FR2819255A1 - CHEMICAL DERIVATIVES AND THEIR APPLICATION AS ANTITELOMERASE AGENT - Google Patents
CHEMICAL DERIVATIVES AND THEIR APPLICATION AS ANTITELOMERASE AGENT Download PDFInfo
- Publication number
- FR2819255A1 FR2819255A1 FR0100205A FR0100205A FR2819255A1 FR 2819255 A1 FR2819255 A1 FR 2819255A1 FR 0100205 A FR0100205 A FR 0100205A FR 0100205 A FR0100205 A FR 0100205A FR 2819255 A1 FR2819255 A1 FR 2819255A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- group
- alkyl
- carbon atoms
- compounds according
- amino
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 0 Cc1cc(N)c(cc(cc2)Nc3nc(SC)nc(N(*)*)n3)c2n1 Chemical compound Cc1cc(N)c(cc(cc2)Nc3nc(SC)nc(N(*)*)n3)c2n1 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
- C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/53—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with three nitrogens as the only ring hetero atoms, e.g. chlorazanil, melamine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
- C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
- C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D453/00—Heterocyclic compounds containing quinuclidine or iso-quinuclidine ring systems, e.g. quinine alkaloids
- C07D453/02—Heterocyclic compounds containing quinuclidine or iso-quinuclidine ring systems, e.g. quinine alkaloids containing not further condensed quinuclidine ring systems
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
<Desc/Clms Page number 1> <Desc / Clms Page number 1>
DERIVES CHIMIQUES ET LEUR APPLICATION COMME AGENT ANTITELOM ERASE
La présente invention est relative à la thérapie du cancer et concerne de nouveaux agents anticancéreux ayant un mécanisme d'action bien particulier. Elle concerne aussi de nouveaux composés chimiques ainsi que leur application thérapeutique chez l'homme. CHEMICAL DERIVATIVES AND THEIR APPLICATION AS AGENT ANTITELOM ERASE
The present invention relates to cancer therapy and relates to novel anticancer agents having a very particular mechanism of action. It also concerns new chemical compounds as well as their therapeutic application in humans.
La présente invention concerne l'utilisation de nouveaux composés chimiques non nucléotidiques qui interagissent avec des structures spécifiques de l'acide désoxyribonucléique (ADN). Ces nouveaux composés sont constitués d'un agent répartiteur lié à un groupe aminoaromatique. Ces nouveaux composés sont utiles dans le traitement des cancers et agissent en particulier en tant qu'agents inhibiteurs de la télomérase. Ils sont particulièrement utiles pour stabiliser l'ADN en structure G-quadruplexe (tétrades de guanines). L'application thérapeutique de l'inhibition de la télomérase via la stabilisation de ces G-quadruplexes est l'arrêt de la mitose
cellulaire et la mort des cellules à division rapide telles que les cellules cancéreuses et éventuellement l'induction de la sénescence des cellules cancéreuses. The present invention relates to the use of novel non-nucleotide chemical compounds that interact with specific structures of deoxyribonucleic acid (DNA). These new compounds consist of a distribution agent linked to an aminoaromatic group. These new compounds are useful in the treatment of cancers and act in particular as telomerase inhibiting agents. They are particularly useful for stabilizing DNA in G-quadruplex structure (guanine tetrads). The therapeutic application of telomerase inhibition via the stabilization of these G-quadruplexes is the arrest of mitosis
cell and death of rapidly dividing cells such as cancer cells and possibly induction of senescence of cancer cells.
Les composés de la présente invention présentent l'avantage du point de vue thérapeutique de bloquer la télomérase. Du point de vue biologique, la télomérase permet l'ajout de séquences d'ADN répétées du type T T A G G G, dites séquences télomériques, à l'extrémité du télomère,
lors de la division cellulaire. Par cette action la télomérase rend la cellule immortelle. En effet, en l'absence de cette activité enzymatique, la cellule perd à chaque division 100 à 150 bases, ce qui la rend rapidement senescente. Lors de l'apparition de cellules cancéreuses à division rapide, il est apparu que ces cellules présentaient des télomères maintenus à une longueur stable au cours de la division cellulaire. Dans ces cellules cancéreuses il est apparu que la télomérase était fortement activée et qu'elle permettait l'addition de motifs répétés de séquences télomériques à la fin du télomère et permettait donc la conservation de la longueur du télomère dans les cellules cancéreuses. Il est apparu depuis quelques temps que plus de 85 % des cellules cancéreuses présentaient des tests positifs à la présence The compounds of the present invention have the therapeutic advantage of blocking telomerase. From a biological point of view, telomerase allows the addition of TTAGGG-like repeat sequences, called telomeric sequences, at the end of the telomere,
during cell division. By this action telomerase makes the cell immortal. Indeed, in the absence of this enzymatic activity, the cell loses each division 100 to 150 bases, which makes it quickly senescente. During the appearance of rapidly dividing cancer cells, it appeared that these cells had telomeres maintained at a stable length during cell division. In these cancerous cells it was found that telomerase was highly activated and that it allowed the addition of repeated motifs of telomeric sequences at the end of the telomere and thus allowed the preservation of telomere length in cancer cells. It has been known for some time that over 85% of cancer cells tested positive for presence
<Desc/Clms Page number 2><Desc / Clms Page number 2>
de télomérase alors que les cellules somatiques ne présentent pas cette caractéristique. telomerase whereas somatic cells do not exhibit this characteristic.
Ainsi la télomérase est une cible très convoitée pour traiter les cellules cancéreuses. La première approche évidente pour bloquer la télomérase a été l'utilisation de structures nucléotidiques (Chen et al., Proc. Thus telomerase is a very coveted target for treating cancer cells. The first obvious approach to block telomerase has been the use of nucleotide structures (Chen et al., Proc.
Naht 1. Acad. Sci. USA 93 (7), 2635-2639). Parmi les composés non nucléotidiques qui ont été utilisées dans l'art antérieur on peut citer les diaminoanthraquinones (Sun et al. J. Med. Chem. 40 (14), 2113-6) ou les diethyloxadicarbocyanines (Wheelhouse R. T. Et al. J. Am. Chem. Soc. Naht 1. Acad. Sci. USA 93 (7), 2635-2639). Non-nucleotide compounds which have been used in the prior art include diaminoanthraquinones (Sun et al., J. Med Chem 40 (14), 2113-6) or diethyloxadicarbocyanines (Wheelhouse RT Et al. Am, Chem Soc.
1998 (120) 3261-2). 1998 (120) 3261-2).
Le brevet WO 99/40087 décrit l'utilisation de composés qui interagissent avec les structures G-quadruplexes qui sont des composés pérylènes et des carbocyanines contenant au moins sept cycles dont deux hétérocycles. The patent WO 99/40087 describes the use of compounds which interact with G-quadruplex structures which are perylenes compounds and carbocyanines containing at least seven rings including two heterocycles.
Il est apparu de façon tout-à-fait surprenante que des structures simples permettaient d'obtenir un résultat au moins équivalent avec des structures beaucoup moins compliquées du point de vue chimique. Les composés de la présente invention qui répondent à l'objectif visé c'est-à-dire qui fixent la structure G-quadruplex et par ce fait présentent une activité inhibitrice des télomérases répondent à la formule générale suivante : cycle aromatique azoté-NR3-répartiteur-NR'3-chaîne hydrocarbonée non aromatique dans laquelle le cycle aromatique azoté, représente : o une quinoléine éventuellement substituée par au moins o un groupe N (Ra) (Rb) dans lequel Ra et Rb, identiques ou différents représentent l'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C4 ou o un groupe ORa dans lequel Ra est défini comme précédemment o une quinoléine possédant un atome d'azote sous forme quaternaire ou It has become quite surprising that simple structures make it possible to obtain at least equivalent results with structures that are much less complicated from the chemical point of view. The compounds of the present invention which fulfill the intended purpose ie which bind the G-quadruplex structure and thereby exhibit a telomerase inhibitory activity have the following general formula: nitrogen-NR3 aromatic ring non-aromatic hydrocarbon-distribution chain-NR'3-chain in which the nitrogenous aromatic ring represents: a quinoline optionally substituted by at least one N (Ra) (Rb) group in which Ra and Rb, identical or different, represent hydrogen or a C1-C4 alkyl radical or an ORa group in which Ra is defined as above, a quinoline having a nitrogen atom in quaternary form or
<Desc/Clms Page number 3><Desc / Clms Page number 3>
o une benzamidine ou o une pyridine * R3 et R'3, identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre l'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C4 ' le répartiteur représente :
0 un groupe triazine éventuellement substitué par un radical alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un radical thio, oxy ou amino eux mêmes éventuellement substitués par une ou plusieurs chaines alkyle à chaine courte contenant 1 à 4 atomes de carbone ou encore un atome d'halogène ou
0 un groupe carbonyle ou 0 un groupe C (=NH) -NH-C (=NH) ou
0 un groupe alkylediyle contenant 3 à 7 atomes de carbone ou
0 un groupe diazine éventuellement substitué par les mêmes groupes que la triazine ou un de ses sels.
a benzamidine or a pyridine R 3 and R '3, which are identical or different, represent, independently of one another, hydrogen or a C 1 -C 4 alkyl radical, the tundish represents:
A triazine group optionally substituted with an alkyl radical having 1 to 4 carbon atoms, a thio, oxy or amino radical, themselves optionally substituted with one or more short-chain alkyl chains containing 1 to 4 carbon atoms or a hydrogen atom; halogen or
A carbonyl group or a C (= NH) -NH-C (= NH) group or
An alkylediyl group containing 3 to 7 carbon atoms or
A diazine group optionally substituted with the same groups as triazine or a salt thereof.
On entend au sens de la formule ci-dessus par chaîne hydrocarbonée non aromatique une chaîne alkyle (C1-C4), alkényle (C2-C4), linéaire ou ramifiée, cycloalkyle (C3-C18), cycloalkényle (C3-C18), hétérocycloalkyle (C3-C18). Le groupe hétérocycloalkyle inclut éventuellement l'atome d'azote. For the purposes of the above formula, the term "non-aromatic hydrocarbon chain" means a (C 1 -C 4) alkyl chain, (C 2 -C 4) alkenyl, linear or branched, (C 3 -C 18) cycloalkyl, (C 3 -C 18) cycloalkenyl, heterocycloalkyl (C3-C18). The heterocycloalkyl group optionally includes the nitrogen atom.
Il est évidemment entendu que la chaîne hydrocarbonée non aromatique peut être éventuellement substituée par un ou plusieurs atomes ou radicaux choisis parmi les atomes d'halogène, les radicaux hydroxy, aryle, hétéroaryle, alkyloxy, aryloxy, thio, alkylthio, arylthio, amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino, diarylamino, amidino, guanidino, alkylcarbonylamino, ou arylcarbonylamino, carboxyle, alkyloxycarbonyle ou aryloxycarbonyle, aminocarbonyl, alkylaminocarbonyle et/ou It is of course understood that the nonaromatic hydrocarbon chain may be optionally substituted with one or more atoms or radicals chosen from halogen atoms, hydroxy, aryl, heteroaryl, alkyloxy, aryloxy, thio, alkylthio, arylthio, amino and alkylamino radicals. and / or arylamino, dialkylamino, diarylamino, amidino, guanidino, alkylcarbonylamino, or arylcarbonylamino, carboxyl, alkyloxycarbonyl or aryloxycarbonyl, aminocarbonyl, alkylaminocarbonyl and / or
<Desc/Clms Page number 4><Desc / Clms Page number 4>
arylaminocarbonyle, dialkylaminocarbonyle, alkylcarbonyl ou arylcarbonyl, cyano et trifluorométhyle. arylaminocarbonyl, dialkylaminocarbonyl, alkylcarbonyl or arylcarbonyl, cyano and trifluoromethyl.
