FI67404B - Foerfarande foer utfoering av mutagenitettest - Google Patents

Foerfarande foer utfoering av mutagenitettest Download PDF

Info

Publication number
FI67404B
FI67404B FI822473A FI822473A FI67404B FI 67404 B FI67404 B FI 67404B FI 822473 A FI822473 A FI 822473A FI 822473 A FI822473 A FI 822473A FI 67404 B FI67404 B FI 67404B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
growth
test
sample
population
mutagenicity
Prior art date
Application number
FI822473A
Other languages
English (en)
Other versions
FI67404C (fi
FI822473L (fi
FI822473A0 (fi
Inventor
Kai Falck
Original Assignee
Labsystems Oy
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Labsystems Oy filed Critical Labsystems Oy
Publication of FI822473A0 publication Critical patent/FI822473A0/fi
Priority to FI822473A priority Critical patent/FI67404C/fi
Priority to IT67732/83A priority patent/IT1162893B/it
Priority to EP83902261A priority patent/EP0112888B1/en
Priority to DE8383902261T priority patent/DE3366962D1/de
Priority to AT83902261T priority patent/ATE22927T1/de
Priority to US06/585,375 priority patent/US4675288A/en
Priority to PCT/FI1983/000053 priority patent/WO1984000384A1/en
Priority to JP58502397A priority patent/JPS59501294A/ja
Priority to DD83252995A priority patent/DD210076A5/de
Priority to CA000433828A priority patent/CA1204373A/en
Priority to AU17618/83A priority patent/AU566150B2/en
Publication of FI822473L publication Critical patent/FI822473L/fi
Priority to NO840823A priority patent/NO840823L/no
Priority to SU843715344A priority patent/SU1442090A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of FI67404B publication Critical patent/FI67404B/fi
Publication of FI67404C publication Critical patent/FI67404C/fi

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5014—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing toxicity
    • G01N33/5017—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing toxicity for testing neoplastic activity

