FI85194B - Determination of clinical parameters by means of an enzymatic immunoprocess - Google Patents
Determination of clinical parameters by means of an enzymatic immunoprocess Download PDFInfo
- Publication number
- FI85194B FI85194B FI873398A FI873398A FI85194B FI 85194 B FI85194 B FI 85194B FI 873398 A FI873398 A FI 873398A FI 873398 A FI873398 A FI 873398A FI 85194 B FI85194 B FI 85194B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- antigen
- zone
- enzyme
- antibody
- labeled
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
- G01N33/537—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody
- G01N33/538—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody by sorbent column, particles or resin strip, i.e. sorbent materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
- G01N33/54391—Immunochromatographic test strips based on vertical flow
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
8519485194
Kliiniseen parametrien määrittäminen entsymaattisella immunoprosessillaDetermination of clinical parameters by enzymatic immunoprocessing
Bestämning av kliniska parametrar med hjälp av en 5 enzymatisk immunoprocess 10Improvement of clinical parameters with 5 enzymatic immunoprocesses 10
Oheinen keksintö kohdistuu diagnostiseen menetelmään sekä välineeseen kliinisten parametrien määrittämiseksi kvalitatiivisesti ja/tai kvantitatiivisesti entsymaattisella immunoprosessilla käyttäen affiniteet-tikromatografiaa. Keksinnön kohteena on erityisesti patenttivaatimuk-15 sen 1 mukainen menetelmä sekä patenttivaatimuksen 10 mukainen väline.The present invention relates to a diagnostic method and a device for the qualitative and / or quantitative determination of clinical parameters by an enzymatic immunoprocess using affinity chromatography. The invention relates in particular to a method according to claim 1 and to a device according to claim 10.
Keksintö on erityisen käyttökelpoinen biologisten aineiden analysoimiseksi biologisista nesteistä, kuten virtsasta, plasmasta, verestä, tulehdusnesteestä, kudosuutteista, jne.The invention is particularly useful for analyzing biological agents in biological fluids such as urine, plasma, blood, inflammatory fluid, tissue extracts, etc.
2020
Immunoentsyymaattisia diagnostisia tekniikoita on tunnettu alalla jo kauan. Ne perustuvat vasta-aineen ja sen antigeenin väliseen reaktioon, joko vasta-aineen tai antigeenin ollessa tällöin konjugoituneena sellaiseen entsyymiin, joka tuottaa ilmaisevan reaktion (joka on luon-25 teeltaan kromogeeninen tai muun kaltainen), kun se saatetaan kosketuksiin sopivan substraatin kanssa. Tämän jälkeen tämä entsyymillä merkitty, antigeenin ja vasta-aineen välinen kompleksi aiheuttaa, saatettaessa se kosketuksiin ilmaisevan substraatin kanssa, sellaisen reaktion, jonka avulla mielenkiinnon kohteena oleva antigeeni tai vasta-. . 30 aine voidaan määrittää kvalitatiivisesti tai kvantitatiivisesti.Immunoenzymatic diagnostic techniques have long been known in the art. They are based on the reaction between an antibody and its antigen, either the antibody or the antigen being conjugated to an enzyme that produces an expressive reaction (chromogenic or similar in nature) when contacted with a suitable substrate. This enzyme-labeled complex between the antigen and the antibody then, upon contact with the detecting substrate, causes a reaction that results in the antigen or antibody of interest. . The substance can be determined qualitatively or quantitatively.
Kaikkien nykyään diagnostiikassa käytettävien entsymaattisten immuno-tekniikoiden haittana ovat tietyt puutteellisuudet, jotka johtuvat olennaisesti näihin tekniikkoihin liittyvistä mutkikkaista ja herkistä 35 toimenpiteistä sekä pitkistä inkubointiajöistä, joiden välissä reak-tiojärjestelmä on pestävä toistuvasti.All of the enzymatic immunoassays currently used in diagnostics have the disadvantage of certain shortcomings, which are essentially due to the complex and sensitive procedures involved in these techniques and the long incubation times between which the reaction system must be washed repeatedly.
Näin ollen tällaisten tekniikoiden käyttö rajoittuu päteviin labo- 2 85194 ratorioihin, kun taas niiden yleisempi käyttö, esimerkiksi näytteen-ottopaikalla tai jopa yksityiskodeissa, on toistaiseksi ollut mahdotonta. Vaikka nämä perinteiset menetelmät eivät aiheutakaan mitään erityisiä vaikeuksia alan asiantuntijalle, niin kuitenkin koetulosten 5 käsittelyyn ja tulkitsemiseen liittyy ongelmia, joiden ratkaiseminen on hyvin vaikeata, ellei mahdotontakin, kouluttamattomalle henkilölle.Thus, the use of such techniques is limited to qualified laboratories, while their more general use, for example at the sampling site or even in private homes, has so far been impossible. Although these traditional methods do not present any particular difficulties for the person skilled in the art, there are still problems in processing and interpreting the test results 5 which are very difficult, if not impossible, for the untrained person to solve.
Alalla tunnetaan esimerkiksi tekniikka, joka tunnetaan nimensä lyhenteenä "ELISA" (enzyme - linked immunosorbent assay, entsyymiin kytket-10 tyyn immunosorbenttiin perustuva koe, Immunochem., 8, 871-874, 1971). Tämä tekniikka edellyttää pitkien reaktio- ja inkubointiaikojen sekä toistuvien pesutoimenpiteiden lisäksi huolellista toimintaa ja reak-tiojärjestelmän käsittelyä.For example, a technique known as "ELISA" (enzyme-linked immunosorbent assay) is known in the art. Immunochem., 8, 871-874, 1971). In addition to long reaction and incubation times and repeated washing procedures, this technique requires careful operation and handling of the reaction system.
15 Toisaalta "EMIT”-tekniikan rajoituksena on se, ettei sillä voida määrittää molekyylejä, joiden molekyylipaino on suuri.15 On the other hand, the limitation of the "EMIT" technique is that it cannot identify molecules with a high molecular weight.
Lopuksi, alalla "FIA"- tekniikkana tunnettu menetelmä edellyttää erityisten määrittävien instrumenttien käyttöä.Finally, the method known in the art as "FIA" technology requires the use of specific determining instruments.
2020
Edellä mainitut diagnostiset tekniikat kuvataan yksityiskohtaisesti esimerkiksi julkaisussa "Enzyme Immunoassay", E. Ishikawa, T. Kawai, K. Miyai, Igaku-Shoin-Tokyo-New York (1981).The above diagnostic techniques are described in detail, for example, in "Enzyme Immunoassay", E. Ishikawa, T. Kawai, K. Miyai, Igaku-Shoin-Tokyo-New York (1981).
25 Edellä esitetyn perusteella on ilmeistä, että sellainen entsymaat- tiseen immuunireaktioon perustuva diagnostinen tekniikka olisi hyvin käyttökelpoinen, jossa tekniikassa helppo ja nopea käyttö yhdistyisi mainituille immunoentsymaattisille menetelmille tunnusomaiseen herkkyyteen ja spesifisyyteen.In the light of the foregoing, it is apparent that a diagnostic technique based on an enzymatic immune response would be very useful, in which easy and rapid use would be combined with the sensitivity and specificity characteristic of said immunoenzymatic methods.