Les chaînes alkyle des substituants éventuels de la chaîne hydrocarbonée contiennent de préférence 1 à 4 atomes de carbone et les groupes aryles des substituants éventuels de la chaîne hydrocarbonée contiennent de préférence 5 à 18 atomes de carbone. The alkyl chains of the optional substituents of the hydrocarbon chain preferably contain 1 to 4 carbon atoms and the aryl groups of the optional substituents of the hydrocarbon chain preferably contain 5 to 18 carbon atoms.
On préfère parmi l'ensemble des composés ci-dessus inclus utiliser ceux comportant comme répartiteur un groupe triazine ou diazine. Parmi les groupes diazines on préfère utiliser les pyrimidines ou les quinazolines. Among all the above-mentioned compounds, it is preferred to use those comprising, as a distributor, a triazine or diazine group. Among the diazine groups it is preferred to use pyrimidines or quinazolines.
Parmi les chaînes hydrocarbonée on préfère les chaînes alkyle contenant 2 à 3 atomes de carbone, les chaînes hétérocycloalkyles ou cycloalkyles contenant 4 à 7 atomes de carbone.
Among the hydrocarbon chains, alkyl chains containing 2 to 3 carbon atoms and heterocycloalkyl or cycloalkyl chains containing 4 to 7 carbon atoms are preferred.
Parmi les triazines on préfère les composés répondant à la formule (1) ci-dessous :
dans laquelle : - A représente e un groupe amino de formule NR1 R2 dans lequel R1 et
R2 identiques ou différents représentent l'hydrogène ou un groupe alkyle droit ou ramifié contenant 1 à 4 atomes de carbone ou e un groupe OR1 ou SR1 dans lequel R1 a la même signification que précédemment ou e un groupe alkyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou ou un groupe trifluorométhyle ou 'un atome d'hydrogène ou w un atome d'halogène choisi parmi le fluor, le chlore, le brome ou l'iode Among the triazines, the compounds of formula (1) below are preferred:
in which: A represents an amino group of formula NR1 R2 in which R1 and
R 2, which are identical or different, represent hydrogen or a straight or branched alkyl group containing 1 to 4 carbon atoms or a group OR 1 or SR 1 in which R 1 has the same meaning as above or an alkyl group containing 1 to 4 carbon atoms or or a trifluoromethyl group or a hydrogen atom or w a halogen atom selected from fluorine, chlorine, bromine or iodine
<Desc/Clms Page number 5><Desc / Clms Page number 5>
- R3 et R'3, identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre l'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C4. - R3 and R'3, identical or different, independently of one another represent hydrogen or a C1-C4 alkyl radical.
- art représente : le cycle aromatique azoté, représente : o une quinoléine éventuellement substituée par au moins o un groupe N (Ra) (Rb) dans lequel Ra et Rb, identiques ou différents représentent l'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C4 ou o un groupe ORa dans lequel Ra est défini comme précédemment o une quinoléine possédant un atome d'azote sous forme quaternaire ou o une benzamidine ou o une pyridine attachée en position-4 ou fusionnée avec un groupe aryle ou hétéroaryle éventuellement substituée par un groupe alkyle en C1-C4 - alk représente o un motif alkyle contenant 2 à 3 atomes de carbone linéaire ou ramifié substitué par un radical amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino ou diarylamino o un motif alkényle contenant 2 à 3 atomes de carbone, substitué par un radical amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino ou diarylamino o un motif hétérocyclyle contenant de 4 à 7 atomes de carbone ou un de ses sels. - art represents: the nitrogenous aromatic ring represents: o a quinoline optionally substituted by at least o a group N (Ra) (Rb) in which Ra and Rb, identical or different, represent hydrogen or a C1-C4 alkyl radical; or o an ORa group in which Ra is defined as above, a quinoline having a nitrogen atom in quaternary form or a benzamidine or a pyridine attached at the 4-position or fused with an aryl or heteroaryl group optionally substituted by a group C1-C4 alkyl - alk represents o an alkyl unit containing 2 to 3 carbon atoms linear or branched substituted with an amino, alkylamino and / or arylamino, dialkylamino or diarylamino radical o an alkenyl unit containing 2 to 3 carbon atoms, substituted with an amino, alkylamino and / or arylamino, dialkylamino or diarylamino radical; o a heterocyclyl unit containing from 4 to 7 carbon atoms or a salt thereof.
Il est évident que les motifs quinoléines peuvent être substitués par tout autre groupe n'intervenant pas dans l'application visée, ainsi des groupes acridines ou isoquinoléines ou quinazolines ou quinoxalines ou It is obvious that the quinoline units may be substituted by any other group not involved in the intended application, thus acridine groups or isoquinolines or quinazolines or quinoxalines or
<Desc/Clms Page number 6><Desc / Clms Page number 6>
phtalazines ou benzothiazines ou benzoxazines ou phénoxazines ou phénothiazines sont inclus dans la définition des groupes quinoléines. phthalazines or benzothiazines or benzoxazines or phenoxazines or phenothiazines are included in the definition of quinoline groups.
On préfère parmi les composés de formule (1) ci-dessus ceux qui comportent un hétérocycle choisi parmi les groupes 4-aminoquinolyl, 4-alkylou 4-dialkylamino-quinolyl, 4-aminoquinolinium ou quinolinium dont le noyau quinolinium est éventuellement substitué par un groupe méthyle. Among the compounds of formula (1) above, those containing a heterocycle chosen from 4-aminoquinolyl, 4-alkyl or 4-dialkylamino-quinolyl, 4-aminoquinolinium or quinolinium groups whose quinolinium nucleus is optionally substituted by a group are preferred. methyl.
En ce qui concerne les groupes A, ils représentent de préférence le radical méthylthio, amino, alkylamino ou dialkylamino radicaux dans lesquels les groupes alkyle possèdent 1 à 4 atomes de carbone. As regards the groups A, they preferably represent the radical methylthio, amino, alkylamino or dialkylamino radicals in which the alkyl groups have 1 to 4 carbon atoms.
En ce qui concerne la chaîne hydrocarbonée non aromatique, elle représente de préférence une chaîne 2- (dialkylamino) éthyl, 3- (dialkylamino) propyl, 2- (N-alkyl-N-arylamino) éthyl ou 3- (N-alkyl-Narylamino) propyl dans lesquels les groupes alkyle contiennent de préférence 1 à 4 atomes de carbone, encore plus préférentiellement 1 à 2 atomes de carbone et les groupes aryle contiennent de préférence 5 à 18 atomes de carbone, encore plus préférentiellement 6 atomes de carbone. As regards the nonaromatic hydrocarbon chain, it preferably represents a 2- (dialkylamino) ethyl, 3- (dialkylamino) propyl, 2- (N-alkyl-N-arylamino) ethyl or 3- (N-alkyl) chain. Narylamino) propyl in which the alkyl groups preferably contain 1 to 4 carbon atoms, more preferably 1 to 2 carbon atoms and the aryl groups preferably contain 5 to 18 carbon atoms, more preferably 6 carbon atoms.
Un autre objet de la présente invention concerne les composés de formule (1) en tant que produits chimiques nouveaux. Il concerne donc les produits nouveaux répondant à la formule (1) suivante :
dans laquelle : - A représente e un groupe amino de formule NR1R2 dans lequel R1 et
R2 identiques ou différents représentent un groupe alkyle droit ou ramifié contenant 1 à 4 atomes de carbone ou e un groupe OR1 ou SR1 dans lequel R1 représente l'hydrogène ou a la même signification que précédemment ou Another object of the present invention relates to compounds of formula (1) as novel chemicals. It therefore concerns new products corresponding to the following formula (1):
in which: A represents an amino group of formula NR1R2 in which R1 and
R 2, which are identical or different, represent a straight or branched alkyl group containing 1 to 4 carbon atoms or a group OR 1 or SR 1 in which R 1 represents hydrogen or has the same meaning as above or
<Desc/Clms Page number 7><Desc / Clms Page number 7>
e un groupe alkyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou un groupe trifluorométhyle ou * un atome d'hydrogène où * un atome d'halogène choisi parmi le fluor, le chlore, le brome ou l'iode - Rg et R', identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C4 - Ar 1 représente : le cycle aromatique azoté, représente : o une quinoléine éventuellement substituée par au moins o un groupe N (Ra) (Rb) dans lequel Ra et Rb, identiques ou différents représentent l'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C4 ou o un groupe ORa dans lequel Ra est défini comme précédemment o une quinoléine possédant un atome d'azote sous forme quaternaire ou o une benzamidine ou o une pyridine attachée en position-4 ou fusionnée avec un groupe aryle ou hétéroaryle éventuellement substituée par un groupe alkyle en C1-C4 - alk représente o un motif alkyle contenant 2 à 3 atomes de carbone linéaire ou ramifié substitué par un radical amino, alkylamino et/ou
arylamino, dialkylamino, ou diarylamino o un motif alkényle contenant 2 à 3 atomes de carbone, substitué par un radical amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino ou diarylamino o un motif hétérocyclyle contenant de 5 à 7 atomes de carbone an alkyl group containing 1 to 4 carbon atoms or a trifluoromethyl group or a hydrogen atom in which a halogen atom chosen from fluorine, chlorine, bromine or iodine-Rg and R ', which are identical, or different, independently of one another represent a hydrogen atom or a C 1 -C 4 alkyl-Ar 1 represents: the nitrogenous aromatic ring, represents: o a quinoline optionally substituted with at least one N group ( Ra) (Rb) in which Ra and Rb, which may be identical or different, represent hydrogen or a C1-C4 alkyl radical or an ORa group in which Ra is defined as above, a quinoline having a nitrogen atom in quaternary form or benzamidine or pyridine attached at the 4-position or fused with an aryl or heteroaryl group optionally substituted with a C1-C4alkyl -alkyl group represents an alkyl unit containing 2 to 3 carbon atoms linear or branched substituted with a r adical amino, alkylamino and / or
arylamino, dialkylamino, or diarylamino o an alkenyl unit containing 2 to 3 carbon atoms, substituted by an amino, alkylamino and / or arylamino, dialkylamino or diarylamino radical o a heterocyclyl unit containing from 5 to 7 carbon atoms
<Desc/Clms Page number 8><Desc / Clms Page number 8>
ou un de ses sels. or one of its salts.
Les composés de formule (1) qui sont préférés sont ceux pour lesquels Ar1 représente un groupe choisi parmi les motifs suivants : 4-aminoou 4-méthylamino-ou 4-diméthylamino-quinolyl ou quinolynium dont le noyau quinolinium est éventuellement substitué par un groupe méthyle. The compounds of formula (1) which are preferred are those for which Ar 1 represents a group chosen from the following units: 4-amino or 4-methylamino or 4-dimethylamino-quinolyl or quinolynium, the quinolinium ring of which is optionally substituted with a methyl group .
Les composés de formule générale (1) qui sont préférés sont ceux
pour lesquels A représente un groupe amino ou diméthylamino ou plus préférentiellement méthylthio. The compounds of general formula (1) which are preferred are those
where A represents an amino or dimethylamino group or more preferably methylthio.
Les composés de formule générale (1) qui sont préférés sont ceux pour lesquels la chaîne hydrocarbonée non aromatique représente une chaîne 2- (dialkylamino) éthyl, 3- (dialkylamino) propyl, 2- (N-alkyl-N- arylamino) éthyl ou 3- (N-alkyl-N-arylamino) propyl dans lesquels les groupes alkyle contiennent 1 à 4 atomes de carbone, notamment 1 à 2 atomes de carbone et les groupes aryle contiennent 5 à 18 atomes de carbone, notamment 6 atomes de carbone. The compounds of general formula (1) which are preferred are those for which the nonaromatic hydrocarbon chain represents a 2- (dialkylamino) ethyl, 3- (dialkylamino) propyl, 2- (N-alkyl-N-arylamino) ethyl chain or 3- (N-alkyl-N-arylamino) propyl wherein the alkyl groups contain 1 to 4 carbon atoms, especially 1 to 2 carbon atoms and the aryl groups contain 5 to 18 carbon atoms, especially 6 carbon atoms.
