FR2659660A1 - Process for the extraction of proteins, not bound to chloroplast pigments, from plant cells - Google Patents

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    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23JPROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J1/00Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
    • A23J1/006Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from vegetable materials
    • A23J1/007Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from vegetable materials from leafy vegetables, e.g. alfalfa, clover, grass

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Abstract

Process for the extraction of proteins not bound to chloroplast pigments or white proteins from plant cells comprising a step of heating by injection of steam until a temperature value, fixed as maximum value, is obtained. The heating temperature is controlled by adjusting the pressure used during this step. This step may be followed by the establishment of a sharp depression in the cooking chamber which has the effect of improving the protein extraction yield. The plant material thus treated is pressed in order to extract the white proteins therefrom. This process has the advantage of avoiding an overheating of the plant material resulting in the coagulation, in the plant tissues, of the white proteins.

Description

La présente invention a pour objet un procédé d'extraction des protéines des cellules végétales , plus particulièrement des protéines non liées aux pigments chloroplastiques , ou protéines blanches
Les végétaux feuillus contiennent des proportions élevées de matière protéique représentée par un très grand nombre de protéines, dont la plupart ont une fonction enzymatique
On a l'habitude de classer ces protéines en distinguant celles qui sont liées aux pigments photorécepteurs et celles qui ne le sont pas.
The subject of the present invention is a process for extracting proteins from plant cells, more particularly proteins not linked to chloroplastic pigments, or white proteins.
Leafy plants contain high proportions of protein matter represented by a very large number of proteins, most of which have an enzymatic function
We are used to classifying these proteins by distinguishing those which are linked to photoreceptor pigments and those which are not.

Les premières dites "protéines vertes" sont des protéines chloroplastiques et plus particulièrement les protéines intrinsèques des thylakoldes liées aux pigments pho torécepteurs caroténoïdes et chlorophylles , et contiennent en particulier les chromoprotéines des photosystèmes.  The first so-called "green proteins" are chloroplastic proteins and more particularly the intrinsic proteins of the thylakoldes linked to the photoreceptor pigments carotenoids and chlorophylls, and contain in particular the chromoproteins of photosystems.

Ces protéines ne peuvent être séparées facilement des pigments. These proteins cannot be easily separated from pigments.

Cette fraction a la propriété de co-précipiter par chauffage à des niveaux de température assez bas. This fraction has the property of co-precipitating by heating at fairly low temperature levels.

La seconde classe est constituée de l'ensemble des protéines hydrosolubles , ou protéines blanches. The second class consists of all water-soluble proteins, or white proteins.

Elles sont nombreuses et ont des localisations diverses dans les cellules. They are numerous and have various locations in cells.

La majeure partie (50 à 70% de cette classe) est constituée par une protéine unique, qui de ce fait est la plus abondante dans le monde. I1 s'agit d'une enzyme à double fonction la "Ribulose - 1,5 biphosphate carboxylase oxygénase" ou Rubisco, responsable du déclenchement des phénomènes de photosynthèse et de photorespiration du cycle de
Calvin
Cette protéine de structure assez bien connue, est localisée dans le stroma des chloroplastes où elle se trouve à des concentrations de 100 à 300 mg/ml.
Most (50 to 70% of this class) is made up of a single protein, which is therefore the most abundant in the world. It is a double function enzyme "Ribulose - 1,5 biphosphate carboxylase oxygenase" or Rubisco, responsible for triggering the photosynthesis and photorespiration phenomena of the
Calvin
This fairly well-known structural protein is located in the stroma of the chloroplasts where it is found in concentrations of 100 to 300 mg / ml.

Cette matière présenterait pour l'homme le double avantage d'une valeur d'efficacité alimentaire protéique élevée et de propriétés fonctionnelles bien caractérisées valorisables par les technologies agro-alimentaires. This material would have the double advantage for humans of a high protein food efficiency value and well-characterized functional properties that can be exploited by agro-food technologies.

A ce jour cette source très abondante de matière protéique n'est valorisée qu'à travers les fourrages par les animaux et la consommation de certains végétaux tels que les feuilles d'épinard ou d'amaranthe. To date, this very abundant source of protein matter is only valued through animal fodder and the consumption of certain plants such as spinach or amaranth leaves.

Divers procédés ont été mis au point ayant pour but l'extraction et la séparation des protéines blanches et des protéines vertes. Various methods have been developed for the purpose of extracting and separating white proteins and green proteins.

