FR2647807A1 - Enzymatic catalyst for hydrolysis or synthesis of ester bonds - Google Patents
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- C12N11/14—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an inorganic carrier
Abstract
Description
L'invention se rapporte à de nouveaux catalyseurs enzymatiques utilisables pour la transformation de composés organiques par hydrolyse ou synthèse de la fonction ester. The invention relates to novel enzymatic catalysts which can be used for the conversion of organic compounds by hydrolysis or synthesis of the ester function.
L'utilisation d'enzymes catalysant l'hydrolyse ou la synthèse de la liaison ester dans le domaine de la synthèse organique, pour les lipides en particulier, fait partie depuis quelques années des méthodes fréquemment employées. The use of enzymes which catalyze the hydrolysis or synthesis of the ester bond in the field of organic synthesis, particularly for lipids, has in recent years been a part of frequently used methods.
De telles enzymes sont désignées ci-après sous la dénomination enzyme lipolytique qui recouvre aussi bien les lipases classiques, les phospholipases ainsi que les esterases. Such enzymes are hereinafter referred to as lipolytic enzyme which covers both conventional lipases, phospholipases as well as esterases.
Il est en effet bien connu que les enzymes de ce type qui catalysent l'hydrolyse des esters d'acides gras peuvent catalyser également, après adaptation des conditions opératoires, les réactions d'esterification et les réactions analogues telles que l'alcoolyse et la transterification. It is indeed well known that enzymes of this type which catalyze the hydrolysis of fatty acid esters can also catalyze, after adaptation of the operating conditions, the esterification reactions and analogous reactions such as alcoholysis and trans-fermentation. .
L'expression "hydrolyse ou synthèse de la fonction ester" désigne dans la présente demande l'ensemble de ces réactions.The expression "hydrolysis or synthesis of the ester function" refers in this application to all these reactions.
Ces enzymes lipolytiques sont des protéines présentant une certaine fragilité lorsqu'on les compare aux autres catalyseurs connus en chimie. Cette relative fragilité entraine un manque de stabilité pouvant conduire dans certains cas à une inactivation du pouvoir catalytique. These lipolytic enzymes are proteins with a certain fragility when compared to other known catalysts in chemistry. This relative fragility causes a lack of stability that can lead in some cases to an inactivation of catalytic power.
Pour pallier cet inconvénient, la solution retenue habituellement consiste à immobiliser l'enzyme sur un support. To overcome this drawback, the solution usually used is to immobilize the enzyme on a support.
Dans le cas d'enzymes d'origine fongique, une solution intéressante consiste à utiliser la lipase naturellement immobilisée dans son mycélium d'origine. Un tel procédé est décrit notamment dans le brevet français 2585365 de la demanderesse. In the case of enzymes of fungal origin, an interesting solution is to use the lipase naturally immobilized in its original mycelium. Such a process is described in particular in the French patent 2585365 of the applicant.
Cette solution n'est malheureusement pas utilisable dans le cas d'enzymes d'origine microbienne non fongique, (bactéries, levure), ou d'enzymes d'extraction, enzymes pancréatiques ou gastriques, et il est alors nécessaire pour immobiliser l'enzyme d'utiliser des supports minéraux classiques. This solution is unfortunately not usable in the case of enzymes of non-fungal microbial origin (bacteria, yeast), or extraction enzymes, pancreatic or gastric enzymes, and it is then necessary to immobilize the enzyme. to use classical mineral supports.
L'association ou l'adsorption d'enzymes sur silice, célite, terre de diatomées, etc... a déjà été décrite par exemple dans les demandes de brevet européen 064855 du 4.5.82 et 035883 du 3.6.1981. The association or the adsorption of enzymes on silica, celite, diatomaceous earth, etc ... has already been described for example in the European patent applications 064855 of 4.5.82 and 035883 of 3.6.1981.
Il existe même actuellement des lipases commerciales fixées sur support. Cependant, les procédures impliquées pour la fixation, par exemple, celles décrites par EIGTVED et Al "A new immobilized lipase for interesterification and ester synthesis". Proc. AOCS Conference, Cannes, France, 1985 ou
SONOMOTO et Al, IXth Enzyme Engineering Conference, Santa
Barbara, Ca USA 1987, comportent des étapes de purification et de greffage chimiques qui rendent le catalyseur final relativement coûteux.There are even currently commercially supported lipases. However, the procedures involved for binding, for example, those described by EIGTVED and Al "A new immobilized lipase for interesterification and ester synthesis". Proc. AOCS Conference, Cannes, France, 1985 or
SONOMOTO and Al, IXth Enzyme Engineering Conference, Santa
Barbara, Ca USA 1987, include chemical purification and grafting steps that make the final catalyst relatively expensive.
