FI95725B - Process for preparing a growth substrate or growth substrate component for lactic acid bacteria, a product which is obtained in this way, and its use - Google Patents

Process for preparing a growth substrate or growth substrate component for lactic acid bacteria, a product which is obtained in this way, and its use Download PDF

Info

Publication number
FI95725B
FI95725B FI942893A FI942893A FI95725B FI 95725 B FI95725 B FI 95725B FI 942893 A FI942893 A FI 942893A FI 942893 A FI942893 A FI 942893A FI 95725 B FI95725 B FI 95725B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
growth substrate
lactic acid
acid bacteria
product
solution obtained
Prior art date
Application number
FI942893A
Other languages
Finnish (fi)
Swedish (sv)
Other versions
FI95725C (en
FI942893A0 (en
Inventor
Matti Harju
Janne Sahlstein
Original Assignee
Valio Oy
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Valio Oy filed Critical Valio Oy
Priority to FI942893A priority Critical patent/FI95725C/en
Publication of FI942893A0 publication Critical patent/FI942893A0/en
Publication of FI95725B publication Critical patent/FI95725B/en
Application granted granted Critical
Publication of FI95725C publication Critical patent/FI95725C/en

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

The invention relates to a process for preparing a growth substrate or a growth substrate component for lactic acid bacteria, with the process being characterised in that a) a press liquid which is derived from producing silage is recovered fresh and stored, where appropriate using a preservative, and, if desirable, the press liquid is converted into grass molasses in a manner known per se, b) the pH of a fresh press liquid, which contains preservative, where appropriate, or of grass molasses which have been produced from a press liquid whose dry substance content has been diluted to less than 25% by weight, is raised to a value greater than 7.7, c) the solution obtained in step b) is heated to a temperature which exceeds 35 degree C, d) the precipitate which has formed is removed from the solution obtained in step c), which solution has a pH greater than 7.7 and a temperature greater than 35 degree C, e) the solution obtained in step d) is cooled and its pH is lowered to a value less than 7.7, and f) if necessary, other growth substrate materials are added to the solution obtained in step e), and g) if desirable, the solution obtained in step e) or f) is concentrated by evaporation to a dry substance content of at least 40% by weight, and to a product which is obtained in this way and to its use as a growth substrate or growth substrate component for lactic acid bacteria.

Description

9572595725

Menetelmä maitohappobakteerien kasvualustan tai kasvualus-takomponentin valmistamiseksi, näin saatu tuote ja sen käyttö 5 Keksinnön kohteena on menetelmä maitohappobaktee rien kasvualustan tai kasvualustakomponentin valmistamiseksi, näin saatu tuote ja sen käyttö. Saatu tuote on kirkastettu ruohomelassi, joka soveltuu kasvualustaksi tai kasvualustakomponentiksi maitohappobakteerien teollisessa 10 tuotannossa.The invention relates to a process for the preparation of a lactic acid bacterial medium or a medium component, the product thus obtained and its use. The product obtained is clarified grass molasses suitable as a growing medium or growing medium component in the industrial production of lactic acid bacteria.

AIV-rehun valmistuksen yhteydessä rehusta valuu puristenestettä. Puristeneste valuu korjuun yhteydessä vaurioituneista kasvisoluista ja toisaalta rehun happamoituminen aiheuttaa plasmolyysin eli solunesteiden yleisen 15 vapautumisen. Pääosa nesteestä muodostuu n. viikon sisällä rehun teosta. Puristenestetappiot rehun teossa ovat olosuhteista riippuen 5 - 20 paino-% rehun tuorepainosta ja keskimäärin puristenestettä muodostuu 1200 kg yhden lehmän vuotuista rehuntarvetta kohden.During the production of AIV feed, pressed liquid leaks from the feed. The pressed liquid drains from the damaged plant cells during harvesting and, on the other hand, the acidification of the feed causes plasmolysis, i.e. the general release of cellular fluids. Most of the fluid is formed within about a week of the feed being made. Depending on the circumstances, the pressurized liquid losses in the production of feed are 5 to 20% by weight of the fresh weight of the feed, and an average of 1200 kg of pressed liquid is formed per annual feed requirement of one cow.

20 Puristenesteen kuiva-ainepitoisuus vaihtelee tyy pillisesti välillä 3-10 paino-%. Nesteessä on kiivaassa kasvuvaiheessa olevan ruohon hiilihydraatteja, aminohappoja ja kasvutekijöitä, joten se pilaantuu herkästi. Ympäristöön joutuessaan puristeneste pilaa pinta- ja pohjave-25 siä ja tukkii ojia. Toisaalta neste on hapanta, sen pH on tyypillisesti noin neljä. Hapan puristeneste vahingoittaa kasvustoa ja korrodoi rakenteita. Puristeneste on siis karjatalouden ympäristöongelma.The dry matter content of the pressed liquid typically varies between 3 and 10% by weight. The liquid contains carbohydrates, amino acids and growth factors from grass in rapid growth, so it is prone to spoilage. When released into the environment, pressurized liquid contaminates surface and groundwater and clogs ditches. On the other hand, the liquid is acidic, typically having a pH of about four. Acidic compression fluid damages the crop and corrodes structures. Pressed liquid is therefore an environmental problem in livestock farming.

Tiloilla puristenestettä voidaan hyödyntää juotta-30 maila sitä eläimille tai levittämällä se pelloille lan-: noitteeksi. Juottoa on hankala järjestää nesteen huonon säilyvyyden vuoksi ja lannoitteeksi levittämistä rajoittaa nesteen happamuus. Molemmissa tapauksissa annostelua vaikeuttaa nesteen kuiva-ainepitoisuuden suuret vaihtelut.On farms, the pressed liquid can be utilized with a solder-30 racket for animals or by applying it to the fields as fertilizer. Watering is difficult to arrange due to the poor shelf life of the liquid and application as a fertilizer is limited by the acidity of the liquid. In both cases, dosing is hampered by large variations in the dry matter content of the liquid.

95725 295725 2

Puristenesteen huonosta säilyvyydestä ja kuiva-ainepitoisuuden vaihtelusta aiheutuvat ongelmat on ratkaistu suomalaisessa patenttijulkaisussa 87 881, jossa on esitetty menetelmä, jolla puristeneste saadaan talteen 5 hyvälaatuisena ja jolla se konsentroidaan vakio kuiva-ainepitoisuuteen säilyväksi ruohomelassiksi. Ruohomelassi on osoittautunut maittavaksi lehmien sokerirehuksi (Miettinen, Maito ja Me 4/1991 s.19).The problems caused by the poor preservation of the pressed liquid and the variation of the dry matter content have been solved in Finnish patent publication 87 881, which discloses a method for recovering the pressed liquid in good quality and concentrating it into grass molasses that remains at a constant dry matter content. Grass molasses has proven to be a tasty sugar feed for cows (Miettinen, Maito and Me 4/1991 p.19).

Puristenesteen huono säilyvyys on merkki siitä, 10 että siinä on runsaasti mikrobeille käyttökelpoisia ravinteita. Puristenesteen korkeaa hapenkulutusta on pyritty pienentämään kasvattamalla siinä Torulopsis alabrate -hiivaa (Olsen ja Pedersen, Acta Agricultura Scandinavica 24 (1974) 160 - 168) tai tuottamalla siitä metaania bioreak-15 torissa (Barry ja Colleran, Agricultural wastes 4 (1982) 231 - 239). Koostumustiedoista voidaan lisäksi päätellä, että puristeneste ja sopivasti laimennettu ruohomelassi sopivat kasvualustoiksi mikrobeille (Poutanen, Pellervo 10(1983) 46 - 47 ja suomalainen patenttijulkaisu 87 881).The poor shelf life of the pressed liquid is a sign that it is rich in microbial nutrients. Efforts have been made to reduce the high oxygen consumption of the pressed liquid by growing Torulopsis alabrate (Olsen and Pedersen, Acta Agricultura Scandinavica 24 (1974) 160-168) or by producing methane from it in a bioreak-15 market (Barry and Colleran, Agricultural wastes 4 (1982) 231-239). ). It can also be concluded from the composition data that the pressed liquid and suitably diluted grass molasses are suitable as growth media for microbes (Poutanen, Pellervo 10 (1983) 46-47 and Finnish patent publication 87,881).