On préfère tout particulièrement les composés de formule générale (1) pour lesquels la chaîne hydrocarbonée non aromatique représente une chaîne 2- (N-alkyl-N-arylamino) éthyl telle que la chaîne 2- (N-m. tolyl-N-éthyl- amino) éthyl
Un autre objet de la présente invention concerne l'utilisation des composés de la formule (1) comme produit pharmaceutique à usage humain. The compounds of the general formula (1) for which the nonaromatic hydrocarbon chain is a 2- (N-alkyl-N-arylamino) ethyl chain such as the 2- (N-methyl-N-ethylamino) chain are particularly preferred. ) ethyl
Another object of the present invention is the use of the compounds of formula (1) as a pharmaceutical product for human use.
Les procédés de préparation des composés de formule (1)
sont décrits ci-après. Processes for preparing the compounds of formula (1)
are described below.
Dans le cas où Ar1 et Alk sont présents, la triazine de formule générale (A) peut être obtenue par déplacement séquentiel des atomes d'halogène, très généralement des atomes de chlore, des produits de formule générale (B) par les amines Ar1 puis Alk de formule générale (C) selon le In the case where Ar1 and Alk are present, the triazine of general formula (A) can be obtained by sequential displacement of the halogen atoms, very generally chlorine atoms, of the products of general formula (B) by the Ar 1 amines then Alk of general formula (C) according to
<Desc/Clms Page number 9> <Desc / Clms Page number 9>
schéma 1 :
diagram 1:
Schéma 1 Généralement on opère avec 1 mole de dihalogéno-s-triazine, ou trihalogéno-s-triazine, et 1 mole d'amine Art. On préfère opérer dans un solvant inerte tel que l'acétone éventuellement aqueux ou un alcool éventuellement aqueux, comme l'éthanol, ou un solvant halogéné, tel que le dichlorométhane, ou un éther tel que l'oxyde de diéthyle ou le dioxane, ou un solvant aprotique polaire tel que le DMF le DMSO ou la NMP. Selon une meilleure manière de mettre en oeuvre l'invention on opère à une température comprise entre 20 C et 50 C. Ensuite on ajoute 1 mole d'amine Alkau produit de formule générale (D), qui peut être éventuellement isolé. On opère notamment à une température comprise entre 50 C et le reflux.
Scheme 1 Generally one operates with 1 mole of dihalo-s-triazine, or trihalo-s-triazine, and 1 mole of amine Art. It is preferred to operate in an inert solvent such as optionally aqueous acetone or an optionally aqueous alcohol, such as ethanol, or a halogenated solvent, such as dichloromethane, or an ether such as diethyl ether or dioxane, or a polar aprotic solvent such as DMF, DMSO or NMP. According to a better way of carrying out the invention, the reaction is carried out at a temperature of between 20 ° C. and 50 ° C. Then 1 mol of amine Alkau product of general formula (D) is added, which can optionally be isolated. It operates in particular at a temperature between 50 C and reflux.
Avantageusement, on peut opérer dans les conditions décrites dans J. Fluor. Chem., 1988, 39 (1), 117-123. Advantageously, it is possible to operate under the conditions described in J. Fluor. Chem., 1988, 39 (1), 117-123.
Méthode générale 2 Selon une seconde méthode les produits de formule générale (A) dans lesquels Ar sont définis tels que précédemment et R représente un groupe NR1 R2 ou OR1 ou SR1 peuvent être également préparés par déplacement nucléophile d'un atome d'halogène, généralement un atome de General Method 2 According to a second method the products of general formula (A) in which Ar are defined as above and R represents a group NR1 R2 or OR1 or SR1 can also be prepared by nucleophilic displacement of a halogen atom, generally an atom of
<Desc/Clms Page number 10><Desc / Clms Page number 10>
chlore, d'un produit de formule générale (A) dans lequel R représente un atome d'halogène selon le schéma 2 :
R = C) (ou F ou Br ou 1) R= NR1R2 ou OR1 ou SR1
Schéma 2
On opère généralement en condensant 1 mole de produit de formule générale (A) dans lequel R représente un atome d'halogène, préférentiellement un atome de chlore, avec 1 mole d'amine R1 R2NH ou d'alcoolate R10-ou de thioalcoolate R1 S. La réaction a lieu en milieu inerte dans les conditions de la réaction. On peut citer parmi les solvants inertes l'acétone éventuellement aqueux ou un alcool éventuellement aqueux comme !'methanol, ou un solvant halogéné tel que le dichlorométhane, ou un éther tel que l'oxyde de diéthyle ou le dioxane, ou un solvant aprotique
polaire tel que le DMF le DMSO ou la NMP. Lorsque le groupe entrant représente un groupe R1 R2NH, on opère de préférence à une température comprise entre 20 C et le reflux, en présence notamment d'une base organique, telle que la triéthylamine, ou minérale, telle que la soude ou le carbonate de sodium ou de potassium. Il est également possible de ne pas utiliser de base lors de la réaction d'amination, et d'isoler un chlorhydrate du produit de formule générale (A), dont la base peut ensuite être libérée. Lorsque le groupe entrant représente un groupe R10 ou R1S on opère préférentiellement avec un alcoolate ou un thioalcoolate alcalin ou alcalinoterreux, tel qu'un sel de sodium ou de potassium ou de lithium ou d'ammonium ou de césium ou de baryum, dans un solvant aprotique polaire tel que le DMF ou le DMSO ou la NMP, à une température comprise entre 50 C et le reflux. chlorine, a product of general formula (A) in which R represents a halogen atom according to scheme 2:
R = C) (or F or Br or 1) R = NR1R2 or OR1 or SR1
Figure 2
The procedure is generally carried out by condensing 1 mole of product of general formula (A) in which R represents a halogen atom, preferably a chlorine atom, with 1 mole of amine R1 R2NH or of alcoholate R10-or thioalcoolate R1 S The reaction takes place in an inert medium under the conditions of the reaction. Examples of inert solvents are acetone, which may be aqueous, or an optionally aqueous alcohol such as methanol, or a halogenated solvent such as dichloromethane, or an ether such as diethyl ether or dioxane, or an aprotic solvent.
such as DMF, DMSO or NMP. When the input group represents a group R1 R2NH, the reaction is preferably carried out at a temperature of between 20 ° C. and reflux, in the presence in particular of an organic base, such as triethylamine, or mineral, such as sodium hydroxide or sodium carbonate. sodium or potassium. It is also possible not to use a base during the amination reaction, and isolate a hydrochloride of the product of general formula (A), the base can then be released. When the entering group represents a R10 or R1S group, the reaction is preferably carried out with an alkali or alkaline earth alcoholate or thioalkoxide, such as a sodium or potassium or lithium or ammonium or cesium or barium salt, in a solvent. aprotic polar such as DMF or DMSO or NMP, at a temperature between 50 C and reflux.
<Desc/Clms Page number 11> <Desc / Clms Page number 11>
Méthode générale 3 Selon un troisième procédé de préparation les composés pour lesquels R représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, droit ou ramifié contenant de 1 à 4 atomes de carbone, peuvent également être préparés par condensation d'un bisguanide de formule générale (E), avec un dérivé d'acide, préférentiellement un chlorure d'acide ou un ester de méthyle de formule générale (F) selon le schéma 3 :
General Method 3 According to a third method of preparation the compounds for which R represents a hydrogen atom or a straight or branched alkyl group containing from 1 to 4 carbon atoms, can also be prepared by condensation of a bisguanide of general formula (E) with an acid derivative, preferentially an acid chloride or a methyl ester of general formula (F) according to scheme 3:
Schéma 3
La condensation entre le bisguanide de formule générale (E) et le dérivé d'acide de formule générale (F) est effectuée généralement dans un alcool comme le méthanol ou l'éthanol. On préfère opérer à une température comprise entre 0 C et la température de reflux. Figure 3
The condensation between the bisguanide of general formula (E) and the acid derivative of general formula (F) is generally carried out in an alcohol such as methanol or ethanol. It is preferred to operate at a temperature between 0 ° C. and the reflux temperature.
Les bisguanides de formule générale (E) symétriques ou dissymétriques peuvent être obtenus en opérant dans les conditions décrites dans la littérature et en particulier selon le brevet J. P. 94-4993. The bisguanides of general formula (E) symmetrical or asymmetric can be obtained by operating under the conditions described in the literature and in particular according to the patent J. P. 94-4993.
Méthode générale 4
Il est entendu que les s-triazines de formule générale peuvent être obtenues sous forme de librairies, en appliquant les méthodes décrites dans les schémas 1,2, 3,4 ou 5 en chimie parallèle et/ou combinatoire en phase liquide ou en phase solide, étant entendu que, lorsqu'on travaille en phase solide, l'un quelconque des réactifs est préalablement fixé sur un support solide, choisi en fonction de la réaction chimique mise en jeu, et que ladite réaction chimique est suivie d'une opération de clivage du produit de la réaction du support solide. General method 4
It is understood that s-triazines of general formula can be obtained in the form of libraries, by applying the methods described in Schemes 1,2, 3,4 or 5 in parallel and / or combinatorial chemistry in liquid phase or in solid phase , it being understood that, when working in the solid phase, any one of the reagents is fixed beforehand on a solid support, chosen as a function of the chemical reaction involved, and that said chemical reaction is followed by an operation of cleavage of the reaction product of the solid support.
<Desc/Clms Page number 12><Desc / Clms Page number 12>
La présente invention concerne aussi les compositions thérapeutiques contenant un composé selon l'invention, en association avec un support pharmaceutiquement acceptable selon le mode d'administration choisi. La composition pharmaceutique peut se présenter sous forme solide, liquide ou de liposoms. The present invention also relates to therapeutic compositions containing a compound according to the invention, in combination with a pharmaceutically acceptable carrier according to the chosen mode of administration. The pharmaceutical composition may be in solid, liquid or liposomal form.
Parmi les compositions solides on peut citer les poudres, les gélules, les comprimés. Parmi les formes orales on peut aussi inclure les formes solides protégées vis-à-vis du milieu acide de l'estomac. Les supports utilisés pour les formes solides sont constitués notamment de supports minéraux comme les phosphates, les carbonates ou de supports organiques comme le lactose, les celluloses, l'amidon ou les polymères. Les formes liquides sont constituées de solutions de suspensions ou de dispersions. Elles contiennent comme support dispersif soit l'eau, soit un solvant organique (éthanol, NMP ou autres) ou de mélanges d'agents tensioactifs et de solvants ou d'agents complexants et de solvants. Among the solid compositions include powders, capsules, tablets. Oral forms may also include solid forms protected from the acidic environment of the stomach. The supports used for the solid forms consist in particular of mineral supports such as phosphates, carbonates or organic supports such as lactose, celluloses, starch or polymers. The liquid forms consist of solutions of suspensions or dispersions. They contain as dispersive carrier either water, or an organic solvent (ethanol, NMP or others) or mixtures of surfactants and solvents or complexing agents and solvents.
La dose administrée des composés de l'invention sera adaptée par le praticien en fonction de la voie d'administration du patient et de l'état de ce dernier. The administered dose of the compounds of the invention will be adapted by the practitioner according to the route of administration of the patient and the state of the latter.