L'invention concerne de nouveaux catalyseurs à base d'enzymes lipolytiques associées à un support minéral, susceptibles de réaliser l'hydrolyse ou la synthèse de liaison ester en milieu organique et présentant une bonne stabilité et d'un coût de préparation peu elevé. The invention relates to novel catalysts based on lipolytic enzymes associated with a mineral support, capable of performing hydrolysis or synthesis of ester bond in organic medium and having a good stability and a low preparation cost.
L'invention a pour objet de nouveaux catalyseurs enzymatiques pour l'hydrolyse ou la synthèse, en milieu organique; de la liaison ester comprenant au moins une enzyme lipolytique associée à un support minéral caractérisés en ce que le support minéral est du talc. The invention relates to novel enzymatic catalysts for hydrolysis or synthesis, in organic medium; ester bond comprising at least one lipolytic enzyme associated with a mineral carrier characterized in that the mineral carrier is talc.
Les catalyseurs de l'invention permettent de réaliser en milieu organique
- La synthèse ou l'hydrolyse d'esters carboxyliques, réactions pour lesquelles l'enzyme sera une lipase, une esterase ou une phospholipase A1, A2 ou B.The catalysts of the invention make it possible to produce an organic medium
- The synthesis or hydrolysis of carboxylic esters, reactions for which the enzyme will be a lipase, an esterase or a phospholipase A1, A2 or B.
- La synthèse ou l'hydrolyse d'esters phosphoriques, réactions pour lesquelles l'enzyme sera une phospholipase C ou D. - The synthesis or hydrolysis of phosphoric esters, reactions for which the enzyme will be a phospholipase C or D.
On entend par esters carboxyliques les composés organiques comportant la fonction
dans laquelle X est soit l'oxygène, soit le soufre et
R un reste hydrocarboné.where X is either oxygen or sulfur and
R a hydrocarbon residue.
Les esters phosphatïdiques sont des triglycerides dont l'une au moins des fonctions alcool du glycerol est esterifiée par un ester phosphorique. La formule ci-après schématise un exemple d'ester phosphatïdique :
Les diverses phospholipases, selon leur type catalyseront des réactions d'hydrolyse spécifiques. The various phospholipases, depending on their type, will catalyze specific hydrolysis reactions.
La phospholipase A1 hydrolysera la fonction ester du carbone 1. Phospholipase A1 will hydrolyze the ester function of carbon 1.
La phospholipase A2 hydrolysera la fonction ester du carbone 2. Phospholipase A2 will hydrolyze the ester function of carbon 2.
La phospholipase B hydrolysera simultanément les 2 fonctions ester. Phospholipase B will hydrolyze both ester functions simultaneously.
La phospholipase C hydrolysera la fonction ester de l'acide phosphorique côté glycerol. Phospholipase C will hydrolyze the ester function of phosphoric acid on the glycerol side.
La phospholipase D hydrolysera la fonction ester du reste amino-ethyle. Phospholipase D will hydrolyze the ester function of the aminoethyl residue.
La réaction est mise en oeuvre en milieu organique, c'est-à-dire, dans un milieu dont la phase continue est organique et dont la teneur en eau est faible. La quantité maximale d'eau présente dans le milieu sera fonction de la réaction mise en oeuvre. Par exemple, dans le cas d'une estérification, la teneur en eau sera inférieure à 100 ppm, dans le cas d'une alcoolyse, elle sera inférieure a 1%, mais dans le cas d'une hydrolyse où l'eau est un élément de la réaction, elle pourra atteindre quelques %. Selon la réaction envisagée, il sera parfois avantageux, par exemple pour une esterification ou une alcoolyse, d'éliminer par tout moyen convenable l'eau ou l'alcool formé lors de la réaction et ainsi de déplacer son équilibre. The reaction is carried out in an organic medium, that is to say in a medium in which the continuous phase is organic and the water content is low. The maximum amount of water present in the medium will depend on the reaction carried out. For example, in the case of an esterification, the water content will be less than 100 ppm, in the case of alcoholysis, it will be less than 1%, but in the case of a hydrolysis where the water is a element of the reaction, it can reach a few percent. Depending on the reaction envisaged, it will sometimes be advantageous, for example for an esterification or an alcoholysis, to eliminate by any suitable means the water or alcohol formed during the reaction and thus to shift its equilibrium.