20 Maitohappobakteerit ovat erittäin vaativia kasvu- alustojensa suhteen. Käymiskelpoisten sokereiden lisäksi alustassa täytyy olla vapaita aminohappoja tai lyhyitä peptidejä, sillä maitohappobakteerien proteolyyttinen aktiivisuus on heikko. Lisäksi maitohappobakteerit tarvitse-25 vat kasvualustastaan eri vitamiineja ja muita kasvutekijöitä.20 Lactic acid bacteria are very demanding on their growth media. In addition to fermentable sugars, the medium must contain free amino acids or short peptides, as the proteolytic activity of lactic acid bacteria is weak. In addition, lactic acid bacteria need various vitamins and other growth factors from their growth medium.

Maitohappobakteerien teollisessa tuotannossa käytettävissä alustoissa käytetään pääraaka-aineena heraa ja alustaa joudutaan täydentämään kalliilla lisäravinteilla, 30 kuten hiivauutteella ja kaseiinihydrolysaatilla. Tämä joh-: tuu maitohappobakteerien kyvyttömyydestä itse syntetisoida tarvitsemiaan kasvutekijöitä. Tuotannossa käytettävät alustat ovat varsin kalliita, alustakustannukset ovat jopa puolet tuotannon kokonaiskustannuksista. Mikrobiologisessa 35 laboratoriotyöskentelyssä mikrobien kasvualustoina käyte- 11 95725 3 tään kaupallisia MRS- ja M17-alustoja, joiden koostumus on taulukossa 1. Nämä alustat ovat hyvin kalliita käyttää, joten alalla on toivottavaa saada käyttöön kustannuksiltaan aikaisempaa edullisempia kasvualustoja.Whey is used as the main raw material in the substrates used in the industrial production of lactic acid bacteria and the substrate has to be supplemented with expensive supplements such as yeast extract and casein hydrolyzate. This is due to the inability of lactic acid bacteria to synthesize the growth factors they need. The substrates used in production are quite expensive, the cost of the substrate is up to half of the total cost of production. In the microbiological laboratory work, 11 95725 3 commercial MRS and M17 media, the composition of which is given in Table 1, are used as microbial growth media. These media are very expensive to use, so it is desirable in the art to provide more cost-effective growth media.

55

Taulukko 1. Maitohappobakteerien kasvatukseen käytettävien kaupallisten kasvualustojen (MRS ja M-17) koostumukset MRS M-17 10 Peptoni 10,0 g Polypeptoni 5,0 gTable 1. Compositions of commercial media (MRS and M-17) for growing lactic acid bacteria MRS M-17 10 Peptone 10.0 g Polypeptide 5.0 g

Lihauute 10,0 g Fytonipeptoni 5,0 gMeat extract 10.0 g Phytonipeptone 5.0 g

Hiivauute 5,0 g Hiivauute 2,5 gYeast extract 5.0 g Yeast extract 2.5 g

Glukoosi 20,0 g Lihauute 5,0 gGlucose 20.0 g Meat extract 5.0 g

Tween 80* 1,0 ml Dinatriumgly- 15 Dikaliumvety- serofosfaatti 19,0 g fosfaatti 2,0 g Magnesiumsulfaatti 0,25 gTween 80 * 1.0 ml Disodium glycol 15 Dipotassium hydrogen serophosphate 19.0 g phosphate 2.0 g Magnesium sulphate 0.25 g

Natriumasetaatti 5,0 g Askorbiinihappo 0,5 gSodium acetate 5.0 g Ascorbic acid 0.5 g

Diammoniumsitraatti 5,0 gDiammonium citrate 5.0 g

Magnesiumsulfaatti 0,2 g 20 Vesi 1000 ml Vesi 1000 ml polyetyleenioksidisorbitaanimono-oleaattiMagnesium sulphate 0.2 g 20 Water 1000 ml Water 1000 ml Polyethylene oxide sorbitan monooleate

Puristenesteen ja sopivasti laimennetun ruohomelas- .: 25 sin on havaittu soveltuvan sellaisenaan eräiden rehuissa ja rehujen säilöntäaineissa käytettävien maitohappobakteerien kasvualustaksi (J. Sahlstein, Diplomityö, Teknillinen korkeakoulu, 1992). Samassa yhteydessä todetaan, että ruo-homelassi soveltuu myös mikrobien kasvualustan osakompo-30 nentiksi. Ruohomelassissa on ilmeisesti kaikki maitohappo- • · : bakteerien tarvitsemat ravinteet sopivassa suhteessa ja ruohomelassiin pohjautuva alusta on hinnaltaan halpa verrattuna nykyisin teollisesti käytettäviin alustoihin.Compressed liquid and suitably diluted grass molasses have been found to be suitable as such as a growth medium for certain lactic acid bacteria used in feed and feed preservatives (J. Sahlstein, Diploma Thesis, Helsinki University of Technology, 1992). In the same context, it is stated that grass mold is also suitable as a component of the microbial culture medium. Grass molasses apparently contains all the nutrients needed by lactic acid bacteria in a suitable ratio, and a substrate based on grass molasses is inexpensive compared to substrates currently used industrially.

Sopivan ravinnekoostumuksen lisäksi maitohappobak-35 teerien teolliseen tuotantoon soveltuvalta alustalta edel- 95725 lytetään, että se ei aiheuta ongelmia itse tuotantoprosessissa. Eniten alusta voi aiheuttaa ongelmia konsentroitaessa soluja kasvuliuoksesta kasvun loputtua. Maitohappo-bakteerien konsentrointiin teollisessa mitassa käytetään 5 mikro- tai ultrasuodatusta, jolloin alustassa oleva vähäinenkin sakka vaikeuttaa prosessia.In addition to a suitable nutrient composition, a substrate suitable for the industrial production of lactic acid bacteria is required not to cause problems in the production process itself. Most of the medium can cause problems concentrating cells from the growth solution after growth has stopped. 5 microfiltration or ultrafiltration is used to concentrate lactic acid bacteria on an industrial scale, making even a small precipitate in the medium difficult.

Kuten aiemmin on mainittu, puristenesteen luonnollinen pH on noin neljä. Silloin nesteessä on kiintoaineena lähinnä soluja, kasvinjäänteitä ja mahdollisesti pellolta 10 peräisin olevaa hiekkaa. Maitohappobakteerien tuotannossa optimaaliset pH-olot ovat pääsääntöisesti pH-välillä 5,5 - 7,5. Kun puristenesteen tai ruohomelassin pH säädetään tälle alueelle, nesteessä luonnostaan olevat kahden arvoiset kationit ja fosfaatti saostuvat. Saostuma on hyvin 15 hienojakoinen ja pienissäkin pitoisuuksissa se muodostaa nopeasti suodatuspinnalle tiiviin virtausta haittaavan sekundäärikerroksen, ts. suodatin tukkeutuu ja konsent-rointi joudutaan keskeyttämään (vrt. esimerkki l). Puristeneste tai sopivasti laimennettu ruohomelassi eivät siten 20 sellaisenaan sovellu maitohappobakteerien teollisen tuotannon kasvualustaksi.As previously mentioned, the natural pH of the pressed liquid is about four. Then the liquid contains mainly cells, plant residues and possibly sand from the field 10 as solids. In the production of lactic acid bacteria, the optimal pH conditions are generally in the range of pH 5.5 to 7.5. When the pH of the pressed liquid or grass molasses is adjusted to this range, the divalent cations and phosphate naturally present in the liquid precipitate. The precipitate is very fine and, even at low concentrations, it quickly forms a dense secondary layer on the filter surface which impedes flow, i.e. the filter becomes clogged and the concentration has to be stopped (cf. Example 1). Thus, pressed liquid or suitably diluted grass molasses 20 as such are not suitable as a growth medium for the industrial production of lactic acid bacteria.