30 Tässä keksinnössä vältytään alalla aikaisemmin tunnetuissa tekniikoissa esiintyviltä ongelmilta siten, että keksinnössä aikaansaadulla menetelmällä ja laitteella voidaan määrittää jopa kvantitatiivisesti luonteeltaan mielivaltaisia kliinisiä parametrejä ilman, että menetel-35 mässä olisi turvauduttava mihinkään erityiseen toimenpiteeseen.The present invention avoids the problems of prior art techniques by allowing the method and apparatus of the present invention to quantify clinical parameters of even arbitrary nature without having to resort to any particular procedure.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle on pääasiallisesti tunnusomaista se, 3 85194 mitä on esitetty patenttivaatimuksen 1 tunnusmerkkiosassa ja keksinnön mukaiselle välineelle on pääasiallisesti tunnusomaista se, mitä on esitetty patenttivaatimuksen 10 tunnusmerkkiosassa.The method according to the invention is mainly characterized by what is set forth in the characterizing part of claim 1 and the device according to the invention is mainly characterized by what is set forth in the characterizing part of claim 10.
5 Keksinnön mukaisesti biologinen neste, josta halutaan määrittää kliinisiä parametrejä, johdetaan ylöspäin tai alaspäin sopivalla tavalla muotoillun kantajan läpi, joka kantaja käsittää: (a) alussa tai keskivaiheilla sijaitsevan vyöhykkeen, johon koetta mahdollisesti häiritsevät aineet voivat adsorboitua; 10 (b) vyöhykkeen, johon on edeltäkäsin adsorboitu palautuvasti yhtä tai useampaa antigeeniä tai entsyymillä merkittyä vasta-ainetta, jota on saatu muodostumaan yhtä tai useampaa, määritettäville kliinisille parametreille spesifistä epitooppia vastaan (N.R. Jerne, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 24; 1985, 810-816); 15 (c) edeltävän vyöhykkeen vieressä sijaitsevan lisävyöhykkeen, johon on immobilisoitu tunnettuja tekniikoita käyttäen vasta-aineita tai antigeenejä, jotka muodostavat määritettävät kliiniset parametrit, määränä, joka on yhtä suuri tai suurempi kuin entsyymillä merkittyjen vasta-aineiden tai antigeenien määrä. Tässä vyöhykkeessä voidaan myös 20 käyttää vasta-aineita, jotka on muodostettu yhtä tai useampaa, vyöhykkeessä (b) vasta-aineiden tunnistamasta epitoopista (epitoopeista) poikkeavaa epitooppia vastaan (kerrostekoe). Tässä tapauksessa kromo-geeniset substraatit entsyymillä merkittyjä vyöhykkeen (b) vasta-aineita varten tulisi sitoa vyöhykkeeseen (c).According to the invention, the biological fluid from which it is desired to determine clinical parameters is passed up or down through a suitably shaped carrier comprising: (a) an early or intermediate zone into which substances that may interfere with the experiment may be adsorbed; (B) a zone to which one or more antigens or enzyme-labeled antibodies that have been reversibly adsorbed against one or more epitopes specific for the clinical parameters to be determined (NR Jerne, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. , 24; 1985, 810-816); (C) an additional zone adjacent to the preceding zone immobilized using antibodies or antigens constituting the clinical parameters to be determined using known techniques in an amount equal to or greater than the amount of enzyme-labeled antibodies or antigens. Antibodies raised against one or more epitopes (epitopes) recognized by the antibodies in zone (b) may also be used in this zone (layer assay). In this case, chromogenic substrates for enzyme-labeled antibodies of zone (b) should be bound to zone (c).
25 Nämä kromogeeniset substraatit voidaan vaihtoehtoisesti adsorboida palautuvasti alempana sijaitsevaan vyöhykkeeseen. Vaihtoehtoisesti, tähän vyöhykkeeseen (c) on voitu immobilisoida vastavasta-aine, joka on spesifinen antigeenin ja vasta-aineen väliselle kompleksille, missä 30 tapauksessa vyöhyke (b) jaetaan puolestaan kahteen osaan niin, että ensimmäiseen osaan on esimerkiksi adsorboitu entsyymillä merkittyä antigeeniä ja toinen osa sisältää vastaavaa vasta-ainetta tai päinvastoin.Alternatively, these chromogenic substrates can be reversibly adsorbed to the lower zone. Alternatively, an antibody specific for the antigen-antibody complex may be immobilized in this zone (c), in which case zone (b) is in turn divided into two parts, for example by adsorbing an enzyme-labeled antigen to the first part and a second part. contains a corresponding antibody or vice versa.
(d) Vyöhykkeen, johon on adsorboitu kromogeeninen substraatti vyöhyk-35 keessä (b) läsnäolevaa, antigeeniin tai vasta-aineeseen konjugoitua entsyymiä varten, tai yhtä tai useampaa kantajaa, joka sallii biologisten nesteiden virtaamisen (kerrostekoe).(d) A zone to which a chromogenic substrate for an enzyme conjugated to antigen or antibody present in zone (b) is adsorbed, or one or more carriers that allow the flow of biological fluids (layer assay).
* 85194* 85194
Biologinen neste, joka virtaa kantajan läpi ylös- tai alaspäin painovoiman, kapillaarivoimien, kromatografiän tai diffuusion avulla, saatetaan ensin kosketuksiin vyöhykkeen (b) kanssa, jolloin mahdollisesti läsnäoleva antigeeni tai vasta-aine reagoi täydentävien, entsyy-5 millä merkittyjen vasta-aineiden tai antigeenin kanssa.The biological fluid flowing up or down through the support by gravity, capillary force, chromatography, or diffusion is first contacted with zone (b), whereby any antigen or antibody present reacts with complementary enzyme-labeled antibodies or antigen. with.
Täten muodostunut kompleksi, tai yhdistynyt järjestelmä, nousee ylöspäin tai laskeutuu alaspäin kromatografisesti kantajaa pitkin, jolloin se kulkee vyöhykkeen (c) läpi, jossa vyöhykkeessä (c) liiallinen ent-10 syymillä merkitty vasta-aine tai antigeeni, mikäli läsnä, sitoutuu täydentävään, immobilisoituun antigeeniin tai vasta-aineeseen. Kerros-tekokeen tapauksessa tämä spesifinen kompleksi sitoutuu kerrosteelli-sen kokonaisuuden muodostaen.The complex thus formed, or combined system, ascends or descends chromatographically along the support, passing through zone (c), in which zone (c) the excess ent-10 labeled antibody or antigen, if present, binds to the complementary, immobilized antigen or antibody. In the case of the layer experiment, this specific complex binds to form a layered whole.