On choisira comme enzymes lipolytiques, les enzymes, notamment les lipases et les phospholipases, permettant l'hydrolyse ou la synthèse de la liaison ester sur des composés organiques, tels que
- les esters
- les couples acide organiques ou gras avec
alcool
polyol
amine
thiol
- les triglycerides
- les glycerides partiels
- les phospholipides
- les lysophosphatides
- les acides phosphatïdiques
Les enzymes lipolytiques peuvent être d'origine animale végétale ou microbienne, y compris les lipoprotéines lipases. Elles peuvent être de type classique, avec site à sérine ayant un fonctionnement à pH neutre 7/8 ou de type acide, avec site a thiol, ayant un fonctionnement à pH 3 à 6.Lipolytic enzymes will be chosen as enzymes, especially lipases and phospholipases, which allow the hydrolysis or synthesis of the ester bond on organic compounds, such as
- the esters
- Organic or fatty acid couples with
alcohol
polyol
amine
thiol
- triglycerides
- partial glycerides
- phospholipids
- lysophosphatides
- phosphatic acids
The lipolytic enzymes may be of plant or microbial animal origin, including lipoprotein lipases. They may be of the conventional type, with a serine site having a neutral pH 7/8 or acid-type operation, with a thiol site, having an operation at pH 3 to 6.
Les phospholipases sont d'origine quelconque et de tous les types possibles, Al, A2, B, C, D. Phospholipases are of any origin and of all possible types, Al, A2, B, C, D.
L'originalité des catalyseurs de l'invention réside essentiellement dans le choix d'un support minéral particulier : le talc qui est associé à l'enzyme lipolytique à mettre en oeuvre. The originality of the catalysts of the invention lies essentially in the choice of a particular mineral carrier: the talc which is associated with the lipolytic enzyme to be used.
Le talc est une association de silicates de magnesium comprenant au moins 25% poids de phyllosilicate de formule théorique Si4 10 Mg3 (OH)2-
Dans ce phyllosilicate, chaque feuillet octaédrique de brucite Mg3 (OH)2 4+ est pris entre 2 feuillets tétraédriques Si 04 4-
En fait, le terme talc désigne le phyllosilicate associé en mélange à d'autres minéraux.Talc is a combination of magnesium silicates comprising at least 25% by weight of phyllosilicate of theoretical formula Si4 10 Mg3 (OH) 2-
In this phyllosilicate, each octahedral sheet of brucite Mg3 (OH) 2 4+ is taken between 2 tetrahedral sheets Si 04 4-
In fact, the term talc refers to the associated phyllosilicate mixed with other minerals.
Le mélange comprend de 0 à 70% poids d'autres silicates de magnesium tels que la chlorite de formule théorique 9Mg0, 3A12 03, 5Si 2 8H20 silicate du genre du talc dans lequel l'alumine est substitué en quantité variable au magnesium dans le feuillet brucite. The mixture comprises from 0 to 70% by weight of other magnesium silicates such as chlorite of the theoretical formula 9Mg0, 3A12 03, 5Si 2 8H20 silicate of the talc genus in which the alumina is substituted in a variable amount with magnesium in the sheet brucite.
Le mélange peut comprendre de 0 à 2% d'impuretés minérales telles que dolomie, Ca, Mg CO3, Fe2 03... The mixture may comprise from 0 to 2% of mineral impurities such as dolomite, Ca, Mg CO 3, Fe 2 O 3, etc.
Le talc est inerte et stable, chimiquement et biologiquement. I1 résiste à des températures de 1000C sans se décomposer. I1 est doué de propriétés hydrophobes, d'où son affinité pour les milieux organiques. La chlorite possède des propriétés voisines, mais l'hydrophobie des faces de type talc, est équilibrée par une certaine hydrophilie des autres faces. Talc is inert and stable, chemically and biologically. I1 withstands temperatures of 1000C without decomposing. It is endowed with hydrophobic properties, hence its affinity for organic media. Chlorite has similar properties, but the hydrophobicity of the talc type faces is balanced by a certain hydrophilicity of the other faces.
