FI92500C - Menetelmä mekaanisen massan valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä mekaanisen massan valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI92500C FI92500C FI930953A FI930953A FI92500C FI 92500 C FI92500 C FI 92500C FI 930953 A FI930953 A FI 930953A FI 930953 A FI930953 A FI 930953A FI 92500 C FI92500 C FI 92500C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- enzyme
- cellobiohydrolase
- pulp
- enzyme preparation
- activity
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 39
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 14
- 229920001131 Pulp (paper) Polymers 0.000 title claims description 20
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 89
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 89
- 108010008885 Cellulose 1,4-beta-Cellobiosidase Proteins 0.000 claims abstract description 45
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 34
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims abstract description 4
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims abstract description 4
- 241000223198 Humicola Species 0.000 claims abstract description 4
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 claims abstract description 4
- 241000222385 Phanerochaete Species 0.000 claims abstract description 4
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 claims abstract description 4
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 claims abstract description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 89
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 35
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 35
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 25
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 19
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 14
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 13
- 239000002023 wood Substances 0.000 claims description 13
- 241000499912 Trichoderma reesei Species 0.000 claims description 12
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 11
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 7
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 claims description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 3
- 102100031260 Acyl-coenzyme A thioesterase THEM4 Human genes 0.000 claims description 2
- 101000638510 Homo sapiens Acyl-coenzyme A thioesterase THEM4 Proteins 0.000 claims description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 2
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 claims description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 claims description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 18
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 18
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 description 12
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 description 12
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 12
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 9
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 7
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 5
- 241000218657 Picea Species 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 108010002430 hemicellulase Proteins 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 4
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 4
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 description 3
- 229920002488 Hemicellulose Polymers 0.000 description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 3
- 239000002657 fibrous material Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 3
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000004537 pulping Methods 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 102100032487 Beta-mannosidase Human genes 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 2
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 2
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 2
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 description 2
- 108010055059 beta-Mannosidase Proteins 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000003801 milling Methods 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,4r,5r,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,4r,5r,6s)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1[C@@H](CO)O[C@@H](OC2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N 0.000 description 1
- DBGSRZSKGVSXRK-UHFFFAOYSA-N 1-[2-[5-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-1,3,4-oxadiazol-2-yl]acetyl]-3,6-dihydro-2H-pyridine-4-carboxylic acid Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1=NN=C(O1)CC(=O)N1CCC(=CC1)C(=O)O DBGSRZSKGVSXRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 241000193752 Bacillus circulans Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 1
- 108700038091 Beta-glucanases Proteins 0.000 description 1
- 235000003932 Betula Nutrition 0.000 description 1
- 241000219429 Betula Species 0.000 description 1
- 229920003043 Cellulose fiber Polymers 0.000 description 1
- 241000146399 Ceriporiopsis Species 0.000 description 1
- 241000123346 Chrysosporium Species 0.000 description 1
- 241000218631 Coniferophyta Species 0.000 description 1
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 101710178123 Endoglucanase 5 Proteins 0.000 description 1
- 102000004366 Glucosidases Human genes 0.000 description 1
- 108010056771 Glucosidases Proteins 0.000 description 1
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 1
- 108010077223 Homer Scaffolding Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010029 Homer Scaffolding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241001480714 Humicola insolens Species 0.000 description 1
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 description 1
- 241001507673 Penicillium digitatum Species 0.000 description 1
- 241000228129 Penicillium janthinellum Species 0.000 description 1
- 241000222395 Phlebia Species 0.000 description 1
- 241000218641 Pinaceae Species 0.000 description 1
- 235000005205 Pinus Nutrition 0.000 description 1
- 241000218602 Pinus <genus> Species 0.000 description 1
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 1
- 241000219000 Populus Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 241000218998 Salicaceae Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 241000958211 Streptomyces flavogriseus Species 0.000 description 1
- 241000187134 Streptomyces olivochromogenes Species 0.000 description 1
- 241000222354 Trametes Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 1
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940059442 hemicellulase Drugs 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000004922 lacquer Substances 0.000 description 1
- 239000012978 lignocellulosic material Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- D—TEXTILES; PAPER
- D21—PAPER-MAKING; PRODUCTION OF CELLULOSE
- D21C—PRODUCTION OF CELLULOSE BY REMOVING NON-CELLULOSE SUBSTANCES FROM CELLULOSE-CONTAINING MATERIALS; REGENERATION OF PULPING LIQUORS; APPARATUS THEREFOR
- D21C5/00—Other processes for obtaining cellulose, e.g. cooking cotton linters ; Processes characterised by the choice of cellulose-containing starting materials
- D21C5/005—Treatment of cellulose-containing material with microorganisms or enzymes
-
- D—TEXTILES; PAPER
- D21—PAPER-MAKING; PRODUCTION OF CELLULOSE
- D21B—FIBROUS RAW MATERIALS OR THEIR MECHANICAL TREATMENT
- D21B1/00—Fibrous raw materials or their mechanical treatment
- D21B1/02—Pretreatment of the raw materials by chemical or physical means
- D21B1/021—Pretreatment of the raw materials by chemical or physical means by chemical means
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Mechanical Engineering (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Paper (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Inorganic Fibers (AREA)
- Porous Artificial Stone Or Porous Ceramic Products (AREA)
- Yarns And Mechanical Finishing Of Yarns Or Ropes (AREA)
- Coloring (AREA)
Description
925ηπ
Menetelma mekaa nisen massan valmistamiseksi s c. \J\J\J
Esillå olevan keksinnon kohteena on patenttivaatimuksen 1 johdannon mukainen menetelma mekaanisen massan valmistamiseksi.
5 Tållaisen menetelmån mukaan puuraaka-aine hajotetaan hakkeeksi, joka kuidutetaan haluttuun suotautuvuuteen, jolloin kuidutettavalle ainekselle suoritetaan valmistusprosessin aikana entsyymikåsittely.
10 Keksinto koskee myos patenttivaatimuksen 15 johdannon mukaista entsyymivalmistetta, joka sopii mekaanisen massan kasittelyyn.
Kemiallisilla ja mekaanisilla massoilla on erilaiset kemialliset ja kuitutekniset ominaisuudet ja siten niiden kayttokohteet paperinvalmistuksessa voidaan valita nåiden ominaisuuksien perus-15 teella. Monet paperilaadut sisaltavåt kumpaakin massatyyppiå vaihtelevissa suhteissa haluttu- jen lopputuoteominaisuuksien mukaan. Mekaanista massaa kaytetaan tarvittaessa paranta-maan/lisaamåan tuotteen jåykkyytta, tilavuusmassaa (bulkkia) tai optisia ominaisuuksia.
Paperin valmistamista vårten on puumateriaalin kuidut ensin erotettava toisistaan. Mekaani-20 sen massanvalmistuksessa kaytetaan påaasiassa hionta- tai hierremenetelmiå, joissa puuraaka- aine altistetaan jaksoittaisten painepulssien alaiseksi. Kitkalåmmon vaikutuksesta puurakenne pehmenee ja sen rakenne hollentyy, mikå lopulta johtaa kuitujen eroamiseen toisistaan [1]. Kuitenkin vain pieni osa systeemiin tuodusta energiasta kuluu kuitujen irrottamiseen toisistaan; valtaosa muuttuu låmmoksi. Tåsta syysta kuidutuksen kokonaisenergiatalous on hyvin 25 huono.