Nyt on yllättäen havaittu, että puristeneste tai sopivasti laimennettu ruohomelassi soveltuvat alustoiksi maitohappobakteerien teollisen mittakaavan tuotantoon, kun 25 niissä oleva kiintoaines ja pH:n säädössä muodostuva fos-faattisaostuma poistetaan keksinnön mukaisella tavalla.It has now surprisingly been found that pressed liquid or suitably diluted grass molasses are suitable as substrates for the industrial scale production of lactic acid bacteria when the solids contained therein and the phosphate precipitate formed during pH adjustment are removed according to the invention.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle onkin tunnusomaista, että a) säilörehun valmistuksesta peräisin oleva puris-30 teneste otetaan talteen tuoreena ja säilötään, mahdolli- : sesti säilöntäaineen avulla, ja halutessa puristeneste muutetaan sinänsä tunnetulla tavalla ruohomelassiksi, b) tuoreen, mahdollisesti säilöntäainetta sisältävän puristenesteen tai kuiva-ainepitoisuuteen alle 25 pai- 35 no-% laimennetun, puristenesteestä valmistetun ruohomelassin pH nostetaan arvoon yli 7,7, it 95725 5 c) vaiheessa b) saatu liuos lämmitetään lämpötilaan, joka on yli 35 °C, d) vaiheessa c) saadusta liuoksesta, jonka pH on yli 7,7 ja lämpötila on yli 35 °C, poistetaan muodostunut 5 sakka, e) vaiheessa d) saatu liuos jäähdytetään ja sen pH lasketaan arvoon alle 7,5 ja f) vaiheessa e) saatuun liuokseen lisätään tarvittaessa muita kasvualusta-aineita, ja 10 g) vaiheessa e) tai f) saatu liuos haluttaessa haihdutetaan kuiva-ainepitoisuuteen vähintään 40 paino-%.The method according to the invention is therefore characterized in that a) the pressed liquid from the manufacture of silage is recovered fresh and preserved, possibly by means of a preservative, and if desired the pressed liquid is converted into grass molasses in a manner known per se, b) fresh, optionally preserved-containing pressed liquid or dry. the pH of the grass molasses made from pressed liquid diluted to a content of less than 25% by weight is raised to more than 7.7, it 95725 5 c) the solution obtained in step b) is heated to a temperature above 35 ° C, d) the solution obtained in step c), a pH of more than 7,7 and a temperature of more than 35 ° C, the precipitate formed is removed, (e) the solution obtained in step (d) is cooled and its pH is reduced to less than 7,5 and (f) other media are added to the solution obtained in and 10 g) the solution obtained in step e) or f) is, if desired, evaporated to a dry matter content of at least 40% by weight.

Menetelmä puristenesteen talteenottamiseksi ja muuttamiseksi ruohomelaseiksi on kuvattu hakijan Fl-pa-tenttijulkaisussa 87 881.A method for recovering and converting pressed liquid into grass melons is described in Applicant's F1 Patent Publication No. 87,881.

15 Keksinnön mukaisessa menetelmässä maitohappobaktee rien kasvualustan tai kasvualustakomponentin valmistamiseksi on olennaista, että saostuman poistossa vaiheessa d) pH on yli 7,7 ja edullisesti pH on 8 - 10 ja että lämpötila on yli 35 °C ja edullisesti 50 - 60 °C, sillä saostuman 20 muodostuminen on riippuvainen pH:sta ja lämpötilasta. Vaiheessa d) vaiheessa c) saadusta liuoksesta poistetan sakka esimerkiksi suodattamalla tai sentrifugoimalla. Saatua tuotetta käytetään sopivasti laimennettuna maitohappobakteerien kasvualustana ja kasvualustat lämpökäsitellään . : 25 ennen kuin niihin lisätään puhdasviljelmä. Mikäli saostu man poistossa käytetään edellä mainittuja pH- ja lämpötila-arvoja alempia arvoja, saostuma muodostuu uudestaan kasvualustan lämpökäsittelyn yhteydessä (Esimerkit 3 ja 4) .In the process according to the invention for preparing the lactic acid bacteria medium or the medium component, it is essential that the pH of the precipitate in step d) is above 7.7 and preferably pH 8-10 and that the temperature is above 35 ° C and preferably 50-60 ° C, since the precipitate The formation is dependent on pH and temperature. The solution obtained in step d) is removed from the solution obtained in step c), for example by filtration or centrifugation. The product obtained is used as a suitably diluted medium for lactic acid bacteria and the media are heat-treated. : 25 before adding pure culture. If values lower than the above-mentioned pH and temperature values are used to remove the precipitate, the precipitate is re-formed during the heat treatment of the medium (Examples 3 and 4).

30 Vaiheessa e) vaiheessa d) saatu liuos jäähdytetään • · : ja sen pH lasketaan arvoon alle 7,5, edullisesti arvoon alle 5 tuotteen kasvualustaominaisuuksien säilymisen edistämiseksi (Esimerkki 13).The solution obtained in step e) in step d) is cooled to a pH of less than 7.5, preferably less than 5, in order to promote the preservation of the medium properties of the product (Example 13).

Vaiheessa f) vaiheessa e) saatuun liuokseen lisä- 35 tään tarvitessa muita kasvualusta-aineita kasvualustan ta- 6 ok725 salaatuisuuden varmistamiseksi. Tällaisia tarvittaessa lisättäviä aineita voivat olla esimerkiksi sokerit ja glukoosi sekä hiivauute ja kaseiinihydrolysaatti.If necessary, other media are added to the solution obtained in step f) in step e) to ensure the secrecy of the medium. Such optional additives may include, for example, sugars and glucose, as well as yeast extract and casein hydrolyzate.

Jo vaiheessa d) tai e) saatua liuosta voidaan käyt-5 tää maitohappobakteerien kasvualustaksi sellaisenaan tai tarpeen mukaan täydennettynä. Vaiheessa e) tai f) saatu liuos voidaan haluttaessa haihduttaa kuiva-ainepitoisuuteen vähintään 40 paino-%.The solution already obtained in step d) or e) can be used as a medium for lactic acid bacteria as such or supplemented as necessary. The solution obtained in step e) or f) can, if desired, be evaporated to a dry matter content of at least 40% by weight.

Esimerkissä 2 on käytännön kuvaus keksinnön mukai-10 sesta kirkastusprosessista, jossa lähtöaineena käytetään FI-patenttijulkaisun 87 881 mukaista tuotetta, ja taulukosta 2 käy ilmi tuotteen koostumuksessa prosessin aikana tapahtuvat muutokset.Example 2 provides a practical description of the clarification process according to the invention, in which the product according to FI patent publication 87 881 is used as a starting material, and Table 2 shows the changes in the composition of the product during the process.

15 Taulukko 2. FI-patenttijulkaisun 87 881 mukaisen tuotteen ja keksinnön mukaisen tuotteen koostumukset FI-patenttijul- Keksinnön kaisun 87 881 mukainen 20 mukainen tuote tuote15 Table 2. Compositions of the product according to FI patent publication 87 881 and the product according to the invention Product according to FI patent publication 87 881

Proteiini 127 g/kg 125 g/kgProtein 127 g / kg 125 g / kg

Glukoosi+fruktoosi 187 g/kg 198 g/kgGlucose + fructose 187 g / kg 198 g / kg

Orgaaniset hapot 110 g/kg 110 g/kg 25 Tuhka 155 g/kg 190 g/kg -fosfori 5,4 g/kg 0,6 g/kg -kalium 3,9 g/kg 59,9 g/kg -kalsium 8,1 g/kg 0,9 g/kg -kloridi 27,4 g/kg 36,4 g/kg 30 -magnesium 5,1 g/kg 2,7 g/kg : -natrium 2,0 g/kg 33,0 g/kgOrganic acids 110 g / kg 110 g / kg 25 Ash 155 g / kg 190 g / kg phosphorus 5.4 g / kg 0.6 g / kg potassium 3.9 g / kg 59.9 g / kg calcium 8.1 g / kg 0.9 g / kg chloride 27.4 g / kg 36.4 g / kg 30 -magnesium 5.1 g / kg 2.7 g / kg: sodium 2.0 g / kg 33.0 g / kg

Edellä kuvattujen vaiheiden a) - g) mukaan valmistettu tuote soveltuu sopivasti laimennettuna useiden mai-35 tohappobakteerien, kuten maitohappobakteerien EnterococcusThe product prepared according to steps a) to g) described above is suitably diluted with a variety of lactic acid bacteria, such as the lactic acid bacterium Enterococcus

IIII

77

QR79RQR79R

faecium, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum ja Streptococcus thermophilus, kasvualustaksi joko sellaisenaan tai spesifin tarpeen mukaan täydennettynä esimerkiksi glukoosilla tai hiivauutteella (Esimerkit 5 ja 6).faecium, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum and Streptococcus thermophilus, as a culture medium either as such or supplemented with specific needs such as glucose or yeast extract (Examples 5 and 6).

5 Vaiheiden a) - g) mukaan valmistetusta tuotteesta sopivasti laimentamalla valmistetulla kasvualustalla saadaan parempia solusaantoja kuin kalliilla kaupallisilla optimialustoilla tai teollisesti käytetyillä herapohjäisillä kasvualustoilla (Esimerkit 7 ja 8).From the product prepared according to steps a) to g), the medium prepared by suitable dilution gives better cell yields than expensive commercial optimum media or industrial whey-based media (Examples 7 and 8).

10 Nyt onkin yllättäen havaittu, että edellä kuvattu jen vaiheiden a) - g) mukaan valmistettu tuote soveltuu sopivasti laimennettuna teollisen mittakaavan maitohappo-bakteerien tuotantoon ja sillä tuotetut solut on mahdollista konsentroida teollisessa tuotannossa käytettävillä 15 laitteilla (Esimerkki 9).10 It has now surprisingly been found that the product prepared according to steps a) to g) described above is suitably diluted for the production of lactic acid bacteria on an industrial scale and it is possible to concentrate the cells produced with it in industrial production equipment (Example 9).