15 Sen jälkeen, kun näyteneste on kulkenut välivyöhykkeen läpi, jossa vyöhykkeessä mahdollisesti määritystä häiritsevät aineet saadaan poistetuiksi, esimerkiksi adsorptiolla, kemiallisesti sitomalla, hajottamalla, jne., entsyymillä merkitty, antigeenin ja vasta-aineen välinen kompleksi saavuttaa kromogeenisen substraatin, jolloin muodostuvaa 20 väriä (positiivinen koe) voidaan käyttää sekä kvantitatiiviseen että kvalitatiiviseen määritykseen, esimerkiksi vertaamalla väriasteikkoon. Toisaalta, mikäli biologisessa nesteessä ei ole läsnä kliinistä parametriä (negatiivinen koe), niin yhdessä tapauksessa entsyymillä merkitty antigeeni tai vasta-aine kiinnittyy täydellisesti vyöhykkeeseen 25 (c) immunokemiallisen reaktion seurauksena, jolloin se ei voi saavut taa kromogeenista substraattia; ja toisessa tapauksessa (kerrostekoe) entsyymillä merkitty vasta-aine ei kiinnity vyöhykkeeseen (c), ja virtaava biologinen neste huuhtelee värin, joka muodostuu vasta-aineeseen konjugoituneen entsyymin edetessä, pois vyöhykkeestä (negatiivi-30 nen koe).After the sample fluid has passed through an intermediate zone in which potentially interfering substances are removed, for example by adsorption, chemical binding, digestion, etc., the enzyme-labeled complex between the antigen and the antibody reaches the chromogenic substrate, resulting in a color (20 positive test) can be used for both quantitative and qualitative determination, for example by comparison with a color scale. On the other hand, if no clinical parameter is present in the biological fluid (negative assay), then in one case the enzyme-labeled antigen or antibody binds completely to zone 25 (c) as a result of an immunochemical reaction, whereby it cannot reach the chromogenic substrate; and in the second case (layer assay), the enzyme-labeled antibody does not adhere to zone (c), and the flowing biological fluid rinses the dye formed as the antibody-conjugated enzyme progresses out of the zone (negative assay).
Toisin sanoen, järjestelmä perustuu biologisessa nesteessä läsnäolevan antigeenin tai vasta-aineen ja immobilisoidun antigeenin tai vasta-aineen väliseen kilpailuun, joka immobilisoitu antigeeni tai vasta-35 aine toimii negatiivisen vasteen tapauksessa joko entsyymillä merkityn vasta-aineen tai antigeenin salpaajana estäen sen kulkeutumisen kromogeenista substraattia sisältävään vyöhykkeeseen; tai toisessa tapauk- 5 85194 sessa epäreaktiivisena materiaalina, joka ei kykene sitomaan entsyymillä merkittyjä vasta-aineita.That is, the system is based on competition between an antigen or antibody present in a biological fluid and an immobilized antigen or antibody, which in the case of a negative response acts as a blocker of either the enzyme-labeled antibody or antigen, preventing it from migrating to the chromogenic substrate. zone; or, in another case, as a non-reactive material incapable of binding enzyme-labeled antibodies.
Keksinnön mukainen kantajaväline voi olla muodoltaan liuska, nauha, 5 kalvo, putki, malli, pullo, imupaperikiekko, jne. Eri komponentit voidaan adsorboida tai immobilisoida joko suoraan välineen muodostavaan materiaaliin, tai välineen sisällä olevaan sopivaan kiinteään kantajaan, tai ne voidaan kiinnittää sen pinnalle geelinä, jauheena, rakeina, mikrohelminä, helminä, jne.The carrier device of the invention may be in the form of a strip, tape, film, tube, template, bottle, blotting disc, etc. The various components may be adsorbed or immobilized either directly on the device-forming material or on a suitable solid carrier inside the device, or gel , in powder, granules, microbeads, beads, etc.
10 Välineen ja kiinteiden kantajien tai tukiaineiden valmistusmateriaalit eri reaktiovyöhykkeissä voivat olla samoja tai erilaisia. Esimerkkejä sopivista materiaaleista ja kantajista ovat lasi, silikan johdannaiset, paperi tai selluloosan johdannaiset, metallit, polymee-15 rit, kuten polyvinyylikloridi, polystyreeni, polybutadieeni, nylon, polyakryyliamidit, metakrylaatit, jne., polysakkaridit tai polyolit, tärkkelys, ihmisen tai eläimen stabiloidut punaiset verisolut, epäorgaaniset aineet kuten BaS04, Ti02, kaoliini, piimää, jne. Tämä väline on mielellään läpikuultamatonta materiaalia lukuunottamatta määritys-20 vyöhykettä, joka on läpinäkyvä.The materials of manufacture of the device and the solid carriers or excipients in the different reaction zones may be the same or different. Examples of suitable materials and carriers are glass, silica derivatives, paper or cellulose derivatives, metals, polymers such as polyvinyl chloride, polystyrene, polybutadiene, nylon, polyacrylamides, methacrylates, etc., polysaccharides or polyols, starches, polyols, blood cells, inorganic substances such as BaSO 4, TiO 2, kaolin, diatomaceous earth, etc. This instrument is preferably an opaque material except for the assay-20 zone, which is transparent.
Sidos, jolla antigeeni tai vasta-aine immobilisoidean mainittuihin materiaaleihin, voidaan saada aikaan fysikaalisin tai kemiallisin menetelmin (esteri- tai amidisidoksena, jne.), kuten US-patenttijul-25 kaisussa 4 003 988 sekä seuraavissa julkaisuissa esitetään: B.K. Van Weemen ja A.H.W. Schuurs, Febs Letters - Voi. 15, No. 3 - June, 1971, sivut 232-5; P. Leinikki ja Suvi Passila, J. Clin. Path., 1976, 29, sivut 1116-20; B.R. Brodeur, F.E. Ashton et B.B. Diena, The Journal of Medical Micorbiology - Voi. 15, No. 1, 1981, sivut 1-9; A. Voller 1., 30 D.E. Bidwell 2, A. Bartlett 2, D.G. Fleck 3, M. Perkins 3 ja B. Olade-hin 3, J. Clin. Path., 1976, 29, sivut 150-3: Howard H. Weetall, Immobilized Enzymes, Antigens, Antibodies, and Peptides - Vol. 1.The bond by which the antigen or antibody immobilizes said materials can be obtained by physical or chemical methods (ester or amide bond, etc.), as disclosed in U.S. Patent 4,003,988 and the following publications: B.K. Van Weemen and A.H.W. Schuurs, Febs Letters - Vol. 15, no. 3 - June, 1971, pages 232-5; P. Leinikki and Suvi Passila, J. Clin. Path., 1976, 29, pages 1116-20; B. R. Brodeur, F.E. Ashton et B.B. Day, The Journal of Medical Micorbiology - Vol. 15, no. 1, 1981, pages 1-9; A. Voller 1., 30 D.E. Bidwell 2, A. Bartlett 2, D.G. Fleck 3, M. Perkins 3 and B. Olade-hin 3, J. Clin. Path., 1976, 29, pages 150-3: Howard H. Weetall, Immobilized Enzymes, Antigens, Antibodies, and Peptides - Vol.
Immobilisoimattomien komponenttien sitominen adsorboimalla tapahtuu 35 toisaalta tunnettujen tekniikoiden mukaisesti, ja se on hyvin tunnettua affiniteettikromatografian alalla.Binding of non-immobilized components by adsorption, on the other hand, is performed according to known techniques and is well known in the field of affinity chromatography.
6 851946 85194
Sekä immobilisoidut että entsyymillä merkityt, keksinnössä käyttökelpoiset vasta-aineet voivat olla polyklonaalisia tai monoklonaa-lisia, kokonaisia vasta-aineita tai niiden kappaleita, joista mainittakoon esimerkiksi Fab' ja F(ab')2. Ne voivat mahdollisesti olla seok-5 sena keskenään ja ne voivat olla spesifisiä antigeenin yhdelle tai useammalle aktiiviselle kohdalle.Both immobilized and enzyme-labeled antibodies useful in the invention may be polyclonal or monoclonal antibodies, whole antibodies, or fragments thereof, such as Fab 'and F (ab') 2. They may optionally be in admixture with each other and may be specific for one or more active sites of the antigen.