Tunnetussa tekniikassa on ehdotettu erilaisia ratkaisuja mekaanisen massanvalmistuksen energiatalouden parantamiseksi. Eråat nåista perustuvat hakkeen esikasittelyyn esim. vedellå tai hapolla (Fl-patenttijulkaisut 74493 ja 87371). Tunnetaan myos menetelmiå, joissa kuidu-3C tettavaa ainesta kasitellåan entsyymeillå kuidutusenergian våhentamiseksi. Niinpå FI-patentti- hakemuksessa 895676 on kuvattu koe, jossa kertaalleen jauhettua massaa kasiteltiin ksy-lanaasientsyymillå. Tåmån entsyymikasittelyn on esitetty jossain måarin våhentavån kuidu- : tuksen energiankulutusta. Julkaisussa mainitaan myos mahdollisuus kayttaa sellulaaseja, 2 92500 mutta niistå ei ole annettu esimerkkejå eika niiden vaikutusta ole osoitettu. Eristettyien entsyymien osalta kiinnostus on hemisellulaasien lisaksi kohdistunut ligniiniin vaikuttaviin entsyymeihin, mm. lakkaasi-entsyymiin [5]. Lakkaasi-kåsittelyllå ei kuitenkaan ole todettu vaikutusta energiankulutukseen [5], 5
Edellisten eristettyjen entsyymien lisaksi on myos tutkittu kasvavien valkolahottajasienten hyvåksikåyttoå mekaanisen massan valmistuksessa. Tållaisen ennen kuidutusta suoritetun valkolahottajasieni-kåsittelyn on todettu laskevan ominaisenergiankulutusta ja parantavan massojen lujuusominaisuuksia [6, 7, 8,]. Haittapuolina nåisså valkolahottaja-kåsittelvisså on 10 niiden vaatima pitkå kåsittelyaika (useimmiten viikkoja), alentunut saanto (85 - 95 %), prosessin vaikea såadettavyys ja huonontuneet optiset ominaisuudet.
Esillå olevan keksinnon tarkoituksena on poistaa tunnetun tekniikan epåkohdat ja saada aikaan aivan uudenlainen menetelmå mekaanisen massan valmistamiseksi.
15
Enneståån on tiedetty, ettå puuhun sitoutuneen veden måårållå ja låmpotilalla on suuri merki-tys kuidutuksen energiankulutuksen ja massan laadun kannalta [1]. Puumateriaaliin sitoutunut vesi alentaa nået kuitujen vålisen hemiselluloosan ja ligniinin pehmenemislåmpotilaa ja hei-kentåa samalla kuitujenvålisten sidosten lujuutta, mikå helpottaa kuitujen irtautumista toistaan 20 [2]. Kuidutuksessa energiaa sitoutuu låhinnå vain kuituaineksen amorfiseen osaan, eli hemi- selluloosaan ja ligniiniin. Tåstå syystå raaka-aineen amorfisuuden lisåys parantaa kuidutuksen energiataloutta.
Keksinto perustuu siihen ajatukseen, etta raaka-aineen amorfisuutta korotetaan mekaanisen 25 massan valmistuksen yhteydesså kåsittelemållå kuidutettavaa materiaalia sopivalla entsyymil- lå, joka reagoi raaka-aineen kiteisen, liukenemattoman selluloosan kanssa.
Selluloosan modifiointiin ja hajotukseen osallistuvista entsyymeistå kaytetaån yhteisnimitysta "sellulaasit". Nåita entsyymejå ovat endo-/3-glukanaasit, sellobiohydrolaasit ja /3-glukosidaasi. 30 Yksinkertaisuuden vuoksi kaytetaån nåiden entsyymien seoksista jopa yksikon muotoa "sellu- laasi". Hyvin monet organismit, kuten erilaiset lahottajasienet, homeet ja anaerobit bakteerit tuottavat joitakin mainituista entsyymeista tai niitå kaikkia. Organismin ja kasvatus-olosuhtei- 3 92500 den mukaan kyseisiå entsyymejå erittyy solun ulkopuolelle vaihtelevissa suhteissa ja mååris-så.
On yleisesti tunnettua, ettå sellulaaseilla, etenkin sellobiohydrolaasilla ja endoglukanaasilla 5 on keskenåån voimakas synergistinen vaikutus; ts. nåiden entsyymien yhteisvaikutus on tehokkaampi kuin yksinåån kåytettyjen entsyymien yhteenlaskettu vaikutus. Tållainen entsyy- · mien yhteistoiminta, synergia, on kuitenkin useimmiten epåtoivottavaa teollisissa sellu-loosakuitujen entsymaattisissa sovelluksessa. Niinpå sellulaasi-entsyymit pyritåån yleenså kokonaan sulkemaan pois kåsittelyistå tai niiden mååråå pyritaån våhentåmåån. Eråisså 10 sovelluksissa kåytetåan hyvin alhaisia sellulaasimååriå esim. hienoaineksen poistoon. mutta tålloin hydrolyysiasteeltaan rajoitetussa kåsittelysså hydrolysoidaan liukoisimmat yhdisteet sokereiksi entsyymien yhteisvaikutuksen ansiosta [3, 4].
Kokeissamme olemme pystyneet toteamaan, etta synergisesti toimivaa sellulaasi-entsyymi-15 tuotetta, eli "sellulaasia", ei voida kåyttåå mekaanisen massan valmistuksen ediståmiseksi koska tållainen entsyymituote johtaa liukenemattoman selluloosan hydrolysoitumiseen ja si ten massan lujuusominaisuuksien heikkenemiseen. Tåsså keksinnosså on sensijaan yllåttåen havaittu, ettå kåytettaesså sellaista sellulaasientsyymivalmistetta, jolla ei ole synergististå vaikutustapaa, voidaan selluloosaa modifioida toivotulla tavalla ja aikaansaada halu tt uja 20 muutoksia ilman merkittåvåå hydrolyysiå ja saantotappioita. Keksinnon mukaan kåytetaån tålloin sellulaasientsyymivalmistetta, jolla on oleellinen sellobiohydrolaasi aktiivisuus ja — suhteessa sellobiohydrolaasiaktiivisuuteen — korkeintaan pieni endo-j3-glukanaasi- aktiivisuus.
25 Tåsmållisemmin sanottuna keksinnon mukaiselle menetelmålle on pååasiallisesti tunnusomais- ta se, mika on esitetty patenttivaatimuksen 1 tunnusmerkkiosassa.
Keksinnon mukaiselle entsyymivalmisteelle on puolestaan tunnusomaista se, mikå on esitetty patenttivaatimuksen 15 tunnusmerkkiosassa.
30
Sellulaasi-entsyymit koostuvat toiminnallisesti kahdesta eri osasta: ytimestå (engl. core) ja hantaosasta (engl tail), seka niitå yhdistavåsta våliosasta (engl. linker). Entsyy min aktii vinen 4 92500 keskus sijaitsee ydin-osassa. Håntåosan funktiona oletetaan låhinnå olevan entsyymin kiinnit-taminen liukenemattomaan substraattiin; jos håntåosa poistetaan, entsyymin aktiivisuus suurimolekyylisiin ja kiteisiin substraatteihin alenee oleellisesti.
5 Keksinnon mukaan kåsitellåån kuidutettavaa materiaalia selluloosan kiteisyytta spesifisesti alentavalla entsyymilla, joka on sellobiohydrolaasi tai tåmån rakenneosa ja joka sellulaasi-entsyymivalmisteena toimii ei-synergisesti, kuten yllå todettiin. Rakenneosalla tarkoitetaan tåsså yhteydessa ydinta (engl. core) tai håntåå (engl. tail). Voidaan myos kåyttåå viimeksi mainittujen seoksia, jotka saadaan esim. digestoimalla natiivientsyymiå.
10
Aikaisemmin ei ole esitetty menetelmiå, joissa kåytetåån ainoastaan yhtå tai useampaa bioke-miallisesti tunnettua entsyymiå pååaktiivisuutena halutun muutoksen aikaansaamiseen. Kiijal-lisuudesta tunnetaan sensijaan menetelmiå ja prosesseja, joissa hyvåksi kaytetaan sellulaasien hydrolyyttisiå ominaisuuksia sokerien tuottamiseksi erilaisista selluloosapitoisista materiaa-15 leista. Nåisså sovelluksissa pyritaan kuitenkin — påinvastoin kuin esillå olevassa keksinnossa — nimenomaan entsyymien mahdollisimman tehokkaaseen, synergistiseen vaikutukseen.