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

67404
Menetelmä mutageenisuustestin suorittamiseksi Tämä keksintö koskee menetelmää mutageenisuustestin suorittamiseksi siten, että solupopulaatio altistetaan mutageenille, minkä seurauksena osa populaatiosta muteeraa, 5 jolloin alunperin yhtenäinen solupopulaatio eriytyy ala-populaatioiksi .
Mutageenisuustestausta käytetään karsinogeeneiksi epäiltävien aineiden nopeaan esitestaukseen, sillä baktee-rimutageenisuustesteissä on osoitettu ainakin 90 % tunne-10 tuista karsinogeeneista olevan myös mutageenejä. Biologisista näytteistä voidaan osoittaa esim. virtsan mutageeni-sena aktiivisuutena ko. henkilön mahdollinen altistuminen mutageenisiile ja näin potentiaalisesti syövän vaaraa aiheuttaville aineille.
15 Ilma- ja vesi- sekä elintarvikenäytteistä voidaan mää rittää ympäristöön joutuneita mutageeneja ja mm. mahdollisia mutageenisia torjunta- ym. ainejäämiä elintarvikkeissa.
Mutageenisuustestaus on yhä kasvavassa määrin osa tuotteen tai vastaavan lakisääteistä toksikologista analyy-20 siä. Testien suurimpia käyttäjiä ovat tällä hetkellä mm. farmaseuttinen ja kemian teollisuus. Oman erikoisalansa muodostavat ympäristönsuojelu- ja työsuojeluviranomaiset, jotka joutuvat tutkimaan yleensä useita eri kemikaaleja sisältäviä kompleksisia näytteitä. Lisääntyvän kuluttajan-25 suojelulainsäädännön myötä mm. elintarvikkeet ja niiden lisäaineet tulevat myös mutageenisuustutkimusten piiriin. Tällöin ongelmaksi saattaa muodostua em. tuotteiden sisältämät kasvutekijät, jotka voivat vääristää tavanomaisilla mutageenisuustesteillä saatavia tuloksia.
30 Aikaisemmin mutageenisuuden testaukseen on käytetty mikrobiologista fluktuaatiotestiä. Fluktuaatiotesti on kaksivaiheinen bakteerinutageenisuustesti, joka soveltuu pienten, ei-toksisten mutageenioitoisuuksien testaamiseen. Ensimmäisessä testivaiheessa, joka kestää 13 - 20 tuntia, 35 tapahtuu mahdollinen mutaatio, minkä jälkeen seuraa 3 vuorokauden selektio kasvutekijöistä vapaassa elatusaineessa.
67404
Koska testi tapahtuu nestemäisessä elatusaineessa,jossa kukin alkuperäinen mutantti pyritään eristämään, seuraa em. edellytyksestä, että kokeen suorittaminen vaatii runsaasti koeoutkia. Mitä enemmän koeputkia näytettä kohden on kaytet-5 tävissä, sitä suuremmalla todennäköisyydellä syntyneet alkuperäiset mutantit saadaan kukin eristettyä omaan putkeensa.
Mutaation havainto perustuu pH-indikaattoriin, sillä muteeranneet solut erittävät happamia fermentaatiotuotteita kasvaessaan selektioelatusaineessa.
10 Mikrobiologinen fluktuaatiotesti on eräs herkimmästä tähän mennessä kehitetyistä mutageenisuustesteistä. Ns. Amesin testi, joka on yleisin käytössä oleva bakteerimuta-geenisuustesti, tarvitsee 10 - 100 kertaa suurempia muta-geenipitoisuuksia antaakseen samanlaisen positiivisen 15 responssin kuin fluktuaatiotesti.
Fluktuaatiotestin heikkoutena on sen herkkyys aineen toksisille ja kasvutekijävaikutuksille, samoin kuin sen vaatima suuri työmäärä. Yhtä näytettä kohden käytetään vähintään 50 koeputkea, ja mikäli näyte on toksisilta omi-20 naisuuksiltaan tuntematon, tarvitaan jopa kahdeksan eri laimennosta em. näytteestä, jotta osuttaisiin mahdollisimman hyvin ei-toksisille, mutta vielä mutageenisille kon-sentraatioalueille. Tällöin putkien kokonaismääräksi voi tulla jopa ^00/näyte. Kaikkine työvaiheineen testin suori-25 tus kestää n. 30 min./laimennos (50 putkea), mikä raioittaa huomattavasti analysoitavien näytteiden määrää. Peräkkäisinä päivinä suoritettavat mutagenisointi ja selektio rajoittavat testin aloituspäiviksi ainoastaan maanantait ja torstait, mikäli viikonlopputyöskentelvltä halutaan välttyä. 30 Käsityönä suoritetun mutageenisuustestin haittana on korkea hinta.
