FR2638234A1 - BIOLOGICALLY ACTIVE OR BIOLOGICALLY ACTIVE MOLECULE CARRIER, PROCESS FOR PREPARING THE SAME AND APPLICATION THEREOF IN BIOLOGY - Google Patents
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Abstract
Description
!!
SUPPORT POUR MOLECULES BIOLOGIQUEMENT ACTIVES OU LUI-MEME SUPPORT FOR BIOLOGICALLY ACTIVE MOLECULES OR HIMSELF
BIOLOGIQUEMENT ACTIF, SON PROCEDE DE PREPARATION ET BIOLOGICALLY ACTIVE, ITS PREPARATION METHOD AND
SON APPLICATION EN BIOLOGIEITS APPLICATION IN BIOLOGY
La présente invention a pour objet un support pour molécules biologiquement actives ou lui-même biologiquement actif, son procédé de préparation et son application en biologie (chromatographie d'affinité, The subject of the present invention is a support for biologically active molecules or itself biologically active, its method of preparation and its application in biology (affinity chromatography,
tests de diagnostic, culture de cellules). diagnostic tests, cell culture).
Il est connu de fixer des molécules biologiquement actives sur des particules de polymère en dispersion aqueuse par adsorption lorsqu'il s'agit de particules de polystyrène par exemple, ou par covalence It is known to bind biologically active molecules to polymer particles in aqueous dispersion by adsorption when it comes to polystyrene particles for example, or covalently
lorsqu'il s'agit de polymères présentant des groupes réactifs. when it comes to polymers having reactive groups.
L'avantage présenté par les latex réside dans la grande surface spécifique développée par les particules et dans leur large gamme de fonctions chimiques disponibles. Leur inconvénient, par contre, réside dans la difficulté de les utiliser, une fois atomisés, comme système de garnissage dans des colonnes ou des capillaires; en effet, lorsque les particules de polymère ont un diamètre inférieur à 1 micron le système The advantage of latexes lies in the large surface area developed by the particles and in their wide range of available chemical functions. Their disadvantage, on the other hand, lies in the difficulty of using them, once atomized, as a packing system in columns or capillaries; indeed, when the polymer particles have a diameter of less than 1 micron the system
de garnissage obtenu manque de perméabilité. of lining obtained lack of permeability.
La Demanderesse a trouvé un support pour molécules biologiquement actives ou lui-même biologiquement actif pouvant servir de système de garnissage, ledit système étant tout à la fois perméable et de grande The Applicant has found a support for biologically active molecules or itself biologically active that can serve as a packing system, said system being both permeable and large.
surface spécifique.specific surface.
Le support pour molécules biologiquement actives faisant l'objet de l'invention, est caractérisé en ce qu'il est constitué: - d'une matrice inorganique, poreuse, non hydrosoluble - et, à la surface de ladite matrice, de particules de polymère non hydrosoluble susceptibles de fixer des molécules biologiquement actives. Le terme "surface" siginifie aussi bien la surface externe de la matrice que sa surface interne, c'est-adire celle développée par les pores. Parmi les matériaux inorganiques poreux, non hydrosolubles, pouvant constituer la matrice, on peut citer les silices, les alumines, les The support for biologically active molecules forming the subject of the invention is characterized in that it consists of: an inorganic, porous, non-water-soluble matrix and, on the surface of said matrix, polymer particles non-water soluble capable of binding biologically active molecules. The term "surface" means both the outer surface of the matrix and its inner surface, that is, the one developed by the pores. Among the porous inorganic materials, non-water-soluble, which can constitute the matrix, mention may be made of silicas, aluminas,
zéolites, la brique, les oxydes de titane, de zirconium. zeolites, brick, oxides of titanium, zirconium.
Les silices et les alumines sont utilisées à titre préférentiel. Le matériau constituant la matrice peut éventuellement présenter en surface des groupes fonctionnels (-COOH, -NH2, -OH, -SH,...) Silicas and aluminas are used on a preferential basis. The material constituting the matrix may optionally have at the surface functional groups (-COOH, -NH 2, -OH, -SH, etc.)
susceptibles de réagir par covalence avec les particules de polymère. capable of covalently reacting with the polymer particles.