Tåssa hakemuksessa kaytetyllå termilla "entsyymivalmiste" tarkoitetaan rnita tahansa sellaista tuotetta, joka sisåltaa ainakin yhden entsyymin tai entsyymin rakenneosan. Niinpå entsyymi-20 valmiste voi olla esim. entsyymiå tai entsyymejå sisåltåvå kasvatusliuos, eristetty entsyymi tai kahden tai useamman entsyymin seos. "Sellulaasi" tai "sellulaasientsyymivalmiste" tar-koittaa puolestaan entsyymivalmistetta, joka sisåltåå ainakin yhden edellå mainituista sellu-laasientsyymeistå.
25 "Sellobiohydrolaasi-aktiivisuudella" tarkoitetaan tåmån hakemuksen puitteissa entsymivalmis- tetta, joka kykenee modifioimaan selluloosan kiteisiå osia. Niinpå kåsitteeseen "sellobio-hydrolaasi-aktiivisuus" sisåltyvåt etenkin ne entsyymit, jotka liukenemattomalla selluloosa-alustalla tuottavat sellobioosia. Kåsite kattaa kuitenkin myos sellaiset entsyymit, joilla ei ole selvåsti hydrolysoivaa vaikutusta tai joilla on vain osittain tållainen vaikutus, mutta siitå 30 huolimatta muuttavat selluloosan kiteistå rakennetta niin, ettå lignoselluloosamateriaalissa selluloosan kiteisten ja amorfisten osien vålinen suhde pienenee, toisin sanoen amorfisen materiaalin osuus kasvaa. Nåitå viimeksi mainittuja entsyymejå ovat esim. sellobiohydrolaa- I! 5 92500 sin rakenneosat yhdesså ja erikseen.
Keksinnon mukaan entsyymikasittely suoritetaan edullisesti mekaanisen massanvalmistuksen "karkealle massalle". Tållå termillå tarkoitetaan tåmån hakemuksen puitteissa lignosellu-5 loosapohjaista materiaalia, josta mekaaninen massa on tarkoitus valmistaa ja jolle valmistus- prosessin aikana on jo suoritettu jonkinasteinen kuidutus esim. jauhamalla tai hiomalla. Tyypillisesti kåsiteltåvån aineen suotautuvuus (freenessluku) on noin 30 - 1000 ml, edullisesti noin 300 - 700 ml. Suoraan hakkeelle tehtynå entsyymikåsittely ei tavallisesti ole yhtå teho-kas, koska entsyymivalmistetta on vaikea saada imeytymåån tehokkaasti hakkeen muodossa 10 olevan raaka-aineen kuituihin. Sensijaan esim. kertaalleen jauhettu massa sopii hyvin kåytet- tåvåksi keksinnon mukaisessa kåsittelysså. Termi karkea massa kattaa siten mm. kertaalleen jauhetun tai hiotun massan, kuiturejektin ja pitkåkuitufraktion sekå nåiden yhdistelmåt, jotka on tuotettu hiertåmållå (esim. TMP) tai hiomalla (esim. GW ja PGW). Keksinnon kannalta on oleellista, ettå entsyymikasittely suoritetaan ainakin ennen viimeistå mekaanista kuidutus-15 vaihetta, jossa materiaali kuidutetaan haluttuun suotautuvuuteen, joka tyypillisesti on korkein- taan 300 ml CSF, edullisesti korkeintaan 100 ml CSF.
Menetelmå ei ole rajoittunut tiettyyn puuraaka-aineeseen, vaan sitå voidaan soveltaa yleisesti sekå havu- ettå lehtipuille, kuten esimerkiksi Pinaceae -lahkon kasveille (esim Picea- ja 20 Pinus- heimot), Salicaceae -lahkon kasveille (esim. Populus -heimo) ja Betula -heimon kasveille.
Keksinnon mukaan voidaan mekaanisen massan valmistuksessa sellobiohydrolaasientsyymin asemasta kayttåå sen osiakin, etenkin sen ydinta. On nået yllåttåen todettu, ettå entsyymin 25 osilla, etenkin sen ytimellå on samankaltainen, tosin heikompi, hydrolyyttinen vaikus kuin kokonaisella entsyymillå keksinnon mukaisessa menetelmåsså. Sellobiohydrolaasientsyymin hånnån on myos todettu vaikuttavan selluloosaa modifioivasti ja soveltuu siten myos kåytettå-våksi esillå olevassa keksinnosså.
30 Keksinnon eråån edullisen sovellutusmuodon mukaan kåsitellåån kertaalleen jauhettuja me- kaanisia massoja, joiden suotautuvuus on noin 300 - 1000 ml CSF, sellobiohydrolaasi-ent-. syymivalmisteella 30 - 90 °C:ssa, sopivimmin noin 40 - 60 °C:ssa, massan sakeuden ollessa 6 92500 noin 0,1 - 20 %, sopivimmin noin 1 - 10 %. Kåsittelyaika on 1 min - 20 h, sopivimmin noin 10 min - 10 h, erityisen edullisesti noin 30 min - 5 h. Kåsittelyn pH-arvo pidetaan neutraali-na tai lievåsti happamana tai alkalisena. tyypillisesti toimitaan pH-alueella 3-10, edullisesti noin 4-8. Entsyymivalmisteen annostus vaihtelee kasiteltåvån massan ja kåytettåvån valmis-5 teen sellobiohydrolaasi-aktiivisuuden mukaan, mutta on tyypillisesti noin 10 μ% - 100 mg proteiinia per grammaa kuivaa massaa. Edullisesti annostellaan noin 100 - 10 mg proteii-· nia/g kuivaa massaa.
Keksinnon mukaiseen menetelmåan voidaan haluttaessa yhdistaa muilla entsyymeillå, kuten 10 hemisellulaaseilla (esim. ksylanaasit, glukuronidaasit ja mannanaasit) tai esteraaseilla suori- tettuja kasittelyita. Edellå mainittujen lisaksi esillå olevassa menetelmassa voidaan lisaentsyy-minå kayttaa /3-glukosidaasiaktiivisuuden omaavaa valmistetta, koska tallainen glu-kosidaasiaktiivisuus estaa sellobioosin aiheuttaman lopputuoteinhibition.
15 Sellobiohydrolaasientsyymivalmisteet valmistetaan kasvattamalla sopivia mikro-organismikan- toja, joiden tiedetaan tuottavan sellulaasia. Kasvatusalustana kaytetaan esimerkiksi yksinker-taista selluloosa-alustaa (1 % Solka floe), johon on lisatty tarvittavat hivenaineet [18]. Tuot-tokantoina voidaan kayttaa bakteereja, homeita ja sieniå. Esimerkkeina mainittakoon seuraa-viin sukuihin kuuluvat mikro-organismit: 20
Trichoderma (esim. T. reesei), Aspergillus (esim. A. niger ), Phanerochaete (esim. P.
. chrysosporium\ [12]), Penicillium (esim. P. janthinellum, P. digitatum), Streptomyces (esim.
S. olivochromogenes, S. flavogriseus), Humicola (esim. H. insolens) ja Bacillus (esim. B. subtilis, B. circulans, [13]). Voidaan kayttaa myos muitakin valkolahottajiin kuuluvia sieniå, 25 esim. Phlebia-, Ceriporiopsis-, Trametes- sukuihin kuuluvia lajeja.
Sellobiohydrolaaseja tai niiden rakenneosia on myos mahdollista tuottaa kannoilla, jotka on geneettisesti parannettu tuottamaan juuri nåita proteiineja tai muilla geneettisesti parannetuilla tuottoisannillå, joihin nåita proteiineja koodaavat geenit on siirretty. Kun halutun proteiinin 30 geenit on kloonattu [14], on proteiinia tai sen osaa mahdollista tuottaa halutussa isånnåsså.
Haluttuna isåntånå voi olla T. reesei -home [16], hiiva [15], jokin toinen home, esim. Asper-. gillus -suvusta [19], bakteeri tai mikå tahansa muu genetiikaltaan riittavåsti tunnettu mikro- 7 92500 organismi.
