CDC13) : 8 (ppm) 171,7-171,5 (CH2CONH) ; 170,6 (OCO); 156,2-156,0 (OCONH); 71,2 (CHO); 63,6 (CH20); 62,5 (ÇH20) ; 41,2 (NCH2CH2); 40,2 (NHCH2CH); 37,1-36,6 (SCH2CH2CO); 31,9 (NCH2CH2); 29,8-29,3 (chaînes); 26,8 (CH3); 22,6 (CH2CH3) ; 20,8 (CH2S) ; 14,1 (CH3). 13 C NMR (/ CDCl3): δ (ppm) 171.7-171.5 (CH2CONH); 170.6 (OCO); 156.2-156.0 (OCONH); 71.2 (CHO); 63.6 (CH 2 O); 62.5 (CH 2 O); 41.2 (NCH2CH2); 40.2 (NHCH2CH); 37.1-36.6 (SCH2CH2CO); 31.9 (NCH2CH2); 29.8-29.3 (chains); 26.8 (CH3); 22.6 (CH 2 CH 3); 20.8 (CH 2 S); 14.1 (CH3).

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Figure img00190001
Figure img00190001

Schéma 1 : synthèse du dérivé Al # Composé Al
0,3 g de dérivé acétylé (0,28 mmol) sont solubilisés dans un minimum de méthanol puis une pointe de spatule de méthylate de sodium (cat. ) est ajoutée. Le mélange est laissé sous agitation à température ambiante durant 30 minutes en maintenant le pH entre 8 et 9 par ajout de méthylate de sodium si nécessaire. Le milieu réactionnel est ensuite neutralisé par ajout de quelques gouttes d'une solution aqueuse normale d'acide Scheme 1: Synthesis of the derivative Al # Compound Al
0.3 g of acetylated derivative (0.28 mmol) are solubilized in a minimum of methanol and then a spatula tip of sodium methoxide (cat.) Is added. The mixture is stirred at room temperature for 30 minutes maintaining the pH between 8 and 9 by adding sodium methoxide if necessary. The reaction medium is then neutralized by adding a few drops of a normal aqueous solution of acid

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chlorhydrique. Après évaporation à sec, le brut réactionnel est purifié par chromatographie sur gel de silice éluée avec un mélange acétate d'éthyle/méthanol 95 :5 Le produit est obtenu pur sous la forme d'une poudre blanche (0,233 g, Rdt : 88%). Pf : 129 C.  hydrochloric. After evaporation to dryness, the crude reaction product is purified by chromatography on silica gel eluted with a 95: 5 ethyl acetate / methanol mixture. The product is obtained pure in the form of a white powder (0.233 g, yield: 88% ). Mp: 129 C.

RMN 1H(CDCl3) : # (ppm) 7,00 (1H, s, CONHC) ; 6,72 (1H, t, CONHCH2) ; 5,00 (3H, m, CHO, CH2O) ; 4,47 (3H, m, OH x3) ; 4,44 (6H, s, CH20 x3) ; 4,19 (2H, m, NH x2) ; 3,48 (2H, t, CH2NH) ; 3,16 (4H, q, CH2NH x2) ; 2,85 (2H, q, CH2S) ; 2,65-2,50 (4H, t, SCH2CH2CO x2) ; 1,44 (4H, m, NHCH2CH2 x2) ; 1,28 (54H, m, CH2 chaînes) ; 0,91 (6H, t, CH3 x2).  1 H NMR (CDCl 3): # (ppm) 7.00 (1H, s, CONHC); 6.72 (1H, t, CONHCH2); 5.00 (3H, m, CHO, CH 2 O); 4.47 (3H, m, OH x3); 4.44 (6H, s, CH 2 O 3); 4.19 (2H, m, NH 2); 3.48 (2H, t, CH 2 NH); 3.16 (4H, q, CH2NH x2); 2.85 (2H, q, CH 2 S); 2.65-2.50 (4H, t, SCH2CH2CO x2); 1.44 (4H, m, NHCH2CH2 x2); 1.28 (54H, m, CH 2 chains); 0.91 (6H, t, CH3 x2).

RMN 13C(CDC13) : # (ppm) 171,1 (CH2CONH); 156,2-156,0 (OCONH); 71,2 (CHO) ; 63,6 (CH20); 61,0 (CH20H); 41,2 (NCH2CH2); 40,2 (NHCH2CH); 37,1-36,6 (SCH2CH2CO); 31,9 (NCH2CH2); 29,9-29,3 (chaînes) ; 22,6 (CH2CH3); 20,41 (CH2S); 14,1 (ÇH3).  13 C NMR (CDCl3): # (ppm) 171.1 (CH2CONH); 156.2-156.0 (OCONH); 71.2 (CHO); 63.6 (CH 2 O); 61.0 (CH 2 OH); 41.2 (NCH2CH2); 40.2 (NHCH2CH); 37.1-36.6 (SCH2CH2CO); 31.9 (NCH2CH2); 29.9-29.3 (chains); 22.6 (CH 2 CH 3); 20.41 (CH 2 S); 14.1 (CH3).

Exemple 2 : Synthèse de l'agent de réticulation C : l'acide 2acryloylamino-3-hydroxy-2-hydroxyméthyl-propyl ester acrylique

Figure img00200001

# Acide 5-acryloylamino-2,2-diméthyl-[1,3]-dioxan-5-yl méthyl ester acrylique
1 g (4,65 mmol) de THAM isopropylidène est solubilisé dans un minimum de dichlorométhane. Le pH est ajusté et maintenu à 9 par ajout de quelques gouttes de triéthylamine puis une solution contenant 0,378 mL de chlorure d'acryloyle (4,65 mmol, 1 éq. ) dans 4 mL de dichlorométhane est additionnée goutte à goutte. La réaction est suivie en CCM (acétate d'éthyle/ cyclohexane 7 :3) avec la disparition du THAM isopropylidène (Rf: 0,3). Le milieu est ensuite neutralisé par ajout d'acide formique, évaporé à sec et purifié par chromatographie sur gel de silice à l'aide d'un gradient d'élution acétate d'éthyle/cyclohexane 7 :3 à 5 :5. produit pur est obtenu sous la forme d'une huile jaune (1,1 g, Rdt : 87 %). EXAMPLE 2 Synthesis of the Crosslinking Agent C 2 Acryloylamino-3-hydroxy-2-hydroxymethylpropyl Acrylic Ester
Figure img00200001

# 5-acryloylamino-2,2-dimethyl- [1,3] -dioxan-5-yl methyl ester acrylic acid
1 g (4.65 mmol) of THAM isopropylidene is solubilized in a minimum of dichloromethane. The pH is adjusted and maintained at 9 by adding a few drops of triethylamine and then a solution containing 0.378 ml of acryloyl chloride (4.65 mmol, 1 eq.) In 4 ml of dichloromethane is added dropwise. The reaction is monitored by TLC (ethyl acetate / cyclohexane 7: 3) with the disappearance of THAM isopropylidene (Rf: 0.3). The medium is then neutralized by addition of formic acid, evaporated to dryness and purified by chromatography on silica gel using an ethyl acetate / cyclohexane elution gradient of 7: 3 to 5: 5. Pure product is obtained in the form of a yellow oil (1.1 g, yield: 87%).

RMN 'H (CDC13): # (ppm) 6,50 (m, 1H, CHCONH), 6. 43 (d, 1H, CH2b ester acrylique), 6. 30 (s, 1H, NH), 6. 22 (d, 1H, CH2bacrylamide), 6. 14 (d, 1H, CHCOO), 5. 93 (d, 1H, CH2aester acrylique), 5. 65 (d, 1H, CH2a acrylamide), 4. 62 (s, 2H, CH20CO), 4. 42 (d, 2H, CH20), 3. 80 (d, 2H, CH20), 1.49 (d, 6H, CH3x2)
RMN 13C(CDCl3) : # (ppm) 1 H NMR (CDCl3): # (ppm) 6.50 (m, 1H, CHCONH), 6. 43 (d, 1H, CH2b acrylic ester), 6. (s, 1H, NH), 6. 22 ( d, 1H, CH 2 -acrylamide), 6. 14 (d, 1H, CHCOO), 5. 93 (d, 1H, CH 2 acrylic ester), 5. 65 (d, 1H, CH 2a acrylamide), 4.62 (s, 2H, CH 2 OCO), 4.42 (d, 2H, CH 2 O), 3.80 (d, 2H, CH 2 O), 1.49 (d, 6H, CH 3 x 2)
13C-NMR (CDCl3): # (ppm)

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# Acide 2-acryloylamino-3-hydroxy-2-hydroxyméthyl-propyl ester acrylique
1,1 g (4,08 mmol) d'acide 5-acryloylamino-2,2-diméthyl-[1,3]-dioxan-5- yl méthyl ester acrylique et 5,45 g de Montmorillonite K10 sont mélangé dans du dichlorométhane et laissés sous agitation à température ambiante durant 4 jours. Ce mélange est ensuite filtré sur célite et lavé au méthanol. Le gâteau de célite est repris plusieurs fois dans le méthanol sous forte agitation avant d'être à nouveau filtré. Après évaporation à sec, le produit est obtenu pur sous la forme d'une huile jaune (0,766 g, Rdt : 82 %). # 2-acryloylamino-3-hydroxy-2-hydroxymethyl-propyl acrylic acid
1.1 g (4.08 mmol) of 5-acryloylamino-2,2-dimethyl- [1,3] -dioxan-5-yl methyl ester acrylic acid and 5.45 g of Montmorillonite K10 are mixed in dichloromethane and left stirring at room temperature for 4 days. This mixture is then filtered on celite and washed with methanol. The celite cake is taken up several times in methanol with vigorous stirring before being filtered again. After evaporation to dryness, the product is obtained pure in the form of a yellow oil (0.766 g, yield: 82%).

RMN 1H (CDC13) : # (ppm) 6. 73 (s, 1H, NH), 6. 42 (d, 1H, CH2b ester acrylique), 6.21 (d, 1H, CH2bacrylamide), 6. 14 (d, 1H, CHCOO), 5. 88 (d, 1H, CH2a ester acrylique), 5.69 (d, 1H, CH2aacrylamide), 4. 70 (m, 2H, OH x2), 4. 39 (d, 2H, CH20), 3. 70 (dd, 4H, CH20H).  1H NMR (CDCl3): # (ppm) 6. 73 (s, 1H, NH), 6. 42 (d, 1H, CH2b acrylic ester), 6.21 (d, 1H, CH2bacrylamide), 6. 14 (d, 1H , CHCOO), 5.88 (d, 1H, CH 2 an acrylic ester), 5.69 (d, 1H, CH 2 -acrylamide), 4.70 (m, 2H, OH x 2), 4.39 (d, 2H, CH 2 O), 3 70 (dd, 4H, CH20H).