Antigeenien tai vasta-aineiden merkitseminen entsyymillä voidaan toteuttaa tunnetuilla tekniikoilla, esimerkiksi niillä, jotka esitetään 10 edellä mainitussa julkaisussa "Enzyme Immunoassay", käyttäen mitä tahansa sellaista entsyymiä, joka tuottaa värireaktion substraatin kanssa, ja niistä voidaan mainita esimerkkeinä peroksidaasi, alkalinen fosfataasi, β-galaktosidaasi ja muut vastaavat. Tällaiset entsyymit voidaan konjugoida esimerkiksi glutaraldehydin, dimaleimidin sekä 15 niiden estereiden kanssa noudattaen tekniikoita, jotka kuvataan edellä mainitun julkaisun "Enzyme Immunoassay" sivuilla 54-113.Enzyme labeling of antigens or antibodies can be accomplished by known techniques, for example, those disclosed in the aforementioned Enzyme Immunoassay, using any enzyme that produces a color reaction with a substrate, and include, for example, peroxidase, alkaline phosphatase, β- galactosidase and the like. Such enzymes can be conjugated to, for example, glutaraldehyde, dimaleimide, and their esters following the techniques described on pages 54-113 of the aforementioned "Enzyme Immunoassay".
Sekä vasta-aineet että antigeenit voidaan kiinnittää kantajaan asettamatta rajoituksia niiden määrille, jotka voivat vaihdella joka ta-20 pauksessa alueella 1-10 mg/cm2, riippuen kyseessä olevasta analyyy-sistä, edellyttäen ainoastaan, että immobilisoitua komponenttia ja entsyymillä merkittyä komponenttia tulisi olla läsnä vähintään stökio-metrisesti yhtäsuuret määrät. Kuten edellä mainittiin, kvantitatiivinen määritys on mahdollinen siten, että kehittyneen värin voimakkuus 25 määritetään joko mielivaltaisella tavalla tai käyttäen sopivaa laitetta heijastumisen mittaamiseksi.Both antibodies and antigens can be attached to the carrier without limiting their amounts, which can vary in any case from 1 to 10 mg / cm 2, depending on the assay in question, provided only that the immobilized component and the enzyme-labeled component should be present. at least stoichiometrically equal amounts. As mentioned above, the quantitative determination is possible by determining the intensity of the color developed either arbitrarily or using a suitable device for measuring the reflection.
Lopuksi, alussa tai keskivaiheilla sijaitseva erotusvyöhyke voi koostua yksinomaan sellaisesta materiaalista, joka kykenee toimimaan kro-30 matografisena kantajana, ja jonka pinnalle voidaan adsorboida etukä teen aineita, jotka poistavat tehokkaasti tunnistavaa reaktiota häiritseviä yhdisteitä. Näin ollen keksinnössä voidaan käyttää: ionin-vaihtohartseja raskasmetallien kelatoimiseksi; immobilisoituja entsyymejä urean tai muiden metaboliittien hajottamiseksi; antiproteiinin 35 vasta-aineita albumiinin poistamiseksi; vasta-aineita, jotka ovat spesifisiä määritettävän antigeenin kaltaisille molekyyleille, jne.Finally, the separation zone at the beginning or in the middle stages may consist exclusively of a material capable of acting as a Kro-30 matrix carrier, on the surface of which substances can be adsorbed in advance which effectively remove compounds which interfere with the recognition reaction. Thus, the invention may use: ion exchange resins to chelate heavy metals; immobilized enzymes to degrade urea or other metabolites; antiprotein 35 antibodies to remove albumin; antibodies specific for molecules such as the antigen to be determined, etc.
7 851947 85194
Edellä kuvatun menetelmän ja välineen avulla keksinnössä saadaan aikaan keino monien erilaisten kliinisten parametrien määrittämiseksi yksinkertaisesti, nopeasti ja täsmällisesti. Näistä parametreistä voidaan mainita esimerkiksi peptidihormonit, kuten HCG, LH, steroidi -5 hormonit kuten progesteroni, estroni-glukuronidi, pregnanedioli-gluku-ronidi, sekä muut klinisesti hyvin mielenkiintoiset parametrit, kuten streptolysiini, immuuniglobuliinit, virukset, kuten herpes-virukset, HTLV-3-virus, jne. Tämän lisäksi samaan kantajaan voidaan kiinnittää useita entsyymillä merkittyjä antigeenejä ja/tai vasta-aineita yhdessä 10 vastaavien immobilisoitujen vasta-aineiden ja/tai antigeenien kanssa, jolloin lukuisia kliinisiä parametrejä voidaan määrittää samanaikaisesti, kun eri vyöhykkeissä on läsnä vastaava määrä kromogeenisia substraatteja, jotka tuottavat mielellään eri värejä reagoidessaan entsyymillä merkittyjen eri kompleksien kanssa.By means of the method and apparatus described above, the invention provides a means of determining many different clinical parameters in a simple, rapid and accurate manner. These parameters include, for example, peptide hormones such as HCG, LH, steroid -5 hormones such as progesterone, estrone glucuronide, pregnanediol glucuronide, as well as other clinically very interesting parameters such as streptolysin, immunoglobulins, viruses such as herpes viruses, HTLV 3 virus, etc. In addition, multiple enzyme-labeled antigens and / or antibodies can be attached to the same carrier together with 10 corresponding immobilized antibodies and / or antigens, allowing numerous clinical parameters to be determined simultaneously when a corresponding amount is present in different zones. chromogenic substrates that preferably produce different colors when reacting with different enzyme-labeled complexes.
1515
Liitteenä olevissa piirustuksissa, jotka esittävät kaavamaisesti keksinnön eräitä edullisia suoritusmuotoja keksintöä millään tavalla rajoittavina esimerkkeinä, symboli tarkoittaa antigeeniä; symboli 0””0 esittää immobilisoitua antigeeniä; symboli (y*'"' ^ 20 esittää entsyymiin konjugoitua antigeeniä, kun taas symbolit ) (' )—O')— esittävät samalla tavalla vastaa vasti vasta-ainetta, immobilisoitua vasta-ainetta sekä entsyymiin konjugoitua vasta-ainetta. Lopuksi, symboli l·· tarkoittaa kromogeenista substraattia, (^J·—tarkoittaa immobilisoitua 25 vastavasta-ainetta, ja nuoli esittää järjestelmään johdetun nesteen kulkusuuntaa.In the accompanying drawings, which schematically illustrate some preferred embodiments of the invention as limiting examples in any way, the symbol denotes an antigen; the symbol 0 ”” 0 represents immobilized antigen; the symbol (y * '"' ^ 20 represents the antigen conjugated to the enzyme, while the symbols (') -O') - similarly represent the corresponding antibody, the immobilized antibody and the antibody conjugated to the enzyme. Finally, the symbol l ·· denotes a chromogenic substrate, (^ J · —means immobilized antibody, and the arrow indicates the direction of flow of the fluid introduced into the system.
