FI58839C - SAETT ATT UTFOERA ENZYM-IMMUNBESTAEMNING OCH FOER UTFOERANDE AV SAETTET AVSETT REAGENSROER - Google Patents
SAETT ATT UTFOERA ENZYM-IMMUNBESTAEMNING OCH FOER UTFOERANDE AV SAETTET AVSETT REAGENSROER Download PDFInfo
- Publication number
- FI58839C FI58839C FI791397A FI791397A FI58839C FI 58839 C FI58839 C FI 58839C FI 791397 A FI791397 A FI 791397A FI 791397 A FI791397 A FI 791397A FI 58839 C FI58839 C FI 58839C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- tube
- enzyme
- reagent tube
- antigen
- reagent
- Prior art date
Links
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/508—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above
- B01L3/5082—Test tubes per se
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
R2Kr*l ΓβΊ m**UULUTUSjULKAISU COQTft flgSA lBJ (11) UTLÄGGNINGSSKRIFT 0 00 C /^jv Patentti myönnetty ΙΟ 04 1981 yTM Patent meddelat ^ (51) Kv.lk?/krt.CI.3 G 01 N 33/5^R2Kr * l ΓβΊ m ** ANNOUNCEMENT PUBLICATION COQTft flgSA lBJ (11) UTLÄGGNINGSSKRIFT 0 00 C / ^ jv Patent Granted ΙΟ 04 1981 yTM Patent meddelat ^ (51) Kv.lk?/krt.CI.3 G 01 N 33/5 ^
SUOMI —FINLAND (21) Ptt*ottlh«k*mu« — PauMameknins T9139TFINLAND —FINLAND (21) Ptt * ottlh «k * mu« - PauMameknins T9139T
(22) HkktmispUvf — AnaOknlngsdag 30.0U.79 ^ ^ (23) Alkupllvi—Glttlghacadag 30. OU. 79 (41) T11H1K (nlklMicri —BUvk offwcllf 31.10.80 P^rtti- j. rekisterihallitut ,. k»«L,«.w»n pv«, -(22) HkktmispUvf - AnaOknlngsdag 30.0U.79 ^ ^ (23) Alkupllvi — Glttlghacadag 30. OU. 79 (41) T11H1K (nlklMicri —Buvk offwcllf 31.10.80 P ^ rtti- j. Registry administrators,. K »« L, «. W» n pv «, -
Patent· och reglsterstyrelsen v ' Araekan utlafd ech utUkrtfcan publlcarad 31.12.80 (32)(33)(31) Pyydetty «tuotkau·—{Uglrd prloritat (71) Orion-yhtymä Oy, Nilsiänkatu 10-lU, 00510 Helsinki 51,Patent · och reglsterstyrelsen v 'Araekan utlafd ech utUkrtfcan publlcarad 31.12.80 (32) (33) (31) Requested «Tuotkau · - {Uglrd prloritat (71) Orion Corporation, Nilsiänkatu 10-lU, 00510 Helsinki 51,
Carl Herman Thomas Adlercreuz, Käätypolku 5A, 00950 Helsinki 95,Carl Herman Thomas Adlercreuz, Käätypolku 5A, 00950 Helsinki 95,
Matti Heikki Aleksi Härkönen, Harjuviita lUc, 02100 Espoo 10,Matti Heikki Aleksi Härkönen, Harjuviita LUc, 02100 Espoo 10,
Suomi-Finland(FI) (72) Carl Herman Thomas Adlercreuz, Helsinki, Matti Heikki Aleksi Härkönen, Espoo, Suomi-Finland(Fl) (7U) Berggren Oy Ab (5U) Tapa suorittaa entsyymi-immuunimäÄritys ja tavan suorittamiseksi tarkoitettu reagenssiputki - Sätt att utföra enzym-immunbestämning och för utförande av sättet avsett reagensrör Tämä keksintö kohdistuu tapaan suorittaa sen tyyppisiä entsyymi-immuunimäärityksiä, joissa reagenssiputkeen, jonka ainakin sisäpinta on päällystetty antiseerumilla tai antigeenillä, pannaan tutkittavan näytteen tai standardin liuos yhdessä merkkiaineena käytetyn entsyymi-antigeeni- tai entsyymi-vasta-ainekompleksin kanssa ja annetaan niiden reagoida päällysteenä olevan antiseerumin tai antigeenin kanssa, minkä jälkeen saatetaan päällyste ja siihen kiinnittyneet aineet reagoimaan entsyymin substraattiliuoksen kanssa, ja lopuksi mitataan reaktiossa syntynyt aine kvantitatiivisesti.Suomi-Finland (FI) (72) Carl Herman Thomas