RMN 13C (CDC13) : # (ppm)
Exemple 3: Synthèse du dérivé D, le 3-mercaptopropanoate de

Figure img00210001

cholestéryle !j composé D omposé # Acide 3-(tritylmercapto) propanoique
17,34 g (62,3 mmol, 1,1 éq. ) de chlorure de triphénylméthyle sont dissous dans un minimum de dichlorométhane et additionnés goutte à goutte à une solution contenant 6 g (56,6 mmol) d'acide 3-mercapto propanoique dilué dans 30 mL de dichlorométhane. Le mélange est placé sous agitation à température ambiante durant 16 heures. Le produit cristallise directement dans le milieu réactionnel. Après filtration et lavage des cristaux à l'éther, le produit est obtenu pur sous la forme d'une poudre blanche (18,51 g, Rdt : %). Pf : 203-204 C. 13C-NMR (CDCl3): # (ppm)
Example 3 Synthesis of Derivative D, 3-mercaptopropanoate
Figure img00210001

cholesteryl compound D compound # 3- (tritylmercapto) propanoic acid
17.34 g (62.3 mmol, 1.1 eq) of triphenylmethyl chloride are dissolved in a minimum of dichloromethane and added dropwise to a solution containing 6 g (56.6 mmol) of 3-mercapto acid. propane diluted in 30 mL of dichloromethane. The mixture is stirred at room temperature for 16 hours. The product crystallizes directly in the reaction medium. After filtration and washing of the crystals with ether, the product is obtained pure in the form of a white powder (18.51 g, yield%). Mp: 203-204C.

RMN 'H(DMSO) : # (ppm) 7,3 (m, 15H, aromatiques trityle), 2,2 (m, 4H, CH2S, CH2CO)
RMN 13C(DMSO) : # (ppm) 173 (COOH), 144. 2 et 126,4-129 (aromatiques du trityle), 66 (Ph3CS), 33 (CH2S), 26,5 (CH2CO) # 3-(tritylmercapto)propanoate de cholestéryle
5 g (14,3 mmol) d'acide mercaptopropanoïque trityle, 1,74 g (14,3 mmol, 1 éq. ) de N-diméthylaminopyridine et 3,57 g (17,16 mmol, 1,2 éq. ) de 1 H NMR (DMSO): # (ppm) 7.3 (m, 15H, trityl aromatics), 2.2 (m, 4H, CH 2 S, CH 2 CO)
13 C NMR (DMSO): # (ppm) 173 (COOH), 144. 2 and 126.4-129 (trityl aromatics), 66 (Ph3CS), 33 (CH2S), 26.5 (CH2CO) # 3- ( tritylmercapto) cholesteryl propanoate
5 g (14.3 mmol) of trityl mercaptopropanoic acid, 1.74 g (14.3 mmol, 1 eq) of N-dimethylaminopyridine and 3.57 g (17.16 mmol, 1.2 eq) of

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dicyclohexylcarbodiimide sont dissous dans 50 mL de dichlorométhane. 5,54 g (14,3 mmol, 1 éq. ) de cholestérol sont additionnés au mélange à température ambiante. La disparition de l'acide permet de suivre le déroulement de la réaction en CCM (hexane/acétate d'éthyle 8 :2). bout de 90 minutes, l'agitation est stoppée, le précipité formé est filtré et lavé à l'éther. Le produit est obtenu pur sous la forme d'une poudre blanche après évaporation du filtrat et recristallisation dans un mélange éther/méthanol (10,12 g, Rdt : %). Pf : 132 C. [a]D20 : -14,9 (c, 1, CH2C12).  dicyclohexylcarbodiimide are dissolved in 50 ml of dichloromethane. 5.54 g (14.3 mmol, 1 eq) of cholesterol are added to the mixture at room temperature. The disappearance of the acid makes it possible to follow the progress of the reaction by TLC (hexane / ethyl acetate 8: 2). After 90 minutes, the stirring is stopped, the precipitate formed is filtered off and washed with ether. The product is obtained pure in the form of a white powder after evaporation of the filtrate and recrystallization from an ether / methanol mixture (10.12 g, yield%). Mp: 132C. [A] D20: -14.9 (c, 1, CH2Cl2).

RMN 'H(/DMSO) : 8 (ppm) 7,2 (m, 15H, aromatiques trityle), 5,3 (m, 1H, Ha cholestérol), 4,5 (m, 1H, CHbOCO cholestérol), 2,35 (m, 2H, CH2S), 2,2 (m, 2H, CH2COO), 2,18 (m, 2H, CHc2 cholestérol), 0,93 (m, 3H, CHd3 cholestérol), 0,84 (m, 3H, CHe3 cholestérol), 0,79 (m, 6H, CHf3, CHg3 cholestérol), 0,60 (s, 3H, CHh3 cholestérol).  1 H NMR (DMSO): δ (ppm) 7.2 (m, 15H, trityl aromatics), 5.3 (m, 1H, Ha cholesterol), 4.5 (m, 1H, CHbOCO cholesterol), 2, (M, 2H, CH2S), 2.2 (m, 2H, CH2COO), 2.18 (m, 2H, CH2 cholesterol), 0.93 (m, 3H, CH3 cholesterol), 0.84 (m, 3H, CH3 cholesterol), 0.79 (m, 6H, CHf3, CH3 cholesterol), 0.60 (s, 3H, CHh3 cholesterol).

RMN 13C(/DMSO) : # (ppm) 170,8 (CH2COO), 144,3 (Cs cholestérol), 139,2 ; 126,2-129,2 (aromatiques du trityle), 122,9 (C6 cholestérol), 74,5 (C3 cholestérol), 64,2 (Ph3CS), 56,7 (C14 cholestérol), 56,2-11,9 (pics caractéristiques du cholestérol).  13 C NMR (DMSO): # (ppm) 170.8 (CH2COO), 144.3 (Cs) cholesterol, 139.2; 126.2-129.2 (trityl aromatics), 122.9 (C6 cholesterol), 74.5 (C3 cholesterol), 64.2 (Ph3CS), 56.7 (C14 cholesterol), 56.2-11, 9 (characteristic peaks of cholesterol).

# 3- Mercaptopropanoate de cholestéryle
5 g (6,98 mmol) de 3-(tritylmercapto)propanoate de cholestéryle et 0,8 g (6,98 mmol, 1 éq. ) de triéthylsilane sont dissous dans un minimum de dichlorométhane et refroidis à 0 C par un bain de glace. 220 mL d'un mélange de dichlorométhane et d'acide trifluoroacétique (10:1 v :v) sont ajoutés goutte à goutte dans le milieu réactionnel. La réaction est suivie en CCM (cyclohexane/acétate d'éthyle 9 :1). fin de réaction, le mélange est concentré sous vide à 40 C. Le brut est repris dans l'éther avant d'être lavé avec une solution aqueuse normale de bicarbonate de sodium et recristallisé dans un mélange éther/méthanol. Le produit est obtenu pur sous la forme de cristaux blancs (3,15 g, Rdt : 95 %). Pf : 69-70 C. [[alpha]]D20 : -20,5 (c, 1, CH2Cl2). # 3- Cholesteryl mercaptopropanoate
5 g (6.98 mmol) of cholesteryl 3- (tritylmercapto) propanoate and 0.8 g (6.98 mmol, 1 eq) of triethylsilane are dissolved in a minimum of dichloromethane and cooled to 0.degree. ice cream. 220 ml of a mixture of dichloromethane and trifluoroacetic acid (10: 1 v: v) are added dropwise to the reaction medium. The reaction is monitored by TLC (cyclohexane / ethyl acetate 9: 1). at the end of the reaction, the mixture is concentrated under vacuum at 40 ° C. The crude product is taken up in ether and then washed with a normal aqueous solution of sodium bicarbonate and recrystallized from an ether / methanol mixture. The product is obtained pure in the form of white crystals (3.15 g, Yield: 95%). Mp: 69-70C [[alpha]] D20: -20.5 (c, 1, CH2Cl2).

RMN 'H(/DMSO) : 8 (ppm) 5,3 (m, 1H, Ha cholestérol), 4,6 (m, 1H, CHbOCO cholesterol), 2,67 (m, 2H, CH2SH), 2,53 (m, 2H, CH2COO), 2,27 (d, 2H, CHc2 cholestérol), 1,54 (tr., 1H, SH), 0,94 (m, 3H, CHd3 cholestérol), 0,80 (m, 3H, CHe3 cholestérol), 0,77 (m, 6H, CHf3, CHg3 cholestérol), 0,60 (s, 3H, CHh3 cholestérol).  1 H NMR (DMSO): δ (ppm) 5.3 (m, 1H, Ha cholesterol), 4.6 (m, 1H, CHbOCO cholesterol), 2.67 (m, 2H, CH 2 SH), 2.53. (m, 2H, CH 2 COO), 2.27 (d, 2H, CH 2 Cl 2), 1.54 (tr., 1H, SH), 0.94 (m, 3H, CH 3 cholesterol), 0.80 (m, 3H, CH3 cholesterol), 0.77 (m, 6H, CHf3, CH3 cholesterol), 0.60 (s, 3H, CH3 cholesterol).

RMN 13C(/DMSO) : # (ppm) 171,0 (CH2COO), 143,9 (Cs cholestérol), 122,9 (C6 cholestérol), 74,5 (C3 cholestérol), 56,8 (Ci4 cholestérol), 56,2-11,9 (pics caractéristiques du cholestérol) Exemple 4 : d'un télomère lipidique de ciblage E
Cette synthèse est illustrée par le schéma 2. 13 C NMR (DMSO): # (ppm) 171.0 (CH2COO), 143.9 (Cs) cholesterol, 122.9 (C6 cholesterol), 74.5 (C3 cholesterol), 56.8 (C14 cholesterol), 56.2-11.9 (characteristic cholesterol peaks) Example 4: Lipid targeting telomere E
This synthesis is illustrated in Figure 2.