Mainituissa piirustuksissa: 30 Kuvio 1 esittää kaavamaisesti järjestelmää, joka mahdollistaa keksinnön erään suoritusmuodon mukaisesti antigeenin määrittämisen, ja siihen kuuluva kantaja (liuska, putki tai muu väline) käsittää ensimmäisen vyöhykkeen, joka sisältää määritettävälle antigeenille spesifisen, entsyymillä merkityn vasta-aineen, ensimmäisen vyöhykkeen vieressä 35 sijaitsevan toisen vyöhykkeen, joka sisältää immobllisoidun antigeenin, ja jota seuraa erotusvyöhyke ja lopuksi vyöhyke, jonka pinnalle on kiinnitetty kromogeeninen substraatti. Kun kantajana käytetään 8 85194 putkea, niin sen päät voidaan sulkea huokoisilla septumeilla.In said drawings: Figure 1 schematically shows a system for determining antigen according to an embodiment of the invention, and a carrier (strip, tube or other device) comprising a first zone containing an enzyme-labeled antibody specific for the antigen to be determined, adjacent to the first zone. 35, which contains an immobilized antigen, followed by a separation zone and finally a zone to which a chromogenic substrate is attached. When 8 85194 tubes are used as a carrier, its ends can be closed with porous septa.
Kuvio 2 esittää sitä tapausta, jossa määritetään vasta-aine. Tässä suoritusmuodossa, toisin kuin edellisessä tapauksessa, biologinen 5 neste saatetaan valumaan alaspäin nuolen osoittamaan suuntaan, jolloin se joutuu peräjälkeen kosketuksiin ensin entsyymillä merkityn antigeenin kanssa, sitten immobilisoidun vasta-aineen kanssa ja viimeksi kromogeenisen substraatin kanssa, jota substraattia voidaan lisätä järjestelmän pohjalta ulostulevaan liuokseen sen sijaan, että se olisi 10 adsorboitu kiinteään kantajaan.Figure 2 shows the case where the antibody is determined. In this embodiment, unlike the previous case, the biological five liquid is caused to flow downward direction of the arrow, so that it must successively into contact first with the enzyme labeled antigen, then the immobilized antibody and the last of the chromogenic substrate with which the substrate can be added into the output of the system give a solution of the instead of being adsorbed on a solid support.
Kuvio 3 esittää kuvion 1 mukaisessa tapauksessa eri liikkumisvaiheita niissä olosuhteissa, kun koe on positiivinen (+) tai negatiivinen (-) (eli kun kyseistä antigeeniä on läsnä tai se puuttuu).Figure 3 shows, in the case of Figure 1, the different stages of movement under the conditions when the test is positive (+) or negative (-) (i.e. when the antigen in question is present or absent).
1515
Kuvio 4 esittää toista, kuvion 1 kaltaista suoritusmuotoa, josta se eroaa siinä suhteessa, että immobilisoitu antigeeni on agglutinoitu etukäteen entsyymillä merkityn vasta-aineen kanssa; näin ollen biologisessa nesteessä mahdollisesti läsnäoleva antigeeni kilpailee immo-20 bilisoidun antigeenin kanssa merkityn vasta-aineen vapauttamiseksi, jolloin tämä viimeksi mainittu voi kulkeutua kromogeenista substraattia kohden.Figure 4 shows another embodiment similar to Figure 1, differing in that the immobilized antigen is pre-agglutinated with an enzyme-labeled antibody; thus, any antigen present in the biological fluid competes with the immobilized antigen to release the labeled antibody, the latter being able to migrate toward the chromogenic substrate.
Kuvio 5 esittää lisämuunnosta antigeenien määrittämiseen sopivasta 25 menetelmästä. Tässä tapauksessa kantajan käsittämä ensimmäinen vyöhyke sisältää entsyymillä merkityn antigeenin, kantajan käsittämään toiseen vyöhykkeeseen on adsorboitu vastaavaa vasta-ainetta, ja kolmas vyöhyke sisältää immobilisoitua vastavasta-ainetta (esimerkiksi Sepharose-proteiini-A tai anti-IgC, joka on sidottu yhdisteeseen PVC), joita 30 seuraa jälleen kromogeeninen substraatti; Tässäkin tapauksessa ainoastaan kilpailu biologisessa nesteessä läsnäolevan vapaan antigeenin kanssa saa aikaan sen, että entsyymillä merkitty antigeeni saavuttaa substraatin, kun taas vasta-aineen ja antigeenin välinen kompleksi pysyy kiinnittynnenä vasta-vasta-aineeseen.Figure 5 shows a further modification of a suitable method for the determination of antigens. In this case, the first zone comprising the carrier contains an enzyme-labeled antigen, the corresponding antibody is adsorbed to the second zone comprising the carrier, and the third zone contains an immobilized antibody (e.g., Sepharose protein A or anti-IgC bound to PVC) which 30 is again followed by a chromogenic substrate; Again, only competition with the free antigen present in the biological fluid causes the enzyme-labeled antigen to reach the substrate, while the complex between the antibody and the antigen remains attached to the antibody.
Kuviot 6a ja 6b esittävät erityyppisen välineen poikkileikkausta ja tasokuvaa ylhäältäpäin katsoen. Väline käsittää kantavan liuskan 2, 35 9 85194 jossa on reikiä 1, joiden läpi neste voi kulkea, sekä läpäisemättömän läpinäkyvän päällyksen 3, joka tekee mahdolliseksi kromogenia sisältävän kerroksen 4 visuaalisen tarkastelun. Tässä tapauksessa väri voidaan arvioida joko näköhavainnon perusteella, kun määritys on kva-5 litatiivinen, tai heijastusmittarilla, kun määritys on kvalitatiivinen.Figures 6a and 6b show a cross-section and a plan view of a different type of device seen from above. The device comprises a support strip 2, 35 9 85194 with holes 1 through which the liquid can pass, and an impermeable transparent cover 3 which allows a visual inspection of the chromogen-containing layer 4. In this case, color can be assessed either by visual observation when the assay is kva-5 litative, or by a reflectometer when the assay is qualitative.
Esitettyjen suoritusmuotojen tarkoitus on yksinomaan havainnollistaa keksinnön periaatteita sitä millään tavalla rajoittamatta. Näin ollen, 10 esimerkiksi, erillisten vyöhykkeiden koko voi vaihdella kulloinkin kyseessä olevassa tapauksessa, ja nämä koot ovat yleensä muutamasta millimetristä muutamaan senttimetriin. Ohessa ei myöskään kuvata tiettyjä yksityiskohtia, jotka tekevät keksinnön mukaisen kantajan käyttökelpoisemmaksi. Näistä yksityiskohdista voidaan mainita kantajan kan-15 nattimet, välineet biologisen nesteen ottamiseksi (imemällä), merkinnät, jotka osoittavat kantajan sen puolen tai pään, johon biologista nestettä laitetaan, väriasteikot, jotka on sijoitettu kromogeenista substraattia sisältävien vyöhykkeiden yhdelle puolelle, jne.The embodiments shown are intended solely to illustrate the principles of the invention without limiting it in any way. Thus, for example, the size of the discrete zones may vary from case to case, and these sizes are generally from a few millimeters to a few centimeters. Also, certain details that make the carrier of the invention more useful are not described below. These details may be mentioned the applicant's kan-bearing members 15, means for receiving a biological fluid (aspiration), markings that indicate the applicant's side or the head to which the biological fluid is put, color gamut, which is disposed on one side of the zone containing the chromogenic substrate, etc.