Le brevet US 3 823 128 a pour objet un procédé comprenant des étapes de broyage et de pressage à froid, de chauffage du jus de pressage et de traitements chimiques afin d'obtenir des préparations de protéines blanches. La première étape de broyage et de pressage des matières végétales résulte en la formation d'un jus appelé jus vert , et d'un gâteau fibreux . Cette étape est effectuée à froid, en présence de divers additifs destinés à faciliter l'extraction ou à minimiser la détérioration des protéines. The patent US 3 823 128 relates to a process comprising stages of grinding and cold pressing, heating of the pressing juice and chemical treatments in order to obtain preparations of white proteins. The first stage of crushing and pressing vegetable matter results in the formation of a juice called green juice, and a fibrous cake. This step is carried out cold, in the presence of various additives intended to facilitate the extraction or to minimize the deterioration of the proteins.

La seconde étape de ce procédé consiste en un chauffage du jus vert afin de précipiter les protéines vertes , tout en laissant en solution les protéines blanches
Cette étape de chauffage est mise en oeuvre par injection de vapeur à une température comprise entre 55 et 700C durant une période allant de O et 40 secondes. Une phase de refroidissement rapide jusqu a une température d'environ 40 à 450C suit ce traitement par la vapeur.
The second step of this process consists of heating the green juice in order to precipitate the green proteins, while leaving the white proteins in solution.
This heating step is carried out by injecting steam at a temperature between 55 and 700C for a period ranging from 0 to 40 seconds. A rapid cooling phase to a temperature of around 40 to 450C follows this steam treatment.

Enfin, une troisième étape est mise en oeuvre afin de séparer les protéines cytoplasmiques des liquides issus de l'étape de chauffage . A cet effet, plusieurs traitements sont envisagés : addition d'acide , traitement thermique à une température supérieure à 650C ou combinaison de ces deux traitements. Finally, a third step is implemented in order to separate the cytoplasmic proteins from the liquids from the heating step. To this end, several treatments are envisaged: addition of acid, heat treatment at a temperature above 650C or combination of these two treatments.

Ce procédé,bien que permettant une extraction des protéines blanches, présente cependant des inconvénients notables
En effet, le pressage de la matière végétale se fait à froid et de ce fait ne permet pas d'obtenir une siccité importante du gâteau fibreux résultant.
This process, although allowing an extraction of white proteins, nevertheless presents notable drawbacks
Indeed, the pressing of the plant material is done cold and therefore does not allow to obtain a significant dryness of the resulting fibrous cake.

D'autre part, l'injection de vapeur telle qu'effectuée dans ce procédé crée des surchauffes locales qui ont pour effet d'entrainer la coagulation simultanée des protéines vertes et d'une fraction des protéines blanches des matières végétales. On the other hand, the injection of steam as carried out in this process creates local overheating which has the effect of causing the simultaneous coagulation of the green proteins and of a fraction of the white proteins of the plant materials.

Le brevet FR 2 294 647 , a pour objet un procédé comprenant une inversion des étapes principales par rapport au brevet US 3 823.128 précédemment analysé . En effet ce procédé comprend une première étape de traitement en milieu humide de la masse végétale par la température ou par voie chimique , suivie d'un pressage de la masse végétale ainsi traitée. The patent FR 2 294 647 relates to a process comprising an inversion of the main steps with respect to the patent US 3 823.128 previously analyzed. In fact, this process comprises a first stage of treatment in a humid environment of the plant mass by temperature or by chemical means, followed by pressing of the plant mass thus treated.

Dans le cas du traitement thermique la température de la masse végétale est préférentiellement comprise entre 50 et 600C avec un pH allant de 5 à 8,5. In the case of heat treatment, the temperature of the plant mass is preferably between 50 and 600C with a pH ranging from 5 to 8.5.

Ledit traitement thermique se fait en milieu humide, et plus particulièrement en présence d'eau ou d'un sérum récupéré en fin de procédé et recyclé
Ce procédé comporte des améliorations certaines par rapport au procédé précédemment décrit , la pressabilité et donc l'extraction de matière soluble sont augmentées, et les protéines vertes sont en partie retenues dans les tissus fibreux. On obtient donc un jus moins chargé en protéines.
Said heat treatment is carried out in a humid environment, and more particularly in the presence of water or a serum recovered at the end of the process and recycled
This process includes certain improvements compared to the process described above, the pressability and therefore the extraction of soluble material are increased, and the green proteins are partly retained in the fibrous tissues. We therefore obtain a juice less loaded with proteins.