Suomalaisen patenttijulkaisun 87 881 mukaan tuotetun ruohomelassin kasvualustaominaisuudet vaihtelevat re-husadosta ja vuodesta riippuen. Nyt on yllättäen myös havaittu, että edellä kohdissa a) - g) kuvatulla menetelmäl-20 lä tuotetun kasvualustan solusaannot ovat paremmat ja va-kioidummat kuin raaka-aineena käytetyn sopivasti laimennetun, suomalaisen patenttijulkaisun 87 881 mukaan valmistetun ruohomelassin (Esimerkki 10).According to the Finnish patent publication 87,881, the growing medium properties of grass molasses vary depending on the feed harvest and the year. It has now surprisingly also been found that the cell yields of the medium produced by the method described in a) to g) above are better and more stable than the suitably diluted grass molasses prepared according to Finnish Patent Publication 87,881 (Example 10).

Keksinnön mukaista tuotetta voidaan käyttää myös . 25 muiden teollisesti mielenkiintoisten maitohappobakteerien kasvualustojen osana, jos sitä ei jostain syystä voida käyttää kasvualustan pääkomponenttina (Esimerkki 11).The product of the invention can also be used. 25 as a medium for other industrially interesting lactic acid bacteria, if for some reason it cannot be used as a major component of the medium (Example 11).

Keksinnön mukainen käsittely parantaa myös tuotteen mikrobiologista laatua. Vaikka kasvualustat lämpökäsitel-30 läänkin alustakomponenttien mukana tulleiden bakteerien ja • * « : itiöiden tuhoamiseksi, niin varsinkin itiöt voivat kestää tämän lämpökäsittelyn. Siksi teollisessa tuotannossa jo raaka-aineiden mikrobiologiseen laatuun kiinnitetään huomiota. Esimerkissä 12 nähdään, että käsittely parantaa 35 tuotteen mikrobiologista laatua.The treatment according to the invention also improves the microbiological quality of the product. Although the growth media are heat-treated to kill the bacteria and spores involved in the substrate components, spores in particular can withstand this heat treatment. Therefore, in industrial production, attention is already paid to the microbiological quality of raw materials. Example 12 shows that the treatment improves the microbiological quality of the 35 products.

8 957258 95725

Keksintöä kuvataan lähemmin seuraavilla esimerkeillä. Esimerkeissä viitataan liitteenä oleviin piirroksiin, joissa kuva 1 on graafinen esitys esimerkissä 1 kuvatun 5 kokeen tuloksista, jotka esittävät sakkaisen ruohomelassi-pohjäisen (-□-) ja herapohjäisen (-·-) kasvualustan vuot ajan funktiona konsentroitaessa maitohappobakteereita teollisen mittakaavan tuotannossa käytettävällä mikrosuoti-mella.The invention is further illustrated by the following examples. In the examples, reference is made to the accompanying drawings, in which Figure 1 is a graphical representation of the results of the 5 experiments described in Example 1 showing precipitated grass molasses-based (- □ -) and whey-based (- · -) medium as a function of concentration of lactic acid bacteria in industrial scale production .

10 Kuva 2 on kirkastetun ruohomelassipohjaisen (-□-) ja herapermeaattipohjäisen (-·-) kasvualustan vuot ajan funktiona konsentroitaessa maitohappobakteereita teollisen mittakaavan tuotannossa käytettävällä mikrosuotimella.10 Figure 2 shows the years of clarified grass molasses-based (- □ -) and whey permeate-based (- · -) media as a function of concentration of lactic acid bacteria with a microfilter used in industrial scale production.

Esimerkki 1 15 Enterococcus faecium on suolistoperäinen maitohap pobakteeri, jota käytetään erityisesti nuorille eläimille tarkoitetuissa valmisrehuissa ja säilörehun säilöntäaineissa .Example 1 Enterococcus faecium is an intestinal lactic acid bacterium used in ready-to-eat and silage preservatives, especially for young animals.

Kuvassa 1 on esitetty permeaatin virtaamat ajan 20 funktiona konsentroitaessa E. faeciumin soluja kahdesta eri kasvuliuoksesta maitohappobakteerien teollisessa tuotannossa käytettävällä mikrosuotimella (Alfa-Laval tyyppi MFS 1X38, huokoskoko 1,4 jum) . Käyrä 1 (-·-) kuvaa permeaatin virtausta konsentroitaessa perinteisellä herapohjai-25 sella alustalla kasvatettua E. faeciumia. Käyrä 2 (-□-) kuvaa permeaatin virtausta konsentroitaessa E. faecium -soluja kasvualustassa, joka on FI-patenttijulkaisun 87 881 mukaan valmistetun ruohomelassin 11 paino-%:inen vesiliuos. Alustasta oli poistettu osa sakasta ja sitä oli 30 jäljellä noin puolet alkuperäisestä eli 6 g/1.Figure 1 shows permeate flows as a function of time 20 when concentrating E. faecium cells from two different growth solutions with a microfilter used in the industrial production of lactic acid bacteria (Alfa-Laval type MFS 1X38, pore size 1.4 μm). Curve 1 (- · -) depicts the permeate flow when concentrating E. faecium grown on a conventional whey-based medium. Curve 2 (- □ -) depicts the flow of permeate when concentrating E. faecium cells in a medium which is an 11% by weight aqueous solution of grass molasses prepared according to FI patent publication 87 881. Part of the precipitate had been removed from the medium and about 30 of the original, i.e. 6 g / l, remained.

! Kuvasta 1 nähdään, että sakkainen kasvualusta tukki suotimen ja ajo jouduttiin keskeyttämään 15 minuutin suodatuksen jälkeen. Perinteisellä hera-alustalla konsent-rointi voitiin viedä kerralla loppuun saakka.! It can be seen from Figure 1 that the precipitated medium clogged the filter and the run had to be stopped after 15 minutes of filtration. On a traditional whey medium, the concentration could be completed in one go.

li 9 95725li 9 95725

Esimerkki 2Example 2

Astiaan punnittiin 286 g FI-patenttijulkaisun 87 881 mukaan valmistettua tuotetta, jonka kuiva-ainepitoisuus on noin 70 paino-%. Tuote liuotettiin 800 g:aan 5 vettä, jolloin saatiin liuos, jonka kuiva-ainepitoisuus oli noin 20 paino-%. Liuoksen pH nostettiin natriumhydroksidilla arvoon 9,5 ja sen lämpötila nostettiin arvoon 55 °C. Muodostunut saostuma erotettiin sentrifugoimalla labo-ratoriosentrifuugilla (3000 g, 10 min), kirkas osa otet-10 tiin talteen ja sen pH laskettiin suolahapolla arvoon viisi, jonka jälkeen se haihdutettiin vakuumihaihduttimella kuiva-ainepitoisuuteen 60 paino-%.286 g of a product prepared according to FI patent publication 87 881 with a dry matter content of about 70% by weight were weighed into the vessel. The product was dissolved in 800 g of water to give a solution with a dry matter content of about 20% by weight. The pH of the solution was raised to 9.5 with sodium hydroxide and the temperature was raised to 55 ° C. The precipitate formed was separated by centrifugation in a laboratory centrifuge (3000 g, 10 min), the clear portion was collected and the pH was lowered to five with hydrochloric acid, after which it was evaporated on a vacuum evaporator to a dry matter content of 60% by weight.

Astiaan punnittiin 143 g edellä kuvatulla tavalla valmistettua tuotetta, se liuotettiin 900 g:aan vettä ja 15 seoksen pH säädettiin natriumhydroksidillä seitsemään, joka on eräiden maitohappobakteerien kasvun optimi-pH. Kun seos lämpökäsiteltiin biotekniikassa yleisesti käytetyllä tavalla (15 minuuttia 121 °C:ssa), siihen ei muodostunut saostumaa.143 g of the product prepared as described above were weighed into the vessel, dissolved in 900 g of water, and the pH of the mixture was adjusted to seven with sodium hydroxide, which is the optimum pH for the growth of some lactic acid bacteria. When the mixture was heat treated as commonly used in biotechnology (15 minutes at 121 ° C), no precipitate formed.

