FI73595C - Foerfarande foer bibehaollande av aktiviteten hos bakteriepreparat. - Google Patents

Description

73595

Menetelmä bakteerivalmisteen vaikutustehon säilyttämiseksi Förfarande för bibehällande av aktiviteten hos bakteriepreparat

Keksinnön kohteena on siipikarjan suoliston normaalin bakteeri-flooran häiriöiden ennaltaehkäisyyn ja hoitoon tarkoitettujen, veteen sekoitettuna annettavien, siipikarjayksilon ruuansulatuskanavassa luonnollisesti esiintyviin bakteerilajeihin pohjautuvien bakteerivalmisteiden vaikutustehon säilyttäminen lisäämällä valmisteeseen liuenneen hapen toksista vaikutusta vähentävää yhdistettä, kysteiiniä.

Tasalämpöisten terveiden eläinten suolistossa vallitsee kullekin lajille tyypillinen bakteeritasapaino. Lajin yksilöiden kesken erot johtuvat ensisijaisesti ruokavaliosta ja iästä. Tasapaino on yleensä vakaa, ja sillä on huomattava puskurivaikutus ulkoisiin häiriöihin nähden. Tasapainon häiriytyminen merkitsee joko jonkin tasapainoon kuuluvan tai täysin ulkopuolisen bakteerin pääsyä valta-asemaan. Tämä voi johtua jostain taudista tai sen hoitoon käytetyn antibiootin vaikutuksesta. Kyseessä voi myös olla ruokamyrkytys tai tarttuva suolistoinfektio. Useiden lajien vastasyntyneet tai hyvin nuoret yksilöt ovat erityisen alttiita suolistoinfektioille, koska niiden suoliston bakteerifloora ei ole saavuttanut puskurivaikutusta omaavaa tasapainoa.

Normaalin bakteeriflooran häiriöiden ennaltaehkäisyyn ja hoitoon on olemassa periaatteessa kahdenlaisia valmisteita. Toiset näistä ovat tyypillisesti eräiden normaali flooraan kuuluvien tai sitä tukevien bakteerilajien kasvua valikoivasti edistäviä ravinteita, esimerkiksi erityisiä sokereita. Nämä valmisteet soveltuvat lähinnä aiemmin vallinneen tasapainon palauttamiseen ja tukemiseen.

-2- 73595

Valmisteiden toinen perustyyppi on joko kaikkien normaal iflooraan kuuluvien anaerobisten bakteereiden tai niistä eristetyn edustavan valikoiman antaminen elävässä muodossa. Tällaisilla valmisteilla voidaan nopeuttaa merkittävästi normaalif1ooran vastustuskykyisen tasapainon saavuttamista joko hyvin nuorilla yksilöillä, tai vakavissa häiriötiloissa. Eräät periaatteessa tämän tyypin valmisteet sisältävät vain yhtä bakteeriis i ia ja soveltuvat näin ollen vain lievien häiriötilojen tukihoitoon.

Suoliston normaaliflooraan kuuluvista mikrobeista suurin osa on ehdottomasti anaerobisia bakteereita. Päinvastoin kuin fakulta-tiivisesti anaerobiset tai happea sietävät anaerobiset bakteerit ne ovat erittäin herkkiä hapen toksiselle vaikutukselle. Niinpä niiden viljelyssä on välttämätöntä järjestää olosuhteet, joissa hapetus-pelkistvspotentiaal i on alhainen. Hapen toksinen vaikutus liittyy solujen aineenvaihduntaan ja tämän vuoksi esimerkiksi kylmäkuivatut solut, joissa aineenvaihdunta on erittäin hidasta ovat merkittävästi vähemmän herkkiä hapen vaikutukselle. Solujen vesipitoisuuden noustessa sopivassa lämpötilassa aineenvaihdunta käynnistyy uudelleen ja herkkyys hapen vaikutukselle palautuu.