20 Keksinnön mukaiset välineet voivat olla myös sellaisia symmetrisiä välineitä, joiden kumpaankin päähän on sisällytetty entsyymillä merkittyä komponenttia, ja jossa näiden päiden jälkeen seuraavat edellä kuvatut peräkkäiset vyöhykkeet, millä estetään se, ettei nestettä laitettaisi välineeseen epäasianmukaisesti. Tämän lisäksi kodeissa 25 käyttöä ajatellen väline voidaan tehdä yksinkertaisesti pakatuiksi kompakseiksi yksiköiksi, jotka ovat tarvittaessa steriilejä, stabiileja, olosuhteisiin mukautettuja, jne.The devices according to the invention can also be symmetrical devices in which an enzyme-labeled component is incorporated at each end, and in which these ends are followed by the successive zones described above, thus preventing the liquid from being improperly introduced into the device. In addition, for use in homes 25, the device can be made into simply packaged compact units that are sterile, stable, adapted to the conditions, etc., if necessary.
Edellä esitetyn perusteella on selvää, että keksinnön mukainen mene-30 telmä ja väline ovat hyvin monipuolisia ja käytännöllisiä, ja että niitä voidaan käyttää monissa erilaisissa kliinisissä analyyseissa ilman erityistä laitteistoa tai tarpeellisia toimenpiteitä. Tämän lisäksi, ja ennen kaikkea, niiden avulla analyysitulokset saadaan lyhyessä, tavallisesti minuutteina laskettavassa ajassa.From the foregoing, it is clear that the method and device of the invention are very versatile and practical, and that they can be used in a wide variety of clinical assays without special equipment or necessary procedures. In addition, and above all, they provide analytical results in a short time, usually in minutes.
Keksintöä selitetään edelleen käyttäen apuna seuraavaa esimerkkiä, joka ei pyri rajoittamaan millään tavalla keksinnön henkeä tai tavoitteita .The invention is further explained with the aid of the following example, which is not intended to limit in any way the spirit or objects of the invention.
35 10 85 1 9435 10 85 1 94
ESIMERKKIEXAMPLE
a. Yhdisteeseen PVC immobilisoidun HCG:n valmistaminen 5 100 grammaa yhdistettä PVC, jonka hiukkaskoko on 200 μ, käsitellään 37 °C.n lämpötilassa yli yön HCG-liuoksessa, jonka pitoisuus on 50 yksikköä/ml, ja joka on valmistettu fosfaattipuskuriin, pH 7,2. Pinnoitettu polymeeri pestään viidesti samalla puskurilla, ja sitä kuivataan 37 eC:n lämpötilassa 10 tuntia.a. Preparation of HCG immobilized on PVC 5,100 grams of PVC with a particle size of 200 μ are treated overnight at 37 ° C in a solution of 50 units / ml in HCG prepared in phosphate buffer, pH 7.2. . The coated polymer is washed five times with the same buffer and dried at 37 ° C for 10 hours.
10 b. Peroksidaasilla merkityn anti-HCG:n valmistus10 b. Preparation of peroxidase-labeled anti-HCG
Kaniinista saatu anti-HCG (10 ml) saostetaan kolmeen kertaan 18-pro-senttisella vedettömällä natriumsulfaatilla, ja tuote otetaan talteen 15 10 millilitrasta tislattua vettä kunkin saostuskerran jälkeen. Tämän jälkeen tuotetta dialysoidaan yksi yö +4 eC:n lämpötilassa pitoisuudeltaan 10 mmol olevaa fosfaattipuskuria, pH 7,2, vastaan.Anti-HCG from rabbit (10 ml) is precipitated three times with 18% anhydrous sodium sulfate, and the product is recovered from 10 ml of distilled water after each precipitation. The product is then dialyzed overnight at +4 ° C against 10 mmol phosphate buffer, pH 7.2.
Dialysoitua liuosta käsitellään 100 milligrammalla peroksidaasia RZ 20 3.00 ja 25 millilitralla 25-prosenttista glutaraldehydiä 48 tunnin ajan +4 °C:n lämpötilassa. Liuos eluoidaan Sephadex G150-geelin läpi, joka geeli on tasapainotettu natriumkloridilla, 50 mmol. Eluoitua . . anti-HCG:n ja peroksidaasin välistä kompleksia voidaan säilyttää -20 °C:n lämpötilassa.The dialyzed solution is treated with 100 milligrams of peroxidase RZ 20 3.00 and 25 milliliters of 25% glutaraldehyde for 48 hours at + 4 ° C. The solution is eluted through a Sephadex G150 gel equilibrated with sodium chloride, 50 mmol. Elute. . the complex between anti-HCG and peroxidase can be stored at -20 ° C.
25 c. Merkityn, kantajaan adsorboidun vasta-aineen valmistus 50 grammaa lasia käsitellään 5 millilitralla anti-HCG:n ja peroksidaasin välistä kompleksia, joka on laimennettu suhteessa 1:500 fosfaatti-30 puskuriin, 10 mmol, pH 7,2, ja tuotetta kuivataan yön yli ____ 37 °C:n lämpötilassa.25 c. Preparation of Labeled Antibody Adsorbed on Carrier 50 grams of glass is treated with 5 ml of anti-HCG-peroxidase complex diluted 1: 500 in phosphate-30 buffer, 10 mmol, pH 7.2, and the product is dried overnight ____ At 37 ° C.
d. Kantajaan adsorboidun kromopeenin valmistus ' : 35 50 grammaa lasia käsitellään 50 milligrammalla tetrametyylibentsi- diiniä, joka on liuotettu 5 millilitraan DMSO-vettä.d. Preparation of chromopene adsorbed on a carrier: 35 50 grams of glass are treated with 50 milligrams of tetramethylbenzidine dissolved in 5 ml of DMSO water.
i Π 85194 e. Kolonnin täyttämineni Π 85194 e. Filling the column
Lasikolonni (sisähalkaisija 3,5 mm, korkeus 15 cm) täytetään pohjasta huippuun seuraavilla materiaaleilla: adsorboitu anti-HCG-peroksidaasi, 5 immobilisoitu HCG, adsorboitu kromogeeni, joita valmistettiin edellä.The glass column (inner diameter 3.5 mm, height 15 cm) is packed from bottom to top with the following materials: adsorbed anti-HCG peroxidase, immobilized HCG, adsorbed chromogen prepared above.
Lasikolonnin molemmat päät suljetaan pumpulilla tai sopivilla huokosilla tulpilla.Both ends of the glass column are closed with a cotton ball or suitable porous plugs.