20 Esimerkki 320 Example 3

Astiaan punnittiin 143 g FI-patenttijulkaisun 87 881 mukaan valmistettua tuotetta, jonka kuiva-ainepitoisuus on noin 70 paino-%. Tuote liuotettiin 900 g:aan vettä, jolloin saatiin liuos, jonka kuiva-ainepitoisuus . 2 5 oli noin 10 paino-%. Liuoksen pH nostettiin natriumhydrok- sidilla arvoon 9,5 ja sen lämpötila nostettiin arvoon 22 °C. Muodostunut saostuma erotettiin suodattamalla imulla ja Whatman GF/A -suodatinpaperilla. Kirkas osa otettiin talteen ja sen pH laskettiin suolahapolla arvoon viisi, 30 jonka jälkeen se haihdutettiin vakuumihaihduttimella kui- • ♦ * va-ainepitoisuuteen 60 paino-%.143 g of a product prepared according to FI patent publication 87 881 with a dry matter content of about 70% by weight were weighed into the vessel. The product was dissolved in 900 g of water to give a solution with a dry matter content. 2 5 was about 10% by weight. The pH of the solution was raised to 9.5 with sodium hydroxide and the temperature was raised to 22 ° C. The precipitate formed was separated by suction filtration and Whatman GF / A filter paper. The clear portion was collected and the pH was lowered to five with hydrochloric acid, after which it was evaporated on a vacuum evaporator to a dry matter content of 60% by weight.

Astiaan punnittiin 143 g edellä kuvatulla tavalla valmistettua tuotetta, se liuotettiin 900 g:aan vettä ja seoksen pH säädettiin natriumhydroksidilla seitsemään, 35 joka on eräiden maitohappobakteerien kasvun optimi-pH. Kun 95725 10 seos lämpökäsiteltiin biotekniikassa yleisesti käytetyllä tavalla (15 minuuttia 121 °C:ssa), siihen muodostui saostuma .143 g of the product prepared as described above were weighed into the vessel, dissolved in 900 g of water, and the pH of the mixture was adjusted with sodium hydroxide to seven, which is the optimum pH for the growth of some lactic acid bacteria. When the 95725 10 mixture was heat treated as commonly used in biotechnology (15 minutes at 121 ° C), a precipitate formed.

Esimerkki 4 5 Astiaan punnittiin 143 g FI-patenttijulkaisun 87 881 mukaan valmistettua tuotetta, jonka kuiva-ainepitoisuus on noin 70 paino-%. Tuote liuotettiin 900 g:aan vettä, jolloin saatiin liuos, jonka kuiva-ainepitoisuus oli noin 10 paino-%. Liuoksen pH nostettiin natriumhydrok-10 sidilla arvoon 7,5 ja sen lämpötila nostettiin arvoon 55 °C. Muodostunut saostuma erotettiin suodattamalla imulla ja Whatman GF/A -suodatinpaperilla. Kirkas osa otettiin talteen ja sen pH laskettiin suolahapolla arvoon viisi, jonka jälkeen se haihdutettiin vakuumihaihduttimella kui-15 va-ainepitoisuuteen 60 paino-%.Example 4 143 g of a product prepared according to FI patent publication 87 881 with a dry matter content of about 70% by weight were weighed into a container. The product was dissolved in 900 g of water to give a solution with a dry matter content of about 10% by weight. The pH of the solution was raised to 7.5 with sodium hydroxide and the temperature was raised to 55 ° C. The precipitate formed was separated by suction filtration and Whatman GF / A filter paper. The clear portion was collected and the pH was lowered to five with hydrochloric acid, after which it was evaporated on a vacuum evaporator to a dry matter content of 60% by weight.

Astiaan punnittiin 143 g edellä kuvatulla tavalla valmistettua tuotetta, se liuotettiin 900 g:aan vettä ja seoksen pH säädettiin natriumhydroksidilla seitsemään, joka on eräiden maitohappobakteerien kasvun optimi-pH. Kun 20 seos lämpökäsiteltiin biotekniikassa yleisesti käytetyllä tavalla (15 minuuttia 121 °C:ssa), siihen muodostui saostuma.143 g of the product prepared as described above were weighed into the vessel, dissolved in 900 g of water, and the pH of the mixture was adjusted to seven with sodium hydroxide, which is the optimum pH for the growth of some lactic acid bacteria. When the mixture was heat treated as commonly used in biotechnology (15 minutes at 121 ° C), a precipitate formed.

Esimerkki 5Example 5

Enterococcus faeciumin kasvattamiseksi 143 g kek-:· 25 sinnön mukaista tuotetta liuotettiin 900 g:aan vettä, se oksen pH säädettiin arvoon 7,0 natriumhydroksidilla ja seos lämpökäsiteltiin 15 minuuttia 121 °C:ssa. Puhdasvil-jelmän siirrostuksen jälkeen solupitoisuus oli 5,4-109 pe-säkettä/ml ja 20 tunnin kasvun jälkeen solupitoisuus asti-30 assa oli 12,0-109 pesäkettä/ml. Kasvun ajan lämpötila oli » · 35 °C ja pH pidettiin arvossa 7,0 säätimellä ja 20 paino-% natriumhydroksidilla.To grow Enterococcus faecium, 143 g of the product of the invention were dissolved in 900 g of water, the pH of the mixture was adjusted to 7.0 with sodium hydroxide, and the mixture was heat-treated at 121 ° C for 15 minutes. After inoculation of the pure culture, the cell concentration was 5.4-109 colonies / ml and after 20 hours of growth, the cell concentration in up to -30 was 12.0-109 colonies / ml. During the growth period, the temperature was »· 35 ° C and the pH was maintained at 7.0 with a regulator and 20% by weight of sodium hydroxide.

Lactobacillus plantarumin kasvattamiseksi 250 g keksinnön mukaista tuotetta liuotettiin 820 g:aan vettä, 35 seoksen pH säädettiin arvoon 6,0 natriumhydroksidilla ja 95725 11 seos lämpökäsiteltiin 15 minuuttia 121 °C:ssa. Puhdasvil-jelmän siirrostuksen (siirroste 1 tilavuus-% kasvualustan tilavuudesta) ja 22 tunnin kasvun jälkeen solupitoisuus astiassa oli 9,7-109 pesäkettä/ml. Kasvun ajan lämpötila 5 oli 32 °C ja pH pidettiin arvossa 6,0 säätimellä ja 20 paino-% natriumhydroksidilla.To grow Lactobacillus plantarum, 250 g of the product of the invention was dissolved in 820 g of water, the pH of the mixture was adjusted to 6.0 with sodium hydroxide and the mixture was heat-treated for 15 minutes at 121 ° C. After inoculation of pure culture (inoculation 1% by volume of medium volume) and growth for 22 hours, the cell concentration in the dish was 9.7-109 colonies / ml. During the growth period, the temperature was 32 ° C and the pH was maintained at 6.0 with a regulator and 20% by weight sodium hydroxide.

Esimerkki 6Example 6

Lactobacillus plantarumin kasvattamiseksi 250 g keksinnön mukaista tuotetta ja 5 g hiivauutetta liuotet-10 tiin 820 g:aan vettä. Seoksen pH säädettiin natriumhydroksidilla arvoon 6,0 ja seos lämpökäsiteltiin 15 minuuttia 121 °C:ssa. Puhdasviljelmän siirrostuksen (siirroste 1 tilavuus-% kasvualustan tilavuudesta) ja 22 tunnin kasvun jälkeen solupitoisuus astiassa oli 11,1-109 pesäkettä/ml.To grow Lactobacillus plantarum, 250 g of the product according to the invention and 5 g of yeast extract were dissolved in 820 g of water. The pH of the mixture was adjusted to 6.0 with sodium hydroxide and the mixture was heat treated at 121 ° C for 15 minutes. After inoculation of pure culture (inoculum 1% by volume of medium volume) and growth for 22 hours, the cell concentration in the dish was 11.1-109 colonies / ml.

15 Kasvun ajan lämpötila oli 32 °C ja pH pidettiin arvossa 6.0 säätimellä ja 20 paino-% natriumhydroksidilla.During the growth period, the temperature was 32 ° C and the pH was maintained at 6.0 with a regulator and 20% by weight sodium hydroxide.

Lactobacillus fermentumin kasvattamiseksi 143 g keksinnön mukaista tuotetta ja 15 g glukoosia liuotettiin 900 g:aan vettä. Seoksen pH säädettiin natriumhydroksidil-20 la arvoon 6,0 ja seos lämpökäsiteltiin 15 minuuttia 121 °C:ssa. Puhdasviljelmän siirrostuksen ja 12 tunnin kasvun jälkeen solupitoisuus astiassa oli 3,4109 pesäkettä/ml. Kasvun ajan lämpötila oli 37 °C ja pH pidettiin arvossa 6.0 säätimellä ja 20 paino-% natriumhydroksidilla.To grow Lactobacillus fermentum, 143 g of the product of the invention and 15 g of glucose were dissolved in 900 g of water. The pH of the mixture was adjusted to 6.0 with sodium hydroxide-20a and the mixture was heat treated at 121 ° C for 15 minutes. After inoculation of the pure culture and growth for 12 hours, the cell concentration in the dish was 3.4109 colonies / ml. During the growth period, the temperature was 37 ° C and the pH was maintained at 6.0 with a regulator and 20% by weight sodium hydroxide.