Tällaisia kylmäkuivattuja soluja sisältävää, veteen sekoitettavaa valmistetta käytettäessä on tärkeää, että solut suojataan liuenneen hapen vaikutukselta erityisesti, jos valmiste sekoitetaan veteen huomattavasti ennen käyttöä. Tämä keksintö kohdistuu sellaisen aineen lisäämiseen valmisteeseen, joka reagoi veteen liuenneen hapen kanssa tehden sen haitattomaksi solujen kannalta. Esimerkkinä tällaisesta yhdisteestä, jolla voi olla myös muita fysiologisesti edullisia vaikutuksia, on kysteiini. Koska kysteiinin vaikutus riippuu liuoksen happamuusasteesta, on kysteiiniä käytettäessä lisäksi huolehdittava liuoksen puskuroinnista lähelle neutraalia pH-arvoa.

Maailmanlaajusesti merkittävän suolistoinfektion, salmonel loosin tavallisimpia leviämisre i. 11 e j a ovat s iipikar j akasvatt amot, erityisesti nykyaikaiset kanabroilerikasvattamot.

Il '3~ 73595

Teollinen broilerituotanto katkaisee luontaisen, koprofasiaan perustuvan anaerobibakteeriflooran siirtymisen aikuisilta linnuilta vastakuoriutuneille. Nämä ovatkin kahden ensimmäisen elinviikkonsa aikana erittäin alttiita salmonellatartunnalle. Tämän leviämisreitin rajoittamiseksi on pyritty kehittämään anaerobibakteerivalmisteita, jotka broileriuntuvikon ensimmäiseen juomaveteen annettuina nopeuttaisivat salmonellalle vastustuskykyisen suolistoflooran muodostumista. Fl-patenttijulkaisus-sa nro 59925 kuvataan tällaisia siipikarjan salmonellainfektioita ehkäiseviä bakteeripreparaatteja. Normaali flooran tasapainon nopea saavuttaminen edistää myös poikasten kasvunoneutta ja parantaa rehunkäytön taloudellisuutta. Käsillä olevan keksinnön mukainen ehdottomien anaerobien suojausmenetelmä soveltuu erityisesti juuri tällaisen valmisteen kanssa käytettäväksi, koska juomaveteen sekoittamisen ja poikasen ensimmäisen juomisen välillä voi kulua useita tunteja.

Esimerkki 1 FI-patenttijulkaisussa 59925 kuvatun menetelmän (esimerkki 1) mukaisesti tuotettua, kasvatusalustasta erotettua ja -70* pakastettua bakteerisolumassaa sulatetaan. Käyttäen laimennukseen joko käsittelemätöntä vesijohtovettä tai vesijohtoveteen tehtyä 0,05 mol dm-^ fosfaattipuskuriliuosta, pH 7,0, joka on 0,25 % (paino/til.) L-kysteiinin (MERCK, D-6100 Darmstadt BRD tuote nro 2838) suhteen, solumassa laimennetaan siten, että solutihevs on 1,5 x 10°/ml tai tämän perättäisiä kymmenkertaisia laimennuksia. Yhden vrk:n ikäiset broileriuntuvikot jaetaan kuuden poikasen ryhmiin ja kutakin liuosta intuboidaan 1 ml yhden ryhmän poikasille suoraan kupuun. Yksi ryhmä jätetään kontrolliryhmäksi, jolle ei anneta mitään hoitoliuosta. I vrk:n kuluttua kaikille poikasille intuboidaan n. 1000 Salmonella infantis-organismia suoraan kupuun, ja poikasia kasvatetaan 5 vrk siten, että ne saavat kokkidiostaattisia yhdisteitä sisältämätöntä rehua ja raikasta vettä adlib. Kuudentena päivänä poikaset lopetetaan hiilidioksidikaasutuksen avulla, ja niiden umpisuolten sisällöstä määritetään salmonellaorganismien määrä viljele-mällä umpisuolten sisällön laimennuksia 10 , 10 1 ja 10 -4“ 73595 BTBLS (Schneitz C et al., Acta Path. Microbiol. Scand. Sect. R 89:109-116, 1981) ja SS-Onciz (Onöz E & Hoffmann K, Zbl. Bakt. Hyg. I Abt . Orig. A240 : 16-2 1, 1978) sal monellaselektiivisille kasvatusalustoille. Umpisuolten sisällöstä rikastetaan lisäksi salmonellaorganismeja seleni itt iliemessä (Leifson F,, Am. J. Hyg. 24:423-432, 1936), josta viljely tehdään era. BTB-LS ja SS-önöz-kasvatusalustoille. Kokeen tulokset on koottu taulukkoon 1.