10 f. Analyysin toteuttaminen10 f. Performing the analysis
Edellä kuvattu kolonni saatetaan kosketuksiin analysoitavan virtsan kanssa, joka virtsa nousee kolonnissa ylöspäin kapillaarivoimien seurauksena. Mikäli virtsassa on läsnä yhdistettä HCG, se sitoutuu kolon-15 nin ensimmäisen osan sisältämään anti-HCG-peroksidaasiin; jatkaessaan nousemista kolonnissa se ei tuota enää agglutinaatioreaktiota kolonnin toisen osan sisältämän immobilisoidun HCG:n kanssa, vaan se jatkaa kulkuaan ylöspäin kolonnin viimeiseen osaan, jonka sisältämä kromo-geeninen substraatti muodostaa sinistä väriainetta reagoidessaan ent-20 syymin kanssa. Kerrostekokeen tapauksessa kompleksi sidotaan spesifisesti vyöhykkeeseen (c) immunokemiallisella reaktiolla, ja sininen väri saadaan kehittymään entsyymin ja kromogeenisen substraatin välisen reaktion seurauksena, ja tämä sininen väri määritetään vyöhykkeessä (c). Toisaalta, mikäli virtsassa ei ole läsnä yhdistettä HCG, niin 25 kolonnin ensimmäisen osan anti-HCG-peroksidaasi liikkuu vapaasti ylöspäin ja saavuttaa kolonnissa immobilisoitua HCG:tä sisältävän vyöhykkeen, joka immobilisoitu HCG sitoo anti-HCG-peroksidaasin immunoke-miallisen reaktion seurauksena, jolloin se ei voi saavutaa kromogee-nista substraattia. Tällöin ei kehity väriä. Kerrostekokeen tapaukses-30 sa anti-HCG-peroksidaasi ei sitoudu vyöhykkeeseen (c), vaan huuhtoutuu siitä, jolloin väriä ei myöskään kehity.The column described above is contacted with the urine to be analyzed, which urine rises in the column as a result of capillary forces. If HCG is present in the urine, it binds to the anti-HCG peroxidase contained in the first part of the column; as it continues to rise in the column, it no longer produces an agglutination reaction with the immobilized HCG contained in the second part of the column, but continues to travel upwards to the last part of the column, which contains a chromogenic substrate forming a blue dye upon reaction with the ent-20 enzyme. In the case of the layer assay, the complex is specifically bound to zone (c) by an immunochemical reaction, and a blue color is induced as a result of the reaction between the enzyme and the chromogenic substrate, and this blue color is determined in zone (c). On the other hand, if HCG is not present in the urine, the anti-HCG peroxidase of the first part of the column 25 moves freely upwards and reaches the zone containing immobilized HCG in the column, which immobilized HCG binds the anti-HCG peroxidase as a result of the immunochemical reaction. cannot reach a chromogenic substrate. In this case, no color develops. In the case of the stratification test, the anti-HCG peroxidase does not bind to zone (c), but is leached from it, so that no color develops either.
Edellä kuvattua prosessia voidaan myös soveltaa alaspäin valuvaan nesteeseen perustuviin järjestelmiin.The process described above can also be applied to downflow-based systems.
3535
Claims (18)
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
IT19443/85A IT1200382B (en) | 1985-02-08 | 1985-02-08 | DETECTION AND / OR DOSAGE SYSTEM OF CLINICAL PARAMETERS BY IMMUNO ENZYMATIC ROUTE |
IT1944385 | 1985-02-08 | ||
PCT/EP1986/000055 WO1986004683A1 (en) | 1985-02-08 | 1986-02-02 | Determination of clinical parameters by enzyme immunoprocess |
EP8600055 | 1986-02-02 |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI873398A FI873398A (en) | 1987-08-05 |
FI873398A0 FI873398A0 (en) | 1987-08-05 |
FI85194B true FI85194B (en) | 1991-11-29 |
FI85194C FI85194C (en) | 1992-03-10 |
Family
ID=11158028
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI873398A FI85194C (en) | 1985-02-08 | 1987-08-05 | Determination of clinical parameters using an enzymatic immunoprocess |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0243370A1 (en) |
JP (1) | JPS62501989A (en) |
AU (1) | AU5511886A (en) |
DD (1) | DD245727A5 (en) |
ES (5) | ES8802256A1 (en) |
FI (1) | FI85194C (en) |
HU (1) | HUT56632A (en) |
IT (1) | IT1200382B (en) |
MW (1) | MW5287A1 (en) |
OA (1) | OA08640A (en) |
RO (1) | RO100056A2 (en) |
WO (1) | WO1986004683A1 (en) |
Families Citing this family (26)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4806311A (en) * | 1985-08-28 | 1989-02-21 | Miles Inc. | Multizone analytical element having labeled reagent concentration zone |
US4959305A (en) * | 1986-06-18 | 1990-09-25 | Miles Inc. | Reversible immobilization of assay reagents in a multizone test device |
CA1289872C (en) * | 1986-06-18 | 1991-10-01 | David L. Woodrum | Reversible immobilization of assay reagents in a multizone test device |
ES2004066A6 (en) * | 1987-01-21 | 1988-12-01 | Euro Fassel Aktiebolag | A kit for qualitative and quantitative analysis of antigens, antibodies and/or microorganisms or other cells |
AU592174B2 (en) * | 1987-02-17 | 1990-01-04 | Genesis Labs, Inc. | Immunoassay test strip |
AU586552B2 (en) * | 1987-02-25 | 1989-07-13 | Genesis Labs, Inc. | Dry test strip for devices using oxygen demanding detection system |
EP0291194B8 (en) * | 1987-04-27 | 2003-10-22 | Inverness Medical Switzerland GmbH | Immunoassays and devices therefor |
US5641639A (en) * | 1987-04-29 | 1997-06-24 | Celltech Therapeutics Limited | Binding assay device |
WO1988008536A1 (en) * | 1987-04-29 | 1988-11-03 | Boots-Celltech Diagnostics Limited | Binding assay device |
IT1223295B (en) * | 1987-08-14 | 1990-09-19 | Boehringer Biochemia Srl | IMMUNODIAGNOSTIC DEVICE AND METHOD |
FR2621393B1 (en) * | 1987-10-05 | 1991-12-13 | Toledano Jacques | DEVICE FOR IMMUNOENZYMATIC DETECTION OF SUBSTANCES FROM A DROP OF BLOOD OR LIQUID FROM ANY BIOLOGICAL MEDIUM |
US5039607A (en) * | 1988-05-17 | 1991-08-13 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Method for immunochromatographic analysis |
US5334513A (en) * | 1988-05-17 | 1994-08-02 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Method for immunochromatographic analysis |
US5338513A (en) * | 1988-07-30 | 1994-08-16 | Boehringer Mannheim Gmbh | Test carrier for the analytical determination of a component of a liquid sample |
FR2634891B1 (en) * | 1988-08-01 | 1994-05-06 | Biotrol Laboratoires | METHOD AND DEVICE FOR THE QUALITATIVE AND / OR QUANTITATIVE DETERMINATION OF A LIGAND IN A FLUID |
US5079174A (en) * | 1988-12-08 | 1992-01-07 | Boehringer Mannheim Corporation | Apparatus for sequential determination of an analyte in a fluid sample |