Tämän keksinnön mukaiselle menetelmälle on pääasiallisesti tunnusomaista se, että eriytyneiden solupopulaatioiden tiheyden kasvun aiheuttamaa turbiditeetin vaihtelua mi-35 tataan optisen tiheyden muutoksena tietyllä aallonpituudel- 3 67404 la pystysuoraan mittaavalla fotometrillä ja alapopulaati-oiden solujen määrä määritetään optisena tiheytenä.
Pystysuoraan mittaavalla fotometrillä voidaan määrittää tarkasti bakteeripopulaation solujen määrä optisena tihey-5 tenä, ilman että solujen sedimentaatio tai nestetilavuuden vaihtelut vaikuttavat mittaustulokseen. Mittaus voidaan suorittaa paitsi fotometrillä, myös pystysuoraan mittaavalla fluorometrillä, nefelometrillä,luminometrillä tai millä tahansa muulla laitteella, joka kykenee rekisteröimään solu-10 populaatioiden kasvun vaihtelua.
Alunperin yhtenäinen auksotrofi solupopulaatio voi eriytyä geneettisesti mutageenin vaikutuksesta auksotrofiksi ja prototrofiksi alapopulaatioiksi .Seuraamalla fotometrillä em. populaatioiden kasvua, joka voi tapahtua yhdessä 15 yhteisessä kyvetissä, saadaan ajan funktiona syntyneestä kasvukäyrästä selville mm. näytteen mutageenisuus, toksisuus, toksisuuden laatu (bakterostaatti, baktero-sidi), toksisen yhdisteen hajoaminen kokeen aikana, sekä lisäksi näytteessä mahdollisesti olevat kasvutekijät ja 20 aukso- ja prototrofien solujen kasvunopeudet. Näiden parametrien selvittämiseksi itse näytteeseen tai koeorganismei-hin ei tarvitse kajota.
Spontaanin mutaatiofrekvenssin (ns. taustan) selvittämiseksi tarvitaan näytettä vastaava, mutta mutageeneja 25 sisältämätön näyte. Menetelmän toimivuuden varmistaa vastaava,mutta tunnettuja mutageeneja sisältävä näyte. Tutkittavasta tuntemattomasta näytteestä riippuen siitä voidaan tehdä useita rinnakkaismäärityksiä ja/tai laimennoksia.
Mikrobiologisessa mutageenisuustestissä voidaan käyt-50 tää geneettisesti tarkasti karakterisoituja aminohappo- auksotrofeja yksimarkker-bakteerikantoja. Mutaation aiheuttama genotyypin muutos havaitaan fenotyyppisesti muuttuneina kasvutekijävaatimuksina siten, että oikean tyyppisen mutaation saaneet solut ovat vapautuneet kasvutekijäamino-55 happojen vaikutuksesta.
Testissä alunperin geneettisesti yhtenäinen bakteeri- 67404 populaatio altistetaan mutageeneille, minkä seurauksena osa populaatiosta muteeraa auksotrofista prototrofiksi. Näin eriytyneiden alapopulaatioiden turbiditeetin kasvua voidaan seurata spektrofotometrisesti subminimaalikasvualustassa 5 FP-901 fotometrillä pystysuoramittauksen avulla, jolloin nestetilavuuden muutokset ja bakteerisolujen sedimentaatio eivät vaikuta ahsorbanssin mittaustulokseen. FP-901 -tyyppistä fotometriä on selvitetty esim. DE-hakemusjulkaisussa 2 451 769.
10 Kasvutekijäaminohapon kuluttua loppuun ainoastaan mutaation saaneet solut kykenevät jatkamaan kasvuaan. Mitä \ suurempi kokeen alkuhetkellä indusoitujen mutanttisolujen populaatio on, sitä nopeammin ne saavuttavat spektrofotometrisesti mitattavissa olevan tiheyden. Testin alusta 15 havaintoajankohtaan kulunut aika on kääntäen verrannollinen näytteen sisältämään mutageeniseen aktiivisuuteen. Absorbanssin perusteella populaatioiden kasvusta saatu kuvaaja, ns. kasvukäyrä, antaa tietoja näytteen mutageenisuuden lisäksi siinä mahdollisesti olevista kasvutekijöistä.
20 Menetelmän edut aikaisempiin testeihin verrattuna ovat seuraavat: 1. Nopeus: testin tulostus tapahtuu alle 24 tunnissa. Amesin testillä tulostus vie 48 tuntia ja fluktuaatio-testillä 96 tuntia.
25 2. Näytteen ja reagenssien kulutuksen pieneneminen, koska turbidometrisessä menetelmässä on kaikenkaikkiaan pienempi testivolyymi.
3. Materiaalin säästö: Turbidometrisessä menetelmässä yksi näyte analysoidaan yhdessä kyvetissä, kun taas 50 Amesin testissä tarvitaan vähintään 6 petrimaljaa ja fluktuaatiotestissä vähintään 150 koeputkea näytettä kohden.
