FR2838341A1 - Cosmetic or dermatological compositions, e.g. for combating skin aging, erythema or irritation, containing extract of Cystoseira stricta brown algae having e.g. DNA protecting action - Google Patents

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Abstract

Cosmetic or dermatological compositions containing an extract (I) of the brown alga Cystoseira stricta Sauvageau (also known as Cystoseira amentacea Bory variety stricta Montagne) are new.

Description

niveau de la peau, des muqueuses et/ou des phanères.level of the skin, mucous membranes and / or integuments.

- 1- 1

EXTRAIT D'ALGUE MARINE DU GENRE CYSTOSEIRA ET  SEAWEED EXTRACT OF THE KIND CYSTOSEIRA AND

UTILISATION DANS LES PRODUITS DE SOIN  USE IN CARE PRODUCTS

La présente invention concerne l'utilisation d'un extrait d'une algue marine du genre Cystoseira notamment Cystoseira stricta Sauvageau (= Cystoseira amentacea Bory variété stricta Montagne), en quantité efficace et dans un milieu physiologiquement acceptable pour un usage topique, dans les produits de soin co smétiques et/ou dermatologiques, plus particulièrement dans le s applications o l'on cherche une protection contre les agressions radicalaires d'origines diverses et o un rôle apaisant et protecteur vis-à-vis des processus inflammatoires, des  The present invention relates to the use of an extract of a seaweed of the genus Cystoseira, in particular Cystoseira stricta Sauvageau (= Cystoseira amentacea Bory variety stricta Montagne), in an effective amount and in a physiologically acceptable medium for topical use, in the products. cosmetics and / or dermatological care, more particularly in applications where protection is sought against radical attacks of various origins and o a soothing and protective role with regard to inflammatory processes,

irritations, des manifestations allergiques et des érythèmes.  irritations, allergic manifestations and erythema.

I1 est bien connu que les effets des radicaux libres sont néLastes et nombreux car leurs réactions s'inscrivent presque toujours dans un processus de réactions en chaîne: le radical rencontre une molécule non radicalaire ce qui lui permet de se stabiliser aux dépends de la création d'un nouveau radical capable de poursuivre la réaction. Les radicaux libres provoquent en particulier tout un ensemble d'altérations au niveau des constituants cellulaires notamrnent de 1' ADN et ses lipides. Mais leurs cibles privilégiées sont les acides gras polyinsaturés présents dans les phospholipides des membranes cellulaires. Cette attaque radicalaire des dérivés lipidiques est appelée peroxydation lipidique ou encore lipo-peroxvdation. C'est une réaction en châîne qui va étre à l'origine de la dégradation de la structure moléculaire et architecturale des membranes cellulaires avec notamment inactivation des récepteurs et modification des échanges de la cellule avec le milieu  It is well known that the effects of free radicals are neLast and numerous because their reactions are almost always part of a chain reaction process: the radical meets a non-radical molecule which allows it to stabilize at the expense of the creation of 'a new radical capable of continuing the reaction. Free radicals in particular cause a whole series of alterations in the cellular constituents, in particular of DNA and its lipids. But their preferred targets are the polyunsaturated fatty acids present in the phospholipids of cell membranes. This radical attack on lipid derivatives is called lipid peroxidation or lipoperoxidation. It is a chain reaction which is going to be at the origin of the degradation of the molecular and architectural structure of cell membranes with in particular inactivation of receptors and modification of the exchanges of the cell with the medium.

extérieur (Belleville, 1988 - Angéiologie, 41: 79-86).  exterior (Belleville, 1988 - Angiology, 41: 79-86).

La peroxydation lipidique peut se faire selon deux mécanismes différents (Emerit & Galli, 1987 - Cah. Nutr. Diét., 22: 35-39): un mécanisme non  Lipid peroxidation can take place according to two different mechanisms (Emerit & Galli, 1987 - Cah. Nutr. Diét., 22: 35-39): a non-

enzymatique et un mécanisme enzymatique.  enzymatic and an enzymatic mechanism.

- 2 Dans le mécanisme non enzymatique, toutes les membranes sont susceptibles d' être attaquées en particulier les membranes mitochondriales avec modification du flux énergétique et les membranes lysosomiales avec libération des hydrolases. La spécificité du substrat est très faible QU nulle. La susceptibilité des acides gras à ce mécanisme de la peroxydation dépend de leur degré d'insaturation. Dans le mécanisme enzymatique, il existe une spécificité du substrat et l'arrachement radicalaire va être sélectif et stéréospécifique. L'acide arachidonique qui est un constituant normal des membranes cellulaires est libéré sous l' influence lo des phospholipases A2 et C. I1 se produit ensuite une oxydation progressive réalisée selon deux voies: - par la cyclo-oxygénase qui enlève l'hydrogène en C13 de l'acide arachidonique et forme les pro staglandines et le s thromboxanes et - par la 5- lipoxvgénase qui enlève l' hydrogène en C7 de l' acide  - 2 In the non-enzymatic mechanism, all the membranes are susceptible to attack, in particular the mitochondrial membranes with modification of the energy flow and the lysosomal membranes with release of the hydrolases. The specificity of the substrate is very low QU zero. The susceptibility of fatty acids to this mechanism of peroxidation depends on their degree of unsaturation. In the enzymatic mechanism, there is a specificity of the substrate and the radical tearing will be selective and stereospecific. Arachidonic acid, which is a normal constituent of cell membranes, is released under the influence of the phospholipases A2 and C. Then there is a progressive oxidation carried out in two ways: - by cyclo-oxygenase which removes the hydrogen in C13 of arachidonic acid and forms pro staglandins and thromboxanes and - by 5-lipoxvengenase which removes the hydrogen in C7 from the acid

arachidonique et forme les leucotriènes.  arachidonic and forms leukotrienes.

Au cours de cette oxydation euzymatique, il apparaît des radicaux libres oxygénés, en particulier des radicaux hydroxyles et alkoxyles ainsi que de  During this euzymatic oxidation, oxygenated free radicals appear, in particular hydroxyl and alkoxy radicals as well as

l'oxygène singulet.singlet oxygen.

Les conséquences de la peroxydation lipidique sont multiples à court terme comme à long terme: - à court terme, elle provoque des troubles ioniques avec en particulier une altération de la pompe à sodium et une homéostasie du calcium intracellulaire, ce qui aboutit à un stress énergétique avec _dème cellulaire,  The consequences of lipid peroxidation are multiple in the short term as in the long term: - in the short term, it causes ionic disorders with in particular an alteration of the sodium pump and a homeostasis of intracellular calcium, which leads to energy stress with cell edema,

diminution du taux d'ATP et mort cellulaire.  decrease in ATP levels and cell death.

- à long terme, les modifications des lipides membranaires sont responsables de l'accumulation de pigments lipofusciniques observables au cours du vieillissement (Therond, 1989 - J. Med. Esth. et Chir. Derm., 26:  - in the long term, the modifications of the membrane lipids are responsible for the accumulation of lipofuscinic pigments observable during aging (Therond, 1989 - J. Med. Esth. and Chir. Derm., 26:

273-280).273-280).

- 3 Les radicaux librps libérés amplifient aussi les phénomènes inflammatoires avec notamment la stimulation de la synthèse des médiateurs lipidiques (prostaglandines et leucotriènes), l' activation de certains facteurs de transcription, l'induction de la synthèse d'interleukine IL-1 et des protéines de choc thermique s (hsp). Plus particulièrement, l' anion superoxyde intervient au niveau de l' inflammation d'une part en activant un facteur plasmatique chimiotactique latent qui augmente l' accumulation des polynucléaires neutrophiles et, d'autre part, en permettant la formation d'autres espèces radicalaires oxygénées elles-mêmes très actives. On comprend donc l' importance qui existe à disposer de produits qui aident à contrôler les réactions radicalaires et à maintenir une bonne régulation des processus de peroxydation lipidique compte tenu de leurs rôles majeurs dans  - 3 The free radicals released also amplify inflammatory phenomena with in particular the stimulation of the synthesis of lipid mediators (prostaglandins and leukotrienes), the activation of certain transcription factors, the induction of the synthesis of interleukin IL-1 and heat shock proteins s (hsp). More particularly, the superoxide anion intervenes at the level of inflammation on the one hand by activating a latent chemotactic plasma factor which increases the accumulation of neutrophils and, on the other hand, by allowing the formation of other oxygenated radical species themselves very active. We therefore understand the importance of having products that help control radical reactions and maintain good regulation of lipid peroxidation processes, given their major roles in

l'altération des membranes des cellules et des phénomènes inflammatoires.  alteration of cell membranes and inflammatory phenomena.

A cet égard, la demanderesse a de manière surprenante et inattendue découvert que l'extrait préparé à partir de l'algue brune Cystoseira stricta possède outre des propriétés protectrices de 1'ADN, également des propriétés protectrices vis-à-vis des dégâts nocifs occasionnés par les deux mécanismes de la lipoperoxydation, à savoir altérations des membranes des cellules et  In this regard, the Applicant has surprisingly and unexpectedly discovered that the extract prepared from the brown alga Cystoseira stricta has, in addition to protective properties of DNA, also protective properties with regard to the harmful damage caused by the two mechanisms of lipoperoxidation, namely alterations of cell membranes and

développement des processus inflammatoires.  development of inflammatory processes.