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Figure img00230001
Figure img00230001

# Ester méthylique de l'acide 5-Acryloylamino-2-tertbutyloxycarbonylamino-pentanoique (5) 4,00 g du sel d'acétate de la L- (Boc)LysOMe mmol - 1 équiv. ) sont dissous dans 30 mL de dichlorométhane anhydre. Le pH de la solution est amené à 9 par addition de DIEA puis refroidi à 0 C. 1,87 mL de chlorure d'acryloyle (23 mmol - 1,85 équiv. ) sont ajoutés goutte à goutte au mélange réactionnel en maintenant le pH de la solution basique par addition de DIEA. Après 24 heures d'agitation, le milieu est lavé à l'eau puis la phase organique est séchée sur Na2SO4. Les solvants sont évaporés sous pression réduite et la purification par chromatographie flash sur gel de silice (éluant : acétate d'éthyle/cyclohexane 8 :2) permet d'obtenir le composé 5 (3,67 g, Rdt : %) sous forme d'une huile incolore translucide. [[alpha]]D = + 7,5 (c, 1, CHC13).  # 5-Acryloylamino-2-tert-butyloxycarbonylamino-pentanoic acid methyl ester (5) 4.00 g of the acetate salt of L- (Boc) LysOMe mmol-1 equiv. ) are dissolved in 30 mL of anhydrous dichloromethane. The pH of the solution is brought to 9 by addition of DIEA and then cooled to 0 C. 1.87 mL of acryloyl chloride (23 mmol - 1.85 equiv) are added dropwise to the reaction mixture while maintaining the pH of the basic solution by addition of DIEA. After stirring for 24 hours, the medium is washed with water and then the organic phase is dried over Na 2 SO 4. The solvents are evaporated off under reduced pressure and the purification by flash chromatography on silica gel (eluent: ethyl acetate / cyclohexane 8: 2) makes it possible to obtain compound 5 (3.67 g, yield:%) in the form of a translucent colorless oil. [[alpha]] D = + 7.5 (c, 1, CHCl3).

RMN 1H (250 MHz, DMSO-d6) : 8 8. 08 (1H, t, J = 5. 6 Hz, NH-CO-O),

Figure img00230002

7.22 ( 1 H, d, J = 7.7 Hz, NH-CO), 6.20 ( 1 H, dd, J eis = 9.7 Hz et J trans = 17.1 Hz, Hc), 6.05 ( 1 H, dd, J gem = 2. 7 Hz et J trans = 17. 1 Hz, Hb), 5.56 ( 1 H, dd, J gem = 2. 7 Hz et J cis = 9. 7 Hz, Ha), 3. 92 (1H, m, CH), 3. 62 (3H, s, CH3-O), 3. 10 (2H, q, J = 6. 3 Hz, CH2-NH), 1. 60 (6H, m, CH2 de la lysine), 1. 38 (9H, s, CH3 du Boc). 1 H NMR (250 MHz, DMSO-d 6): 8.88 (1H, t, J = 5. 6 Hz, NH-CO-O),
Figure img00230002

7.22 (1H, d, J = 7.7 Hz, NH-CO), 6.20 (1H, dd, J eis = 9.7 Hz and J trans = 17.1 Hz, Hc), 6.05 (1H, dd, J gem = 2 7 Hz and J trans = 17. 1 Hz, Hb), 5.56 (1H, dd, J gem = 2.7 Hz and J cis = 9. 7 Hz, Ha), 3.92 (1H, m, CH ), 3.62 (3H, s, CH3-O), 3. (2H, q, J = 6.3Hz, CH2-NH), 1.60 (6H, m, CH2 of lysine), 1 38 (9H, s, CH3 from Boc).

RMN 13C (62. 86 MHz, CDCI3) : 8 169. 3, 161. 3 (CO), 136.8 (CIV arom), 130. 7 (CH arom. ), 128.6 (CIV arom), 128. 6 (CH arom. ), 125.5 (CH=N(O)), 72. 2 (CIV), 28. 4 (CH2-CO), 25. 7 (CH3 du tert-butyl).  13 C NMR (62. 86 MHz, CDCl3): 8169. 3, 161. 3 (CO), 136.8 (CIV arom), 130.7 (CH arom.), 128.6 (CIV arom), 128. 6 (CH arom) 125.5 (CH = N (O)), 72.2 (CIV), 28.4 (CH2-CO), 25.7 (tert-butyl CH3).

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Figure img00240001

Schéma de synthèse du télomère lipidique de ciblage E
Figure img00240001

Lipid telomere synthesis scheme of targeting E

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# Tris-(acétoxyméthyl) acrylamidométhane (6)
100 mL d'un mélange anhydride acétique/pyridine 1 : 1 placé à froid (eau + glace) dans un ballon de 250 mL est agité pendant 10 minutes. Après ajout du Tris (hydroxyméthyl) acrylamidométhane (11,5 g, 66 mmoles), le milieu réactionnel est ramené à température ambiante, puis laissé sous agitation durant 12h00. Le brut est versé dans 200 mL d'eau glacée et la phase aqueuse est extraite avec 200 mL de dichlorométhane. La phase organique est lavée avec une solution aqueuse d'HCl IN (100 mL) puis une solution aqueuse de NaHC03 sat (100 mL), séchée sur sulfate de sodium puis concentrée sous pression réduite. Deux cristallisations successives dans un mélange AcOEt/hexane permettent d'obtenir le composé 6 sous la forme d'aiguilles blanches (17 g, 90 %). Pf : 96- 97 C. # Tris (acetoxymethyl) acrylamidomethane (6)
100 mL of a cold 1: 1 acetic anhydride / pyridine mixture (water + ice) in a 250 mL flask is stirred for 10 minutes. After adding Tris (hydroxymethyl) acrylamidomethane (11.5 g, 66 mmol), the reaction medium is brought to ambient temperature and then left stirring for 12 hours. The crude is poured into 200 ml of ice water and the aqueous phase is extracted with 200 ml of dichloromethane. The organic phase is washed with an aqueous solution of 1N HCl (100 mL) then an aqueous solution of sat. NaHCO 3 (100 mL), dried over sodium sulfate and then concentrated under reduced pressure. Two successive crystallizations in a mixture AcOEt / hexane make it possible to obtain compound 6 in the form of white needles (17 g, 90%). Mp: 96-97C.

RMN 'H (250 MHz, CDC13) : 8 5. 9-6.2 (1H, dd, CH2=CH; 2H, 2dd, CH2=CH ; 1H, s, NH), 4.48 (6H, s, CH2-OAc), 2. 09 (9H, s, CH3CO).  1 H NMR (250 MHz, CDCl 3): 5.9-6.2 (1H, dd, CH 2 = CH; 2H, 2dd, CH 2 = CH; 1H, s, NH), 4.48 (6H, s, CH 2 -OAc) , 2. 09 (9H, s, CH3CO).

RMN 13C (62. 86 MHz, CDC13) : # 170. 7 (CH3ÇO), 165. 6 (NHCO), 130. 9 (CH2=CH), 127. 1 (CH2=ÇH), 62. 7 (CH20), 58. 2 (C-NH), 20.7 (CH3CO).  13 C NMR (62. 86 MHz, CDCl3): # 170.7 (CH3 OC), 165.6 (NHCO), 130.9 (CH2 = CH), 127. 1 (CH2 = CH), 62.7 (CH2O) , 58. 2 (C-NH), 20.7 (CH3CO).

# Synthèse du lipide télomèrisé E
Dans un ballon bicol de 100 mL surmonté d'un réfrigérant, sont dissous 0,767 g de monomère 6 ( 2,55 mmoles, 12 éq) et 0,2 g de monomère 5 (0,63 mmole, 3 éq) dans 20 mL d'acétonitrile fraîchement distillé. Le milieu réactionnel est dégazé sous argon et porté à reflux. 7 mg d'AIBN (4,29.10-2 mmole, 0,2 éq) et 0,157 g de thiol 4 (0,21 mmole, 1 éq) dissous dans 5 mL d'acétonitrile fraîchement distillé et dégazé sont additionnés. La réaction est maintenue au reflux pendant 4h jusqu'à consommation totale des monomères (détectée par CCM). Le milieu réactionnel est concentré sous pression réduite et le brut réactionnel est filtré sur colonne sephadex (MeOH/CH2Cl2 1 :1). Le produit est ensuite dissous dans 100 mL de méthanol en présence d'une quantité catalytique de méthylate de sodium. Après 5h d'agitation le milieu réactionnel est neutralisé par addition de résine acide IRC 50. La résine est éliminée par filtration et le solvant éliminé sous pression réduite. Le produit est ensuite mis en réaction à froid dans un mélange acide TFA/CH2CI2 (20%) pendant 3h. # Synthesis of telomereized lipid E
0.767 g of monomer 6 (2.55 mmol, 12 eq) and 0.2 g of monomer (0.63 mmol, 3 eq) are dissolved in a 100 ml two-neck flask surmounted by a condenser. freshly distilled acetonitrile. The reaction medium is degassed under argon and brought to reflux. 7 mg of AIBN (4.29 × 10 -2 mmol, 0.2 eq) and 0.157 g of thiol 4 (0.21 mmol, 1 eq) dissolved in 5 mL of freshly distilled and degassed acetonitrile are added. The reaction is kept under reflux for 4 h until total consumption of the monomers (detected by TLC). The reaction medium is concentrated under reduced pressure and the crude reaction product is filtered through a Sephadex column (MeOH / CH 2 Cl 2 1: 1). The product is then dissolved in 100 mL of methanol in the presence of a catalytic amount of sodium methoxide. After stirring for 5 hours, the reaction medium is neutralized by addition of IRC acid resin 50. The resin is removed by filtration and the solvent is removed under reduced pressure. The product is then cold-reacted in a TFA / CH 2 Cl 2 (20%) acid mixture for 3 hours.

Le mileu réactionnel est concentré sous pression réduite. L'huile obtenue est reprise plusieurs fois dans de l'éther jusqu'à précipitation du télomère sous la forme d'une poudre blanche. Le produit est dissous dans l'eau et lyophilisé jusqu'à obtention du composé E sous la forme d'une poudre blanche.  The reaction medium is concentrated under reduced pressure. The oil obtained is taken up several times in ether until precipitation of the telomer in the form of a white powder. The product is dissolved in water and lyophilized until compound E is obtained in the form of a white powder.