Le brevet 2.294.647 permet aussi de résoudre le problème de la surchauffe des tissus végétaux en effectuant l'étape de chauffage à l'aide d'un liquide, la quantité de liquide étant inversement proportionnelle à l'écart de température maximal que l'on veut obtenir dans la masse végétale; cette solution implique néanmoins l'utilisation de grandes quantités de fluides et donc des étapes supplémentaires d'extraction des protéines de ces fluides. Patent 2,294,647 also makes it possible to solve the problem of overheating plant tissues by carrying out the heating step using a liquid, the quantity of liquid being inversely proportional to the maximum temperature difference that the we want to obtain in the plant mass; this solution nevertheless involves the use of large quantities of fluids and therefore additional steps for extracting proteins from these fluids.

Aucun de ces procédés ne résoud donc de manière satisfaisante le problème de l'extraction des protéines blanches ou protéines non liées aux pigments chloroplastiques des tissus végétaux et de la séparation de ces protéines et des protéines vertes. None of these methods therefore satisfactorily solves the problem of extracting white proteins or proteins not linked to chloroplast pigments from plant tissues and of separating these proteins from green proteins.

En effet, le procédé du brevet US 3 823.128 a pour inconvénient majeur d'entraîner la coagulation d'une certaine partie des protéines blanches en raison d'une surchauffe due à une température trop importante lors de l'étape de chauffage. In fact, the method of US Pat. No. 3,823,128 has the major drawback of causing the coagulation of a certain part of the white proteins due to overheating due to too high a temperature during the heating step.

Un contrôle de température, afin d'éviter une surchauffe entraînant une précipitation des protéines dites blanches est donc nécessaire, mais ce contrôle ne doit pas non plus entraîner des températures de chauffage trop faibles qui auraient comme inconvénient de ne pas précipiter les protéines vertes qui contamineraient alors les extraits de protéines blanches. A temperature control, in order to avoid overheating leading to precipitation of the so-called white proteins is therefore necessary, but this control must also not lead to too low heating temperatures which would have the disadvantage of not precipitating the green proteins which would contaminate then the white protein extracts.

De plus , le fluide utilisé dans l'étape de chauffage ne doit pas entraîner une dilution trop importante des protéines extraites qui rendrait nécessaire des étapes supplémentaires d'extraction, comme c'est le cas dans le brevet
FR 2.294.647.
In addition, the fluid used in the heating stage must not result in an excessive dilution of the proteins extracted which would make necessary additional extraction stages, as is the case in the patent.
FR 2,294,647.

La présente invention a donc pour objet un procédé présentant par rapport aux procédés décrits dans l'art antérieur une meilleure extraction des protéines blanches, c'est-à-dire des protéines non liées aux pigments des chloroplastes du fait d'une meilleure régulation de la température et d'une dilution limitée desdites protéines dans le fluide utilisé dans l'étape de chauffage
Selon l'invention on a constaté que le contrôle de la température lors de l'étape de chauffage pouvait être effectué par ajustement de la pression lors de cette étape
I1 a été aussi mis en évidence qu'une brusque dépression dans le système de traitement des matières végétales après la phase de montée en température augmentait la libération des fluides intracellulaires.
A subject of the present invention is therefore a process which, compared with the processes described in the prior art, has a better extraction of white proteins, that is to say proteins which are not bound to the chloroplast pigments due to better regulation of the temperature and a limited dilution of said proteins in the fluid used in the heating step
According to the invention it has been found that the temperature control during the heating step could be carried out by adjusting the pressure during this step
It has also been shown that a sudden depression in the plant material processing system after the temperature rise phase increases the release of intracellular fluids.

La présente invention a donc pour objet un procédé d'extraction des protéines non liées aux pigments chloroplastiques, ou protéines blanches, des cellules végétales et de séparation de ces protéines et des protéines vertes comprenant au moins une étape de chauffage et une étape de pressage de la masse végétale, caractérisé en ce que ladite étape de chauffage est mise en oeuvre par injection de vapeur jusqu'à ce que la température atteigne une valeur fixée comme valeur maximale , fonction du type de végétaux , ladite température étant contrôlée par ajustement de la pression mise en oeuvre lors de cette étape. The present invention therefore relates to a process for extracting proteins not linked to chloroplastic pigments, or white proteins, from plant cells and for separating these proteins and green proteins comprising at least one heating step and one pressing step. the plant mass, characterized in that said heating step is carried out by injecting steam until the temperature reaches a fixed value as a maximum value, depending on the type of plant, said temperature being controlled by adjusting the pressure implemented during this step.