Selon l'invention, la matrice peut présenter un volume poreux de l'ordre de 0,5 à 1,8 ml/g, un diamètre de pores de l'ordre de 0,005 à 1 micron (de préférence de 0,1 à 1 micron} et une surface spécifique de According to the invention, the matrix may have a pore volume of the order of 0.5 to 1.8 ml / g, a pore diameter of the order of 0.005 to 1 micron (preferably 0.1 to 1 micron} and a specific surface of
l'ordre de 2 à 1000 m2/g.the order of 2 to 1000 m2 / g.
Elle se présente de préférence sous forme de particules, de billes notamment, présentant un diamètre de l'ordre de 4 microns à 5 mm (de It is preferably in the form of particles, especially beads having a diameter of about 4 microns to 5 mm (
préférence de 50 à 500 microns).preferably from 50 to 500 microns).
On entend par "monomère non miscible à l'eau" les monomères The term "monomer immiscible with water" means the monomers
présentant une solubilité dans l'eau inférieure à 5 % en poids. having a solubility in water of less than 5% by weight.
Parmi ceux-ci on peut citer: - les monoméres vinylaromatiques (styrène, vinyltoluène...) - les alkylesters d'acides x-P insaturés (acrylates et méthacrylates de méthyle, éthyle...) - les esters d'acides carboxyliques insaturés (acétate de vinyle...) - le chlorure de vinyle; le chlorure de vinylidène - les diènes (butadiéne...} - ceux présentant des fonctions nitriles (acrylonitrile...) Among these, mention may be made of: - vinylaromatic monomers (styrene, vinyltoluene, etc.) - x-unsaturated acid alkyl esters (methyl and ethyl acrylates and methacrylates, etc.) - unsaturated carboxylic acid esters (acetate vinyl ...) - vinyl chloride; vinylidene chloride - dienes (butadiene ...) - those with nitrile functions (acrylonitrile ...)
- les siloxanes.siloxanes.
La composition monomère dont dérive ledit polymère peut contenir en outre jusqu'à 10 % de son poids (de préférence jusqu'à 4 % de son poids) d'au moins un monomère portant des groupes ionogènes ou réactifs tels que:SO3H, - OSO3H, - NR3, - COOH, - OH, - NH2, - NR2, The monomeric composition from which said polymer is derived may also contain up to 10% of its weight (preferably up to 4% of its weight) of at least one monomer carrying ionogenic or reactive groups, such as: SO3H, - OSO3H - NR3, - COOH, - OH, - NH2, - NR2,
- CH-CH2, - 0 CH2C1, - CONH2, - SHI O, - COOR, - PO(OR)2, CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 Cl 2 CH 2 O 3 COOR 2 PO 2
\o! R représentant un radical alkyle en C1 - C4, de préférence en Cl - C: A titre d'exemple on peut citer: - le vinylbenzène sulfonate, les sulfoalkylesters d'acides \ O! R representing a C1 - C4 alkyl radical, preferably C1 - C: By way of example, mention may be made of: - vinylbenzene sulphonate, sulphoalkyl esters of acids
insaturés (2-sulfoéthylméthacrylate...). unsaturated (2-sulfoethylmethacrylate ...).
- les acides carboxyliques insaturés (acide acrylique, méthacry- unsaturated carboxylic acids (acrylic acid, methacrylate)
lique, maleïque, itaconique...)lique, maleic, itaconic ...)
- les hydroxyalkylacrylates ou méthacrylates (acrylate d'hydro- hydroxyalkylacrylates or methacrylates (hydro-
xyéthyle, hydroxypropyle...)xyethyl, hydroxypropyl ...)
- les aminoalkylesters d'acides insaturés (2-aminoéthyl- aminoalkyl esters of unsaturated acids (2-aminoethyl-
méthacrylate... - l'acrylamide - le chlorure de vinylbenzyle methacrylate ... - acrylamide - vinylbenzyl chloride
- le méthacrylate de glycidyle.glycidyl methacrylate.
Lesdites particules de polymère peuvent présenter une granulométrie de l'ordre de 0,05 à 20 microns et de préférence de l'ordre de 0,1 à 3 microns. D'une manière toute préférentielle le diamètre des particules de polymère est inférieur à celui des pores de la matrice et en Said polymer particles may have a particle size of about 0.05 to 20 microns and preferably of the order of 0.1 to 3 microns. Most preferably, the diameter of the polymer particles is smaller than that of the pores of the matrix and
particulier inférieur à 1 micron.especially less than 1 micron.
Le poids de la matrice correspond à environ 1 à 1 000 fois celui des The weight of the matrix corresponds to about 1 to 1,000 times that of
particules de polymère (de préférence environ 50 à 500 fois). polymer particles (preferably about 50 to 500 times).