Adlercreuz, Helsinki, Matti Heikki Aleksi Härkönen, Espoo, Suomi-Finland (Fl) (7U) Berggren Oy Ab (5U) Method for performing the enzyme-linked immunosorbent assay and reagent tube This invention is directed to a method of performing enzyme-linked immunosorbent assays in which a reagent tube having at least an inner surface coated with an antiserum or antigen is co-labeled with a solution of a test sample or standard. antibody complex and reacting them with a coated antiserum or antigen, then reacting the coating and its adherents with a substrate solution of the enzyme, and finally measuring the substance formed in the reaction quantitatively.
Tunnetaan aikaisemmin entsyymi-immuunimääritysmenetelmiä, jotka ovat kuvanneet Schuurs, A.H. ja van Weeman, B.K., Clinica Chimica Acta JM, 1-40, 1977. Tällaisia menetelmiä on edelleen kuvattu mm. suomalisissa patenteissa 52 154, 53 894, 54 033 ja 54 034.Enzyme-linked immunosorbent assays are known in the art and are described by Schuurs, A.H. and van Weeman, B.K., Clinica Chimica Acta JM, 1-40, 1977. Such methods are further described e.g. in Finnish patents 52,154, 53,894, 54,033 and 54,034.
Tämän keksinnön tarkoituksena on saada aikaan uusi, tunnettuja menetelmiä herkempi ja käytännöllisempi tapa suorittaa entsyymi-immuuni-määrityksiä, joka tapa mahdollistaa määritysten yksinkertaisen suorittamisen suurella tarkkuudella sekä mikromittakaavassa että makro- 58839 2 mittakaavassa.It is an object of the present invention to provide a new, more sensitive and practical way of performing enzyme-linked immunosorbent assays than known methods, which enables simple assays to be performed with high accuracy on both the micro-scale and the macro-scale.
Keksinnön mukainen tapa on tunnettu siitä, että kun tutkittava näyte tai standardi on reagoinut reagenssiputken päällysteen kanssa, poistetaan liuos ja reagenssiputki sovitetaan suu alaspäin tiiviisti toisen, substraattiliuosta sisältävän putken suulle, yhteen liitettyjä uutkia ravistelemalla tai pyörittämällä saatetaan subs uraattiliuos reagoimaan reagenssiputken päällysteen ja siihen kiinnittyneiden aineiden kanssa, reaktion päätyttyä käännetään yhteen liitetyt putket niin, että neste joutuu toiseen putkeen, minkä jälkeen reagenssiputki poistetaan ja kvantitatiivinen mittaus suoritetaan fluorometrisesti, jolloin merkkiaineena käytetään antigeeniin tai vasta-aineeseen kiinnitettyä hiivaglukoosi-6-fosfaatti-dehydrogenaasia tai muuta entsyymiä, joka käyttää pyridiininukleo-tidia koentsyyminä.The method according to the invention is characterized in that after the test sample or standard has reacted with the coating of the reagent tube, the solution is removed and the reagent tube is placed mouth-down tightly at the mouth of another tube containing the substrate solution, shaking or rotating the combined extract to react the reactant solution. At the end of the reaction, the connected tubes are inverted so that the liquid enters the other tube, after which the reagent tube is removed and the quantitative measurement is performed fluorometrically using yeast glucose-6-phosphate dehydrogenase attached to antigen or antibody or another enzyme using pyridine. tidia as a coenzyme.
