FI77045C - FOERGRENADE AMIDER AV L-ASPARTYL-D-AMINOSYRAPEPTIDER. - Google Patents
FOERGRENADE AMIDER AV L-ASPARTYL-D-AMINOSYRAPEPTIDER. Download PDFInfo
- Publication number
- FI77045C FI77045C FI812268A FI812268A FI77045C FI 77045 C FI77045 C FI 77045C FI 812268 A FI812268 A FI 812268A FI 812268 A FI812268 A FI 812268A FI 77045 C FI77045 C FI 77045C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- amide
- aspartyl
- acid
- mixture
- formula
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
1 77045 L-aspartyyli-D-aminohappo-dipeptidien sivuketjuisia amideja1,77045 Side chain amides of L-aspartyl-D-amino acid dipeptides
Keksintö koskee uusia L-aspartyyli-D-aminohappo-dipeptidiamideja, joilla on kaava IThe invention relates to novel L-aspartyl-D-amino acid dipeptide amides of the formula I
5 O5 O
NH2 ,|NH2, |
Ac^nyc\Ac ^ nyc \
f II f NHR If II f NHR I
COOH 0 RCOOH 0 R
10 ja niiden suoloja. Nämä L-aspartyyli-D-seriinin ja L-as-partyyli-D-O-metyyliseriinin amidit ovat erityisen käyttökelpoisia voimakkaiden makeutusominaisuuksiensa vuoksi ja niitä voidaan käyttää elintarvikkeissa ja komponentteina 15 syötäviksi kelpaavissa yhdistelmissä.10 and their salts. These amides of L-aspartyl-D-serine and L-as-partyl-D-O-methylserine are particularly useful due to their strong sweetening properties and can be used in foods and as edible combinations in components.
US-patenttijulkaisussa 3 492 131 L-aspartyyli-L-fenyylialaniinin tiettyjen alempi alkyyliesterien todettiin olevan jopa 200 kertaa makeampia kuin sakkaroosi ja niiltä puuttui oleellisilta osiltaan katkerat makuvivah-20 teet, jotka olivat aikaisempien keinotekoisten makeutusai-neiden, kuten sakkariinin heikkouksia. Näiden yhdisteiden stabilisuuden todettiin myöhemmin olevan vain rajoitettua vesiseoksissa, johtuen diketopiperatsiinin muodostumisesta erityisesti neutraaleissa - happamissa pH-olosuhteissa, 25 jotka ovat yleisiä useimmissa elintarvikeseoksissa.U.S. Patent 3,492,131 found that certain lower alkyl esters of L-aspartyl-L-phenylalanine were up to 200 times sweeter than sucrose and substantially lacked the bitter flavors that were weaknesses of previous artificial sweeteners, such as saccharin. The stability of these compounds was later found to be limited only in aqueous mixtures, due to the formation of diketopiperazine, especially under the neutral-acidic pH conditions common in most food mixtures.
Mazur et al.f J. Med. Chem. 16 (1973), s. 1284 ovat esittäneet, että L-aspartyyli-D-alaniinin alempi alkyyliesterien ja eräiden niiden homologien, erityisesti L-aspartyyli-D-alaniini-isopropyyliesterin, makeutustehot 30 ovat enintään 125-kertaiset sakkaroosiin verrattuna.Mazur et al., J. Med. Chem. 16 (1973), p. 1284 have reported that the lower alkylation efficiencies of L-aspartyl-D-alanine lower alkyl esters and some of their homologues, especially L-aspartyl-D-alanine isopropyl ester, are up to 125 times that of sucrose.
Sukehiro et ai., Seikatsu Kagaku, 11 (1977), ss.Sukehiro et al., Seikatsu Kagaku, 11 (1977), p.
9 - 16; Chem. Abstr. 87 (1977), s. 16840h, ovat esittäneet tiettyjä L-aspartyyli-D-alaniinin amideja, joilla on kaava9 - 16; Chem. Abstr. 87 (1977), p. 16840h, have disclosed certain amides of L-aspartyl-D-alanine having the formula
35 ?H2 B35? H2 B
f ^ p ^ NHR1 I II CH-f ^ p ^ NHR1 I II CH-
COOH O JCOOH O J
2 77045 jossa R1 on metyyli, etyyli, n-propyyli, isopropyyli, n-butyyli, isobutyyli, sekundäärinen butyyli, sykloheksyyli tai glysiinin, D-alaniinin tai L-alaniinin metyyliesterin hiilitähde. Voimakkaimpia yhdisteitä olivat yhdisteet, 5 joissa R·*" on jokin edellä mainituista butyyliryhmistä tai sykloheksyyli, ja joiden makeus on vastaavasti 100 - 125-ja 100-kertainen sakkaroosiin verrattuna. Koska n-butyyli-amidin todettiin olevan 125 kertaa makeampi kuin sakkaroosi ja isobutyyliamidi ja sekundäärinen butyyliamidiovat 10 100 kertaa sakkaroosia makeampia, pääteltiin, että näiden amidien tehokkuuteen vaikuttaa pääasiallisesti alkyyliryh-mässä R*· olevien hiiliatomien lukumäärä, ja että alkyyli-ryhmän rakenneisomerismillä on vähäinen vaikutus makeutus-tehoon.2,77045 wherein R 1 is methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, secondary butyl, cyclohexyl or a carbon residue of methyl ester of glycine, D-alanine or L-alanine. The strongest compounds were those in which R · * "is one of the above-mentioned butyl groups or cyclohexyl and have a sweetness of 100 to 125 and 100 times that of sucrose, respectively. Since n-butylamide was found to be 125 times sweeter than sucrose and isobutylamide and secondary butylamides are 10,100 times sweeter than sucrose, it was concluded that the efficiency of these amides is mainly affected by the number of carbon atoms in the alkyl group R * · and that the structural isomerism of the alkyl group has little effect on the sweetening power.
15 Ariyoshi et ai., Bull. Chem. Soc. Japan 47 (1974), s. 326 ovat todenneet L-aspartyyli-D-seriinin ja L-aspar-tyyli-D-treoniinin esterien olevan makeampia kuin vastaavat L-aspartyyli-D-alaniinin ja vastaavasti L-aspartyyli-D-2-aminovoihapon esterit. Voimakkain näistä estereistä, 20 L-aspartyyli-D-seriini-N-propyyliesteri, oli 320 kertaa makeampi kuin 5 %:n sakkaroosistandardi.15 Ariyoshi et al., Bull. Chem. Soc. Japan 47 (1974), p. 326 have found that the esters of L-aspartyl-D-serine and L-aspartyl-D-threonine are sweeter than those of L-aspartyl-D-alanine and L-aspartyl-D-2-, respectively. aminobutyric acid esters. The strongest of these esters, 20 L-aspartyl-D-serine-N-propyl ester, was 320 times sweeter than the 5% sucrose standard.
US-patenttijulkaisussa 3 971 822 esitetään L-aspar-tyyli-D-alaninolin ja karboksyylihappojen estereitä, mukaan luettuina 2-metyylivoihapon, syklopropaanikarboksyy-25 lihapon, syklobutaanikarboksyylihapon ja 2-metyylisyklo-butaanikarboksyylihapon estereitä. Nämä syklopropaani- ja syklobutaanikarboksyylihappojen esterit olivat vastaavasti 200 ja 220 kertaa sakkaroosia makeampia. 2-metyylisyklobu-taanikarboksyylihapon esteri oli ainoastaan 160 kertaa sak-30 karoosia makeampi. Lisäksi esitetään vastaavat L-aspartyy-li-D-serinoliesterit, joista makein, propionihapon esteri, on 160 kertaa sakkaroosia makeampi.U.S. Patent No. 3,971,822 discloses esters of L-aspartyl-D-alaninol and carboxylic acids, including esters of 2-methylbutyric acid, cyclopropanecarboxylic acid, cyclobutanecarboxylic acid, and 2-methylcyclobutanecarboxylic acid. These esters of cyclopropane and cyclobutanecarboxylic acids were 200 and 220 times sweeter than sucrose, respectively. The ester of 2-methylcyclobutanecarboxylic acid was only 160 times sweeter than sucrose. In addition, the corresponding L-aspartyl-D-serinol esters are shown, of which the sweetest, propionic acid ester, is 160 times sweeter than sucrose.
US-patenttijulkaisuissa 3 959 245 ja 3 907 766 esitetään, vastaavasti, L-aspartyyliaminomalonihappometyy-35 li-2-metyylisykloheksyyli-diesteri ja vastaava alkyyli- fenkyyli-diesteri. Edellisen ilmoitetaan olevan 6600 kertaa sakkaroosia makeamman, jälkimmäisen 4200 - 33000 kertaa sakkaroosia makeamman. Tähän liittyvässä keksijän jul- 3 77045 kaisussa, Chem. Pharm. Bull. 24 (1976), s. 2112 esitetään sarja L-aspartyyliaminomalonihappo-diestereitä, toisen es-teriryhmistä ollessa metyyli tai etyyli ja toisen ollessa jokin erilaisista sivuketjuisista alkyyli- ja sykloalkyy-5 liryhmistä.U.S. Patent Nos. 3,959,245 and 3,907,766 disclose, respectively, L-aspartylaminomalonic acid methyl-2β-methylcyclohexyl diester and the corresponding alkylphenyl diester. The former is reported to be 6,600 times sweeter than sucrose, the latter 4,200 to 33,000 times sweeter than sucrose. In a related inventive publication, 3,77045, Chem. Pharm. Bull. 24 (1976), p. 2112 discloses a series of L-aspartylaminomalonic acid diesters, one of the ester groups being methyl or ethyl and the other being one of the various side chain alkyl and cycloalkyl groups.
Vireillä olevassa FI-patenttihakemuksessamme 810148 on todettu, että ei ainoastaan amidi-substituentin koolla ole ratkaisevaa merkitystä L-aspartyyli-D-alaniini-amidien korkealle makeutusasteelle, vaan päinvastoin ratio kaiseva merkitys on amidi-substituentin R täsmällisellä avaruudellisella sijoittumisella. Tietyillä L-aspartyyli-D-alaniini-amideilla, joissa on sivuketju Qi-hiiliatomin kohdalla (hiiliatomi, jossa on amidi-typpiatomi) ja sivu-ketju myös uudelleen toisen tai kummankin /4- ja /iV-hii-15 liatomin kohdalla, todettiin olevan merkittäviä etuja.In our pending FI patent application 810148, it has been stated that not only the size of the amide substituent is crucial for the high degree of sweetening of L-aspartyl-D-alanine amides, but on the contrary the exact spatial arrangement of the amide substituent R is crucial. Certain L-aspartyl-D-alanine amides having a side chain at the Qi carbon atom (a carbon atom having an amide nitrogen atom) and a side chain also at the other or both β and β-carbon-15 liatoms were found to have significant benefits.
Tämä keksintö kohdistuu uusiin kaavan I mukaisiin sivuketjuisiin L-aspartyyli-D-seriini- ja L-aspartyy-li-D-O-metyyliseriini-dipeptidien amideihin, joilla on odottamattoman korkea makeutusteho ja joilta puuttuvat ei-20 toivottavat makuvivahteet tavanomaisin määrin käytettäes sä. Niiden stabilisuuden on todettu olevan yllättävän hyvän sekä kiinteässä muodossa että vesiseoksissa pH-rajois-sa, jotka vallitsevat useimmissa elintarvikeseoksissa normaalia korkeammissakin lämpötiloissa, joita käytetään lei-25 vonnassa ja tavanomaisessa elintarvikkeiden jatkokäsitte lyssä.This invention relates to novel side chains of the amides of L-aspartyl-D-serine and L-aspartyl-D-O-methylserine dipeptides of formula I which have an unexpectedly high sweetening power and lack undesirable flavors when used in conventional amounts. Their stability has been found to be surprisingly good both in solid form and in aqueous mixtures at the pH ranges prevailing in most food mixtures even at higher than normal temperatures used in Lei-25 formulation and conventional food processing.
Keksinnön mukaiset uudet yhdisteet ovat L-aspar-tyyli-D-aminohappo-dipeptidiamideja, joilla on kaava IThe novel compounds of the invention are L-aspartyl-D-amino acid dipeptide amides of formula I
30 MH O30 MH O
Γ2 ilΓ2 il
I li I NHRI li I NHR
COOH Q Ra ja niiden fysiologisesti hyväksyttäviä kationi- ja happo-additiosuoloja, jossa kaavassa Ra on CI^OH tai Ct^OCH^, 35 4 77045 R on di-isopropyylikarbinyyli, disyklopropyylikarbinyyli tai ryhmä, jolla on kaava (a) tai (b) ^ 3 R H C CH3 ,ί> '> 10 H3C CH3 (a) (b) 3 6 joissa ryhmät R ja R merkitsevät alkyyliä, jossa on 15 1-4 hiiliatomia, ja X on S tai SO-, jolloin hiiliato- 3 6 ^ mien summa ryhmissä R ja R ei ole suurempi kuin 6.COOH Q Ra and their physiologically acceptable cationic and acid addition salts, wherein Ra is Cl 2 OH or C 1-4 OCH 2, R 4 77045 R is diisopropylcarbinyl, dicyclopropylcarbinyl or a group of formula (a) or (b) ^ 3 RHC CH3, ί> '> 10 H3C CH3 (a) (b) 3 6 in which the groups R and R denote alkyl having 1 to 4 carbon atoms and X is S or SO-, in which case the carbon atom the sum of the values in groups R and R does not exceed 6.
Keksinnön piiriin sisällytetään myös seokset, jotka sisältävät kaavan I mukaisia L-aspartyyli-D-amino-happoamideja, joissa toinen tai kumpikin aspartyyli- tai 20 toinen aminohappo (s.o. seriini tai O-metyyliseriini)-ryhmistä on raseeminen.Also included within the scope of the invention are compositions comprising L-aspartyl-D-amino acid amides of formula I wherein one or both of the aspartyl or other amino acid (i.e., serine or O-methylserine) groups is racemic.
Kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa aspartyyli-osa on pelkästään D-konfiguraatiota vastaava tai toinen aminohappo-osa on pelkästään L-konfiguraatiota vastaava, 25 ovat vain hiukan makeita tai eivät ole lainkaan makeita.The compounds of the formula I in which the aspartyl moiety corresponds exclusively to the D-configuration or the other amino acid moiety corresponds exclusively to the L-configuration are only slightly sweet or not sweet at all.
Erityisen ensisijaisen kaavan I mukaisten L-as-partyyli-D-aminohappoamidien ryhmän muodostavat yhdisteet, joissa R on asyklinen ryhmä, joka on di-isopropyylikarbinyyli.A particularly preferred group of L-as-partyl-D-amino acid amides of formula I are those compounds wherein R is an acyclic group which is diisopropylcarbinyl.
30 Toisen erityisen ensisijaisen kaavan I mukaisten L-aspartyyli-D-aminohappoamidien ryhmän muodostavat yhdisteet, joissa R on ryhmä, jolla on kaava (a) tai (b).Another particularly preferred group of L-aspartyl-D-amino acid amides of formula I are those compounds wherein R is a group of formula (a) or (b).
Erityisen ensisijaisia kaavan I mukaisia amideja ovat L-aspartyyli-D-seriini-amidit, s.o. yhdisteet, jois-35 sa Ra on Cl^OH.Particularly preferred amides of formula I are L-aspartyl-D-serine amides, i. compounds in which Ra is 35 Cl 2 OH.
5 770455,77045
Erityisen ensisijaisia ovat kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa:Particularly preferred are compounds of formula I wherein:
Ra on CH2OH ja R on disyklopropyylikarbinyyli, 2,2,4,4-tetrametyyliti-5 etan-3-yyli, 2,2,4,4-tetrametyyli-l,l-dioksoetan-3-yyli; ja yhdisteet, joissa:Ra is CH2OH and R is dicyclopropylcarbinyl, 2,2,4,4-tetramethylthi-5-ethan-3-yl, 2,2,4,4-tetramethyl-1,1-dioxoetan-3-yl; and compounds in which:
Ra on CH2OCH3 ja R on 2,2,4,4-tetrametyylitietan-3-yyli tai 2,2,4,4-tetra-metyyli-1,l-dioksoetan-3-yyli; 10 joiden makeutustehot ovat 200 - 1200 kertaiset sakkaroosiin nähden.Ra is CH2OCH3 and R is 2,2,4,4-tetramethylethan-3-yl or 2,2,4,4-tetramethyl-1,1-dioxoetan-3-yl; 10 with a sweetening power of 200 to 1200 times that of sucrose.
Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää seoksissa, jotka on tarkoitettu syötäväksi kelpaavien aineiden makeuttamiseen, jotka seokset sisältävät makeuttavan mää-15 rän kaavan I mukaista yhdistettä ja myrkytöntä kantajaa. Erityisen ensisijaisia ovat seokset, jotka sisältävät L-aspartyyli-D-seriini-N-(disyklopropyylikarbinyyli)amidia, L-aspartyyli-D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrametyylitietan-3-yyli)amidia, jälkimmäisen 1,1-dioksojohdannaista.The compounds of formula I may be used in compositions for sweetening edible substances which contain a sweetening amount of a compound of formula I and a non-toxic carrier. Particularly preferred are mixtures containing L-aspartyl-D-serine-N- (dicyclopropylcarbinyl) amide, L-aspartyl-D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethylethan-3-yl) amide, the latter 1,1-dioksojohdannaista.
20 Lisäksi kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan käyt tää seoksissa, jotka on tarkoitettu syötäviksi kelpaavien aineiden makeuttamiseen ja jotka sisältävät makeuttavan määrän kaavan I mukaisen yhdisteen ja sakkariinin tai sen fysiologisesti hyväksyttävän suolan seosta.In addition, the compounds of the formula I can be used in mixtures for sweetening edible substances and containing a sweetening amount of a mixture of a compound of the formula I and saccharin or a physiologically acceptable salt thereof.
25 Erityisen edullisia sellaisia seoksia ovat seok set, joiden mainitussa kaavan I mukaisessa yhdisteessä Ra on CH2OH ja R on disyklopropyylikarbinyyli, 2,2,4,4-tetra-metyylitietan-3-yyli tai 2,2,4,4-tetrametyyli-l,1-diokso-tietan-3-yyli. Erityisen ensisijaisia ovat L-aspartyyli-D-30 seriini-N-(2,2,4,4-tetrametyylitietan-3-yyli)amidin ja mainitun sakkariinin seokset, erityisesti sellaiset, joissa mainittua yhdistettä ja mainittua sakkariinia on läsnä painosuhteessa 1:1 - 1:8.Particularly preferred mixtures are those wherein in said compound of formula I Ra is CH2OH and R is dicyclopropylcarbinyl, 2,2,4,4-tetramethylethan-3-yl or 2,2,4,4-tetramethyl-1-yl. 1-dioxo-TietäNet-3-yl. Particularly preferred are mixtures of L-aspartyl-D-30 serine-N- (2,2,4,4-tetramethylethan-3-yl) amide and said saccharin, especially those in which said compound and said saccharin are present in a weight ratio of 1: 1. - 1: 8.
Fysiologisesti hyväksyttävillä sakkariinin suo-35 loilla tarkoitetaan sakkariinin suoloja fysiologisesti hyväksyttävien kationien kanssa, kuten esim. natrium-, kalium-, kalsium- tai ammoniumsuoloja.By physiologically acceptable salts of saccharin is meant salts of saccharin with physiologically acceptable cations, such as, for example, sodium, potassium, calcium or ammonium salts.
6 770456 77045
Keksinnön mukaisten yhdisteiden fysiologisesti hyväksyttävillä kationisuoloilla tarkoitetaan suoloja, jotka on muodostettu neutraloimalla kaavan I mukaisten yhdisteiden vapaa karboksyylihapporyhmä fysiologisesti hyväk-5 syttävillä metalli-, ammonium ja amiiniemäksillä. Esimerkkejä sellaisista metalleista ovat N-metyyliglukamiini ja etanoliamiini.By physiologically acceptable cationic salts of the compounds according to the invention are meant salts formed by neutralizing the free carboxylic acid group of the compounds of the formula I with physiologically acceptable metal, ammonium and amine bases. Examples of such metals are N-methylglucamine and ethanolamine.
Termillä fysiologisesti hyväksyttävät happoaddi-tiosuolat tarkoitetaan suoloja, jotka on muodostettu kaa-10 van I mukaisen yhdisteen vapaan aminoryhmän ja fysiologisesti hyväksyttävän hapon kesken. Esimerkkejä sellaisista hapoista ovat etikkahapoo, bentsoehappo, bromivetyhappo, kloorivetyhappo, sitruunahappo, fumaarihappo, glukonihap-po, maitohappo, maleiinihappo, maliinihappo, typpihappo, 15 fosforihappo, sokerihappo, roeripihkahappo ja viinihappo.The term physiologically acceptable acid addition salts refers to salts formed between the free amino group of a compound of formula I and a physiologically acceptable acid. Examples of such acids are acetic acid, benzoic acid, hydrobromic acid, hydrochloric acid, citric acid, fumaric acid, gluconic acid, lactic acid, maleic acid, malic acid, nitric acid, phosphoric acid, sugar acid, and succinic acid.
Termi "karbinyyli" tarkoittaa tässä käytettynä ryhmää -CH-. Täten esimerkiksi di-isopropyylikarbinyyli on ryhmä (i-C^H.^ 2-CH- ja disyklopropyylikarbinyyliamiini on (Δ)2chnh2.The term "carbinyl" as used herein, means -CH-. Thus, for example, diisopropylcarbinyl is a group (i-C 1 H 2 -CH- and dicyclopropylcarbinylamine is (Δ) 2chnh 2.
20 Uusia kaavan I mukaisia dipeptidiamideja valmis tetaan mukavasti menetelmin, jotka soveltuvat aminohappojen kytkemiseen. Ensisijainen menetelmä kaavan I mukaisten peptidiamidien valmistamiseksi on hahmoteltu seuraa-vassa: NHQ Ra _/ , »* (1) kondensointi L' f\ * b-nh2c«coor11 πro—►The novel dipeptide amides of the formula I are conveniently prepared by methods suitable for the coupling of amino acids. The preferred process for the preparation of peptide amides of formula I is outlined as follows: NHQ Ra _ /, »* (1) condensation L 'f \ * b-nh2c« coor11 πro — ►
C00RiU COOHC00RiU COOH
tai karboksyyli-aktivoitu johdannainenor a carboxyl-activated derivative
.-^NH0 Ra /—<-NHQ.- ^ NH0 Ra / - <- NHQ
4θ \ /k RNH? \ X4θ \ / k RNH? \ X
COOR COHN ^ ^COOH-► COOR10 C0HN^>«C0NHRCOOR COHN ^ ^ COOH- ► COOR10 C0HN ^> «C0NHR
(11) y'' (III) / suojauksen poisto (I) 7 77045(11) y '' (III) / deprotection (I) 7 77045
Edellä esitetyissä L-aspartiinihappojohdannaisissa Q on jokin hyvin tunnetuista aminosuojaryhmistä, jotka voidaan poistaa selektiviisesti, kuten ryhmistä, joita on selostettu artikkelissa Boissonnas, Advances in Or-5 ganic Chem., 3 (1963), ss. 159 - 190. Erityisen ensisijaisia amino-suojaryhmiä ovat bentsyylioksikarbonyyli ja tert-butyylioksikarbonyyli. R^ on edullisesti alkyyliryhmä, jossa on 1 - 4 hiiliatomia tai bentsyyli. Käytettävä D-se-riini tai D-O-metyyliseriini voi olla vapaan aminohapon 10 muodossa, jossa on vety, mutta lähinnä se on karboksyy- lisuojattu johdannainen, jossa R^ voi olla esteriryhmän tähde, kuten metyyli tai etyyli, mutta on suositeltavimmin silyyliryhmä, kuten trialkyylisilyyli, jossa on 3 - 12 hiiliatomia. Erityisen ensisijainen sellainen ryhmä on tri-15 metyylisilyyli, taloudellisuutensa ja tehokkuutensa vuoksi.In the above L-aspartic acid derivatives, Q has one of the well-known amino protecting groups that can be selectively removed, such as those described in Boissonnas, Advances in Or-5 ganic Chem., 3 (1963), p. 159-190. Particularly preferred amino protecting groups are benzyloxycarbonyl and tert-butyloxycarbonyl. R 1 is preferably an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms or benzyl. The D-serine or DO-methylserine used may be in the form of the free amino acid 10 with hydrogen, but is essentially a carboxyl-protected derivative wherein R 1 may be a residue of an ester group such as methyl or ethyl, but is most preferably a silyl group such as trialkylsilyl with 3 to 12 carbon atoms. A particularly preferred such group is tri-15 methylsilyl, due to its economy and efficiency.