Ledit support pour molécules biologiquement actives faisant l'objet de l'invention peut être préparé par "dépôt" des particules de polymère A la surface de la matrice par simple contact d'une dispersion aqueuse (latex) de particules de polymère avec la matrice poreuse, puis séchage après lavage éventuel (à l'eau distillée). Le latex mis en oeuvre contient environ 0,1 à 50 % (de préférence de 0,5 à 15 %) en poids de Said support for biologically active molecules which are the subject of the invention may be prepared by "deposition" of the polymer particles on the surface of the matrix by simple contact of an aqueous dispersion (latex) of polymer particles with the porous matrix then drying after washing (with distilled water). The latex used contains approximately 0.1 to 50% (preferably 0.5 to 15%) by weight of
particules de polymère.polymer particles.
Les quantités relatives de matrice et de dispersion aqueuse mises en oeuvre correspondent à un rapport pondéral matrice/particules de polymère de l'ordre de 0,01 à 1 000; selon la concentration de la dispersion et les caractéristiques physiques de la matrice, la quantité de particules mise en oeuvre correspond à environ 1 à 100 fois celle déposée. La dispersion non utile peut ensuite être remise en oeuvre, après The relative amounts of matrix and aqueous dispersion used correspond to a weight ratio matrix / polymer particles of the order of 0.01 to 1000; depending on the concentration of the dispersion and the physical characteristics of the matrix, the amount of particles used corresponds to about 1 to 100 times that deposited. The non-useful dispersion can then be reworked after
séparation du support obtenu, dans une opération ultérieure. separation of the obtained support, in a subsequent operation.
Lorsque ledit support est préparé à partir d'une matrice présentant en surface des groupes fonctionnels susceptibles de réagir par covalence avec les particules de polymère, il est préférable de préactiver la matrice à l'aide d'un agent de couplage (carbodiimide -hydrosoluble, glutaraldéhyde, N-hydroxybenzotriazole, bromure de 3 cyanogène,...) puis de la mettre en contact avec la dispersion de polymère. Ledit support ci- dessus décrit peut être utilisé en biologie pour immobiliser des substances biologiquement actives (protéines telles que anticorps, enzymes...; antigènes; médicaments...) par adsorption ou covalence; selon la nature de ladite substance active on peut obtenir un support susceptible d'être avantageusement utilisé dans les tests de diagnostic (agglutination "RIA" radioimmunological assay - "IRMA" immunoradiometric assay - "EIA" enzyme immuno assay), en chromatographie d'affinité, comme catalyseur enzymatique en When said support is prepared from a matrix having at the surface functional groups capable of covalently reacting with the polymer particles, it is preferable to preactivate the matrix with the aid of a coupling agent (carbodiimide-water-soluble, glutaraldehyde, N-hydroxybenzotriazole, cyanogen bromide, etc.) and then bring it into contact with the polymer dispersion. Said support described above can be used in biology to immobilize biologically active substances (proteins such as antibodies, enzymes, antigens, drugs, etc.) by adsorption or covalence; depending on the nature of said active substance, it is possible to obtain a support which can advantageously be used in diagnostic tests (agglutination "RIA" radioimmunological assay - "IRMA" immunoradiometric assay - "EIA" enzyme immunoassay), in affinity chromatography as an enzymatic catalyst in
biotechnologie, comme support de culture cellulaire. biotechnology, as a cell culture support.
La présente invention a également pour objet les supports biologiquement actifs constitués: - d'une matrice inorganique, poreuse non hydrosoluble et, à la surface de ladite matrice, de particules de polymère non hydrosoluble "sensibilisé" par une quantité efficace de substances The subject of the present invention is also the biologically active supports consisting of: an inorganic, porous non-water-soluble matrix and, on the surface of said matrix, non-water-soluble polymer particles "sensitized" by an effective quantity of substances
biologiquement actives.biologically active.
La quantité de substance "sensibilisante" présente est généralement de l'ordre de 0,01 à 15 % en poids par rapport au poids des particules de polymère. Il est bien évident que cette quantité est choisie en The amount of "sensitizing" substance present is generally of the order of 0.01 to 15% by weight relative to the weight of the polymer particles. It is obvious that this quantity is chosen in
fonction de l'application recherchée du support biologiquement actif. depending on the desired application of the biologically active medium.