Toisena putkena käytetään edullisesti fluorometrin kyvettiput-kea.A fluorometer cuvette tube is preferably used as the second tube.
Mittauksen herkistämiseksi fluoresenssiä voidaan vahvistaa sinänsä tunnetulla tavalla käyttämällä joko entsyymisyklausta (Lowry, O.H., Passoneau, J.V., Schulz, D.W. ja Rock, M.K., J.Biol.Chem. 236, 2746-2755, 1961, sekä Kato, T., Berger, S.J., Carter, J.A. ja Lowry, O.H., Anal. Biochem. 5_3, 86-97, 1973) tai lisäämällä sub-straattiliuokseen natriumhydroksidia (Lowry, O.H., Roberts, N.R. ja Kapphahn, J.I., J.Biol.Chem. 224, 1047-1064, 1957).To sensitize the measurement, fluorescence can be amplified in a manner known per se using either enzyme cycling (Lowry, OH, Passoneau, JV, Schulz, DW and Rock, MK, J. Biol. Chem. 236, 2746-2755, 1961, and Kato, T., Berger, SJ, Carter, JA and Lowry, OH, Anal. Biochem. 53, 86-97, 1973) or by adding sodium hydroxide to the substrate solution (Lowry, OH, Roberts, NR and Kapphahn, JI, J. Biol. Chem. 224, 1047 -1064, 1957).
Keksintö tarkoittaa myös reagenssiputkea keksinnön mukaisen tavan suorittamiseksi, jonka putken ainakin sisäpinta on päällystetty antiseerumilla tai antigeenillä, ja keksinnön mukainen reagenssiputki on tunnettu siitä, että pienen tilavuuden omaavassa reagens-siputkessa on terävän kartiomainen kärkiosa ja että toiseen putkeen sisään työnnettävässä päässä on ainakin yksi ulkopuolinen rengasmainen, joustava tiiviste-elin. Keksinnön mukaisen reagenssiputken edullisen sovellutusmuodon mukaan toiseen putkeen liitettävässä päässä on ulkopuolinen olake, jota vasten toisen putken pää on tarkoitettu asetettavaksi putkia sisäkkäin työnnettäessä.The invention also relates to a reagent tube for carrying out the method according to the invention, the inner surface of which is at least coated with antiserum or antigen, and characterized in that the small volume reagent tube has a sharply conical tip , flexible sealing member. According to a preferred embodiment of the reagent tube according to the invention, the end to be connected to the second tube has an outer shoulder against which the end of the second tube is intended to be inserted when the tubes are nested.
3 588393,58839
Keksinnön mukaisen tavan suorittamiseksi tarkoitettu putki tehdään edullisesti nylonista, joka käsitellään antigeenin tai vasta-aineen tiimittiaiseksi sinänsä tunnetulla tavalla (Hornby, W.E. ja Goldstein, L., Methods in Enzymology XLIV, K. Mosbach, Academic Press, Mew York 1976, s. 118). Tämän käsittelyn mukaan putki upotetaan metanoliin, joka sisältää 18,8 % CaC^ ja 18,6 % 1^0, joka pidetään 50-60°C:n lämpötilassa ja sekoitetaan magneettisekoittajal-la. Tällä käsittelyllä saadaan amorfista nylonia liuotettua ja täten käytettävissä oleva pinta-ala suurenee ja sen kostumiskyky paranee. Liuonnut nylon pestään pois hautomalla vedessä useita tunteja.The tube for performing the method of the invention is preferably made of nylon, which is treated as an antigen or antibody team in a manner known per se (Hornby, WE and Goldstein, L., Methods in Enzymology XLIV, K. Mosbach, Academic Press, Mew York 1976, p. 118 ). According to this treatment, the tube is immersed in methanol containing 18.8% CaCl 2 and 18.6% Cl 2, maintained at a temperature of 50-60 ° C and stirred with a magnetic stirrer. This treatment dissolves the amorphous nylon and thus increases the available surface area and improves its wettability. The dissolved nylon is washed away by incubating in water for several hours.