Les composés de la présente invention peuvent être administrés seuls ou en mélange avec d'autres anticancéreux. Parmi les associations possibles on peut citer a les agents alkylants et notamment le cyclophosphamide, le melphalan, l'ifosfamide, le chlorambucil, le busulfan, le thiotepa,
la prednimustine, la carmustine, la lomustine, la semustine, la steptozotocine, la decarbazine, la témozolomide, la procarbazine et l'hexamethylmélamine e les dérivés du platine comme notamment le cisplatine, le carbopiatine ou l'oxaliplatine o les agents antibiotiques comme notamment la bléomycine, la mitomycine, la dactinomycine, e les agents antimicrotubules comme notamment la vinblastine, la vincristine, la vindésine, la vinorelbine, les taxoides (paclitaxel et docétaxel) The compounds of the present invention may be administered alone or in admixture with other anticancer agents. Among the possible combinations, mention may be made of alkylating agents and in particular cyclophosphamide, melphalan, ifosfamide, chlorambucil, busulfan, thiotepa,
prednisimine, carmustine, lomustine, semustine, steptozotocine, decarbazine, temozolomide, procarbazine and hexamethylmelamine and platinum derivatives such as cisplatin, carbopiatine or oxaliplatin, antibiotic agents such as bleomycin, mitomycin, dactinomycin, antimicrotubules such as vinblastine, vincristine, vindesine, vinorelbine, taxoids (paclitaxel and docetaxel)
<Desc/Clms Page number 13> <Desc / Clms Page number 13>
e les anthracyclines comme notamment la doxorubicine, la daunorubicine, l'idarubicine, l'épirubicine, la mitoxantrone, la losoxantrone e les topoisomérases des groupes 1 et Il telles. que l'étoposide, le teniposide, l'amsacrine, l'irinotecan, le topotecan et le tomudex, w les fluoropyrimidines telles que le 5-fluorouracile, l'UFT, la floxuridine, e les analogues de cytidine telles que la 5-azacytidine, la cytarabine, la gemcitabine, la 6-mercaptomurine, la 6-thioguanine e les analogues d'adénosine telles que la pentostatine, la cytarabine ou le phosphate de fludarabine *) le methotrexate et l'acide folinique # les enzymes et composés divers tels que la
L-asparaginase, l'hydroxyurée, l'acide trans-rétinoique, la suramine, la dexrazoxane, l'amifostine, l'herceptin ainsi que les hormones oetrogéniques, androgéniques.
anthracyclines such as doxorubicin, daunorubicin, idarubicin, epirubicin, mitoxantrone, losoxantrone and topoisomerases of groups 1 and 11 such. etoposide, teniposide, amsacrine, irinotecan, topotecan and tomudex, fluoropyrimidines such as 5-fluorouracil, UFT, floxuridine and cytidine analogues such as 5-azacytidine , cytarabine, gemcitabine, 6-mercaptomurine, 6-thioguanine and adenosine analogs such as pentostatin, cytarabine or fludarabine phosphate *) methotrexate and folinic acid # various enzymes and compounds that the
L-asparaginase, hydroxyurea, trans-retinoic acid, suramin, dexrazoxane, amifostine, herceptin as well as androgenic, androgenic hormones.
Il est également possible d'associer aux composés de la présente invention un traitement par les radiations. Ces traitements peuvent être administrés simultanément, séparément, séquentielle ment. Le traitement
sera adapté au malade à traiter par le praticien. It is also possible to associate the compounds of the present invention with radiation treatment. These treatments can be administered simultaneously, separately, sequentially. The treatment
will be adapted to the patient to be treated by the practitioner.
L'activité de stabilisation des G-quadruplexes peut être determinée par une méthode utilisant la formation d'un complexe avec la fluoresceine dont le protocole expérimental est décrit ci-après. The stabilization activity of G-quadruplexes can be determined by a method using the formation of a complex with fluorescein, the experimental protocol of which is described below.
Qjiqonudéotides
Tous les olignucléotides, modifiés ou non, ont été synthétisés par Eurogentec SA, Seraing, Belgique. L'oligoncléotide FAM + DABCYL porte la référence catalogue, OL-0371-0802. Il possède la séquence : GGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG correspondant à 3.5 répétitions du motif télomérique humain (brin riche en G). La fluorésceine est attaché à l'extrémité 5', le DABCYL à l'extrémité 3', par les bras chimiques décrit par Eurogentec. La concentration des échantillons est vérifiée par Qjiqonudéotides
All olignucleotides, modified or unmodified, were synthesized by Eurogentec SA, Seraing, Belgium. The oligonucleotide FAM + DABCYL carries the reference catalog, OL-0371-0802. It has the sequence: GGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG corresponding to 3.5 repetitions of the human telomeric motif (strand rich in G). Fluorescein is attached to the 5 'end, DABCYL at the 3' end, by the chemical arms described by Eurogentec. The concentration of the samples is verified by
<Desc/Clms Page number 14><Desc / Clms Page number 14>
spectrophotométrie, en enregistrant le spectre d'absorbance entre 220 et 700 nm et en utilisant le coefficient d'extinction molaire fourni par le fournisseur. spectrophotometry, recording the absorbance spectrum between 220 and 700 nm and using the molar extinction coefficient provided by the supplier.
Tampons
Toutes les expériences ont été réalisées dans un tampon cacodylate de sodium 10 mM pH 7.6 contenant 0.1 M de Chlorure de Lithium (ou de Chlorure de Sodium). L'absence de contamination fluorescente dans le tampon a été préalablement vérifiée. L'oligonucléotide fluorescent est ajouté
à la concentration finale de 0. 2 uM. tampons
All experiments were performed in 10 mM sodium cacodylate pH 7.6 buffer containing 0.1 M Lithium Chloride (or Sodium Chloride). The absence of fluorescent contamination in the buffer was previously verified. The fluorescent oligonucleotide is added
at the final concentration of 0. 2 μM.
Etude de Fluorescence
Toutes les mesures de fluorescence ont été effectuées sur un appareil Spex Fluorolog DM1 B, en utilisant une largeur de raie d'excitation de 1.8 nm et une largeur de raie d'émission de 4.5 nm. Les échantillons sont placés dans une cuvette en quartz micro de 0.2 x 1 cm. La température de l'échantillon est contrôlée par un bain-marie extérieur. L'oligonucléotide seul a été analysé à 20,30, 40,50, 60,70 et 80 C. Les spectres d'émission sont enregistrés en utilisant une longueur d'onde d'excitation de 470 nm. Les spectres d'excitation sont enregistrés en utilisant soit 515 nm soit 588 nm comme longueur d'onde d'émission. Les spectres sont corrigés de la réponse de l'instrument par des courbes de référence. Une extinction importante (80- 90 %) de la fluorescence de la fluoresceine à température ambiante est observée, en accord avec un repli intramoléculaire de l'oligonucléotide à 200C sous forme d'un G-quadruplex, ce qui induit une juxtaposition de ses extrémités 5'et 3', respectivement liées à la fluoresceine et au DABCYL. Fluorescence study
All fluorescence measurements were made on a Spex Fluorolog DM1 B apparatus, using an excitation line width of 1.8 nm and an emission bandwidth of 4.5 nm. The samples are placed in a 0.2 x 1 cm micro quartz dish. The temperature of the sample is controlled by an external water bath. The oligonucleotide alone was analyzed at 20.30, 40.50, 60.70 and 80 C. The emission spectra are recorded using an excitation wavelength of 470 nm. Excitation spectra are recorded using either 515 nm or 588 nm as the emission wavelength. The spectra are corrected for the response of the instrument by reference curves. A significant extinction (80-90%) of fluorescein fluorescence at room temperature is observed, in agreement with an intramolecular fold of the oligonucleotide at 200C in the form of a G-quadruplex, which induces a juxtaposition of its extremities. 5 'and 3' respectively bound to fluorescein and DABCYL.
Cette juxtaposition entraîne un phénomène déjà décrit d'extinction de fluorescence, utilisé pour les"Molecular Beacons". This juxtaposition results in a previously described phenomenon of fluorescence quenching, used for "Molecular Beacons".
Tm en fluorescence :
Une solution stock d'oligonucléotide à la concentration en brin de 0. 2 uM dans un tampon 0. 1 M LiCI 10 mM cacodylate pH 7. 6 est préalablement préparée, chauffée brièvement à 90 C et refroidie lentement à 200C, puis distribuée par aliquots de 600 ut dans les cuves de fluorescence. Tm in fluorescence:
A stock solution of oligonucleotide at the strand concentration of 0.2 μM in a buffer of 0.1 M 10 mM LiCI cacodylate pH 7. 6 is prepared beforehand, heated briefly to 90 ° C. and cooled slowly to 200 ° C., then distributed by aliquots. 600 μl in the fluorescence tanks.
3 ut d'eau (pour le contrôle) ou 3 ui du produit à tester (stock à 200 uM, 3 μl of water (for control) or 3 μl of the product to be tested (200 μM stock,
<Desc/Clms Page number 15> <Desc / Clms Page number 15>
concentration finale 1 uM) sont alors ajoutés et mélangés. Les échantillons sont alors laissés à incuber pendant au moins 1 heure à 20 C avant chaque mesure. L'utilisation de temps d'incubation plus longs (jusqu'à 24 heures) n'a pas d'influence sur le résultat obtenu.
final concentration 1 μM) are then added and mixed. The samples are then incubated for at least 1 hour at 20 C before each measurement. The use of longer incubation times (up to 24 hours) has no influence on the result obtained.
Chaque expérience ne permet que la mesure d'un seul échantillon. Each experiment only allows the measurement of a single sample.
Celui-ci est d'abord incubé à une température initiale de 200C, porté à 80 C en 38 minutes, laissé 5 minutes à 80 C, puis refroidi à 200C en 62 minutes. Durant ce temps, la fluorescence est mesurée simultanément à deux longueurs d'onde d'émission (515 nm et 588 nm) en utilisant 470 nm comme longueur d'onde d'excitation. Une mesure est effectuée toutes les 30 secondes. La température du bain-marie est enregistrée en parallèle, et le profil de fluorescence en fonction de la température est reconstitué à partir de ces valeurs. Les profils de fluorescence sont ensuite normalisés entre 20 C et 80 C, et la température pour laquelle l'intensité d'émission à 515 nm est la moyenne de celles à haute et basse température est appelée Tm. Dans ces conditions, le Tm de l'échantillon de référence sans addition de
produit est de 44 C dans un tampon Chlorure de Lithium. Cette température est portée à plus de 55 C dans un tampon Chlorure de Sodium. L'addition d'un composé stabilisant le G-quadruplex induit une augmentation du Tm. This is first incubated at an initial temperature of 200C, brought to 80 C in 38 minutes, left for 5 minutes at 80 C, and then cooled to 200C in 62 minutes. During this time, the fluorescence is measured simultaneously at two emission wavelengths (515 nm and 588 nm) using 470 nm as the excitation wavelength. A measurement is performed every 30 seconds. The temperature of the water bath is recorded in parallel, and the fluorescence profile as a function of temperature is reconstituted from these values. The fluorescence profiles are then normalized between 20 C and 80 C, and the temperature for which the emission intensity at 515 nm is the average of those at high and low temperature is called Tm. Under these conditions, the Tm of the reference sample without addition of
product is 44 C in Lithium Chloride buffer. This temperature is increased to more than 55 C in a Sodium chloride buffer. The addition of a G-quadruplex stabilizing compound induces an increase in Tm.
Cette augmentation est jugée significative si elle est supérieure à 30. This increase is considered significant if it is greater than 30.
L'activité biologique antitélomérase est déterminée par le protocole expérimental suivant :
Préparation de l'extrait enrichi en activité télomérase humaine
La lignée de leucémie HL60 est obtenue auprès de l'ATCC (Americam Type Culture Collection, Rockville USA). Les cellules sont cultivées en suspension dans du milieu RPMI 1640 contenant, L-Glutamine à
2 mM, Penicilline 200 U/ml, streptomycine 200 pg/mI, gentamycine 50 ug/ml et additionné de 10 % de sérum foetal de veau inactivé par la chaleur. The biological activity antitélomerase is determined by the following experimental protocol:
Preparation of the extract enriched in human telomerase activity
The leukemia line HL60 is obtained from the ATCC (Americam Type Culture Collection, Rockville USA). The cells are cultured in suspension in RPMI 1640 medium containing L-Glutamine
2 mM Penicillin 200 U / ml, streptomycin 200 μg / ml, gentamycin 50 μg / ml and supplemented with 10% heat-inactivated fetal calf serum.