Edellä esitetyn reaktiosarjän ensimmäisessä vaiheessa di-suojattu L-aspartiinihappo kondensoidaan sopivan D-aminohapon tai karboksisuojatun johdannaisen kanssa, jolloin saadaan kaavan II mukaista di-suojattua dipeptidiä.In the first step of the above reaction sequence, the di-protected L-aspartic acid is condensed with the appropriate D-amino acid or carboxy-protected derivative to give the di-protected dipeptide of formula II.
20 Joskin tämä vaihe voidaan suorittaa di-suojattua aspartii-nihappoa käyttäen kondensointiaineiden, kuten esim. disyk-loheksyylikarbodi-imidin läsnäollessa, suositeltavampaa on käyttää di-suojatun aspartiinihapon <2-karboksyyli-akti-voitua johdannaista. Ensisijaisia sellaisia karboksyyli-25 aktivoituja johdannaisia ovat kloridi, bromidi, anhydridi tai seka-anhydridi. Tehokkuuden kannalta erityisen ensisijaisia ovat edellä mainittujen di-suojattujen L-aspartiinihappo jen seka-anhydridit kloorikarboksyylihapon esterien, erityisesti alkyyliesterien kanssa, joiden mainitussa al-30 kyylissä on 1 - 4 hiiliatomia. Ensisijaisimpia seka-anhyd-ridejä ovat taloudellisista syistä anhydridit, jotka on valmistettu kloorikarboksyylihapon metyyli- ja etyylieste-reistä.Although this step can be performed using di-protected aspartic acid in the presence of condensing agents such as dicyclohexylcarbodiimide, it is more preferable to use a <2-carboxyl-activated derivative of di-protected aspartic acid. Preferred such carboxyl-25 activated derivatives are chloride, bromide, anhydride or mixed anhydride. Particularly preferred for efficiency are the mixed anhydrides of the above-mentioned di-protected L-aspartic acids with chlorocarboxylic acid esters, in particular alkyl esters having 1 to 4 carbon atoms in said alkyl. For economic reasons, the most preferred mixed anhydrides are anhydrides prepared from methyl and ethyl esters of chlorocarboxylic acid.
Eräässä ensisijaisessa menetelmässä kaavan I mu-35 kaisten yhdisteiden valmistamiseksi yiS-bentsyyli-N-bents-yylioksikarbonyyli-L-aspartiinihapon annetaan reagoida etyylikloorikarbonaatin kanssa vastaavan seka-anhydridin muodostamiseksi alalla tunnetuin menetelmin. D-aminohappo, 8 77045In a preferred process for the preparation of compounds of formula I, γ-benzyl-N-benzyloxycarbonyl-L-aspartic acid is reacted with ethyl chlorocarbonate to form the corresponding mixed anhydride by methods known in the art. D-amino acid, 8,77045
RaCH(Nt^JCOOH, jota saadaan kaupallisista lähteistä tai hajottamalla raseeminen aminohappo tunnetuin menetelmin i(ks. esim. Yamada et ai., J. Org. Chem. 38 (1973), s. 4408?, muutetaan erillisessä astiassa trimetyylisilyyliesteriksi 5 saattamalla aminohappo kosketukseen ekvimolaarimäärän kanssa trimetyylisilyylikloridia reaktion suhteen neutraalin orgaanisen liuottimen läsnäollessa; Ra:n ollessa CH20H käytetään tavallisesti 2 mooliekvivalenttia silyloin-tiainetta. Tähän tarkoitukseen sopivia liuottimia ovat 10 esim. pyridiini, dimetyyliformamidi tai dimetyyliasetami- di, erityisen edullinen on dimetyyliformamidi.RaCH (Nt ^ JCOOH obtained from commercial sources or by decomposition of a racemic amino acid by known methods i (see e.g. Yamada et al., J. Org. Chem. 38 (1973), p. 4408?) Is converted in a separate vessel to trimethylsilyl ester by placing the amino acid contact with an equimolar amount of trimethylsilyl chloride in the presence of a reaction-neutral organic solvent, Ra being CH 2 OH, usually 2 molar equivalents of silylating agent are usually used, suitable solvents for this purpose being e.g. pyridine, dimethylformamide or dimethylformamide, particularly preferred is dimethylformamide.
Tyypillisessä tämän menetelmän mukaisessa reaktiossa D-aminohappo, esim. D-O-metyyliseriini, liuotetaan dimetyyliformamidiin ja ekvimolaarimäärä trimetyylikloori-15 silaania lisätään huoneen lämpötilassa. Erillisessä astiassa /3-bentsyyli-N-bentsyylioksikarbonyyli-L-aspartiinihap-po ja mooliylimäärin happoa sitovaa ainetta, lähinnä tri-etyyliamiinia liuotetaan seokseen, jossa on dimetyyliform-amidia ja tetrahydrofuraania ja huoneen lämpötilassa tai 20 sitä alemmassa lämpötilassa, lähinnä noin -24 - +25°C:ssa ja erityisesti noin -10 - 0°C:ssa lisätään ekvimoolimäärä etyylikloorikarbonaattia, jolloin muodostuu seka-anhydri-diä. Tähän lisätään esim. D-O-metyyliseriini-trimetyyli-silyyliesterin liuos, lämpötilan ollessa lähinnä samoissa 25 rajoissa. Reaktio on tavallisesti päättynyt 1-2 tunnin kuluessa, minkä jälkeen reaktioseos kaadetaan veteen tai hapon vesiliuokseen, esimerkiksi suolahappoon, ja kaavan IE mukainen tuote uutetaan veden kanssa sekoittamattomalla liuottimena, tyypillisesti kloroformilla, metyleeniklori-30 dilla tai etyylieetterillä ja eristetään standardin mukaisin menetelmin. Di-suojattu dipeptidi (II) on tavallisesti riittävän puhdasta käytettäväksi seuraavassa vaiheessa, mutta sitä voidaan haluttaessa puhdistaa edelleen, esim. kroamtografoimalla kolonnissa.In a typical reaction according to this method, a D-amino acid, e.g. D-O-methylserine, is dissolved in dimethylformamide and an equimolar amount of trimethylchloro-15 silane is added at room temperature. In a separate vessel, β-benzyl-N-benzyloxycarbonyl-L-aspartic acid and a molar excess of an acid scavenger, mainly triethylamine, are dissolved in a mixture of dimethylformamide and tetrahydrofuran and at room temperature or below, preferably about -24 to At + 25 ° C, and in particular at about -10 to 0 ° C, an equimolar amount of ethyl chlorocarbonate is added to form mixed anhydride. To this is added, for example, a solution of D-O-methylserine trimethylsilyl ester, the temperature being essentially within the same range. The reaction is usually complete within 1-2 hours, after which the reaction mixture is poured into water or aqueous acid, for example hydrochloric acid, and the product of formula IE is extracted with a water-immiscible solvent, typically chloroform, methylene chloride or ethyl ether and isolated by standard methods. The di-protected dipeptide (II) is usually sufficiently pure for use in the next step, but may be further purified if desired, e.g. by column chromatography.
9 77045 Tämän menetelmän toisessa vaiheessa disuojatun dipeptidin (II) annetaan reagoida ekvimoolimäärän kanssa primääristä amiinia, jonka kaava on RNH2, jolloin saadaan vastaavaa disuojattua dipeptidiamidi-väliyhdis-5 tettä, joka on kaavan (III) mukainen, jossa Ra, R, R10 ja Q ovat aikaisemmin määriteltyjä. Kuten ensimmäisessä vaiheessa reagenssin (II) karboksyylihappomuotoa voidaan käyttää menestyksellisesti käytettäessä kondensointi-aineita, esim. disykloheksyylikarbodi-imidiä, jolloin 10 saadaan kaavan (III) mukaisia väliyhdisteitä. Suositeltavaa on kuitenkin muuttaa kaavan (II) mukainen yhdiste karboksyyli-aktivoiduksi johdannaiseksi, esim. kloridiksi, bromidiksi tai seka-anhydridiksi, jälkimmäisen ollessa ensisijainen. Täten seka-anhydridejä valmistetaan 15 käyttämällä erityisen ensisijaista kaavan (II) mukaista yhdistettä, jossa R10 on bentsyyli ja Q on bentsyyliok-sikarbonyyli. Kuten edellä on mainittu ensisijaisia ovat anhydridit, joita on saatu kloorikarboksyylihapon estereistä ja erityisen ensisijaisia ovat sen metyyli-20 tai etyyliesterit. Yhdisteen (II) seka-anhydridejä valmistetaan käyttämällä reagensseja ja olosuhteita, joita on selostettu edellä tämän reaktiosarjan ensimmäisessä vaiheessa. Tyypillisessä reaktiossa kaavan (II) mukaista yhdistettä ja trietyyliamiinia yhdistetään 25 suunnilleen ekvimoolimäärin reaktion suhteen neutraalissa orgaanisessa liuottimessa, esim. tetrahydrofuraanissa, seos jäähdytetään noin -10°C:seen ja lisätään etyyli-kloorikarbonaattia, jolloin saadaan seka-anhydridiä.In the second step of this process, the disubstituted dipeptide (II) is reacted with an equimolar amount of a primary amine of formula RNH 2 to give the corresponding disubstituted dipeptide amide intermediate of formula (III) wherein Ra, R, R10 and Q are previously defined. As in the first step, the carboxylic acid form of the reagent (II) can be used successfully with the use of condensing agents, e.g. dicyclohexylcarbodiimide, to give intermediates of formula (III). However, it is preferred to convert the compound of formula (II) to a carboxyl-activated derivative, e.g. chloride, bromide or mixed anhydride, the latter being preferred. Thus, mixed anhydrides are prepared using a particularly preferred compound of formula (II) wherein R 10 is benzyl and Q is benzyloxycarbonyl. As mentioned above, anhydrides derived from chlorocarboxylic acid esters are preferred, and its methyl-20 or ethyl esters are particularly preferred. The mixed anhydrides of compound (II) are prepared using the reagents and conditions described above in the first step of this series of reactions. In a typical reaction, a compound of formula (II) and triethylamine are combined in approximately equimolar amounts in a reaction-neutral organic solvent, e.g. tetrahydrofuran, the mixture is cooled to about -10 ° C and ethyl chlorocarbonate is added to give mixed anhydride.
Tähän lisätään sitten ekvimoolimäärä kaavan RNH2 mu-30 kaista amiinia tai sen liuosta, esim. samassa reaktion suhteen neutraalissa liuottimessa ja lämpötilan ollessa rajoissa noin -50 - +25°C, ja lähinnä välillä -35 --5°C. Amiinin lisäyksen päätyttyä reaktioseoksen annetaan lämmetä suunnilleen huoneen lämpötilaan ja sitä 35 pidetään tässä lämpötilassa kunnes reaktio on pääasiallisesti tapahtunut täydellisesti, tavallisesti noin 1-20 10 7 7045 tuntia. Haluttu kaavan (II) mukainen väliyhdiste eristetään sen jälkeen ja puhdistetaan, mikäli halutaan, edellä yhdisteen (II) yhteydessä selostetuin menetelmin.To this is then added an equimolar amount of an amine of formula RNH 2 or a solution thereof, e.g. in the same reaction neutral solvent and at a temperature in the range of about -50 to + 25 ° C, and most preferably between -35 to 5 ° C. After the addition of the amine is complete, the reaction mixture is allowed to warm to approximately room temperature and is maintained at this temperature until the reaction is substantially complete, usually about 1-20 ° C 74545 hours. The desired intermediate of formula (II) is then isolated and, if desired, purified by the methods described above for compound (II).
Tämän menetelmän viimeisessä vaiheessa poistetaan 5 karboksyyli-suojaryhmä, R10 ja amino-suojaryhmä, Q, jolloin saadaan haluttuja kaavan (I) mukaisia makeutusai-neita.In the last step of this process, the carboxyl protecting group, R 10 and the amino protecting group, Q are removed to give the desired sweeteners of formula (I).
Suojaryhmien poistamiseen kaavan (III) mukaisesta dipeptidiamidista valittava menetelmä vaihtelee riip-10 puen joukosta tekijöitä, jotka ovat alan asiantuntijoille ilmeisiä. Kaksi tärkeätä tekijää tällaisen valinnan suorittamiseksi ovat suojaryhmien R^ ja Q luonne, ja amidi-substituentin R luonne. Esimerkiksi kun R"^ ja Q ovat, vastaavasti, erityisen ensisijaisia bentsyyli- ja 15 bentsyylioksikarbonyyli-ryhmiä eikä R:ssä ole rikkiä, ensisijaisena menetelmänä mainittujen suojaryhmien poistamiseksi on tavallisesti hydrogenolyysi. Kuitenkin kun R^ on bentsyyli tai edellä määritelty alkyyli ja Q on tert-butyylioksikarbonyyli ja R:llä on mikä tahan-20 sa edellä mainituista merkityksistä, tavallisesti on suositeltavaa poistaa suojaryhmät hydrolysoimalla. Hydro-lyysin ja hydrogenolyysin yhdistelmä on suositeltava tapauksissa, jolloin R1^* on alkyyli, Q on bentsyylioksi-karbonyyli eikä R:ssä ole rikkiä.The method chosen for the deprotection of a dipeptide amide of formula (III) will vary depending on factors which will be apparent to those skilled in the art. Two important factors for making such a choice are the nature of the protecting groups R 1 and Q, and the nature of the amide substituent R. For example, when R 1 and Q are, respectively, particularly preferred benzyl and benzyloxycarbonyl groups and there is no sulfur in R, the preferred method for removing said protecting groups is usually hydrogenolysis. However, when R 1 is benzyl or alkyl as defined above and Q is tert -butyloxycarbonyl and R has any of the meanings given above, it is usually preferable to remove the protecting groups by hydrolysis.The combination of hydrolysis and hydrogenolysis is preferred in cases where R 1 * is alkyl, Q is benzyloxycarbonyl and R has no sulfur.
25 Kun suojaryhmien poistamiseksi kaavan (III) mu kaisesta väliyhdisteestä valitaan hydrogenolyysi, suositeltavaa on, että reaktio suoritetaan katalyyttisen jalometalli-katalyyttimäärän läsnäollessa, palladiumin ollessa erityisen ensisijainen, ja reaktion suhteen 30 neutraalin liuottimen läsnäollessa. Esimerkkejä sellaisista liuottimista ovat pienimolekyyliset alkanolit, kuten metanoli, etanoli, isopropanoli ja n-butanoli; eetterit, kuten tetrahydrofuraani, etyylieetteri, 1,2-dimetoksietaani ja dietyleeniglykoli-dimetyylieetteri; 35 esterit^kuten etyyliasetaatti, metyylipropionaatti ja dimetyylisukkinaatti; ja dimetyyliformamidi. Erityisen ensisijaisia sellaisia liuottimia ovat metanoli ja eta- 11 77045 noli taloudellisista syistä ja tehokkuudesta johtuen. Joskin hydrogenolyysi voidaan suorittaa menestyksellisesti korkeammissa paineissa ja lämpötiloissa, taloudellisuuden ja mukavuuden kannalta suositeltavaa on 5 käyttää noin 1-10 ilmakehän painetta ja huoneen lämpötilaa. Ensisijaisessa lämpötilassa ja paineessa reaktio on tavallisesti päättynyt noin 30 minuutin - noin 6 tunnin kuluttua, minkä jälkeen katalyytti poistetaan tyypillisesti suodattamalla, liuotin haihdutetaan pois 10 ja saatu tuote puhdistetaan haluttaessa standardin mukaisin menetelmin, esimerkiksi kiteyttämällä uudelleen tai kromatografoimalla kolonnissa.When hydrogenolysis is selected to remove the protecting groups from the intermediate of formula (III), it is preferred that the reaction be carried out in the presence of a catalytic amount of noble metal catalyst, with palladium being particularly preferred, and in the presence of a reaction-neutral solvent. Examples of such solvents include lower alkanols such as methanol, ethanol, isopropanol and n-butanol; ethers such as tetrahydrofuran, ethyl ether, 1,2-dimethoxyethane and diethylene glycol dimethyl ether; Esters such as ethyl acetate, methyl propionate and dimethyl succinate; and dimethylformamide. Particularly preferred such solvents are methanol and ethanol for economic reasons and efficiency. Although hydrogenolysis can be performed successfully at higher pressures and temperatures, for economical and comfort reasons it is advisable to use about 1-10 atmospheric pressure and room temperature. At the preferred temperature and pressure, the reaction is usually complete after about 30 minutes to about 6 hours, after which the catalyst is typically removed by filtration, the solvent is evaporated off and the resulting product is purified, if desired, by standard methods such as recrystallization or column chromatography.
Kun toisen tai kummankin suojaryhmän R10 ja Q poistamiseksi valitaan hydrolyysi, melkoisella menes-15 tyksellä voidaan käyttää mitä tahansa hyvin tunnetuista esterien alkalilla tai hapolla suoritettavista hydro-lysointimenetelmistä ja näiden kaltaisia menetelmiä. Kuitenkin kun suojaryhmät R"^ on poistettava hydrolysoimalla, alkalinen hydrolyysi on ensisijainen, ja eri-20 tyisen ensisijaisia ovat olosuhteet käytettäessä ainakin yhden ekvivalentin verran vahvaa emästä, esim. nat-riumhydroksidia tai kaliumhydroksidia veden ja pienimolekyylisen alkanolin, erityisesti metanolin tai etanolin läsnäollessa huoneen lämpötilassa tai suunnilleen 25 huoneen lämpötilassa. Näissä ensisijaisissa olosuhteissa R^-ryhmän poistuminen hydrolyyttisesti on tavallisesti tapahtunut täydellisesti muutamassa tunnissa tai lyhyemmässä ajassa.When hydrolysis is chosen to remove one or both of the protecting groups R 10 and Q, any of the well-known methods for hydrolyzing esters with alkali or acid and the like can be used with considerable success. However, when the protecting groups R "must be removed by hydrolysis, alkaline hydrolysis is preferred, and conditions using at least one equivalent of a strong base, e.g. sodium hydroxide or potassium hydroxide in the presence of water and a lower alkanol, especially methanol or ethanol at room temperature, are particularly preferred. or at a temperature of about 25. Under these preferred conditions, the hydrolytic removal of the R 1 group is usually complete in a few hours or less.
Kun amino-suojaryhmä Q on tert-butyylioksikarbo-30 nyyli , sen poistamiseen on suositeltavaa käyttää hapolla hydrolysointia. Erityisen suositeltava on laimea kloorivetyhapon vesiliuos metanolin tai etanolin läsnäollessa, ja seoksen lämmittäminen kiehuttaen. Näissä olosuhteissa hydrolyysi on tavallisesti tapahtunut 35 täydellisesti muutamassa tunnissa tai lyhyemmässä ajassa.When the amino protecting group Q is tert-butyloxycarbonyl, it is recommended to use acid hydrolysis to remove it. Particularly preferred is a dilute aqueous solution of hydrochloric acid in the presence of methanol or ethanol, and heating the mixture to boiling. Under these conditions, the hydrolysis is usually complete in a few hours or less.
12 7704512 77045
Millä tahansa edellä mainituista hydrolyysime-netelmistä suoritetun suojaryhmien poistamisen jälkeen kaavan (I) mukaisten tuotteiden eristämiseen käytetään standardin mukaisia alalla tunnettuja menetelmiä.After deprotection of any of the aforementioned hydrolysis methods, standard methods known in the art are used to isolate products of formula (I).
5 Esimerkiksi hapolla hydrolysoinnin jälkeen reaktioseos haihdutetaan kuiviin liuottimen poistamiseksi, vesipitoinen jäännös pestään veden kanssa sekoittumattomalla polaarittomalla liuottimena, esimerkiksi etyylieette-rillä tai kloroformilla, minkä jälkeen vesikerros teh- 10 dään alkaliseksi ja tuote uutetaan veden kanssa sekoittumattomalla liuottimella, kuten esim. etyyliasetaatilla, ja tuote saadaan talteen haihduttamalla liuotin. Haluttaessa tuote voidaan puhdistaa edelleen, esim. kiteyttämällä uudelleen tai kromatografoimalla kolonnissa. Kun 15 suojaryhmän poistamista alkalilla hydrolysoimalla seuraa hydrogenolyysi aminosuojaryhmän Q poistamiseksi, alkalisen hydrolyysin jälkeinen reaktioseos on suositeltavaa neutraloida lisäämällä happoa, esim. suolahappoa, ja neutraloitu reaktioseos hydrogenolysoidaan edel- 20 lä selostetulla tavalla.For example, after hydrolysis with acid, the reaction mixture is evaporated to dryness to remove the solvent, the aqueous residue is washed with a water-immiscible non-polar solvent such as ethyl ether or chloroform, the aqueous layer is made alkaline and the product is extracted with a water-immiscible solvent such as ethyl acetate. recovered by evaporation of the solvent. If desired, the product can be further purified, e.g. by recrystallization or column chromatography. When removal of the protecting group by alkali hydrolysis is followed by hydrogenolysis to remove the amino protecting group Q, it is preferable to neutralize the reaction mixture after alkaline hydrolysis by adding an acid, e.g. hydrochloric acid, and hydrogenate the neutralized reaction mixture as described above.
Toinen ensisijainen menetelmä tämän keksinnön kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi on esitetty alla.Another preferred method of preparing the compounds of formula (I) of this invention is set forth below.
2525
D-QNHCHCOOH + RNH, QNHCHCONHRD-QNHCHCOOH + RNH, QNHCHCONHR
- —► tai karboksyyli-aktivoitu (IV) johdannainen- —► or a carboxyl-activated (IV) derivative
NHQNHQ
30 L /-(30 L / - (
. . . , Ra COOR10 COOH. . . , Ra COOR10 COOH
suoiauksen poisto -►NH2CHCONHR -► (III)—XI) (V) 35 jossa Ra, R, R^ ja Q ovat edellä määriteltyjä.deprotection -►NH2CHCONHR -► (III) -XI) (V) 35 wherein Ra, R, R1 and Q are as defined above.
77045 1377045 13
Amino-suojätun D-aminohapon tai sen karboksyy-li-aktivoidun johdannaisen annetaan reagoida ekvimoo-limäärän kanssa amiinia RNHj käyttämällä menetelmiä ja olosuhteita, joita on selostettu edellä väliyhdis-5 teiden (II) ja (III) valmistamiseksi, jolloin saadaan kaavan (IV) mukaista aminosuojattua D-aminohappoamidia. Suojaryhmä Q poistetaan hydrogenolysoimalla tai hydrolysoimalla edellä selostetulla tavalla ja saatu vapaa aminoamidi (V) kondensoidaan disuojatun L-aspartiini-10 happo-johdannaisen tai sen karboksyyli-aktivoidun joh dannaisen kanssa, kuten edellä on selostettu kaavan (II) mukaisten väliyhdisteiden valmistuksen yhteydessä, jolloin saadaan kaavan (III) mukaista disuojattua dipeptidiamidia, josta haluttua kaavan (I) mukaista 15 makeutusainetta saadaan aikaisemmin selostetulla tavalla .The amino-protected D-amino acid or its carboxyl-activated derivative is reacted with an equimolar amount of the amine RNH 2 using the methods and conditions described above for the preparation of intermediates (II) and (III) to give the compounds of formula (IV). amino-protected D-amino acid amide according to The protecting group Q is removed by hydrogenolysis or hydrolysis as described above, and the resulting free amino amide (V) is condensed with a disprotected L-aspartine-10 acid derivative or a carboxyl-activated derivative thereof as described above for the preparation of intermediates of formula (II) to give a disubstituted dipeptide amide of formula (III) from which the desired sweetener of formula (I) is obtained as previously described.