Keksinnon edullisen sovellutusmuodon mukaan haluttu sellobiohydrolaasi tuotetaan homekan-nan Trichoderma reesei avulla. Sanottu kanta on yleisesti kaytetty tuotto-organismi ja sen 5 sellulaasit tunnetaan kohtuullisen hyvin. T. reesei syntetisoi kahta sellobiohydrolaasia, joista seuraavassa kåytetåån lyhenteita CBH I ja CBH II, useita endoglukanaaseja ja ainakin kahta · j3-glukosidaasia [17]. Entsyymien biokemiallisia ominaisuuksia on runsaasti kuvattu erilaisil-la, puhtailla selluloosasubstraateilia. Endoglukanaasit ovat tyypillisesti aktiivisia liukoisilla ja amorfisilla substraateilla (CMC, HEC, jS-glukaani), sen sijaan sellobiohydrolaasit pvstyvåt 10 hydrolysoimaan kiteistå selluloosaa. Sellobiohydrolaasit toimivat keskenåån selkeån synergis- tisesti kiteisellå selluloosalla, mutta niiden hydrolyysimekanismi on oletettavasti erilainen. Nykyiset kåsitykset sellulaasien toimintamekanismeista perustuvat puhtailla selluloosapre-paraateilla saatuihin tutkimustuloksiin, eivåtkå ne ole yleispåteviå tapauksissa, joissa subst-raatti sisåltåå myos muita komponentteja, kuten esim. ligniiniå tai hemiselluloosaa.
15 T. reesein sellulaasit (sellobiohydrolaasit ja endoglukanaasit) eivåt juurikaan eroa toisistaan optimaalisten toimintaolosuhteiden, esim pH ja låmpotilan, suhteen. Sen sijaan ne eroavat toisistaan puuraaka-aineen selluloosaa hydrolysoivan ja modifioivan kykynsa perusteella.
20 Myos sellobiohydrolaasit I ja II eroavat toisistaan jossain måårin aktiivisuuksien osalta, jota ominaisuutta voidaan hyddyntåå tåssa sovelluksessa. Niinpå Trichoderma reesein tuottamaa sellobiohydrolaasi I:tå (CBH I) kåytetaan keksinnon mukaan erityisen edullisesti mekaanisen massan valmistuksen ominaisenergiankulutuksen våhentåmiseksi. Tåmån entsyymin pi on kiijallisuudessa esitettyjen tietojen mukaan 3,2 - 4,2 riippuen isoentsyymimuodosta [20] tai 25 mååritettynå esimerkissa 2 kuvatulla tavalla 4,0 - 4,4 ja molekyylipaino SDS-PAGE:lla måaritettynå on noin 64 000. Tålloin on kuitenkin huomattava, etta SDS-PAGE-menetelmållå mååritettyyn molekyylipainoon liittyy aina n. 10 %:n epåvarmuus. Sellobiohydrolaaseja ' yksinåan tai yhdistettyinå esim. hemisellulaaseihin voidaan erityisen edullisesti kåyttaa mekaanisen massan ominaisuuksien modifiointiin, esim. sen paperiteknisten ominaisuuksien 30 parantamiseen. Kuidutettavan massan kasittelyyn voidaan tietenkin myos kåyttaa sellobiohyd- rolaasien seoksia, kuten esimerkistå 6 kåy ilmi.
8 92500
Sellobiohydroiaasi voidaan erottaa Trichoderma reesei -homeen kasvatusliuoksista useilla tunnetuilla tavoilla. Nåisså erotusmenetelmisså tyypillisesti yhdistetåån useita erilaisia puhdis-tustekniikoita. kuten saostuksia, ioninvaihtokromatografisia ja affineettikromatografisia sekå geelikromatografisia menetelmiå. Affiniteettikromatografiaa kåyttåen sellobiohydroiaasi 5 voidaan erottaa nopeasti jopa suoraan kasvatusliuoksesta [9]. Kyseistå affiniteettikromato grafiaa vårten tarvittavan geelimateriaalin valmistus on kuitenkin vaikeaa eikå kyseista materiaalia ole kaupallisesti saatavilla. Esillå olevan keksinnon edullisessa sovellutusmuodos-sa sellobiohydroiaasi I -entsyymi erotettiin muista kasvatusliuoksen proteiineista nopealla anioniseen ioninvaihtoon perustuvalla puhdistusmenetelmållå. Menetelmåå on kuvattu låhem-10 min alla esimerkisså 1. Keksinnosså ei kuitenkaan rajoituta tåhån proteiinien erotusmenetel- måån, vaan haluttu proteiini on mahdollista eriståå tai rikastaa myos muilla tunnetuilla menetelmillå.
Keksinnon avulla saavutetaan huomattavia etuja. Niinpå sen avulla voidaan merkittåvåsti 15 våhentåå jauhatuksen ominaisenergiankulutusta; kuten alla esitettåvåt esimerkit osoittavat pååståån keksinnon mukaan jopa 20 % alempaan energiankulutukseen kuin kåsittelemåttomil-lå låhtoaineilla. Sopivalla sellobiohydrolaasilla voidaan myos massan ominaisuuksia parantaa. Keksinnon mukaisella ratkaisulla, jossa kåytettyjen entsyymivalmisteiden synergistinen vaikutus puuttuu tai on vain våhåinen, voidaan samalla vålttaa tunnetun sienikasittelyn yllå 20 esitetyt ongelmat. Niinpå kasittelyaika on pelkåståån muutamia tunteja, saanto erittåin korkea, massan laatu hyvå ja menetelmån liittåminen nykyisiin prosesseihin on yksinkertaista.
Keksintoå voidaan soveltaa kaikissa mekaanisissa ja puolimekaanisissa massan val mis tus-menetelmissa, kuten hiokkeen (GW, PGW), kuumahierteen (TMP) ja kemimekaanisen 25 massan (CTMP) valmistuksessa.
Keksintoå ryhdytåån seuraavassa låhemmin tarkastelemaan muutaman ei-rajoittavan so veil u-tusesimerkin avulla.
30 «
II
9 92500
Esimerkki 1
Sellobiohydrolaasi I -entyymin puhdistus
Trichoderma reesei-hometta. (kanta VTT-D-86271, Rut C-30) kasvatettiin tilavuudeltaan 2 5 m3:n fermentorissa alustalla, joka sisålsi 3 paino-% solka-floc-selluloosaa, 3 % maissinliotus- vetta, 1,5 % KH2P04 ja 0,5 % (NH4)2S04. Kasvatuslåmpotila oli 29 °C ja kasvatuksen pH · pidettiin vålillå 3,3 - 5,3. Kasvatusta jatkettiin 5 vrk, jonka jålkeen homerihmasto erotettiin rumpusuodattimella ja kasvuliuos kasiteltiin bentoniitilla, kuten Zurbriggen et al. [10] ovat kuvanneet. Tåmån jålkeen liuos konsentroitiin ultrasuodattamalla.
10
Entsyymin eristaminen aloitettiin puskuroimalla konsentraatti geelisuodattamalla pH-arvoon 7,2 (Sephadex G-25 coarse). Entsyymiliuos pumpattiin tassa pH-arvossa (pH 7,2) anionit vaihtavaan kromatografiapylvååseen (DEAE-Sepharose FF), johon suurin osa nåytteen proteiineista, mukaanlukien CBH I, tarttui. Suurin osa pylvååseen sitoutuneista proteiineista 15 ja mm. muut sellulaasit kuin CBH I eluoitiin puskurilla pH 7,2, johon lisattiin natriumklori- dia siten, etta sen konsentraatio eluointipuskurissa nousi asteittain arvoon 0,12 mol Γ1. Pylvåstå pestiin puskurilla pH 7,2, joka sisålsi 0,12 M NaCl kunnes siita ei enåå irronnut merkittavåsti proteiinia. CBH I eluoitiin kohottamalla NaCl:n konsentraatio arvoon 0,15 mol 11. Puhdistettu CBH I keråttiin tallå puskurilla eluioituneisiin jakeisiin.