Cette valeur de la pression est choisie comme étant égale à la pression de vapeur saturante à la valeur maximale de la température. This pressure value is chosen to be equal to the saturated vapor pressure at the maximum temperature value.

La valeur de la pression est fixe et connue de l'homme du métier, grâce à des tables de correspondance. The pressure value is fixed and known to those skilled in the art, thanks to correspondence tables.

Elle est égale à environ 12.ka à 500C et à 19 kPa à 600C. It is equal to around 12.ka at 500C and 19 kPa at 600C.

Selon un mode de mise en oeuvre préférentiel de l'invention, lorsque la température a atteint la valeur maximale fixée, l'injection de vapeur est arrêtée et la pression est abaissée de manière brutale afin de créer une dépression .Cette pression peut alors être abaissée jusqu'à 5 kPa. According to a preferred embodiment of the invention, when the temperature has reached the maximum value set, the steam injection is stopped and the pressure is lowered abruptly in order to create a vacuum. This pressure can then be lowered up to 5 kPa.

Le procédé permet donc, grâce au contrôle de la température,d'éviter une surchauffe de la masse végétale et une précipitation des protéines blanches. D'autre part, ce procédé utilisant de la vapeur comme fluide de traitement thermique évite la dilution des protéines à extraire. The process therefore makes it possible, thanks to the temperature control, to avoid overheating of the plant mass and precipitation of the white proteins. On the other hand, this process using steam as heat treatment fluid avoids the dilution of the proteins to be extracted.

L'abaissement brutal de la pression permet un éclatement interne des cellules qui supplée ainsi la phase de dilacération des membranes par le broyage. The brutal lowering of the pressure allows an internal bursting of the cells which thus supplants the phase of dilaceration of the membranes by grinding.

Le procédé selon l'invention peut comprendre les étapes suivantes
- introduction d'une quantité de matière végétale fraîche dans une enceinte fermée,
- mise sous vide partiel de l'enceinte
- injection de vapeur
- maintien de l'injection de vapeur jusqu'à atteindre la valeur de température maximale fixée,
- arrêt de l'injection de vapeur
- mise sous vide poussé de l'enceinte.
The method according to the invention can comprise the following steps
- introduction of a quantity of fresh vegetable matter into a closed enclosure,
- partial vacuum of the enclosure
- steam injection
- maintaining the steam injection until reaching the maximum temperature value set,
- stopping the steam injection
- placing the chamber under high vacuum.

De manière préférentielle , la masse végétale est constituée de luzerne
La valeur maximale de la température doit être ajustée en fonction du type de matériel végétal traité
Cette valeur est d'environ 500C pour la luzerne.
Preferably, the plant mass consists of alfalfa
The maximum temperature value must be adjusted according to the type of plant material treated
This value is around 500C for alfalfa.

Ce procédé peut être effectué de manière continue ou discontinue mais il sera préférentiellement effectué de la manière discontinue. This process can be carried out continuously or discontinuously but it will preferably be carried out discontinuously.

Les jus obtenus après l'étape de pressage peuvent être traités par toute méthode connue par l'homme de l'art afin d'en isoler les protéines et notamment par traitements thermique ou chimique. The juices obtained after the pressing step can be treated by any method known to those skilled in the art in order to isolate the proteins, and in particular by heat or chemical treatment.

Le procédé de l'invention peut être mis en oeuvre à l'aide de tout appareillage connu de l'homme du métier et notamment à l'aide d'un appareillage comprenant un cuiseur pouvant résister à des basses pressions pourvu de moyens permettant le chauffage , la mise sous vide et l'injection de vapeur ainsi que de moyens de contrôle et de régulation de la pression et de la température, ledit cuiseur pouvant être raccordé à une pompe à vide,et étant couplé de manière connue à une presse. The method of the invention can be implemented using any apparatus known to those skilled in the art and in particular using an apparatus comprising a cooker capable of withstanding low pressures provided with means for heating , evacuating and injecting steam as well as means for controlling and regulating the pressure and the temperature, said cooker being able to be connected to a vacuum pump, and being coupled in a known manner to a press.

La description qui suit donne à titre illustratif et non limitatif des exemples d'application de l'invention. The description which follows gives by way of illustration and without limitation examples of application of the invention.