Tämän menetelmän muunnelmassa kaavan (IV) mukainen väliyhdiste, jonka R:ssä on syklinen sulfidi-ryhmä (—S—), voidaan hapettaa vastaavaksi sulfoniksi ennen sen 20 muuttamista väliyhdisteeksi (V) ja myöhempiä edellä selostettuja reaktioita, jolloin saadaan kaavan I mukaisia yhdisteitä, joissa R:ssä on sulfoniryhmä.In a variation of this process, an intermediate of formula (IV) having a cyclic sulfide group (-S-) in R may be oxidized to the corresponding sulfone prior to conversion to intermediate (V) and subsequent reactions described above to give compounds of formula I, wherein R has a sulfone group.
Kolmannessa ensisijaisessa menetelmässä keksinnön mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi kaavan (V) mu-25 kaisen D-aminohappoamidin, selostettu edellä, annetaan reagoida L-aspartiinihappo-N-tiokarboksianhydridin kanssa, jolloin saadaan suoraan kaavan (I) mukaisia yhdisteitä. Tätä menetelmää suoritettaessa sopivassa liuottimessa oleva väliyhdiste (V) saatetaan kosketuk-30 siin ekvimoolimäärän kanssa L-aspartiinihappo-N-tiokarbok-sianhydridiä pH:n ollessa lievästi alkalinen ja lämpötilan ollessa välillä noin -25 - +10°C, jolloin saadaan kaavan (I) mukaista yhdistettä. Tätä reaktiota varten pH saadaan alkaliseksi vahvan emäksen, esim. natrium-35 hydroksidin tai kaliumkarbonaatin avulla. Tähän reaktioon sopivia liuottimia ovat liuottimet, jotka liuottavat ainakin osan reagensseista käytettävissä reaktio-olosuhteissa reagoimatta kummankaan reagenssin kanssa 14 77045 olennaisessa määrässä ja mahdollistavat reaktiossa muodostuneiden tuotteiden eristämisen suhteellisen helposti. Esimerkkejä tähän reaktioon soveltuvista sellaisista liuottimista ovat vesi, tetrahydrofuraani, 1,2-dime-5 toksietaani, dietyleeniglykoli-dimetyylieetteri, dime-tyylisulfoksidi, dimetyyliformamidi ja niiden yhdistelmät; ensisijaisia liuottimia ovat vesi ja sen seokset tetrahydrofuraanin kanssa. Ensisijainen alkalinen pH-alue tämän reaktion kannalta on noin 8-10, ja eri-10 tyisen ensisijainen pH on noin 9. Erityisen ensisijainen lämpötila on rajoissa noin -10 - 0°C.In a third preferred process for the preparation of the compounds of the invention, the D-amino acid amide of formula (V) described above is reacted with L-aspartic acid-N-thiocarboxyanhydride to give directly the compounds of formula (I). In carrying out this process, intermediate (V) in a suitable solvent is contacted with an equimolar amount of L-aspartic acid-N-thiocarboxyanhydride at a slightly alkaline pH and a temperature between about -25 and + 10 ° C to give the formula (I). ). For this reaction, the pH is made alkaline with a strong base, e.g. sodium hydroxide or potassium carbonate. Suitable solvents for this reaction include solvents which dissolve at least some of the reagents under the reaction conditions used without reacting with either reagent in a substantial amount and allow the products formed in the reaction to be isolated relatively easily. Examples of such solvents suitable for this reaction include water, tetrahydrofuran, 1,2-dimethoxyethane, diethylene glycol dimethyl ether, dimethyl sulfoxide, dimethylformamide, and combinations thereof; the preferred solvents are water and mixtures thereof with tetrahydrofuran. The preferred alkaline pH range for this reaction is about 8-10, and the particularly preferred pH is about 9. The particularly preferred temperature is in the range of about -10 to 0 ° C.
Edellä mainituissa ensisijaisissa olosuhteissa reaktio on tavallisesti tapahtunut loppuun yhden - kahden tunnin kuluessa. Kaavan (I) mukainen tuote eris-15 tetään sitten standardin mukaisin menetelmin, esim., reaktioseoksen pH säädetään tuotteen isoelektriseen pH-arvoon, tavallisesti välille noin 5,0-5,6 kaavan (I) mukaisen tuotteen saostamiseksi, pääosa liuottimesta poistetaan haihduttamalla tai suodattamalla ja raaka 20 aine lietetään orgaaniseen liuottimeen, esim. metano- liin, etanoliin, etyylieetteriin, etyyliasetaattiin tai niiden seoksiin. Kaavan (I) mukainen tuote eristetään sitten, esimerkiksi suodattamalla. Haluttaessa sitä voidaan puhdistaa edelleen, esim. kiteyttämällä uudel-25 leen tai kromatografroimalla kolonnissa.Under the above-mentioned primary conditions, the reaction is usually complete within one to two hours. The product of formula (I) is then isolated by standard methods, e.g. the pH of the reaction mixture is adjusted to the isoelectric pH of the product, usually between about 5.0-5.6 to precipitate the product of formula (I), most of the solvent is removed by evaporation or by filtration and the crude material is slurried in an organic solvent, e.g. methanol, ethanol, ethyl ether, ethyl acetate or mixtures thereof. The product of formula (I) is then isolated, for example by filtration. If desired, it can be further purified, e.g. by recrystallization or column chromatography.
Tämän keksinnön yhdisteiden makeutusteho määritettiin vertaamalla niiden maun makeutta sakkaroosin makeuteen. Kaavan (I) mukaisen yhdisteen vesiliuoksia, laimennettuina sopiviin konsentraatioalueisiin, verta-30 si sakkaroosi-standardiin asiantuntijoista koottu maku-paneeli. Vertailut suoritettiin yleensä käyttämällä sakkaroosin 7-9-prosenttisia vesiliuoksia, so. liuoksia, joissa oli 7-9 g sakkaroosia/100 ml liuosta. Suuremmilla sakkaroosikonsentraatioilla on selvä makuvaikutelma 35 suussa, joka voi vaikuttaa tuloksiin ja pienemmät sak- karoosikonsentraatiot eivät viittaa normaaleihin käyttötilanteisiin. Jos esimerkiksi 0,014-prosenttinen kaavan (I) mukaisen yhdisteen liuos arvioidaan yhtä makeaksi 15 77045 kuin 7 %:inen sakkaroosi liuos, silloin tuon yhdisteen makeutusteho on 7/0,014 = 500 x sakkaroosin makeutusteho. Kaikki tässä mainitut makeutusteho-arvot, jotka on saatu tämän keksinnön yhdisteillä, määritettiin tällä 5 menetelmällä. Kynnyskonsentraatioiden kohdalla (so.The sweetening power of the compounds of this invention was determined by comparing their taste sweetness to sucrose sweetness. Aqueous solutions of a compound of formula (I), diluted to appropriate concentration ranges, a blood-sucrose standard, a panel of flavors assembled by experts. Comparisons were generally made using 7-9% aqueous solutions of sucrose, i. solutions of 7-9 g sucrose / 100 ml solution. Higher sucrose concentrations have a clear taste effect in the mouth, which can affect the results, and lower sucrose concentrations do not indicate normal use. For example, if a 0.014% solution of a compound of formula (I) is estimated to be as sweet as a 7% sucrose solution, then the sweetening power of that compound is 7 / 0.014 = 500 x the sucrose sweetening power. All sweetening power values mentioned herein obtained with the compounds of this invention were determined by this method. For threshold concentrations (ie
pienin konsentraatio, jolloin makeus ensin havaittiin, joka sakkaroosin osalta on tavallisesti konsentraatio-alueessa 2-3 %) makeutusaineen, kuten keksinnön yhdisteiden, teho on yleensä kaksi kertaa suurempi kuin se, 10 mikä havaitaan verrattaessa sen maun makeutta 7-9%:isiin sakkaroosiliuoksiin.the lowest concentration at which sweetness was first observed, which for sucrose is usually in the concentration range of 2-3%), the potency of a sweetener, such as the compounds of the invention, is generally twice as high as that observed when comparing sweetness to 7-9% sucrose solutions. .
Tarvittavat amiinit, jotka ovat kaavan RNH2 mukaisia, jossa R on aikaisemmin määritelty, ovat joko kaupan olevia tai niitä voidaan saada helposti saatavista 15 lähtöyhdisteistä. Esimerkiksi 2-alkyylisykloheksyyli- amiineja ja 2,6-dialkyylisykloheksyyliamiineja voidaan saada hydraamalla katalyyttisesti vastaavia alkyyli-subs-tituoituja aniliineja. Monia amiineista saadaan pelkisty s aminoima 11a vastaavasta ketonista käyttämällä eri-20 laisia alalla tunnettuja olosuhteita. Esimerkiksi voi daan käyttää pelkistysaminointia hyvin tunnetun Leuckhart-reaktion yhteydessä käyttämällä pelkistysaineina muurahaishappoa ja formamidia, katso esimerkiksi selostusta Organic Reactions, Wiley and Sons, New York, Vol. 5, 25 s. 301, 1949. Vaihtoehtoisesti sopiva ketoni voidaan pelkistysaminoida käyttämällä natriumsyaaniboorihydri-diä ja ammoniumasetaattia, katso esim. J.Amer. Chem.The required amines of formula RNH2, wherein R is as previously defined, are either commercially available or can be obtained from readily available starting compounds. For example, 2-alkylcyclohexylamines and 2,6-dialkylcyclohexylamines can be obtained by catalytic hydrogenation of the corresponding alkyl-substituted anilines. Many of the amines are reduced to the aminated 11a from the corresponding ketone using a variety of conditions known in the art. For example, reduction amination can be used in connection with the well-known Leuckhart reaction using formic acid and formamide as reducing agents, see, for example, Organic Reactions, Wiley and Sons, New York, Vol. 5, 25, 301, 1949. Alternatively, a suitable ketone can be reduced amine using sodium dic and ammonium acetate, see, e.g., J. Amer. Chem.
Soc., 93, 2897 (1971), tai ammoniakin etanoliliuoksen avulla hydrauskatalyytin kuten Raney-nikkelin, platinan 30 tai palladiumin läsnäollessa, katso, esim. OrganicSoc., 93, 2897 (1971), or with an ethanolic solution of ammonia in the presence of a hydrogenation catalyst such as Raney nickel, platinum or palladium, see e.g. Organic
Reactions, 4, 174 (1948). Monia kaavan RNH2 mukaisia amiineja saadaan vastaavista ketoneista muodostamalla oksii-mi-väliyhdiste, joka muodostetaan antamalla ketonin reagoida hydroksyyliamiinin tai sen suolojen kanssa alalla 35 hyvin tunnetuissa olosuhteissa. Oksiimi-väliyhdiste pelkistetään sitten hydraamalla katalyyttisesti tai natriumin avulla pienimolekyylisen alkanolin läsnäollessa normaalia 16 77C45 korkeammassa lämpötilassa. Erityisen ensisijaisessa menetelmässä, joka on erityisen käyttökelpoinen pelkistettäessä rikkipitoisten ketonien oksiimeja, oksiimi pelkistetään etanolissa ja käyttämällä mooliylimäärin 5 natriumia seoksen kiehumislämpötilassa.Reactions, 4, 174 (1948). Many amines of formula RNH2 are obtained from the corresponding ketones by formation of an oxime intermediate formed by reacting the ketone with hydroxylamine or its salts under conditions well known in the art. The oxime intermediate is then reduced by catalytic or sodium hydrogenation in the presence of a low molecular weight alkanol at a temperature higher than normal. In a particularly preferred process, which is particularly useful in the reduction of oximes of sulfur-containing ketones, the oxime is reduced in ethanol and using a molar excess of 5 sodium at the boiling temperature of the mixture.
Tarvittavat amiinien RNF^ ketoni-lähtöyhdisteet ovat joko kaupan olevia alalla tunnettuja tai niitä valmistetaan tunnetuin menetelmin.The required RNF-ketone starting compounds for amines are either commercially available in the art or are prepared by known methods.
Kaavan RNHj mukaisia amiineja, joissa R on ai-10 kaisemmin määritelty, saadaan myös hyvin tunnetunAmines of formula RNHj, wherein R is as defined in Ai-10, are also obtained from a well-known
Hofmann'in reaktion avulla suorittamalla sopivan karboksi-amidin konversio alkalimetallihypohalitin kanssa.By Hofmann reaction by performing the conversion of the appropriate carboxyamide with an alkali metal hypohalite.
Kaavan I mukaisia yhdisteitä tai niiden amidiväli-yhdisteitä, joissa R on ryhmä, jolla on kaava (b), jossa 15 X on SO2, saadaan vastaavista yhdisteistä, joissa X on hapettamalla ja käyttämällä reagensseja ja olosuhteita, joissa sulfideista tiedetään muodostuvan sulfoneja.Compounds of formula I or their amide intermediates wherein R is a group of formula (b) wherein X is SO 2 are obtained from the corresponding compounds wherein X is by oxidation and using reagents and conditions where sulphides are known to form sulfones.
Kaavan I mukaisen yhdisteet ja niiden fysiologisesti hyväksyttävät suolat tarjoavat etuja makeutusaineina suu-20 ren tehokkuutensa, fysikaalisen muotonsa ja stabilisuuten-sa vuoksi. Ne ovat tavallisesti kiteisiä, eivät ole hygroskooppisia, ovat veteen liukenevia kiinteitä aineita. Niiden ainutlaatuisena tyypillisenä ominaisuutena on, että ne ovat makean makuisia, vailla ei-toivottavia kitke-25 riä tai karvaita makuvivahteita tavanomaisilla käyttömäärillä. Niitä voidaan edullisesti käyttää syötäväksi kel-paavien aineiden makeuttamiseen.The compounds of the formula I and their physiologically tolerable salts offer advantages as sweeteners due to their potency, physical form and stability. They are usually crystalline, non-hygroscopic, and are water-soluble solids. Their unique characteristic feature is that they are sweet-tasting, free of undesirable bitterness or bitter taste nuances at conventional application rates. They can be advantageously used to sweeten edible substances.
Termi "syötäväksi kelpaavat aineet" tarkoittaa tässä käytettynä kaikkia myrkyttömiä aineita, joita ihmi-30 set tai muut elolliset olennot voivat käyttää kulutukseen kiinteässä tai nestemäisessä muodossa. Kuvaavia sellaisia aineita ovat elintarvikkeet, mukaan lukien ravintoaineista valmistetut ruokavalmisteet, purukumi ja virvoitusjuomat; elintarvikkeiden lisäaineet, mukaan lukien mauste- ja 35 väriaineet, samoin kuin makua korostavat aineet; ja farmaseuttiset valmisteet.The term "edible substances" as used herein means all non-toxic substances that can be used by humans or other living beings for consumption in solid or liquid form. Descriptive such substances include foods, including food preparations made from nutrients, chewing gum, and soft drinks; food additives, including spices and colors, as well as flavor enhancers; and pharmaceutical preparations.
Seuraavassa on esitetty eräitä valmistusesimerk-kejä tällaisista syötäviksi kelpaavista aineista.The following are some preparation examples of such edible substances.
i7 7 / C 4 bi7 7 / C 4 b
Valmiste-esimerkki 1Preparation Example 1
Hyytelöjälkiruokaa valmistetaan seuraavan yhdistelmän ja menetelmän mukaisesti: aineosat grammaa 5 Gelatin 225 Bloom 7,522Jelly dessert is prepared according to the following combination and method: Ingredients grams 5 Gelatin 225 Bloom 7,522
Sitruunahappo 1,848Citric acid 1,848
Natriumsitraatti 1,296Sodium citrate 1,296
Mansikkamauste 0,298 L-aspartyyli-D-seriini-N-(2,2,4,4-tetra-10 metyylitietan-3-yyli)amidi 0,036Strawberry Seasoning 0.298 L-Aspartyl-D-Serine-N- (2,2,4,4-Tetra-10-methyl-ethan-3-yl) -amide 0.036
Kiehuva vesi 240,000Boiling water 240,000
Kylmä vesi 240,000 491,000Cold water 240,000 491,000
Sekoita ensin viisi ensimmäistä aineosaa, lisää 15 kiehuvaan veteen ja sekoita täydelliseen liukenemiseen asti. Lisää kylmä vesi ja sekoita vilkkaasti. Siirrä seos annoskulhoihin ja jäähdytä kunnes seos on hyytynyt .First mix the first five ingredients, add 15 to boiling water and mix until completely dissolved. Add cold water and stir vigorously. Transfer the mixture to serving bowls and cool until the mixture has coagulated.
Valmiste-esimerkki 2 20 LeivinkakkuPreparation Example 2 20 Baking Cake
Erittäin miellyttävä vaniljakakku valmistettiin käyttämällä seuraavaa reseptiä:A very pleasant vanilla cake was made using the following recipe:
Aineosat grammaaIngredients in grams
Emulgoitu rasva 16,09 25 Vesi 20,83Emulsified fat 16.09 25 Water 20.83
Munat 23,00Eggs 23.00
Natriumvetykarbonaatti 1,10Sodium bicarbonate 1.10
Vaniljauute, yksinkertainen 0,28Vanilla extract, simple 0.28
Glukono-delta-laktoni 1,75 30 Polydekstroosi , 70 %:inen vesiliuos 80,00 ö . . . .. (U.S. 3 766 165) ,Glucono-delta-lactone 1.75 30 Polydextrose, 70% aqueous solution 80.00 δ. . . .. (U.S. 3,766,165),
Rasvaton kuivamaxto 2,50Non-fat dry extract 2.50
Kakkujauho 56,20Cake flour 56.20
Kokomaitoj auhe 0,80Whole milk powder 0.80
Vehnätärkkelys 1,40 35 L-aspartyyli-D-seriini-N-(2,2,4,4-tetra- metyylitietan-3-yyli)amidi 0,05 204,00 77045 18Wheat starch 1.40 35 L-aspartyl-D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethylethan-3-yl) amide 0.05 204.00 77045 18
Yhdistä rasvaton kuivamaito, kokomaitojauhe, polydekstroosiliuos ja emulgoitu rasva. Sekoita alhaisella nopeudella kunnes seos on kermamainen ja tasalaatuinen (noin 3 minuuttia), lisää munat ja vatkaa kunnes 5 seos on saatu homogeeniseksi kermamaiseksi seokseksi. Liuota makeutusaine veteen, lisää liuos kermamaiseen homogeni saatti in ja sekoita 2-3 minuuttia. Lisää jäljellä olevat aineosat ja sekoita kunnes seos on kermamainen ja tasalaatuinen (3-5 minuuttia). Pane 120 g taiki-10 naa pieneen esivoideltuun pannuun ja paista 350°F:ssa (176°C) 30 minuuttia.Combine skim milk powder, whole milk powder, polydextrose solution and emulsified fat. Stir on low speed until the mixture is creamy and homogeneous (about 3 minutes), add the eggs and beat until a mixture is obtained as a homogeneous creamy mixture. Dissolve the sweetener in water, add the solution to the creamy homogeneous may in and stir for 2-3 minutes. Add the remaining ingredients and stir until the mixture is creamy and homogeneous (3-5 minutes). Put 120 g of batter-10 in a small pre-greased pan and bake at 350 ° F (176 ° C) for 30 minutes.
Valmiste-esimerkki 3 SäilykepäärynätPreparation Example 3 Canned pears
Tuoreet päärynät pestään, kuoritaan, poistetaan 15 siemenkodat, leikataan viipaleiksi ja upotetaan vesi-liuokseen, jossa on 0,05 paino-% askorbiinihappoa. Leikattu hedelmä pakataan kierrekansitölkkeihin ja tölkit täytetään siirapilla, joka sisältää seuraavat aineosat: Paino-% 20 Sorbitoli 25,000 L-aspartyyli-D-seriini-N-(2 ,2,4,4-tetrame- tyyli-tietan-3-yyli)amidi 0,025Fresh pears are washed, peeled, peeled, cut into slices and immersed in an aqueous solution containing 0.05% by weight of ascorbic acid. The cut fruit is packed in screw-cans and the cans are filled with a syrup containing the following ingredients:% by weight Sorbitol 25,000 L-aspartyl-D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-tetan-3-yl) amide 0,025
Sitruunahappo 0,125Citric acid 0.125
Vesi g.s, 25 100,000 Tölkkien kannet kierretään löysästi kiinni ja tölkit sijoitetaan autoklaaviin, jossa on kuumaa vettä ja käsitellään siinä 100°C:ssa 45 minuutin ajan. Tölkit otetaan pois, suljetaan heti kiristämällä kannet 30 kiinni ja annetaan jäähtyä.Water g.s, 25 100,000 The lids of the cans are loosely screwed on and the cans are placed in an autoclave with hot water and treated at 100 ° C for 45 minutes. The cans are removed, immediately closed by tightening the lids 30 and allowed to cool.
19 7704519 77045
Valmiste-esimerkki 4Preparation Example 4
Virvoitus j uomaj auhekonsentraatti Aineosat Paino-%Softening Drink Powder Concentrate Ingredients Weight%
Sitruunahappo 31,78 5 Natriumsitraatti 5,08Citric acid 31.78 5 Sodium citrate 5.08
Mansikkamauste 57,72Strawberry seasoning 57.72
Strawberry FD- ja C-väri Q,54 L-aspartyyli-D-O-metyyliseriini-N-(2,2,4,4- tetrametyylitietan-3-yyli)amidi 2,44 10 Karboksimetyyliselluloosa 2,44 100,00Strawberry FD and C color Q, 54 L-aspartyl-D-O-methylserine-N- (2,2,4,4-tetramethylethan-3-yl) amide 2.44 10 Carboxymethylcellulose 2.44 100.00
Yhdistä kaikki aineosat sekoittimessa ja sekoita kunnes seos on homogeeninen. Käyttöä varten 1,73 g virvoitus juomaj auhekonsentraattia liuotetaan 4 nesteuns-15 siin (118 ml) vettä.Combine all ingredients in a blender and mix until homogeneous. For use, 1.73 g of a soft drink concentrate is dissolved in 4 liquid ointments (118 ml) of water.
Valmiste-esimerkki 5 Ruokavalio-opillinen kovamakeinen Kovamakeisia valmistetaan seuraavan yhdistelmän ja menetelmän mukaisesti: 20 Aineosat grammaa L-aspartyyli-D-seriini-N-(disyklopropyyli-karbinyyli)amidi 0,59Preparation Example 5 Dietary hard confectionery Hard confectionery is prepared according to the following combination and method: 20 Ingredients grams L-aspartyl-D-serine-N- (dicyclopropylcarbinyl) amide 0.59
Vesi 4,00 FD ja C Red 40 (10 % vesiliuos) 0,30 25 Kirsikkamauste 0,60Water 4.00 FD and C Red 40 (10% aqueous solution) 0.30 25 Cherry spices 0.60
Sitruunahappo 6,00Citric acid 6.00
Polydekstroosi (U.S. 3 766 165) 420,00Polydextrose (U.S. 3,766,165) 420.00
Vesi 180,00Water 180.00
Makeutusaine liuotetaan pienessä dekanterilasis-30 sa veteen, lisätään väriaine, mauste ja sitruunahappo ja sekoitetaan hyvin liukenemiseen asti. Polydekstroosi ja vesi yhdistetään erillisessä dekanterilasissa. Sekoitetaan lämmitettäessä 140°C:seen, sitten annetaan jäähtyä 120 - 125°C:seen. Pienestä dekanterilaisista 35 lisätään muut aineosat ja sekoitetaan tai vatkataan perusteellisesti. Massa siirretään öljypinnoitteisel-le marmorilevylle ja annetaan jäähtyä 75-80°C:seen. Massa ajetaan öljy pinnoitteisen painotelan läpi.The sweetener is dissolved in a small beaker in water, the colorant, spice and citric acid are added and mixed well until dissolved. The polydextrose and water are combined in a separate beaker. Stir with heating to 140 ° C, then allow to cool to 120-125 ° C. From the small beakers 35, add the other ingredients and mix or beat thoroughly. The mass is transferred to an oil-coated marble slab and allowed to cool to 75-80 ° C. The pulp is passed through an oil-coated pressure roll.