: 25 Esimerkki 7: 25 Example 7

Lactobacillus plantarumin kasvattamiseksi 250 g keksinnön mukaista tuotetta liuotettiin 820 g:aan vettä, seoksen pH säädettiin natriumhydroksidilla arvoon 6,0 ja seos lämpökäsiteltiin 15 minuuttia 121 °C:ssa. Puhdasvil-30 jelmän siirrostuksen (siirroste 1 tilavuus-% kasvualustan tilavuudesta) ja 22 tunnin kasvun jälkeen solupitoisuus astiassa oli 9,7-109 pesäkettä/ml. Kasvun ajan lämpötila oli 32 °C ja pH pidettiin arvossa 6,0 säätimellä ja 20 paino-% natriumhydroksidilla.To grow Lactobacillus plantarum, 250 g of the product of the invention was dissolved in 820 g of water, the pH of the mixture was adjusted to 6.0 with sodium hydroxide, and the mixture was heat-treated at 121 ° C for 15 minutes. After inoculation of pure culture (inoculum 1% by volume of medium volume) and growth for 22 hours, the cell concentration in the vessel was 9.7-109 colonies / ml. During the growth period, the temperature was 32 ° C and the pH was maintained at 6.0 with a regulator and 20% by weight sodium hydroxide.

95725 1295725 12

Lactobacillus plantarumia kasvatettiin kaupallisessa MRS-alustassa, jonka koostumus on esitetty edellä taulukossa l. Puhdasviljelmän siirrostuksen (siirroste l ti-lavuus-% kasvualustan tilavuudesta) ja 22 tunnin kasvun 5 jälkeen solupitoisuus astiassa oli 2,5-109 pesäkettä/ml. Kasvun ajan lämpötila oli 32 °C ja pH pidettiin arvossa 6.0 säätimellä ja 20 paino-% natriumhydroksidilla.Lactobacillus plantarum was grown in commercial MRS medium, the composition of which is shown in Table 1 above. After inoculation of pure culture (inoculum 1% by volume of medium volume) and growth for 22 hours, the cell concentration in the vessel was 2.5-109 colonies / ml. During the growth period, the temperature was 32 ° C and the pH was maintained at 6.0 with a regulator and 20% by weight sodium hydroxide.

Lactobacillus fermentumin kasvattamiseksi 143 g keksinnön mukaista tuotetta ja 15 g glukoosia liuotettiin 10 900 g:aan vettä. Seoksen pH säädettiin natriumhydroksidil la arvoon 6,0 ja seos lämpökäsiteltiin 15 minuuttia 121 °C:ssa. Puhdasviljelmän siirrostuksen (siirroste 1 tila-vuus-% kasvualustan tilavuudesta) ja 12 tunnin kasvun jälkeen solupitoisuus astiassa oli 3,4 109 pesäkettä/ml. Kas-15 vun ajan lämpötila oli 37 °C ja pH pidettiin arvossa 6,0 säätimellä ja 20 paino-% natriumhydroksidilla.To grow Lactobacillus fermentum, 143 g of the product of the invention and 15 g of glucose were dissolved in 10,900 g of water. The pH of the mixture was adjusted to 6.0 with sodium hydroxide and the mixture was heat treated at 121 ° C for 15 minutes. After inoculation of pure culture (inoculum 1% v / v of the volume of medium) and growth for 12 hours, the cell concentration in the dish was 3.4,109 colonies / ml. During the growth period, the temperature was 37 ° C and the pH was maintained at 6.0 with a regulator and 20% by weight sodium hydroxide.

Lactobacillus fermentumia kasvatettiin kaupallisessa MRS-alustassa, jonka koostumus on esitetty edellä taulukossa 1. Puhdasviljelmän siirrostuksen (siirroste 1 ti-20 lavuus-% kasvualustan tilavuudesta) ja 12 tunnin kasvun jälkeen solupitoisuus astiassa oli 5,7-10® pesäkettä/ml. Kasvun ajan lämpötila oli 37 °C ja pH pidettiin arvossa 6.0 säätimellä ja 20 paino-% natriumhydroksidilla.Lactobacillus fermentum was grown in a commercial MRS medium, the composition of which is shown in Table 1 above. After inoculation of pure culture (inoculum 1 ti-20% by volume of medium volume) and growth for 12 hours, the cell concentration in the vessel was 5.7-10® colonies / ml. During the growth period, the temperature was 37 ° C and the pH was maintained at 6.0 with a regulator and 20% by weight sodium hydroxide.

Esimerkki 8 25 Enterococcus faeciumin kasvattamiseksi 143 g kek sinnön mukaista tuotetta liuotettiin 900 g:aan vettä, seoksen pH säädettiin natriumhydroksidilla arvoon 7,0 ja seos lämpökäsiteltiin 15 minuuttia 121 °C:ssa. Puhdasvil-jelmän siirrostuksen (siirroste 1 tilavuus-% kasvualustan 30 tilavuudesta) ja 20 tunnin kasvun jälkeen solupitoisuus « . astiassa oli 12,0 109 pesäkettä/ml. Kasvun ajan lämpötila oli 35 °C ja pH pidettiin arvossa 7,0 säätimellä ja 20 paino-% natriumhydroksidilla.Example 8 To grow Enterococcus faecium, 143 g of the product of the invention were dissolved in 900 g of water, the pH of the mixture was adjusted to 7.0 with sodium hydroxide and the mixture was heat-treated at 121 ° C for 15 minutes. Cell content after inoculation of pure culture (inoculum 1% by volume of 30 volumes of medium) and growth for 20 hours «. the vessel had 12.0 109 colonies / ml. During the growth period, the temperature was 35 ° C and the pH was maintained at 7.0 with a regulator and 20% by weight sodium hydroxide.

Enterococcus faeciumin kasvattamiseksi teollisesti 35 käytetyssä alustassa 60 g herapermeaattia, 10 g kaseiini- 95725 13 hydrolysaattia, 4 g hiivauutetta ja 1 ml Tween 80:tä liuotettiin 930 g:aan vettä ja seos lämpökäsiteltiin 15 minuuttia 121 °C:ssa. Puhdasviljelmän siirrostuksen (siir-roste 1 tilavuus-% kasvualustan tilavuudesta) ja 20 tunnin 5 kasvun jälkeen solupitoisuus astiassa oli 5,5·109 pesäket-tä/ml. Kasvun ajan lämpötila oli 35 °C ja pH pidettiin arvossa 7,0 säätimellä ja 20 paino-% natriumhydroksidilla.In the medium used to grow Enterococcus faecium, 60 g of whey permeate, 10 g of casein 95725 13 hydrolyzate, 4 g of yeast extract and 1 ml of Tween 80 were dissolved in 930 g of water and the mixture was heat-treated for 15 minutes at 121 ° C. After inoculation of pure culture (inoculum 1% by volume of medium volume) and growth for 20 hours 5, the cell concentration in the vessel was 5.5 · 109 colonies / ml. During the growth period, the temperature was 35 ° C and the pH was maintained at 7.0 with a regulator and 20% by weight sodium hydroxide.

Esimerkki 9Example 9

Kuvassa 2 on esitetty permeaatin virtaamat konsent-10 roitaessa E. faecium -soluja maitohappobakteerien teollisen mittakaavan tuotannossa käytettävällä mikrosuotimella (Alfa-Laval typpi MFS 1X38, huokoskoko 1,4 μιη) . Käyrä 1 (-·-) kuvaa permeaatin virtausta konsentroitaessa perinteisellä herapohjaisella alustalla kasvatettua E. faeci-15 umia. Käyrä 2 (-□-) kuvaa permeaatin virtausta konsentroitaessa kasvatusta, jonka alustassa on keksinnön mukaista tuotetta kuiva-ainepitoisuudessa 10 paino-%.Figure 2 shows the permeate flows when concentrating E. faecium cells with a microfilter used in the industrial production of lactic acid bacteria (Alfa-Laval nitrogen MFS 1X38, pore size 1.4 μιη). Curve 1 (- · -) depicts the permeate flow when concentrating E. faeci-15 uma grown on a traditional whey-based medium. Curve 2 (- □ -) depicts the flow of permeate when concentrating a culture in which the product of the invention has a dry matter content of 10% by weight.