Le degré de polymérisation moyen (DPn) et le rapport des concentration de chaque monomère dans la macromolécule (x et y) a été déterminé par RMN 1H en comparant les intégrations des signaux des méthyls des deux chaînes alkyle à 1,1 ppm à  The average degree of polymerization (DPn) and the ratio of the concentration of each monomer in the macromolecule (x and y) was determined by 1 H NMR by comparing the signal integrations of the methyls of the two alkyl chains at 1.1 ppm.

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celle des signaux du Tris (CH2OH) à 4,3 ppm et de la lysine (CH2NH) à 3,37 ppm. Nous avons pu déterminer les valeurs suivantes pour x et y : x:30ety:10

Figure img00260001

Exemple 5 : Synthèse d'un lipide de ciblage F 0 A N X S H H ! H T F N 1--- 0 0 # Acide 5-Acryloylamino-2-tert-butoxycarbonylamino-pentanoique 7
2 g de Boc Lysine (8,13 mmoles) sont dissous dans 10mL d'un mélange acétonitrile - soude 2N 1 : 1. Le milieu réactionnel est refroidi à 10 C . Le chlorure d'acryloyle (1,1 g, 12,19 mmoles) dissous dans 10 mL d'acétonitrile est additionné goutte à goutte. Le pH est maintenu à 8 par addition de soude 2N. A la fin de l'addition le milieu réactionnel est agité 2h à température ambiante puis acidifié avec une solution d'HCl 2N, extrait avec de l'acétate d'éthyle (3x20mL). La phase organique est séchée puis concentrée sous pression réduite. Le produit final est obtenu pur sous la forme d'une poudre blanche par recristallisation dans l'éthanol (1,9 g, 78%). that of the signals of Tris (CH2OH) at 4.3 ppm and lysine (CH2NH) at 3.37 ppm. We were able to determine the following values for x and y: x: 30ety: 10
Figure img00260001

Example 5 Synthesis of an targeting lipid F 0 ANXSHH! HTFN 1 --- 0 0 # 5-Acryloylamino-2-tert-butoxycarbonylamino-pentanoic acid 7
2 g of Boc Lysine (8.13 mmol) are dissolved in 10 ml of a 1N acetonitrile-2N sodium hydroxide mixture. The reaction medium is cooled to 10 ° C. The acryloyl chloride (1.1 g, 12.19 mmol) dissolved in 10 mL of acetonitrile is added dropwise. The pH is maintained at 8 by addition of 2N sodium hydroxide. At the end of the addition, the reaction medium is stirred for 2 hours at room temperature and then acidified with a 2N HCl solution and extracted with ethyl acetate (3 × 20 mL). The organic phase is dried and concentrated under reduced pressure. The final product is obtained pure in the form of a white powder by recrystallization from ethanol (1.9 g, 78%).

RMN 1H (250 MHz, DMSO-d6) : # 8. 02 (1H, t, NH-CO-O), 7. 18 (1H, d, J = 7. 4 Hz, NH-CO), 6.25 (1H, dd, J cis = 9. 4 Hz et J trans = 17.1 Hz, Hc), 6. 05 (1H, dd, J gem = 2. 7 Hz et J trans = 17. 1 Hz, Hb), 5.6 ( 1 H, dd, J gem = 2. 7 Hz et J cis = 9. 4 Hz, Ha), 3.92 (1H, m, CH), 3. 10 (2H, q, J = 6. 3 Hz, CH2-NH), 1. 60 (6H, m, CH2 de la lysine), 1.38 (9H, s, CH3 du Boc).  1 H NMR (250 MHz, DMSO-d 6): # 8.O 2 (1H, t, NH-CO-O), 7.18 (1H, d, J = 7.4 Hz, NH-CO), 6.25 (1H). , dd, J cis = 9.4 Hz and J trans = 17.1 Hz, Hc), 6. 05 (1H, dd, J gem = 2.7 Hz and J trans = 17. 1 Hz, Hb), 5.6 (1 H, dd, J gem = 2.7 Hz and J cis = 9.4 Hz, Ha), 3.92 (1H, m, CH), 3. 10 (2H, q, J = 6.3 Hz, CH2-NH ), 1. 60 (6H, m, CH 2 of lysine), 1.38 (9H, s, CH 3 of Boc).

RMN 13C (62. 86 MHz, DMSO-d6) : # 169. 3, 161. 3 (CO), 155. 8 (CO urethane), 130. 7 (CH2=), 128.6 (-CH=), 80. 5 (C tBu), 53. 7 (CH Lys), 40.3 (C#Lys), 33. 2 (CpLys), 29. 8 (C#Lys), 28. 4 (CH2-CO), 25. 7 (CH3 du tert-butyl).  13 C NMR (62. 86 MHz, DMSO-d6): # 169. 3, 161. 3 (CO), 155.8 (CO urethane), 130.7 (CH2 =), 128.6 (-CH =), 80. (C tBu), 53.7 (CH Lys), 40.3 (C # Lys), 33.2 (CpLys), 29.8 (C # Lys), 28.4 (CH2-CO), 25.7 ( Tert-butyl CH3).

# Acide 6-Acryloylamino-2-[bis-(2-carboxy-éthyl)-amino]-hexanoique 8
Dans un ballon de 50 mL, 1,9 g de composé 7 (6,33 mmoles) sont dissous dans 20 mL d'un mélange acide trifluoroacétique - dichlorométhane 1 :1. Après 2h d'agitation le solvant est évaporé sous pression réduite et l'huile obtenue est reprise plusieurs fois dans du chloroforme et évaporé jusqu'à obtention d'une poudre. Dans un ballon de 25 mL, 1,94 g d'acide bromoacétique (12,66 mmoles) sont dissous dans 7 mL de soude 2N. La solution est refroidie à 0 C dans un bain de glace et la poudre obtenue après # 6-Acryloylamino-2- [bis- (2-carboxy-ethyl) -amino] -hexanoic acid 8
In a 50 ml flask, 1.9 g of compound 7 (6.33 mmol) are dissolved in 20 ml of a 1: 1 mixture of trifluoroacetic acid and dichloromethane. After stirring for 2 hours, the solvent is evaporated off under reduced pressure and the oil obtained is taken up several times in chloroform and evaporated until a powder is obtained. In a 25 mL flask, 1.94 g of bromoacetic acid (12.66 mmol) are dissolved in 7 mL of 2N sodium hydroxide solution. The solution is cooled to 0 ° C. in an ice bath and the powder obtained after

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déprotection, dissoute dans 11 mL d'une solution aqueuse de soude 2N est additionnée goutte à goutte. Après 2h de réaction à température ambiante, une solution aqueuse d'HCI 2N est additionnée jusqu'à l'obtention d'un pH acide. Le produit précipite. Le précipité est filtré et essoré puis séché sous pression réduite. Le produit 8 est obtenu pur sous la forme d'une poudre blanche après recristallisation dans l'éthanol (1,6 g, 57%).  deprotection, dissolved in 11 mL of aqueous 2N sodium hydroxide solution is added dropwise. After 2 hours of reaction at ambient temperature, an aqueous solution of 2N HCl is added until an acidic pH is obtained. The product precipitates. The precipitate is filtered and drained and dried under reduced pressure. The product 8 is obtained pure in the form of a white powder after recrystallization from ethanol (1.6 g, 57%).

RMN'H (250 MHz, DMSO-d6) : ô 8. 02 (1H, t, NH-CO-O), 7. 18 (1H, d,

Figure img00270001

J = 7.4 Hz, NH-CO), 6.25 ( 1 H, dd, J CIS = 9.4 Hz et J trans = 17.1 Hz, He), 6.05 (li, dd, J gem = 2. 7 Hz et J trans =17.1 Hz, Hb), 5.6 ( 1 H, dd, J gem = 2. 7 Hz et J cis = 9. 4 Hz, Ha), 3. 5 (4H, s, N-CH2-COOH), 3. 3 (1H, t, J=7. 1 Hz, CH2-CH-N), 2. 9 (2H, m, CH2NH), 1-1. 5 (6H, m, CH2CH2CH2). 1 H NMR (250 MHz, DMSO-d 6): δ 8.O 2 (1H, t, NH-CO-O), 7. 18 (1H, d,
Figure img00270001

J = 7.4 Hz, NH-CO), 6.25 (1H, dd, J CIS = 9.4 Hz and J trans = 17.1 Hz, He), 6.05 (li, dd, J gem = 2.7 Hz and J trans = 17.1). Hz, Hb), 5.6 (1H, dd, J gem = 2.7 Hz and J cis = 9.4 Hz, Ha), 3.5 (4H, s, N-CH2-COOH), 3.3 ( 1H, t, J = 7.1 Hz, CH 2 -CH-N), 2.9 (2H, m, CH 2 NH), 1-1. (6H, m, CH 2 CH 2 CH 2).

RMN 13C (62. 86 MHz, DMSO-d6) : # 174.8, 173.6 (COOH), 168. 4 (CONH), 130.4 (CH2=), 128. 2 (-CH=), 64. 8 (CH Lys), 53.8 (N-CH2-COOH), 40. 3 (CELys), 30. 5 (CpLys), 29. 8 (C#Lys).  13 C NMR (62. 86 MHz, DMSO-d6): # 174.8, 173.6 (COOH), 168. (CONH), 130.4 (CH2 =), 128.2 (-CH =), 64.8 (CH Lys) , 53.8 (N-CH 2 -COOH), 40.3 (CELys), 30 (CpLys), 29.8 (C # Lys).

# Synthèse du lipide F
2,56 g de composé 4 (3,6 mmol) et 1,6 g de composé 8 (3,6 mmol) sont solubilisés dans 30 mL de triéthylamine fraîchement distillée. Le mélange est porté à 50 C sous bullage d'Argon durant 2 heures puis ramené à température ambiante et évaporé à sec sous pression réduite. Le produit est obtenu pur sous la forme d'une poudre blanche après recristallisation successive dans l'acétate d'éthyle (2,29 g, Rdt : 55 %). # Synthesis of lipid F
2.56 g of compound 4 (3.6 mmol) and 1.6 g of compound 8 (3.6 mmol) are solubilized in 30 ml of freshly distilled triethylamine. The mixture is brought to 50 ° C. under argon bubbling for 2 hours then cooled to room temperature and evaporated to dryness under reduced pressure. The product is obtained pure in the form of a white powder after successive recrystallization in ethyl acetate (2.29 g, yield: 55%).