77045 20 Käytettäessä 0,49 g L-aspartyyli-D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrametyyli-l,l-dioksotietan-3-yyli)amidia tai 2,33 g L-aspartyyli-D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrame-tyyli-3-pentyyli)amidia makeutusaineena L-aspartyyli-5 D-seriini-N-(disyklopropyylikarbinyyli)amidin asemesta, saadaan samanlaisia tuloksia.77045 20 Using 0.49 g of L-aspartyl-D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-1,1-dioxothietan-3-yl) amide or 2.33 g of L-aspartyl-D- serine N- (2,2,4,4-tetramethyl-3-pentyl) amide as a sweetener instead of L-aspartyl-5D-serine-N- (dicyclopropylcarbinyl) amide, similar results are obtained.
Valmiste-esimerkki 6Preparation Example 6
Hiilihappopitoinen Cola-juoma Hiilihappopitoista cola-juomaa valmistettiin 10 alla esitetyn koostumuksen mukaisesti. Saadun juoman arvosteltiin omaavan makeusintensiteetin, joka oli verrattavissa 11 % sakkaroosia sisältävän kontrolli-juoman makeusintensiteettiin.Carbonated Cola Beverage Carbonated cola beverage was prepared according to the composition shown below. The resulting beverage was judged to have a sweetness intensity comparable to that of a control beverage containing 11% sucrose.
Aineosa Paino-% 15 Kofeiini (1-prosenttinen vesiliuos) 0,700 L-aspartyyli-D-seriini-N-(cis,trans-2,6- dimetyylisykloheksyyli)amidi (10 % vesi- liuos) 0,540Ingredient Weight% 15 Caffeine (1% aqueous solution) 0.700 L-aspartyl-D-serine-N- (cis, trans-2,6-dimethylcyclohexyl) amide (10% aqueous solution) 0.540
Cola-maustekonsentraatti 0,080 20 Fosforihappo (50 % vesiliuos) 0,040Cola Spice Concentrate 0.080 Phosphoric acid (50% aqueous solution) 0.040
Sitruunahappo (50 % vesiliuos) 0,066Citric acid (50% aqueous solution) 0.066
Natriumsitraatti (25 % vesiliuos) 0,210Sodium citrate (25% aqueous solution)
Karamelliväri (25 % vesiliuos) 0,370Caramel color (25% aqueous solution)
Sitruunaöljyuute 0,012 25 Citrus limetta-kuoriöljyuute 0,021Lemon oil extract 0.012 Citrus lime peel oil extract 0.021
Hiilihappopitoinen vesi (3,5 til-% hiilidioksidia) g »s.Carbonated water (3.5% by volume of carbon dioxide) g »s.
100,000100,000
Korvaamalla edellä esitetyssä reseptissä L-aspar-30 tyyli-D-seriini-N-(cis,trans-2,6-dimetyylisykloheksyy- li)amidi 0,090 %:lla 10-%:ista L-aspartyyli-D-seriini-happo-N-(disyklopropyylikarbinyyli)amidin vesiliuosta tai 1,35 %:lla 10-%:ista L-aspartyyli-D-O-metyyliserii-ni-N-(disyklopropyylikarbinyyli)amidin vesiliuosta, 35 saadaan laadultaan samanlaisia hiilihappopitoisia cola-juomia.By replacing L-aspar-30-style-D-serine-N- (cis, trans-2,6-dimethylcyclohexyl) amide in the above recipe with 0.090% of 10% L-aspartyl-D-serine acid. An aqueous solution of N- (dicyclopropylcarbinyl) amide or 1.35% of a 10% aqueous solution of L-aspartyl-DO-methylserine-N- (dicyclopropylcarbinyl) amide gives 35 carbonated cola beverages of similar quality.
21 7704521 77045
Valmiste-esimerkki 7 Jähmetetty jälkiruoka Vähäsokerista vanilja-jähme-jälkiruokaa valmistetaan seuraavan yhdistelmän ja tavanomaisen käytännön 5 mukaisesti.Preparation Example 7 Solidified Dessert A low sugar vanilla-solid dessert is prepared according to the following combination and conventional practice 5.
Aineosa Paino-%Ingredient Weight%
Kuohukerma (35 % voirasva) 23,00Whipped cream (35% butterfat) 23.00
Rasvaton kiinteä maitoaine 10,50Skimmed milk solids
Mono- ja diglyseridi-emulgaattori 0,25 10 Polydekstroosi (U.S. 3 766 165) 11,20Mono- and Diglyceride Emulsifier 0.25 10 Polydextrose (U.S. 3,766,165) 11.20
Vesi 54,49 L-aspartyyli-D-O-metyyliseriini-N-(2,2,4,4- tetrametyyli-1,l-dioksotietan-3-yyli)amidi 0,06Water 54.49 L-aspartyl-D-O-methylserine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-1,1-dioxothietan-3-yl) amide 0.06
Gelatiini (225 Bloom) 0,50 15 100,00Gelatin (225 Bloom) 0.50 15 100.00
Keksinnön yhdisteistä voidaan valmistaa erilaisia muotoja, jotka soveltuvat käytettäviksi makeutus-20 aineina. Tyypillisiä käyttökelpoisia muotoja ovat kiinteät muodot, kuten jauheet, tabletit, rakeet ja pastillit; ja nestemäiset muodot, kuten liuokset, suspensiot, siirapit, emulsiot samoin kuin muut yleisesti käytettävät muodot, jotka erityisesti soveltuvat syötäväksi kel-25 paavien aineiden yhteyteen. Näitä muotoja voivat olla kaavan I mukaiset yhdisteet tai niiden fysiologisesti hyväksyttävät suolat joko sellaisinaan tai myrkyttömien makeutusainekantajien yhteydessä, so. myrkyttömien aineiden kanssa, joita yleisesti käytetään makeu-30 tusaineiden yhteydessä. Sellaisia sopivia kantajia ovat nesteet, kuten vesi, etanoli, sorbitoli, glyseroli, sitruunahappo, maissiöljy, maapähkinäöljy, soijapapuöl-jy, seesamöljy, propyleeniglykoli, maissisiirappi, vaah-terasiirappi ja nestemäinen parafiini, ja kiinteät ai-35 neet, kuten laktoosi, selluloosa, tärkkelys, dekstriini, 77045 22 modifioidut tärkkelykset, polysakkariditt kuten poly-dekstroosi (kts. esim. US-patenttijulkaisut 3 766 165 ja 3 876 794), kalsiumfosfaatti (mono-, di- tai kolmiemäk-siset) ja kalsiumsulfaatti.The compounds of the invention may be formulated into various forms suitable for use as sweeteners. Typical useful forms include solid forms such as powders, tablets, granules and lozenges; and liquid forms such as solutions, suspensions, syrups, emulsions as well as other commonly used forms which are particularly suitable for use with edible substances. These forms may be the compounds of the formula I or their physiologically tolerable salts, either as such or in the context of non-toxic sweetening agents, i.e. with non-toxic substances commonly used in connection with sweeteners. Such suitable carriers include liquids such as water, ethanol, sorbitol, glycerol, citric acid, corn oil, peanut oil, soybean oil, sesame oil, propylene glycol, corn syrup, wax terrazole and liquid paraffin, liquid paraffin, and solid paraffin, and solid paraffin, starch, dextrin, 77045 22 modified starches, polysaccharides such as poly-dextrose (see, e.g., U.S. Patent Nos. 3,766,165 and 3,876,794), calcium phosphate (mono-, di- or tri-base) and calcium sulfate.
5 Samalla tavalla käyttökelpoisia ja sekoittuvia ovat seokset, jotka sisältävät keksinnön yhdistettä tunnetun makeutusaineen yhteydessä, kuten esim. sakkaroosin, sakkariinin, syklamaatin, L-aspartyyli-L-fe-nyylialaniini-metyyliesterin ja näiden kaltaisten ainei-10 den yhteydessä, jotka soveltuvat syötäväksi kelpaavien aineiden makeuttamiseen. Erityisen käyttökelpoisia ovat kaavan (I) mukaisten yhdisteiden ja sakkariinin tai sen fysiologisesti hyväksyttävän suolan, esim. sakkariinin natrium-, kalium-, kalsium- tai ammoniumsuolan 15 seokset. Mainituissa seoksissa sakkariinin kanssa kaa van (I) mukaiset yhdisteet vähentävät tai peittävät täysin sakkariinin hyvin tunnetun katkeran, ei-toivottavan jälkimaun.Similarly useful and miscible are compositions containing a compound of the invention in association with a known sweetener, such as sucrose, saccharin, cyclamate, L-aspartyl-L-phenylalanine methyl ester, and the like, which are suitable for use as edible sweeteners. Particularly useful are mixtures of compounds of the formula (I) with saccharin or a physiologically acceptable salt thereof, e.g. the sodium, potassium, calcium or ammonium salt of saccharin. In said mixtures with saccharin, the compounds of formula (I) completely reduce or completely mask the well-known bitter, undesirable aftertaste of saccharin.
Erityisen käyttökelpoisia sellaisia makeutusai-20 neseoksia ovat seokset, jotka sisältävät sakkariinia seoksena kaavan (I) mukaisten yhdisteiden kanssa, jotka ovat makeudeltaan ainakin 400 kertaa sakkaroosia makeampia, erityisesti yhdisteiden kanssa, joissa Ra on CH20H ja R on disyklopropyylikarbinyyli, 2,2,4,4-tetra-25 metyylitietan-3-yyli tai 2,2,4 ,4-tetrametyyli-l,1- dioksotietan-3-yyli. Erityisen ensisijaisia ovat sellaiset sakkariinin ja L-aspartyyli-D-seriini-N-(2,2,- 4,4-tetrametyylitietan-3-yyli)-amidin seokset, erityisesti sellaiset seokset, jotka sisältävät jälkimmäistä 30 kaavan (I) mukaista yhdistettä ja sakkariinia painosuh-derajoissa 1:1 - 1:8. Nämä seokset eivät ainoastaan ole maultaan miellyttävän makeita katkeran jälkimaun olennaisesti puuttuessa, vaan ne ovat yllättäen merkittävästi makeampia kuin seoksen yksittäisten aineosien 35 makeuksien summa. Toisin sanoen niillä on synergistinen 23 7 7 0 4 5 vaikutus, makeuden ollessa jopa 50 % laskettua suurempi. Sakkariinin tai sen suolojen ja L-aspartyyli-D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrametyylitietan-3-yyli)amidin seoksissa, joissa niiden suhteet eivät ole edellä mainituissa rajoissa, 5 synergistinen vaikutus on huomattavasti heikompi.Particularly useful sweetener mixtures are those containing saccharin in admixture with compounds of formula (I) which are at least 400 times sweeter than sucrose in sweetness, especially with compounds wherein Ra is CH2OH and R is dicyclopropylcarbinyl, 2,2,4, 4-tetra-25-methylthietan-3-yl or 2,2,4,4-tetramethyl-1,1-dioxothietan-3-yl. Particularly preferred are mixtures of saccharin and L-aspartyl-D-serine-N- (2,2,4,4,4-tetramethylethan-3-yl) -amide, in particular mixtures containing the latter compound of formula (I) and saccharin in weight ratio ranges of 1: 1 to 1: 8. Not only are these blends pleasantly sweet in taste in the substantial absence of bitter aftertaste, but they are surprisingly significantly sweeter than the sum of the sweetnesses of the individual ingredients of the blend. In other words, they have a synergistic effect 23 7 7 0 4 5, with a sweetness of up to 50% higher than calculated. In mixtures of saccharin or its salts and L-aspartyl-D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethylethan-3-yl) amide, where their ratios are not within the above-mentioned limits, the synergistic effect is considerably weaker.
Seuraavat valmiste-esimerkit kuvaavat kaavan I mukaista yhdistettä sisältäviä makeutusaineita. Valmiste-esimerkki 8 Vähäkalorisia pöytämakeutusaineita valmistetaan 10 seuraavien yhdistelmien mukaisesti: A. Makeutusaineen jauhemuotoa valmistetaan sekoittamalla keskenään seuraavat aineosat.The following formulation examples illustrate sweeteners containing a compound of formula I. Preparation Example 8 Low calorie table-top sweeteners are prepared according to the following combinations: A. A powder form of a sweetener is prepared by mixing the following ingredients together.
Aineosat Paino-% L-aspartyyli-D-seriini-N-(2,2,4,4-tetra-15 metyyli-l,l-dioksotietan-3-yyli)amidi 0,42Ingredients Weight% L-aspartyl-D-serine-N- (2,2,4,4-tetra-15-methyl-1,1-dioxothietan-3-yl) amide 0.42
Kiteinen sorbitoli 49,52Crystalline sorbitol 49.52
Dekstriini (dekstroosi-ekvivalentti 10) 50,00Dextrin (dextrose equivalent 10) 50.00
Mononatriumglutamaatti 0,02Monosodium glutamate 0.02
Glukono-delta-laktoni 0,02 20 Natriums!traatti 0,02 100,00Glucono-delta-lactone 0.02 Sodium nitrate 0.02 100.00
Yksi gramma saatua seosta vastaa makeudeltaan kolmea grammaa sakkaroosia.One gram of the mixture obtained corresponds to a sweetness of three grams of sucrose.
25 B. Pöytämakeutusaineen nestemuotoa valmistetaan seuraavasti.25 B. The liquid form of the table-top sweetener is prepared as follows.
Aineosat Paino-% L-aspartyyli-D-seriini-N-(disyklopropyyli- karbinyyli)amidi 0,17 30 Vesi 99,73Ingredients Weight% L-aspartyl-D-serine-N- (dicyclopropylcarbinyl) amide 0.17 30 Water 99.73
Natriumbensoaatti 0,10 100,00Sodium benzoate 0.10 100.00
Yksi gramma saatua liuosta vastaa makeudeltaan noin 1,2 grammaa kiteistä sakkaroosia.One gram of the resulting solution corresponds to a sweetness of about 1.2 grams of crystalline sucrose.
24 7704524 77045
Kun edellä osassa A käytettävänä kaavan (I) mukaisena makeutusaineena on 0,83 g L-aspartyyli-D-se-riini-N-(2,2 ,4,4-tetrametyylitietan-3-yyli)amidin ja natriumsakkariinin l:4-seosta, saadaan vastaavia 5 tuloksia. Samalla tavalla kun edellä osassa B käytetty L-aspartyyli-D-seriini-N-(disyklopropyylikarbinyyli)-amidi korvataan 0,34 grammalla saman yhdisteen ja natriumsakkariinin 1:6 (paino-%) seosta, saadaan vastaavaa nestemäistä pöytä-makeutusainetta.When the sweetener of formula (I) used in Part A above is 0.83 g of L-aspartyl-D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethylethanetan-3-yl) amide and sodium saccharin 1: 4- mixture, 5 corresponding results are obtained. In a similar manner, replacing the L-aspartyl-D-serine-N- (dicyclopropylcarbinyl) -amide used in Part B above with 0.34 grams of a 1: 6 (w / w) mixture of the same compound and sodium saccharin gives the corresponding liquid table-top sweetener.
10 Valmiste-esimerkki 9 L-aspartyyli-D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrametyyli-tietan-3-yyli)amidin, CH, CH-</ 3 15 ^(1) , Ra = CH20H, R = —) ja sakkariinin synergistisiä CH^ CHj seoksiaPreparative Example 9 L-aspartyl-D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethylthietan-3-yl) amide, CH, CH - </ 3 15 ^ (1), Ra = CH2OH , R = -) and synergistic mixtures of saccharin CH 2 CH 2
Valmistettiin L-aspartyyli-D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrametyylitietan-3-yyli)amidin ja natriumsakkariinin 20 seoksia ja arvioitiin maun hyväksyttävyyttä ja makeus-intensiteettiä vertaamalla sakkaroosi-standardi-vesi-liuoksiin. Seosten teoreettisen makeuden laskemiseksi natriumsakkariinin ja keksinnön mukaisen yhdisteen (I, Ra = CH20H, (CH3>2 25 J.Mixtures of L-aspartyl-D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethylethan-3-yl) amide and sodium saccharin were prepared and the taste acceptability and sweetness intensity were evaluated by comparison with sucrose-standard-water solutions. To calculate the theoretical sweetness of the mixtures, sodium saccharin and the compound of the invention (I, Ra = CH 2 OH, (CH 3> 2 25 J).
R = _ζ S ) makeutustehotekijöinäR = _ζ S) as sweetening factors
VV
(CH3)2 käytettiin tekijöitä 300 ja vastaavasti 1200 x sakka-30 roosin makeus. Suoritettiin joukko makupaneelin arviointeja vertaamalla koesekoitusten vesiliuoksia sakkaroosin vesiliuoksiin alueella 6-12 % (paino/til.) ja 0,033 %:n natriumsakkariiniliuokseen. Tulokset on koottu seu-raavaan taulukkoon.(CH3) 2 factors of 300 and 1200 x precipitate-30 rose sweetness, respectively, were used. A series of flavor panel evaluations were performed comparing aqueous solutions of the test mixtures to aqueous solutions of sucrose in the range of 6-12% (w / v) and 0.033% sodium saccharin solution. The results are summarized in the following table.
25 770 4 525 770 4 5
Seos, paino-% lί, rSo^OH, ^3 *2 Makeus c R = —<Γ 7 Natrium- Teto x sakkaroosi Syner- Maun sakka- (T)Teor. (A) Todell. gia-% laatu «”3)2 riinl _ 1 : 1 750 1125 50 puhdas, makea, ei katkera 1Q 1 : 2 600 900 50 sama 1 : 4 480 720 50 sama 1:6 430 580 35 sama 1 ; 8 400 520 30 makea, juuri havaittava metallinen 1 _ makuMixture,% by weight, rSo ^ OH, ^ 3 * 2 Sweetness c R = - <Γ 7 Sodium- Teto x sucrose Syner- Taste precipitate- (T) Theor. (A) Really. gia-% quality «” 3) 2 riinl _ 1: 1 750 1125 50 pure, sweet, not bitter 1Q 1: 2 600 900 50 same 1: 4 480 720 50 same 1: 6 430 580 35 same 1; 8,400,520 30 sweet, just perceptible metallic 1 _ flavor
Ib 1 : 9 390 makea, lievästi metallinen maku 1 : 10 381 makea, lievä - kohtalainen metallinen 20 makuIb 1: 9 390 sweet, slightly metallic flavor 1: 10 381 sweet, mild - moderate metallic 20 flavor
Synergia-% laskettiin seuraavan kaavan mukaisesti:The% synergy was calculated according to the following formula:
Synergia-% = — x 100Synergy% = - x 100
TT
25 jossa A on todellinen makeus määritettynä laskemalla makupaneelin tulosten keskiarvo ja T on teoreettinen makeus, joka on määritetty seosten koostumuksesta painon perusteella, esim. seoksen 1:4 teoreettinen makeus on (1/5 x 1200) + (4/5 x 300) = 480.25 where A is the actual sweetness as determined by averaging the results of the taste panel and T is the theoretical sweetness determined from the composition of the mixtures by weight, e.g. the theoretical sweetness of a 1: 4 mixture is (1/5 x 1200) + (4/5 x 300) = 480.
3q Tuloksista nähdään, että seoksien 1:1 - 1:8 osalta makeusteho lisääntyy odottamattoman paljon, 30-50%. Vaikkakin suhteiden ollessa suurempia näytti esiintyvän synergiaa, sakkariinista johtuva metallinen maku häiritsi tarkkaa määritystä. Lisäksi sakkariinin hyvin 25 tunnettu katkera jälkimaku peittyi täysin seoksissa 1:1-1:6 ja katkeruus peittyi tehokkaasti seoksiin 26 7 7 0 4 5 saakka, joissa oli yksi osa L-aspartyyli-D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrametyylitietan-3-yyli)amidia ja 8 osaa natriumsakkariinia.3q The results show that for blends 1: 1 to 1: 8, the sweetness power increases unexpectedly, 30-50%. Although synergies appeared to occur with higher ratios, the metallic taste due to saccharin interfered with the accurate determination. In addition, the well-known bitter aftertaste of saccharin was completely masked in mixtures 1: 1-1: 6 and the bitterness was effectively masked up in mixtures containing one part L-aspartyl-D-serine-N- (2,2,4 , 4-tetramethylethan-3-yl) amide and 8 parts of sodium saccharin.
L-aspartyyli-D-seriini-N- (2,2,4 ,4-tetrametyyli-5 tietan-3-yyli)amidi/natriumsakkariini-seoksen 1:8, konsentraation ollessa 0,0192 % (paino/til.), todettiin vastaavan makeudeltaan 10-%:ista (paino/til.) sak-karoosiliuosta ja sakkariini/syklamaatti-seosta 1:10, konsentraation ollessa 0,117 % (paino/til.).L-aspartyl-D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-5-tetan-3-yl) amide / sodium saccharin 1: 8 at a concentration of 0.0192% (w / v), was found to correspond to a sweetness of 10% (w / v) sucrose solution and saccharin / cyclamate mixture 1:10 at a concentration of 0.117% (w / v).
10 Lisäksi suoritetussa aistiarvioinnissa trian- gelikokeessa, jossa harjaantuneille koepaneelin jäsenille tarjottiin kolme näytettä, joina olivat edellä mainitut vesiliuokset, joissa oli seoksena 1:8 keksinnön yhdiste/natriumsakkariini, konsentraation olles-15 sa 0,0192 % ja seoksena 1:10 sakkariini/syklamaatti, konsentraation ollessa 0,1177 %. Paneelin jäseniä pyydettiin löytämään kaksi samanlaista näytettä ja ilmaisemaan mahdollinen paremmuus. Seitsemän kymmenestä koepaneelin jäsenestä ei kyennyt moitteettomasti erot-20 tamaan toisistaan kahta makeampaa seosta.10 In addition, in a sensory evaluation performed in a triangle experiment, three samples of the above-mentioned aqueous solutions containing a 1: 8 mixture of a compound of the invention / sodium saccharin at a concentration of 0.0192% and a mixture of 1:10 saccharin / cyclamate were provided to trained panel members. , at a concentration of 0.1177%. Panel members were asked to find two similar samples and to express possible superiority. Seven of the ten members of the test panel were not able to properly distinguish between the two sweeter mixtures.
Heistä ne, jotka moitteettomasti löysivät kaksi samanlaista näytettä, arvioivat noiden kahden seoksen välisen eroavuuden olevan "hyvin lievän" tai "juuri havaittavan".Of these, those who impeccably found two similar samples rated the difference between the two mixtures as "very slight" or "just noticeable."
25 Nämä tulokset osoittavat, että mitään merkittä vää eroa ei ole seoksen 1:8 keksinnön yhdiste/sakkarii-ni ja seoksen 1:10 sakkariini/syklamaatti välillä.These results indicate that there is no significant difference between a 1: 8 mixture of the compound of the invention / saccharin and a 1:10 mixture of saccharin / cyclamate.
Toistettaessa edellä esitetty menettely käytetyn keksinnön yhdisteen ollessa kuitenkin kaavan (I) 30 mukainen, jossa Ra on C^OCH^ ja R on (CH3>2 Whh -<> tai <^>2 (CH3)2 (ch3)2 27 77045 tai jossa Ra on CH20H ja R on (ch3)2 -<C^S02 tai -CH-(/\>2 (CH3,2 saadaan samanlaisia tuloksia.However, when repeating the above procedure, the compound of the invention used is of formula (I) 30, wherein Ra is C 2 OCH 2 and R is (CH 3> 2 Whh - <> or <^> 2 (CH 3) 2 (ch3) 2 2777045 or wherein Ra is CH2OH and R is (ch3) 2 - <CH2SO2 or -CH- (/ \> 2 (CH3,2) similar results are obtained.