Les catalyseurs enzymatiques de l'invention présentent l'originalité, outre leur faible coût lié à la facilité de mise en oeuvre, d'apporter un effet de stabilisation, mais également, ce qui en plus est inattendu, un effet d'activation, notamment dans un domaine de température où usuellement l'activité de l'enzyme décroit ou même s'annule. The enzymatic catalysts of the invention have the originality, besides their low cost related to the ease of implementation, to provide a stabilizing effect, but also, which is moreover unexpected, an activation effect, in particular in a temperature range where usually the activity of the enzyme decreases or even vanishes.
L'association du talc choisi et de l'enzyme lipolytique souhaitée peut se faire selon des processus physiques très variés : tels que par exemple - Précipitation par solvant
La solution de l'enzyme est mélangée au talc, et un solvant tel que l'acétone est ajouté à la suspension. L'enzyme précipite et s'associe au talc. I1 suffit ensuite de filtrer et d'évaporer la phase liquide pour obtenir la préparation finale.The combination of the chosen talc and the desired lipolytic enzyme can be done according to very varied physical processes: such as for example - Solvent precipitation
The enzyme solution is mixed with talc, and a solvent such as acetone is added to the suspension. The enzyme precipitates and associates with talc. It is then sufficient to filter and evaporate the liquid phase to obtain the final preparation.
- Séchage par évaporation
Le mélange talc/solution enzymatique est évaporé sous vide à une température convenable jusqu' obtention du produit sec final.- Drying by evaporation
The talc / enzyme solution mixture is evaporated under vacuum at a suitable temperature until the final dry product is obtained.
- Séchage par lyophilisation
Le mélange talc/solution enzymatique et congelé en couche mince, puis l'eau est éliminée par lyophilisation.- Drying by freeze-drying
The talc / enzyme solution mixture is frozen in a thin layer, then the water is removed by lyophilization.
- Séchage par atomisation
La suspension talc/solution enzymatique est pulvérisée dans un courant d'air chaud (à une température compatible avec une activité finale convenable de la préparation), et la poudre séchée obtenue est récupérée par un cyclone.- Spray drying
The talc / enzyme solution suspension is sprayed in a stream of hot air (at a temperature compatible with a suitable final activity of the preparation), and the dried powder obtained is recovered by a cyclone.
Le terme d'association enzyme-talc signifie que l'on crée entre l'enzyme et le support non pas une liaison chimique mais simplement une liaison de nature physique. The term enzyme-talc association means that between the enzyme and the support is created not a chemical bond but simply a link of a physical nature.
La préparation du catalyseur enzymatique peut se faire à partir d'une solution enzymatique brute ou à partir d'une solution purifiée d'enzymes. La solution enzymatique contiendra soit une seule enzyme, soit un mélange d'entre elles selon les fonctions à assigner'au catalyseur final. The enzymatic catalyst can be prepared from a crude enzyme solution or from a purified enzyme solution. The enzymatic solution will contain either a single enzyme or a mixture of them according to the functions to be assigned to the final catalyst.
Les applications du catalyseur ainsi préparées sont multiples, et concernent tous les domaines d'application des enzymes lipolytiques. Les applications suivantes sont plus particulièrement visées - Préparation d'arômes naturels par transestérification de triglycérides à l'aide de lipases spécifiques de certains acides gras, tels que les acides gras à chaines courtes. The applications of the catalyst thus prepared are multiple, and concern all areas of application of lipolytic enzymes. The following applications are particularly targeted - Preparation of natural flavors by transesterification of triglycerides using lipases specific for certain fatty acids, such as short-chain fatty acids.
- Préparation d'acides gras polyinsaturés par hydrolyse spécifique de certaines associations de triglycérides.- Preparation of polyunsaturated fatty acids by specific hydrolysis of certain combinations of triglycerides.
- Préparation de lysolécithines par utilisation de phospholipases et des phospholipases A2 en particulier.- Preparation of lysolecithines using phospholipases and phospholipases A2 in particular.