Une aliquote de 105 cellules est centrifugée à 3000xG et le surnageant écarté. Le culot de cellules est resuspendu par plusieurs pipettages successifs dans 200 al de tampon de lyse contenant CHAPS 0.5 %, Tris-HCI pH 7,5 10 mM, MgCI2 1mM, EGTA 1 mM, P-mercaptoethanol 5 mM, PMSF 0.1 mM et glycérol 10 % et est conservé dans la glace pendant An aliquot of 105 cells is centrifuged at 3000xG and the supernatant discarded. The cell pellet is resuspended by several successive pipettings in 200 μl of lysis buffer containing 0.5% CHAPS, 10 mM pH 7.5 Tris-HCl, 1 mM MgCl 2, 1 mM EGTA, 5 mM P-mercaptoethanol, 0.1 mM PMSF and glycerol. 10% and is kept in ice for
<Desc/Clms Page number 16> <Desc / Clms Page number 16>
30 minutes. Le ysat est centrifugé à 16 0000xG pendant 20 minutes à 4 C et 160 pol du surnageant est récupéré. Le dosage des protéines de l'extrait est effectué par la méthode de Bradford. L'extrait est conservé à-80 C.
30 minutes. The ysat is centrifuged at 16,000xG for 20 minutes at 4 ° C. and 160 μl of the supernatant is recovered. The protein assay of the extract is carried out by the Bradford method. The extract is stored at -80 C.
Dosage de l'activité télomérase
L'inhibition de l'activité télomérase est déterminée par un protocole d'extension de l'oligonucléotide TS ('AATCGTTCGAGCAGAGTT3), en présence d'un extrait cellulaire enrichi en activité télomérase et des composés qui sont ajoutés à différentes concentrations (10,1, 0.1 et 0, 01 g/ml). La réaction d'extension est suivie d'une amplification PCR des produits d'extension à l'aide des oligonucléotides TS et CXext (5'GTGCCCTTACCCTTACCCTTACCCTAA3'). Assay of telomerase activity
The inhibition of telomerase activity is determined by an extension protocol of the oligonucleotide TS ('AATCGTTCGAGCAGAGTT3), in the presence of a cell extract enriched in telomerase activity and compounds which are added at different concentrations (10.1 0.1 and 0.11 g / ml). The extension reaction is followed by PCR amplification of the extension products using the oligonucleotides TS and CXext (5'GTGCCCTTACCCTTACCCTTACCCTAA3 ').
Le milieu réactionnel est préparé selon la composition suivante :
Tris HCI pH 8,3 20 mM
MgCl2 1, 5 mM
Tween 20 0,005 % (PN)
EGTA 1 mM dATP 50 uM dGTP 50 zum dCTP 50 uM dTTP 50 uM Oligonucléotide TS 2 pg/ml Oligonucléotide CXext 2 ug/ml Sérum Albumin bovine 0, 1 mg/ml Taq DNA polymérase 1 U/ml alpha 32P dCTP (3000 Ci/mmole) 0. 5 u) Extrait télomérase 200 ng sous un volume de 10 ! JI
Produit à tester ou solvant sous un volume de 5 ! JI Eau bi-distillée QS 50 pl The reaction medium is prepared according to the following composition:
Tris HCI pH 8.3 20 mM
MgCl 2 1.5 mM
Tween 20 0.005% (PN)
EGTA 1mM dATP 50 μM dGTP 50 μg dCTP 50 μM dTTP 50 μM Oligonucleotide TS 2 μg / ml Oligonucleotide CXext 2 μg / ml Bovine Albumin Serum 0.1 mg / ml Taq DNA polymerase 1 U / ml alpha 32P dCTP (3000 Ci / ml) mmol) 0. 5 u) Telomerase Extract 200 ng under a volume of 10! JI
Test product or solvent in a volume of 5! JI Bi-distilled water QS 50 pl
<Desc/Clms Page number 17> <Desc / Clms Page number 17>
Les oligonucléotides sont obtenus auprès d'Eurogentec (Belgique) et sont conservés à-20 C à une concentration stock de 1 mg/ml dans de l'eau distillée. The oligonucleotides are obtained from Eurogentec (Belgium) and are stored at -20 ° C. at a stock concentration of 1 mg / ml in distilled water.
Les échantillons réactionnels sont assemblés dans des tubes à PCR de 0.2 ml et une goutte d'huile de paraffine est déposée sur chacune des réactions de l'expérience avant la fermeture des tubes. The reaction samples are assembled in 0.2 ml PCR tubes and a drop of paraffin oil is deposited on each of the reactions of the experiment before the closure of the tubes.
Les échantillons réactionnels sont ensuite incubés dans un appareil à PCR de type Cetus 4800 selon les conditions de températures suivantes :
15 minutes à 30\,
1 minute à 90 C, suivis de 30 cycles de,
30 secondes à 94\,
30 secondes à 50 C, et 1 minute 30 secondes à 72\, suivis d'un cycle final de 2 minutes à 72 C. The reaction samples are then incubated in a Cetus 4800 PCR apparatus according to the following temperature conditions:
15 minutes to 30 \,
1 minute at 90 C, followed by 30 cycles of,
30 seconds to 94 \,
30 seconds at 50 C, and 1 minute 30 seconds at 72 \, followed by a final cycle of 2 minutes at 72 C.
Pour chacun des échantillons, une aliquote de 10 pl est pipettée sous
la couche d'huile et mélangée avec 5 um d'un tampon de dépôt contenant : TBE 3X glycérol 32 % (PN) Bleu de bromophénol 0. 03 % Xylène cyanol 0. 03 % Les échantillons sont ensuite analysés par électrophorèse en gel d'acrylamide 12 % dans un tampon TBE 1X pendant 1 heure sous une tension de 200 volts, à l'aide d'un système d'électrophorèse Novex. For each sample, a 10 μl aliquot is pipetted under
the oil layer and mixed with 5 μm of a deposition buffer containing: TBE 3X glycerol 32% (PN) Bromophenol blue 0. 03% Xylene cyanol 0. 03% The samples are then analyzed by gel electrophoresis. 12% acrylamide in a 1 × TBE buffer for 1 hour at a voltage of 200 volts, using a Novex electrophoresis system.
Les gels d'acrylamides sont ensuite séchés sur une feuille de papier whatmann 3MM à 80\ pendant 1 heure. The acrylamide gels are then dried on a 3MM Whatmann paper at 80 for 1 hour.
L'analyse et la quantification des produits de la réaction sont effectuées à l'aide d'un appareillnstantlmager (Pacard). The analysis and quantification of the products of the reaction are carried out with the aid of a device (FIGS).
<Desc/Clms Page number 18> <Desc / Clms Page number 18>
Pour chaque concentration de composé testée, les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition de la réaction et calculés à partir du contrôle enzymatique non traité et de l'échantillon sans enzyme (blanc) selon la formule suivante : (Valeur Composé-valeur blanc/Valeur contrôle enzymatiquevaleur blanc) x 100. For each concentration of test compound, the results are expressed as percent inhibition of the reaction and calculated from the untreated enzymatic control and the sample without enzyme (white) according to the following formula: (Compound value-white value / Enzymatic control value white value) x 100.
La concentration de composé induisant une inhibition de 50 % de la réaction télomérase (IC50) est déterminée à l'aide d'une représentation graphique semi logarithmique des valeurs d'inhibition obtenues en fonction de chacune des concentrations de composé testée. The concentration of compound inducing a 50% inhibition of the telomerase reaction (IC50) is determined using a semi-log plot of the inhibition values obtained as a function of each of the concentrations of test compound.
On considère qu'un composé est actif en tant qu'agent
antitélomérase lorsque la quantité inhibant 50 % de la réaction télomérase est notamment inférieure à 5, uM. A compound is considered active as an agent
antiteromerase when the amount inhibiting 50% of the telomerase reaction is in particular less than 5 μM.
L'activité biologique cytotoxique sur des lignées de tumeur humaines est déterminée selon le protocole expérimental suivant :
Les lignées de cellules humaines KB et A549 sont originaires de l'ATCC (Americam Type Culture Collection, Rockville USA). Les cellules A549 sont cultivées en couche en flacon de culture dans du milieu RPMI 1640, L-Glutamine à 2 mM, Penicilline 200 U/ml, streptomycine 200 pg/ml et additionné de 10 % de sérum foetal de veau inactivé par la chaleur. Les cellules KB sont cultivées en couche en flacon de culture dans du milieu de Dulbelco's contenant, L-Glutamine à 2 mM, Penicilline 200 U/mt, streptomycine 200 g/ml et additionné de 10 % de sérum foetal de veau inactivé par la chaleur.
The cytotoxic biological activity on human tumor lines is determined according to the following experimental protocol:
The human cell lines KB and A549 originate from the ATCC (Americam Type Culture Collection, Rockville USA). A549 cells are cultured in a culture flask in RPMI 1640 medium, 2 mM L-Glutamine, 200 U / ml Penicillin, 200 μg / ml streptomycin and 10% heat-inactivated fetal calf serum. The KB cells are cultured in a culture flask in Dulbelco's medium containing 2 mM L-Glutamine, Penicillin 200 U / ml, streptomycin 200 g / ml and 10% heat-inactivated fetal calf serum added. .
Les cellules en phase exponentielle de croissances sont trypsinées, lavées dans du PBS 1X et sont ensemencées en microplaques 96 puits (Costar) à raison de 4x104 cellules/ml pour A549 et de 1, 5x104 cellules/ml (0. 2 ml/puit) puis incubées pendant 96 heures en présence de concentrations variables de produit à étudier (10,1, 0.1 et 0. 01 ug/mi, chaque point en quadruplicata). 16 heures avant la fin de l'incubation, 0.02 % final de rouge neutre est ajouté dans chaque puits. A la fin de l'incubation, les cellules sont lavées par du PBS IX et lysées par 1 % de lauryl sulfate de sodium. L'incorporation cellulaire du colorant, qui reflète la croissance cellulaire, est The cells in the growth exponential phase are trypsinized, washed in 1X PBS and are seeded in 96-well microplates (Costar) at a rate of 4x104 cells / ml for A549 and 1.5x104 cells / ml (0.2 ml / well). then incubated for 96 hours in the presence of varying concentrations of product to be studied (10.1, 0.1 and 0.1.ug / ml, each point in quadruplicate). 16 hours before the end of incubation, 0.02% neutral red is added to each well. At the end of the incubation, the cells are washed with IX PBS and lysed with 1% sodium lauryl sulfate. The cellular incorporation of the dye, which reflects cell growth, is
<Desc/Clms Page number 19><Desc / Clms Page number 19>
évaluée par spectrophotométrie à une longueur d'onde de 540 nm pour chaque échantillon à l'aide d'un appareil de lecture Dynatech MR5000. evaluated spectrophotometrically at a wavelength of 540 nm for each sample using a Dynatech MR5000 reading device.
Pour chaque concentration de composé testé, les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition de croissance cellulaire et calculés à partir du contrôle non traité et du milieu de culture sans cellules (blanc) selon la formule suivante : (Valeur Composé-valeur blanc/Valeur contrôle cellules-valeur blanc) x 100. For each concentration of test compound, the results are expressed as a percentage of cell growth inhibition and calculated from the untreated control and the cell-free culture medium (white) according to the following formula: (Value Compound-value white / Value cell-value white control) x 100.