TAULUKKO 1. Laimennusveteen lisättävän kvsteiinin vaikutus anae-robisolumassan tehokkuuteen estää salmonellan kolo-nisoituminen broileriuntuvikon umpisuoliin

Broileri- Salmonella infantis kpl/g umpisuolten sisältöä poikanen —--------------__----1--------— -------1-----

Laimennus vesijohto-jLaimennus puskuroi- j Kontrolli veteen (painosuhde jtuun kysteiinipitoi-| solumassa:vesi) jseen vesijohtoveteen| |(painosuhde solu- )

|mas sa:ves i) I

1:70 1:7000 j1 :70 1:700 1:7000 j 1 R(a 106 j -(b - 108 j 108 2 108 104 I - R 106 | 108 3 ίο8 ίο6 I - - in6 j io8 4 106 108 j - - 108 | 108 5 ΙΟ8 108 j - - 108 j 108 6 106 106 | - - 108 j io8 _ _____J________ I ___ (a : salmonella löydetty rikastusviljelystä (b : salmonellaa ei todettu laimennus- tai rikastusviljoiystä

II

'5' 73595

Esimerkki 2 FI-patenttijulkaisussa 59925 kuvatun menetelmän mukaisesti tuotettua, kasvatusalustasta erotettua bakteerisolumassaa kylmäkui-vataan. Tätä kylmäkuivattua solumassaa käytetään joko sellaisenaan tai siihen sekoitetaan mono- ia dikaliumvetyfosfaatteja sekä L-kysteiiniä (MERCK, D-6100 Darmstadt BRD, tuote nro 2838) sellaiset määrät, että laimennettaessa tätä solumassaa salmonellan kolonisoitumisen estävän tehon tutkimista varten liuos on 0,05 mol dm-^ fosfaattipuskuri pH 7, joka on 0,25 % (paino/til.) L-kysteiinin suhteen. Näistä solumassoista tehdään vesijohtoveteen laimennukset, jotka sisältävät 10 mg ml-^ tai 25 mg ml ^ solumassaa. Yhden vrk:n ikäiset broileriuntuvikot jaetaan kuuden poikasen ryhmiin, ja kutakin liuosta intuboidaan 1 ml yhden ryhmän poikasille suoraan kupuun. Kontrolliryhmälle ei anneta mitään hoitoliuosta. Koe noudattaa muilta osin esimerkin 1 . koetta. Erään solumassaerän koetulokset on koottu taulukkoon 2.

__- - r~ 73595 TAULUKKO 2. Kylmäkuivattuun solumassaan lisättävän kvsteiinin vaikutus solumassan tehokkuuteen estää salmonellan kolonisoituminen broileriuntuvikon umpisuoliin

Broileri- Salmonella infantis kpl/g umpisuolten sisältöä poikanen —---1---------^___

Solumassa ilman |Solumassa johon sekoi- jKontrolli kysteiiniä jtettu kysteiiniä | J10 mg solu- 25 mg solu-| 10 mg/ml 25 mg/ml|massaa/ml massaa/ml j 1 R(a 106 | R -(b j 108 2 104 R | 106 R | 108 3 R 106 | R | 108 4 108 106 | - - j 108 5 108 R | - | 108 6 108 ei t.(c j R - | 108 (a : salmonella löydetty rikastusviljelystä (b : salmonellaa ei todettu laimennus- tai rikas tusviljelystä (c : ei tulosta

Claims (3)

73595 - 7 -

1. Menetelmä siipikarjan suoliston normaalin bnkteeriflooran häiriöiden ennaltaehkäisyyn ja hoitoon tarkoitettujen, veteen sekoitettuina annettavien, siipikarjayksilon ruuansulatuskanavassa luonnollisesti esiintyviin bakteeril ajeihin pohjautuvien bakteerivalmisteiden vaikutustehon säilyttämiseksi, tunnettu siitä, että bakteerivalmisteeseen lisätään kysteiiniä.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että liuos puskuroidaan lähelle neutraalia pH-arvoa, edullisesti fosfaattisuolojen avulla.

3. Patenttivaatimusten 1 ja 2 mukainen menetelmä, t u n n e t -t u siitä, että kysteiiniä lisätään niin paljon, että sen pitoisuus on vähintään 0,05 paino-%.