Kuvasta 2 nähdään, että permeaatin virtaamissa ei ole merkittäviä eroja. Maitohappobakteerit voidaan siis 20 konsentroida teollisessa tuotannossa käytetyillä suotimilla, kun alustassa on käytetty keksinnön mukaista tuotetta.It can be seen from Figure 2 that there are no significant differences in permeate flows. Thus, lactic acid bacteria can be concentrated with filters used in industrial production when the product of the invention is used in the medium.

Esimerkki 10Example 10

Taulukossa 2 on esitetty pesäkemäärät kokeista, joissa eri vuosina on vertailtu E. faeciumin solusaantoja ·· 25 FI-patenttijulkaisun 87 881 mukaisesta tuotteesta valmis tetussa ja keksinnön mukaisesta tuotteesta valmistetussa kasvualustassa. FI-patenttijulkaisun 87 881 mukaisesta ruohomelassista tehty kasvualusta on valmistettu liuottamalla 158 g ko. patenttijulkaisun mukaan valmistettua ruo-30 homelassia 890 g:aan vettä ja säätämällä liuoksen pH nat- · : riumhydroksidilla arvoon 7,0. Keksinnön mukaisesta tuot teesta tehty kasvualusta on valmistettu liuottamalla 143 g keksinnön mukaista tuotetta 900 g:aan vettä ja säätämällä liuoksen pH natriumhydroksidilla arvoon 7,0. Kaikissa ta-35 pauksissa siiroste oli 1 tilavuus-% kasvualustan tilavuudesta ja kasvuaika 20 h.Table 2 shows the number of colonies from experiments in which the cell yields of E. faecium in the medium prepared from the product according to FI patent publication 87 881 and the product prepared according to the invention have been compared in different years. The medium made of grass molasses according to FI patent publication 87 881 has been prepared by dissolving 158 g of the a cane-30 mold made according to the patent publication to 890 g of water and by adjusting the pH of the solution to 7.0 with sodium hydroxide. The medium made from the product according to the invention has been prepared by dissolving 143 g of the product according to the invention in 900 g of water and adjusting the pH of the solution to 7.0 with sodium hydroxide. In all cases, the inoculum was 1% by volume of the medium volume and the growth time was 20 h.

95725 1495725 14

Taulukko 3. E. faeciumin pesäkemäärät, kun sitä on kasvatettu eri vuosien sadoista peräisin olevissa, toisaalta FI-patenttijulkaisun 87 881 ja toisaalta keksinnön mukaisista tuotteista valmistetuissa kasvualustoissa 5Table 3. Colony counts of E. faecium when grown in growing media from different years, on the one hand according to FI patent publication 87 881 and on the other hand made from products according to the invention 5

Pesäkemäärä 109 CFU/mlColony count 109 CFU / ml

Vuoden 1991 satoa oleva FI-patentti- julkaisun 87 881 mukainen tuote 10,1 10 Vuoden 1991 satoa oleva keksinnön mukainen tuote 12,4Product of the 1991 harvest according to FI patent publication 87,881 10.1 10 Product of the invention of the 1991 harvest 12.4

Vuoden 1992 satoa oleva FI-patentti- julkaisun 87 881 mukainen tuote 8,1 15 Vuoden 1992 satoa oleva keksinnön mukainen tuote 12,0Product of the 1992 harvest according to FI patent publication 87 881 8.1 15 Product of the invention of the 1992 harvest 12.0

Vuoden 1993 satoa oleva FI-patentti- julkaisun 87 881 mukainen tuote 8,0 20 Vuoden 1993 satoa oleva keksinnön mukainen tuote 12,3Product of the 1993 harvest according to FI patent publication 87 881 8.0 20 Product of the invention of the 1993 harvest 12.3

Esimerkki 11Example 11

Juusto- ja jogurttihapatteissa käytettävää Strepto-·’ 25 coccus thermophilus -maitohappobakteeria tuotetaan hera- pohjäisellä alustalla, jota täydennetään kaseiinihydroly-saatilla. Kaseiinhydrolysaatin pitoisuus alustassa on 0,5 %. Kun kaseiinihydrolysaatti korvattiin kuiva-aineeksi laskettuna vastaavalla määrällä ruohomelassia, ei solujen 30 kasvunopeudessa eikä solujen loppupitoisuudessa havaittu .·' eroja. Kasvatuksen ajan pH pidettiin arvossa yli kuusi.The lactic acid bacterium Strepto- · 25 coccus thermophilus used in cheese and yoghurt patties is produced on a whey-based medium supplemented with casein hydrolyzate. The concentration of casein hydrolyzate in the medium is 0.5%. When the casein hydrolyzate was replaced by the corresponding amount of grass molasses calculated as dry matter, no differences were observed in the growth rate of the cells or in the final cell concentration. During the growth, the pH was kept above six.

Esimerkki 12 FI-patenttijulkaisun 87 881 mukaan tuotetusta ruo-homelassista ja keksinnön mukaisesta tuotteesta määritet-35 tiin aerobisten bakteeri-itiöiden ja klostridi-itiöiden 95725 15 määrät ja kokonaisbakteeripitoisuudet. Määritysten tulokset ovat taulukossa 4. Taulukosta nähdään, että käsittely parantaa tuotteen mikrobiologista laatua.Example 12 From the grass molasses produced according to FI patent publication 87 881 and the product according to the invention, the amounts and total bacterial concentrations of aerobic bacterial spores and clostridial spores 95725 15 were determined. The results of the assays are shown in Table 4. The table shows that the treatment improves the microbiological quality of the product.

5 Taulukko 4. Ruohomelassin ja keksinnön mukaisen tuotteen mikrobiologisten analyysien tulokset FI-patenttijul- Keksinnön kaisun 87 881 mukainen 10 mukainen ruoho- tuote melassi5 Table 4. Results of microbiological analyzes of grass molasses and the product according to the invention According to FI patent publication

Aerobiset bakteeri-itiöt 10 000 kpl/g <100 kpl/gAerobic bacterial spores 10,000 pcs / g <100 pcs / g

Klostridi-itiöt 30 MPN/g <3 MPN/g 15 Bakteerien pesäkemäärät 15 000 kpl/g <100 kpl/gClostridial spores 30 MPN / g <3 MPN / g 15 Bacterial colony counts 15,000 / g <100 / g

Esimerkki 13Example 13

Keksinnön mukaisen tuotteen säilyvyyden tutkimiseksi punnittiin kaksi 500 g:n erää keksinnön mukaista tuo-20 tetta. Tuotteen pH oli valmistuksen jäljiltä 7,0. Toisen erän pH laskettiin 25 paino-% suolahapolla arvoon 5,0, mutta toisen erän pH:ta ei muutettu. Kummankin erän solu-saannot Entrococcus faeciumilla määritettiin kokeen alussa ja kuuden kuukauden varastoinnin jälkeen.To investigate the shelf life of the product according to the invention, two 500 g batches of the product according to the invention were weighed. The pH of the product after preparation was 7.0. The pH of the second batch was lowered to 5.0 with 25% by weight hydrochloric acid, but the pH of the second batch was not changed. Cell yields of both batches with Entrococcus faecium were determined at the beginning of the experiment and after six months of storage.

·· 25 Entrococcus faeciumin kasvattamiseksi 143 g tutkit tavaa erää liuotettiin 900 g:aan vettä, seoksen pH säädettiin natriumhydroksidillä arvoon 7,0 ja seos lämpökäsitel-tiin 15 minuuttia 121 °C:ssa. Puhdasviljelmän siirrostuk-sen (siiroste 1 tilavuus-% kasvualustan tilavuudesta) ja 30 20 tunnin kasvun jälkeen solusaanto määritettiin erotta- • · maila solut 100 mlrsta kasvualustaa laboratoriosentrifuu-gilla, pesemällä ne ionivaihdetulla vedellä kaksi kertaa, kuivaamalla pesty solumassa 102 °C:ssa 18 tuntia ja punnitsemalla kuiva solumassa.To grow Entrococcus faecium, 143 g of the test portion was dissolved in 900 g of water, the pH of the mixture was adjusted to 7.0 with sodium hydroxide, and the mixture was heat-treated at 121 ° C for 15 minutes. After inoculation of pure culture (inoculum 1% by volume of medium volume) and growth for 20 hours, cell yield was determined by separating the cells from 100 ml of medium in a laboratory centrifuge, washing them twice with deionized water, drying the washed cell mass at 102 ° C. hours and weighing the dry cell mass.