20
Esimerkki 2
Sellobiohydrolaasi I -entsyymin karakterisointi
Esimerkin 1 mukaisesti puhdistetun entsyymipreparaatin proteiiniominaisuudet maaritettiin 25 tavanomaisilla proteiinikemian menetelmilla. Isoelektrinen fokusointi ajettiin Pharmacian
Multiphor II System -laitteistolla valmistajan ohjeiden mukaan kåyttaen 5 % pol yakry yliami-dia sisåltåvåå geeliå. pH-gradientti tehtiin kåyttåen kantaja-amfolyyttiå Ampholine, pH 3,5 -10 (Pharmacia), jolloin isoelektrisessa fokusoinnissa muodostui pH:n suhteen gradientti vålille pH 3,5 - pH 10. Perinteinen geelielektroforeesi denaturoivissa olosuhteissa (SDS-30 PAGE) ajettiin kuten Laemmli (11) on kuvannut kåyttåen 10 % polyakryyliamidia sisåltåå geeliå. Molemmista geeleistå proteiinit våijåttiin hopeavåijåyksellå (Bio Rad, Silver Stain Kit).
« _____ -- ---— Τ'- 92500 10 CBH Ι:η molekyylipainoksi saatiin 64000 ja isoelektriseksi pisteeksi 4,0 - 4,4. Geelien perusteella voitiin arvioida, etta yli 90 % preparaatin proteiinista oli sellobiohydrolaasi I:ta.
5 Esimerkki 3
Entsyymikasittely
Esimerkkien 1 ja 2 mukaisesti puhdistettujen ja karakterisoitujen entsyymien kyky hydro-lysoida karkeaa puuainesta (kuusi) selvitettiin ja verrattiin muihin sellulaaseihin. Entsyymian-10 nos oli 0,5 mg/g massaa ja hydrolyysiolosuhteet: pH 5 - 5,5, låmpdtila 45 °C, 24 h. Tulok- set on kuvattu taulukossa 1. On merkillepantavaa, etta sellobiohydrolaasit eivåt yksinåan aiheuttaneet sokereiden muodostumista eika siten massatappioita.
Taulukko 1. Puuaineksen (kuusi) hydrolyysikoe eri sellulaaseilla 15 ' ' """ - -— — "i · 1 1-----
Entsyymi DNS, g/1 Hydrolyysiaste, % CBH I 0,003 0,01 CBH II 0,05 0,1 EG I 0,06 0,12 EG II 0,04 0,08 20: *
Esimerkki 4
Entsyymikasittelyn vaikutus puun turpoamiseen 25
Fraktioidun TMP-kuusimassan pitkakuitujaetta (+48) kasiteltiin eri sellulaaseilla 5 %:n sakeudessa ja 45 °C:ssa 24 h. Massa lietettin vesijohtoveteen ja pH saadettiin vålille 5 - 5,5 laimealla rikkihapolla. Entsyymiannostus oli 0,5 mg/g kuivaa massaa. Kåsittelyn jålkeen massa pestiin vedellå ja kuitujen turpoamista kuvaava WRV-arvo (SCAN ehd. ) måaritettiin. 30: * Tulokset on esitettty taulukossa 2.
11 92500
Taulukko 2. TMP -kuusimassan turpoaminen entsyymien vaikutuksesta.
Entsyymi WRV, % CBH I 108 5 Kontrolli 102
Tulosten mukaan CBH I modifioi massaa lisaten sen kykyå pidåttaa vetta (turpoamista), mika parantaa jauhautuvuutta.
10 Esimerkki 5
Entsyymikåsittelyn vaikutus kuidun taipuisuuteen TMP-kuusimassan pitkakuitufraktiota (mesh +48) kasiteltiin CBH I- entsyymillå 5 %:n sakeudessa 2 tuntia 45 °C:ssa. Entsyymiannnostus oli 1 mg CBH I/g. Kåsittelyn jålkeen 15 mitattiin kuitujen jåykkyys hydrodynaamisella mentelmållå. Kustakin nåytteestå mitattiin 100 - 200 kuitua. Tulokset on esitetty taulukossa 3. Tulosten mukaan kuitujen jåykkyys pieneni, ts. kuitujen taipuisuus lisaåntyi CBH-kåsittelyn vaikutuksesta.
« ft » --- - 1— i2 92500
Taulukko 3. Entsyymikasittelyiden vaikutus kuidunjåykkyyteen.
Kuidunjåykkyysjakauman Kontrolli-nåyte CBH I
tunnusluku (yksikkonå 10'12Nm2 5 Pienin arvo 2,7 2,1
Alempi kvartiili 6,2 7,2
Mediaani 16,8 14.2
Ylempi kvartiili 27,4 21,8
Suurin arvo 45,5 40,2 10 Keskiarvo 17,7 15,8
Standardipoikkeama 11.2 9,6
Esimerkki 6 15 Entsyymikåsittelyn vaikutus jauhatuksen ominaisenergiankulutukseen
Kolmessa toisistaan riippumattomassa koesaijassa kertaalleen jauhettuja TMP-kuusimassoja, joiden freeness-arvot (CSF) olivat 450-550 ml, kasiteltiin CBH I -entsyymipreparaatilla. Massasulpun sakeus oli kaikissa kokeissa 5 % vesijohtovedesså, kasittelyaika 2 h ja låmpotila 20 45 - 50 °C. Kåsittelyisså kaytettiin 1 kg kuivaksi laskettua massaa ja entsyymiannostus oli 0,5 mg/g kuivaa massaa. Kåsittelyn jålkeen massat sakeutettiin, lingottiin ja homogenoitiin. Vertailunåytteet kasiteltiin muuten samoin, mutta niihin ei lisatty entsyymiå.
Massat jauhettiin edelleen Bauer- tai Sprout Waldron -levyjauhimilla kayttaen pienenevåa 25 teråvåliå. Kuituuntumista seurattiin måarittamållå vålinåytteiden freeness-arvot. Jauhatukset lopetettiin, kun massojen freeness oli < 100 ml. Kuhunkin jauhatukseen kulunut sahkoener-gian måarå mitattiin ja laskettiin ominaisenergiankulutus, kWh/kg. Tulokset on esitetty taulukossa 4.
13 92500
Taulukko 4. Kuidutuksen ominaisenergiankulutus CBH I -kasitellyillå nåytteillå ja vertailuilla kolmessa eri koesaijassa. Ominaisenergiankulutukset on laskettu freeness-iasolla 100 ml.
Nåyte Saija I Saija II Saxja II
kWh/kg kWh/kg kWh/kg CBH I 1,73 1,64 2,04 5 Kontrollit 1,97 2.05 2,39
Saaduista tuloksista huomataan, ettå CBH I -entsyymikasitellyllå on mahdollista alentaa Kuidutuksen ominaisenergiankulutusta 15 -20 % kasittelemåttomåån nåytteeseen verrattuna.
10 Sama efekti saavutettiin myos, jos preparaatti sisalsi molempia sellobiohydrolaasi-aktiivisuuk- sia tai proteolyyttisesti digestoitua CBH:ta. Viimeksi mainittu valmiste sisalsi CBH:n molem-mat rakenneosat (ydin ja hån ta), jotka kuitenkin oli erotettu toisistaan.
Esimerkki 7 15 £ntsyymikåsittelyiden vaikutus paperiteknisiin ominaisuuksiin.
Kåsiteltiin TMP-massoja, jotka oli jauhettu eri freeness tasoihin (30 - 300) entsyymivalmis-teilla, jotka sisålsivåt CBH I ja CBH II -entsyymejå. Todettiin kuidun paperiteknisten omi-naisuuksien, kuten lujuuden paraneminen.