Du fait de ses activités multiples, ledit extrait trouve avantageusement son utilisation seul ou en association avec au moins un autre principe actif, dans un milieu physiologiquement acceptable, dans les produits de soins destinés en particulier à lutter contre le vieillissement cutané, à diminuer voire inLiber les irritations, le s inflammations, le s érythème s cutanés, particulièrement les érythèmes induits par les rayonnements ultraviolets, les éruptions érythémateuses localisées  Due to its multiple activities, said extract advantageously finds its use alone or in combination with at least one other active principle, in a physiologically acceptable medium, in care products intended in particular to combat skin aging, to reduce or even to free skin irritations, inflammations, erythema, especially erythema induced by ultraviolet radiation, localized erythematous rashes

ou diffuses sur la peau et donc à traiter les peaux dites sensibles.  or diffuse on the skin and therefore to treat so-called sensitive skin.

Par milieu physiologiquement acceptable, on entend un milieu compatible  By physiologically acceptable medium is meant a compatible medium

avec la peau, les muqueuses et les phanères.  with the skin, mucous membranes and dander.

Préférentiellement selon l' invention, l'extrait ou les applications le comprenant sont employés de manière topique. Selon l'invention, les produits comprenant l'extrait peuvent être des compositions cosmétiques ou dermatologiques. Plus particulièrement selon  Preferably according to the invention, the extract or the applications comprising it are used topically. According to the invention, the products comprising the extract can be cosmetic or dermatological compositions. More particularly according to

l'invention, il s'agit de compositions cosmétiques.  the invention is cosmetic compositions.

Le genre Cystose ira appartient au phylum de s HeteroLontophyta, à la c las se des Phacophyta (algues brunes) et à l'ordre des Fucales. I1 regroupe en Méditerrance une trentaine d'espèces. L'espèce stricta, encore appelée Cystoseira amentacea variété stricta s'y développe en ceinture dense sur des substrats rocheux. Ses exigences écologiques en font une algue très caractéristique de nos rivages rocheux de par son adaptation au choc des vagues, sa résistance aux fortes variations du rayonnement solaire et son reffis de vivre dans les stations atteintes  The genus Cystose ira belongs to the phylum of HeteroLontophyta, to the las of Phacophyta (brown algae) and to the order of Fucales. It groups together around 30 species in the Mediterranean. The species stricta, also called Cystoseira amentacea variety stricta grows there in dense belts on rocky substrates. Its ecological requirements make it an alga very characteristic of our rocky shores by its adaptation to the shock of the waves, its resistance to strong variations of the solar radiation and its resilience to live in the affected stations.

par la pollution.by pollution.

A la connaissance de la demanderesse, des applications industrielles pour cette espèce, notamment dans le domaine des soins n'ont jamais été décrites à ce jour. Dans un mode de réalisation avantageux, 1' extrait de l'algue Cystoseira stricta selon la présente invention est un extrait qui peut êke obtenu à partir de thalles ou de quelque partie isolée de thalles sous forme frâîche, congelée, sèche,  To the knowledge of the applicant, industrial applications for this species, in particular in the field of care have never been described to date. In an advantageous embodiment, the extract of the alga Cystoseira stricta according to the present invention is an extract which can be obtained from thalli or from some isolated part of thalli in fresh, frozen, dry form,

entière, fragmentée ou broyée.whole, fragmented or ground.

Toute méthode d'extraction connue de l'homme du métier peut être  Any extraction method known to a person skilled in the art can be

employée pour préparer l'extrait contenu dans les compositions selon l'invention.  used to prepare the extract contained in the compositions according to the invention.

- 5 Plus particulièrement, l'extrait est avantageusement obtenu par macération des thalles dans un solvant ou un mélange de solvants suivie d'une filtration et  More particularly, the extract is advantageously obtained by maceration of the thalli in a solvent or a mixture of solvents followed by filtration and

d'une centrifugation pour éliminer les particules.  centrifugation to remove particles.

Dans un mode préPéré de réalisation de la présente invention, l'extrait ainsi  In a preferred embodiment of the present invention, the extract thus

obtenu est calibré par des ultrafiltrations et concentrations successives.  obtained is calibrated by successive ultrafiltrations and concentrations.

A titre de solvants avantageusement employés, on citera l'eau, les solvants chlorés tel que le chloroforme, les éthers tels que l'éther éthylique, l'acétone, les lo esters en C2 à C8 tels que l'acétate d'éthyle et l'acétate de butyle, des alcools en C1 à C6 tels que le méthanol, l'éthanol, l'isopropanol et le butanol, des polyols en C2 à C6 tels que le propylène glycol et le butylène glycol, sans que cette liste soit  As solvents advantageously used, mention will be made of water, chlorinated solvents such as chloroform, ethers such as ethyl ether, acetone, C 2 to C 8 lo esters such as ethyl acetate and butyl acetate, C1 to C6 alcohols such as methanol, ethanol, isopropanol and butanol, C2 to C6 polyols such as propylene glycol and butylene glycol, without this list being

limitative. Ces solvants peuvent étre utilisés seuls ou en mélange.  limiting. These solvents can be used alone or as a mixture.

L'extraction peut être renouvelée plusieurs fois jusqu'à épuisement des  The extraction can be repeated several times until the exhaustion of

thalles conformément aux procédés bien connus de l'homme du métier.  thalli according to methods well known to those skilled in the art.

La proportion en masse entre le solvant et le matériau frais à extraire peut varier dans de larges limites. Plus précisément elle peut étre comprise entre 15: 1  The proportion by mass between the solvent and the fresh material to be extracted can vary within wide limits. More precisely it can be between 15: 1

et 1: 1 de préférence 8: 1.and 1: 1 preferably 8: 1.

I1 est possible d'apporter des améliorations, optimisations et modifications du procédé de préparation des extraits. Ainsi à la place de la macération simple, on peut employer les techniques à contre courant, la décoction, la lixiviation, l'extraction sous reflux, l'extraction à l'aide d'ultrasons ou de micro-ondes associée ou non aux solvants, l' extraction au moyen de fluides supercritiques,  It is possible to make improvements, optimizations and modifications to the process for preparing the extracts. So instead of simple maceration, we can use countercurrent techniques, decoction, leaching, reflux extraction, extraction using ultrasound or microwaves associated or not with solvents , extraction using supercritical fluids,

notamment de CO2 supercritique avec ou sans co-solvant.  in particular supercritical CO2 with or without co-solvent.

Quelque so it le mode de préparation utilisé se lon l ' invent ion, des étape s subséquentes visant à favoriser la conservation et/ou la stabilisation peuvent 8tre ajoutées sans pour cela modifier la nature même de l'extrait. Ainsi, pour certaines - 6 applications cosmétiques, il peut s'avérer judicieux de concentrer et de purifier l'extrait liquide ou encore de préparer un extrait sec à partir d'extrait liquide par exemple par des techniques classiques de séchage, précipitation, évaporation,  Whatever the mode of preparation used according to the invention, subsequent steps aimed at promoting conservation and / or stabilization can be added without modifying the very nature of the extract. Thus, for certain cosmetic applications, it may be advisable to concentrate and purify the liquid extract or even to prepare a dry extract from liquid extract, for example by conventional drying, precipitation, evaporation techniques,

atomisation ou lyophilisation.atomization or lyophilization.

D ' autres caractéristiques et avantages de l' invention appara^tront à la lecture des exemples qui suivent, qui sont donnés à titre purement illustratifs et ne sont pas limitatifs de l' invention, quant aux autres activités cosmétiques et dermato lo giques qui ont été mise s en évidence au co urs du déve loppement de ce  Other characteristics and advantages of the invention will appear on reading the examples which follow, which are given purely by way of illustration and are not limitative of the invention, as regards the other cosmetic and dermatological activities which have been highlighted at the heart of the development of this

o principe actif cosmétique.o cosmetic active ingredient.

Exemple n l: Préparation d'un extrait selon l'invention La préparation de l'extrait de Cystoseira stricta (: C. amentacea variété stricta) selon l'invention comprend la succession des étapes suivantes: - 200 g de thalles préulablement séchés et réduits en poudre sont dispersés dans 1700 ml d'eau sous agitation modérée et à la température ambiante, - la suspension est filtrée et centrifugée pour éliminer les particules, - le surnageant est ensuite soumis à des ultrafiltrations successives et enfin  Example nl: Preparation of an Extract According to the Invention The preparation of the extract of Cystoseira stricta (: C. amentacea variety stricta) according to the invention comprises the succession of the following stages: - 200 g of thalli pre-dried and reduced in powder are dispersed in 1700 ml of water with moderate stirring and at room temperature, - the suspension is filtered and centrifuged to remove the particles, - the supernatant is then subjected to successive ultrafiltrations and finally

concentré jusqu'à la calibration de ses activités.  concentrated until the calibration of its activities.

L'extrait obtenu est limpide et de couleur ambre foncé.  The extract obtained is clear and dark amber in color.

Exemple n 2: Mise en évidence de l'effet orotecteur de 1'ADN vis-à-vis de l'oxrène sinaulet Cet exemple démontre l'effet protecteur de l'extrait de Cystoseira stricta  Example 2: Demonstration of the orotective effect of DNA vis-à-vis the oxene sinaulet This example demonstrates the protective effect of the extract of Cystoseira stricta

préparé selon l'invention sur 1'ADN vis-à-vis de l'oxygène singulet.  prepared according to the invention on DNA vis-à-vis singlet oxygen.