4. Työmäärän säästö: Turbidometrinen menetelmä voidaan automatisoida täydellisesti ^P-9Q1 järjestelmäiavul- 55 La. Näytettä kohden tarvittava aika on n. 20 sek.
Amesin testissä yksi näyte vaatii ainakin 20 minuuttia ja f luktuaat iotestissä n. 1,5 tuntia.
5 67404 5. Vapaasti työviikon kuluessa valittava aloitusajankohta: Turbidometrisen testin kesto on alle 24 tuntia, kun taas Amesin testin 48 tuntia rajoittavat aloitusajan-kohdan maanantaista keskiviikkoon ja fluktuaatiotes- 5 tiliä aloitus on mahdollista vain maanantaina ja torstaina, mikäli viikonloppuisin ei työskennellä.
6. Herkkyys: Turbidometrinen menetelmä on teoriassa herkin mahdollinen bakteerimutageenisuustesti. Sillä voidaan jopa havaita 1 indusoidun revertantin synty.
10 O-kontrollin spontaanirevertaatiotaso on tavallises ti alle 1/näyte. Yksi indusoitu revertanttisolu havaitaan turbidina kasvustona noin 20 tunnin kuluessa, jos G.T. (generation time) on n. 40 min.
7. Turbidometrinen mutageenisuustesti on ainoa mutageeni- 15 suustesti, jossa saadaan tietoa myös kokeen alkamisen ja päättymisen välillä, ilman että näytteeseen kajotaan. Amesin testissä voidaan määrittää näytteen akuutti toksisuus, mutta tämä kaksinkertaistaa testiin tarvittavan työmäärän. Fluktuaatiotestissä 20 toksisuus taas pyritään eliminoimaan suurilla laimen- nossarjoilla.
Keksintöä ja sen yksityiskohtia selostetaan lähemmin seuraavassa viitaten oheisiin piirustuksiin, joissa kuvat 1-3 esittävät erilaisia kasvukäyriä eli 25 absorbanssiarvoja ajan funktiona, jolloin absorbanssiarvot on esitetty logaritmisella asteikolla.
Turbidometrinen bakteerimutageenisuustesti perustuu siis mutageenin aikaansaamaan, alunperin geneettisesti yhtenäisen solupopulaation eriytymiseen auksotrofeiksi ja 30 prototrofeiksi alapopulaatioiksi,ja näiden alapopulaatioiden turbiditeetin kasvun seurantaan.
Testissä käytetään E.coli WP2 (trp“) ja Salmonella typhimurium (his~) tai muita soveliaita aminohaDpoaukso-trofeja yksimarkkerikantoja. Solupopulaatioiden kasvua ja 35 eriytymistä seurataan pystysuoraan mittaavalla FP-901 spektrofotometrillä, jolloin nestetilavuuden muutokset ja 6 67404 solujen sedimentaatio eivät vaikuta absorbanssin mittaustulokseen» vaan absorptio on suoraan verrannollinen solujen massaan. (Suovaniemi, O.:Performance and Properties of the Pinnpipette Analyzer System. Proceedings of the Second National Meeting 5 on Biophysics and Biotechnology in Finland. 1976, pp.
183 - 187, edited by A.-L. Kairento, E.Riihimäki and P.Tarkka; Suovaniemi, O. ja Järnefelt, J.: Discrete
Multichannel analyzing Systems with a Vertical Optical Path and Batch Processing, International Laboratory, April 1982 10 pp 48-60).
Testi ja solujen kasvatus tapahtuu +37°C lämpökase-^ tissa, 9x1 ml:n kyvetistössä,yksi kyvetti/näyte, joko
Davis-Mingioli tai Vogel-Bonner sub-minimaalineste-elatusaineessa Alkuperäinen solupopulaation koko on 5 x 10^, ja sitä käy-15 tetään omana sokeana kokeenaan PP 901:ssa,minkä jälkeen solujen kasvu aiheuttaa absorbanssin muutoksen dA^g^/lO solua = 0.001- Mutagenisointivaiheessa solut jakautuvat auksotrofi-sesti kasvutekijän vaikutuksesta 5 kertaa. Kasvutekijän loputtua auksotrofien solujen kasvu päättyy, mutta proto-20 trofeiksi muteeranneet solut jatkavat kasvuaan. Mitä suurempi prototrofien solujen osuus on koko populaatiosta, sitä nopeammin ne saavuttavat mitattavissa olevan tiheyden.
Havaintoajankohtaan mennessä kulunutta aikaa voidaan käyttää ei-toksisten näytteiden kohdalla suoraan mutagee-25 nisen aktiivisuuden mittana. Koeorganismin kasvunopeudesta riippuen testin suorituksen kesto vaihtelee, E.colilla ja S.typhimuriumilla se ei ylitä 24 tuntia.
Absorbanssiarvoista tulostettu käyrä on tyypillinen diauksisen kasvun kuvaaja.