20
Toisessa koesaijassa CBH-valmisteeseen lisattiin hemisellulaaseja (ksylanaaseja, manna-naaseja ja esteraaseja yhdessa ja erikseen) jauhetun massan kasittelemiseksi. Hemisellulaasi-lisaysten voitiin todeta parantavan massan valkaistavuutta peroksidilla.
25 Esimerkki 8
Entsyymikasittelyn vaikutus selluloosan kiteisyyteeu.
TMP-kuusimassaa kåsiteltiin natiiveilla sellobiohydrolaasi-entsyymeillå ja vastaavilla diges-toiduilla valmisteilla. Kåsittelyiden vaikutuksesta puuraaka-aineen selluloosan kiteisyys aleni. 30' * Samaa efektiå ei todettu endoglukanaasi-entsyymeillå (EG I ja EG II).
14 92500
Kirjallisuus 1. Puumassan valmistus. Toim. Nils-Erik Virkola, Suomen Paperi-insinoorien yhdistys.
Turku 1983.
5 2. D.A. Goring. Thermal Softening of Lignin, Hemicellulose and Cellulose. Pulp And Ppaer· Magazine of Canada 64 (1963) 12, T517-27.
3. J-C Pommier, J-L Fuentes & G. Goma. Using enzymes to improve the process and the 10 product quality in the recycled paper industry. Part 1: the basic laboratory work. TAPPI J.
72 (1989) 6. 187-191.
4. J-C Pommier, G. Goma, J-L Fuentes, C. Rousser, O. Jokinen, Using enzymes to improve the process and the product quality in the recycled paper industry. Part 2: Industrial 15 applications. TAPPI J. 73 (1990) 12, 197-202.
5. K. Jokinen & M. Savolainen. Puun mekaanisen massan kasittely lakkaasilla. PSC Communications 18. Espoo 1991.
20 6. E. Setliff, R. Marton, G. Granzow & K. Eriksson. Biochemical pulping with white-rot fungi. TAPPI J. 73 (1990), 141-147.
7. G. Leatham, G. Myers & T. Wegner. Biomechanical pulping of aspen chips: energy savings resulting from different fungal treatments. TAPPI J. 73 (1990), 197-200.
25 8. M. Akhtar, M. Attridge, G. Myers, T.K. Kirk & R. Blanchette. Biomechanical pulping of loblolly pine with different strains of the white-rot fungus Ceriporiopsis subvermispora.
: TAPPIJ. 75 (1992), 105-109.
30 9. van Tilbeurgh, H. Bhikhabhai, R. Pettersson, L. and Claeyessens M. (1984) Separation of endo- and exo-type cellulases using a new affinity method. FEBS Lett. 169, 215-218.
15 92500 10. Zurbriggen, B.Z., Bailey, M.J., Penttilå, M.E., Poutanen, K. and Linko M. (1990)
Pilot scale production of a heterologous Trichodema reesei cellulase in Saccharomyces cerevisiae. J. Biotechno]. 13, 267-278.
5 11. Laemmli, U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacte riophage T4. Nature 227 (1970), 680-685.
Chen H., Hayn M. & Esterbauer H. Purificatio and characterization of two extracellular β-glucosidases from Trichoderma reesei. Biochim.Biophys.Acta 1121 (1992), 54-60.
10 12. Covert, S., Vanden Wymelenberg, A. & Cullen, D., Structure, organisation and trans cription of a cellobiohydrolase gene cluster from Phanerochaere chrysosporium, Appl. Environ. Microbiol. 58 (1992), 2168-2175.
13. Ito, S., Shikata, S., Ozaki, K., Kawai, S., Okamoto, K., Inoue, S., Takei, A., Ohta, Y.
15 & Satoh, T., Alkaline cellulase for laudry detergents: production by Bacillus sp. KSM-635 and enzymatic properties, Agril. Biol. Chem. 53 (1989), 1275-1281 14. Teeri, T., Salovuori, I. & Knowles, J., The molecular cloning of the major cellobiohydrolase gene from Trichoderma reesei Bio/Technolgy 1 (1983), 696-699 20 15. Penttilå, M., Antre, L., Lehtovaara, P., Bailey, M., Teeri, T. & Knowles, J. Effecient secretion of two fungal cellobiohydrolases by Saccharomyces cerevisiae. Gene 63 (1988) 103-112.
25 16. Mitsuishi, Y., Nitisinprasert, S., Saloheimo, M., Biese. I., Reinikainen, T., Clayssens, M., Kerånen, S., Knowles, J. & Teeri, T. Site-directed mutagenesis of the putative catalysic residues of Trichoderma reesei cellobiohydrolase I and endoglucanase I, FEBS Lett. 275 (1990), 135-138 30 17. Chen, H., Hayn, M. & Esterbauer, H. Purification and characterization of two extracel lular /5-glucosidases from Trichoderma reesei, Biochim. Biophys. Acta 1121 (1992), 54-60 92500 16 18. Mandels, Μ. & Weber, J. The production of cellulases. Advances in Chemistry Series, No. 95, 1969, 391-414 19. van den Hondel, C., Punt, P. & van Gorcom, R. Production of extracellular proteins by 5 the filamentous fungus Aspergillus. Antonio van Leeuwenhoek 61 (1992), 153-160 20. Tomme, P., McCrae, S., Wood, T. & Claeyssens, M. Chromatographic separation of cellulolytic enzymes. Methods Enzymol. 160 (1988), 187-193.
II
Claims (17)
1. Menetelmå mekaanisen massan valmistamiseksi puuraaka-aineesta, jonka menetelmån mukaan 5. raaka-aine hajotetaan hakkeeksi, ja - hake kuidutetaan ainakin oleellisesti mekaanisesti, jolloin kuidutettava aine kåsitellåån entsyymillå valmistusprosessin sopivassa vaiheessa, t u η n e 11 u siita, ettå - entsyyminå kåytetåån sellaista entsyymivalmistetta, jonka pååasiallinen sellulaasiaktii- 10 visuus koostuu sellobiohydrolaasi-aktiivisuudesta.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmå, t u η n e 11 u siita, etta kaytetaan sellaista entsyymivalmistetta, jonka endo-/3-glukanaasi- aktiivisuus on korkeintaan pieni suhteessa sellobiohydrolaasi-aktiivisuuteen. 15
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmå, t u η n e 11 u siita, etta kaytetaan entsyymivalmistetta, joka sisåltåå eristettyjå sellobiohydrolaasientsyymejå tai niiden osia.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmå, t u η n e 11 u siita., etta kuidutettavan 20 aineen amorfisen osan osuutta kasvatetaan entsyymikåsittelyllå ennen sen kuiduttamista halut- tuun lopulliseen suotautuvuuteen.
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmå, t u η n e 11 u siita, etta kaytetaan sellaista entsyymivalmistetta, joka on tuotettu kasvattamalla sopivalla kasvatusalustalla mikro-organis- 25 mikantaa, joka on kuuluu Trichoderma-sukum, Aspergillus-sukuun, Phanerochaete-sukuun, Penicillium-sukuun, Streptomyces-sukuun, Humicola-sukuun, tai Bacillus-sukuun.
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmå, t u η n e 11 u siita, etta kaytetaan sellaista entsyymivalmistetta, joka on tuotettu kannalla, jota on geneettisesti parannettu tuottamaan 30 sellobiohydrolaasi-aktiivisuuden omaavaa entsyymiå, tai johon sanottua aktiivisuutta koodaa- va geeni on siirretty. 92500 ---- " - T—
7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmå, t u η n e 11 u siitå, ettå kåytetåån entsyy-mivalmistetta, joka sisåltåå mikro-organismin Trichoderma reesei tuottamaa sellobiohydrolaa-sia.