La figure 1 décrit les principales étapes du procédé selon l'invention, appliquées à la luzerne
La figure 2 représente le schéma général d'un dispositif destiné à la mise en oeuvre du procédé selon l'invention
La figure 3 représente un cuiseur pouvant être utilisé dans l'étape de cuisson de la matière végétale du procédé selon l'invention.
Figure 1 describes the main steps of the method according to the invention, applied to alfalfa
FIG. 2 represents the general diagram of a device intended for the implementation of the method according to the invention
FIG. 3 represents a cooker which can be used in the step of cooking the plant material of the process according to the invention.

EXEMPLES
EXEMPLE 1
Procédé et dispositif d'extraction des protéines
Le procédé de préparation schématisé sur la figure 1 , est un procédé d'extraction des protéines non liées aux pigments chloroplastiques ou protéines blanches , à partir de luzerne
De la luzerne fraîche est placée dans l'enceinte du cuiseur,puis le cuiseur est mis sous vide partiel (1).La vapeur est ensuite injectée dans cette enceinte (2) jusqu'à ce que la valeur de température maximale soit atteinte.
EXAMPLES
EXAMPLE 1
Protein extraction method and device
The preparation process shown diagrammatically in FIG. 1 is a process for extracting proteins not linked to chloroplastic pigments or white proteins, from alfalfa
Fresh alfalfa is placed in the enclosure of the cooker, then the cooker is placed under partial vacuum (1). Steam is then injected into this enclosure (2) until the maximum temperature value is reached.

L'injection de vapeur est alors arrêtée (3).The steam injection is then stopped (3).

Une étape de mise sous vide poussé du cuiseur (4) peut alors être mise en oeuvre en fonction du matériel végétal et des conditions du procédé. A step of placing the cooker (4) under high vacuum can then be implemented as a function of the plant material and of the conditions of the process.

Après cette étape ou après l'étape (3) le matériel végétal est serré dans une presse (5) d'où on tire après pressage (6) un jus brun et de la luzerne pressée. After this step or after step (3) the plant material is pressed in a press (5) from which after pressing (6) a brown juice and pressed alfalfa are drawn.

L'extraction des protéines (7) peut alors être effectuée par divers moyens , résultant en l'obtention d'un isolat protéique
La figure 2 représente le schéma d'un dispositif pour la mise en oeuvre du procédé d'extraction de protéines à partir de la luzerne selon l'invention . Cet appareillage comprend un cuiseur (101) qui peut être chauffé par exemple à 50"C à une pression de 12 kPa., et dans lequel la luzerne est chauffée sous pression, cette enceinte de cuisson pouvant être raccordée à une pompe à vide (102).
Protein extraction (7) can then be carried out by various means, resulting in obtaining a protein isolate
FIG. 2 represents the diagram of a device for implementing the method of extracting proteins from alfalfa according to the invention. This equipment comprises a cooker (101) which can be heated for example to 50 "C at a pressure of 12 kPa., And in which the alfalfa is heated under pressure, this cooking enclosure being able to be connected to a vacuum pump (102 ).

La presse(103) permet d'obtenir d'une part un jus brun qui va ensuite être traité dans l'atelier d'extraction des protéines (104) et d'autre part de la luzerne pressée
De ce jus brun sont extraits lors de l'extraction des protéines , un isolat protéïque et un sérum déprotéiné lequel est transféré dans un évaporateur (106) alimenté à l'aide de vapeur à 1050C. Le sérum concentré issu de cette étape est recyclé par mélange avec de la luzerne pressée et séché sur le sécheur à tapis (105) avant d'être mis en forme par un granulateur (108).
The press (103) makes it possible to obtain on the one hand a brown juice which will then be treated in the protein extraction workshop (104) and on the other hand pressed alfalfa
From this brown juice are extracted during the extraction of proteins, a protein isolate and a deproteinized serum which is transferred to an evaporator (106) supplied with the aid of steam at 1050C. The concentrated serum from this step is recycled by mixing with pressed alfalfa and dried on the carpet dryer (105) before being shaped by a granulator (108).

Les condensats obtenus lors du passage du sérum dans l'évaporateur (106) sont fournis à une température de 90"C à un premier aérotherme (110). The condensates obtained during the passage of the serum through the evaporator (106) are supplied at a temperature of 90 "C to a first air heater (110).

Un second aérotherme(l09)utilise de la vapeur pour une élévation de température de l'air préchauffé dans le premier aérotherme (110). Les condensats obtenus s'ajoutent à ceux de l'évaporateur. A second air heater (109) uses steam to raise the temperature of the preheated air in the first air heater (110). The condensates obtained are added to those of the evaporator.