RMN 'H (250 MHz, DMSO-d6) : # (ppm) 7.12 (1H, t, NH-CO-O), 6,48 (1H, t, CONHCH2) ; 6,37 (1H, s, CONHC) ; 5,05-4,96 (3H, m, CHO, CH20) 4,45 (6H, s, CH20) ; 4,22 (2H, m, NH) ; 3,48 (6H, s + t, N-CH2-COOH, CH2NH) ; 3. 25 (1H, t, J=7.1 Hz, CH2-CH-N), 3,17 (2H, m, CH2NH) ; 2,81 (4H, t, CH2S) , 1,44 (4H, m, NHCH2CH2) ; 1,27 (60H, m, CH2 Lys, CH2 chaînes) ; 0,90 (6H, t, CH3).  1H NMR (250 MHz, DMSO-d6): # (ppm) 7.12 (1H, t, NH-CO-O), 6.48 (1H, t, CONHCH2); 6.37 (1H, s, CONHC); 5.05-4.96 (3H, m, CHO, CH 2 O) 4.45 (6H, s, CH 2 O); 4.22 (2H, m, NH); 3.48 (6H, s + t, N-CH 2 -COOH, CH 2 NH); 3. (1H, t, J = 7.1Hz, CH2-CH-N), 3.17 (2H, m, CH2NH); 2.81 (4H, t, CH 2 S), 1.44 (4H, m, NHCH 2 CH 2); 1.27 (60H, m, CH 2 Lys, CH 2 chains); 0.90 (6H, t, CH 3).

RMN 13C(250 MHz, DMSO-d6) : # (ppm) 171,7-171,5 (COOH, CH2CONH); 156,2-156,0 (OCONH) ; 71,2 (CHO) ; 64. 5 (CH Lys), 63,6 (CH20); 62,5 (CH20) ; 53. 2 (N-CH2-COOH), 41,2 (NCH2CH2) ; 40,2,40.1 (CsLys, NHCH2CH) ; 37,1- 36,6 (SCH2CH2CO) ; 31,9 (C(3Lys) ; 29,8-29,3 (chaînes et CpLys) ; 26,8 (CH3); 22,6 (CH2CH3) ; 20,8 (CH2S) ; 14,1 (CH3).  13 C NMR (250 MHz, DMSO-d6): # (ppm) 171.7-171.5 (COOH, CH2CONH); 156.2-156.0 (OCONH); 71.2 (CHO); 64. (CH Lys), 63.6 (CH 2 O); 62.5 (CH 2 O); 53. 2 (N-CH 2 -COOH), 41.2 (NCH 2 CH 2); 40.2.40.1 (CsLys, NHCH2CH); 37.1-36.6 (SCH2CH2CO); 31.9 (C (3Lys), 29.8-29.3 (chains and CpLys), 26.8 (CH3), 22.6 (CH2CH3), 20.8 (CH2S), 14.1 (CH3).

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Figure img00280001

schéma de synthèse du lipide de ciblage F Exemple 6 : Préparation des vésicules tubulaires à partir du dérivé Al Matériel utilisé.
Figure img00280001

Synthesis scheme of targeting lipid F Example 6: Preparation of tubular vesicles from Al derivative Material used.

# Mesure de la taille des vésicules tubulaires.  # Measurement of the size of the tubular vesicles.

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La distribution en taille des particules a été mesurée par spectroscopie de corrélation photonique de la lumière d'échantillon dilués dans l'eau en utilisant un appareil Malvern HPPS/NIBS équipé d'un laser He/Ne de 3 mW et d'un corrélateur à 288 canaux muni d'une avalanche de photodiodes. Le traitement mathématique de la courbe d'autocorrélation fait appel à la méthode Contin.  Particle size distribution was measured by photon correlation spectroscopy of sample light diluted in water using a Malvern HPPS / NIBS instrument equipped with a 3 mW He / Ne laser and a correlator. 288 channels with an avalanche of photodiodes. The mathematical treatment of the autocorrelation curve uses the Contin method.

# Dispersion des lipides
Les lipides A sont dispersés dans l'eau selon la méthode film dans un bain de sonication Bransonic thermostaté type 2510 E (100 W, 42 Hz) au dessus de leur température de transition de phase pendant une demi heure. # Lipid dispersion
The lipids A are dispersed in water according to the film method in a Bransonic thermostatic sonication bath type 2510 E (100 W, 42 Hz) above their phase transition temperature for half an hour.

# Formation des dispersions de vésicule tubulaires
Les vésicules tubulaires sont préparées dans un premier temps en solubilisant le lipide Al dans le chloroforme. La solution est concentrée lentement sous pression réduite dans un ballon forme c#ur de 20 mL à l'aide d'un évaporateur rotatif. Le film obtenu est ensuite séché sous pression réduite à l'aide d'une pompe à palette. Le film de lipide est réhydraté avec de l'eau distillé à 65 C (10 C au dessus de la température de transition de phase du lipide) à une concentration de 2.5 mg.mL-1. Le mélange est homogénéisé au vortex pendant 5 minutes puis soumis aux ultrasons pendant 30 minutes à 70 C. La solution bleutée translucide obtenue est filtrée à travers un filtre de 0,45 m puis analysée au spectromètre de corrélation photonique et en microscopie électronique par transmission (figures 3,4 et 5). # Formation of tubular vesicle dispersions
The tubular vesicles are prepared initially by solubilizing the lipid Al in chloroform. The solution is slowly concentrated under reduced pressure in a 20 ml heart shaped flask using a rotary evaporator. The resulting film is then dried under reduced pressure using a paddle pump. The lipid film is rehydrated with distilled water at 65 ° C. (10 ° C. above the lipid phase transition temperature) at a concentration of 2.5 mg.mL-1. The mixture is homogenized by vortexing for 5 minutes and then sonicated for 30 minutes at 70 ° C. The resulting translucent bluish solution is filtered through a 0.45 m filter and then analyzed by photon correlation spectrometer and transmission electron microscopy ( Figures 3,4 and 5).

Avec R=C17H35 (dérivé Al). La température de transition de phase a été mesurée par détection de la polarisation d'une sonde fluorescente, le DPH en spectrofluorimétrie : Tm = 54 C
Nous obtenons des vésicules tubulaires dont le diamètre hydrodynamique moyen mesuré par diffraction de la lumière est de 132 nm (IP : 0,35).

Figure img00290001
With R = C17H35 (Al derivative). The phase transition temperature was measured by detecting the polarization of a fluorescent probe, the DPH in spectrofluorimetry: Tm = 54 ° C.
We obtain tubular vesicles whose mean hydrodynamic diameter measured by diffraction of light is 132 nm (IP: 0.35).
Figure img00290001

Les mesures de forme et de taille établies par observation des clichés de microscopie électronique (figures 4 et 5) ont permis de mettre en évidence la formation de vésicules tubulaires refermées à leurs extrémités dont la section moyenne est de 38 nm et la longueur moyenne de 247 nm. Les analyses en cryofracture ont confirmé la formation de  Measurements of shape and size established by observation of electron micrographs (FIGS. 4 and 5) made it possible to demonstrate the formation of tubular vesicles closed at their ends, the average section of which is 38 nm and the average length of 247. nm. Cryofracture analyzes confirmed the formation of

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ces vésicules tubulaires et leurs caractéristiques morphologiques, à savoir la présence d'une cavité aqueuse interne isolée du milieu extérieur.  these tubular vesicles and their morphological characteristics, namely the presence of an internal aqueous cavity isolated from the external medium.

Ces vésicules tubulaires ont une stabilité élevée puisqu'on n'observe aucune évolution de la taille des particules après un an de stockage tandis que dans les mêmes conditions, des liposomes formés de phosphatidyl choline de jaune d'oeuf évoluent au bout de seulement 5 jours.  These tubular vesicles have a high stability since there is no change in particle size after one year of storage while under the same conditions, liposomes formed of phosphatidyl choline egg yolk evolve after only 5 days .

La mise en évidence de la cavité interne aqueuse a été prouvée indirectement par des mesures spectrofluorimétriques de l'encapsulation et des cinétiques de libération d'une sonde fluorescente hydrophile, la carboxyfluorescéine (figure 1). Les mesures montrent clairement une cinétique de libération plus lente de la sonde fluorescente comparée à une encapsulation traditionnelle dans un mélange de phosphatidyl choline de jaune d'oeuf.  Demonstration of the aqueous internal cavity was proven indirectly by spectrofluorimetric measurements of the encapsulation and release kinetics of a hydrophilic fluorescent probe, carboxyfluorescein (Figure 1). The measurements clearly show slower release kinetics of the fluorescent probe compared to traditional encapsulation in a mixture of phosphatidyl choline of egg yolk.

Exemple 7 : Encapsulation de carboxyfluorescéine dans des vésicules tubulaires fabriquées à partir du dérivé Al
Le pouvoir d'encapsulation des différents composés est déterminé par spectrofluorimétrie à l'aide d'une sonde fluorescente : la 5 (6) -carboxyfluorescéine. On mesure la libération de ce marqueur fluorescent à partir des vésicules préparées selon les méthodes standardisées. Example 7 Encapsulation of Carboxyfluorescein in Tubular Vesicles Manufactured from Al Derivative
The encapsulation power of the various compounds is determined by spectrofluorimetry using a fluorescent probe: 5 (6) -carboxyfluorescein. The release of this fluorescent label is measured from the vesicles prepared according to the standardized methods.

Cette étude nécessite la préparation d'un tampon Tris (15 mM et 150 mM NaCI) à pH 7,4, ainsi que d'une solution de carboxyfluorescéine à 120 mM et pH 7,4 également.  This study requires the preparation of a Tris buffer (15 mM and 150 mM NaCl) at pH 7.4, as well as a solution of carboxyfluorescein at 120 mM and pH 7.4 also.

Les composés étudiés sont pesés (2,5 mg/mL) et sont dissous dans un minimum de méthanol. Le solvant est évaporé sous pression réduite au rotavapor et le film ainsi obtenu est séché par un flux d'azote.  The test compounds are weighed (2.5 mg / mL) and are dissolved in a minimum of methanol. The solvent is evaporated under reduced pressure in the rotavapor and the film thus obtained is dried by a stream of nitrogen.

On ajoute la solution de carboxyfluorescéine 120 mM dans le tampon Tris de manière à obtenir une dispersion de lipides de concentration égale à 2,5 mg/mL. La suspension obtenue est agitée au vortex pendant 1 minute puis soumise aux ultrasons dans un bain de sonication pendant 1 heure à 70 C.  The 120 mM carboxyfluorescein solution is added to the Tris buffer to obtain a dispersion of lipids with a concentration of 2.5 mg / ml. The suspension obtained is vortexed for 1 minute and then sonicated in a sonic bath for 1 hour at 70 ° C.