L'oxygène singulet est formé par l'action directe de la lumière sur la molécule d'oxygène. La réaction photobiologique est déclenchée par les radiations  Singlet oxygen is formed by the direct action of light on the oxygen molecule. The photobiological reaction is triggered by radiation

W et celles du spectre visible.W and those of the visible spectrum.

L'oxygène singulet diffuse très facilement. I1 devient alors très agressif et fait subir des dégats à 1'ADN. Ces dégâts correspondent à plusieurs catégories de lésions par exemple des altérations des bases, des pontages ADN-protéines, des ruptures de brins d'ADN. Ils interviennent aussi bien sur 1'ADN du noyau cellulaire que sur 1'ADN des mitochondries. En cas de déLaut ou d'inadéquation des systèmes réparateurs de 1'ADN, ces dommages entrainent des mutations et la  Singlet oxygen diffuses very easily. He then becomes very aggressive and causes DNA damage. This damage corresponds to several categories of lesions, for example base alterations, DNA-protein bridging, DNA strand breaks. They intervene as well on the DNA of the cell nucleus as on the DNA of the mitochondria. In case of failure or inadequacy of the DNA repair systems, this damage leads to mutations and the

mort cellulaire.cell death.

Conditions expérimentales: Le protocole utilisé est le test in vitro 3D (SFRI) sur ADN plasmidique. I1 s'agit d'un système de détection des dommages sur de 1'ADN capté sur  Experimental conditions: The protocol used is the in vitro 3D test (SFRI) on plasmid DNA. It is a system for detecting damage on DNA captured on

microplaque (Salles et al., 1995 - Anal. Biochem. 232: 37-42).  microplate (Salles et al., 1995 - Anal. Biochem. 232: 37-42).

L'oxygène singulet est généré par éclairement du bleu de méthylène. Une solution stock de bleu de méthylène à lO,ug/ml a été diluée à la  Singlet oxygen is generated by illumination of methylene blue. A stock solution of methylene blue at 10 µg / ml was diluted with

concentration de 4 ng/ml dans de l'eau ultrapure (qualité MilliQ de Millipore).  concentration of 4 ng / ml in ultrapure water (MilliQ quality from Millipore).

Cette solution est mélangée à volume égal avec différentes dilutions de l'extrait de Cystoseira stricta (0,1% - 1% et 10%). 501 du mélange sont ajoutés dans les puits d'une microplaque contenant de l' ADN plasmidique adsorbé. L ' ensemble est ensuite éclairé pendant 20 minutes sous deux lampes de 100 Watts, distantes de 30 cm. Les autres étapes du test sont les suivantes:  This solution is mixed in equal volume with different dilutions of the extract of Cystoseira stricta (0.1% - 1% and 10%). 501 of the mixture are added to the wells of a microplate containing adsorbed plasmid DNA. The whole is then lit for 20 minutes under two 100 Watt lamps, 30 cm apart. The other stages of the test are as follows:

2s - une étape de réparation des lésions par les complexes spécifiques de réparation.  2s - a stage of repair of lesions by specific repair complexes.

Au cours de la phase de resynthèse du brin d'ADN excisé, un nucléotide marqué à la biotine est incorporé dans 1'ADN, - une étape de reconnaissance de la biotine par une molécule d'avidine eouplée à une molécule de peroxydase, - une étape de révélation de la réaction par addition d'un substrat chimiluminescent  During the resynthesis phase of the excised DNA strand, a biotin-labeled nucleotide is incorporated into DNA, - a step of recognition of biotin by an avidin molecule coupled to a peroxidase molecule, - a step of revealing the reaction by adding a chemiluminescent substrate

de la peroxydase.peroxidase.

Résultats: Pour une meilleure visualisation des résultats, ceux-ci sont exprimés comme le pourcentage d'inllibition de la formation de dommages oxydatifs sur 1'ADN ou pourcentage de protection. La valeur 0% correspond au signal de réparation de  Results: For a better visualization of the results, these are expressed as the percentage of inhibition of the formation of oxidative damage on DNA or percentage of protection. The value 0% corresponds to the repair signal of

1'ADN lésé par l'oxydant seul.DNA damaged by the oxidant alone.

Le pourcentage d'inhibition ou de protection (P) en présence d'espèces réactives de l'oxygène est calculé comme la baisse relative de l'effet lésionnel due à l'oxygène singulet soit: 0 [RLU oxydant] - [RLU (oxydant + échantillon)] () x 100 [RLU oxydant]  The percentage of inhibition or protection (P) in the presence of reactive oxygen species is calculated as the relative decrease in the lesional effect due to singlet oxygen, namely: 0 [oxidizing RLU] - [RLU (oxidizing + sample)] () x 100 [oxidizing RLU]

avec RLU: Relative Light Units (unités arbitraires de quantité de lumière) .  with RLU: Relative Light Units.

La protection spécifique est le reilet de l'activité antiradicalaire due à l'extrait testé.  The specific protection is the reilet of the anti-free radical activity due to the tested extract.

Les résultats obtenus montrent qu'en présence de l'extrait de Cystoseira stricta préparé selon l'invention à la concentration de 0,1% - 2,5% et 10% la protection spécifique de 1'ADN vis-à-vis de l'oxygène singulet est respectivement  The results obtained show that in the presence of the extract of Cystoseira stricta prepared according to the invention at the concentration of 0.1% - 2.5% and 10% the specific protection of DNA vis-à-vis the singlet oxygen is respectively

de 41% - 77% et 86%.from 41% - 77% and 86%.

Cette protection est en eet très active puisque 50% de la protection  This protection is indeed very active since 50% of the protection

spécifique sont atteints avec seulement une concentration dudit extrait de 0,2%.  specific are achieved with only a concentration of said extract of 0.2%.

Cette propriété permet des applications destinées à protéger le matériel génétique et à lutter contre les mutations induites par exemple par divers radicaux  This property allows applications intended to protect the genetic material and to fight against mutations induced for example by various radicals

libres et agents chimiques ou encore par les différents rayonnements ultraviolets.  free and chemical agents or by the different ultraviolet rays.

Exemple n 3: Mise en évidence de l'eet protecteur des cvtomembranes vis avis de la perordation lipidique La peroxydation lipidique attaque les dérivés lipidiques des membranes et entrane des altérations pouvant aboutir à la lyse cellulaire. Elle comprend quatre  Example No. 3: Demonstration of the protective e ect of the membrane members against notice of the lipid perordation The lipid peroxidation attacks the lipid derivatives of the membranes and causes alterations which may lead to cell lysis. It includes four

étapes successives: l'initiation, la propagation, la réactivation et la terminaison.  successive stages: initiation, propagation, reactivation and termination.

Dans l' étape d' initiation, le radical hydroxyle généré au niveau cellulaire par les radiations ionisantes, les rayonnements ultraviolets A et B. les oxydases ou les ions ferryles arrache un atome d'hydrogène d'un carbone situé entre deux double-liaison d'un enchainement malonique d'un acide gras polyinsaturé membranaire [e.g. acide linoléique C18:2 (n-6), acide linolénique C18:3 (n-3), acide arachidonique C20:4 (n-6)] qui après activation et réarrangement forme un  In the initiation step, the hydroxyl radical generated at the cellular level by ionizing radiation, ultraviolet radiation A and B. Oxidases or ferry ions tears off a hydrogen atom from a carbon located between two double bonds d 'a malonic sequence of a polyunsaturated membrane fatty acid [eg linoleic acid C18: 2 (n-6), linolenic acid C18: 3 (n-3), arachidonic acid C20: 4 (n-6)] which after activation and rearrangement forms a

radical alkyle.alkyl radical.

Dans l' étape de propagation, l' oxygène mo léculaire se fixe au radical alkyle 0 pour former un peroxyalkyle. Ce dernier arrache un atome d'hydrogène à une autre molécule d'acide gras polyinsaturé proche de la première. I1 se forme un  In the propagation step, molecular oxygen binds to the alkyl radical 0 to form a peroxyalkyl. The latter tears off a hydrogen atom from another polyunsaturated fatty acid molecule close to the former. I1 forms a

hydroperoxyde et une deuxième radical aLEyle.  hydroperoxide and a second aLEyl radical.

La réaction s'intensifie d'autant plus que les châînes d'acides gras présentent un grand nombre de double liaison. Plusieurs centaines d'acides gras peuvent étre atteints et conduire à une accumulation d'hydroperoxydes qui  The reaction intensifies all the more since the fatty acid chains have a large number of double bonds. Several hundred fatty acids can be reached and lead to an accumulation of hydroperoxides which

représentent, en fait, une source de radicaux alkyles.  represent, in fact, a source of alkyl radicals.

