FI76370B

FI76370B - Foerfarande och anordning foer separering av bakterier fraon ett bakterier innehaollande vaetskeprov.

Info

Publication number: FI76370B
Application number: FI842306A
Authority: FI
Inventors: Bertil Engstroem; Max Spinell
Original assignee: Foss Electric As N
Priority date: 1983-06-10
Filing date: 1984-06-07
Publication date: 1988-06-30
Also published as: JPH0458319B2; EP0128509A1; FI842306A; EP0128509B1; FI842306A0; US4591445A; FI76370C; JPS59232098A; DE3461479D1; ATE23878T1; DK268283D0

Claims

1 Patentkrav

1. Förfarande för separering av bakterier ur ett bakterier innehallande vätskeprov, kanne tecknat därav, att förfarandet utförs 5 med hjälp av en skälformig centrifugbehallare (21), som har en Övre öppning (25), som bestäms av en kantdel (24) som sträcker slg radiellt inät, och att förfarandet innefattar följande skeden efter varandra: (a) rotation av centrifugbehallaren (21) med hög rotationshastighet, 10 (b) införing av en volym av en vätskekomponent med hög täthet i centrifugbehallaren (21), vilken täthet är högre än tätheten pa bakterierna, 15 (c) införing av en volym av en vätskekomponent med lag täthet i centri fugbehallaren (21), vilken täthet är lägre än tätheten pa bakterierna, för att bilda ett tvakomponentsgradientseparationsskikt (60,61,62) innanför centrifugbehallaren (21), 20 (d) införing av en kontinuerlig Ström av ett vätskeprov i centrifug behallaren (21), vars täthet är lägre än tätheten pä vätskekomponenten med lag täthet, varvid bakterierna placeras i gränsytan (63) mellan komponenterna med hög (61) och lag (62) täthet i tväkomponents-gradientseparationsskiktet, medan vätskeprovet avlägsnas genom den övre 25 öppningen (25) av centrifugbehallaren, (e) införing av skölimedel i centrifugbehallaren (21), varvid skölj-medlet avlägsnar sig fran en öppning (24) i den övre delen av centrifugbehallaren (21), 30 (f) inbromsning av centrifugbehallaren (21) och rotation av denna med lag rotationshastighet, (g) aktivering och förflyttning av en sugpipett (40) fran en första 35 position där dess spets är längre borta fran den inre ytan av väggarna (23) som omger centrifugbehallaren (21) tili en andra position, där dess (40) spets är anordnad i närheten av nämnda inre yta för bortsugning av 21 76370 1 vätskeämnet i centrifugbehallaren (21), dl man tillför en volym av en överföringsvätska i centrifugbehallaren utan att man avlägsnar vätska fran öppningen i den övre delen av centrifugbehallaren (21), och 5 (h) aterföring av sugpipetten (AO) till dess första position.

2. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat därav, att förfarandet ännu innefattar följande skeden (a)-(h) efter varandra: 10 (i) införing en liten volym av överföringsvätskan i centrifugbehallaren (21) utan att avlägsna vätska genom den övre öppningen av centrifug-behillaren (21), (j) accelerering av centrifugbehallaren och rotation av denna med dess 15 höga rotationshastighet, och (k) upprepning av stegen (f)-(h).

3. Förfarande enligt patentkrav 2, kännetecknat därav, att 20 förfarandet ännu innefattar följande skeden efter skedena (a)-(k): (l) accelerering av centrifugbehallaren och rotation av denna med dess högre rotationshastighet, 25 (m) periodvis införing av en Ström av sköljämne och upphettad luft i centrifugbehallaren (21) med en spray, för att skölja bort eventuellt material som fastnat vid centrifugbehallaren (21), (n) inbromsning av centrifugbehallaren (21) och rotation av denna med 30 de ss läga rotationshastighet, (o) aktivering och förflyttning av sugpipetten (AO) fran dess första position tili dess andra position, för att suga bort eventuellt vätske-ämne fran centrifugbehallaren, och 35 (p) aterföring av sugpipetten (AO) tili dess första position. 22 7 6 3 7 0 ^ 4. Förfarande enligt nägot av föregaende patentkrav, kanne teck- n a t därav, att vätskan avlägsnas fran öppningen (25) i den Övre delen av den centrifugbehallaren (21) genom hälet (26) som bestämmer minimi-bredden pa kantdelen (24) som böjts radiellt inat för att astadkomma 5 en fördröjning för vätskan som skall avlägsnas för centrifugbehallaren (21).