- Utilisations en synthèse organique dédoublement de mélanges racémiques d'esters, d'alcools, ou d'acides chiraux . transestérification de phospholipides
Les catalyseurs enzymatiques de l'invention sont illustrés par les exemples ci-après dans lesquels différents types de talc seront utilisés et qui correspondent aux références suivantes 00 : talc standard broyé à 50 - qualités pharmaceutiques blancheur 90 avec une teneur en talc minéralogique de 90% 15 MOO : talc standard broyé à 15
PE 8224 : talc standard broyé encore plus finement ( < 5
PE 8223 : talc 15 M00 traité å l'alcool polyvinylique (PVA)
PE 8213 : talc 15 M00 traité par 1% d'aminosilane 00C : talc chloriteux - qualité ordinaire blancheur 84 teneur en talc minéralogique de 45% et une teneur en chlorite de 55%
PE 8225 : talc OOC broyé très finement ( < 5
Extra Steamic 0 : talc 00C rebroyé à la vapeur
EXEMPLE I
La réaction choisie est l'éthanolyse de triglycérides. Deux lipases de Candida Cvlindracea (= Candida rugosa) d'origine Sigma et Meito Sangyo sont colyophilisées avec du talc "(Extra Steamic 0"), à raison de 20% d'enzyme par rapport au support minéral.- Uses in organic synthesis splitting of racemic mixtures of esters, alcohols, or chiral acids. transesterification of phospholipids
The enzymatic catalysts of the invention are illustrated by the following examples in which different types of talc will be used and which correspond to the following references 00: standard talc milled to 50 - pharmaceutical whiteness 90 grades with a 90% mineralogical talc content 15 OOM: Standard talc crushed at 15
PE 8224: standard talc crushed even more finely (<5
PE 8223: talc 15 M00 treated with polyvinyl alcohol (PVA)
PE 8213: talc 15 M00 treated with 1% aminosilane 00C: chlorite talc - ordinary whiteness 84 mineralogical talcum content of 45% and a chlorite content of 55%
PE 8225: OOC talc milled very finely (<5
Extra Steamic 0: Steamed Talc 00C
EXAMPLE I
The reaction chosen is the ethanolysis of triglycerides. Two lipases of Candida Cvlindracea (= Candida rugosa) of origin Sigma and Meito Sangyo are colyophilized with talc "(Extra Steamic 0"), at a rate of 20% of enzyme relative to the mineral support.
La réaction est opérée dans la matière grasse laitière anhydre (MGLA) à l'état fondu pendant 20 H à 40 C. The reaction is carried out in the anhydrous milk fat (MGLA) in the molten state for 20 hours at 40 ° C.
La proportion d'esters obtenue est exprimée en mg pour 100 mg d'esters potentiels obtenus de façon non spécifique par éthanolyse chimique. The proportion of esters obtained is expressed in mg per 100 mg of potential esters obtained nonspecifically by chemical ethanolysis.
Les résultats obtenus sont les suivants
Tableau 1
Table 1
<tb> <SEP> I <SEP> Rendement <SEP> en <SEP> esters, <SEP> mg <SEP> pour <SEP> 100 <SEP> mg
<tb> <SEP> Lipase <SEP> I <SEP> <SEP> Enzyme <SEP> libre <SEP> | <SEP> Enzyme <SEP> associée <SEP> au
<tb> C. <SEP> cylindracea <SEP> talc
<tb> <SEP> sigma <SEP> I <SEP> 1 <SEP> <SEP> 15,7
<tb> <SEP> Meito <SEP> Sangyo <SEP> 0 <SEP> 11,0
<tb>
EXEMPLE II
Dans les mêmes conditions, d'autres lipases donnent des résultats différentes qui figurent dans le tableau 2 ci après
Tableau 2
<tb><SEP> Lipase <SEP> I <SEP><SEP> Enzyme <SEP> Free <SEP> | <SEP> Enzyme <SEP> associated <SEP> with
<tb> C. <SEP> cylindracea <SEP> talcum
<tb><SEP> sigma <SEP> I <SEP> 1 <SEP><SEP> 15.7
<tb><SEP> Meito <SEP> Sangyo <SEP> 0 <SEP> 11.0
<Tb>
EXAMPLE II
Under the same conditions, other lipases give different results, which are shown in Table 2 below.