Dans l'étape de réactivation' en présence d' ions ferreux, l' hydroperoxyde constitue un radical alkoxyle très agressif, des ions ferriques et des ions hydroxyles. C'est la réaction de Fenton. Les anions superoxydes relancent la réaction de Fenton en réduisant les ions ferriques en ions ferreux: c'est le cycle de Haber-Weiss. Comme les ions hydroxyles, les radicaux alkoxyles arrachent un proton à un acide gras polysinsaturé pour former un alcool gras et un radical alkyle  In the reactivation step in the presence of ferrous ions, the hydroperoxide constitutes a very aggressive alkoxyl radical, ferric ions and hydroxyl ions. It's Fenton's reaction. The superoxide anions revive the Fenton reaction by reducing the ferric ions to ferrous ions: this is the Haber-Weiss cycle. Like hydroxyl ions, alkoxy radicals pull a proton from a polysunsaturated fatty acid to form a fatty alcohol and an alkyl radical

et, par là, relancent une nouvelle châîne de réactions: c'est la phase de réactivation.  and, thereby, relaunch a new chain of reactions: this is the reactivation phase.

Dans l'étape de terminaison, le blocage de la chaîne d'auto-oxydation peut se produire spontanément au niveau des radicaux alkyles et peroxyalkyles par interaction avec des radicaux libres de même nature ou d'autres formés sur des  In the termination step, the blocking of the auto-oxidation chain can occur spontaneously at the level of the alkyl and peroxyalkyl radicals by interaction with free radicals of the same kind or of others formed on

chaînes peptidiques ou nucléiques. C'est la terminaison bimoléculaire de Russel.  peptide or nucleic acid chains. It is Russel's bimolecular ending.

Ce mécanisme est toutefois peu actif.  However, this mechanism is not very active.

Toutes les cytomembranes sont susceptibles d'être attaquées dès la phase d'initiation. En effet, la peroxydation des lipides insaturés membranaires altère leur structure, leur perméabilité et leur fonctionnalité avec perturbation des potentiels transmembranaires, des flux ioniques et des transports membranaires, inactivation des récepteurs membranaires et dérégulation des signaux de transduction. Ces  All cytomembranes are susceptible to attack from the initiation phase. Indeed, the peroxidation of unsaturated membrane lipids alters their structure, their permeability and their functionality with disturbance of transmembrane potentials, ion fluxes and membrane transport, inactivation of membrane receptors and deregulation of transduction signals. These

altérations sont irréversibles et peuvent aboutir à la lyse des cellules.  alterations are irreversible and can lead to cell lysis.

Comme la peroxydation lipidique est une réaction en chaîne, les effets intramembranaires des radicaux libres se prolongent méme lorsque l'attaque  Since lipid peroxidation is a chain reaction, the intramembrane effects of free radicals continue even when the attack

radicalaire s'estompe.radical fades.

Dans le cadre de la présente invention, il a été démontré que l'extrait de  In the context of the present invention, it has been demonstrated that the extract of

Cystoseira stricta possèdent des effets protecteurs des cytomembranes.  Cystoseira stricta have protective effects on cytomembranes.

Ces résultats sont prouvés à l' aide de tests in vitro sur kératinocytes et fibroblastes soumis à trois systèmes peroxydatifs différents: - le système enzymatique hypoxanthine-xanthine oxydase qui génère des anions superoxydes et du peroxyde d'hydrogène, - 1' action du t-butyl hydroperoxyde en présence d'ions ferreux qui génère des radicaux alkoxyles et - 1' irradiation des rayonnements WA qui libère de l'oxygène singulet et  These results are proven using in vitro tests on keratinocytes and fibroblasts subjected to three different peroxidative systems: - the hypoxanthine-xanthine oxidase enzyme system which generates superoxide anions and hydrogen peroxide, - the action of t- butyl hydroperoxide in the presence of ferrous ions which generates alkoxy radicals and - 1 irradiation of WA radiation which releases singlet oxygen and

des radicaux hydroxyles.hydroxyl radicals.

Ces effets ont été appréciés selon une approche biochimique d'évaluation d'une activité enzymatique: la lactate déshydrogénase cytoplasmique. Le dosage classique de la lactate déshydrogénase présente dans le cytoplasme cellulaire  These effects were assessed according to a biochemical approach to the evaluation of an enzymatic activity: cytoplasmic lactate dehydrogenase. The classic dosage of lactate dehydrogenase present in the cell cytoplasm

permet de quantifier les altérations membranaires occasionnées par une agression.  allows to quantify the membrane alterations caused by an attack.

En effet, la libération de l'enzyme dans le milieu de culture traduit l'altération de la  Indeed, the release of the enzyme in the culture medium reflects the alteration of the

membrane plasmique.plasma membrane.

Selon le type d' agression, l' extrait objet du présent brevet est incorporé à raison de 2 ou 4% soit dans le milieu de culture complet soit dans le PBS d'après plusieurs modalités: avant l'agression pendant 48 heures (P1), pendant l'agression 3 0 (P2) ainsi qu' avant et pendant l' agression (P3). Le standard choisi est l' alpha tocophérol incorporé à la dose de 5.10 M après avoir été dilué au préalable dans - 11 de l'éthanol à 5% (10-2M). Les détails des protocoles expérimentaux sont fournis  Depending on the type of attack, the extract which is the subject of this patent is incorporated at a rate of 2 or 4% either in the complete culture medium or in the PBS according to several methods: before the attack for 48 hours (P1) , during the assault 30 (P2) as well as before and during the assault (P3). The standard chosen is alpha tocopherol incorporated at a dose of 5.10 M after having been previously diluted in - 11 of 5% ethanol (10-2M). Details of experimental protocols are provided

pour chaque exemple.for each example.

Tous les résultats sont exprimés en % d'activité protectrice par rapport aux cellules témoins à partir de la formule suivante: C (%) = [ (A-B)A] x 100] pour laquelle A = [ DOCT - DOCA)/ DOCT] x 100 B [ DO CTB-DOCAB) / DOCTB]x 100 avec DO: densités optiques CT: cellules témoins non agressées, cultivées sans extrait CA: cellules agressées, non protégées par l'extrait CTB: cellules témoins non agressés, cultivées en présence d'extrait  All the results are expressed in% of protective activity relative to the control cells from the following formula: C (%) = [(AB) A] x 100] for which A = [DOCT - DOCA) / DOCT] x 100 B [DO CTB-DOCAB) / DOCTB] x 100 with DO: optical densities CT: unaggressed control cells, cultured without extract CA: assaulted cells, not protected by the CTB extract: unaggressed control cells, cultured in the presence of 'extract

CAB: cellules agressées, protégées par l'extrait.  CAB: attacked cells, protected by the extract.

Ils représentent la moyenne de trois expérimentations avec 3 points pour  They represent the average of three experiments with 3 points for

chaque traitement. Les moyennes sont exprimées avec un risque d'erreur a = 0,05.  each treatment. The means are expressed with a risk of error a = 0.05.

3 -1 Protection des cytomembranes vis-à-vis des anions superoxydes et du peroxyde d'hydrogène Cet exemple démontre les effets protecteurs de l'extrait selon l'invention sur des kératinocytes et des fibroblastes en culture soumis à une agression du système hypoxanthine-xanthine oxydase qui génère des anions superoxydes et du  3 -1 Protection of Cytomembranes Against Superoxide Anions and Hydrogen Peroxide This example demonstrates the protective effects of the extract according to the invention on keratinocytes and fibroblasts in culture subjected to an attack on the hypoxanthine system. xanthine oxidase which generates superoxide anions and

peroxyde d'hydrogène.hydrogen peroxide.

Conditions expérimentales et résultats: Le protocole utilisé dans cet exemple est adapté des travaux de Noël  Experimental conditions and results: The protocol used in this example is adapted from Christmas work

Hudson et al., (1990 - Int. J. Cosmetic Sc., 12: 105-114).  Hudson et al., (1990 - Int. J. Cosmetic Sc., 12: 105-114).

Des suspensions de kératinocytes et de fibroblastes sont ensemencées dans leur milieu de culture respectif dans des microplaques 96 puits. Après 24 h d' incubation, à 3 7 C dans une atmosphère à 5% de CO2, le milieu est éliminé et remplacé par du milieu neuf. L,ajout de l'extrait objet du présent brevet est réalisé -12 aux concentrations de 2% et 4% avant l'agression (P1) ainsi qu'avant et pendant  Suspensions of keratinocytes and fibroblasts are seeded in their respective culture medium in 96-well microplates. After 24 h of incubation, at 37 ° C. in an atmosphere at 5% CO 2, the medium is removed and replaced with new medium. The addition of the extract which is the subject of this patent is carried out -12 at the concentrations of 2% and 4% before the attack (P1) as well as before and during

l'agression (P3) pour les deux types cellulaires.  aggression (P3) for both cell types.

L'agression est réalisée dans du PBS pendant 150 minutes avec les concentrations en hypoxanthine de 160 g.ml et en xanthine-oxydase de 20 mU.mli pour les kératinocytes et de 5 mU.mli pour les fibroblastes. L'évaluation du relargage de la lactate deshydrogenase est effectuée sur le surnageant après l'agression. Pour une dose de 2% d'extrait selon l' invention et avec les conditions 0 expérimentales définies dans le présent brevet, l'activité protectrice antiradicalaire (en %) est pour - les kératinocytes de 74 + 4 pour P1 et 111 + 5 pour P3  The aggression is carried out in PBS for 150 minutes with the hypoxanthine concentrations of 160 g.ml and xanthine oxidase of 20 mU.mli for keratinocytes and 5 mU.mli for fibroblasts. The evaluation of the release of lactate dehydrogenase is carried out on the supernatant after the attack. For a dose of 2% of extract according to the invention and with the experimental conditions defined in this patent, the anti-free radical protective activity (in%) is for - the keratinocytes of 74 + 4 for P1 and 111 + 5 for P3

- les fibroblastes de 50 + 2 pour P 1 et 103 + 4 pour P3.  - fibroblasts of 50 + 2 for P 1 and 103 + 4 for P3.