Makeuttava määrä kaavan I mukaista yhdistettä tai sen fysiologisesti hyväksyttävää suolaa pelkkänä tai yhdistelmänä myrkyttömän kantajan tai tunnetun makeutusai-10 neen kanssa voidaan lisätä esimerkiksi seuraaviin syötäväksi kelpaaviin yhdistelmiin: hedelmät, vihannekset, mehut, lihatuotteet, kuten kinkku, pekoni ja makkara; mu-natuotteet, hedelmäkonsentraatit, gelatiinit ja gelatiini-maiset tuotteet, kuten hillot, hyytelöt, säilykkeet jne.; 15 maitotuotteet, kuten jäätelö, hapan kermajäätelö ja sorbetti jäätelö; sokerikuorrutukset, siirapit, melassit mukaan luettuina; maissi-, vehnä-, ruis-, soijapapu-, karua-, riisi- ja ohra-tuotteet kuten leipä, hiutaleet, tahtaat, kakku ja kakkuseokset; kala, juusto ja juusto-20 tuotteet, pähkinät ja pähkinätuotteet, virvoitusjuomat kuten kahvi, tee, hiilihappoiset ja hiilihapottomat alkoholittomat juomat, oluet, viinit ja muut nesteet; sokeroidut valmisteet kuten makeiset ja hedelmänmakui-set pastillit; mausteet kuten yrtit, aromiaineet ja 25 höysteet, makua korostavat aineet kuten mononatriumglu-tamaatti ja purukumi. Pikamakeutusaineilla on käyttöä myös valmispakkaustuotteissa kuten ruokavalio-makeutus-aineissa, neste-makeutusaineissa, rakeistetuissa maku-aineseoksissa, jotka vedessä hajotessaan muodostavat 30 hiilihapottomia juomia, pikavanukasseoksissa, pikakahvissa ja teessä, kahvin vaalennusaineissa, imelletyissä maitoseoksissa, kotieläinten elintarvikkeissa, karjan rehussa, tupakka- ja kulutustoalettitarvikkeissa, kuten suuvesissä ja hammastahnoissa samoin kuin paten-35 toiduissa ja patentoimattomissa farmaseuttisissa valmisteissa ja muissa elintarvike-, lääke- ja sekalaisia valmisteita valmistavien teollisuuksien tuotteissa.A sweetening amount of a compound of formula I, or a physiologically acceptable salt thereof, alone or in combination with a non-toxic carrier or known sweetener, may be added to, for example, the following edible combinations: fruits, vegetables, juices, meat products such as ham, bacon and sausage; egg products, fruit concentrates, gelatins and gelatinous products such as jams, jellies, preserves, etc .; 15 dairy products such as ice cream, sour cream ice cream and sorbet ice cream; icing, including syrups, molasses; corn, wheat, rye, soybean, barley, rice and barley products such as bread, flakes, pastries, cake and cake mixes; fish, cheese and cheese-20 products, nuts and nut products, soft drinks such as coffee, tea, carbonated and non-carbonated soft drinks, beers, wines and other liquids; candied preparations such as confectionery and fruit flavored lozenges; spices such as herbs, flavorings and 25 Spices, flavor enhancers such as monosodium glutamate and chewing gum. Instant sweeteners also have use in ready-to-pack products such as dietary sweeteners, liquid sweeteners, granulated flavor mixtures which decompose in water to form 30 carbonated beverages, instant casserole mixes, instant coffee and tea, coffee bleaches, coffee bleaches, sour milk mixes, consumer toiletries such as mouthwashes and toothpastes as well as paten-35 foods and off-patent pharmaceuticals and other products from the food, pharmaceutical and miscellaneous manufacturing industries.
77045 2877045 28
Erityisen ensisijaisia makeutettuja nautittaviksi kelpaavia seoksia ovat hiilihappoiset virvoitusjuomat, jotka sisältävät yhtä tai useampaa tämän keksinnön mukaista pikamakeutusainetta.Particularly preferred sweetened edible compositions are carbonated soft drinks containing one or more of the instant sweeteners of this invention.
Kaavan I mukaiset L-aspartyyli-S-aminohappo-di-peptidiamidit ovat käyttökelpoisia myös samoihin tarkoituksiin, joita on esitetty seuraavissa L-aspartyyli-L-fenyylialaniini-metyyliestereihin liittyvissä patenteissa ja patenttihakemuksissa. Näissä käyttötarkoituksissa niillä on ne edut, jotka on esitetty valmistettaessa dipeptidi-esteriä samoin kuin niiden aikaisemmin mainitut edut sta-bilisuus ja tehokkuus huomioiden.The L-aspartyl-S-amino acid di-peptide amides of formula I are also useful for the same purposes as set forth in the following patents and patent applications relating to L-aspartyl-L-phenylalanine methyl esters. For these uses, they have the advantages presented in the preparation of the dipeptide ester as well as their previously mentioned advantages in terms of stability and efficacy.
BE-patentit n:o 830 020 838 938 863 138 882 672 GB-patentti n:o 1 464 571 JP-Kokai-julkaisu n:o 77-04 176 FR-patentti n;o 2 338 651 CH-patentti n:o 590 615 US-patentit n:o 3 642 491 3 971 857 3 865 957 3 761 288 3 982 023 3 800 046 4 001 456 3 818 077 4 004 039 3 829 588 4 007 288 3 875 311 4 031 258 3 875 312 4 036 992 3 886 295 4 051 268 3 922 369 4 059 706 3 934 048 4 122 195 3 947 600 4 139 636 3 955 000 4 143 170 3 956 507 4 153 737 29 77045 CA-patentit n:o 1 026 987 1 027 113 1 028 197 5 1 043 158 1 046 840 NL-patenttihakemukset n:o 73-04 314 73-11 307 10 75-14 921 76-05 390 76-08 963 DE-patenttihakeraukset n:o 2 438 317 15 2 456 926 2 509 257 2 518 302 2 609 999 2 646 224 20 2 713 951BE Patents No. 830,020,838,938,863 138,882,672 GB Patent No. 1,464,571 JP-Kokai Publication No. 77-04,176 FR Patent No. 2,338,651 CH Patent No. 590,615 U.S. Patent Nos. 3,642,491 3,971,857 3,865,957 3,761,288 3,982,023 3,800,046 4,001,456 3,818,077 4,004,039 3,829,588 4,007,288 3,875,311 4,031,258 3,875,312 4,036,992 3,886,295 4,051,268 3,922,369 4,059,706 3,934,048 4,122 195 3,947,600 4,139,636 3,955,000 4,143,170 3,956,507 4,153,737 29,77045 CA Patents No. 1,026,987 1,027,113 1,028,197 1,043,158 1,046,840 NL patent applications No. 73-04,314 73-11,307 10 75-14,921 76-05,390 76-08,963 DE patent applications No. 2,438,317 15 2,456,926 2,509,257 2,518,302 2,609,999 2,646,224 20 2,713,951
Esimerkki 1 L-aspartyyli-D-seriini-N-(disyklopropyylikarbi-nyyli) amidiExample 1 L-aspartyl-D-serine-N- (dicyclopropylcarbinyl) amide
25 A25 A
I, Ra = CH20H, R =I, Ra = CH 2 OH, R =
A.) D-H0CH-CHC00H VA.) D-HOCH-CHCl 3 V
2\ NHCbz 30 Liuos, jossa oli 4,41 g (0,042 moolia) D-serii- niä 21 ml:ssa 2-norm, natriumhydroksidia, jäähdytettiin 5-10°C:seen, pH säädettiin väkevällä suolahapolla välille 10,0-11,5 ja 1,5 tunnin kuluessa lisättiin annoksittain 6,9 ml (0,048 moolia) bentsyyliklooriformi-35 aattia samanaikaisesti, kun lisättiin 2-norm, natriumhydroksidia seoksen pH:n pitämiseksi edellä mainituissa rajoissa. Seosta sekoitettiin yön ajan huoneen 30 77045 lämpötilassa, pestiin etyylieetterillä ja vesifaasi tehtiin happameksi (pH 2,5-3,0) 6-norm. suolahapolla. Uuttamalla etyyliasetaatilla, pesemällä uutteet suolaliuoksella ja kuivaamalla (MgSO^) saatiin 3,14 g tuo-5 tetta värittömänä kiinteänä aineena, joka kiteytettiin uudelleen 20 mlrsta etyyliasetaattia, jolloin saatiin 2,64 g tuotetta, 0,43 ^ohutkerroskromatografi-ointi (TLC), etyyliasetaatti/heksaani/etikkahappo, 9:9:2, til.suhde^.A solution of 4.41 g (0.042 mol) of D-serine in 21 ml of 2N sodium hydroxide was cooled to 5-10 ° C, the pH was adjusted to 10.0-11 with concentrated hydrochloric acid. During 5, 5 and 1.5 hours, 6.9 ml (0.048 moles) of benzyl chloroformate was added portionwise while 2-norm, sodium hydroxide was added to keep the pH of the mixture within the above limits. The mixture was stirred overnight at room temperature 77045, washed with ethyl ether and the aqueous phase acidified (pH 2.5-3.0) to 6-norm. hydrochloric acid. Extraction with ethyl acetate, washing of the extracts with brine and drying (MgSO 4) gave 3.14 g of product as a colorless solid which was recrystallized from 20 ml of ethyl acetate to give 2.64 g of product, 0.43 g of thin layer chromatography (TLC). , ethyl acetate / hexane / acetic acid, 9: 9: 2, v / v.
10 b.) d-hoch2chconh-<q^ NHCbz10 b.) D-hoch2chconh- <q ^ NHCbz
Lietteeseen, jossa oli 2,4 g (0,01 moolia) osassa A saatua N-Cbz-D-seriiniä 75 ml:ssa kloroformia, lisättiin 1,1 ml (0,01 moolia) N-metyylimorfoliinia.To a slurry of 2.4 g (0.01 mol) of N-Cbz-D-serine obtained in Part A in 75 ml of chloroform was added 1.1 ml (0.01 mol) of N-methylmorpholine.
15 Saatiin liuos, joka jäähdytettiin -12°C:seen. Tähän lisättiin 0,96 ml (0,01 moolia) etyyliklooriformiaat-tia, seosta sekoitettiin -10°C:ssa viisi minuuttia, lisättiin liuos, jossa oli 1,11 g (0,01 moolia) disyk-propyyliamiinia 5 ml:ssa kloroformia ja sekoittamista 20 jatkettiin viisi minuuttia -15°C:ssa. Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan, pestiin peräkkäin 0,5-norm. suolahapolla, 5 %:isella natriumvety-karbonaattiliuoksella ja vedellä. Kloroformi haihdutettiin pois vakuumissa, Vesipesunesteet yhdistettiin ja 25 uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattiuutteet yhdistettiin jäännöksen kanssa, joka oli saatu haihduttamalla kloroformi pois ja etyyliasetaattiosa kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin valkeata kiinteätä ainetta, jota kuivat-30 tiin vakuumissa yön ajan, jolloin saatiin 3,2 g haluttua tuotetta (Rj 0,54) jota käytettiin seuraavassa vaiheessa.A solution was obtained which was cooled to -12 ° C. To this was added 0.96 ml (0.01 mol) of ethyl chloroformate, the mixture was stirred at -10 ° C for five minutes, and a solution of 1.11 g (0.01 mol) of dicyclopropylamine in 5 ml of chloroform was added. and stirring was continued for five minutes at -15 ° C. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature, washed successively with 0.5 norm. hydrochloric acid, 5% sodium bicarbonate solution and water. The chloroform was evaporated off in vacuo, the aqueous washings were combined and extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate extracts were combined with the residue obtained by evaporating the chloroform and the ethyl acetate portion dried (MgSO 4) and evaporated to dryness in vacuo to give a white solid which was dried in vacuo overnight to give 3.2 g of the desired product (Rf 0, 54) which was used in the next step.
31 77045 C.) D-H0CHoCHC0NH-2 I NH2 3,2 g (9,6 mmoolia) osassa B saatua N-Cbz-ami-dia liuotettiin 70 ml:aan metanolia, lisättiin 1,0 g 5 5 %:ista Pd/C-katalyyttiä ja seosta hydrattiin 60 psi:n 2 paineessa (4,2 kg/cm ) 30 minuuttia. Katalyytti poistettiin suodattamalla ja suodos haihdutettiin kuiviin va-kuumissa, jolloin saatiin 1,93 g tuotetta saippuamaise-na kiinteänä aineena.31,77045 C.) D-HOCHoCHCONH-2 L NH 2 3.2 g (9.6 mmol) of the N-Cbz amide obtained in Part B were dissolved in 70 ml of methanol, 1.0 g of 5% Pd was added. The A / C catalyst and mixture were hydrogenated at 60 psi 2 (4.2 kg / cm) for 30 minutes. The catalyst was removed by filtration and the filtrate was evaporated to dryness in vacuo to give 1.93 g of product as a soapy solid.
io d.) c6h5ch2ococh2chconhch(ch2oh)conhch(A)2 NHCbzio d.) c6h5ch2ococh2chconhch (ch2oh) conhch (A) 2 NHCbz
Seosta, jossa oli 3,4 g (9,5 mmoolia) /3-bentsyyli-N-bentsyylioksikarbonyyli-L-aspartaattia, 1,0 ml (9,5 mmoolia) N-metyylimorfoliinia ja 0,9 ml (9,5 mmoo-15 lia) etyyliklooriformiaattia, sekoitettiin -15...-10°C:ssa viisi minuuttia ja -15°C:ssa lisättiin liuos, jossa oli 1,9 g (9,5 mmoolia) osassa C saatua D-seriini-N-di-syklopropyylikarbinyyliamidia 10 ml:ssa kloroformia.A mixture of 3.4 g (9.5 mmol) of 3-benzyl-N-benzyloxycarbonyl-L-aspartate, 1.0 ml (9.5 mmol) of N-methylmorpholine and 0.9 ml (9.5 mmol) of -15 lia) ethyl chloroformate, stirred at -15 ...- 10 ° C for five minutes and at -15 ° C a solution of 1.9 g (9.5 mmol) of D-serine-N obtained in Part C was added. -di-cyclopropylcarbinylamide in 10 ml of chloroform.
Saatua seosta sekoitettiin -10°C:ssa viisi minuuttia, 20 annettiin lämmetä ympäristön lämpötilaan ja sekoitettiin tunnin ajan. Liuottimen poistamiseksi reaktio-seos haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (250 ml), pestiin vuorollaan 1-norm. suolahapolla, 5-%:isella natriumvetykarbonaat-25 tiliuoksella ja suolaliuoksella, ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin haihdutettiin pois vakuumissa, jolloin saatiin hyytelömäistä kiinteätä ainetta. Tämä liuotettiin 75 ml:aan kuumaa etyyliasetaattia. Jäähdytettäessä saatiin kiteistä kiinteätä 30 ainetta, joka kuivattiin vakuumissa 40°C:ssa, jolloin saatiin 2,75 g haluttua disuojattua dipeptidiamidia hienojakoisena valkeana kiinteänä aineena; 0,30.The resulting mixture was stirred at -10 ° C for five minutes, allowed to warm to ambient temperature and stirred for 1 hour. To remove the solvent, the reaction mixture was evaporated to dryness in vacuo, the residue was dissolved in ethyl acetate (250 ml), washed in turn with 1N norm. hydrochloric acid, 5% sodium hydrogen carbonate-25 solution and brine, and dried over anhydrous magnesium sulfate. The solvent was evaporated in vacuo to give a gelatinous solid. This was dissolved in 75 ml of hot ethyl acetate. Upon cooling, a crystalline solid was obtained which was dried in vacuo at 40 ° C to give 2.75 g of the desired disubstituted dipeptide amide as a fine white solid; 0.30.
E.) Seosta, jossa oli 2,75 g osassa D saatua disuojattua dipeptidiamidia, 200 ml metanolia ja 1,0 g 35 5-%:ista Pd/C-katalyyttiä, hydrattiin 60 psi:n painees- 2 sa (4,2 kg/cm ) tunnin ajan, jolloin tuote saostui. Katalyytti/tuote-seos suodatettiin erilleen, suodatin-kakku lietettiin 100 ml:aan kuumaa vettä ja suodatet- 77045 32 20 tiin uudelleen. Yhdistetyt suodokset haihdutettiin kuiviin, trituroitiin veden kanssa, suodatettiin ja kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin 260 mg tuotetta hienojakoisena valkeana, höytymäisenä kiinteänä aineena; sp. 252-54°c; 0,58 (TLC, n-butanoli/vesi/- 25 etikkahappo 4:1:1, ninhydriini-suihke).E.) A mixture of 2.75 g of the disubstituted dipeptide amide from Part D, 200 mL of methanol, and 1.0 g of 35% Pd / C catalyst was hydrogenated at 60 psi (4.2 kg / cm) for one hour when the product precipitated. The catalyst / product mixture was filtered off, the filter cake was slurried in 100 ml of hot water and refiltered. The combined filtrates were evaporated to dryness, triturated with water, filtered and dried in vacuo to give 260 mg of product as a fine white fluffy solid; mp. 252-54 ° C; 0.58 (TLC, n-butanol / water / -acetic acid 4: 1: 1, ninhydrin spray).
Hydrauksessa saatu suodatinkakku lietettiin 50 ml: aan 0,1-norm. suolahappoa, seos suodatettiin piimään läpi (Supercel), suodoksen pH (pH 1,6) säädettiin arvoon pH 5,9 natriumhydroksidiliuoksella, ja saostunut 30 tuote koottiin talteen suodattamalla ja kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin vielä 800 mg tuotetta. Vaiheen kokonaissaanto 68 %.The filter cake obtained in the hydrogenation was slurried in 50 ml of 0.1-norm. hydrochloric acid, the mixture was filtered through diatomaceous earth (Supercel), the pH of the filtrate (pH 1.6) was adjusted to pH 5.9 with sodium hydroxide solution, and the precipitated product was collected by filtration and dried in vacuo to give a further 800 mg of product. The overall yield of the phase was 68%.
Massaspektri (m/e) 313 (M+).Mass spectrum (m / e) 313 (M +).
Esimerkki 2 L-aspartyyli-D-seriini-N-(2,4-dimetyyli-3-pen-tyyli)amidi 5 I, Ra = CH-0H, R = V- A.) D-H0CHoCHC0NH—( 2iExample 2 L-aspartyl-D-serine-N- (2,4-dimethyl-3-pentyl) amide 5 L, Ra = CH-OH, R = V-A.) D-HOCHoCHCONH- (2i
NHCbz SNHCbz S
10 Seka-anhydridiä valmistettiin seuraavasti: 1,0 g (4,3 mmoolia) N-bentsyylioksikarbohyyli-D-seriiniä liuotettiin 50 ml:aan tetrahydrofuraania, jäähdytettiin -10°C:seen typpiatmosfäärin suojämänä ja lisättiin 0,47 ml (4,3 mmoolia) N-metyylimorfoliinia 15 ja 0,41 ml (4,3 mmoolia) etyyliklooriformiaattia.The mixed anhydride was prepared as follows: 1.0 g (4.3 mmol) of N-benzyloxycarbohyl-D-serine was dissolved in 50 ml of tetrahydrofuran, cooled to -10 ° C under a nitrogen atmosphere and 0.47 ml (4.3 mmol) of N-methylmorpholine 15 and 0.41 ml (4.3 mmol) of ethyl chloroformate.
Seosta sekoitettiin 30 minuuttia -10°C:ssa.The mixture was stirred for 30 minutes at -10 ° C.
Seka-anhydridiliuokseen lisättiin 495 mg (4,3 mmoolia) 2,4-dimetyyli-3-aminopentaania liuotettuna pieneen määrään kloroformia, seosta sekoitettiin -10°C:ssa 20 15 minuuttia ja sen annettiin lämmetä huoneen lämpöti laan. Lisättiin etyyliasetaattia (40 ml) ja seos pestiin 1-norm. suolahapolla, natriumvetykarbonaattiliuoksella ja suolaliuoksella, ja orgaaninen kerros kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Haihduttamalla liuotin pois 33To the mixed anhydride solution was added 495 mg (4.3 mmol) of 2,4-dimethyl-3-aminopentane dissolved in a small amount of chloroform, the mixture was stirred at -10 ° C for 20 minutes and allowed to warm to room temperature. Ethyl acetate (40 ml) was added and the mixture was washed with 1-norm. hydrochloric acid, sodium hydrogencarbonate solution and brine, and the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate. By evaporating the solvent 33
7704S7704S
vakuumissa saatiin 1,27 g väritöntä kiinteätä ainetta jota trituroitiin etyylieetterin kanssa, suodatettiin ja kuivattiin ilmassa, jolloin saatiin 1,0 g väritöntä tuotetta, R^ 0,77 (TLC, etyyliasetaatti/heksaani, til.in vacuo gave 1.27 g of a colorless solid which was triturated with ethyl ether, filtered and air dried to give 1.0 g of a colorless product, Rf 0.77 (TLC, ethyl acetate / hexane, vol.
5 suhde 7:3, vanilliinisuihke).5 ratio 7: 3, vanillin spray).
B.) D-H0CH-CHC0NH —/ k V- 1,0 g edellä saatua tuotetta liuotettiin 50 ml:aan 10 metanolia, lisättiin 0,5 g 5 %:ista Pd/C-katalyyttiä 2 ja seosta hydrattiin 50 psi:n paineessa (3,52 kg/cm ) kunnes vedyn sitoutuminen lakkasi. Suodattamalla ja haihduttamalla suodos saatiin 700 mg haluttua tuotetta.B.) D-HOCH-CHCONH - / k V- 1.0 g of the product obtained above was dissolved in 50 ml of 10 methanol, 0.5 g of 5% Pd / C catalyst 2 was added and the mixture was hydrogenated at 50 psi. pressure (3.52 kg / cm) until hydrogen bonding ceased. Filtration and evaporation of the filtrate gave 700 mg of the desired product.
15 - c.) C6H5CH20C0CH2CHC0NHCH(CH20H)C0NH_/ K I—15 - c.) C6H5CH2OCHCH2CHCONHCH (CH2OH) CONH_ / K I—
Liuos, jossa oli 1,36 g (3,8 mmoolia) /^-bentsyy-li-N-bentsyylioksikarbonyyli-L-aspartaattia 10 ml:ssa 20 tetrahydrofuraania, jäähdytettiin -10°C:seen ja lisättiin 0,42 ml (3,8 mmoolia) N-metyylimorfoliinia. Tähän lisättiin tiputtamalla 0,36 ml (3,8 mmoolia) etyyli-klooriformiaattia ja saatua seosta sekoitettiin -10°C:ssa 5 minuuttia. Sitten lisättiin tiputtamalla 566 mg (2,8 25 mmoolia) D-seriini-N-(2,4-dimetyyli-3-pentyyli)amidia (osasta B edellä) muutamassa millilitrassa tetrahydro-furaania ja sekoittamista jatkettiin 15 minuuttia. Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin 30 kiinteätä jäännöstä. Tätä sekoitettiin etyyliasetaatin kanssa, pestiin 1-normaalisella suolahapolla ja orgaaninen faasi pestiin 5-%:isella natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja suolaliuoksella, kuivattiin (MgSC>4) ja liuotin haihdutettiin pois, jolloin saatiin 1,6 g tuo-35 tetta amorfisena kiinteänä aineena, jota käytettiin seu-raavassa vaiheessa.A solution of 1.36 g (3.8 mmol) of N-benzyl N-benzyloxycarbonyl L-aspartate in 10 ml of tetrahydrofuran was cooled to -10 ° C and 0.42 ml (3 .8 mmol) N-methylmorpholine. To this was added dropwise 0.36 ml (3.8 mmol) of ethyl chloroformate, and the resulting mixture was stirred at -10 ° C for 5 minutes. 566 mg (2.8 25 mmol) of D-serine-N- (2,4-dimethyl-3-pentyl) amide (from part B above) in a few milliliters of tetrahydrofuran were then added dropwise and stirring was continued for 15 minutes. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and evaporated to dryness in vacuo to give 30 solid residues. This was mixed with ethyl acetate, washed with 1N hydrochloric acid and the organic phase washed with 5% aqueous sodium hydrogen carbonate and brine, dried (MgSO 4) and the solvent evaporated to give 1.6 g of product as an amorphous solid which was used in the next step.
34 7 7 0 4 5 D.) Liuokseen, jossa oli 2,7 g disuojattua dipep- tidiamidia (valmistettu edellä osassa C selostetulla tavalla) metanolissa, lisättiin 1,5 g 5-%:ista Pd/C-ka- talyyttiä ja seosta hydrattiin 50 psi:n paineessa 2 5 (3,52 kg/cm ) kunnes vedyn sitoutuminen oli lakannut.34 7 7 0 4 5 D.) To a solution of 2.7 g of disubstituted dipeptide amide (prepared as described in Part C above) in methanol was added 1.5 g of 5% Pd / C catalyst and a mixture of hydrogenated at 50 psi 2 (3.52 kg / cm) until hydrogen bonding ceased.