30 Kuvassa 1 käyrä 1 vastaa inhiboimatonta kasvua (ei-toksisuutta,survival rate 100 %\, käyrä 2 vastaa survival rate 80 %, käyrä 3 survival rate 50 % ja käyrä 4 survival rate 20 %. Kuolleiden solujen osuus voidaan laskea kaavasta b = n---; jossa 2 / gt n = alkuperäisen populaation osuus (1,000) t - 0-tason ylittämiseen kulunut: aika (tQ+, t^, t2 + ) 35 f 7 67404 gt = generation time (t^ - tQ)
Kuvassa 2 käyrä 5 edustaa inhiboimatonta kasvua, käyrä 6 bakterosidia (death rate 50 %), käyrät 7 ja 3 hajoamattomia bakterostaatteja ja käyrä 9 hajoavaa baktero-5 staattia.
Kuvassa 3 edustaa 1^ ~ 1Q (= ai kasvutekijän osuutta. Diauksisen kasvun kuvaajasta voidaan-määrittää seuraavat tekijät: 1. Näytteen toksisuus, I log-vaiheen alkamisajankohdasta (kuva 11.
10 2. Näytteen toksisuuden luonne (bakterosidi, baktero- staatti, hajoava bakterostaatti), I log-vaiheen kasvukäyrän muodosta (kuva. 21.
3. Revertoitumattomien solujen kasvunopeus, I log- vaiheen kasvukäyrän kulmakertoimen suuruudesta (kuva 3). 15 4. Revertanttien kasvunopeus, II log-vaiheen kulmakertoi men suuruudesta (kuva 3).
5. Näytteessä mahdollisesti olevat kasvutekijät I plateau-vaiheen absorbanssin suuruudesta. Kasvutekijöiden aiheuttama ylimääräisten revertanttien lukumäärä saa- 20 daan selville kaavasta nr _ Ί ψ
Fp. -2^ x g x r, jossa Fp. = ylimääräiset rever-tantit, ylimääräisen kasvutekijän loputtua, g = solu-sukupolvien määrä, r = syntyvien revertanttien määrä/ sukupolvi x populaation koko 25 z = revertanttia (r)/sukupolvi (g) x populaation koko (s) 1q = ylityksen lähtötaso = D-^ - Dq = s 1^ = ylityksen päättymistaso = - Dq g = solusukupolvien 30 lukumäärä = - DQ/D2 = ^1^5+ “ ~ ^1^5 ~ 6. Näytteen mutageenisuus, I plateau-vaiheen pituudesta (kuva 3).
7. Revertanttien lukumäärä ajan hetkellä tQ, ekstrapoloimalla II ja I log-vaiheiden kasvunopeuksia hyväksikäyt- 35 täen.
D = havaittu loppupopulaation koko 3 67404 a = k,/tc - tn = jakojen lukumäärä log I vaiheessa 1 o . u b = ^2^fcn+2 ~ t5 = jakoJen lukumäärä plateau I ja log II vaiheissa X = revertanttien lukumäärä ajan hetkellä t^.
ς y - D — 5 ' ' 2a ♦ 2a*b
Testin suoritus
Elatusaine 9β5 μΐ
Bakteerisolut 5 μΐ 10 Näyte 10 ui
Metaholinen aktivaatiosysteemi (S—9) 20 ui (tarvittaessa)
Yllämainitut komponentit yhdistetään 1 ml:n kyvettiin, sekoitetaan ravisteiijalla 15 sek., sijoitetaan +37°C lämpö-kasettiin, tehdään sokea mittaus 405 nm:n aallonpituudella 15 FP 901:ssä, minkä jälkeen inkuboidaan 20 - 24 tuntia, jonka aikana mitataan näytteen absorbanssia 405 nm:11a ennaltaohjelmoidun aikajaoituksen mukaan.
Absorbanssiarvoista muodostetaan ajan funktiona kasvu-käyrä, josta voidaan tulkita näytteen mutageenisuus ja 20 useita muita parametrejä.
Turbidometrinen bakteerimutageenisuustesti soveltuu kaikentyyppiseen mutageenisuustestaukseen, jossa halutaan selvittää, kykeneekö em. näyte reagoimaan DNA:n kanssa mutaatioita aiheuttavasta.
67404 9
Taulukko 1 FP-901:n turbiditeetin erotuskyky A4Q5nmn = 9
Tiheys IQ6 &nQ5~ S.D. S.O./A^ (%) /106solua 5 5 Q.000 0.000 ------- ------ 20 0.021 0.004 19 0.001 40 0.046 0.007 15 0.001 60 Ο.Ο62 Q.0Q6 10 0.001 10 80 0.076 0.QQ2 2.6 0.001 160 0.159 0.Q1Q . 6.0 0.001 240 0.239 0.Q1Q 4.2 0.001 320 0.326 0.015 4.6 0.001 400 0.405 0.018 4.4 0.001 15 480 0.486 0.020 4.1 0.001 560 0.562 0.022 3.9 0.001 640 Ο.638 0.015 2.4 0.001 720 0.706 0.015 2.1 0.001 800 0.772 0.014 1.8 0.001 20 880 0.333 0.012 1.4 0.001 960 0.890 0.009 1.0 0.001 1040 0.938 0.011 1.2 0.001 1120 0.990 0.010 1.0 0.001 25 Taulukko 2
Kasvutekijöiden vaikutus E.coli WP 2 uvrA:n tiheyteen ja auksotrofiseen kasvuaikaan. Alkupopulaation koko 5 x 10^ solua.
30 Trp-kons.Mg/ml Tiheys/mittauskyvetti Xasvuaika 0.0 2.5 x 107 2h 20' 0.4 1.6 x 108 5h 0.S 2.0 x 108 5h 20' 1.6 3.2 x 108 6h 35 5.2 6.4 x 108 7h 6.4-48 n. 10^ 8h 20’