Pour une dose de 4% dudit extrait, cette activité protectrice antiradicalaire est pour - les kératinocytes de 85 + 4 pour P1 et 128 + 6 pour P3 - les fibroblastes de 79 i 4 pour P1 et 126 + 6 pour P3. On constate que l'alpha-tocophérol, qui est la référence, conduit à un résultat pour - les kératinocytes de 94 + 4 pour P1 et 150 + 7 pour P3  For a dose of 4% of said extract, this anti-free radical protective activity is for - keratinocytes of 85 + 4 for P1 and 128 + 6 for P3 - fibroblasts of 79 i 4 for P1 and 126 + 6 for P3. We note that alpha-tocopherol, which is the reference, leads to a result for - keratinocytes of 94 + 4 for P1 and 150 + 7 for P3

- les fibroblastes de 67 + 3 pour P1 et 79 + 4 pour P3.  - fibroblasts of 67 + 3 for P1 and 79 + 4 for P3.

Les analyses réalisées par les inventeurs démontrent bien que l'extrait de Cystoseira selon l'invention possède un effet protecteur des cytomembranes des kératinocytes et des fibroblastes vis-à-vis des radicaux libres générés par l'agression du système hypoxanthine-xanthine oxydase. Au niveau de la lipoperoxydation, cet effet traduit un blocage de la phase d' initiation et du cycle de  The analyzes carried out by the inventors clearly demonstrate that the Cystoseira extract according to the invention has a protective effect on the cytomembranes of keratinocytes and fibroblasts against free radicals generated by the aggression of the hypoxanthine-xanthine oxidase system. At the lipoperoxidation level, this effect reflects a blockage of the initiation phase and the

2 5 Haber- We is s.2 5 Haber- We is s.

3 - 2 Protection des cytomembranes vis-à-vis des radicaux alkoxyles Cet exemple démontre les effets protecteurs de l'extrait selon l'invention sur des kératinocytes et des fibroblastes en culture soumis à une agression du t  3 - 2 Protection of Cytomembranes Against Alkoxy Radicals This example demonstrates the protective effects of the extract according to the invention on keratinocytes and fibroblasts in culture subjected to an aggression of t

butyl hydroperoxyde qui en présence de fer ferreux génère des radicaux alkoxyles.  butyl hydroperoxide which in the presence of ferrous iron generates alkoxy radicals.

- 13 Conditions expérimentales et résultats: L'agression est réalisée dans le milieu de culture complet pendant 7h pour les kératinocytes et pendant 6h pour les fibroblastes à 37 C dans une atmosphère avec 5% de CO2. L'ajout de l'extrait objet du présent brevet est réalisé aux concentrations de 2% et 4% pendant l'agression (P2) ainsi qu' avant et pendant  - 13 Experimental conditions and results: The aggression is carried out in the complete culture medium for 7 hours for keratinocytes and for 6 hours for fibroblasts at 37 ° C. in an atmosphere with 5% CO 2. The addition of the extract which is the subject of this patent is carried out at concentrations of 2% and 4% during the attack (P2) as well as before and during

l'agression (P3) pour les deux types cellulaires.  aggression (P3) for both cell types.

Pour une dose de 2% d'extrait selon l' invention et avec les conditions 0 expérimentales définies dans le présent brevet, l'activité protectrice antiradicalaire est (en %) pour - les kératinocytes de 47 + 2 pour P2 et 116 + 5 pour P3  For a dose of 2% of extract according to the invention and with the experimental conditions defined in this patent, the anti-free radical protective activity is (in%) for - the keratinocytes of 47 + 2 for P2 and 116 + 5 for P3

- les fibroblastes de 37 + 2 pour P2 et 58 + 3 pour P3.  - fibroblasts of 37 + 2 for P2 and 58 + 3 for P3.

Pour une dose de 4% dudit extrait, cette activité protectrice antiradicalaire est pour - les kératinocytes de 53 * 3 pour P2 et 12X + 6 pour P3  For a dose of 4% of said extract, this anti-radical protective activity is for - keratinocytes of 53 * 3 for P2 and 12X + 6 for P3

1S - les fibroblastes de 61 + 4 pour P2 et 74 + 4 pour P3.  1S - fibroblasts of 61 + 4 for P2 and 74 + 4 for P3.

On constate que la réLérence à savoir l'alpha-tocophérol conduit à un résultat de: - les kératinocytes de 40 + 2 pour P1 et 107 + 5 pour P3  We note that the reference to alpha-tocopherol leads to a result of: - keratinocytes of 40 + 2 for P1 and 107 + 5 for P3

- les fibroblastes de 49 + 3 pour P1 et 78 + 4 pour P3.  - fibroblasts of 49 + 3 for P1 and 78 + 4 for P3.

Les analyses réalisées par les inventeurs démontrent bien que l'extrait de Cystoseira stricta selon l'invention possède un efiSet protecteur des cytomembranes des kératinocytes et des fibroblastes vis-à-vis des radicaux alkoxyles générés par l'agression du t-butyl hydroperoxyde. Au niveau de la lipoperoxydation, cet effet  The analyzes carried out by the inventors clearly demonstrate that the extract of Cystoseira stricta according to the invention has a protective efiSet for the cytomembranes of keratinocytes and fibroblasts against alkoxy radicals generated by the aggression of t-butyl hydroperoxide. At the level of lipoperoxidation, this effect

traduit donc un blocage de la phase de réactivation.  therefore reflects a blockage of the reactivation phase.

2s 3 - 3 Protection des cytomembranes vis-à-vis des rayonnements UVA Cet exemple démontre les eets protecteurs de l'extrait selon l'invention sur des fibroblastes en culture soumis à des rayonnements WA. Les ultraviolets  2s 3 - 3 Protection of cytomembranes against UVA radiation This example demonstrates the protective eects of the extract according to the invention on fibroblasts in culture subjected to WA radiation. Ultraviolet

libèrent à l'intérieur des cellules des radicaux hydroxyles et de l'oxygène singulet.  release hydroxyl radicals and singlet oxygen inside the cells.

Conditions expérimentales et résultats: L'agression est réalisée dans du PBS pendant 6h. L'ajout de l'extrait objet du présent brevet est réalisé aux concentrations de 2% et 4% avant l'agression (P1) et avant et pendant l'agression (P3). L'évaluation du relargage de la lactate  Experimental conditions and results: The aggression is carried out in PBS for 6 h. The addition of the extract which is the subject of this patent is carried out at concentrations of 2% and 4% before the attack (P1) and before and during the attack (P3). Lactate release assessment

déshydrogénase est effectuée sur le surnageant à la fin de l'essai.  dehydrogenase is carried out on the supernatant at the end of the test.

Pour une dose de 2% d'extrait selon l' invention et avec les conditions expérimentales définies dans le présent brevet, l'activité protectrice antiradicalaire  For a dose of 2% of extract according to the invention and with the experimental conditions defined in this patent, the anti-free radical protective activity

o est (en %) de 52 + 3 pour P1 et 140 + 6 pour P3.  o is (in%) of 52 + 3 for P1 and 140 + 6 for P3.

Pour une dose de 4% dudit extrait, cette activité protectrice antiradicalaire  For a dose of 4% of said extract, this anti-radical protective activity

passe à 68 i 4 pour P1 et 148 + 6 pour P3.  goes to 68 i 4 for P1 and 148 + 6 for P3.

Les analyses réalisces par les inventeurs démontrent bien que l'extrait de Cystoseira stricta selon l'invention possède un effet protecteur des cytomembranes des kératinocytes et des fibroblastes vis-à-vis des rayonnements ultraviolets A. Les résultats obtenus par les inventeurs et présentés dans l'exemple 3 prouvent bien que l'extrait de Cystoseira stricta selon l'invention protège les  The analyzes carried out by the inventors clearly demonstrate that the extract of Cystoseira stricta according to the invention has a protective effect on the cytomembranes of keratinocytes and fibroblasts against ultraviolet A radiation. The results obtained by the inventors and presented in l example 3 prove that the extract of Cystoseira stricta according to the invention protects the

cytomembranes des dogâts nocifs occasionnés par la peroxydation lipidique.  cytomembranes of harmful dogats caused by lipid peroxidation.

L' inhibition des anions superoxydes, des radicaux alkoxyles et de l'oxygène singulet révèle un triple blocage de la châîne d'auto-oxydation des acides gras polyinsaturés au niveau de la phase d'initiation, du cycle de Haber-Weiss et de la phase de réactivat ion. Les résultats obtenus par le s inventeurs démontrent bien que ledit extrait permet l'arrêt de la synthèse des radicaux les plus agressifs à savoir les  The inhibition of superoxide anions, alkoxy radicals and singlet oxygen reveals a triple blockage of the auto-oxidation chain of polyunsaturated fatty acids at the initiation phase, the Haber-Weiss cycle and the reactivation phase. The results obtained by the inventors clearly demonstrate that said extract allows the synthesis of the most aggressive radicals, namely the

radicaux hydroxyles et les radicaux alkoxyles.  hydroxyl radicals and alkoxy radicals.