Sur cette figure les circuits de vapeur sont représentés par des lignes pointillées. In this figure the steam circuits are represented by dotted lines.

Dans cet exemple le thermocompresseur(107) recomprime la vapeur à 95"C issue de l'évaporation du sérum dans l'évaporateur(106),avec de la vapeur à 1200 kPa. In this example the thermocompressor (107) recompresses the steam to 95 "C resulting from the evaporation of the serum in the evaporator (106), with steam at 1200 kPa.

Dans ces conditions, il suffit de 38 kg de vapeur à 1200 kPa pour recomprimer 100 kg de vapeur à 95 C et pour produire 138 kg de vapeur à 1050C utilisable dans le cuiseur (101) dans l'évaporateur (106) et dans le second aérotherme (109). Under these conditions, just 38 kg of steam at 1200 kPa is enough to recompress 100 kg of steam at 95 C and to produce 138 kg of steam at 1050C usable in the cooker (101) in the evaporator (106) and in the second air heater (109).

Le premier aérotherme (110) est alimenté par de l'air à 150C tandis que le second aérotherme est alimenté par de la vapeur à 105 C issue du thermocompresseur (107). The first air heater (110) is supplied with air at 150C while the second air heater is supplied with steam at 105 C from the thermocompressor (107).

L'air réchauffé dans le second aérotherme (109) est utilisé dans le sécheur à tapis (105).The air heated in the second air heater (109) is used in the carpet dryer (105).

La figure 3 représente schématiquement un cuiseur utilisé dans le procédé selon l'invention; ce cuiseur est constitué d'un corps cylindrique horizontal (ll)dans lequel tourne une vis de manutention (12) . Ce cuiseur est alimenté en fourrage par l'orifice (13 ) , la matière végétale cuite étant retirée par l'orifice (14). Le vide est obtenu à l'aide d'une pompe à vide reliée au conduit(15), tandis que la vapeur est injectée par la partie inférieure du cuiseur au travers d'orifices (16 ). FIG. 3 schematically represents a cooker used in the method according to the invention; this cooker consists of a horizontal cylindrical body (ll) in which a handling screw (12) rotates. This cooker is supplied with fodder through the orifice (13), the cooked vegetable material being withdrawn through the orifice (14). Vacuum is obtained using a vacuum pump connected to the conduit (15), while steam is injected from the bottom of the cooker through orifices (16).

EXEMPLE 2
Comparaison du procédé selon l'invention et des procédés décrits dans l'art antérieur
Une expérimentation a été conduite en Septembre 1989 pour comparer l'extractibilité de la Rubisco par des voies différentes . L'essai a été fait tard en saison quand la luzerne était d'une qualité exceptionnelle
Les chiffres qui suivent sont donc à considérer davantage dans leurs valeurs relatives que dans leurs valeurs absolues. Les rendements par rapport à la matière sèche (M.S.) seraient certainement moins forts avec une luzerne de moins bonne qualité.En revanche , exprimées par rapport à la matière azotée totale (M.A.T.) , les valeurs peuvent être considérées comme plus représentatives
Les résultats sont présentés dans le tableau et appellent les commentaires suivants
- Dans le cas d'un simple "pressage à froid" (1père colonne ) la Rubisco a été dosée dans le jus total obtenu lui même avec un rendement de pressage élevé. Ce chiffre constitue donc une référence sévère .
EXAMPLE 2
Comparison of the method according to the invention and of the methods described in the prior art
An experiment was carried out in September 1989 to compare the extractability of Rubisco by different routes. The trial was done late in the season when the alfalfa was of exceptional quality.
The figures which follow are therefore to be considered more in their relative values than in their absolute values. Yields relative to dry matter (DM) would certainly be lower with lower quality alfalfa; however, expressed relative to total nitrogenous matter (MAT), the values can be considered more representative
The results are presented in the table and call for the following comments
- In the case of a simple "cold pressing" (1st column), the Rubisco was dosed in the total juice obtained itself with a high pressing yield. This figure therefore constitutes a severe reference.