La sonde fluorescente non encapsulée est éliminée par passage sur colonne Séphadex G25 préalablement équilibrée avec le tampon Tris. La fraction de vésicule récoltée est immédiatement étudiée par spectrofluorimétrie.  The unencapsulated fluorescent probe is removed by passage on a Sephadex G25 column previously equilibrated with the Tris buffer. The fraction of vesicle harvested is immediately studied by spectrofluorimetry.

Les mesures de fluorescence ont été réalisées à l'aide d'un spectrofluorimètre Jobin-Yvon (spectrofluoromax 2), équipé d'une lampe Xénon 150 W.  The fluorescence measurements were carried out using a Jobin-Yvon spectrofluorometer (spectrofluoromax 2), equipped with a 150 W Xenon lamp.

Toutes les mesures ont été effectuées dans une cuve en quartz, thermostatée à 25 C. Les échantillons ont été analysés à une longueur d'onde d'excitation de 480 nm, et une longueur d'onde d'émission de 530 nm pendant 4 heures. All measurements were made in a quartz tank, thermostated at 25 C. The samples were analyzed at an excitation wavelength of 480 nm, and an emission wavelength of 530 nm for 4 hours. .

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Les bandes passantes ont été fixées à 0,5 nm aussi bien pour l'excitation que pour l'émission.  Bandwidths were set at 0.5 nm for both excitation and emission.

Pour chaque mesure, l'intensité de fluorescence initiale (Fo) est déterminée 30 secondes après la filtration sur colonne. La libération est étudié sur une période de 4h et l'intensité de fluorescence (Ft) est mesurée à intervalle régulier. L'intensité maximum de fluorescence (Fmax) qui correspond à 100% de relargage, est obtenue après la lyse des vésicule tubulaires obtenue par ajout de Triton XI 00 (10% v/v).  For each measurement, the initial fluorescence intensity (Fo) is determined 30 seconds after the column filtration. The release is studied over a period of 4 hours and the fluorescence intensity (Ft) is measured at regular intervals. The maximum fluorescence intensity (Fmax) corresponding to 100% release is obtained after lysis of the tubular vesicles obtained by adding Triton XI 00 (10% v / v).

Le pourcentage de libération est obtenu à l'aide de l'équation suivante (figure 1) : %R = (Ft - F0)/ Fmax
Exemple 8: Polymérisation d'un monomère encapsulé dans des vésicules tubulaires obtenues à partir du lipide Al
La composition des solutions utilisées est résumée dans le Tableau 1.

Figure img00310001
The release percentage is obtained using the following equation (Figure 1):% R = (Ft - F0) / Fmax
EXAMPLE 8 Polymerization of an Encapsulated Monomer in Tubular Vesicles Obtained from Lipid Al
The composition of the solutions used is summarized in Table 1.
Figure img00310001

<tb>
<tb> <Tb>
<Tb>

Désignation <SEP> Solvant <SEP> Concentration
<tb> Monomère <SEP> THAM <SEP> Eau <SEP> distillée <SEP> 0,1 <SEP> M
<tb> Acrylamide <SEP> Eau <SEP> distillée <SEP> 0,1 <SEP> M
<tb> Amorceur <SEP> tBuOOH <SEP> / <SEP> Na2S205 <SEP> Dichlorométhane/ <SEP> Tampon <SEP> 2,5.10-4 <SEP> M/ <SEP> 2,5.10-4 <SEP> M
<tb> Na2S205 <SEP> Tampon
<tb> Tampon <SEP> NaCl <SEP> Eau <SEP> distillée <SEP> 0,1 <SEP> M
<tb> Designation <SEP> Solvent <SEP> Concentration
<tb> Monomer <SEP> THAM <SEP> Distilled Water <SEP><SEP> 0.1 <SEP> M
<tb> Acrylamide <SEP> Water <SEP> Distilled <SEP> 0.1 <SEP> M
<tb> Primer <SEP> tBuOOH <SEP> / <SEP> Na2S205 <SEP> Dichloromethane / <SEP> Buffer <SEP> 2.5.10-4 <SEP> M / <SEP> 2.5.10-4 <SEP> M
<tb> Na2S205 <SEP> Buffer
<tb> Buffer <SEP> NaCl <SEP> Water <SEP> Distilled <SEP> 0.1 <SEP> M
<Tb>

Tableau 1 # Préparation du film
20 mg de lipides Al sont solubilisés dans 2 mL d'une solution d'hydropéroxyde de Cumène dans le dichlorométhane fraîchement distillé et dégazé par bullage d'argon (2,5.10-4 M), dans un ballon forme c#ur. Table 1 # Preparation of the film
20 mg of lipid Al are solubilized in 2 ml of a solution of hydroperoxide of cumene in dichloromethane, freshly distilled and degassed by bubbling argon (2.5 × 10 -4 M), in a coformed flask.

La solution est évaporée à sec à l'évaporateur rotatif (la température du bain ne dépassant pas 40 C) puis le film est séché à la pompe à palette (1 heure) et placé sous atmosphère inerte jusqu'à utilisation. Dans le cas d'un amorçage par le dithionite de sodium, le film est préparé dans du dichlorométhane fraîchement distillé et dégazé par bullage d'Argon.  The solution is evaporated to dryness on a rotary evaporator (the bath temperature does not exceed 40 ° C.) and the film is then dried with the paddle pump (1 hour) and placed under an inert atmosphere until use. In the case of a priming with sodium dithionite, the film is prepared in dichloromethane freshly distilled and degassed by bubbling Argon.

# Dispersion
2 mL de solution de monomère dans l'eau distillée (0,1 M), préalablement désoxygénée par bullage d'Argon sont ajoutés. Le mélange est agité pendant 1 minute puis placé dans un bain d'ultrasons durant 60 minutes à 70 C. # Dispersion
2 ml of monomer solution in distilled water (0.1 M), previously deoxygenated by bubbling Argon are added. The mixture is stirred for 1 minute and then placed in an ultrasound bath for 60 minutes at 70 ° C.

# Séparation - Polymérisation  # Separation - Polymerization

<Desc/Clms Page number 32> <Desc / Clms Page number 32>

La préparation est déposée sur colonne Sephadex G50 (2 cm de diamètre pour une hauteur de 10 cm de gel) préalablement équilibrée avec un tampon NaCl 0,1M désoxygéné pendant 30 minutes par bullage d'Argon. The preparation is deposited on a Sephadex G50 column (2 cm in diameter at a height of 10 cm of gel) previously equilibrated with a 0.1M NaCl buffer deoxygenated for 30 minutes by bubbling Argon.

2 mL de fraction bleutée correspondant à une élution de 25 à 27 mL sont récupérés dans un ballon. 2 mL de solution de méta bisulfite de sodium dans le tampon NaCl (2,5.10-4 M) sont alors ajoutés pour amorcer la polymérisation qui se déroule sous atmosphère inerte, à 37 C et durant 1 (acrylamide) à 3 heures (THAM).  2 ml of a bluish fraction corresponding to an elution of 25 to 27 ml are recovered in a flask. 2 ml of sodium metabisulfite solution in NaCl buffer (2.5 × 10 -4 M) are then added to initiate the polymerization which takes place under an inert atmosphere, at 37 ° C. and during 1 (acrylamide) at 3 hours (THAM) .

Dans le cas d'un amorçage par le dithionite de sodium, 2 mL d'une solution de l'amorceur dans le tampon NaCI 0,1M (2.10-3 M) sont ajoutés après séparation sur colonne Sephadex.  In the case of a priming with sodium dithionite, 2 ml of a solution of the initiator in 0.1M NaCl buffer (2.10-3 M) are added after separation on a Sephadex column.

Exemple 9: Télomérisation d'un monomère encapsulé dans des vésicules tubulaires obtenues à partir du lipide Al
La composition des solutions utilisées est résumée dans le tableau 2.

Figure img00320001
EXAMPLE 9 Telomerization of a Monomer Encapsulated in Tubular Vesicles Obtained from Lipid Al
The composition of the solutions used is summarized in Table 2.
Figure img00320001

<tb>
<tb> <Tb>
<Tb>

Désignation <SEP> Solvant <SEP> Concentration
<tb> Monomère <SEP> THAM <SEP> Eau <SEP> distillée <SEP> 0,1 <SEP> M
<tb> Agent <SEP> 3- <SEP> Dichlorométhane <SEP> 2.10-3 <SEP> M <SEP>
<tb> télogène <SEP> mercaptopropanoate
<tb> de <SEP> cholestéryle
<tb> Amorceur <SEP> tBuOOH <SEP> / <SEP> Na2S205 <SEP> Dichlorométhane <SEP> 2,5.10-4 <SEP> M <SEP> / <SEP> 2,5.10-4 <SEP> M
<tb> Tampon
<tb> Na2S205 <SEP> Tampon
<tb> Tampon <SEP> NaCl <SEP> Eau <SEP> distillée <SEP> 0,1 <SEP> M
<tb> Designation <SEP> Solvent <SEP> Concentration
<tb> Monomer <SEP> THAM <SEP> Distilled Water <SEP><SEP> 0.1 <SEP> M
<tb> Agent <SEP> 3- <SEP> Dichloromethane <SEP> 2.10-3 <SEP> M <SEP>
<tb> telogen <SEP> mercaptopropanoate
<tb><SEP> cholesteryl
<tb> Primer <SEP> tBuOOH <SEP> / <SEP> Na2S205 <SEP> Dichloromethane <SEP> 2.5.10-4 <SEP> M <SEP> / <SEP> 2.5.10-4 <SEP> M
<tb> Buffer
<tb> Na2S205 <SEP> Buffer
<tb> Buffer <SEP> NaCl <SEP> Water <SEP> Distilled <SEP> 0.1 <SEP> M
<Tb>

Tableau 2 # Préparation du film
18mg de lipide Al et 2 mg de composé télogène D sont solubilisés dans 2 mL d'une solution d'hydropéroxyde de Cumène dans le dichlorométhane fraîchement distillé et dégazé par bullage d'Argon (2,5.10-4 M), dans un ballon c#ur. Table 2 # Preparation of the film
18 mg of lipid A1 and 2 mg of telogenic compound D are solubilized in 2 ml of a solution of hydroperoxide of cumene in dichloromethane, freshly distilled and degassed by bubbling Argon (2.5 × 10 -4 M), in a flask. #ur.