La concentration de composé induisant une inhibition de 50 % de la croissance (IC50) est déterminée à l'aide d'une représentation graphique semi logarithmique des valeurs d'inhibition obtenues en fonction de chacune des concentrations de composé testée. The compound concentration inducing a 50% inhibition of growth (IC50) is determined using a semi-log plot of the inhibition values obtained as a function of each of the concentrations of test compound.
On considère qu'un composé est actif comme agent cytotoxique si la concentration inhibitrice de 50 % de la croissance des cellules tumorales testées est notamment inférieure à 10 uM. It is considered that a compound is active as a cytotoxic agent if the inhibitory concentration of 50% of the growth of the tumor cells tested is in particular less than 10 .mu.M.
Les exemples suivants et non limitatifs sont donnés pour illustrer l'invention. The following nonlimiting examples are given to illustrate the invention.
Exemple 1 : Synthèse en parallèle de dérivés substitués de N6-[6-amino-4-
méthytsu ! fany !- [1, 3, 5] triazin-2-y !]-2-méthyt-quinotine-4, 6diamine
Example 1: Parallel synthesis of substituted derivatives of N6- [6-amino-4-
Methytsu! fany! - [1, 3, 5] triazin-2-yl] - 2-methylquinotin-4,6-diamine
Préparation de la N6-(6-chloro-4-méthylsulfanyl-[1, 3 5] triazin-2-yl)-2-méthylquinoline-4z6-diamine Dans un tricol de 1 litre, à une solution de 5 g (25 mmoles) de 2, 6-dichlor-6méthylsulfanyl-[1, 3, 5] triazine, qui peut être préparée selon J. Amer. Chem.
Preparation of N6- (6-chloro-4-methylsulfanyl- [1,3,5] triazin-2-yl) -2-methylquinoline-4z6-diamine In a 1 liter tricol, to a solution of 5 g (25 mmol) ) 2,6-dichloro-6-methylsulfanyl- [1,3,5] triazine, which can be prepared according to J. Amer. Chem.
<Desc/Clms Page number 20><Desc / Clms Page number 20>
Soc., 1945, 67, 662, dans 400 ml de tétrahydrofurane, on ajoute successivement 4, 4 g (25 mmoles) de 2-méthyl-quinoline-4, 6-diamine, qui peut être préparée selon J. Med. Chem. 1992,35, 252, et 2,8 g (25 mmoles) de carbonate de sodium. Le mélange réactionnel est chauffé à reflux pendant 16 heures. Après évaporation du tétrahydrofurane, le résidu est repris par 400 ml d'un mélange d'eau et de dichorométhane (50-50 en volumes). La phase organique est décantée, séchée sur sulfate de sodium et concentrée à sec sous pression réduite. On obtient alors 7,5 g (88 %) de N6- (6-chloro-4-méthylsulfanyl-triazin-2-yl)-2-méthyl-quinoline-4, 6-diamine, sous forme d'un solide jaune pâle dont les caractéristiques sont les suivantes : - point de fusion = 294 C - spectre de RMN'H (300 MHz, (CD3)2SO d6, 8 en ppm) : 2,43 (s : 3H) ; 2,52
(s : 3H) ; 6, 47 (s : 1 H) ; 6, 61 (mf : 2H) ; 7, 62 (d large, J = 9 Hz : 1 H) ; 7, 69 (d, J = 9 Hz : 1H) ; 8, 32 (mf : 1H) ; 10, 80 (mf : 1H). Soc., 1945, 67, 662, in 400 ml of tetrahydrofuran, 4, 4 g (25 mmol) of 2-methyl-quinoline-4,6-diamine, which can be prepared according to J. Med. Chem. 1992, 35, 252, and 2.8 g (25 mmol) of sodium carbonate. The reaction mixture is refluxed for 16 hours. After evaporation of the tetrahydrofuran, the residue is taken up in 400 ml of a mixture of water and dichoromethane (50-50 by volume). The organic phase is decanted, dried over sodium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure. 7.5 g (88%) of N6- (6-chloro-4-methylsulfanyl-triazin-2-yl) -2-methyl-quinoline-4,6-diamine are then obtained in the form of a pale yellow solid. whose characteristics are as follows: melting point = 294 ° C -1H NMR spectrum (300 MHz, (CD3) 2SO d6, 8 ppm): 2.43 (s: 3H); 2.52
(s: 3H); 6, 47 (s: 1H); 6, 61 (mf: 2H); 7, 62 (broad, J = 9 Hz: 1H); 7, 69 (d, J = 9 Hz: 1H); 8, 32 (mf: 1H); 10.80 (mf: 1H).
Synthèse en parallèle de N6-f6- (2-diméthylamino-éthylamino)-4-méthylsulfanyl-ri. 3. 51triazin-2-y ! 1-2-méthyl-quinoline-4, 6-diamine (exemple 1-1) Dans un réacteur magnétique chauffant avec condenseur Zymark, de type STEM RS2050 contenant 25 puits en parallèle munis chacun d'un tube en verre de 50 ml, on introduit 50 mg (0,15 mmole) de N6- (6-amino-4- méthylsulfanyl-[1, 3, 5]triazin-2-yl)-2-méthylquinoline-4,6-diamine. Dan sle premier tube (exemple 1-1), on ajoute successivement 5 ml de dioxane, 16 mg (0.15 mmole) de carbonate de sodium, 23 mg (0,15 mmole) d'iodure de sodium et 27 mg (0,3 mmole) de 2-diméthylamino-éthylamine. Le milieu réactionnel est chauffé au reflux sous argon pendant 24 heures. Après refroidissement, le contenu du tube est évaporé sous pression réduite, repris par 5 ml d'eau et 5 ml d'acétate d'éthyle et filtré. La phase organique est décantée, séchée et concentrée sous pression réduite. Le produit brut obtenu est alors purifié par LC/MS en utilisant une colonne de silice C18 Waters Xterra 3. 5 M, de diamètre 3 mm et de longueur 50 mm, en éluant par un gradient linéaire d'élution constitué au temps initial (to = 0 mn) par de l'eau contenant 0,05 % d'acide trifluoroacétique et au temps final (tf = 4 mn) par de l'acétonitrile contenant 0,05 % d'acide trifluoroacétique. On obtient ainsi, après purification, 58 mg de trifluoroacétate de N6-[ (6- (méthyl-quinolin- Parallel synthesis of N6- [6- (2-dimethylaminoethylamino) -4-methylsulfanyl]. 3. 51triazin-2-y! 1-2-methyl-quinoline-4,6-diamine (Example 1-1) In a magnetic heating reactor with Zymark condenser, of the STEM RS2050 type containing 25 wells in parallel, each provided with a 50 ml glass tube, 50 mg (0.15 mmol) of N6- (6-amino-4-methylsulfanyl- [1,3,5] triazin-2-yl) -2-methylquinoline-4,6-diamine were added. In the first tube (Example 1-1), 5 ml of dioxane, 16 mg (0.15 mmol) of sodium carbonate, 23 mg (0.15 mmol) of sodium iodide and 27 mg (0.3 mmol) of 2-dimethylaminoethylamine. The reaction medium is refluxed under argon for 24 hours. After cooling, the contents of the tube are evaporated under reduced pressure, taken up in 5 ml of water and 5 ml of ethyl acetate and filtered. The organic phase is decanted, dried and concentrated under reduced pressure. The crude product obtained is then purified by LC / MS using a C18 Waters Xterra 3. 5 M silica column, of diameter 3 mm and length 50 mm, eluting with a linear elution gradient constituted at the initial time (to = 0 min) with water containing 0.05% trifluoroacetic acid and at the final time (tf = 4 min) with acetonitrile containing 0.05% trifluoroacetic acid. 58 mg of N6 - [(6- (methyl-quinolin) trifluoroacetate are thus obtained after purification.
<Desc/Clms Page number 21> <Desc / Clms Page number 21>
6-yl-amino)-4-méthylthio-triazin-2-yl]-quinaldine-4, 6-diamine, dont les caractéristiques sont les suivantes : - spectre de masse (DAD-TIC) = 454 (MW) - temps de rétention = 2, 69 mn (les temps de rétention sont obtenus sur Colonne hypersil C18 5 um 50 mm diamètre 4. 6 mm marque Purity Elite en éluant avec un mélange de solvants A (H20/TFA 0. 05 %) et B (ACN/TFA 0. 05 %) avec un gradiant linéaire allant de 95 % A/5 % B (t = 0 mn) à 10 % A/90 % B à t= 3, 5 mn puis palier 2 mn).
6-yl-amino) -4-methylthio-triazin-2-yl] -quinaldine-4,6-diamine, whose characteristics are as follows: - mass spectrum (DAD-TIC) = 454 (MW) - time of retention = 2.69 min (retention times are obtained on hypersil column C18 5 um 50 mm diameter 4. 6 mm mark Purity Elite eluting with a mixture of solvents A (H20 / TFA 0. 05%) and B (ACN / TFA 0. 05%) with a linear gradient ranging from 95% A / 5% B (t = 0 min) to 10% A / 90% B at t = 3.5 min and then plateau 2 min).
Les exemples 1-1 à 1-26 ont été obtenus en opérant comme ci-dessus dans un réacteur Zymark STEM RS2050. Les structures, les diverses conditions opératoires utilisées et les caractéristiques des exemples 1-1 à 1-26 sont résumées dans le tableau ci-dessous :
Exemple Structure Conditions réactionnelles Caractéristiques AlkN (R'3- Solvant Chauffage Nbre de Masse Temps mmoles MH+ de d'amine Rétention (mn) dioxane 17 h/1000 0, 3 384 2, 69 /NNH- 1-2-NJ-NH-dloxane 17 h/1000 0, 3 410 2, 91 - N -NH"- 1-3 un.../\- < -choxane 17h/100 0, 15 411 2, 86 Ho U NH racémique trans 1-4) \ dioxane 3j./100 0, 45 422 2, 85 f 3-RS ... Examples 1-1 to 1-26 were obtained by operating as above in a Zymark STEM RS2050 reactor. The structures, the various operating conditions used and the characteristics of Examples 1-1 to 1-26 are summarized in the table below:
Example Structure Reaction conditions Characteristics AlkN (R'3- Solvent Heating No. of Mass Time mmoles MH + of amine Retention (mn) dioxane 17 h / 1000 0, 3 384 2, 69 / NNH-1-2-NJ-NH- dloxane 17 h / 1000 0, 3410 2, 91 - N -NH "- 1-3 a ... / \ - <-choxane 17h / 100 0, 15 411 2, 86 Ho U NH trans-1-4 trans) \ dioxane 3j./100 0, 45 422 2, 85 f 3-RS ...