Table 2
<tb> <SEP> I <SEP> | <SEP> Rendement <SEP> en <SEP> esters, <SEP> %
<tb> <SEP> Lipases <SEP> Origine <SEP> Enzyme <SEP> libre <SEP> Enzyme/Talc
<tb> Rohm <SEP> J <SEP> Pseudomonas <SEP> Sp <SEP> 1 <SEP> 19,8 <SEP> 1 <SEP> 23,5
<tb> Sigma <SEP> Pancreas <SEP> porc <SEP> 0 <SEP> 5,5
<tb> Gist <SEP> Brocades <SEP> Mucor <SEP> Meihei <SEP> 0 <SEP> 1,9
<tb>
EXEMPLE III
Cet exemple illustre les résultats obtenus dans les mêmes opérations avec différentes qualités de talc
L'enzyme utilisée est la lipase de Candida Cylindracea, dans les conditions opératoires de l'exemple 1.<tb><SEP> I <SEP> | <SEP> Yield <SEP> in <SEP> esters, <SEP>%
<tb><SEP> Lipases <SEP> Origin <SEP> Enzyme <SEP> Free <SEP> Enzyme / Talc
<tb> Rohm <SEP> J <SEP> Pseudomonas <SEP> Sp <SEP> 1 <SEP> 19.8 <SEP> 1 <SEP> 23.5
<tb> Sigma <SEP> Pancreas <SEP> Pig <SEP> 0 <SEP> 5.5
<tb> Gist <SEP> Brocade <SEP> Mucor <SEP> Meihei <SEP> 0 <SEP> 1.9
<Tb>
EXAMPLE III
This example illustrates the results obtained in the same operations with different qualities of talc
The enzyme used is Candida Cylindracea lipase, under the operating conditions of Example 1.
Les résultats obtenus figurent dans le tableau 3 ciaprès
Tableau 3
Table 3
<tb> Référence <SEP> du <SEP> talc <SEP> | <SEP> Rendement <SEP> en <SEP> esters, <SEP> S <SEP>
<tb> 1 <SEP> 00 <SEP> 1 <SEP> 6,6 <SEP> 1
<tb> 1 <SEP> 15 <SEP> M00 <SEP> | <SEP> 9,8
<tb> <SEP> 00C <SEP> 11,7
<tb> Extra <SEP> Steamic <SEP> 0 <SEP> 1 <SEP> 15,7
<tb> PE <SEP> PE <SEP> 8224 <SEP> | <SEP> 10,1
<tb> I <SEP> PE <SEP> 8225 <SEP> | <SEP> 19,8
<tb> I <SEP> PE <SEP> 8213 <SEP> | <SEP> 6,6
<tb> I <SEP> PE <SEP> 8223 <SEP> | <SEP> 11,8
<tb> <SEP> Témoin <SEP> enzyme <SEP> libre <SEP> 0
<tb>
EXEMPLE IV
Cet exemple illustre, dans les mêmes conditions que l'exemple 2 en utilisant l'enzyme de Rohm (lipase de
Pseudomonas sp) l'effet de l'association enzyme/talc sur une stabilisation de l'activité vis-å-vis de la température (exprimée en % comme dans l'exemple 1).<tb><SEP><SEP> Talc <SEP> Reference <SEP> Yield <SEP> in <SEP> esters, <SEP> S <SEP>
<tb> 1 <SEP> 00 <SEP> 1 <SEP> 6.6 <SEP> 1
<tb> 1 <SEP> 15 <SEP> M00 <SEP> | <SEP> 9.8
<tb><SEP> 00C <SEP> 11.7
<tb> Extra <SEP> Steamic <SEP> 0 <SEP> 1 <SEP> 15.7
<tb> PE <SEP> PE <SEP> 8224 <SEP> | <SEP> 10.1
<tb> I <SEP> PE <SEP> 8225 <SEP> | <SEP> 19.8
<tb> I <SEP> PE <SEP> 8213 <SEP> | <SEP> 6.6
<tb> I <SEP> PE <SEP> 8223 <SEP> | <SEP> 11.8
<tb><SEP> Control <SEP> enzyme <SEP> free <SEP> 0
<Tb>
EXAMPLE IV
This example illustrates, under the same conditions as Example 2, using the Rohm enzyme (lipase
Pseudomonas sp) the effect of the enzyme / talc association on a stabilization of the activity with respect to the temperature (expressed in% as in Example 1).
Les résultats obtenus figurent dans le tableau cidessous. The results obtained are shown in the table below.