Claims (4)

10 67404
1. Menetelmä mutageenisuustestin suorittamiseksi siten, että solupopulaatio altistetaan mutageenille,minkä seurauksena osa populaatiosta muteeraa, jolloin alunperin yhtenäinen 5 solupopulaatio eriytyy alapopulaatioiksi, tunnettu siitä, että altistaminen mutageenille suoritetaan välttämättömän kasvutekijän sisältävässä kasvuympäristössä, että eriytyneiden solupopulaatioiden annetaan kasvaa selektiivisessä, kasvutekijästä vapaassa kasvuympäristössä ja että 10 eriytyneiden populaatioiden tiheyden kasvun aiheuttamaa turbiditeetin vaihtelua mitataan optisen tiheyden muutoksena tietyllä aallonpituudella pystysuoraan mittaavalla optisen tiheyden mittauslaitteella ja alapopulaatioiden solujen määrä määritetään optisen tiheyden avulla.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että altistaminen mutageenille ja eriytyneiden solupopulaatioiden kasvatus suoritetaan yhtäjaksoisesti ja samassa reaktioastiässä ja että selektiivinen kasvuympäristö saadaan aikaan antamalla solupopulaation kuluttaa 20 kasvutekijä loppuun.
3· Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että eriytyneiden solupopulaatioiden kasvua mitataan pystysuoraan mittaavalla fotometrillä.
4. Patenttivaatimusten 1 tai 2 mukainen menetelmä, 25 tunnettu siitä, että absorbanssiarvoja mitataan ennalta ohjelmoidun aikajaoituksen mukaan ja muodostetaan arvoista ajan funktiona kasvukäyrä.
FI822473A 1982-07-12 1982-07-12 Foerfarande foer utfoering av mutagenitettest FI67404C (fi)