Tämän jälkeen putki upotetaan 3,7 M suolahappoon 50-60°C:ssa käyttäen magneettista sekoittajaa. Käsittelyn jälkeen putki pestään kunnes pesuveden pH pysyy neutraalina.The tube is then immersed in 3.7 M hydrochloric acid at 50-60 ° C using a magnetic stirrer. After treatment, the tube is washed until the pH of the wash water remains neutral.
Esikäsitelty putki aktivoidaan upottamalla se 5 % glutaarialdehydiin 0,5 M fosfaattipuskurissa, pH 5,0, tunnin ajaksi huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen putki pestään peräkkäin asetaattipuskurilla, pH 5,0, ja fosfaattipuskurilla, pH 7,0. Näin aktivoitu putki upotetaan fosfaattipuskurissa olevaan laimeaan antiseerumiin ja inkuboidaan huoneen lämpötilassa kolme tuntia. Inkuboinnin jälkeen putki pestään 0,9 % NaCl-liuoksella, joka sisältää kostutusainetta, 0,05 % TWEEN-20, ja vielä 0,133 M boraattipuskurilla, pH 8,0. Käsitelty putki säilytetään kylmässä, upotetaan boraattipuskuriin, joka sisältää 0,02 % naudan seerumialbumiinia (BSA), tai kun se on käsitelty BSA-boraattipuskurilla se tyhjennetään, kylmäkuivataan ja varastoidaan kylmässä.The pretreated tube is activated by immersing it in 5% glutaraldehyde in 0.5 M phosphate buffer, pH 5.0, for one hour at room temperature. The tube is then washed sequentially with acetate buffer, pH 5.0, and phosphate buffer, pH 7.0. The tube thus activated is immersed in dilute antiserum in phosphate buffer and incubated at room temperature for three hours. After incubation, the tube is washed with 0.9% NaCl solution containing wetting agent, 0.05% TWEEN-20, and a further 0.133 M borate buffer, pH 8.0. The treated tube is stored cold, immersed in borate buffer containing 0.02% bovine serum albumin (BSA), or after treatment with BSA borate buffer it is emptied, lyophilized, and stored cold.
Reagenssiputkia voidaan käsitellä suurina erinä, jolloin saadaan yhdenmukainen päällyste kaikkiin putkiin. Esitetyllä käsittelyllä putket tulevat kokonaan päällystetyksi sekä sisäpuolelta että ulkopuolelta. Immuunireaktioon käytetään kuitenkin vain putken sisäpintaa, joka ei naarmuunnu tai muulla tavoin vaurioidu käsittelystä johtuen.Reagent tubes can be processed in large batches to provide a uniform coating on all tubes. With the treatment shown, the pipes become completely coated on both the inside and the outside. However, only the inner surface of the tube is used for the immune reaction, which is not scratched or otherwise damaged due to the treatment.
Oheisessa piirustuksessa kuva 1 esittää keksinnön mukaista reagenssi-putkea ja kuva 2 samaa putkea liitettynä fluoronetrin kyvettiputkeen.In the accompanying drawing, Figure 1 shows a reagent tube according to the invention and Figure 2 shows the same tube connected to a fluoronetrette cuvette tube.
4 588394,58839
Putkessa 1 on lieriömäinen yläosa 2 ja terävästi kartiomainen kärkiosa 3. Tämän kartiomuodon ansiosta putkessa voidaan käyttää hyvin pieniä nestetilavuuksia, esimerkiksi noin 10 ^ul:sta ylöspäin. Reagenssiputken lieriömäisen yläosan 2 ulkosivussa on toisaalta rengasmainen rajoitinuloke 4 ja toisaalta kaksi samoin rengasmaista, mutta ohuempaa uloketta 5, jotka ovat taipuisia ja täten toimivat tiivisteinä. On selvää, että tiivisterenkaiden lukumäärä voi vaihdella, mutta vähintään yksi tiivisterengas tulee putkessa olla. Sen sijaan rajoitinuloke 4 ei ole välttämättä tarpeellinen, joten se voidaan haluttaessa jättää pois.The tube 1 has a cylindrical top 2 and a sharply conical tip 3. Thanks to this conical shape, very small volumes of liquid can be used in the tube, for example from about 10. The outer side of the cylindrical upper part 2 of the reagent tube has, on the one hand, an annular restrictor projection 4 and, on the other hand, two similarly annular but thinner projections 5, which are flexible and thus act as seals. It is clear that the number of sealing rings can vary, but at least one sealing ring must be in the pipe. On the other hand, the limiter projection 4 is not necessarily necessary, so it can be omitted if desired.