Le fait d'introduire le principe actif à divers stades de la culture cellulaire (avant et/ou pendant l' agression) permet de plus de préciser le mode d'action de  The fact of introducing the active principle at various stages of cell culture (before and / or during the assault) also makes it possible to specify the mode of action of

cet actif.this asset.

- Dans l'administration Pl, l'extrait est éliminé du milieu de culture avant  - In the Pl administration, the extract is eliminated from the culture medium before

- 15-.- 15-.

l'agression. L'activité enregistrée révèle que l'extrait de Cystoseira préparé selon l' invention est capable de pénétrer aussi bien dans les kératinocytes que dans les  aggression. The recorded activity reveals that the Cystoseira extract prepared according to the invention is capable of penetrating both keratinocytes and

fibroblastes pour les protéger contre les radicaux libres intracellulaires.  fibroblasts to protect them from intracellular free radicals.

- Dans l' administration P2, l'extrait est présent seulement pendant l'agression.  - In the P2 administration, the extract is present only during the aggression.

L'activité enregistrée révèle donc que ledit extrait est capable d'intercepter les radicaux libres à l'intérieur des cellules pour protéger cellesci des agressions radicalaires. - Dans l' administration P3, l'extrait est présent avant et au moment o l' agression enzymatique se déroule. L'activité enregistrée confrme bien que l'extrait possède  The recorded activity therefore reveals that said extract is capable of intercepting free radicals inside the cells to protect them from free radical attack. - In the P3 administration, the extract is present before and at the time when the enzymatic aggression takes place. The recorded activity confirms although the extract has

o une activité anti-radicalaire.o anti-radical activity.

Exemple n 4: Mise en évidence de l'effet protecteur anti-inflammatoire L'inflammation est un processus réversible résultant d'une atteinte des structures cellulaires. Les radicaux libres oxygénés amplifient ce processus, en particulier en stimulant la synthè se des médiateurs lipidique s (pro staglandines et leucotriènes). Ces substances néformées sont libérées à partir d'un constituant  Example No. 4: Demonstration of the Anti-Inflammatory Protective Effect Inflammation is a reversible process resulting from damage to cellular structures. Oxygenated free radicals amplify this process, in particular by stimulating the synthesis of lipid mediators (pro staglandins and leukotrienes). These reformed substances are released from a constituent

normal des membranes cellulaires: l'acide arachidonique.  normal cell membranes: arachidonic acid.

L'acide arachidonique est libéré à partir des phospholipides membranaires sous l' action des phospholipases A2 (et C). I1 se produit alors une oxydation ,.,; progressve realsee - par la cyclo-oxygénase qui enlève l'hydrogène en C13 de l'acide arachidonique et forme les prostaglandines et les thromboxanes et - par la 5 -lipoxygénase qui enlève l' hydrogène en C7 de l' acide arachidonique et forme les lencotriènes.  Arachidonic acid is released from membrane phospholipids under the action of phospholipases A2 (and C). I1 then occurs an oxidation,.,; progressve realsee - by cyclooxygenase which removes C13 hydrogen from arachidonic acid and forms prostaglandins and thromboxanes and - by 5-lipoxygenase which removes C7 hydrogen from arachidonic acid and forms lencotrienes .

Les médiateurs néoformés: lencotriènes, prostaglandines et thromboxanes  Newly trained mediators: lencotrienes, prostaglandins and thromboxanes

agissent sur la perméabilité des vaisseaux et occasionnent des effets douloureux.  act on the permeability of the vessels and cause painful effects.

Les deux exemples insérés ci-après illustrent l'action inhibitrice que présente l'extrait selon l'invention à deux niveaux du processus inflammatoire, à savoir une  The two examples inserted below illustrate the inhibitory action presented by the extract according to the invention at two levels of the inflammatory process, namely a

activité anti-phospholipase A2 et une activité anti-lipoxygénase.  anti-phospholipase A2 activity and anti-lipoxygenase activity.

- 16 4 - 1 Inhibition de la phospholipase A Cet exemple démontre l'activité inhibitrice de l'extrait de Cystoseira stricta  - 16 4 - 1 Inhibition of phospholipase A This example demonstrates the inhibitory activity of the extract of Cystoseira stricta

préparé selon l' invention, vis-à-vis de la phospholipase A2.  prepared according to the invention, with respect to phospholipase A2.

Conditions expérimentales et résultats:  Experimental conditions and results:

Le protocole utilisé est adapté des travaux de Uthe & Magge (1971 - Can.  The protocol used is adapted from the work of Uthe & Magge (1971 - Can.

J. 13iochem., 49: 776) et de ceux de Dennis (1973 - J. Lipids Res., 14: 152}.  J. 13iochem., 49: 776) and those of Dennis (1973 - J. Lipids Res., 14: 152}.

lo Le milieu réactionnel renferme le substrat (un phospholipide: L phosphatidylcholine dimyristoyl) et l'extrait à tester en concentrations croissantes: 2% - 3% - 4% et 5%. En présence de l'enzyme phospholipase A2, le phospholipide se transforme en lysolécithine avec libération d'un acide gras insoluble dans le milieu. La réaction est suivie par turbimétrie au moyen d'un spectrophotomètre à la longueur d'onde de 360 nm. Le s valeurs rapportées correspondent à la moyenne arithmétique de tro is  lo The reaction medium contains the substrate (a phospholipid: L phosphatidylcholine dimyristoyl) and the extract to be tested in increasing concentrations: 2% - 3% - 4% and 5%. In the presence of the enzyme phospholipase A2, the phospholipid transforms into lysolecithin with release of a fatty acid insoluble in the medium. The reaction is monitored by turbimetry using a spectrophotometer at the wavelength of 360 nm. The reported values correspond to the arithmetic mean of three

essais effectués pour chaque concentration d'extrait algal.  tests carried out for each concentration of algal extract.

Avec les concentrations croissantes de l'extrait de Cystoseira stricta selon l'invention, à savoir 1% - 2,5% - 5% et 7,5%, on observe une inhibition de  With the increasing concentrations of the extract of Cystoseira stricta according to the invention, namely 1% - 2.5% - 5% and 7.5%, an inhibition of

l'activité enzymatique de 34% - 70% - 86% et 88% respectivement.  the enzyme activity of 34% - 70% - 86% and 88% respectively.

4 - 2 Inhibition de la 5-lipowénase Cet exemple démontre l'activité inhibitrice de l'extrait de Cystoseira stricta  4 - 2 Inhibition of 5-lipowenase This example demonstrates the inhibitory activity of the extract of Cystoseira stricta

préparé selon l' invention vis-à-vis de la 5-lipoxygénase.  prepared according to the invention with respect to 5-lipoxygenase.

La S-lipoxygénase est l'enzyme-clé de la synthèse des lencotriènes à partir  S-lipoxygenase is the key enzyme for the synthesis of lencotrienes from

de l'acide arachidonique.arachidonic acid.

Les lencotriènes sont impliqués dans le développement de tumeurs de la peau et dans plusieurs autres maladies (asthme, psoriasis...}. Le leucotriène B4 - 17 induit la chimiotaxie et l'aggrégation des lencocytes. Les leucotriènes C, D et E sont impliqués dans l'anaphylaxie (choc allergique généralisé) en tant qu'inducteurs de la bronchoconstriction et des changements de perméabilité  Lencotrienes are involved in the development of skin tumors and in several other diseases (asthma, psoriasis ...}. Leukotriene B4 - 17 induces chemotaxis and aggregation of lencocytes. Leukotrienes C, D and E are involved in anaphylaxis (generalized allergic shock) as inducers of bronchoconstriction and changes in patency

vasculaire des poumons.vascular of the lungs.

Les lencotriènes sont présents dans les polynucléaires neutrophiles. En se fixant sur des récepteurs de nombreuses cellules, ils occasionnent des effets bio logiques néLastes et conduisent aux phénomènes d' irritation, de douleur et de rougeurs. lo Conditions expérimentales et résultats: Le protocole utilisé est celui exposé dans les revues Methods of Enzymatic  Lencotrienes are present in neutrophils. By binding to receptors of many cells, they cause negative biological effects and lead to the phenomena of irritation, pain and redness. lo Experimental conditions and results: The protocol used is that described in the Methods of Enzymatic journals

Analysis (411, 1965) et Brit. Med. Bull., (30: 219, 1989).  Analysis (411, 1965) and Brit. Med. Bull., (30: 219, 1989).

Le milieu réactionnel renferme le substrat (un acide gras insaturé: l'acide linoléique) et l'extrait à tester en concentrations croissantes: 1% - 1,5% - 2% et 2,5%. En présence de l'enzyme, l'acide linoléique se transforme en acide 5 hydroperoxy-6,8,11,14-eicosatétraénoique (5 HÉETE3 dont la formation est suivie  The reaction medium contains the substrate (an unsaturated fatty acid: linoleic acid) and the extract to be tested in increasing concentrations: 1% - 1.5% - 2% and 2.5%. In the presence of the enzyme, linoleic acid is transformed into 5 hydroperoxy-6,8,11,14-eicosatetraenoic acid (5 HÉETE3 whose formation is followed

à 234 nm.at 234 nm.