16 9572516 95725

Taulukossa 5 on esitetty solusaannot kahdessa eri pH:ssa varastoidussa keksinnön mukaisessa tuotteessa ennen kuuden kuukauden varastointia ja sen jälkeen. Taulukosta nähdään, että pH:ssa 7 tuote on kuudessa kuukaudessa me-5 nettänyt täysin kasvualustaominaisuutensa, mutta pH:ssa 5 varastoidun tuotteen kasvualustaominaisuudet ovat vielä osittain tallella.Table 5 shows the cell yields of the two products of the invention stored at different pH before and after six months of storage. It can be seen from the table that at pH 7 the product has completely lost its medium properties in six months, but the medium properties of the product stored at pH 5 are still partially preserved.

Taulukko 5. Varastointi-pH:n vaikutus keksinnön mukaisen 10 tuotteen kasvualustaominaisuuksien säilymiseenTable 5. Effect of storage pH on the preservation of medium properties of the product of the invention

Varastointi-pH Solusaanto Solusaanto varastoinnin 6 kk:n alussa kuluttua 15 5 3,9 g/1 2,7 g/1 7 4,0 g/1 0 g/1 • · a » ·Storage pH Cell yield Cell yield at the beginning of 6 months of storage 15 5 3.9 g / l 2.7 g / 1 7 4.0 g / 10 g / l • · a »·

Claims (7)

1. Förfarande för framställning av ett tillväxt-substrat eller av en tillväxtsubstratkomponent för mjölk- 5 syrabakterier, kännetecknat därav, att a) en frän framställningen av ensilage härstammande pressvätska tillvaratages färsk och uppbevaras, eventuellt med tillhjälp av ett konserveringsmedel och ifall önskvärt omvandlas pressvätskan pä i och för sig känt sätt tili 10 gräsmelass, b) pH-värdet i en färsk, eventuellt konserverings-medel innehällande pressvätska eller i en gräsmelass, vil-ken framställts av en pressvätska och vars torrsubstans-halt utspätts till under 25 vikt-%, höjs tili ett värde 15 över 7,7, c) den i steg b) erhällna lösningen uppvärms tili en temperatur som överstiger 35 °C, d) den bildade fällningen avlägsnas ur den i steg c) erhällna lösningen, vilken har ett pH över 7,7 och en 20 temperatur över 35 °C, e) den i steg d) erhällna lösningen avkyls och dess pH sänks tili ett värde under 7,5 och f) i den i steg e) erhällna lösningen tillsätts vid behov andra tillväxtsubstrat-material, och . 25 g) ifall önskvärt indunstas den i steg e) eller f) »· » " erhällna lösningen tili en torrsubstanshalt av ätminstone 40 vikt-%.A process for preparing a growth substrate or a growth substrate component for lactic acid bacteria, characterized in that a) a fresh preparation of silage-derived press liquid is freshly collected and stored, possibly with the aid of a preservative and if desired, in the case of pressurized water. b) the pH of a fresh, possibly preservative containing pressurized liquid or in a turf, prepared from a pressurized liquid and whose dry matter content is diluted to less than 25% by weight; is raised to a value above 7.7, c) the solution obtained in step b) is heated to a temperature exceeding 35 ° C, d) the precipitate formed is removed from the solution obtained in step c), which has a pH above 7 , 7 and a temperature above 35 ° C, e) the solution obtained in step d) is cooled and its pH is lowered to a value below 7.5 and f) in the step e) the poured solution is added to other growth substrate materials as needed; and. G) if desired, the solution obtained in step e) or f) is evaporated to a dry matter content of at least 40% by weight. 2. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat därav, att i steg b) höjs lösningens pH 30 tili ett värde 8-10, vid vilket den hälls i steg d).Process according to claim 1, characterized in that in step b) the pH of the solution is raised to a value 8-10, to which it is poured in step d). ·· 3. Förfarande enligt patentkrav 1 eller 2, kän netecknat därav, att i steg e) sänks lösningens pH tili ett värde under 5.3. Process according to claim 1 or 2, characterized in that in step e) the pH of the solution is lowered to a value below 5. 4. Förfarande enligt nägot av patentkrav 1-3, 35 kännetecknat därav, att i steg c) uppvärms 95725 20 lösningen till en temperatur av 50 - 60 eC, vid vilken den hälls i steg d).4. A process according to any one of claims 1-3, characterized in that in step c) the solution is heated to a temperature of 50 - 60 eC at which it is poured in step d). 5. Förfarande enligt nägot av patentkrav 1-4, kännetecknat därav, att i steg d) avlägsnas 5 fällningen genom filtrering eller centrifugering.Process according to any of claims 1-4, characterized in that in step d) the precipitate is removed by filtration or centrifugation. 6. Tillväxtsubstrat eller en tillväxtsubstratkom-ponent för mjölksyrabakterier, kännetecknat därav, att det framställts enligt ett förfarande enligt nägot av patentkrav 1-5.6. Growth substrate or a growth substrate component for lactic acid bacteria, characterized in that it is prepared according to a process according to any of claims 1-5. 7. Användning av en enligt ett förfarande enligt nägot av patentkrav 1-5 framställd produkt som tillväxtsubstrat eller tillväxtsubstratkomponent för mjölksyrabak-terier. • · I · 1 ·Use of a product prepared according to any one of claims 1-5 as a growth substrate or growth substrate component for lactic acid bacteria. • I · 1
FI942893A 1994-06-16 1994-06-16 Method for preparing a culture medium or a medium component of lactic acid bacteria, the product thus obtained and its use FI95725C (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI942893A FI95725C (en) 1994-06-16 1994-06-16 Method for preparing a culture medium or a medium component of lactic acid bacteria, the product thus obtained and its use

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI942893 1994-06-16
FI942893A FI95725C (en) 1994-06-16 1994-06-16 Method for preparing a culture medium or a medium component of lactic acid bacteria, the product thus obtained and its use

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI942893A0 FI942893A0 (en) 1994-06-16
FI95725B true FI95725B (en) 1995-11-30
FI95725C FI95725C (en) 1996-03-11

Family

ID=8540942

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI942893A FI95725C (en) 1994-06-16 1994-06-16 Method for preparing a culture medium or a medium component of lactic acid bacteria, the product thus obtained and its use

Country Status (1)

Country Link
FI (1) FI95725C (en)

Also Published As

Publication number Publication date
FI95725C (en) 1996-03-11
FI942893A0 (en) 1994-06-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU775082B2 (en) Fermented milk drinks and foods and process for producing the same
Stamer et al. Growth rates and fermentation patterns of lactic acid bacteria associated with the sauerkraut fermentation
JP5933650B2 (en) Method for producing fermented food and drink
CN107022355A (en) A kind of biologic ferment soil conditioner and preparation method thereof
CH649196A5 (en) PROCESS FOR THE MANUFACTURE OF YOGURT.
CN110387340B (en) Lactobacillus plantarum L16 and application thereof in preventing and treating vegetable diseases
EP1820406B1 (en) Fermented drink, fermented food, and method for producing thereof
KR101730191B1 (en) Method for culturing lactic acid bacterium, and food or beverage
CN101606552B (en) Bifidobacterium deep freezing direct vat starter culture and composite cryoprotectant thereof
Thomsen et al. Manufacturing of stabilised Brown juice for L-lysine production from university lab scale over pilot scale to industrial production
CN109504614A (en) A kind of preparation method of native country saccharomyces cerevisiae dry powder
CN105104610A (en) Preparation method and application of tea fermentation bacterium yeast
FI95725B (en) Process for preparing a growth substrate or growth substrate component for lactic acid bacteria, a product which is obtained in this way, and its use
CN115558620B (en) Lactic acid bacteria freeze-drying protective agent and preparation method and application thereof
CN108391726A (en) A method of making natural yogurt
CN114886015A (en) Method for regulating ecology of sweet sorghum silage flora in saline-alkali soil by using pyrosulfite
KR102161110B1 (en) Compost tea using functional compost, method of manufacturing the same and use of the same
KR101169358B1 (en) The method of preparing of high quality oyster mushroom cultured by culture medium using deep sea water
CN112725183A (en) Method for improving freeze drying survival rate of probiotics
US4919942A (en) Method of manufacturing cheese
US4851347A (en) Bulk starter medium
RU2154386C1 (en) Method of whey processing
EP3450418A1 (en) Method for obtaining a plant-growth-promoting composition comprisingpseudomonas putida
RU2061004C1 (en) Method for production of concentrate of food dye from beet
CN115316474B (en) Preparation method of milk-containing cold-extraction coffee

Legal Events

Date Code Title Description
BB Publication of examined application