La solution est évaporée à sec à l'évaporateur rotatif (la température du bain ne dépassant pas 40 C) puis le film est séché à la pompe à palette (1 heure) et placé sous atmosphère inerte jusqu'à utilisation. Dans le cas d'un amorçage par le dithionite de sodium, le film est préparé dans du dichlorométhane fraîchement distillé et dégazé par bullage d'Argon.  The solution is evaporated to dryness on a rotary evaporator (the bath temperature does not exceed 40 ° C.) and the film is then dried with the paddle pump (1 hour) and placed under an inert atmosphere until use. In the case of a priming with sodium dithionite, the film is prepared in dichloromethane freshly distilled and degassed by bubbling Argon.

# Dispersion
2 mL de solution de monomère dans l'eau distillée (0,1 M), préalablement désoxygénés par bullage d'Argon sont ajoutés. Le mélange est agité 1 minute puis placé dans un bain d'ultrasons durant 60 minutes à 70 C. # Dispersion
2 ml of monomer solution in distilled water (0.1 M), previously deoxygenated by bubbling Argon are added. The mixture is stirred for 1 minute and then placed in an ultrasound bath for 60 minutes at 70 ° C.

# Séparation - Polymérisation  # Separation - Polymerization

<Desc/Clms Page number 33> <Desc / Clms Page number 33>

La préparation est déposée sur colonne Sephadex G50 (2 cm de diamètre pour une hauteur de 10 cm de gel) préalablement équilibrée avec un tampon NaCl 0,1 M désoxygéné 30 minutes par bullage d'Argon. The preparation is deposited on a Sephadex G50 column (2 cm in diameter at a height of 10 cm of gel) previously equilibrated with a 0.1 M NaCl buffer deoxygenated for 30 minutes by bubbling with Argon.

2 mL de fraction bleutée correspondant à une élution de 25 à 27 mL sont récupérés dans un ballon. 2 mL de solution de métabisulfite de sodium dans le tampon NaCl (2,5.10 M) sont alors ajoutés pour amorcer la télomérisation qui se déroule sous atmosphère inerte, à 37 C et durant 16 à 20 heures. Dans le cas d'un amorçage par le dithionite de sodium, 2 mL d'une solution de l'amorceur dans le tampon NaCl 0,1 M (2.10- 3 M) sont ajoutés après séparation sur colonne Sephadex. 2 ml of a bluish fraction corresponding to an elution of 25 to 27 ml are recovered in a flask. 2 ml of sodium metabisulfite solution in NaCl buffer (2.5 × 10 M) are then added to initiate the telomerization which takes place under an inert atmosphere, at 37 ° C. and for 16 to 20 hours. In the case of a priming with sodium dithionite, 2 ml of a solution of the initiator in 0.1M NaCl buffer (2.10 -3 M) are added after separation on a Sephadex column.

Claims (23)