Les valeurs rapportées correspondent à la moyenne arithmétique de trois  The reported values correspond to the arithmetic mean of three

essais effectués pour chaque concentration d'extrait algal.  tests carried out for each concentration of algal extract.

Avec le s concentrations cro is santes de l extrait de Cystose ira stricta selo n l'invention, à savoir 1,5% - 2% - 2,5% - 3% et 4%, on observe une inhibition de  With the increasing concentrations of the Cystose extract will go strictly according to the invention, namely 1.5% - 2% - 2.5% - 3% and 4%, an inhibition of

l'activité enzymatique de 38% - 6Q% - 90% - 97% et 100% respectivement.  the enzymatic activity of 38% - 6Q% - 90% - 97% and 100% respectively.

Les résultats de ces deux derniers exemples démontrent que l'extrait objet du présent brevet présente d' importantes capacités d' inhibition au niveau de deux des enzymes fortement impliquces dans les processus inflammatoires à savoir la  The results of these last two examples demonstrate that the extract which is the subject of this patent has significant inhibitory capacities at the level of two of the enzymes strongly implicated in inflammatory processes, namely the

phospholipase A2 et la 5-lipoxygénase.  phospholipase A2 and 5-lipoxygenase.

- 18 Ces propriétés permettent des applications o l'on recherche à limiter ou à bloquer les processus de formation des médiateurs de l' inflammation et de l'allergie cutanée. Elles sont aussi utiles dans les traitements visant à atténuer ou à supprimer les irritations, les picoternents, les manifestations allergiques, les érythèmes et les rougeurs. Conclusion Les exemples ci-dessus démontrent que l'extrait préparé à partir de la o macroalgue Cystoseira stricta (= Cystoseira amentacea variété stricta) selon l'invention présente de bonnes capacités réparatrices des lésions de 1'ADN mais aussi des capacités élevées à inhiber les conséquences néLastes de la lipoperoxydation membranaire et cela au niveau des deux mécanismes de cette peroxydation à savoir le mécanisme non enzymatique qui attaque toutes les cytomembranes et le mécanisme enzymatique qui déclenche les processus inflammatoires. Ainsi, ledit extrait peut être avantageusement utilisé dans diverses applications impliquant en particulier: - la protection du matériel génétique vis-à-vis par exemple des radicaux libres et des rayonnements ultraviolets, l'inhibition de la dégradation et/ ou de la destruction des cellules, - la lutte contre les effets du vieillissement intrinsèque et/ou extrinsèque des cellules, particulièrement des cellules de la peau, - l' inhibition voire la suppression des processus inDarnmatoires comme par exemple les manifestations allergiques au niveau de la peau, - le traitement des peaux dites sensibles, - le traitement des érythèmes cutanés, particulièrement les érythèmes induits par les rayonnements ultraviolets ou encore les éruptions érythémateuses localisées ou diffuses sur la peau et causées par divers agents infectieux ou non. - 19 Lesdites compositions utilisant la présente invention renferment ledit extrait à titre de principe actif, seul ou en association avec au moins un autre principe  - 18 These properties allow applications where one seeks to limit or block the processes of formation of mediators of inflammation and skin allergy. They are also useful in treatments aimed at reducing or eliminating irritations, stinging, allergic manifestations, erythema and redness. Conclusion The above examples demonstrate that the extract prepared from the macroalga o Cystoseira stricta (= Cystoseira amentacea variety stricta) according to the invention has good repair capacities for DNA lesions but also high capacities for inhibiting neLast consequences of membrane lipoperoxidation and this at the level of the two mechanisms of this peroxidation, namely the non-enzymatic mechanism which attacks all cytomembranes and the enzymatic mechanism which triggers inflammatory processes. Thus, said extract can be advantageously used in various applications involving in particular: - the protection of genetic material from, for example, free radicals and ultraviolet radiation, the inhibition of the degradation and / or destruction of cells , - the fight against the effects of intrinsic and / or extrinsic aging of cells, particularly of skin cells, - inhibition or even suppression of inDarnmatory processes such as allergic manifestations in the skin, - treatment of so-called sensitive skin, - the treatment of cutaneous erythema, particularly erythema induced by ultraviolet radiation or localized or diffuse erythematous eruptions on the skin and caused by various infectious agents or not. - 19 Said compositions using the present invention contain said extract as active principle, alone or in combination with at least one other principle

actif, mais en quantité efficace pour une application topique.  active, but in an effective amount for topical application.

De manière avantageuse, la composition finale desdits produits renferme entre 0,1% et 40% (p/p), préLérentiellement entre 1% et 5% en poids de l'extrait  Advantageously, the final composition of said products contains between 0.1% and 40% (w / w), preferably between 1% and 5% by weight of the extract.

préparé selon l'invention.prepared according to the invention.

L' extrait objet de la présente invention peut être employé dans les o compositions cosmétiques ou dermatotologiques pour l'exploitation soit d'une des activités ou propriétés démontrées et prise isolément, soit d'au moins deux de ces  The extract which is the subject of the present invention can be used in cosmetic or dermatological compositions for the exploitation either of one of the activities or properties demonstrated and taken in isolation, or of at least two of these

activités soit encore de toutes ces activités considérces ensemble.  activities are still all of these activities considered together.

Ledit extrait peut être incorporé sous toutes les formes galéniques normalement employées dans les domaines cosmétique et dermatologique pour une application topique sur la peau, notamment les solutions aqueuses ou huileuses ou le s dispersions du type lotion ou sérum, les émuls ions de consistance liquide ou semi-liquide du type lait obtenues par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse (H/E) ou inversement (E/EI), les suspensions ou émulsions de o consistance molle du type crème ou gel aqueux ou anhydre, les dispersions  Said extract can be incorporated in all the galenical forms normally used in the cosmetic and dermatological fields for topical application to the skin, in particular aqueous or oily solutions or dispersions of the lotion or serum type, emulsions ions of liquid or semi consistency. -liquid of the milk type obtained by dispersion of a fatty phase in an aqueous phase (O / W) or vice versa (E / W), the suspensions or emulsions of o soft consistency of the aqueous or anhydrous cream or gel type, the dispersions

vésiculaires de type ionique et/ou non ionique.  Ionic and / or non-ionic vesicles.

En application sur les phanères, ledit extrait peut être incorporé aussi sous diverses formes galéniques, notamment sous la forme de solutions aqueuses, alcooliques ou hydroalcooliques ou encore de crèmes, de gels, d'émulsions, de  When applied to the integuments, said extract can also be incorporated in various galenical forms, in particular in the form of aqueous, alcoholic or hydroalcoholic solutions or also of creams, gels, emulsions,

mousses et même d'aérosols avec un agent propulseur sous pression.  foams and even aerosols with a pressurized propellant.

Ces compositions cosmétiques et dermatologiques selon l' invention peuvent constituer des crèmes de nettoyage, de protection, de traitement ou de soin pour le visage ou encore le corps (par exemple crèmes de jour ou de nuit, crèmes démaquillantes, crèmes de fond de teint, crème anti- so laires), des fonds de teint, -20 des laits de démaquillage, des laits corporels de soin ou de protection ou encore anti-solaires, des lotions pour la peau et les phanères, des mousses pour le soin  These cosmetic and dermatological compositions according to the invention can constitute cleaning, protection, treatment or care creams for the face or the body (for example day or night creams, make-up removing creams, foundation creams, anti-soals cream), foundations, -20 cleansing milks, body care or protective milks or even anti-sun, lotions for skin and integuments, foams for care

cutané, des compositions pour le bain ou pour les cheveux, des compositions anti-  skin, bath or hair compositions, anti-hair loss compositions

solaires ou après-rasage ou encore épilatoires sans que ces listes soient exhaustives. Toutes ces compositions sont préparées selon les méthodes habituelles  sunscreen or after shave or depilatory without these lists being exhaustive. All these compositions are prepared according to the usual methods

de l'homme du métier.of the skilled person.

L' extrait de Cystoseira stricla selon l'invention peut être combiné dans lesdites compositions cosmétiques et dermatologiques avec tout autre ingrédient lO habituellement utilisé dans les formulations en application topique: les lipides d'extraction et/ou de synthèse, les polymères gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les tensioactifs, les émulsionnants, les conservateurs, les antioxydants, les parfums, les vitamines, les émollients, les séquestrants, les dépigmentants, les filtres solaires, les agents amincissants, les céramides, les matières colorantes, les bactéricides, les antipelliculaires, les principes actifs hydro- ou liposolubles, les extraits de plantes,  The extract of Cystoseira stricla according to the invention can be combined in said cosmetic and dermatological compositions with any other ingredient lO usually used in formulations in topical application: extraction and / or synthetic lipids, hydrophilic or lipophilic gelling polymers , surfactants, emulsifiers, preservatives, antioxidants, perfumes, vitamins, emollients, sequestrants, depigmentants, sunscreens, slimming agents, ceramides, dyes, bactericides, dandruff, water- or fat-soluble active ingredients, plant extracts,

les extraits marins, les extraits tissulaires sans que cette liste soit limitative.  marine extracts, tissue extracts without this list being exhaustive.