On entend par particules de polymère "sensibilisé" par des substances biologiquement actives, des particules de polymère sur By polymer particles "sensitized" by biologically active substances, polymer particles on
lesquelles lesdites substances sont fixées par adsorption ou covalence. which said substances are fixed by adsorption or covalence.
La nature et les caractéristiques de la matrice ainsi que la nature et les caractéristiques des particules de polymère ont déjà été données The nature and characteristics of the matrix as well as the nature and characteristics of the polymer particles have already been given
ci-dessus.above.
Parmi les substances biologiquement actives "sensibilisantes" on peut citer les protéines (anticorps, enzymes...}, les antigènes, les médicaments... Lesdits supports biologiquement actifs faisant l'objet de l'invention peuvent être préparés par "dépôt" des particules de polymère "sensibilisé" par des substances biologiquement actives à la surface de la matrice par simple contact d'uLne dispersion aqueuse (latex) de particules de polymère "sensibilisé" par des substances biologiquement actives, avec la matrice poreuse, puis séchage après lavage éventuel, à une température compatible avec la substance Among the "sensitizing" biologically active substances, mention may be made of proteins (antibodies, enzymes, etc.), antigens, drugs, etc. Said biologically active carriers which are the subject of the invention may be prepared by "depot" polymer particles "sensitized" by biologically active substances on the surface of the matrix by simply contacting an aqueous dispersion (latex) of polymer particles "sensitized" with biologically active substances, with the porous matrix, and then drying after washing possible, at a temperature compatible with the substance
biologiquement active fixée sur lesdites particules. biologically active fixed on said particles.
La "'sensibilisation" des particules de polymère par la substance biologiquement active peut être réalisée par adsorption ou bien par couplage, la réaction de couplage faisant intervenir les groupes superficiels réactifs oui fonctionnels du polymère et les groupements fonctionnels de la molécules biologique & fixer. La réaction de couplage peut être réalisée selon des méthodes bien connues, par exemple: en faisant appel à des agents de couplage (tels que glutaraldehyde, carbodiimide hydrosoluble, N-hydroxybenzotriazole spacers du type 1-6 diaminohexane, polysaccharide...) par activation des fonctions du polymère (par exemple par diazotation, par action du bromure de cyanogéne, du chlorure de tosyle...) The "sensitization" of the polymer particles by the biologically active substance can be carried out by adsorption or by coupling, the coupling reaction involving the reactive functional groups of the polymer and the functional groups of the biological molecules. The coupling reaction can be carried out according to well-known methods, for example by using coupling agents (such as glutaraldehyde, water-soluble carbodiimide, N-hydroxybenzotriazole spacers of the 1-6 diaminohexane type, polysaccharide, etc.) by activation. functions of the polymer (for example by diazotization, by the action of cyanogen bromide, tosyl chloride, etc.)
puis réaction avec la molécule à fixer. then reaction with the molecule to be fixed.
15. etc...15. etc ...
Des exemples de réactions de couplage sont donnés dans les brevets américains n 3.857.931, 4.045.384, 4.140.662, 4.046.723, 4.421.896, anglais n 2.004.892, français n 2.331.567, n 2.345.459, 2.378.094, Examples of coupling reactions are given in US Pat. Nos. 3,857,931, 4,045,384, 4,140,662, 4,046,723, 4,421,896, English No. 2,004,892, French No. 2,331,567, No. 2,345,459, 2,378,094,
européen n 15.841...European No 15,841 ...
Une variante de réalisation du procédé de préparation desdits supports biologiquement actifs consiste à "déposer" des particules de polymère non "sensibilisé" à la surface de la matrice selon le procédé précédemment décrit concernant les supports pour molécules biologiquement actives, puis à fixer les molécules biologiquement actives sur les particules de polymère par adsorption ou couplage selon An alternative embodiment of the method for preparing said biologically active supports consists of "depositing" non-sensitized polymer particles on the surface of the matrix according to the method previously described for the supports for biologically active molecules, and then to fix the molecules biologically. active on the polymer particles by adsorption or coupling according to
les méthodes ci-dessus décrites.the methods described above.