A noter par ailleurs, que l'extraction de la
Rubisco à partir de jus vert obtenu par le procédé décrit dans le brevet US 3.823.128 , est peu réalisable et ne peut se faire sans une perte élevée . Par cette voie, le chiffre final serait donc inférieur à 4,3% de Matières Sèches ou 14,2 % des Matières Azotées qui sont les résultats obtenus dans cette expérimentation.
Note also that the extraction of the
Rubisco from green juice obtained by the process described in US Patent 3,823,128, is impractical and cannot be done without a high loss. By this route, the final figure would therefore be less than 4.3% of Dry Matter or 14.2% of Nitrogenous Matter which are the results obtained in this experiment.

- La seconde colonne présente le résultat du procédé du brevet FR 2.294.647 , , par recyclage d'eau et de sérum, appliqué à une température de 500C . Avec un très bon pressage , le rendement de Rubisco dans le jus est excellent mais sous une forme très diluée (3,5 g/l au lieu de 14,2 g/l dans le jus vert) et au prix d'une adjonction d'eau très importante (250 kg pour 100 kg de luzerne ) avec les inconvénients qui y sont liés (dilution, coût de séchage ou contrainte de rejet,perte de matières solubles...)
Les quatre essais suivants mis en oeuvre à l'aide du procédé selon l'invention résument clairement les avantages de ce procédé.
- The second column presents the result of the process of patent FR 2,294,647, by recycling water and serum, applied at a temperature of 500C. With a very good pressing, the yield of Rubisco in the juice is excellent but in a very diluted form (3.5 g / l instead of 14.2 g / l in the green juice) and at the price of an addition of very large water (250 kg per 100 kg of alfalfa) with the associated drawbacks (dilution, cost of drying or rejection constraint, loss of soluble matter ...)
The following four tests carried out using the method according to the invention clearly summarize the advantages of this method.

On constate qu'à la même température (50"C) que pour l'essai selon le procédé du brevet FR 2.294.647 par chauffage préalable avec eau et jus recyclés, le rendement est un peu amélioré (7% de plus), mais avec une augmentation de poids par adjonction d'eau de 8 à 8,5 kg qui est faible par rapport aux 250 kgs du procédé du brevet FR 2.294.647. It can be seen that at the same temperature (50 ° C.) as for the test according to the method of patent FR 2,294,647 by prior heating with recycled water and juice, the yield is slightly improved (7% more), but with an increase in weight by adding water from 8 to 8.5 kg, which is low compared to the 250 kgs of the process of patent FR 2,294,647.

Mais on ne constate aucun effet de la dépression brutale . Ceci s'explique certainement par la trop faible différence de pression, ou dépression, à ce niveau de température (tension de vapeur à 500C = 12 kPa.)
En revanche à 60 C (tension de vapeur = 19 kPa.) l'effet de la dépression brutale est nettement perçu avec une augmentation de teneur en Rubisco de 7t par rapport à la teneur obtenue à la même température sans induire de dépression
On notera cependant qu'à la température de 600C, une partie de la Rubisco reste coagulée dans le gâteau de pressage Procédé selon l'invention
Pressage à Trempage Pressage après cuisson sous vide
froid 50 C 50 C 50 C 60 C 60 C
(brevet sans dépres- avec dépres- sans dépres avec dépres
2.294.647) sion brutale brutale sion brutale sion brutale matière sèche du produit 33,7 40 38,4 38,4 38,4 40,2 fibreux (%) issu du
pressage
Volume jus extrait au pressage (litres) 51,2 315 71,7 72,6 78,8 80,9 dont eau apportée directement ou par la vapeur 250 8,2 8,5 11,3 12,9
(litres)
Teneur des jus de pressage en Rubisco(g/l) 14,2 3,5 14,6 14,6 8,9 9,5
Rubisco extraite/Matière sèche luzerne traitée (%) 4,3 5,9 6,3 6,3 4,5 4,9
Rubisco/
Matiére azotée totale de la luzerne traitée (%) 14,2 19,5 20,9 20,9 14,9 16,2
But there is no effect from the brutal depression. This is certainly explained by the too small difference in pressure, or depression, at this temperature level (vapor pressure at 500C = 12 kPa.)
On the other hand at 60 C (vapor pressure = 19 kPa.) The effect of the brutal depression is clearly perceived with an increase in Rubisco content of 7t compared to the content obtained at the same temperature without inducing depression
Note however that at the temperature of 600C, part of the Rubisco remains coagulated in the pressing cake Method according to the invention
Dipping pressing Pressing after vacuum cooking
cold 50 C 50 C 50 C 60 C 60 C
(patent without depres- with depres- without depres with depres
2,294,647) brutal brutal brut brutal brutal dry matter of the product 33.7 40 38.4 38.4 38.4 40.2 fibrous (%) from
pressing
Volume of juice extracted during pressing (liters) 51.2 315 71.7 72.6 78.8 80.9 of which water supplied directly or by steam 250 8.2 8.5 11.3 12.9
(liters)
Rubisco juice content (g / l) 14.2 3.5 14.6 14.6 8.9 9.5
Rubisco extracted / Alfalfa dry matter treated (%) 4.3 5.9 6.3 6.3 4.5 4.9
Rubisco /
Total nitrogen content of alfalfa treated (%) 14.2 19.5 20.9 20.9 14.9 16.2