1-5 dioxane 17 h/1001 0, 15 396 2, 84 2-8 "-NH < - 2-S 1-5 dioxane 17 hrs / 100 O, 15 396 2, 84 2-8 "-NH <- 2-S
<Desc/Clms Page number 22> <Desc / Clms Page number 22>
1-6 dioxane 17 h./100 0, 15 424 2, 79 t 2-RS 1-7./\ dioxane 17 h./100 0, 15 410 2, 72 H2Nt"NHracémique trans 1-8 H'/\ d dioxane 2 j./100 0, 3 452 2, 81 H2N NH-H 2 1-9/\ dioxanetû 24h./100 0, 3 425 2, 43 HN NL mVDMF1 "--1 NH--% 1-10 \ dioxane10 24 h./100 0, 3 410 2, 51 '"\/-\ m !/DMF1 NH-% 1-11-N)--" dioxane10 24h./100 0, 3 424 2, 50 mVDMF1 % 1-12 dioxane10 24 h./100 0, 3 398 2, 46 NH -m !/DMF1 t % 1-13 H dioxanel0 24h./100 0, 3 398 2, 48 '""NH < -mi/DMF1 % 1-14 dioxanel0 24 h./100 0, 3 412 2, 47 , m !/DMF1 % 1-15 H dioxane10 24 h. l1000 0, 3 384 2, 48 N mVDMF1 % 1-16 H dioxanel0 24 h./100 0, 3 396 2, 49 N NH-mVDMF1 % 1-17 d ! oxane10 24 h./100 0, 3 511 2, 38 mVDMF1 non % 1 r t 1 1-18 dioxanelo 24 h./i 00-0, 3 459 2, 62 Nr \--N N - mVDMF1 \/"\/ DMF1 -"--1 %
1-6 dioxane 17 h./100 0, 15 424 2, 79 t 2-RS 1-7. / Dioxane 17 h./100 0, 15 410 2, 72 H2Nt "trans-NH8 1-8 H '/ \ dioxane 2 dl / 100 0, 3 452 2, 81 H2N NH-H 2 1-9 / dioxanetu 24h / 100 0, 3 425 2, 43 HN NL mVDMF1 "- 1 NH -% 1-10 dioxane, 24 h / 100 0, 3410 2, 51% DMF 1 NH-% 1-11-N), dioxane, 24h / 100 0.34%, 50 mVDMF1% 1-12 dioxane 24 h./100 0, 398 2, 46 NH-m! / DMF1 t% 1-13 H dioxanel0 24h./100 0, 3 398 2, 48 '"" NH <-mI / DMF1% 1-14 dioxanel, 24 h / 100 0, 3412 2, 47, m / DMF1% 1-15 H dioxane, 24 h. 1, 0, 3 384 2, 48 N mVDMF1% 1-16 H dioxanel0 24 h./100 0, 3 396 2, 49 N NH-mVDMF1% 1-17 d! oxane, 24 h./100 0, 3511 2, 38 mVDMF1 no% 1 rt 1 1-18 dioxanelo 24 h./i 00-0, 3,459 2, 62 Nr \ - NN - mVDMF1 \ / "\ / DMF1 - "- 1%
<Desc/Clms Page number 23> <Desc / Clms Page number 23>
1-19 d ! oxane10 24 h./100 0, 3 410 2, 44 , H-- 1-20 dioxanel0 24 h./100 0, 3 410 2, 52 mVDMF1 7% 1-21 \ dioxanel0 24 h./100 0, 3 422 2, 55 mVDMF1 3-S 3-S 1-22 H dioxane10 24 h./1000 0, 3 400 2, 36 HCr- "NH < -mi/DMF1 zu 1-23 H dioxane10 24 h. l1000 0, 3 384 2, 40 NNH---mVDMF1 % 1-24 Y dioxanel0 24 h./100 0, 3 440 2, 58 N mUDMF1 X NH + % 1-25"""'N dioxane10 24 h./1 000 0, 3 410 2, 48 t N"-mi/DMF1 % 1-26 dioxanel0 24 h./100 0, 3 474 2, 86 ml/DMF1 '"'NH < -%
Exemple 2 : Synthèse en parallèle de dérivés substitués de N6-[6-amino-4diéthylamino- [1, 3, 5] triazin-2-yl]-2-méthyl-quinoline-4, 6-diamine
1-19 d! oxane, 24 h./100 0, 3410 2, 44, H-1-20 dioxanel 24 h./100 0, 3410 2, 52 mVDMF1 7% 1-21 \ dioxanel0 24 h./100 0, 3 422 2, 55 mVDMF1 3-S 3 -S 1-22 H dioxane 24 h./1000 0, 3 400 2, 36 HCr-NH 4 -mI / DMF 1 zu 1-23 H dioxane 24 hrs. 2.40 NNH --- mVDMF1% 1-24 Y dioxanel0 24 h./100 0, 3 440 2, 58 N mUDMF1 X NH +% 1-25 """N Noxoxane 24 h./1000 0, 3 410 2, 48% N-methyl / DMF1% 1-26 dioxanel, 24 hrs / 100%, 3474 2, 86 ml / DMF 1% NH 4%
Example 2: Parallel synthesis of substituted derivatives of N6- [6-amino-4-diethylamino- [1,3,5] triazin-2-yl] -2-methyl-quinoline-4,6-diamine
<Desc/Clms Page number 24> <Desc / Clms Page number 24>
Préparation de la N6- (6-chloro-4-diéthylamino-f1. 3, 51triazin-2-yl)-2-méthylquinoline-4, 6-diamine Dans un tricol de 1 litre, à une solution de 5 g (22,5 mmoles) de 2, 6-dichlor- 4-diéthylamino-[1, 3, 5] triazine commerciale dans 300 ml de tétrahydrofurane, on ajoute successivement 3,91 g (22,5 mmoles) de 2-méthyl-quinoline-4, 6diamine, qui peut être préparée selon J. Med. Chem. 1992,35, 252, et 2,4 g (22,5 mmoles) de carbonate de sodium. Le mélange réactionnel est chauffé à reflux pendant 20 heures. Après évaporation du tétrahydrofurane, le résidu est repris par 400 ml d'un mélange d'eau et de dichorométhane (50-50 en volumes). La phase organique est décantée, séchée sur sulfate de sodium et concentrée à sec sous pression réduite. On obtient alors 7,4 g (92 %) de N6- (6-chloro-4-diéthylamino-triazin-2-yl)-2-méthyl-quinoline-4, 6-diamine, sous forme d'un solide jaune dont les caractéristiques sont les suivantes : - point de fusion = 120 C - spectre de RMN'H (300 MHz, (CD3) 2SO d6, 8 en ppm) : 1,14 (mt : 6H) ; 2,42 (s : 3H) ; de 3,50 à 3,70 (mt : 4H) ; 6,47 (s et mf : 3H en totalité) ; 7,54 (d large, J = 9 Hz : 1 H) ; 7,67 (dd, J = 9 et 2 Hz : 1 H) ; 8,27 (mf : 1 H) ; 10,09
(mf : 1H).
Preparation of N6- (6-chloro-4-diethylamino-1,3,5-triazin-2-yl) -2-methylquinoline-4,6-diamine In a 1 liter tricol, to a solution of 5 g (22, 5 mmol) of commercial 2,6-dichloro-4-diethylamino- [1,3,5] triazine in 300 ml of tetrahydrofuran are successively added 3.91 g (22.5 mmol) of 2-methyl-quinoline-4. , 6diamine, which can be prepared according to J. Med. Chem. 1992, 35, 252, and 2.4 g (22.5 mmol) of sodium carbonate. The reaction mixture is refluxed for 20 hours. After evaporation of the tetrahydrofuran, the residue is taken up in 400 ml of a mixture of water and dichoromethane (50-50 by volume). The organic phase is decanted, dried over sodium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure. 7.4 g (92%) of N6- (6-chloro-4-diethylamino-triazin-2-yl) -2-methyl-quinoline-4,6-diamine are then obtained in the form of a yellow solid which the characteristics are as follows: melting point = 120 ° C. - 1 H NMR spectrum (300 MHz, (CD 3) 2 SO 4, 6 in ppm): 1.14 (mt: 6H); 2.42 (s: 3H); from 3.50 to 3.70 (mt: 4H); 6.47 (s and mf: 3H in total); 7.54 (broad, J = 9 Hz: 1H); 7.67 (dd, J = 9 and 2 Hz: 1H); 8.27 (mf: 1H); 10.09
(mf: 1H).
Synthèse en parallèle de (3-d, méthylamino-propylamino)-4diéthylamino- [1. 3. 5jtriazin-2-yl]-2-méthyl-quinoline-4. 6-diamine (exemple 2-1) Dans un réacteur magnétique chauffant avec condenseur Zymark, de type STEM RS2050 contenant 25 puits en parallèle munis chacun d'un tube en verre de 50 ml, on introduit 50 mg (0,13 mmole) de N6- (6-chloro-4- diéthylamino-[1, 3, 5] triazin-2-yl)-2-méthyl-quinoline-4, 6-diamine. Dans le premier tube (exemple 2-1), on ajoute successivement 5 ml de DMF, 19 mg (0.14 mmole) de carbonate de potassium, 21 mg (0,14 mmole) d'iodure de sodium et 14 mg (0,14 mmole) de 3-diméthylamino-propylamine. Le milieu réactionnel est chauffé à 120 C sous argon pendant 16 heures. Après refroidissement, le contenu du tube est évaporé sous pression réduite, repris par 5 ml d'eau, filtré et lavé avec de l'oxyde de diéthyle. Le produit brut obtenu est alors purifié par LC/MS en utilisant une colonne de silice C18 Waters Xterra 3.5 uM, de diamètre 3 mm et de longueur 50 mm, en éluant Parallel synthesis of (3-d, methylamino-propylamino) -4-diethylamino- [1. 3. 5-Triazin-2-yl] -2-methyl-quinolin-4. 6-diamine (Example 2-1) In a magnetic heating reactor with Zymark condenser, of the STEM RS2050 type containing 25 wells in parallel each provided with a 50 ml glass tube, 50 mg (0.13 mmol) of N6- (6-chloro-4-diethylamino- [1,3,5] triazin-2-yl) -2-methyl-quinolin-4,6-diamine. In the first tube (Example 2-1), 5 ml of DMF, 19 mg (0.14 mmol) of potassium carbonate, 21 mg (0.14 mmol) of sodium iodide and 14 mg (0.14) are successively added. mmol) of 3-dimethylaminopropylamine. The reaction medium is heated at 120 ° C. under argon for 16 hours. After cooling, the contents of the tube are evaporated under reduced pressure, taken up in 5 ml of water, filtered and washed with diethyl ether. The crude product obtained is then purified by LC / MS using a 3.5 μM Waters Xterra C18 silica column, 3 mm in diameter and 50 mm in length, eluting with
<Desc/Clms Page number 25><Desc / Clms Page number 25>
par un gradient linéaire d'élution constitué au temps initial (typ = 0 mn) par de l'eau contenant 0, 05 % d'acide trifluoroacétique et au temps final (t, = 4 mn) par de l'acétonitrile contenant 0,05 % d'acide trifluoroacétique. On obtient ainsi, après purification, 12 mg de N6-[(6-(3-diméthylamino-propylamino)-4- diéthylamino-[1, 3, 5]triazin-2-yl]-2-méthyl-quinoline-4, 6-diamine, dont les caractéristiques sont les suivantes : - spectre de masse (DAD-TIC) = 423 (MH+) - temps de rétention = 0,79 mn (les temps de rétention sont obtenus sur Colonne hypersil C18 5 um 50 mm diamètre 4.6 mm marque Purity Elite en éluant avec un mélange de solvants A (H20/TFA 0.05 %) et B (ACN/TFA 0.05 %) avec un gradiant linéaire allant de 95 % A/5 % B (t = 0 mn) à 10 % Al90 % B à t= 3,5 mn puis palier 2 mn). by a linear elution gradient constituted at the initial time (typ = 0 min) with water containing 0.05% trifluoroacetic acid and at the final time (t = 4 min) with acetonitrile containing 0, 05% trifluoroacetic acid. 12 mg of N6 - [(6- (3-dimethylamino-propylamino) -4-diethylamino- [1,3,5] triazin-2-yl] -2-methyl-quinolin-4 are thus obtained after purification, 6-diamine, whose characteristics are as follows: - mass spectrum (DAD-TIC) = 423 (MH +) - retention time = 0.79 min (retention times are obtained on hypersil column C18 5 μm 50 mm diameter 4.6 mm mark Purity Elite eluting with a mixture of solvents A (H20 / TFA 0.05%) and B (ACN / TFA 0.05%) with a linear gradient ranging from 95% A / 5% B (t = 0 min) to 10 % Al90% B at t = 3.5 min then plateau 2 min).