Priority Applications (13)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI822473A FI67404C (fi) 1982-07-12 1982-07-12 Foerfarande foer utfoering av mutagenitettest
IT67732/83A IT1162893B (it) 1982-07-12 1983-07-05 Procedimento per l'esecuzione di una prova di mutageneita
PCT/FI1983/000053 WO1984000384A1 (en) 1982-07-12 1983-07-11 Method for the performance of a mutagenicity test
DE8383902261T DE3366962D1 (en) 1982-07-12 1983-07-11 Method for the performance of a mutagenicity test
AT83902261T ATE22927T1 (de) 1982-07-12 1983-07-11 Verfahren zur durchfuehrung eines mutagenitaetstests.
US06/585,375 US4675288A (en) 1982-07-12 1983-07-11 Method for the performance of a mutagenicity test
EP83902261A EP0112888B1 (en) 1982-07-12 1983-07-11 Method for the performance of a mutagenicity test
JP58502397A JPS59501294A (ja) 1982-07-12 1983-07-11 突然変異誘発性試験の遂行方法
DD83252995A DD210076A5 (de) 1982-07-12 1983-07-12 Verfahren zur durchfuehrung einer mutagenitaetspruefung
CA000433828A CA1204373A (en) 1982-07-12 1983-08-03 Method for the performance of a mutagenicity test
AU17618/83A AU566150B2 (en) 1982-07-12 1983-08-05 Turbidity change mutagenicity test method
NO840823A NO840823L (no) 1982-07-12 1984-03-05 Fremgangsmaate for utfoerelse av en mutagenitetsproeve
SU843715344A SU1442090A3 (ru) 1982-07-12 1984-03-11 Способ определени мутаций в культуре клеток Е. coLI WP2/тRр-/ и S.тUрнIмURIUм(нIS-)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI822473A FI67404C (fi) 1982-07-12 1982-07-12 Foerfarande foer utfoering av mutagenitettest
FI822473 1982-07-12

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI822473A0 FI822473A0 (fi) 1982-07-12
FI822473L FI822473L (fi) 1984-01-13
FI67404B true FI67404B (fi) 1984-11-30
FI67404C FI67404C (fi) 1986-07-28

Family

ID=8515808

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI822473A FI67404C (fi) 1982-07-12 1982-07-12 Foerfarande foer utfoering av mutagenitettest

Country Status (12)

Country Link
US (1) US4675288A (fi)
EP (1) EP0112888B1 (fi)
JP (1) JPS59501294A (fi)
AU (1) AU566150B2 (fi)
CA (1) CA1204373A (fi)
DD (1) DD210076A5 (fi)
DE (1) DE3366962D1 (fi)
FI (1) FI67404C (fi)
IT (1) IT1162893B (fi)
NO (1) NO840823L (fi)
SU (1) SU1442090A3 (fi)
WO (1) WO1984000384A1 (fi)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5169755A (en) * 1986-12-30 1992-12-08 E. I. Du Pont De Nemours And Company Process for inducing cytochrome P-450 enzymes in streptomyces bacteria and determining the mutagenicity of chemicals
CA1313613C (en) * 1986-12-30 1993-02-16 Fateme Sima Sariaslani Induction of cytochrome p-450 enzymes in streptomyces bacteria
US5213971A (en) * 1986-12-30 1993-05-25 E. I. Du Pont De Nemours And Company Process for inducing cytochrome P-450 enzymes in Streptomyces bacteria and determining the mutagenicity of chemicals
NZ223569A (en) * 1987-02-24 1990-06-26 Mobil Oil Corp Assaying polynuclear compounds for mutagenic activity
US5246837A (en) * 1988-10-19 1993-09-21 Spiral System Instruments, Inc. Processor implemented method for determining the potency of a growth affecting substance interacting with micro-organisms on the surface of microbial culture media
US5079145A (en) * 1988-10-21 1992-01-07 Synergen Associates, Inc. Process for preparing microorganisms used for making phenyl acetyl carlinol (pac)
US4983527A (en) * 1989-05-26 1991-01-08 Arizona Board Of Regents Oocyte test for detection of tumor promoting compounds
CN101415393B (zh) * 2006-04-05 2013-07-24 卡夫食品环球品牌有限责任公司 含酸糖食中的磷酸钙复合物