Claims (10)

REVENDICATIONS 1.Procédé d'extraction des protéines non liées aux pigments chloroplastiques, ou protéines blanches, des cellules végétales et de séparation de ces protéines et des protéines vertes,comprenant au moins une étape de chauffage et une étape de pressage de la masse végétale, caractérisé en ce que ladite étape de chauffage est mise en oeuvre par injection de vapeur jusqu'à ce que la température atteigne une valeur fixée comme valeur maximale, fonction du matériel végétal, ladite température étant contrôlée par ajustement de la pression mise en oeuvre lors de cette étape. 1. Process for extracting proteins not linked to chloroplastic pigments, or white proteins, from plant cells and for separating these proteins and green proteins, comprising at least one heating step and one pressing step on the plant mass, characterized in that said heating step is carried out by injecting steam until the temperature reaches a fixed value as a maximum value, depending on the plant material, said temperature being controlled by adjusting the pressure used during this step. 2.Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que lorsque la température a atteint la valeur maximale fixée , l'injection de vapeur est arrêtée et la pression est abaissée de manière brutale. 2. Method according to claim 1, characterized in that when the temperature has reached the maximum value fixed, the steam injection is stopped and the pressure is lowered abruptly. 3.Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes 3. Method according to any one of claims 1 and 2, characterized in that it comprises the following steps -introduction d'une quantité de matière végétale fraîche dans une enceinte fermée, -introduction of a quantity of fresh vegetable matter into a closed enclosure, -mise sous vide partiel de l'enceinte - partial vacuum of the enclosure -injection de vapeur - steam injection -maintien de l'injection de vapeur jusqu'à atteindre la valeur de température maximale fixée, -maintaining steam injection until reaching the maximum temperature value set, -arrêt de l'injection de vapeur, -stop of steam injection, -mise sous vide poussé de l'enceinte. -high vacuum vacuuming of the enclosure. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 , caractérisé en ce que la masse végétale est constituée de luzerne. 4. Method according to any one of claims 1 to 3, characterized in that the plant mass consists of alfalfa. 5.Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que la valeur maximale de la température est d'environ 50"C.  5. Method according to any one of claims 1 to 4, characterized in that the maximum temperature value is approximately 50 "C. 6.Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'il est effectué en discontinu  6. Method according to any one of claims 1 to 5, characterized in that it is carried out batchwise 7.Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que la pression est égale à la pression de vapeur saturante à la valeur maximale de température fixée. 7. Method according to any one of claims 1 to 6, characterized in that the pressure is equal to the saturated vapor pressure at the maximum temperature value set. 8.Procédé selon l'une quelconque des revendications 2 à 7, caractérisé en ce que lorsque la température a atteint sa valeur maximale la pression est abaissée au minimum jusqu'à 5 kPa. 8. Method according to any one of claims 2 to 7, characterized in that when the temperature has reached its maximum value the pressure is lowered to a minimum of 5 kPa. 9.Appareillage pour la mise en oeuvre du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce qu'il comprend un cuiseur pouvant résister à des basses pressions, pourvu de moyens permettant le chauffage, la mise sous vide et l'injection de vapeur ainsi que de moyens de contrôle et de régulation de la pression et de la température, ledit cuiseur pouvant être raccordé à une pompe à vide , et étant couplé, de manière connue, à une presse. 9. Apparatus for implementing the method according to any one of claims 1 to 8, characterized in that it comprises a cooker capable of withstanding low pressures, provided with means for heating, evacuating and l injection of steam as well as means for controlling and regulating the pressure and the temperature, said cooker being able to be connected to a vacuum pump, and being coupled, in known manner, to a press. 10. Protéines pouvant être obtenues par le procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 ou avec l'appareillage selon la revendication 9.  10. Proteins obtainable by the process according to any one of claims 1 to 8 or with the apparatus according to claim 9.
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