Les exemples 2-1 à 2-2 ont été obtenus en opérant comme ci-dessus dans un réacteur Zymark STEM RS2050. Les structures, les diverses conditions
opératoires utilisées et les caractéristiques des exemples 2-1 et 2-2 sont résumées dans le tableau ci-dessous :
Exemple Structure Conditions réactionnelles Caractéristiques AlkN (R'3)- Solvant Chauffage Nbre de Masse Temps de mmoles MH'Rétention d'amine (mn) 2-1 1 DMF 16 h./120'0, 14 423 0, 79 NNH-- 2-2/\ DMF 16 h/120"0, 14 421 0, 79 - N N- 1 1 Examples 2-1 to 2-2 were obtained by operating as above in a Zymark STEM RS2050 reactor. Structures, various conditions
The operating procedures used and the characteristics of Examples 2-1 and 2-2 are summarized in the table below:
Example Structure Reaction conditions Characteristics AlkN (R'3) - Solvent Heating No. of mass Time of mmoles MH'Retention of amine (mn) 2-1 1 DMF 16 h./120'0, 14 423 0, 79 NNH-- 2-2 / DMF 16 hrs / 120 ° C, 14,421 0, 79 - N N-1 1
<Desc/Clms Page number 26><Desc / Clms Page number 26>
Tableau de résultats biologiques
Table of biological results
<tb>
<tb> TRAP <SEP> G-4 <SEP> Cytotoxicité
<tb> Exemple
<tb> télomérase <SEP> #Tm <SEP> A549
<tb> IC50 <SEP> M <SEP> \ <SEP> IC50 <SEP> M
<tb> 1-1 <SEP> 6
<tb> 1-2 <SEP> 7.5
<tb> 1-3 <SEP> 4,4 <SEP> 3. <SEP> 1
<tb> 1-4 <SEP> 0,1 <SEP> 5.6
<tb> 1-5 <SEP> 1,6 <SEP> 2.8
<tb> 1-6 <SEP> 1,36
<tb> 1-7 <SEP> 0,47
<tb> 1-8 <SEP> 8.5
<tb> 1-9 <SEP> 7
<tb> 1-10 <SEP> 7
<tb> 1-11 <SEP> 4.5
<tb> 1-12 <SEP> 3,1
<tb> 1-13 <SEP> 2,9
<tb> 1-14 <SEP> 3,2
<tb> 1-15 <SEP> 4,6
<tb> 1-16 <SEP> 1,29
<tb> 1-17 <SEP> 1,6
<tb> 1-19 <SEP> 1
<tb> 1-20 <SEP> 3,1
<tb> 1-21 <SEP> 0,7
<tb> 1-22 <SEP> 3,2
<tb> 1-23 <SEP> 3,8
<tb> 1-24 <SEP> 3,9
<tb> 1-25 <SEP> 1,5 <SEP> 10
<tb> 1-26 <SEP> < <SEP> 0.3
<tb> 2-1 <SEP> 7.9
<tb> 2-2 <SEP> 2.4
<tb> <Tb>
<tb> TRAP <SEP> G-4 <SEP> Cytotoxicity
<tb> Example
<tb> telomerase <SEP>#Tm<SEP> A549
<tb> IC50 <SEP> M <SEP> \ <SEP> IC50 <SEP> M
<tb> 1-1 <SEP> 6
<tb> 1-2 <SEP> 7.5
<tb> 1-3 <SEP> 4,4 <SEP> 3. <SEP> 1
<tb> 1-4 <SEP> 0.1 <SEP> 5.6
<tb> 1-5 <SEP> 1.6 <SEP> 2.8
<tb> 1-6 <SEP> 1.36
<tb> 1-7 <SEP> 0.47
<tb> 1-8 <SEP> 8.5
<tb> 1-9 <SEP> 7
<tb> 1-10 <SEP> 7
<tb> 1-11 <SEP> 4.5
<tb> 1-12 <SEP> 3.1
<tb> 1-13 <SEP> 2.9
<tb> 1-14 <SEP> 3,2
<tb> 1-15 <SEP> 4,6
<tb> 1-16 <SEP> 1.29
<tb> 1-17 <SEP> 1.6
<tb> 1-19 <SEP> 1
<tb> 1-20 <SEP> 3.1
<tb> 1-21 <SEP> 0.7
<tb> 1-22 <SEP> 3,2
<tb> 1-23 <SEP> 3.8
<tb> 1-24 <SEP> 3.9
<tb> 1-25 <SEP> 1.5 <SEP> 10
<tb> 1-26 <SEP><<SEP> 0.3
<tb> 2-1 <SEP> 7.9
<tb> 2-2 <SEP> 2.4
<Tb>
Claims (30)
Priority Applications (10)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR0100205A FR2819255B1 (en) | 2001-01-09 | 2001-01-09 | CHEMICAL DERIVATIVES AND THEIR APPLICATION AS ANTITELOMERASE AGENT |
EP02710956A EP1351957A1 (en) | 2001-01-09 | 2002-01-09 | Chemical derivatives and their use as anti-telomerase agent |
MXPA03005975A MXPA03005975A (en) | 2001-01-09 | 2002-01-09 | Chemical derivatives and their use as anti-telomerase agent. |
JP2002556184A JP2004520350A (en) | 2001-01-09 | 2002-01-09 | Chemical derivatives and their use as antitelomerase agents |
CA002433723A CA2433723A1 (en) | 2001-01-09 | 2002-01-09 | Chemical derivatives and their use as anti-telomerase agent |
IL15679402A IL156794A0 (en) | 2001-01-09 | 2002-01-09 | Chemical derivatives and their use as anti-telomerase agent |
PCT/FR2002/000057 WO2002055515A1 (en) | 2001-01-09 | 2002-01-09 | Chemical derivatives and their use as anti-telomerase agent |
AU2002229859A AU2002229859B2 (en) | 2001-01-09 | 2002-01-09 | Chemical derivatives and their use as anti-telomerase agent |
US10/040,370 US6858608B2 (en) | 2001-01-09 | 2002-01-09 | Chemical derivatives and their application as antitelomerase agents |
US10/954,808 US7179816B2 (en) | 2001-01-09 | 2004-09-30 | Chemical derivatives and their application as antitelomerase agents |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR0100205A FR2819255B1 (en) | 2001-01-09 | 2001-01-09 | CHEMICAL DERIVATIVES AND THEIR APPLICATION AS ANTITELOMERASE AGENT |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FR2819255A1 true FR2819255A1 (en) | 2002-07-12 |
FR2819255B1 FR2819255B1 (en) | 2003-02-28 |
Family
ID=8858610
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FR0100205A Expired - Fee Related FR2819255B1 (en) | 2001-01-09 | 2001-01-09 | CHEMICAL DERIVATIVES AND THEIR APPLICATION AS ANTITELOMERASE AGENT |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP1351957A1 (en) |
JP (1) | JP2004520350A (en) |
AU (1) | AU2002229859B2 (en) |
CA (1) | CA2433723A1 (en) |
FR (1) | FR2819255B1 (en) |
IL (1) | IL156794A0 (en) |
MX (1) | MXPA03005975A (en) |
WO (1) | WO2002055515A1 (en) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6887873B2 (en) | 2001-03-23 | 2005-05-03 | Aventis Pharma S.A. | Triazine derivatives and their application as antitelomerase agents |
US7173032B2 (en) * | 2001-09-21 | 2007-02-06 | Reddy Us Therapeutics, Inc. | Methods and compositions of novel triazine compounds |
FR2850970B1 (en) * | 2003-02-07 | 2006-07-07 | Aventis Pharma Sa | CHEMICAL DERIVATIVES BINDING VERY SPECIFIC TO G-QUADRUPLEX DNA STRUCTURES AND THEIR APPLICATION AS A SPECIFIC ANTICANCER AGENT |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1993020056A1 (en) * | 1992-03-27 | 1993-10-14 | Michael Jarman | Melamine derivatives for use in the treatment of cancer |
US5767278A (en) * | 1995-10-06 | 1998-06-16 | Geron Corporation | Telomerase inhibitors |
JPH1160573A (en) * | 1997-08-22 | 1999-03-02 | Nippon Kayaku Co Ltd | Triazine derivative and telomerase inhibitor |
-
2001
- 2001-01-09 FR FR0100205A patent/FR2819255B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-01-09 AU AU2002229859A patent/AU2002229859B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-01-09 MX MXPA03005975A patent/MXPA03005975A/en not_active Application Discontinuation
- 2002-01-09 JP JP2002556184A patent/JP2004520350A/en not_active Abandoned
- 2002-01-09 CA CA002433723A patent/CA2433723A1/en not_active Abandoned
- 2002-01-09 WO PCT/FR2002/000057 patent/WO2002055515A1/en not_active Application Discontinuation
- 2002-01-09 IL IL15679402A patent/IL156794A0/en unknown
- 2002-01-09 EP EP02710956A patent/EP1351957A1/en not_active Withdrawn
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1993020056A1 (en) * | 1992-03-27 | 1993-10-14 | Michael Jarman | Melamine derivatives for use in the treatment of cancer |
US5767278A (en) * | 1995-10-06 | 1998-06-16 | Geron Corporation | Telomerase inhibitors |
JPH1160573A (en) * | 1997-08-22 | 1999-03-02 | Nippon Kayaku Co Ltd | Triazine derivative and telomerase inhibitor |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
PATENT ABSTRACTS OF JAPAN vol. 1999, no. 08 30 June 1999 (1999-06-30) * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2002055515A1 (en) | 2002-07-18 |
AU2002229859B2 (en) | 2008-03-13 |
FR2819255B1 (en) | 2003-02-28 |
MXPA03005975A (en) | 2005-02-14 |
CA2433723A1 (en) | 2002-07-18 |
EP1351957A1 (en) | 2003-10-15 |
JP2004520350A (en) | 2004-07-08 |
IL156794A0 (en) | 2004-02-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP1244650B1 (en) | Arylamine derivatives and their use as anti-telomerase agent | |
EP1401833A2 (en) | Chemical derivatives and the use thereof as an anti-elomerase agent | |
EP3368023B1 (en) | Derivatives of porphyrins, their process of preparation and their use for treating viral infections | |
WO2002076975A1 (en) | Chemical derivatives and their use as anti-telomerase agent | |
US20030087931A1 (en) | Chemical derivatives and their application as antitelomerease agent | |
FR2850970A1 (en) | New quaternary aromatic nitrogen heterocycle derivatives that fix the G-quadruplex structure of DNA or RNA are telomerase inhibitors, useful in the treatment of cancers and some genetic disorders | |
US7179816B2 (en) | Chemical derivatives and their application as antitelomerase agents | |
FR2819255A1 (en) | CHEMICAL DERIVATIVES AND THEIR APPLICATION AS ANTITELOMERASE AGENT | |
US8053583B2 (en) | Anti-cancer compound and manufacturing method thereof | |
WO2002012194A1 (en) | Phenantridine derivatives and their use as anti-telomerase agent | |
FR2821355A1 (en) | CHEMICAL DERIVATIVES AND THEIR APPLICATION AS ANTITELOMERASE AGENT | |
FR2822468A1 (en) | New arylamino-substituted triazine or diazine derivatives, used as telomerase inhibiting anticancer agents, by fixing the G-quadruplex structure of DNA or RNA | |
US20030013711A1 (en) | Chemical derivatives and their application as antitelomerase agents | |
FR2825090A1 (en) | New compounds as telomerase inhibitors that fix the G-quadruplex structure of DNA or RNA, useful in the treatment of cancers | |
FR2801588A1 (en) | Diarylamino diazine and triazine derivatives are telomerase inhibitors and G-quadruplex stabilizers, useful in the treatment of cancers | |
US20040034023A1 (en) | Use of polycyclic aromatic compounds for making medicines capable of inhibiting telomerase |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
ST | Notification of lapse |
Effective date: 20091030 |