Kuvassa 2 on esitetty miten reagenssiputki 1 on liitetty yhteen fluorometrin kyvettiputken 6 kanssa työntämällä sen sisään. Tällöin reagenssiputki pysähtyy kun sen rajoitinuloke 4 osuu kyvettiputken 6 suuhun. Reagenssiputken 1 yläosa 2 on mitoitettu niin, että sen ulkoläpimitta on kyvettiputken 6 sisäläpimittaa pienempi, mutta tiivisterenkaiden 5 läpimitta on kyvettiputken sisäläpimittaa suurempi, joten ne saavat aikaan putkien nestetiiviin tiivistyksen.Figure 2 shows how the reagent tube 1 is connected to the cuvette tube 6 of the fluorometer by pushing it in. In this case, the reagent tube stops when its restrictor projection 4 hits the mouth of the cuvette tube 6. The upper part 2 of the reagent tube 1 is dimensioned so that its outer diameter is smaller than the inner diameter of the cuvette tube 6, but the diameter of the sealing rings 5 is larger than the inner diameter of the cuvette tube, so that they provide a liquid-tight sealing of the tubes.
Immuunimäärityksen suorittamista varten entsyymillä merkittyä antigeeniä tai vasta-ainetta ja standardinäyte tai tutkittava näyte pipe-toidaan reagenssiputkeen esimerkiksi 100 ^ul tilavuuteen, putki suljetaan ja immunoreaktio suoritetaan esimerkiksi 14 h 4°C:ssa.To perform the immunoassay, the enzyme-labeled antigen or antibody and the standard or test sample are pipetted into a reagent tube in a volume of, for example, 100, sealed, and the immunoreaction is performed, for example, for 14 h at 4.
Tämän jälkeen neste imetään pois ja putki pestään esimerkiksi 0,1 M TRIS-HCl-puskurilla, pH 8,0. Fluorometrin kyvettiputkfeen pipetoi-daan 1 ml merkkiaineena käytetyn entsyymin substraattiliuosta, ja reagenssiputki sovitetaan tiiviisti kyvettiputken päälle. Yhteen-liitetyt putket käännetään ylösalaisin ja entsyymireaktion annetaan tapahtua pyörittämällä tai ravistelemalla putkia huoneen lämpötilassa tai 37°C :ssa 10-60 minuuttia. Tämän jälkeen entsyymireaktio keskeytetään kääntämällä yhteen liitetyt putket niin, että neste valuu kyvettiputkeen, reagenssiputki poistetaan ja kyvettiputki sijoitetaan fluorometriin ja fluoresenssi mitataan.The liquid is then sucked off and the tube is washed with, for example, 0.1 M TRIS-HCl buffer, pH 8.0. Pipette 1 ml of the enzyme substrate substrate solution into the cuvette tube of the fluorometer, and fit the reagent tube tightly onto the cuvette tube. The interconnected tubes are inverted and the enzyme reaction is allowed to proceed by rotating or shaking the tubes at room temperature or 37 ° C for 10-60 minutes. The enzyme reaction is then stopped by inverting the connected tubes so that the liquid flows into the cuvette tube, the reagent tube is removed, and the cuvette tube is placed in a fluorometer and the fluorescence is measured.