DE3842702A1 (en) * | 1988-12-19 | 1990-06-21 | Boehringer Mannheim Gmbh | TEST CARRIER FOR ANALYTICAL EXAMINATION OF A SAMPLING LIQUID WITH THE AID OF A SPECIFIC BINDING REACTION OF TWO BIOAFFIN BINDING PARTNERS AND A CORRESPONDING TEST PROCEDURE |
GB8903627D0 (en) * | 1989-02-17 | 1989-04-05 | Unilever Plc | Assays |
EP0588958A1 (en) * | 1991-06-13 | 1994-03-30 | Pacific Biotech Inc. | Assay for the detection of specific ligands |
DE4121493A1 (en) * | 1991-06-28 | 1993-01-07 | Draegerwerk Ag | ANALYSIS DEVICE FOR THE QUANTITATIVE, IMMUNOLOGICAL DETERMINATION OF POLLUTANTS |
FI92882C (en) * | 1992-12-29 | 1995-01-10 | Medix Biochemica Ab Oy | Disposable test strip and process for its manufacture |
FR2725023B1 (en) * | 1994-09-28 | 1997-01-31 | Gks Technologies | DIRECT DIAGNOSIS OF HAPTENES |
JP3010699U (en) * | 1994-10-29 | 1995-05-02 | 株式会社ニッポンジーン | Chromatographic inspection device capable of direct urine collection |
FR2917171A1 (en) * | 2007-06-07 | 2008-12-12 | Biosynex Sarl | Detection of molecule of interest e.g. peptide in liquid sample by contacting the sample with first antibody, contacting the antibody with marked conjugate, contacting the first antibody with second antibody, and analysis of test zone |
CN102095860B (en) * | 2011-01-25 | 2013-12-18 | 厦门大学附属中山医院 | Syphilis specific IgG antibody western blot kit and preparation method thereof |
EP4062066A1 (en) | 2019-11-22 | 2022-09-28 | Nano Scale Machining GmbH | Fluid machine, in particular hydraulic machine |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2644249A1 (en) * | 1976-09-30 | 1978-04-06 | Abbott Lab | Reactive, stable metal and organic cpd. compsns. - comprising metal surface coated with polymer and coupled to enzymes, protein(s) etc. |
US4320111A (en) * | 1977-06-14 | 1982-03-16 | American Home Products Corporation | Immunologic compositions methods of preparation and use |
US4189304A (en) * | 1978-10-27 | 1980-02-19 | Miles Laboratories, Inc. | Device and method for detecting myoglobin |
US4331650A (en) * | 1980-07-18 | 1982-05-25 | Science Research Center, Inc. | Identification of reagins in the blood serum of allergen sensitized vertebrates |
JPS5818167A (en) * | 1981-07-24 | 1983-02-02 | Fuji Photo Film Co Ltd | Analyzing film and analysis using said film |
US4446232A (en) * | 1981-10-13 | 1984-05-01 | Liotta Lance A | Enzyme immunoassay with two-zoned device having bound antigens |
US4447546A (en) * | 1982-08-23 | 1984-05-08 | Myron J. Block | Fluorescent immunoassay employing optical fiber in capillary tube |
EP0149168B1 (en) * | 1983-12-19 | 1991-04-24 | Daiichi Pure Chemicals Co. Ltd. | Immunoassay |
-
1985
- 1985-02-08 IT IT19443/85A patent/IT1200382B/en active
-
1986
- 1986-02-02 WO PCT/EP1986/000055 patent/WO1986004683A1/en active IP Right Grant
- 1986-02-02 JP JP61501288A patent/JPS62501989A/en active Pending
- 1986-02-02 HU HU862003A patent/HUT56632A/en unknown
- 1986-02-02 AU AU55118/86A patent/AU5511886A/en not_active Abandoned
- 1986-02-02 EP EP86901372A patent/EP0243370A1/en not_active Withdrawn
- 1986-02-05 DD DD86286799A patent/DD245727A5/en not_active IP Right Cessation
- 1986-02-07 ES ES551760A patent/ES8802256A1/en not_active Expired
-
1987
- 1987-07-17 MW MW52/87A patent/MW5287A1/en unknown
- 1987-07-22 OA OA59169A patent/OA08640A/en unknown
- 1987-08-05 FI FI873398A patent/FI85194C/en not_active IP Right Cessation
- 1987-08-13 ES ES557662A patent/ES8900067A1/en not_active Expired
-
1988
- 1988-01-11 RO RO131733A patent/RO100056A2/en unknown
- 1988-01-15 ES ES557803A patent/ES8802259A1/en not_active Expired
- 1988-01-15 ES ES557802A patent/ES8802258A1/en not_active Expired
- 1988-02-01 ES ES557818A patent/ES8802260A1/en not_active Expired
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0243370A1 (en) | 1987-11-04 |
AU5511886A (en) | 1986-08-26 |
WO1986004683A1 (en) | 1986-08-14 |
HUT56632A (en) | 1991-09-30 |
ES557802A0 (en) | 1988-04-16 |
ES8802260A1 (en) | 1988-04-16 |
FI873398A (en) | 1987-08-05 |
OA08640A (en) | 1988-11-30 |
ES551760A0 (en) | 1988-04-16 |
ES8900067A1 (en) | 1988-11-16 |
ES8802256A1 (en) | 1988-04-16 |
FI85194C (en) | 1992-03-10 |
ES8802259A1 (en) | 1988-04-16 |
JPS62501989A (en) | 1987-08-06 |
ES8802258A1 (en) | 1988-04-16 |
ES557803A0 (en) | 1988-04-16 |
ES557818A0 (en) | 1988-04-16 |
DD245727A5 (en) | 1987-05-13 |
RO100056B1 (en) | 1990-10-30 |
FI873398A0 (en) | 1987-08-05 |
MW5287A1 (en) | 1988-11-09 |
ES557662A0 (en) | 1988-11-16 |
IT8519443A0 (en) | 1985-02-08 |
IT1200382B (en) | 1989-01-18 |
RO100056A2 (en) | 1991-03-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI85194B (en) | Determination of clinical parameters by means of an enzymatic immunoprocess | |
EP0349215B1 (en) | Method and cell for detection | |
US5780308A (en) | Calibration reagents for semiquanitative binding assays and devices | |
US6287875B1 (en) | Internally referenced competitive assays | |
US6737278B1 (en) | Ligand binding assay and kit with a separation zone for disturbing analytes | |
US4948726A (en) | Enzyme immunoassay based on membrane separation of antigen-antibody complexes | |
EP0466914B1 (en) | Immunochromatographic assay and method of using same | |
US5958790A (en) | Solid phase transverse diffusion assay | |
US5126241A (en) | Process for the determination of a specifically bindable substance | |
US5474902A (en) | Semi-permeable capillary assay device | |
EP0303110A2 (en) | Immunodiagnostic device and method | |
CA2669667C (en) | Saturation assay | |
US6689317B1 (en) | Immunoassay apparatus for diagnosis | |
CA2172993A1 (en) | Interrupted-flow assay device | |
EP0279097A2 (en) | Immunoassay test strip | |
EP0297292A2 (en) | Method and test device for separating labeled reagent in an immunometric binding assay | |
EP0207152B1 (en) | Solid phase diffusion assay | |
US7919331B2 (en) | Chromatographic test strips for one or more analytes | |
WO1987007384A1 (en) | Enzyme immunoassay device | |
JPH0772152A (en) | Specific binding assay method and element of analysis | |
EP0362284A1 (en) | Multiple antigen immunoassay | |
AU703940B2 (en) | Regenerable solid phase for carrying out specific binding reactions | |
KR100193267B1 (en) | Immune membrane strips and methods of making the same | |
AU2003200222B2 (en) | Ligand binding assay and kit with a separation zone for disturbing analytes | |
JPS60127462A (en) | Enzymatic immune measuring method |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM | Patent lapsed |
Owner name: BOEHRINGER BIOCHEMIA ROBIN S.P.A. |