Katalyytti poistettiin suodattamalla ja suodos haihdutettiin vakuumissa pienitilavuiseksi ja annettiin olla paikoillaan huoneen lämpötilassa. Saostunut tuote koottiin talteen suodattamalla ja kuivattiin vakuumissa, 10 jolloin saatiin 342 mg väritöntä kiinteätä ainetta, sp.The catalyst was removed by filtration and the filtrate was evaporated to low volume in vacuo and allowed to stand at room temperature. The precipitated product was collected by filtration and dried in vacuo to give 342 mg of a colorless solid, m.p.
90°C. Rf 0,65 ^ohutkerroskromatografia, n-butanoli:etik-kahapposvesi (tilavuussuhde 4:1:1)^?.90 ° C. Rf 0.65 TLC, n-butanol: water-acetic acid (4: 1: 1 v / v).
Makeus: 180 x sakkaroosin makeus.Sweetness: 180 x sweetness of sucrose.
Esimerkki 3 15 L-aspartyyli-D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrametyyli- tietan-3-yyli)amidi CH, en., X/Example 3 L-aspartyl-D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethylethan-3-yl) amide CH, en., X /
I , Ra = CH-0H, R = -/ XI, Ra = CH-OH, R = - / X
2020
/N/OF
CH3 CH3 A.) d-hoch2chcooh NHt-BocCH3 CH3 A.) d-hoch2chcooh NHt-Boc
Menetelmänä oli menetelmä, jota ovat selosta-25 neet Moroder ym., Z. Physiol. Chem. 357, 1651 (1976) t-Boc-aminohappojen valmistamiseksi. Liuokseen, jossa oli 10 ml dioksaania ja 10 ml vettä, lisättiin 2,18 g (10 mmoolia) di-t-butyylidikarbonaattia, 1,6 ml (11,5 mmoolia) trietyyliamiinia ja 1,05 g (10 mmoolia) D-30 seriiniä. Seosta sekoitettiin 30 minuuttia huoneen lämpötilassa ja dioksaani haihdutettiin pois vakuumissa. Vesipitoinen jäännös jäähdytettiin jäissä, lisättiin etyyliasetaattia ja seosta sekoitettiin lisäten laimeata kaliumvetysulfaattiliuosta kunnes pH oli 2-3.The method was that described by Moroder et al., Z. Physiol. Chem. 357, 1651 (1976) for the preparation of t-Boc amino acids. To a solution of 10 mL of dioxane and 10 mL of water were added 2.18 g (10 mmol) of di-t-butyl dicarbonate, 1.6 mL (11.5 mmol) of triethylamine, and 1.05 g (10 mmol) of D-30. serine. The mixture was stirred for 30 minutes at room temperature and the dioxane was evaporated off in vacuo. The aqueous residue was cooled on ice, ethyl acetate was added, and the mixture was stirred by adding dilute potassium hydrogen sulfate solution until the pH was 2-3.
35 Vesikerros erotettiin, uutettiin kahdesti etyyliasetaatilla ja yhdistetyt uutteet pestiin vedellä, kuivattiin (Na2S04) ja liuotin haihdutettiin pois vakuumissa, jolloin saatiin 1,7 g tuotetta viskoosisena tahnana.The aqueous layer was separated, extracted twice with ethyl acetate and the combined extracts were washed with water, dried (Na 2 SO 4) and the solvent evaporated in vacuo to give 1.7 g of product as a viscous paste.
35 7 7 0 4 5 CH3 ch335 7 7 0 4 5 CH3 ch3
B.) D-H0CHoCHC0NH--A XB.) D-HOCHoCHCONH - A X
A XA X
CH3 CH3 5 Seka-anhydridiä valmistettiin 2,85 g:sta (14 mmoo- lia) N-t-butoksikarbonyyli-D-seriiniä, 1,55 ml:sta N-me-tyylimorfoliinia, 1,34 ml:sta etyyliklooriformiaat-tia 75 ml:ssa metyleenikloridia -12...-10°C:ssa esimerkin 1 osan B menetelmällä. Tähän seokseen lisättiin 2,01 g 10 (14 mmoolia) 3-amino-2,2,4,4-tetrametyylitietaania ja sekoittamista jatkettiin viisi minuuttia -12°C:ssa.CH3 CH3 5 Mixed anhydride was prepared from 2.85 g (14 mmol) of Nt-butoxycarbonyl-D-serine, 1.55 ml of N-methylmorpholine, 1.34 ml of ethyl chloroformate and 75 ml of in methylene chloride at -12 to -10 ° C by the method of Example 1, Part B. To this mixture was added 2.01 g of 10 (14 mmol) of 3-amino-2,2,4,4-tetramethylethane and stirring was continued for 5 minutes at -12 ° C.
Tuote eristettiin esimerkissä 1 osassa B selostetulla tavalla, jolloin saatiin 4 g viskoosista nestemäistä jäännöstä. Jäännös liuotettiin 40 ml:aan metyleeniklo-15 ridia, lisättiin 12 ml trifluorietikkahappoa (d = 1,480) ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kolme tuntia. Reaktioseos tehtiin alkaliseksi 40-%:isella nat-riumhydroksidiliuoksella, orgaaninen kerros erotettiin, vesikerros kyllästettiin natriumkloridilla ja uutettiin 20 metyleenikloridilla. Yhdistetyt uutteet kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin 2,21 g amorfista, harmahtavaa kiinteätä ainetta. Kiteyttämällä etyylieetteri/heksaani-seoksesta saatiin 1,92 g tuotetta hienojakoisena, valkeana kiinteänä 25 aineena. (CH-,)^The product was isolated as described in Example 1, Part B to give 4 g of a viscous liquid residue. The residue was dissolved in 40 ml of methylene chloride, 12 ml of trifluoroacetic acid (d = 1.480) were added and the mixture was stirred at room temperature for three hours. The reaction mixture was made alkaline with 40% sodium hydroxide solution, the organic layer was separated, the aqueous layer was saturated with sodium chloride and extracted with methylene chloride. The combined extracts were dried (MgSO 4) and evaporated to dryness in vacuo to give 2.21 g of an amorphous, off-white solid. Crystallization from ethyl ether / hexane gave 1.92 g of product as a fine white solid. (CH -,) ^
AA
C.) t-butyyli0C0CH2CHC0NHCHC0NH—X XC.) t-butylOCOCH 2 CHCONHCHCONH-X X
| CH20H \A| CH 2 OH \ A
NH-t-Boc (CH3)2 30 Seosta, jossa oli 2,3 g (,0 mmoolia) y^-t-butyy- li-N-t-butoksikarbonyyli-L-asparaattia, 0,88 ml (8,0 mmoolia) N-metyylimorfoliinia ja 0,77 ml (8,0 mmoolia) etyyliklooriformiaattia 40 ml:ssa metyleenikloridia, sekoitettiin -12°C:ssa viisi minuuttia. Lisättiin liuos, 35 jossa oli 1,85 g (8,0 mmoolia) D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrametyylitietan-3-yyli)amidia 5 ml:ssa samaa liuotinta ja sekoittamista jatkettiin -12 .. .-10°C:ssa kymmenen minuuttia. Seoksen annettiin lämmetä huoneen « 77045 ό Ο lämpötilaan, sekoitettiin tunnin ajan tässä lämpötilassa ja liuotin haihdutettiin pois. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin, pestiin laimealla suolahapolla, natriumvetykarbonaattiliuoksella ja suolaliuoksella, kui-5 vattiin (MgSO^) ja etyyliasetaatti haihdutettiin pois, jolloin saatiin 3,34 g amorfista kiinteätä ainetta. Kiteyttämällä etyylieetteri/häksaani-seoksesta saatiin 2,91 g väritöntä kiinteätä tuotetta, 0,70 (etyyli-asetaatti/heksaani-seos, 7:3).NH-t-Boc (CH3) 2 A mixture of 2.3 g (0.0 mmol) of tert-butyl N-t-butoxycarbonyl L-aspartate, 0.88 ml (8.0 mmol) N-methylmorpholine and 0.77 mL (8.0 mmol) of ethyl chloroformate in 40 mL of methylene chloride were stirred at -12 ° C for five minutes. A solution of 1.85 g (8.0 mmol) of D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethylethan-3-yl) amide in 5 ml of the same solvent was added and stirring was continued at -12. At -10 ° C for ten minutes. The mixture was allowed to warm to room temperature> 77045 ° C, stirred for 1 hour at this temperature and the solvent was evaporated. The residue was dissolved in ethyl acetate, washed with dilute hydrochloric acid, sodium bicarbonate solution and brine, dried (MgSO 4) and the ethyl acetate evaporated to give 3.34 g of an amorphous solid. Crystallization from ethyl ether / hexane gave 2.91 g of a colorless solid, 0.70 (ethyl acetate / hexane, 7: 3).
10 D.) Liuokseen, jossa oli 2,4 g (4,78 mmoolia) edellä osassa C saatua tuotetta 60 ml:ssa kloroformia, sijoitettiin kaasun sisäänjohtoputki ja liuoksen läpi johdettiin kuplina kuivaa kloorivetyä. Viiden minuutin kuluttua havaittiin kiinteän aineen saostumista. Kloo-15 rivedyn lisäämistä jatkettiin kymmenen minuuttia, sen jälkeen seosta sekoitettiin ympäristön lämpötilassa tunnin ajan ja sitten haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös liuotettiin veteen, pestiin kloroformilla ja pH säädettiin arvoon 5,6, pestiin uudelleen kloroformilla, 20 ja vesifaasi haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännökseen lisättiin etanolia ja seos haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös liuotettiin 25 ml:aan kuumaa vettä ja annettiin jäähtyä. Saostunut tuote koottiin talteen suodattamalla ja kuivattiin vakuumissa, jolloin saa-25 tiin 1,12 g (67 %) tuotetta, sp. 193-196°C.D.) To a solution of 2.4 g (4.78 mmol) of the product obtained in Part C above in 60 ml of chloroform was placed a gas inlet tube, and dry hydrogen chloride was bubbled through the solution. After 5 minutes, a precipitate of solid was observed. The addition of chloro-15 hydrogen was continued for ten minutes, then the mixture was stirred at ambient temperature for one hour and then evaporated to dryness in vacuo. The residue was dissolved in water, washed with chloroform and the pH was adjusted to 5.6, washed again with chloroform, and the aqueous phase was evaporated to dryness in vacuo. Ethanol was added to the residue and the mixture was evaporated to dryness in vacuo. The residue was dissolved in 25 ml of hot water and allowed to cool. The precipitated product was collected by filtration and dried in vacuo to give 1.12 g (67%) of product, m.p. 193-196 ° C.
R^ 0,32 (n-butanoli/vesi/etikkahappo 4:1:1).Rf 0.32 (n-butanol / water / acetic acid 4: 1: 1).
Analyysi yhdisteelle C14H25N3°5SAnalysis for C 14 H 25 N 3 O 5 S
laskettu: C 48,39; H 7,25; N 12,09; S 9,23.Calculated: C, 48.39; H 7.25; N 12.09; S 9.23.
saatu: C 46,77; H 7,48; N 11,91; S 8,82.Found: C, 46.77; H 7.48; N 11.91; S 8.82.
30 Makeutusteho, 1200 x sakkaroosin makeutusteho.30 Sweetening power, 1200 x sweetening power of sucrose.
Esimerkki 4 L-aspartyyli-D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrametyyli- 1,l-dioksotietan-3-yyli)amidi CH^CHa 35 I, Ra = CH-OH, R = —ς SO,Example 4 L-aspartyl-D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-1,1-dioxothietan-3-yl) amide CH 2 CH 3 35 I, Ra = CH-OH, R = —ς SO,
XX
CH3 CH3 37 77045 A.) 3-amino-2,2,4,4-tetrametyylitetaani-1,1-dioksidi Liuosta, jossa oli 14,53 g (0,1 moolia) 3-ami-no-2,2,4,4-tetrametyylitietaania ja 64,17 g (0,3 moolia) natrium-m-perjodaattia 500 ml:ssa vettä sekoitettiin yön 5 ajan huoneen lämpötilassa. Reaktioseoksen pH säädettiin natriumhydroksidiliuoksella arvoon 13 ja saostunut nat-riumjodaatti poistettiin suodattamalla. Suodos pestiin 100 mlslla etyylieetteriä, vesifaasia uutettiin jatkuvasti 18 tuntia metyleenikloridilla, uute kuivattiin 10 (MgSO^) ja liuotin haihdutettiin pois vakuumissa. Jäljelle jäänyt kiinteä aine kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatista, jolloin saatiin 8,5 g tuotetta, sp. 104-106,5°C. Saatiin myös toinen erä kiteitä, 2,7 g,* sp. 103-106°C. Kokonaissaanto 63 %.CH 3 CH 3 37 77045 A.) 3-Amino-2,2,4,4-tetramethylmethane-1,1-dioxide A solution of 14.53 g (0.1 mol) of 3-amino-2,2, 4,4-Tetramethylethane and 64.17 g (0.3 mol) of sodium m-periodate in 500 ml of water were stirred overnight at room temperature. The pH of the reaction mixture was adjusted to 13 with sodium hydroxide solution, and the precipitated sodium iodate was removed by filtration. The filtrate was washed with 100 ml of ethyl ether, the aqueous phase was extracted continuously for 18 hours with methylene chloride, the extract was dried (MgSO 4) and the solvent was evaporated off in vacuo. The residual solid was recrystallized from ethyl acetate to give 8.5 g of product, m.p. 104 to 106.5 ° C. A second batch of crystals, 2.7 g, * m.p. 103-106 ° C. Total yield 63%.
15 B.) D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrametyyli-l,1-diokso- tietan-3-yyli)amidiB.) D-Serine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-1,1-dioxothetan-3-yl) amide
Esimerkin 1 osan B menetelmällä 1,33 g:sta (6,5 moolia) N-bentsyylioksikarbonyyli-D-seriiniä, 0,715 ml:sta N-metyylimorfoliinia, 0,62 ml:sta etyyliklooriformiaat-20 tia ja 1,15 g:sta (6,5 mmoolia) 3-amino-2,2,4,4-tetra-metyylitietaani-1,1-dioksidia saatiin 2,3 g N-bentsyy-lioksikarbonyyli-D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrametyyli- 1,l-dioksotietan-3-yyli)amidia viskoosisena nesteenä, R^ 0,37 (etyyliasetaatti/heksaani-seos, 7:3). Tämä 25 neste liuotettiin metanoliin, lisättiin 750 mg 5-%:ista Pd/C-katalyyttiä ja seosta hydrattiin esimerkin 1 osan C mukaisella menetelmällä. Katalyytin poistamiseksi suoritetun suodatuksen jälkeen metanoli haihdutettiin vakuumissa, jäännös liuotettiin 1-norm. suolahappoon 30 ja uutettiin kloroformilla. Vesikerros tehtiin alkali-seksi natriumkloridilla kyllästetyllä natriumhydroksi-dilla ja uutettiin jatkuvasti yön ajan kloroformilla. Haihduttamalla liuotin pois saatiin 1,54 g tuotetta viskoosisena nesteenä, joka muuttui kiinteäksi ollessa pai-35 koillaan, Rf 0,32 (m-butanoli/vesi/etikkahappo, 4:1:1).By the method of Example 1, Part B, 1.33 g (6.5 moles) of N-benzyloxycarbonyl-D-serine, 0.715 ml of N-methylmorpholine, 0.62 ml of ethyl chloroformate-20 and 1.15 g of (6.5 mmol) of 3-amino-2,2,4,4-tetramethylethane-1,1-dioxide gave 2.3 g of N-benzyloxycarbonyl-D-serine-N- (2,2,4 , 4-tetramethyl-1,1-dioxothietan-3-yl) amide as a viscous liquid, Rf 0.37 (ethyl acetate / hexane, 7: 3). This liquid was dissolved in methanol, 750 mg of 5% Pd / C catalyst was added, and the mixture was hydrogenated according to the method of Example 1, Part C. After filtration to remove the catalyst, the methanol was evaporated in vacuo, the residue was dissolved in 1N norm. hydrochloric acid 30 and extracted with chloroform. The aqueous layer was basified with sodium hydroxide saturated with sodium chloride and extracted continuously with chloroform overnight. Evaporation of the solvent gave 1.54 g of product as a viscous liquid which solidified on standing, Rf 0.32 (m-butanol / water / acetic acid, 4: 1: 1).
38 7 70 4 5 CH, CH038 7 70 4 5 CH, CH0
XX
C.) CcHc0C0CHoCHC0NHCHC0NH—< S0o 6 5 2, | 2C.) CcHc0C0CHoCHC0NHCHC0NH— <SO0 6 5 2, | 2
NHCbz CH OHNHCbz CH OH
CH3 ^ch3 5 Edellä esitetyn kaavan mukaista disuojattua dipeptidiamidia valmistettiin 4,7 mmooli-mittakaavas-sa käyttämällä esimerkin 1 osan D menetelmää ja 1,7 g /3-bentsyyli-N-bentsyylioksikarbonyyli-L-aspartaattoa, 0,51 ml N-metyylimorfolinia, 0,45 ml etyylikloori-10 formiaattia ja 1,24 g D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrame-tyyli-1,l-dioksotietan-3-yyli)amidia. Tuote, 2,45 g, saatiin värittömänä amorfisena, kiinteänä aineena. Kaksi grammaa tätä ainetta puhdistettiin kromatografises-ti 60 g:11a silikageeliä eluoimalla etyyliasetaatilla, 15 jolloin saatiin 1,2 g amorfista kiinteätä tuotetta,CH3 ^ ch3 5 The disprotected dipeptide amide of the above formula was prepared on a 4.7 mmol scale using the method of Example 1, Part D and 1.7 g of β-benzyl-N-benzyloxycarbonyl-L-aspartate, 0.51 ml of N-methylmorpholine. , 0.45 ml of ethyl chloro-10 formate and 1.24 g of D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-1,1-dioxothietan-3-yl) amide. The product, 2.45 g, was obtained as a colorless amorphous solid. Two grams of this material was purified by chromatography on 60 g of silica gel eluting with ethyl acetate to give 1.2 g of an amorphous solid.
Rf 0,30 (etyyliasetaatti/heksaani, 7:3).Rf 0.30 (ethyl acetate / hexane, 7: 3).
D.) Seosta, jossa oli 1,2 g edellä osassa C saatua pudistettua tuotetta, 75 ml metanolia ja 0,6 g 5-%:istaD.) A mixture of 1.2 g of the shaken product obtained in Part C above, 75 ml of methanol and 0.6 g of 5%
Pd/C-katalyyttiä, hydrattiin 80 psi:n paineessa (5,6 kg/ 2 20 cm ). Vedyn sitoutumisen päätyttyä katalyytti poistettiin suodattamalla, ja suodos haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin väritöntä kiinteätä jäännöstä. Jäännös liuotettiin veteen, pestiin kloroformilla ja vesikerros haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäljelle jäänyt kiin-25 teä aine kiteytettiin etanolista, jolloin saatiin 255 mg haluttua dipeptidiamidia hienojakoisena, valkeana kiinteänä aineena; sp. 170-173°C; R^0,20. Käsittelemällä uudelleen hydrauksessa saatua suodatinkakkua saatiin vielä 180 mg tuotetta.Pd / C catalyst, hydrogenated at 80 psi (5.6 kg / 2 20 cm). After completion of the hydrogen uptake, the catalyst was removed by filtration, and the filtrate was evaporated to dryness to give a colorless solid residue. The residue was dissolved in water, washed with chloroform and the aqueous layer was evaporated to dryness in vacuo. The residual solid was crystallized from ethanol to give 255 mg of the desired dipeptide amide as a fine white solid; mp. 170-173 ° C; R 0.20. Reprocessing the filter cake obtained in the hydrogenation gave a further 180 mg of product.
30 Makeutusteho: 850 x sakkaroosin makeutusteho.30 Sweetening power: 850 x sweetening power of sucrose.
39 7704539 77045
Esimerkki 5 A. ) N-klooriasetyyli-dl-O-metyyliseriini 125 ml:aan vettä lisättiin 59,55 g (0,5 moolia) dl-O-metyyliseriiniä, seosta sekoitettiin ja lisät-5 tiin 20 g (0,5 moolia) natriumhydroksidia. Saatua liuosta jäähdytettiin jäissä ja kahdesta tiputussuppilosta lisättiin samanaikaisesti tunnin kuluessa liuos, jossa oli 20 g natriumhydroksidia 125 ml:ssa vettä ja 47,8 ml (0,6 moolia) klooriasetyylikloridia. Lisäysmäärät sää-10 dettiin siten, että reaktioseoksen pH saatiin pidetyksi rajoissa 9,0-9,5. Lisäyksen päätyttyä saatua seosta sekoitettiin tunnin ajan pH-arvon ollessa välillä 9,0-9,5. Seos pestiin kahdesti metyleenikloridilla, vesifaasi tehtiin happameksi pH-arvoon 1,5 väkevällä suolahapolla 15 jäillä jäähdyttäen, kyllästettiin natriumkloridilla ja uutettiin useaan kertaan kloroformilla. Yhdistetyt uutteet kuivattiin (MgSO^) ja liuotin haihdutettiin vakuu-missa. Jäännöstä sekoitettiin etyylieetterin kanssa keltaisen kiinteän tuotteen saostamiseksi, joka koottiin 20 talteen suodattamalla ja kuivattiin,' 69,38 g (71 %) .Example 5 A.) N-chloroacetyl-dl-O-methylserine To 125 ml of water was added 59.55 g (0.5 moles) of dl-O-methylserine, the mixture was stirred and 20 g (0.5 moles) of ) sodium hydroxide. The resulting solution was cooled in ice, and a solution of 20 g of sodium hydroxide in 125 ml of water and 47.8 ml (0.6 mol) of chloroacetyl chloride was added simultaneously from two dropping funnels. The addition amounts were adjusted to keep the pH of the reaction mixture in the range of 9.0-9.5. At the end of the addition, the resulting mixture was stirred for one hour at a pH between 9.0 and 9.5. The mixture was washed twice with methylene chloride, the aqueous phase was acidified to pH 1.5 with concentrated hydrochloric acid under ice-cooling, saturated with sodium chloride and extracted several times with chloroform. The combined extracts were dried (MgSO 4) and the solvent evaporated in vacuo. The residue was stirred with ethyl ether to precipitate a yellow solid which was collected by filtration and dried to give 69.38 g (71%).
Sp. 104-107°C, Rf 0,23 (etyy.liasetaatti/heksaani/etik-kahappo, 9:9:2, fosforimolybdaattisuihke). Toinen erä saatiin vesifaasista lisäämällä enemmän natriumklori-dia ja uuttamalla kloroformilla. Haihduttamalla kloro-25 formi pois saatiin 3,65 g tuotetta. Kokonaissaanto 75 %.Sp. 104-107 ° C, Rf 0.23 (ethyl acetate / hexane / acetic acid, 9: 9: 2, phosphorus molybdate spray). The second batch was obtained from the aqueous phase by adding more sodium chloride and extracting with chloroform. Evaporation of the chloro-25 form gave 3.65 g of product. Total yield 75%.