Les supports biologiquement actifs faisant l'objet de l'invention peuvent être utilisés, selon la nature de la substance active immobilisée sur les particules de polymère, dans les tests de diagnostic ("RIA" radioimmunological assay - "IRMA" immunoradiometric assay - "EIA" enzyme immuno assay), en chromatographie d'affinité, comme catalyseur enzymatique en biotechnologie, comme support de The biologically active supports which are the subject of the invention may be used, depending on the nature of the active substance immobilized on the polymer particles, in diagnostic tests ("RIA" radioimmunological assay - "IRMA" immunoradiometric assay - "EIA "enzyme immunoassay"), in affinity chromatography, as an enzymatic catalyst in biotechnology, as a support for
culture cellulaire.cellular culture.
Ils sont particulièrement intéressants comme tests de diagnostic lorsque la substance active immobilisée est un immunoréactif (antigène ou anticorps); sous forme particulaire lesdits supports peuvent constituer le garnissage de colonnes et en particulier de tubes capillaires utilisables pour la réalisation de tests qualitatifs ou semi-quantitatif. Les exemples suivants sont donnés à titre indicatif et ne peuvent être considérés comme une limite du domaine et de l'esprit de l'invention. They are particularly useful as diagnostic tests when the immobilized active substance is an immunoreactant (antigen or antibody); in particulate form, said supports can constitute the packing of columns and in particular of capillary tubes that can be used for carrying out qualitative or semi-quantitative tests. The following examples are given for information only and can not be considered as a limit of the scope and spirit of the invention.
EXEMPLEEXAMPLE
Préparation d'un latex de particules de polymère "sensibilisé" Des fragments d'anticorps F (ab')2 Lapin anti protéine C sont mis en incubation à la concentration de 1 mg/l dans un tampon phosphate salin à pE 7,8 en présence d'un latex ESTAPOR K 025 commercialisé par RHONEPOULENC (latex calibré constitué de microsphéres de polystyrène de 0,25 micron de diamètre) à la concentration de 1 % en poids de Preparation of a "Sensitized" Polymer Particle Latex F (ab ') 2 Anti protein C rabbit antibody fragments are incubated at a concentration of 1 mg / l in phosphate buffered saline at pH 7.8 the presence of an ESTAPOR K 025 latex sold by RHONEPOULENC (calibrated latex consisting of 0.25 micron diameter polystyrene microspheres) at a concentration of 1% by weight of
particules de polymère dans le tampon. polymer particles in the buffer.
Après 17 h d'incubation à 22 C le latex sensibilisé est lavé trois fois à l'eau, centrifugé puis remis en dispersion dans un tampon phosphate gélatine à la concentration de 1 % en poids de particules de After 17 hours of incubation at 22 ° C., the sensitized latex is washed three times with water, centrifuged and then redispersed in phosphate gelatin buffer at a concentration of 1% by weight of
polymère dans le tampon.polymer in the buffer.
DéDpôt des particules de polymère "sensibilisé" sur une silice poreuse La dispersion de particules de polymère "sensibilisé" est diluée Deposition of polymer particles "sensitized" on a porous silica The dispersion of "sensitized" polymer particles is diluted
cinq fois par de l'eau distillée.five times with distilled water.
On y ajoute en pluie fine et sous faible agitation de la silice SPHEROSIL XOC 005 commercialisé par RHONE-POULENC (grains de silice de 100 à 200 microns de diamètre, présentant un volume poreux de 1 ml/g, un diamètre de pores de 0,30 micron et une surface spécifique de m2/g), à raison de 10 t en poids par rapport au poids de dispersion Fine rain and with gentle stirring of silica SPHEROSIL XOC 005 marketed by RHONE-POULENC (silica grains 100 to 200 microns in diameter, having a pore volume of 1 ml / g, a pore diameter of 0, are added to it. 30 micron and a specific surface area of m 2 / g), at a rate of 10% by weight relative to the dispersion weight
(soit 1 000 % en poids par rapport au poids des particules). (ie 1000% by weight relative to the weight of the particles).
Après deux heures d'imprégnation au repos et à température ambiante, la silice est lavée cinq fois à l'eau distillée, puis séchée à l'étuve After two hours of impregnation at rest and at room temperature, the silica is washed five times with distilled water and then dried in an oven
à 501C pendant deux heures.at 501C for two hours.
Confection d'un test capillaire Un tube capillaire du type pipette de PASTEUR est fermé a son extrémité inférieure par un tampon de coton hydrophile. La partie capillaire du tube est remplie sous vibration à l'aide d'un agitateur du type REAX 2000 commercialisé par Prolabo, de silice précédemment Making a capillary test A PASTEUR pipette type capillary tube is closed at its lower end by a hydrophilic cotton pad. The capillary portion of the tube is filled under vibration using a stirrer of the type REAX 2000 marketed by Prolabo, silica previously
préparée, sur une hauteur de 5 cm. prepared, on a height of 5 cm.