Bien entendu, on veillera à sélectionner le ou les éventuels ingrédients à ajouter aux dites compositions de manière à ne pas altérer ou substantiellement altérer les propriétés avantageusement attachées à ces compositions et à les ajouter  Of course, care will be taken to select the possible ingredient (s) to be added to said compositions so as not to alter or substantially alter the properties advantageously attached to these compositions and to add them

selon des quantités classiquement employées dans le domaine cosmétique.  in amounts conventionally used in the cosmetic field.

Il est également possible d' incorporer l'extrait algal selon l' invention dans tout vecteur cosmétique adéquat comme par exemple des agents filmogènes, des  It is also possible to incorporate the algal extract according to the invention into any suitable cosmetic carrier such as, for example, film-forming agents,

liposomes, des chylomicrons, des cyclodextrines, des micelles, des macro-, micro-  liposomes, chylomicrons, cyclodextrins, micelles, macro-, micro-

et nanoparticules des macro-, micro- et nanocapsules, ou encore de les absorber sur  and nanoparticles of macro-, micro- and nanocapsules, or to absorb them on

des polymères organiques, des supports textiles et minéraux.  organic polymers, textile and mineral supports.

- 21- 21

Claims (10)

REVENDICATIONS 1 - Compositions cosmétiques et dermatologiques caractérisées en ce qu'elles contiennent un extrait de l' algue brane Cystoseira stricta Sauvageau (= Cystoseira amentacea Bory variété stricta Montagne). 2 Compositions cosmétiques et dermatologiques selon la revendication 1 caractérisées en ce que l'on réalise l'extraction à partir de thalles ou toute partie de thalles de ladite algue sous forme fra^che, congelée, sèche, entière, fragmentée ou broyée. 3 - Compositions cosmétiques et dermatologiques selon l'une quelconque  1 - Cosmetic and dermatological compositions characterized in that they contain an extract of the bran alga Cystoseira stricta Sauvageau (= Cystoseira amentacea Bory variety stricta Montagne). 2 Cosmetic and dermatological compositions according to claim 1 characterized in that one carries out the extraction from thalli or any part of thalli of said alga in fresh, frozen, dry, whole, fragmented or crushed form. 3 - Cosmetic and dermatological compositions according to any one des revendications 1 et 2 caractérisées en ce que ledit extrait est obtenu par  claims 1 and 2 characterized in that said extract is obtained by macération des thalles de ladite algue, suivie de filtrations, centrifugation,  maceration of the thalli of the said alga, followed by filtration, centrifugation, ultrafiltrations et concentration.ultrafiltration and concentration. 4 - Compositions cosmétiques et dermatologiques selon l'une quelconque  4 - Cosmetic and dermatological compositions according to any one des revendications 2 et 3 caractérisées en ce que la macération peut étre remplacée  claims 2 and 3 characterized in that the maceration can be replaced par des techniques à contre courant, la décoction, l' extraction sous reflux, 1' extraction à l' aide d'ultrasons, de micro -ondes associée ou non aux so lvants, l'extraction par des fluides supercritiques, notamment le CO2 supercritique avec ou  by countercurrent techniques, decoction, extraction under reflux, extraction using ultrasound, microwaves associated or not with solvents, extraction by supercritical fluids, in particular supercritical CO2 with or sans co-solvant.without co-solvent. 5 - Compositions cosmétiques et dermatologiques selon l'une quelconque  5 - Cosmetic and dermatological compositions according to any one des revendications 2 à 4 caractérisées en ce que le solvant d'extraction est choisi  of claims 2 to 4, characterized in that the extraction solvent is chosen parmi le groupe constitué par l'eau, les solvants chlorés tel que le chloroforme, les éthers tels que l'éther éthylique, l'acétone, les esters en C2 à C8 tels que l'acétate d'éthyle et l'acétate de butyle, des alcools en C1 à C6 tels que le méthanol, l' éthanol, l' isopropanol et le butanol, des polyols en C2 à C6 tels que le propylène  from the group consisting of water, chlorinated solvents such as chloroform, ethers such as ethyl ether, acetone, C2 to C8 esters such as ethyl acetate and butyl acetate , C1 to C6 alcohols such as methanol, ethanol, isopropanol and butanol, C2 to C6 polyols such as propylene glycol et le butylène glycol et leurs mélanges.  glycol and butylene glycol and mixtures thereof. 6 - Compositions cosmétiques et dermatologiques selon l'une quelconque  6 - Cosmetic and dermatological compositions according to any one des revendications 1 à 5 caractérisces en ce que ledit extrait est utilisé soit sous  of claims 1 to 5, characterized in that said extract is used either under forme liquide soit sous forme sèche obtenue par séchage, précipitation,  liquid form or in dry form obtained by drying, precipitation, atomisation, évaporation ou lyophilisation.  atomization, evaporation or lyophilization. - 22 7 - Compositions cosmétiques et dermatologiques selon l'une quelcouque  - 22 7 - Cosmetic and dermatological compositions according to any one des revendications 1 à 6 caractérisées en ce que ledit extrait est incorporé ou  claims 1 to 6 characterized in that said extract is incorporated or associé à un vecteur cosmétique adéquat tel que par exemple des agents filmogènes, des liposomes, des chylomicrons, des micelles, des cyclodextrines, des macro-, micro- et nanoparticules, des macro-, microet nanocapsules ou absorbé  associated with a suitable cosmetic vector such as for example film-forming agents, liposomes, chylomicrons, micelles, cyclodextrins, macro-, micro- and nanoparticles, macro-, micro and nanocapsules or absorbed sur des polymères organiques, des supports textiles et minéraux.  on organic polymers, textile and mineral supports. 8 - Compositions cosmétiques et dermatologiques selon l'une quelcouque  8 - Cosmetic and dermatological compositions according to any one des revendications 1 à 7 caractérisées en ce que qu'elles comprennent de 0,1% à  of claims 1 to 7, characterized in that they comprise from 0.1% to % en poids, en particulier de 1% à 5% en poids d'extrait de ladite algue.  % by weight, in particular from 1% to 5% by weight of extract of said alga. o 9 - Compositions cosmétiques et dermatologiques selon l'une quelconque  o 9 - Cosmetic and dermatological compositions according to any one des revendications 1 à 8 caractérisées en ce que lesdites compositions se présentent  claims 1 to 8 characterized in that said compositions are presented sous toute forme galénique appropriée pour une application topique sur la peau, les  in any dosage form suitable for topical application to the skin, muqueuses et/ou les phanères dans un milieu physiologiquement acceptable.  mucous membranes and / or integuments in a physiologically acceptable medium. - Utilisation d'un extrait de Cysfoseira stricta Sauvageau (= Cystoseira amenfacea Bory variété stricta Montagne) en tant que principe actif, ledit principe actif étant incorporé seul ou en association avec au moins un autre principe actif, pour des compositions cosmétiques et dermatologiques en application topique  - Use of an extract of Cysfoseira stricta Sauvageau (= Cystoseira amenfacea Bory variety stricta Montagne) as active ingredient, said active ingredient being incorporated alone or in combination with at least one other active ingredient, for cosmetic and dermatological compositions in application topical telles que définies dans l'une des revendications 1 à 9.  as defined in one of claims 1 to 9. 11 - Utilisation d'un extrait de ladite algue selon la revendication 10 caractérisée en ce que ledit extrait présente une activité protectrice vis-à-vis de  11 - Use of an extract of said alga according to claim 10 characterized in that said extract has a protective activity vis-à-vis radicaux libres d'origines diverses.  free radicals of various origins. 12 - Utilisation d'un extrait de ladite algue selon les revendications 10 et 11  12 - Use of an extract of said alga according to claims 10 and 11 caractérisée en ce que ledit extrait présente une activité protectrice des molécules d'ADN.  characterized in that said extract exhibits protective activity against DNA molecules. 2s 13 - Utilisation selon l'une des revendications 10 à 12 caractérisée en ce  2s 13 - Use according to one of claims 10 to 12 characterized in that que lesdites compositions sont destinées à protéger le matériel génétique et à lutter contre les mutations induites notamment par les radicaux libres et les différents  that said compositions are intended to protect genetic material and to fight against mutations induced in particular by free radicals and the various rayonnements ultraviolets.ultraviolet radiation. 14 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 10 à 13  14 - Use according to any one of claims 10 to 13 caractérisée en ce que lesdites compositions sont destinées à inhiber la dégradation  characterized in that said compositions are intended to inhibit degradation et/ou la destruction des cellules.and / or the destruction of cells. - 23 - Utilisation d'un extrait de ladite algue selon l'une quelconque des  - 23 - Use of an extract of said alga according to any one of revendications 10 à 14 caractérisée en ce que ledit extrait est destiné à traiter le  claims 10 to 14 characterized in that said extract is intended to treat the vieillissement intrinsèque et/ou extrinsèque.  intrinsic and / or extrinsic aging. 16 - Utilisation d'un extrait de ladite algue selon l'une quelconque des  16 - Use of an extract of said alga according to any one of s revendications 10 à 15 caractérisée en ce que ledit extrait présente une activité  s claims 10 to 15 characterized in that said extract has an activity inhibitrice de la phospholipase A2 et/ou de la 5-lipoxygénase.  phospholipase A2 and / or 5-lipoxygenase inhibitor. 17 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 10 à 16  17 - Use according to any one of claims 10 to 16 caractérisée en ce que lesdites compositions sont destinées à traiter des peaux dites  characterized in that said compositions are intended for treating so-called skins
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