Tableau 4
<tb> <SEP> I <SEP> Rendements <SEP> en <SEP> esters
<tb> <SEP> Température
<tb> <SEP> I <SEP> J <SEP> I
<tb> 40 <SEP> 50 <SEP> 60
<tb> Enzyme <SEP> libre <SEP> 1 <SEP> 19,8 <SEP> 1 <SEP> 0 <SEP> 1 <SEP> 0 <SEP>
<tb> IEnzyme <SEP> associée <SEP> au <SEP> talc <SEP> r <SEP> | <SEP>
<tb> <SEP> (Extra <SEP> Stéamic <SEP> 0) <SEP> 23,5 <SEP> 24,8 <SEP> 20,9
<tb>
EXEMPLE V
Cet exemple illustre la mise en oeuvre des phospholipases en association avec le talc. L'enzyme utilisée ici est une phospholipase pancréatique (lécithase de NOVO), mise en oeuvre libre ou associée à du talc Extra Steamic 0, en milieu méthyl-tertiobutyl-éther/acétone 85-15, à 37 C pour l'hydrolyse de la lécithine de soja.<tb><SEP> I <SEP> Yields <SEP> in <SEP> esters
<tb><SEP> Temperature
<tb><SEP> I <SEP> J <SEP> I
<tb> 40 <SEP> 50 <SEP> 60
<tb> Enzyme <SEP> free <SEP> 1 <SEP> 19.8 <SEP> 1 <SEP> 0 <SEP> 1 <SEP> 0 <SEP>
<tb> IEnzyme <SEP> associated <SEP> with <SEP> talc <SEP> r <SEP> | <September>
<tb><SEP> (Extra <SEP> Stéamic <SEP> 0) <SEP> 23.5 <SEP> 24.8 <SEP> 20.9
<Tb>
EXAMPLE V
This example illustrates the use of phospholipases in combination with talc. The enzyme used here is a pancreatic phospholipase (NOVO lecithase), used free or combined with Extra Steamic Talc 0, in methyl-tert-butyl-ether / acetone 85-15 medium, at 37 ° C. for the hydrolysis of the soy lecithin.
La proportion utilisée est de 1 g de lécithine pour 70 ou 150 mg d'eau destinée à l'hydrolyse. The proportion used is 1 g of lecithin for 70 or 150 mg of water intended for hydrolysis.
Les résultats obtenus figurent dans le tableau 5 ciaprès. Les valeurs indiquées correspondent aux milligrammes d'acides gras libérés en 20 H par g de lécithine. Les deux dernières lignes visent des expériences menées à 48 C. The results obtained are shown in Table 5 below. The values indicated correspond to the milligrams of fatty acids released in 20 hours per g of lecithin. The last two lines are for experiments conducted at 48 C.
Tableau 5
<tb> <SEP> Acides <SEP> gras <SEP> libérés <SEP> en <SEP> 20 <SEP> h
<tb> <SEP> (mg)
<tb> <SEP> Quantité <SEP> d'eau <SEP> utilisée
<tb> <SEP> 70 <SEP> mg <SEP> 150 <SEP> mg
<tb> Enzyme/talc <SEP> I <SEP> <SEP> 294 <SEP> 1 <SEP> 367
<tb> Enzyme <SEP> libre <SEP> 53 <SEP> 282
<tb> Enzyme <SEP> /talc <SEP> (48 C) <SEP> - <SEP> 488
<tb> Enzyme <SEP> libre <SEP> (48 C) <SEP> - <SEP> 305
<tb> <tb><SEP><SEP> fatty acids <SEP> released <SEP> in <SEP> 20 <SEP> h
<tb><SEP> (mg)
<tb><SEP> Quantity <SEP> of water <SEP> used
<tb><SEP> 70 <SEP> mg <SEP> 150 <SEP> mg
<tb> Enzyme / Talc <SEP> I <SEP><SEP> 294 <SEP> 1 <SEP> 367
<tb> Enzyme <SEP> free <SEP> 53 <SEP> 282
<tb> Enzyme <SEP> / talc <SEP> (48 C) <SEP> - <SEP> 488
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| FR8907243A FR2647807A1 (en) | 1989-06-01 | 1989-06-01 | Enzymatic catalyst for hydrolysis or synthesis of ester bonds |
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Family Applications (1)
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| FR (1) | FR2647807A1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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