8. Jonkin patenttivaatimuksen 5-7 mukainen menetelmå, t u η n e 11 u siita, ettå kayte taan sellaista sellobiohydrolaasi-entsyymiå, joka on erotettu muista kasvatusliuoksen proteii- neista nopealla anioniseen ioninvaihtoon perustuvalla puhdistusmenetelmållå
9. Patenttivaatimuksen 7 mukainen menetelmå, t u η n e t t u siitå, ettå kåytetåån entsyy- 10 mivalmistetta. joka sisåltaa homekannan Trichoderma reesei tuottamaa sellobiohydrolaasia I (CBH I), jonka molekyylipaino SDS-PAGE:iia mååritettynå on noin 64.000 ja isoelektrinen piste on noin 3,2 - 4,4.
10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmå, t u η n e t t u siitå, ettå kåsitellåån entsy- 15 maattisesti karkeaa massaa, jonka suotautuvuus on noin 30 - 1000 ml CSF, edullisesti noin 300 - 700 ml CSF.
11. Patenttivaatimuksen 10 mukainen menetelmå, t u η n e 11 u siitå, ettå kåsitellåån entsy-maattisesti karkeaa massaa, joka kåsittåå kertaalleen jauhetun tai hiotun massan, kuiturejektin 20 tai pitkåkuitufraktion tai nåiden yhdistelmån.
12. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmå, t u η n e 11 u siitå, ettå entsyymikåsittely suoritetaan 30 - 90 °C:ssa, edullisesti noin 40 - 60 °C, massan sakeuden ollessa noin 0,1 -20 %, edullisesti noin 1 - 10 %, ja kåsittelyajan ollessa 1 min - 20 h, edullisesti noin 30 min 25 - 5 h.
13. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmå, t u η n e 11 u siitå, ettå entsyymivalmis-tetta kåytetåån noin 10 μ% - 100 mg proteiinia per g kuivaa massaa, edullisesti noin 100 μ% -10 mg proteiinia/g kuivaa massaa. 30
14. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen menetelmå, t u η n e 11 u siitå, ettå mekaaninen massa valmistetaan GW-, PGW-, TMP- tai CTMP-menetelmållå. 19 92500
15. Mekaanisen massan kasittelyyn tarkoitettu entsyymivalmiste, t u η n e 11 u siita, etta sillå on oleellinen sellobiohydrolaasi aktiivisuus ja — suhteessa sellobiohydrolaasiaktiivisuu-teen — korkeintaan pieni endo-/3-glukanaasi-aktiivisuus.
16. Patenttivaatimuksen 15 mukainen entsyymivalmiste, tunnettu siita, etta se on tuotettu kasvattamalla sopivalla alustalla mikro-organismikantaa, joka kuuluu Trichoderma- sukuun, Aspergillus-sukmn, Phanerochaete-sukuun, Penicillium-sukuun, Streptomyces-sukuun, Humicola-sukuun, tai Bacillus-sukum.
17. Patenttivaatimuksen 15 mukainen entsyymivalmiste, tunnettu siita, etta se on tuotettu kasvattamalla homekantaa Trichoderma reesei tai tamån modifioitua kantaa, johon sellobiohydrolaasia tai sen rakenneosaa koodaava geeni on siirretty, tai kasvattamalla hiivan, homeen tai bakteerin geneettisesti modifioitua kantaa, johon Trichoderma reesein sellobiohydrolaasia tai sen rakenneosaa koodaava geeni on siirretty. « « 20 92500
Priority Applications (15)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI930953A FI92500C (fi) | 1993-03-03 | 1993-03-03 | Menetelmä mekaanisen massan valmistamiseksi |
| US08/513,991 US6099688A (en) | 1993-03-03 | 1994-03-03 | Process for preparing mechanical pulp by treating the pulp with an enzyme having cellobiohydralase activity |
| CA002157513A CA2157513C (en) | 1993-03-03 | 1994-03-03 | Process for preparing mechanical pulp |
| EP94908363A EP0687320B1 (en) | 1993-03-03 | 1994-03-03 | Process for preparing mechanical pulp |
| DE69412077T DE69412077T2 (de) | 1993-03-03 | 1994-03-03 | Verfahren zur herstellung von mechanischem faserbrei |
| US08/513,856 US5865949A (en) | 1993-03-03 | 1994-03-03 | Process for preparing and treating mechanical pulp with an enzyme preparation having cellobiohydralase and endo-β-glucanase activity |
| EP94908364A EP0692043B1 (en) | 1993-03-03 | 1994-03-03 | Process and enzyme preparation for preparing mechanical pulp |
| AT94908364T ATE222306T1 (de) | 1993-03-03 | 1994-03-03 | Verfahren und enzympräparation zur herstellung von mechanischer pulpe |
| AU61433/94A AU6143394A (en) | 1993-03-03 | 1994-03-03 | Process and enzyme preparation for preparing mechanical pulp |
| AT94908363T ATE169069T1 (de) | 1993-03-03 | 1994-03-03 | Verfahren zur herstellung von mechanischem faserbrei |
| DE69431182T DE69431182T2 (de) | 1993-03-03 | 1994-03-03 | Verfahren und enzympräparation zur herstellung von mechanischer pulpe |
| PCT/FI1994/000079 WO1994020667A1 (en) | 1993-03-03 | 1994-03-03 | Process and enzyme preparation for preparing mechanical pulp |
| PCT/FI1994/000078 WO1994020666A1 (en) | 1993-03-03 | 1994-03-03 | Process for preparing mechanical pulp |
| CA002157512A CA2157512C (en) | 1993-03-03 | 1994-03-03 | Process and enzyme preparation for preparing mechanical pulp |
| AU61432/94A AU6143294A (en) | 1993-03-03 | 1994-03-03 | Process for preparing mechanical pulp |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI930953A FI92500C (fi) | 1993-03-03 | 1993-03-03 | Menetelmä mekaanisen massan valmistamiseksi |
| FI930953 | 1993-03-03 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI930953A0 FI930953A0 (fi) | 1993-03-03 |
| FI92500B FI92500B (fi) | 1994-08-15 |
| FI92500C true FI92500C (fi) | 1994-11-25 |
Family
ID=8537490
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI930953A FI92500C (fi) | 1993-03-03 | 1993-03-03 | Menetelmä mekaanisen massan valmistamiseksi |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5865949A (fi) |
| EP (2) | EP0687320B1 (fi) |
| AT (2) | ATE169069T1 (fi) |
| AU (2) | AU6143394A (fi) |
| CA (2) | CA2157513C (fi) |
| DE (2) | DE69412077T2 (fi) |
| FI (1) | FI92500C (fi) |
| WO (2) | WO1994020667A1 (fi) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6231608B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-05-15 | Crosscart, Inc. | Aldehyde and glycosidase-treated soft and bone tissue xenografts |
| US5851351A (en) * | 1995-08-29 | 1998-12-22 | The Central Timber Co-Operative Ltd. | Method of microbial pre-treating wood chips for paper making |
| US6939437B1 (en) | 1999-11-19 | 2005-09-06 | Buckman Laboratories International, Inc. | Paper making processes using enzyme and polymer combinations |
| US6398148B1 (en) | 2000-04-25 | 2002-06-04 | Mark Snow | Device and method for storing holiday light strings |
| US6808595B1 (en) * | 2000-10-10 | 2004-10-26 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Soft paper products with low lint and slough |
| US20040104003A1 (en) * | 2000-11-28 | 2004-06-03 | Biopulping International, Inc. | Eucalyptus biokraft pulping process |
| US20030051836A1 (en) * | 2001-05-21 | 2003-03-20 | Novozymes A/S | Enzymatic hydrolysis of a polymer comprising vinyl acetate monomer |
| DE10126347A1 (de) * | 2001-05-30 | 2002-12-05 | Voith Paper Patent Gmbh | Verfahren zur Herstellung von Faserstoff |
| BR0210119A (pt) * | 2001-06-01 | 2004-06-08 | Biopulping Int Inc | Processo de polpação biomecânica de eucalipto |