dans lesquels - m est un entier allant de 1 à 10 et lorsque X=CH2 alors Km+n<7 ; - x représente 0 ou un entier allant de 1 à 30 ; - y représente 0 ou un entier allant de 1 à 10 ; - Ri représente un groupement hydrophile ; - R2 représente un groupement de reconnaissance ayant une affinité pour une cible biologique ; - Z est un bras espaceur ; Z est lié à R2 au moyen d'une liaison qui peut être choisie parmi les fonctions -O-CO-, -CO-NH-,-NH-CO-NH-, -NH-CO-O-, O-CO-O-, -O-, -CH=N-,-S- ou par complexation d'un atome de nickel ; Z est choisi parmi une chaîne peptidique, un acide Q-aminé, l'éthanolamine, la 3-propanolamine, une diamine de formule -NH-(CH2)p-NH- dans laquelle p représente un entier allant de 2 à 6, ou -Z-Rz représente un groupement NTA de formule suivante :  in which - m is an integer from 1 to 10 and when X = CH2 then Km + n <7; x represents 0 or an integer ranging from 1 to 30; y represents 0 or an integer ranging from 1 to 10; Ri represents a hydrophilic group; R2 represents a recognition group having an affinity for a biological target; Z is a spacer arm; Z is bonded to R2 by means of a bond which may be selected from -O-CO-, -CO-NH-, -NH-CO-NH-, -NH-CO-O-, O-CO- O-, -O-, -CH = N-, -S- or by complexation of a nickel atom; Z is selected from a peptide chain, a Q-amino acid, ethanolamine, 3-propanolamine, a diamine of the formula -NH- (CH 2) p-NH- in which p represents an integer ranging from 2 to 6, or -Z-Rz represents an NTA group of following formula:
Figure img00340002
Figure img00340002
 dans laquelle - X représente un atome de soufre S ou un groupement-CH2- ; - n est un entier allant de 0 à 10 ; - R représente un groupement choisi parmi : les radicaux hydrocarbonés en C4-C24 ; les radicaux hydrocarbonés fluorés en C4-C24 ; radicaux thioalkyls en C4- C24 ; - R3 représente un groupement choisi parmi :  in which - X represents a sulfur atom S or a group -CH2-; n is an integer ranging from 0 to 10; R represents a group chosen from: C4-C24 hydrocarbon radicals; fluorinated C4-C24 hydrocarbon radicals; C4-C24 thioalkyl radicals; R3 represents a group chosen from:
Figure img00340001
Figure img00340001
 REVENDICATIONS 1. Composé de formule (III) : 1. Compound of formula (III): <Desc/Clms Page number 35> <Desc / Clms Page number 35> dans laquelle : - X représente un atome de soufre S ou un groupement -CH2- ; - n est un entier allant de 0 à 10 ; - m est un entier allant de 1 à 10 ; - lorsque X=CH2 alors 1 <m+n<7 ; - R représente un groupement choisi parmi : les radicaux hydrocarbonés en C4-C24 ; les radicaux hydrocarbonés fluorés en C4-C24 ; les radicaux thioalkyls en C4C24.  in which: X represents a sulfur atom S or a group -CH 2 -; n is an integer ranging from 0 to 10; m is an integer from 1 to 10; when X = CH2 then 1 <m + n <7; R represents a group chosen from: C4-C24 hydrocarbon radicals; fluorinated C4-C24 hydrocarbon radicals; thioalkyl radicals at C4C24.
Figure img00350002
Figure img00350002
 2. Composé selon la revendication 1 répondant à la formule (I) :  2. Compound according to claim 1 corresponding to formula (I):
Figure img00350001
Figure img00350001
 3. Composé selon la revendication 2, caractérisé en ce que le groupement R est choisi parmi les radicaux suivants : - le radical thiooctyl - le n-butyle, le ter-butyle, l'isobutyle, le n-pentyle, l'isopentyle, le nhexyle, le n-heptyle, le n-octyle, le n-nonyle, le n-décyle, le n-undécyle, le n-dodécyle, le n-tridécyle, le n-tétradécyle, le n-pentadécyle, le n-hexadécyl, le n- heptadécyle, le noctadécyle, le radical phytyl (CH3[CH(CH3)(CH2)3]3CH(CH3)CH2CH2), - les radicaux hydrocarbonés fluorés répondant à la formule -(CH2)t- (CF2)rF, dans laquelle r et t représentent deux entiers avec : 14 > r+t > 4.  3. Compound according to claim 2, characterized in that the R group is chosen from the following radicals: the thiooctyl radical - n-butyl, tert-butyl, isobutyl, n-pentyl, isopentyl, hexyl, n-heptyl, n-octyl, n-nonyl, n-decyl, n-undecyl, n-dodecyl, n-tridecyl, n-tetradecyl, n-pentadecyl, n-decyl hexadecyl, n-heptadecyl, noctadecyl, the phytyl radical (CH 3 [CH (CH 3) (CH 2) 3] 3 CH (CH 3) CH 2 CH 2), fluorinated hydrocarbon radicals corresponding to the formula - (CH 2) t - (CF 2 ) rF, in which r and t represent two integers with: 14> r + t> 4. 4. Composé selon la revendication 2 ou la revendication 3, caractérisé en ce que R est choisi de façon à ce que (I) ait une température de transition de phase supérieure à 37 C.  4. Compound according to claim 2 or claim 3, characterized in that R is chosen so that (I) has a phase transition temperature greater than 37 C. 5. Composé selon l'une quelconque des revendication 2 à 4, caractérisé en ce que l'une ou plusieurs des conditions suivantes sont vérifiées : X=S ; n=2 ;m=2.  5. Compound according to any one of claims 2 to 4, characterized in that one or more of the following conditions are satisfied: X = S; n = 2, m = 2. <Desc/Clms Page number 36> <Desc / Clms Page number 36> 6. Composé selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'il répond à la formule A :  6. Compound according to claim 5, characterized in that it corresponds to formula A:
Figure img00360001
Figure img00360001
 Formule AFormula A 7. Composé selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il répond à la formule Al : 7. Compound according to claim 6, characterized in that it corresponds to the formula Al:
Figure img00360002
Figure img00360002
 8. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il répond à la formule (II) : 8. Compound according to claim 1, characterized in that it corresponds to formula (II):
Figure img00360003
Figure img00360003
 dans laquelle : - X représente un atome de soufre S ou un groupement -CH2- ; - n est un entier allant de 0 à 10 ; - x représente 0 ou un entier allant de 1 à 30 ; - y représente 0 ou un entier allant de 1 à 10 ; - R1 représente un groupement hydrophile ; - R2 représente un groupement de reconnaissance ayant une affinité pour une cible biologique ;  in which: X represents a sulfur atom S or a group -CH 2 -; n is an integer ranging from 0 to 10; x represents 0 or an integer ranging from 1 to 30; y represents 0 or an integer ranging from 1 to 10; - R1 represents a hydrophilic group; R2 represents a recognition group having an affinity for a biological target; <Desc/Clms Page number 37><Desc / Clms Page number 37>
Figure img00370001
Figure img00370001
 - Z est un bras espaceur ; Z est lié à R2 au moyen d'une liaison qui peut être choisie parmi les fonctions -O-CO-, -CO-NH-,-NH-CO-NH-, -NH-CO-O-, O-CO-O-, -0-, -CH=N-,-S- ou par complexation d'un atome de nickel ;Z est choisi parmi une chaîne peptidique, un acide Q-aminé, l'éthanolamine, la 3-propanolamine, une diamine de formule -NH-(CH2)p-NH- dans laquelle p représente un entier allant de 2 à 6, ou -Z-R2 représente un groupement NTA de formule :  Z is a spacer arm; Z is bonded to R2 by means of a bond which may be selected from -O-CO-, -CO-NH-, -NH-CO-NH-, -NH-CO-O-, O-CO- O-, -O-, -CH = N-, -S- or by complexation of a nickel atom, Z is selected from a peptide chain, a Q-amino acid, ethanolamine, 3-propanolamine, a a diamine of the formula -NH- (CH 2) p-NH- in which p represents an integer ranging from 2 to 6, or -Z-R2 represents an NTA group of formula: (CH2)t-(CF2)F, dans laquelle r et t représentent deux entiers avec : 14 >- r+t 4.  (CH2) t- (CF2) F, wherein r and t are two integers with: 14> - r + t 4.
Figure img00370003
Figure img00370003
 dans lesquels R' représente H ou un composé hydrocarboné polyhydroxylé en C4-C24, - R est choisi parmi les radicaux suivants : - le radical thiooctyl, - le n-butyle, le ter-butyle, l'isobutyle, le n-pentyle, l'isopentyle, le n-hexyle, le n-heptyle, le n-octyle, le n-nonyle, le n-décyle, le n-undécyle, le n-dodécyle, le n-tridécyle, le n-tétradécyle, radical phytyl (CH3[CH(CH3)(CH2)3]3CH(CH3)CH2CH2), - les radicaux hydrocarbonés fluorés répondant à la formule -  in which R 'represents H or a C4-C24 polyhydroxy hydrocarbon compound, R is chosen from the following radicals: the thiooctyl radical, n-butyl, tert-butyl, isobutyl and n-pentyl, isopentyl, n-hexyl, n-heptyl, n-octyl, n-nonyl, n-decyl, n-undecyl, n-dodecyl, n-tridecyl, n-tetradecyl, radical phytyl (CH3 [CH (CH3) (CH2) 3] 3CH (CH3) CH2CH2), - the fluorinated hydrocarbon radicals corresponding to the formula -
Figure img00370002
Figure img00370002
 9. Composé selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'une ou plusieurs des conditions suivantes sont vérifiées : - X=S - n=2 - R1 est choisi parmi les radicaux suivants : 9. Compound according to claim 8, characterized in that one or more of the following conditions are satisfied: - X = S - n = 2 - R1 is chosen from the following radicals: - R2 est choisi parmi des anticorps, des fragments d'anticorps, des petites molécules effectrices permettant l'interaction avec des récepteurs de surface cellulaires, des antigènes, des sucres, des peptides.  R2 is selected from antibodies, antibody fragments, small effector molecules allowing interaction with cell surface receptors, antigens, sugars, peptides. 10. Composé selon la revendication 9, caractérisé en ce qu'il répond à la formule F :  10. Compound according to claim 9, characterized in that it corresponds to formula F: <Desc/Clms Page number 38> <Desc / Clms Page number 38>
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 Formule FForm F 11. Procédé de préparation de liposomes caractérisé en ce qu'il comporte les étapes suivantes : - Dissolution d'un composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 2 à 7, dans un alcool ou dans un solvant chloré ; - Evaporation du solvant ; - Addition d'eau à une température allant de 40 à 80 C à une concentration allant de 0,5 à 10 mg/ml ; - Traitement : - soit aux ultrasons à une température supérieure à la température de transition de phase du composé (I) - soit par extrusion de la solution à travers un ou plusieurs filtres de porosité appropriée, jusqu'à l'obtention d'une solution translucide bleutée. 11. A process for preparing liposomes, characterized in that it comprises the following steps: dissolving a compound of formula (I) according to any one of claims 2 to 7, in an alcohol or in a chlorinated solvent; - Evaporation of the solvent; - Addition of water at a temperature ranging from 40 to 80 C at a concentration ranging from 0.5 to 10 mg / ml; - Treatment: - either with ultrasound at a temperature higher than the phase transition temperature of the compound (I) - or by extrusion of the solution through one or more filters of appropriate porosity, until a solution is obtained translucent bluish. 12. Liposome caractérisé en ce qu'il comporte un ou plusieurs composés de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 2 à 7 comme constituant de ses parois.  12. Liposome characterized in that it comprises one or more compounds of formula (I) according to any one of claims 2 to 7 as constituent of its walls. 13. Liposome selon la revendication 12, caractérisé en ce qu'il est de forme allongée, refermé à ses extrémités, de section moyenne comprise entre 20 et 80 nm et de longueur moyenne comprise entre 200 et 500 nm.  13. Liposome according to claim 12, characterized in that it is of elongate shape, closed at its ends, of average section between 20 and 80 nm and average length between 200 and 500 nm. 14. Liposome selon la revendication 12 ou la revendication 13, caractérisé en ce qu'il comporte en outre de 1 à 5% d'un ou plusieurs composés de formule (II) selon l'une quelconque des revendications 8 à 10.  14. Liposome according to claim 12 or claim 13, characterized in that it further comprises from 1 to 5% of one or more compounds of formula (II) according to any one of claims 8 to 10. 15. Liposome selon l'une quelconque des revendications 12 à 14, caractérisé en ce qu'il comporte en outre un télomère ou polymère d'un monomère de type acrylique contenu dans sa cavité aqueuse interne.  15. Liposome according to any one of claims 12 to 14, characterized in that it further comprises a telomer or polymer of an acrylic-type monomer contained in its internal aqueous cavity. 16. Liposome selon la revendication 15, caractérisé en ce que l'oligomère ou le polymère est constitué de blocs de construction monomériques, hydrophiles, ioniques ou non ioniques, choisis parmi les dérivés acide acrylique, acide méthacrylique,  Liposome according to claim 15, characterized in that the oligomer or the polymer consists of monomeric, hydrophilic, ionic or nonionic building blocks chosen from acrylic acid and methacrylic acid derivatives. <Desc/Clms Page number 39><Desc / Clms Page number 39> méthacrylamide, ainsi que les dérivés acrylate, méthacrylate, acrylamide et méthacrylamide d'alcools en C1-C6, de polyols en C2-CI2, de sucres et d'aminoacides.  methacrylamide, as well as acrylate, methacrylate, acrylamide and methacrylamide derivatives of C 1 -C 6 alcohols, C2-C12 polyols, sugars and amino acids. 17. Liposome selon la revendication 15 ou la revendication 16, caractérisé en ce que le polymère est constitué de monomères choisis parmi : le tris (hydroxyméthyl)acrylamidométhane, l'acrylate de sodium, l'hydroxyéthyl acrylate, le  Liposome according to Claim 15 or Claim 16, characterized in that the polymer consists of monomers chosen from: tris (hydroxymethyl) acrylamidomethane, sodium acrylate, hydroxyethyl acrylate,
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 glucose monoacrylate, le glucose-1-(N-méthyl)acrylamide, le glucose 2-acrylamide, le maltose 1-acrylamide, le monoacrylate de sorbitol.  glucose monoacrylate, glucose-1- (N-methyl) acrylamide, glucose 2-acrylamide, maltose 1-acrylamide, sorbitol monoacrylate. 18. Liposome selon l'une quelconque des revendications 15 à 17, caractérisé en ce que le polymère est réticulé par un agent réticulant choisi parmi : le glucose-l,2-diacrylamide, le sorbitol diacrylate, le saccharose diacrylate, le saccharose di(éthylènediamine acrylamide), le kanamycin tétracrylamide, le kanamycin diacrylamide, l'acrylate de tris(hydroxyméthyl) acrylamidométhane (composé C):  Liposome according to any one of Claims 15 to 17, characterized in that the polymer is crosslinked by a crosslinking agent chosen from: glucose-1,2-diacrylamide, sorbitol diacrylate, sucrose diacrylate, sucrose di ( ethylenediamine acrylamide), kanamycin tetracrylamide, kanamycin diacrylamide, tris (hydroxymethyl) acrylamidomethane acrylate (compound C):
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 le réticulant étant présent en quantité allant de 1 à 5% en poids par rapport au poids du ou des monomères.  the crosslinker being present in an amount ranging from 1 to 5% by weight relative to the weight of the monomer or monomers. 19. Liposome selon l'une quelconque des revendications 15 à 18, caractérisé en ce que le polymère comporte un ou plusieurs agents de transfert sélectionné parmi : l'acide thiol acétique, l'acide mercaptopropionique, le thioéthylène glycol, la cystamine, la cystéine, les alcane thiols de C2 à C30, le composé D  Liposome according to any one of claims 15 to 18, characterized in that the polymer comprises one or more transfer agents selected from: thiol acetic acid, mercaptopropionic acid, thioethylene glycol, cystamine, cysteine alkane thiols from C2 to C30, compound D
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 le phosphite de diéthyle, les phosphites de dioctyle, didodécyle, dihexadécyle, le composé répondant à la formule (IV) :  diethyl phosphite, dioctyl phosphites, didodecyl, dihexadecyl, the compound of formula (IV):
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 <Desc/Clms Page number 40><Desc / Clms Page number 40> dans laquelle R a la même signification que dans les formules (I) (II) et (III).  in which R has the same meaning as in formulas (I) (II) and (III). 20. Liposome selon la revendication 19 comportant un agent télogène de formule (IV).  20. Liposome according to claim 19 comprising a telogen of formula (IV). 21. Liposome selon la revendication 19 ou la revendication 20, caractérisé en ce que le rapport agent de transfert de chaîne / tensioactif lipidique (I) varie de 1 à 10% en poids/poids et le rapport agent de transfert de chaîne/ monomère varie de 0,1à 10 % en poids/poids.  Liposome according to claim 19 or claim 20, characterized in that the ratio of chain transfer agent / lipid surfactant (I) ranges from 1 to 10% w / w and the ratio of chain transfer agent / monomer varies. from 0.1 to 10% w / w. 22. Association d'un liposome selon l'une quelconque des revendications 12 à 21 avec un composé choisi parmi : les principes actifs thérapeutiques, les substances cosmétiques, les agents de diagnostic.  22. Association of a liposome according to any one of claims 12 to 21 with a compound selected from: therapeutic active ingredients, cosmetic substances, diagnostic agents. 23. Composition thérapeutique, de diagnostic ou cosmétique comprenant au moins un principe actif en association avec un liposome selon l'une quelconque des revendications 12 à 21. 23. Therapeutic, diagnostic or cosmetic composition comprising at least one active principle in combination with a liposome according to any one of claims 12 to 21.
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