L'extrémité supérieure du tube capillaire est fermée d'un tampon de The upper end of the capillary tube is closed with a buffer of
coton hydrophile.cotton wool.
Test qualitatif de diagnostic (technique du sandwich) L'extrémité inférieure du tube capillaire est plongée dans une Qualitative diagnostic test (sandwich technique) The lower end of the capillary tube is immersed in a
solution aqueuse de protéine C (antigène). aqueous solution of protein C (antigen).
La colonne de silice est remplie en moins de 5 minutes. Le tube est incubé pendant 2 heures à température ambiante. Le tube, muni d'un compte gouttes en aspiration est plongé dans une solution de lavage The silica column is filled in less than 5 minutes. The tube is incubated for 2 hours at room temperature. The tube, with a suction dropper is immersed in a washing solution
(tampon phosphate TWEEN) puis renversé pour éliminer l'eau de lavage. (TWEEN phosphate buffer) and inverted to remove wash water.
Le tube, muni de son compte gouttes en dispersion est ensuite plongé dans une solution aqueuse d'anticorps antiprotéine C-peroxydase jusqu'a The tube, with its dropper dispersion is then immersed in an aqueous solution of antiprotein C-peroxidase antibody until
imprégnation totale du support.total impregnation of the support.
Après incubation pendant deux heures à température ambiante puis lavage comme précédemment, une solution de substrat ABTS (à base de 2-2' azinodi3 éthylbenzthiazoline sulfate) révèle la présence de After incubation for two hours at room temperature and then washing as above, a solution of ABTS substrate (based on 2-2'-azinodi3 ethylbenzthiazoline sulfate) reveals the presence of
protéine C par coloration de la silice en bleu- vert. Protein C by staining the silica in blue-green.
Claims (14)
Priority Applications (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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AT89402827T ATE121777T1 (en) | 1988-10-21 | 1989-10-13 | CARRIER FOR BIOLOGICALLY ACTIVE MOLECULES OR BIOLOGICALLY ACTIVE CARRIER, METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF AND ITS BIOLOGICAL USE. |
ES89402827T ES2073454T3 (en) | 1988-10-21 | 1989-10-13 | SUPPORT FOR BIOLOGICALLY ACTIVE MOLECULES OR BIOLOGICALLY ACTIVE AT THE SAME TIME, ITS PREPARATION PROCEDURE AND ITS APPLICATION IN BIOLOGY. |
EP89402827A EP0368702B1 (en) | 1988-10-21 | 1989-10-13 | Carrier for biologically active molecules, or itself biologically active, process for its preparation and its biological use |
DE68922371T DE68922371T2 (en) | 1988-10-21 | 1989-10-13 | Carrier for biologically active molecules or biologically active carrier, process for its preparation and its biological use. |
US08/206,215 US5459079A (en) | 1988-10-21 | 1994-03-07 | Support for biologically active molecules which itself may be biologically active, process for its preparation and its biological applications |
Applications Claiming Priority (1)
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---|---|---|---|
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Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
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Citations (6)
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---|---|---|---|---|
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US4071409A (en) * | 1976-05-20 | 1978-01-31 | Corning Glass Works | Immobilization of proteins on inorganic support materials |
US4218363A (en) * | 1978-10-16 | 1980-08-19 | Uop Inc. | Preparation of support matrices for immobilized enzymes |
US4268423A (en) * | 1979-11-16 | 1981-05-19 | Uop Inc. | Support matrices for immobilized enzymes |
FR2476125A1 (en) * | 1980-02-19 | 1981-08-21 | Kuraray Co | MEDIA FOR IMMOBILIZATION OF ACTIVE BIOLOGICAL SUBSTANCES AND SELECTIVE ADSORBENTS, SELECTIVE ELECTRODES AND ANALYSIS COLUMNS USING THE SAME |
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US4045384A (en) * | 1976-07-23 | 1977-08-30 | The Dow Chemical Company | Method for forming an amide bond between a latex and protein |
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US4218363A (en) * | 1978-10-16 | 1980-08-19 | Uop Inc. | Preparation of support matrices for immobilized enzymes |
US4268423A (en) * | 1979-11-16 | 1981-05-19 | Uop Inc. | Support matrices for immobilized enzymes |
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