B. ) N-klooriasetyyli-D-O-metyyliseriini 3000 ml:aan vettä, jonka lämpötila oli 35-37°C, lisättiin 73,03 g (0,37 moolia) N-klooriasetyyli-dl-O-metyyliseriiniä ja seoksen pH säädettiin arvoon 7,18 30 lisäämällä väkevää ammoniumhydroksidia. Lisättiin vettä siten, että kokonaistilavuudeksi tuli 3700 ml. Tähän lisättiin 17 mg kaupan olevaa sianmunuais-aminoasylaa-sia /N-asyyliaminohappo-amidohydrolaasia; EC 3.5.1.14 (Acylase Ijj, jossa oli 1845 yksikköä/mg (1 yksikkö mää-35 ritetään määräksi, joka tarvitaan hydrolysoimaan 1 mik-romooli N-asetyyli-L-metioniinia tuntia kohden pH:n oi- 40 77045 lessa 7,0 ja lämpötilan 25°C). Lisätyn entsyymin määrä oli määrä, jonka laskettiin hydrolysoivan herkän isomeerin kuudessa tunnissa. Saatua liuosta pidettiin 37-38°C:ssa 28 tuntia lisäämällä silloin tällöin ammonium-5 hydroksidia siten, että pH pysyi välillä 7,1 - 7,2. 24 tunnin kuluttua lisättiin vielä 5 mg entsyymiä. Hydro-lyysiseos tehtiin happameksi pH-arvoon 4,5 jääetikka-hapolla, suodatettiin 0,6 pm:n millipore-suotimen (tyyppiä BD) läpi ja suodosta haihdutettiin vakuumis-10 sa 35°C:n alapuolella kokonaistilavuuden pienentämiseksi välille 100-150 ml. Jäljellejäänyt seos tehtiin happameksi pH-arvoon 2,00 suolahapolla ja uutettiin useaan kertaan etyyliasetaatilla ja uutettiin edelleen kloroformilla. Erilliset orgaaniset uutteet pestiin 15 kukin vedellä, kuivattiin (MgSO^) ja liuotin haihdutettiin pois vakuumissa, jolloin saatiin keltaista nestemäistä jäännöstä. Kiteytyminen käynnistettiin lisäämällä heksaania ja haihduttamalla vakuumissa. Etyyliase-taattiuutteista saatiin 16,67 g (46 %) N-klooriasetyyli-20 D-O-metyyliseriiniä ,* sp. 95-96°C,‘ - 15,5 (C = 1, 1-norm. NaOH). Kloroformiuutteista saatiin 4,61 g (31 %) samaa tuotetta! sp. 90-94°C (kloorietikkahapon tuoksua). Molemmat tuote-erät antoivat yhden ainoan täplän ohutker-roskromatografiakäsittelyssä silikageelilevyillä,' 25 0,35 (etyyliasetaatti/heksaani/etikkahappo, 9:9:2, fosforimolybdaatti-suihke).B.) N-chloroacetyl-DO-methylserine To 3000 ml of water at 35-37 ° C was added 73.03 g (0.37 mol) of N-chloroacetyl-dl-O-methylserine and the pH of the mixture was adjusted to 7.18 30 by adding concentrated ammonium hydroxide. Water was added to give a total volume of 3700 ml. To this was added 17 mg of commercial porcine kidney aminoacylase / N-acylamino acid amidohydrolase; EC 3.5.1.14 (Acylase Ijj at 1845 units / mg (1 unit is defined as the amount needed to hydrolyze 1 micromole of N-acetyl-L-methionine per hour at pH 7 77045 7.0 and the temperature of 25 ° C.) The amount of enzyme added was the amount calculated for six hours of hydrolysis of the sensitive isomer, and the resulting solution was kept at 37-38 ° C for 28 hours with occasional addition of ammonium-5 hydroxide so that the pH remained between 7.1 and 7.2 After 24 hours, an additional 5 mg of enzyme was added, the hydrolysis mixture was acidified to pH 4.5 with glacial acetic acid, filtered through a 0.6 μm Millipore filter (type BD) and the filtrate was evaporated in vacuo. Below 35 ° C to reduce the total volume to between 100 and 150 ml, the remaining mixture was acidified to pH 2.00 with hydrochloric acid and extracted several times with ethyl acetate and further extracted with chloroform The separate organic extracts were washed each with water, dried (MgSO 4) and the solvent evaporated in vacuo to give a yellow liquid residue. Crystallization was initiated by the addition of hexane and evaporation in vacuo. 16.67 g (46%) of N-chloroacetyl-20-D-O-methylserine were obtained from the ethyl acetate extracts, * m.p. 95-96 ° C, '- 15.5 (C = 1,1-norm. NaOH). From the chloroform extracts 4.61 g (31%) of the same product were obtained! mp. 90-94 ° C (chloroacetic acid odor). Both batches gave a single spot on thin layer chromatography on silica gel plates, 0.35 (ethyl acetate / hexane / acetic acid, 9: 9: 2, phosphorus molybdate spray).
C. 16,67 g:aan (0,085 moolia) N-klooriasetyyli-D-O-metyyliseriiniä lisättiin 25 ml 2-norm, suolahappoa ja seosta lämmitettiin kiehuttaen kolme tuntia. Seos 30 konsentroitiin vakuumissa, karkoittamalla jäljelle jäänyt kloorietikkahappo lisätyllä vedellä. Kiinteä jäännös pestiin etyylieetterillä ja koottiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin 12,31 g (93 %) D-O-metyyliseriini-hydrokloridia,' sp. 188-190°C; “16,7° (C = 0,7, 35 CH30H).C. To 16.67 g (0.085 mol) of N-chloroacetyl-D-O-methylserine was added 25 ml of 2-norm hydrochloric acid and the mixture was heated at reflux for three hours. Mixture 30 was concentrated in vacuo, expelling the remaining chloroacetic acid with added water. The solid residue was washed with ethyl ether and collected by filtration to give 12.31 g (93%) of D-O-methylserine hydrochloride, m.p. 188-190 ° C; 16.7 ° (C = 0.7, 35 CH 3 OH).
41 7704541 77045
Esimerkki 6 L-aspartyyli-D-O-metyyliseriini-N-disyklopropyy- likarbinyyli) amidi .Λ 5 I, R = CH20CH3, R = A.) D-CH0 —OCH-nCHCO OH 3 2{ NHCbzExample 6 L-aspartyl-D-O-methylserine-N-dicyclopropylcarbinyl) amide. 5 L, R = CH 2 OCH 3, R = A.) D-CHO-OCH-nCHCO OH 3 2 {NHCbz
Liuos, jossa oli 12,31 g (0,079 moolia) D-0-10 metyyliseriiniä 40 ml:ssa vettä, jossa oli 6,32 g (0,158 moolia) natriumhydroksidia, jäähdytettiin 5-10°C:seen ja samanaikaisesti lisättiin (pH:n ollessa 8-9) 11,74 ml (0,0806 moolia) bentsyyliklooriformiaattia ja 4-mol. natriumhydroksidia. Saatua seosta sekoitettiin kunnes 15 pH pysyi arvossa 8 lisäämättä enempää emästä. Metylee-nikloridilla pesemisen jälkeen vesifaasi tehtiin happa-meksi väkevällä suolahapolla, uutettiin neljä kertaa metyleenikloridilla, uutteet kuivattiin (MgSO^) ja liuotin haihdutettiin vakuumissa. Viskoosista nestemäistä 20 jäännöstä sekoitettiin heksaanin kanssa ja saostunut kiinteä aine koottiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin 18,6 g tuotetta (93 %) , /9^-2,7° (C = 1, 1-norm. NaOH), Rf 0,43.A solution of 12.31 g (0.079 moles) of D-0-10 methylserine in 40 ml of water containing 6.32 g (0.158 moles) of sodium hydroxide was cooled to 5-10 ° C and simultaneously added (pH: n being 8-9) 11.74 ml (0.0806 moles) of benzyl chloroformate and 4-mol. sodium hydroxide. The resulting mixture was stirred until the pH remained at 8 without the addition of more base. After washing with methylene chloride, the aqueous phase was acidified with concentrated hydrochloric acid, extracted four times with methylene chloride, the extracts dried (MgSO 4) and the solvent evaporated in vacuo. The viscous liquid residue was mixed with hexane and the precipitated solid was collected by filtration to give 18.6 g of product (93%), λmax -2.7 ° (C = 1.1 N NaOH), Rf 0, 43.
AA
25 B.) D-CH..0CH-CHC0NH25 B.) D-CH..OCH-CHCONH
3 2i V3 2i V
NHCbzNHCBz
Liuokseen, jossa oli 3,80 g (0,015 moolia) N-bents-yylioksikarbonyyli-D-O-metyyliseriiniä 75 ml:ssa mety-leenikloridia, lisättiin 1,68 ml (0,015 moolia) N-me-30 tyylimorfoliinia ja seos jäähdytettiin -15°C:seen. Tähän lisättiin 1,43 ml (0,015 moolia) etyyliklooriformiaat-tia, seosta sekoitettiin -20...15°C:ssa kymmenen minuuttia ja lisättiin 1,68 g (0,015 moolia) disyklopropyyli-karbinyyliamiinia. Seoksen annettiin lämmetä huoneen läm- 42 ' 77045 potilaan ja sekoitettiin kaksi tuntia. Saatu seos pestiin kaksi kertaa 1-norm. natriumhydroksidilla, kahdesti 1-norm. suolahapolla ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Haihduttamalla liuotin pois vakuumissa saatiin 5,1 g 5 (98 %) haluttua tuotetta, 0,59 (silikageeli-TLC:n jälkeen, etyyliasetaatti/heksaani-seoksella 1:1; fosfo-rimolybdaatti-suihke^.To a solution of 3.80 g (0.015 mol) of N-benzyloxycarbonyl-DO-methylserine in 75 ml of methylene chloride was added 1.68 ml (0.015 mol) of N-methyl-morpholine and the mixture was cooled to -15 °. C. To this was added 1.43 ml (0.015 mol) of ethyl chloroformate, the mixture was stirred at -20 to 15 ° C for ten minutes, and 1.68 g (0.015 mol) of dicyclopropylcarbinylamine was added. The mixture was allowed to warm to room temperature in a 42 '77045 patient and stirred for two hours. The resulting mixture was washed twice with 1-norm. with sodium hydroxide, twice 1-norm. hydrochloric acid and dried over magnesium sulfate. Evaporation of the solvent in vacuo gave 5.1 g (98%) of the desired product, 0.59 (after silica gel TLC, ethyl acetate / hexane 1: 1; phosphomolybdate spray).
Tuotteen struktuuri varmennettiin 1H-NMR-spektro-skooppisesti.The structure of the product was confirmed by 1 H-NMR spectroscopy.
10 /Λ c.) D-CH30CH2CH (ΟΗ2)α0ΝΗ-\10 / Λ c.) D-CH30CH2CH (ΟΗ2) α0ΝΗ- \
VV
5,1 g edellä osassa B saatua N-bentsyylioksikarbo-nyyli-D-O-metyyliseriini-N-(disyklopropyylikarbinyyli)ami-15 dia hydrattiin esimerkin 1 osan C menetelmällä, jolloin saatiin 2,96 g (95 %) D-O-metyyliseriini-N-(disyklopropyylikarbinyyli ) amidia nesteenä, Rf 0,39; -23,2 (C = 0,7, 1-norm. HC1). Struktuurin varmensi 1H-NMR-spektroskooppinen määritys.5.1 g of N-benzyloxycarbonyl-DO-methylserine-N- (dicyclopropylcarbinyl) amide obtained in Part B above was hydrogenated by the method of Example 1, Part C to give 2.96 g (95%) of DO-methylserine-N- (dicyclopropylcarbinyl) amide as a liquid, Rf 0.39; -23.2 (C = 0.7, 1-normal HCl). The structure was confirmed by 1 H-NMR spectroscopic determination.
20 D.) C6H5CH2OCOCH2CH(NHCbz)CONHCH(CH2OCH3)CONHCH(A)220 D.) C6H5CH2OCOCH2CH (NHCbz) CONHCH (CH2OCH3) CONHCH (A) 2
Seoksen, jossa oli 4,97 g (13,9 mmoolia) /^-bents-yyli-N-bent^ylioksikarbonyyli-L-aspartaattia, 1,55 ml (13,9 mmoolia) N-metyylimorfoliinia ja 1,33 ml (13,9 mmoolia) etyyliklooriformiaattia, annettiin reagoida 25 esimerkissä 1 osassa D selostetulla tavalla, jolloin saatiin 7,43 g (97 %) disuojattua dipeptidiamidia, joka kiteytettiin uudelleen kaksi kertaa etyyliasetaatista, jolloin saatiin 4,25 g väritöntä tuotetta, R^ 0,45 (etyyliasetaatti/heksaani-seos, 7:3). Rakenne varmennet-30 tiin 1H-NMR:n avulla.A mixture of 4.97 g (13.9 mmol) of N-benzyl N-benzyl oxycarbonyl L-aspartate, 1.55 ml (13.9 mmol) of N-methylmorpholine and 1.33 ml ( 13.9 mmol) of ethyl chloroformate, was reacted as described in Example 1, Part D to give 7.43 g (97%) of the disubstituted dipeptide amide, which was recrystallized twice from ethyl acetate to give 4.25 g of a colorless product, Rf. 45 (ethyl acetate / hexane, 7: 3). The structure was verified by 1 H-NMR.
E.) Hydrattaessa 4,25 g edellä osassa D saatua puhdistettua disuojattua dipeptidiamidia esimerkin 1 osan E menetelmällä, saatiin 2,4 g (95 %) haluttua dipeptidiamidia, sp. 215-217°C (hajosi); +37,6° 35 (C = 0,8, 1,2-norm. HC1); R^ 0,41.E.) Hydrogenation of 4.25 g of the purified disubstituted dipeptide amide obtained in Part D above by the method of Example 1, Part E gave 2.4 g (95%) of the desired dipeptide amide, m.p. 215-217 ° C (dec.); + 37.6 ° 35 (C = 0.8, 1.2-norm HCl); Rf 0.41.
43 7704543 77045
Makeutusteho, 85 x sakkaroosin makeutusteho.Sweetening power, 85 x sucrose sweetening power.
Esimerkki 7 L-aspartyyli-D-O-metyyliseriini-N-^ ,2,4,4-tetra- metyylitietan-3-yyli)amidi 5 CH, CH- K/ I, Ra = CH20CH3, R = ch/ch3Example 7 L-aspartyl-D-O-methylserine-N- (2,4,4-tetramethylethan-3-yl) amide CH, CH-K / I, Ra = CH2OCH3, R = ch / ch3
10 A.) D-CH30CH2CHC00H10 A.) D-CH 3 OCH 2 CHCl 3
NHt-BocNHT-Boc
Liuokseen, jossa oli 2,89 g {18,6 mmoolia) D-0-metyyliseriini-hydrokloridia 11 ml:ssa vettä, lisättiin 6,48 ml (46,5 mmoolia) trietyyliamiinia, 5,10 g 15 (20,7 mmoolia) 2-(t-butoksikarbonyylioksi-imino)-2-fe- nyyliasetonitriiliä ("B0C-0N") ja 11 ml tetrahydrofu-raania. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön ajan, laimennettiin 25 ml:11a vettä ja pestiin etyyliasetaatilla. Vesikerros tehtiin happameksi pH-arvoon 1,8 20 1-mol. suolahapolla, uutettiin etyyliasetaatilla (3 x 75 ml), kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin 4,2 g tuotetta viskoosisena nesteenä, R^ 0,65 (etyyliasetaatti/heksaani/etikkahappo, 9:9:2, fosforimolybdaatti-suihke).To a solution of 2.89 g (18.6 mmol) of D-O-methylserine hydrochloride in 11 mL of water was added 6.48 mL (46.5 mmol) of triethylamine, 5.10 g (20.7 mmol) of triethylamine. ) 2- (t-butoxycarbonyloxyimino) -2-phenylacetonitrile ("BOC-O") and 11 ml of tetrahydrofuran. The mixture was stirred at room temperature overnight, diluted with 25 ml of water and washed with ethyl acetate. The aqueous layer was acidified to pH 1.8 with 1 mol. hydrochloric acid, extracted with ethyl acetate (3 x 75 ml), dried (MgSO 4) and evaporated to dryness in vacuo to give 4.2 g of product as a viscous liquid, Rf 0.65 (ethyl acetate / hexane / acetic acid, 9: 9: 2, phosphorus molybdate). -spray).
25 B. N-t-Boc-D-O-metyyliseriini-N-(2,2,4,4-tetra- metyylitietan-3-yyli)amidi25 B. N-t-Boc-D-O-methylserine-N- (2,2,4,4-tetramethylethan-3-yl) amide
Liuokseen, jossa oli 4,2 g (18,6 mmoolia) N-t-Boc-D-O-metyyliseriiniä 90 ml:ssa metyleenikloridia, lisättiin 2,08 ml N-metyylimorfoliinia, seos jäähdytet-30 tiin -15°C:seen ja lisättiin 1,78 ml etyylikloorifor- miaattia. Kun oli sekoitettu 8 minuuttia -20 ...-15°C:ssa, samassa lämpötilassa lisättiin 2,70 g (18,6 mmoolia 3-amino-2,2,4,4-tetrametyylitietaania liuotettuna 10 ml: aan metyleenikloridia ja seoksen annettiin lämmetä huoneen 35 lämpötilaan. Kahden tunnin sekoittamisen jälkeen seos pes- 4« 77045 tiin laimealla natriumhydroksidilla ja laimealla suolahapolla, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin haihdutettiin pois vakuumissa, jolloin saatiin 6,04 g (94 %) väritöntä kiinteätä ainetta, 0,35 5 (etyyliasetaatti/heksaani-seos 3:7, fosforimolybdaatti- suihke). Rakenne varmennettiin ^H-NMR:n avulla.To a solution of 4.2 g (18.6 mmol) of Nt-Boc-DO-methylserine in 90 ml of methylene chloride was added 2.08 ml of N-methylmorpholine, the mixture was cooled to -15 ° C and 1 .78 ml of ethyl chloroformate. After stirring for 8 minutes at -20 to -15 ° C, 2.70 g (18.6 mmol of 3-amino-2,2,4,4-tetramethylethane) dissolved in 10 ml of methylene chloride and the mixture were added at the same temperature. was allowed to warm to room temperature 35. After stirring for 2 hours, the mixture was washed with dilute sodium hydroxide and dilute hydrochloric acid, dried over anhydrous magnesium sulfate and the solvent evaporated in vacuo to give 6.04 g (94%) of a colorless solid, 0.35 g. (ethyl acetate / hexane 3: 7, phosphorus molybdate spray) The structure was confirmed by 1 H-NMR.
C. D-O-metyyliseriini-N-(2,2,4,4-tetrametyyli-tietan-3-yyli)amidiC. D-O-Methylserine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-tetan-3-yl) -amide
Liuokseen, jossa oli 6,04 g (17,4 mmoolia) N-t-10 Boc-D-0-metyyliseriini-N-(2,2,4,4-tetrametyylietan-3- yyli)amidia 13,4 ml:ssa metyleenikloridia, lisättiin 6,7 ml (87 mmoolia) trifluorietikkahappoa (om.p. 1,480) ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kolme tuntia; sitä lisättiin vielä 1,0 ml 2 ml:ssa 15 metyleenikloridia ja sekoittamista jatkettiin tunnin ajan. Reaktioseos tehtiin alkaliseksi 40-%:isella (pai-no-%) natriumhydroksidiliuoksella, orgaaninen kerros erotettiin ja vesikerros uutettiin useaan kertaan tuoreella metyleenikloridilla. Yhdistetyt uutteet kuivat-20 tiin (MgSO^) ja liuotin haihdutettiin pois vakuumissa, jolloin saatiin 4,29 g raakaa nestemäistä tuotetta.To a solution of 6.04 g (17.4 mmol) of Nt-10 Boc-D-O-methylserine-N- (2,2,4,4-tetramethylethan-3-yl) amide in 13.4 mL of methylene chloride , 6.7 ml (87 mmol) of trifluoroacetic acid (m.p. 1.480) were added and the mixture was stirred at room temperature for three hours; an additional 1.0 mL of 2 mL of 15 methylene chloride was added and stirring was continued for 1 hour. The reaction mixture was basified with 40% (w / w) sodium hydroxide solution, the organic layer was separated and the aqueous layer was extracted several times with fresh methylene chloride. The combined extracts were dried (MgSO 4) and the solvent evaporated in vacuo to give 4.29 g of crude liquid product.
Tämä liuotettiin 20 ml:aan 1-norm. suolahappoa, pestiin etyylieetterillä, vesikerros tehtiin alkaliseksi natriumhydroksidilla (40 paino-%), kyllästettiin natrium-25 kloridilla ja uutettiin metyleenikloridilla. Haihdut tamalla uutteet kuiviin saatiin 3,21 g (75 %) haluttua tuotetta; Rf 0,41; - 19,8° (C = 0,8, 1-norm. HC1) .This was dissolved in 20 ml of 1-norm. hydrochloric acid, washed with ethyl ether, basified with sodium hydroxide (40% by weight), saturated with sodium chloride and extracted with methylene chloride. Evaporation of the extracts to dryness gave 3.21 g (75%) of the desired product; Rf 0.41; - 19.8 ° (C = 0.8, 1-normal HCl).
Tämän tuotteen struktuurin osoitti oikeaksi sen 1H-NMR-spektri.The structure of this product was confirmed by its 1 H-NMR spectrum.
45 77045 CH0 CH,45 77045 CH0 CH,
D.) t-butyyli 0C0CH„CH CONH CH CONH_/ XSD.) t-butyl OCOCH CH CH H CH CONH / XS
I =H20CH3 'Vf 5 NH-t-Boc CH3 CH3 Käyttämällä 3,76 g edellä osan C menetelmällä saatua tuotetta toistettiin esimerkin 3 osan C menetelmä 13 millimoolin mittakaavassa käyttämällä liuottimena 50 ml metyleenikloridia, jolloin saatiin 5,0 g (74 %) 10 haluttua disuojattua dipeptidiamidia hauraana vaahtona,I = H 2 OCH 3 · Vf 5 NH-t-Boc CH 3 CH 3 Using 3.76 g of the product obtained by the method of Part C above, the procedure of Part 3 of Example 3 was repeated on a scale of 13 mmol using 50 ml of methylene chloride as solvent to give 5.0 g (74%) of 10 the desired disubstituted dipeptide amide as a brittle foam,
Rf 0,40 (etyyliasetaatti/heksaani-seos, 1:1; fosfori-molybdaatti-suihke). Rakenne osoitettiin oikeaksi tuotteen ^H-NMR-spektrin avulla.Rf 0.40 (ethyl acetate / hexane, 1: 1; phosphorus molybdate spray). The structure was confirmed by 1 H-NMR spectrum of the product.
E. Kuivaa bromivetyä johdettiin kuplina liuoksen 15 läpi, jossa oli 5,0 g (9,7 mmoolia) edellä osassa D saatua disuojattua dipeptidiamidia sekoittamalla huoneen lämpötilassa tunnin ajan. Saatu seos haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja saatu keltainen kiinteä jäännös liuotettiin veteen. Liuos pestiin kahdesti etyylieette- 20 rillä ja kerran metyleenikloridilla. Vesifaasin pH säädettiin arvoon 5,8 natriumhydroksidiliuoksella ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäljelle jäänyt kiinteä aine liuotettiin 10 ml:aan 95-%:ista etanolia ja lisättiin etyylieetteriä otsikon yhdisteen saostamiseksi, kahte-25 na eränä: 1,66 g, + 13,4° (C = 0,9, 1,2-norm. HCl), sp. 85-90°C; 1»20 g, {°0O + 13,9° (C = 0,8, 1,2 -norm. HCl).E. Dry hydrogen bromide was bubbled through a solution of 5.0 g (9.7 mmol) of the disubstituted dipeptide amide obtained in Part D above with stirring at room temperature for 1 hour. The resulting mixture was evaporated to dryness in vacuo and the resulting yellow solid residue was dissolved in water. The solution was washed twice with ethyl ether and once with methylene chloride. The pH of the aqueous phase was adjusted to 5.8 with sodium hydroxide solution and evaporated to dryness in vacuo. The residual solid was dissolved in 10 ml of 95% ethanol and ethyl ether was added to precipitate the title compound, in two portions: 1.66 g, + 13.4 ° (C = 0.9, 1.2-norm). HCl), m.p. 85-90 ° C; 1-20 g, {0 ° + 13.9 ° (C = 0.8, 1.2-norm. HCl).
Kummankin erän TLC:ssä oli täplä kohdalla Rf 0,51 30 sekä pieni ainemäärä kohdalla 0,44.The TLC of both batches showed a spot at Rf 0.51 and a small amount at 0.44.