| EP1448846A4 (en) * | 2001-11-09 | 2006-06-21 | Biopulping Int Inc | PRE-TREATMENT WITH MICROWAVES OF RIBBONS USED IN THE MANUFACTURE OF PAPER AND OTHER WOOD PRODUCTS |
| AU2003219956A1 (en) * | 2003-02-27 | 2004-09-28 | Midwest Research Institute | Superactive cellulase formulation using cellobiohydrolase-1 from penicillium funiculosum |
| WO2004101889A2 (en) * | 2003-05-06 | 2004-11-25 | Novozymes North America, Inc. | Use of hemicellulase composition in mechanical pulp production |
| FI20031818L (fi) * | 2003-12-11 | 2005-06-12 | Valtion Teknillinen | Menetelmä mekaanisen massan valmistamiseksi |
| EP1709163B1 (en) * | 2004-01-16 | 2010-11-24 | Novozymes, Inc. | Methods for degrading lignocellulosic materials |
| CN1997791B (zh) | 2004-05-03 | 2011-01-26 | 纸、纸板和纤维素工业技术中心 | 机械纸浆的制备方法 |
| CN1305110C (zh) * | 2004-09-10 | 2007-03-14 | 北京工业大学 | 硅片低温直接键合方法 |
| SE529897C2 (sv) | 2006-03-27 | 2007-12-27 | Rottneros Ab | Formpressat tråg |
| WO2009061746A2 (en) * | 2007-11-05 | 2009-05-14 | Energy Enzymes, Inc. | Process for integrating cellulose and starch feedstocks in ethanol production |
| JP2009124995A (ja) * | 2007-11-22 | 2009-06-11 | Oji Paper Co Ltd | リグノセルロース分解酵素遺伝子およびその利用 |
| FI20085345L (fi) * | 2008-04-22 | 2009-10-23 | Kemira Oyj | Menetelmä valon aikaansaaman ligniinipitoisen materiaalin kellertymisen vähentämiseksi |
| US8454798B2 (en) * | 2010-04-15 | 2013-06-04 | Buckman Laboratories International, Inc. | Paper making processes and system using enzyme and cationic coagulant combination |
| US9347176B2 (en) * | 2012-10-04 | 2016-05-24 | Api Intellectual Property Holdings, Llc | Processes for producing cellulose pulp, sugars, and co-products from lignocellulosic biomass |
| US9127401B2 (en) | 2013-01-31 | 2015-09-08 | University Of New Brunswick | Wood pulp treatment |
| US9145640B2 (en) | 2013-01-31 | 2015-09-29 | University Of New Brunswick | Enzymatic treatment of wood chips |
| FI126698B (fi) | 2013-12-18 | 2017-04-13 | Teknologian Tutkimuskeskus Vtt Oy | Menetelmä fibrilloidun selluloosamateriaalin valmistamiseksi |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI841500A0 (fi) * | 1984-04-13 | 1984-04-13 | Valtion Teknillinen | Foerfarande foer uppbygnande av cellulolytiska jaeststammar. |
| FR2604198B1 (fr) * | 1986-09-22 | 1989-07-07 | Du Pin Cellulose | Procede de traitement d'une pate papetiere par une solution enzymatique. |
| FI81394C (fi) * | 1988-07-22 | 1993-07-20 | Genencor Int Europ | Foerfarande foer behandling av massa med enzymer |
| FR2652595B1 (fr) * | 1989-10-02 | 1995-03-31 | Pin Cellulose Du | Procede de traitement d'une pate papetiere par une preparation enzymatique pour la fabrication de papier ou carton. |
| FI92414B (fi) * | 1989-11-27 | 1994-07-29 | Enso Gutzeit Oy | Menetelmä massan valmistamiseksi |
-
1993
- 1993-03-03 FI FI930953A patent/FI92500C/fi not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-03-03 DE DE69412077T patent/DE69412077T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-03 US US08/513,856 patent/US5865949A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-03 AU AU61433/94A patent/AU6143394A/en not_active Abandoned
- 1994-03-03 WO PCT/FI1994/000079 patent/WO1994020667A1/en not_active Ceased
- 1994-03-03 EP EP94908363A patent/EP0687320B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-03 WO PCT/FI1994/000078 patent/WO1994020666A1/en not_active Ceased
- 1994-03-03 AU AU61432/94A patent/AU6143294A/en not_active Abandoned
- 1994-03-03 AT AT94908363T patent/ATE169069T1/de active
- 1994-03-03 AT AT94908364T patent/ATE222306T1/de active
- 1994-03-03 CA CA002157513A patent/CA2157513C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-03-03 DE DE69431182T patent/DE69431182T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-03 CA CA002157512A patent/CA2157512C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-03-03 US US08/513,991 patent/US6099688A/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-03-03 EP EP94908364A patent/EP0692043B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE169069T1 (de) | 1998-08-15 |
| DE69412077T2 (de) | 1999-04-15 |
| AU6143394A (en) | 1994-09-26 |
| US5865949A (en) | 1999-02-02 |
| CA2157512C (en) | 2004-07-06 |
| DE69431182D1 (de) | 2002-09-19 |
| DE69412077D1 (de) | 1998-09-03 |
| EP0687320B1 (en) | 1998-07-29 |
| CA2157513A1 (en) | 1994-09-15 |
| DE69431182T2 (de) | 2003-05-08 |
| AU6143294A (en) | 1994-09-26 |
| CA2157513C (en) | 2005-09-20 |
| CA2157512A1 (en) | 1994-09-15 |
| ATE222306T1 (de) | 2002-08-15 |
| EP0692043B1 (en) | 2002-08-14 |
| WO1994020667A1 (en) | 1994-09-15 |
| US6099688A (en) | 2000-08-08 |
| EP0687320A1 (en) | 1995-12-20 |
| EP0692043A1 (en) | 1996-01-17 |
| FI930953A0 (fi) | 1993-03-03 |
| WO1994020666A1 (en) | 1994-09-15 |
| FI92500B (fi) | 1994-08-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI92500C (fi) | Menetelmä mekaanisen massan valmistamiseksi | |
| Buchert et al. | Applications of Trichoderma reesei enzymes in the pulp and paper industry | |
| KR101715428B1 (ko) | 마이크로피브릴화 셀룰로오스 생산 공정 | |
| EP1699974B1 (en) | Process for preparing mechanical pulp | |
| FI81394C (fi) | Foerfarande foer behandling av massa med enzymer | |
| US9145640B2 (en) | Enzymatic treatment of wood chips | |
| CN104342424B (zh) | 用于改变和改善纤维性质的纤维氧化酶组合物及造纸方法和应用 | |
| US6402887B1 (en) | Biopulping industrial wood waste | |
| Salles et al. | Effect of cellulase-free xylanases from Acrophialophora nainiana and Humicola grisea var. thermoidea on eucalyptus kraft pulp | |
| US20190003120A1 (en) | Method for saving energy in paper production | |
| Zhao et al. | Alkaline peroxide mechanical pulping of wheat straw with enzyme treatment | |
| FI89613C (fi) | Foerfarande foer enzymatisk behandling av cellulosamassor | |
| WO2017102542A1 (en) | Method for producing mechanical pulp from a biomass comprising lignocellulosic material | |
| WO2017108431A1 (en) | Method for producing mechanical pulp from a biomass comprising lignocellulosic material | |
| Wu et al. | Comparative characterization of a recombinant Volvariella volvacea endoglucanase I (EG1) with its truncated catalytic core (EG1-CM), and their impact on the bio-treatment of cellulose-based fabrics | |
| Buchert et al. | Paper industry | |
| Pawlak | Biochemical additives for papermaking | |
| ADESINA | CHARACTERISTICS OF SOME HYDROLYTIC ENZYMES AND BIOPULPING POTENTIAL OF FUNGAL ISOLATES FROM SELECTED WOOD SAMPLES IN SOUTHWESTERN NIGERIA | |
| SABHARWAL | 14 Biological Approach for Pulping | |
| WO2016015570A1 (zh) | 用于改变和改善纤维性质的纤维氧化酶组合物及造纸方法和应用 | |
| WO1995014809A1 (en) | Treatment of pulp with a mannanase in a bleaching process |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| MM | Patent lapsed |