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3255095A (en) * 1962-10-08 1966-06-07 Martin C Baer Mutant detection method
CH573471A5 (fi) * 1971-02-04 1976-03-15 Bitterfeld Chemie
GB1358760A (en) * 1971-08-09 1974-07-03 Bitterfeld Chemie Process for the selection of biochemically-active substances
US4072574A (en) * 1976-07-30 1978-02-07 The Institute For Cancer Research System for in vitro assay for mutagenicity and/or carcinogenicity of chemicals or other exogenous agents
US4299915A (en) * 1977-10-17 1981-11-10 Massachusetts Institute Of Technology Assay for mutagenesis in bacterial cells
US4256832A (en) * 1978-12-12 1981-03-17 Bioresearch Inc. Carcinogen and mutagen screening method and apparatus
US4345026A (en) * 1981-01-12 1982-08-17 The Children's Hospital Medical Center Mutagenicity assay

Also Published As

Publication number Publication date
US4675288A (en) 1987-06-23
SU1442090A3 (ru) 1988-11-30
EP0112888B1 (en) 1986-10-15
WO1984000384A1 (en) 1984-02-02
IT1162893B (it) 1987-04-01
DE3366962D1 (en) 1986-11-20
JPS59501294A (ja) 1984-07-26
DD210076A5 (de) 1984-05-30
AU566150B2 (en) 1987-10-08
FI67404C (fi) 1986-07-28
FI822473L (fi) 1984-01-13
AU1761883A (en) 1985-02-07
NO840823L (no) 1984-03-05
FI822473A0 (fi) 1982-07-12
CA1204373A (en) 1986-05-13
IT8367732A0 (it) 1983-07-05
EP0112888A1 (en) 1984-07-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5112745A (en) Rapid identification of microbial organisms and determination of antibiotic sensitivity by infrared spectroscopy
Chou et al. A high performance liquid chromatography method for determining nitrate and nitrite levels in vegetables
AU2020101875A4 (en) Colorimetric strip, colorimetric card and test method for quickly testing histamine
FI67404B (fi) Foerfarande foer utfoering av mutagenitettest
US4620930A (en) Process for rapidly determining biological toxicity of wastewater
JP2002330800A (ja) 残留農薬測定方法
US3890099A (en) Colorimetric assay for urea
Scampicchio et al. Determination of sulfite in wine by linear sweep voltammetry
US5759860A (en) Automated analysis method for detecting bacterial nitrite in urine
NZ234556A (en) Optical measurement of cell concentration during fermentation process
US20200025740A1 (en) Electrochemical method for detection and quantification of organic compounds in water
US5801060A (en) Method of using automated analyzer testing of urine for presence of a pH abnormality with single reagent indicator
Obst et al. Application of enzyme assays for toxicological water testing
Ghosh et al. Toxicity screening of phenol using Microtox
Schwedt et al. Development of an automated bacterial luminescence test for biomonitoring of environmental contaminants
Bains A spectroscopically interrogated flow-through type toxicity biosensor
CN117761045B (zh) 一种甲醛显色试纸、其制备方法与应用
Branson et al. Effluent monitoring step by step
HU190134B (en) Method for determing mutagenicity
Sinkkonen et al. Chlorinated acetic and propionic acids in pine needles from industrial areas
RU2170258C1 (ru) Способ оценки общей токсичности воды
CN114594058A (zh) 一种基于金纳米酶过氧化酶检测甲基汞的方法
Quinto et al. Optical sensor for ammonia based on polyaniline
Wang et al. Subtyping of enterotoxin C strains isolated from food poisoning outbreaks in Taiwan
Wolf et al. An automated continuous determination of oxygen with high sensitivity

Legal Events

Date Code Title Description
MM Patent lapsed

Owner name: LABSYSTEMS OY