F. Puhdistus p-tolueenisulfonaattisuolana 10 ml:aan vettä lisättiin 1,39 g (3,85 mmoolia) yhdistettyjä edellä saadun tuotteen eriä ja 0,66 g (3,83 mmoolia) p-tolueenisulfonihappoa. Saatua liuosta 35 sekoitettiin huoneen lämpötilassa kaksi tuntia. Saostunut 77045 46 kiinteä aine koottiin talteen suodattamalla ja pestiin pienellä määrällä vettä, jolloin saatiin 0,94 g p-tolueeni-sulfonaatti-suolaa. Suola yhdistettiin 3 ml:n kanssa nestemäistä anioinivaihtajahartsia ^Amberlite LA-1® (Rohm 5 and Haas Co.: n rekisteröity tavaramerkki )^} , 6 ml: an kanssa heksaania ja 2 ml:n kanssa vettä ja seosta sekoitettiin 2 tuntia. Vesifaasi erotettiin, pestiin heksaanilla ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin 0,72 g harmaan valkeata kiinteätä ainetta; (pjD +22,43° (C = 0,8, 10 1,2-norm. HC1); Rf 0,48.F. Purification as p-toluenesulfonate salt To 10 mL of water were added 1.39 g (3.85 mmol) of the combined batches of the product obtained above and 0.66 g (3.83 mmol) of p-toluenesulfonic acid. The resulting solution 35 was stirred at room temperature for two hours. The precipitated 77045 solid was collected by filtration and washed with a small amount of water to give 0.94 g of p-toluenesulfonate salt. The salt was combined with 3 ml of liquid anion exchange resin Amberlite LA-1® (registered trademark of Rohm 5 and Haas Co.), 6 ml of hexane and 2 ml of water, and the mixture was stirred for 2 hours. The aqueous phase was separated, washed with hexane and evaporated to dryness in vacuo to give 0.72 g of an off-white solid; (pjD + 22.43 ° (C = 0.8, 1.2-norm. HCl); Rf 0.48.
Makeutusteho: 320 x sakkaroosin makeutusteho.Sweetening power: 320 x sucrose sweetening power.
Makean maun arveltiin olevan epätavallisen puhtaan, vapaan sivumakuvivahteista ja makeutusvaikutuksen nopean.The sweet taste was thought to be unusually clean, free of off-flavors, and the sweetening effect was rapid.
15 Esimerkki 8 L-aspartyyli-D-O-metyyliseriini-N-(2,2,4,4-tetra-metyyli-l,l-dioksotietan-3-yyli)amidi CH, CH-3 20 A.) D-CH30CH2CHC0NH_/ .s NHCbz ch3 ch3 75 ml:aan metyleenikloridia liuotettiin 3,8 g (15 mmoolia) N-bentsyylioksikarbonyyli-D-O-metyylise-25 riiniä. Lisättiin N-metyylimorfoliinia (1,68 ml), liuos jäähdytettiin -15°C:seen ja lisättiin 1,43 ml etyyli-klooriformiaattia. Saatua seosta sekoitettiin 8 minuuttia -15°C:ssa, sitten lisättiin 2,18 g (15 mmoolia) 3-amino-2,2,4,4-tetrametyylitietaania ja seoksen annet-30 tiin lämmetä huoneen lämpötilaan. Sekoittamista jatkettiin kaksi tuntia huoneen lämpötilassa, reaktioseos pestiin laimealla natriumhydroksidilla, laimealla suolahapolla, kuivattiin (MgSO^) ja liuotin haihdutettiin vakuumissa, jolloin saatiin 6,11 g nestemäistä tuotet-35 ta, Rf 0,58 (etyyliasetaatti/heksaani-seos, 1:1; fosfo-rimolybdaattisuihke).Example 8 L-aspartyl-DO-methylserine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-1,1-dioxothietan-3-yl) amide CH, CH-3 20 A.) D-CH 3 OCH 2 CHCONH_ / 3.8 g (15 mmol) of N-benzyloxycarbonyl-DO-methyl-serine were dissolved in 75 ml of methylene chloride. N-methylmorpholine (1.68 ml) was added, the solution was cooled to -15 ° C and 1.43 ml of ethyl chloroformate was added. The resulting mixture was stirred for 8 minutes at -15 ° C, then 2.18 g (15 mmol) of 3-amino-2,2,4,4-tetramethylethane was added and the mixture was allowed to warm to room temperature. Stirring was continued for two hours at room temperature, the reaction mixture was washed with dilute sodium hydroxide, dilute hydrochloric acid, dried (MgSO 4) and the solvent evaporated in vacuo to give 6.11 g of liquid product, Rf 0.58 (ethyl acetate / hexane, 1: 1). 1; phosphomolybdate spray).
47 7 7 0 4 5 B.) Hapetus 1,1-dioksidiksi47 7 7 0 4 5 B.) Oxidation to 1,1-dioxide
Edellä osassa A saatu tuote, 6,11 g, liuotettiin 75 ml:aan kloroformia ja jäähdytettiin jäissä lisäten annoksittain 7,12 g m-klooriperbentsoehappoa.The product obtained in Part A above, 6.11 g, was dissolved in 75 ml of chloroform and cooled on ice by adding 7.12 g of m-chloroperbenzoic acid portionwise.
5 Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan ja sekoitettiin kolme tuntia. Lisättiin vielä kloroformia (75 ml) ja liuos pestiin kahdesti 5-%:isella (pai-no/til.) natriumkarbonaattiliuoksella, 2 x 0,5-norm, natriumsulfaatilla ja 2 x 1-norm. suolahapolla. Orgaa-10 nisen faasin kuivaamisen (MgS04) ja liuottimen haihduttamisen jälkeen saatiin 6,24 g tuotetta viskoosisena nesteenä, Rf 0,22 (etyyliasetaatti/heksaani-seos, 1:1; fosforimolybdaatti-suihke) sekä jälkiä lähtöaineesta ja sulfoksidista. ^H-NMR-spektri oli halutun sulfonin 15 struktuurin mukainen pienen kloroformimäärän yhteydessä.The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for three hours. Additional chloroform (75 mL) was added and the solution was washed twice with 5% (w / v) sodium carbonate solution, 2 x 0.5-norm, sodium sulfate and 2 x 1-norm. hydrochloric acid. After drying the organic phase (MgSO 4) and evaporation of the solvent, 6.24 g of product were obtained as a viscous liquid, Rf 0.22 (ethyl acetate / hexane, 1: 1; phosphorus molybdate spray) and traces of starting material and sulfoxide. The 1 H-NMR spectrum was consistent with the structure of the desired sulfone with a small amount of chloroform.
ch3 ch3 c.) d-ch3och2chconh 20 CHf CH3ch3 ch3 c.) d-ch3och2chconh 20 CHf CH3
Seosta, jossa oli 6,11 g N-bentsyylioksikarbo-nyyli-D-O-metyyliseriini-N-(2,2,4,4-tetrametyyli-l,1-dioksotietan-3-yyli)amidia, 250 ml metanolia ja 3,0 g 25 3—%:ista palladium/hiili-katalyyttiä, hydrattiin 50 ps:n paineessa (3,52 kg/cm ) kaksi tuntia. Katalyytti poistettiin suodattamalla, suodos haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja jäännös liuotettiin 35 ml:aan 1-norm. suolahappoa. Hapan liuos pestiin kolme kertaa klorofor-30 millä, tehtiin alkaliseksi kiinteällä natriumhydroksi-dilla, kyllästettiin natriumkloridilla ja uutettiin 3 kertaa 50 ml:11a kloroformia. Yhdistetyt uutteet kuivattiin (MgSO^) ja liuotin haihdutettiin vakuumissa, jolloin saatiin 3,37 g (80 %) ^-aminoamidi-tuotetta vä-35 rittömänä nesteenä, R^ 0,29; ^?D - 15,7° (C = 0,8, 48 7 7 0 4 5 l-norm. HC1). Struktuuri varmennettiin ^H-NMR-spektrosko-pian avulla.A mixture of 6.11 g of N-benzyloxycarbonyl-DO-methylserine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-1,1-dioxothietan-3-yl) amide, 250 ml of methanol and 3.0 ml of g of 3% palladium / carbon catalyst, was hydrogenated at 50 ps (3.52 kg / cm) for two hours. The catalyst was removed by filtration, the filtrate was evaporated to dryness in vacuo and the residue was dissolved in 35 ml of 1N norm. hydrochloric acid. The acidic solution was washed three times with chloroform, basified with solid sodium hydroxide, saturated with sodium chloride and extracted 3 times with 50 ml of chloroform. The combined extracts were dried (MgSO 4) and the solvent evaporated in vacuo to give 3.37 g (80%) of the β-aminoamide product as a colorless liquid, Rf 0.29; Δ D - 15.7 ° (C = 0.8, 48 7 7 0 4 5 l-norm. HCl). The structure was confirmed by 1 H-NMR spectroscopy.
CH, CH,CH, CH,
D.) /XD.) / X
5 C6H5CH2OCOCH2CH (NHCbz) CONHCH (CH2OCH3) C0NH-<^^ S02 ch3^^^ch35 C6H5CH2OCOCH2CH (NHCbz) CONHCH (CH2OCH3) CONH - <^^ SO2 ch3 ^^^ ch3
10 Käyttämällä 3,37 g (12 mmoolia) edellä osassa C10 Using 3.37 g (12 mmol) above in Part C
saatua tuotetta lähtöaineena esimerkin 1 osan D menetelmässä, haluttua disuojattua dipeptidiamidia saatiin kirkkaana lasimaisena aineena, 6,73 g (91 %); 0,28 (etyyliasetaatti/heksaani-seos, 70:30). ^H-NMR-15 spektri oli tämän yhdisteen struktuurin mukainen.the product obtained as a starting material in the procedure of Example 1, Part D, the desired disubstituted dipeptidamide was obtained as a clear glass, 6.73 g (91%); 0.28 (ethyl acetate / hexane, 70:30). The 1 H-NMR spectrum of 15 was consistent with the structure of this compound.
E.) Seosta, jossa oli 6,75 g -bentsyyli-N-Cbz-L-aspartyyli-D-O-metyyliseriini-N-(2,2,4,4-tetrame-tyyli-1,l-dioksotietan-3-yyli)amidia, 250 ml metano-lia ja 2,0 g 5-%:ista Pd/C-katalyyttiä, hydrattiin 20 edellä esitetyn osan C menetelmällä. Liuottimen haihduttamisen jälkeen jäljelle jäänyttä jäännöstä sekoitettiin yön ajan etyylieetterissä ja kiinteä tuote koottiin talteen suodattamalla ja kuivattiin vakuumiuunis-sa, jolloin saatiin 3,3 g (77 %) haluttua dipeptidi-25 amidia/ Rf 0,23; sp. 140-150°C (haj .); (V)^ + 20,3° (C = 1, 1,2-norm. HC1).E.) A mixture of 6.75 g of benzyl-N-Cbz-L-aspartyl-DO-methylserine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-1,1-dioxothietan-3-yl) ) amide, 250 ml of methanol and 2.0 g of 5% Pd / C catalyst were hydrogenated by the method of Part C above. After evaporation of the solvent, the remaining residue was stirred overnight in ethyl ether and the solid product was collected by filtration and dried in a vacuum oven to give 3.3 g (77%) of the desired dipeptide-25 amide / Rf 0.23; mp. 140-150 ° C (dec.); (V) + 20.3 ° (C = 1, 1,2-norm. HCl).
Makeutusteho: 200 x sakkaroosin makeutusteho.Sweetening power: 200 x sucrose sweetening power.
Esimerkki 9 L-aspartyyli-D-seriini-N-(dl-cis,trans-2,6-di-30 metyylisykloheksyyli)amidi CH-, \3 I, Ra = CHjOH, R = —^ ^ 35 CH3 49 7 7 0 4 5 A.) dl-cis,trans-2,6-dimetyylisykloheksyyliamiini Liuos, jossa oli 2,1 g trans-2,6-dimetyylisyklo-heksanonioksiimia 30 mlrssa kuivaa etanolia, lämmitettiin kiehuvaksi. Tähän lisättiin annoksittain 3,1 g 5 metanolista natriumia. Lisäyksen päätyttyä seosta pidettiin kiehuvana 30 minuuttia ja annettiin jäähtyä huoneen lämpötilaan. Saatu geeli liuotettiin veteen, pH säädettiin arvoon 2,0 suolahapolla ja pestiin etyyli-eetterillä. Vesifaasi tehtiin alkaliseksi. natriumhydrok-10 sidilla, uutettiin eetterillä ja uutteet kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin haluttua amiinia värittömänä nesteenä.Example 9 L-aspartyl-D-serine-N- (dl-cis, trans-2,6-di-30-methylcyclohexyl) amide CH-, 3, Ra = CH 2 OH, R = - ^ 35 CH 3 49 7 7 0 4 5 A.) dl-cis, trans-2,6-dimethylcyclohexylamine A solution of 2.1 g of trans-2,6-dimethylcyclohexanone oxime in 30 ml of dry ethanol was heated to boiling. To this was added portionwise 3.1 g of 5 sodium sodium. At the end of the addition, the mixture was kept boiling for 30 minutes and allowed to cool to room temperature. The resulting gel was dissolved in water, adjusted to pH 2.0 with hydrochloric acid and washed with ethyl ether. The aqueous phase was made alkaline. sodium hydroxide, extracted with ether and the extracts dried (MgSO 4) and evaporated to dryness to give the desired amine as a colorless liquid.
B.) D-seriini-N-(dl-cis,trans-2,6-dimetyylisyklo- heksyyli)amidi 15 Käyttämällä 1,47 g (6,17 mmoolia) N-Cbz-D-serii- niä, 775 mg (6,15 mmoolia) dl-cis,trans-2,6-dimetyyli-sykloheksyyliamiinia ja ekvimoolimäärin N-metyylimorfo-liinia ja etyyliklooriformiaattia ja poistamalla sen jälkeen amino-suojaryhmä hydraamalla katalyyttisesti 20 esimerkin 1 osien B ja C menetelmin, saatiin 0,70 g haluttua D-seriini-amidia valkeana kiinteänä aineena, 0,64 (etyyliasetaatti/heksaani, 7:3).B.) D-Serine-N- (dl-cis, trans-2,6-dimethylcyclohexyl) amide Using 1.47 g (6.17 mmol) of N-Cbz-D-serine, 775 mg ( 6.15 mmol) of dl-cis, trans-2,6-dimethyl-cyclohexylamine and an equimolar amount of N-methylmorpholine and ethyl chloroformate, followed by deprotection by catalytic hydrogenation by the methods of Example 1, Parts B and C, gave 0.70 g. the desired D-serine amide as a white solid, 0.64 (ethyl acetate / hexane, 7: 3).
C.) Disuojattu dipeptidiamidi Käyttämällä esimerkin 1 osassa D 600 mg (2,8 mmoo-25 lia) D-seriini-N-(dl-cis,trans-2,6-dimetyylisyklohek- syyli)amidia, vastaavaa yi-bentsyyli-N-bentsyylioksi-karbonyyli-L-aspartyyli-D-seriiniamidia (l,2 g) saatiin värittömänä kiinteänä aineena. Kiteyttämällä uudelleen isopropyylieetteristä saatiin 1,0 g tuotetta, 30 R^ 0,35 (etyyliasetaatti/heksaani, 7:3).C.) Disulfated Dipeptide Amide Using in Example D, Part D, 600 mg (2.8 mmol-25) of D-serine-N- (dl-cis, trans-2,6-dimethylcyclohexyl) amide corresponding to γ-benzyl-N -Benzyloxycarbonyl-L-aspartyl-D-serinamide (1.2 g) was obtained as a colorless solid. Recrystallization from isopropyl ether gave 1.0 g of product, Rf 0.35 (ethyl acetate / hexane, 7: 3).
D.) Hydraamalla katalyyttisesti edellä osassa C saatua disuojattua dipeptidiamidia (1,0 g) metanolissa siten, että läsnä oli 0,6 g 5—%:ista palladium/hiili-katalyyttiä, esimerkin 1 osan E menetelmällä, saatiin 435 35 mg otsikon yhdistettä harmaanvalkeana, kiteisenä kiin- tenä aineena; sp. 206 - 210°C (haj.); 0,67 ^ohutkerros- kromatografia, n-butanoli:etikkahappo:vesi (tilavuussuhde 4:1:1)].D.) Catalytic hydrogenation of the disubstituted dipeptide amide from Part C above (1.0 g) in methanol in the presence of 0.6 g of 5% palladium / carbon catalyst by the method of Example 1, Part E gave 435 35 mg of the title compound. as an off-white crystalline solid; mp. 206-210 ° C (dec.); 0.67 ^ thin layer chromatography, n-butanol: acetic acid: water (4: 1: 1 by volume)].
Makeusteho: 200 x sakkaroosin makeusteho.Sweetness: 200 x sucrose sweetness.
bo 77045bo 77045
Esimerkki 10 L-aspartyyli-D-seriini-N-(disyklopropyylikarbi-nyyli)amidin natriumsuolaExample 10 Sodium salt of L-aspartyl-D-serine-N- (dicyclopropylcarbinyl) amide
Liuokseen, jossa on 3,12 g (0,01 moolia) L-aspar-5 tyyli-D-seriini-N-(disyklopropyylikarbinyyli)ami dia 100 ml;ssa etanolia, lisätään 2 ml 2-norm, natrium-hydroksidia. Saatua seosta sekoitetaan kymmenen minuuttia huoneen lämpötilassa ja sitten haihdutetaan kuiviin vakuumissa. Jäännöstä trituroidaan kuivan etanolin 10 kanssa, suodatetaan ja kuivataan ilmassa.To a solution of 3.12 g (0.01 mol) of L-aspar-5-style-D-serine-N- (dicyclopropylcarbinyl) amide in 100 ml of ethanol is added 2 ml of 2-norm, sodium hydroxide. The resulting mixture is stirred for ten minutes at room temperature and then evaporated to dryness in vacuo. The residue is triturated with dry ethanol 10, filtered and air dried.
Kun edellä käytetty natriumhydroksidi korvataan ekvivalenttimäärällä kaliumhydroksidia, kalsiumhydrok-sidia, magnesiumhydroksidia tai ammoniumhydroksidia, samalla tavalla muodostuu vastaavia kalium-, kalsium-, 15 magnesium- ja ammoniumsuoloja.When the sodium hydroxide used above is replaced by an equivalent amount of potassium hydroxide, calcium hydroxide, magnesium hydroxide or ammonium hydroxide, the corresponding potassium, calcium, magnesium and ammonium salts are similarly formed.
Myös muut kaavan (I) mukaiset L-aspartyyli-aminohappo-dipeptidiamidit muutetaan edellä selostetulla tavalla karboksylaattisuoiksi.Other L-aspartyl amino acid dipeptide amides of formula (I) are also converted to carboxylate salts as described above.
Esimerkki 11 20 HappoadditiosuolatExample 11 20 Acid addition salts
Kaavan (I) mukainen L-aspartyyli-D-aminohappo-dipeptidiamidi lietetään pieneen määrään vettä ja lisätään ekvivalenttimäärä happoa kuten suolahappoa, fosfo-rihappoa, rikkihappoa, etikkahappoa, maleiinihappoa, 25 fumaarihappoa, maitohappoa, viinihappoa, sitruunahappoa, glukonihappoa tai sokerihappoa. Saatua seosta sekoitetaan 15 - 30 minuuttia ja haihdutetaan sitten kuviin tai saos-tetaan lisäämällä lisäliuotinta, kuten metanolia tai etanolia.The L-aspartyl-D-amino acid dipeptide amide of formula (I) is slurried in a small amount of water and an equivalent amount of an acid such as hydrochloric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, acetic acid, maleic acid, fumaric acid, lactic acid, tartaric acid, citric acid, citric acid, citric acid is added. The resulting mixture is stirred for 15-30 minutes and then evaporated to the images or precipitated by the addition of an additional solvent such as methanol or ethanol.
Claims (4)
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FI812268A FI77045C (en) | 1981-07-20 | 1981-07-20 | FOERGRENADE AMIDER AV L-ASPARTYL-D-AMINOSYRAPEPTIDER. |
FI870301A FI79835C (en) | 1981-07-20 | 1987-01-23 | D-AMINOSYRAAMIDFOERENING ANVAENDBAR SAOSOM MELLANPRODUKT VID FRAMSTAELLNING AV L-ASPARTYL-D -AMINOSYRADIPEPTIDAMIDER. |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FI812268A FI77045C (en) | 1981-07-20 | 1981-07-20 | FOERGRENADE AMIDER AV L-ASPARTYL-D-AMINOSYRAPEPTIDER. |
FI812268 | 1981-07-20 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI812268L FI812268L (en) | 1983-01-21 |
FI77045B FI77045B (en) | 1988-09-30 |
FI77045C true FI77045C (en) | 1989-01-10 |
Family
ID=8514585
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI812268A FI77045C (en) | 1981-07-20 | 1981-07-20 | FOERGRENADE AMIDER AV L-ASPARTYL-D-AMINOSYRAPEPTIDER. |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
FI (1) | FI77045C (en) |
-
1981
- 1981-07-20 FI FI812268A patent/FI77045C/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FI77045B (en) | 1988-09-30 |
FI812268L (en) | 1983-01-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4797298A (en) | Branched amides of L-aspartyl-D-amino acid dipeptides | |
US5286509A (en) | L-aspartyl-D-α-aminoalkanoyl-(S)-N-alpha-alkylbenzyl amides useful as artificial sweeteners | |
FI77044C (en) | SIDOKEDJADE L-ASPARTYL-D-AMINOSYRA-DIPEPTIDSYROR. | |
FI114314B (en) | Novel N-aspartame derivatives useful as sweeteners and process for their preparation | |
EP0128654B1 (en) | Gem-diaminoalkane derived sweeteners | |
AU603052B2 (en) | Aminomalonyl alanine compounds and use as dietary sweeteners | |
US4517379A (en) | Branched amides of L-aspartyl-D-amino acid dipeptides | |
US5968581A (en) | Dipeptide derivatives and sweetening agents | |
US3972860A (en) | L-aspartyl-L-phenylglycine esters of lower alkanols | |
FI77045C (en) | FOERGRENADE AMIDER AV L-ASPARTYL-D-AMINOSYRAPEPTIDER. | |
EP0069811B1 (en) | Branched amides of l-aspartyl-d-amino acid dipeptides and compositions thereof | |
US3959245A (en) | L-Aspartyl-aminomalonic acid methyl 2-methylcyclohexyl diester | |
US4870190A (en) | Branched amides of L-aspartyl-D-amino acid dipeptides | |
CA2179376A1 (en) | Novel intermediates for the synthesis of l-aspartyl-d-.alpha.-aminoalkanoyl-(s)-n-.alpha.-alkylbenzyl amides useful as artificial sweeteners | |
EP0199257A2 (en) | L-Aminodicarboxylic acid esters and an edible composition containing same as sweeteners | |
US4677126A (en) | Oxa-fenchyl esters and amides of alpha-L-aspartyl-D-phenylglycine | |
JPS61200999A (en) | Aspartylalanine 2-pinanyl or fenchyl ester | |
EP0013044A1 (en) | L-aspartyl amide derivatives and their use as sweetening agents | |
FI79835C (en) | D-AMINOSYRAAMIDFOERENING ANVAENDBAR SAOSOM MELLANPRODUKT VID FRAMSTAELLNING AV L-ASPARTYL-D -AMINOSYRADIPEPTIDAMIDER. | |
EP0779296A2 (en) | D-alpha-aminoalkanoyl-(S)-N-alpha-alkylbenzyl amides useful as intermediates for artificial sweeteners | |
NO153891B (en) | NEW L-ASPARTYL-D-AMINO ACID-DIPEPTIDE AMIDES AND USE THEREOF AS A SWEATER. | |
DK154652B (en) | L-ASPARTYL-D-AMINO ACID DIPEPTIDAMIDES AND D-AMINO ACIDAMIDS FOR USE IN THEIR PREPARATION | |
JPH0723396B2 (en) | Oxaethyl ester of α-L-aspartyl-D-phenylglycine | |
WO1994002441A1 (en) | A process for making 1-cyclopentylalkyl amines useful for the synthesis of sweeteners | |
JPH11169132A (en) | Mixed crystal of aspartame and its derivative, and production of the mixed crystal |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: CULTOR OY |
|
MA | Patent expired |
Owner name: CULTOR OY |