5. Förfarande enligt nägot av föregaende patentkrav, känneteck-n a t därav, att centrifugbehallaren (21) termostateras till en pä för- 10 hand bestämd temperatur genom att tillföra luft av nämnd temperatur i centrifugbehallaren (21).

6. Förfarande enligt nagot av föregaende patentkrav, känneteck-n a t därav, att en Ström av trycksatt luft införs i centrifugbehallaren 15 (21), da den roterar med dess höga rotationshastighet.

7. Förfarande enligt nägot av föregaende patentkrav, känneteck-n a t därav, att komponenten (61) med hög täthet i tvakomponentsgradient-separationsskiktet (60) är en vattenlösning av dextran, och komponenten 20 (62) med lag täthet i tväkomponentsgradientseparationsskiktet (60) är en vattenlösning av sackaros, varvid sköljmedlet och överföringsvätskan är enzymlösningar.

8. Förfarande enligt nagot av föregaende patentkrav, känneteck-25 n a t därav, att den höga rotationshastigheten av centrifugbehallaren (21) är av storleksklassen 45000 rpm och den läga rotationshastigheten av centrifugbehallaren (21) är av storleksklassen 250 rpm.

9. Förfarande enligt nagot av föregaende patentkrav, känneteck-30 n a t därav, att nettovolymen av centrifugbehallaren (21), som bestäms av att da centrifugbehallaren (21) bringas att rotera med dess höga rotationshastighet, är av storleksklassen 2 ml, varvid volymen av komponenten (61) med hög täthet i tvakomponentsgradientseparations-skiktet (60) är av storleksklassen 0,5 ml, och varvid volymen av 35 komponenten (62) med lag täthet i tväkomponentsgradientseparations-skiktet (60) är av storleksklassen 1,5 ml. 23 76370

10. Anordning för utföring av förfarandet enligt patentkraven 1-9, kännetecknad därav, att anordningen (10) innefattar: en skilformig centrifugbehlllare (21), som har en övre öppning (25), 5 som bestäms av en kantdel (24) som sträcker sig radiellt inat, en motor (16) med tvl växlar kopplad tili centrifugbehlllaren (21) för selektiv rotation av denna med lag rotationshastighet och hög rotations-hastighet, 10 en införingsanordning (32) för vätska, som sträcker sig tili centri-fugbehällaren (21), för införing av komponenten (61) med hög täthet i centrifugbehlllaren (21), vars täthet är högre än tätheten pa bakterierna, för införing av komponeten (61) med lag täthet i centri-15 fugbehallaren (21), vars täthet är lägre än tätheten pä bakterierna, för införing av sköljmedel tili centrifugbehällaren (21), för införing av en entzymlösning tili centrifugbehlllaren (21) och införing av ett vätskeprov tili centrifugbehällaren (21), samt 20 en sugpipett (40), som monterats sa att den kan förflyttas mellan en första position, där dess spets är längre borta fran den inre ytan av väggarna (23) som omger centrifugbehlllaren (21), och en andra position, där dess spets är anordnade i närheten av nämnda inre yta, och som är anordnad att kunna aktiveras för bortsugning av vätske-25 ämne fran centrifugbehlllaren (21).

11. Anordning enligt patentkrvav 10, kännetecknad därav, att nämnda införingsanordning (32) bestir av enskilda införingsrör, som sträcker sig tili centrifugbehlllaren genom dess övre öppning för införing av en komponent (61) med hög täthet, en komponent (62) med lag täthet, sköljmedel, en överföringsvätska och ett vätskeprov.

12. Anordning enligt patentkrav 11, kännetecknad därav, att den dessutom innehallar ett extra tilläggsrör, som sträcker sig 33 tili centrifugbehlllaren (21) genom dess övre öppning för tillförtng av tryckluft tili centrifugbehällaren (21).