Suoritettaessa immunomääritys mikromittakaavassa reagenssiputkeen pipetoidaan tutkittava näyte tai standardinäyte ja entsyymillä merkittyä antigeeniä tai vasta-ainetta esimerkiksi 10 ^ul tilavuuteen, putki suljetaan jainkuboidaan kuten edellä on selostettu, minkä jälkeen neste imetään pois ja reagenssiputki pestään, samoin kuten edellä on selostettu. Tämän jälkeen reagenssiputkeen pipetoi- 5 58839 daan 15 yUl merkkiaineena käytetyn entsyymin substraattiliuosta ja inkuboidaan heikosti ravistellen 10-60 minuuttia 37°C:ssa. Reagens-siputkeen pipetoidaan sitten 2 ,ul 0,1 mooli/1 NaOH ja inkuboidaan O ' 10 minuuttia 60 C:ssa nikotiiniamidiadeniininukleotidifosfaatin (NADP+) hävittämiseksi. Reagenssiputkeen lisätään tämän jälkeen 50 /Ui syklausreagenssiä fluoresenssin vahvistamiseksi ja inkuboidaanWhen performing a micro-scale immunoassay, a test sample or standard sample is pipetted into a reagent tube and the enzyme-labeled antigen or antibody in a volume of, for example, 10, the tube is sealed and incubated as described above, then the liquid is aspirated and the reagent tube is washed as above. The reagent tube is then pipetted with 15 μl of the tracer enzyme substrate solution and incubated with gentle shaking for 10-60 minutes at 37 ° C. The reagent tube is then pipetted with 2 μl of 0.1 M NaOH and incubated for 10 minutes at 60 ° C to destroy nicotinamide adenine nucleotide phosphate (NADP +). 50 [mu] l of cycling reagent is then added to the reagent tube to confirm the fluorescence and incubated
' O'O
60 minuuttia 37 C:ssa, minkä jälkeen fluorometrin kyvettiputki sovitetaan tiiviisti reagenssiputken päälle. Tämän jälkeen yhteen liitetyt putket käännetään ylösalaisin ja keitetään 2 minuuttia entsyymien hävittämiseksi syklausreaktion keskeyttämistä varten. Reagenssiputki poistetaan, kyvettiputkeen lisätään 1 ml indikaatto-rireagenssiä ja inkuboidaan 20 minuuttia huoneen lämpötilassa. Lopuksi kyvettiputki sijoitetaan fluorometriin ja fluoresenssi mitataan.60 minutes at 37 ° C, after which the cuvette tube of the fluorometer is fitted tightly over the reagent tube. The connected tubes are then inverted and boiled for 2 minutes to discard the enzymes to stop the cyclization reaction. The reagent tube is removed, 1 ml of indicator reagent is added to the cuvette tube and incubated for 20 minutes at room temperature. Finally, the cuvette tube is placed in a fluorometer and the fluorescence is measured.
Keksinnön havainnollistamiseksi esitetään seuraava esimerkki.The following example is provided to illustrate the invention.
EsimerkkiExample
Testosteronin määritys plasmasta.Determination of testosterone in plasma.
Kuvan 1 mukaiseen reagenssiputkeen, joka on päällystetty testosteroni-The reagent tube of Figure 1 coated with testosterone
11-sukkinyyli-BSA-antiseerumilla, lisätään 20 ^ul testosteroni-standardiliuosta tai näyteuutetta 100 ^ul:an immunoreaktioliuosta, jonka koostumus on 0,133 moolia/1 boraattipuskuria, pH 8,0, 0,02 % gelatiinia, sekä yhtäaikaa tai sen jälkeen testosteroni-3-karboksi-metyylioksiimi-glukoosi-6-fosfaattidehydrogenaasia (leimattua testosteronia) . Putkia inkuboidaan yli yön +4°C:ssa. Tämän jälkeen neste imetään pois ja putket pestään kolmasti 0,1 M Tris-HCl-puskurilla, pH 8,0. Fluorometrin kyvettiputkeen pipetoidaan 1 ml glukoosi-6-fosfaattidehydrogenaasin substraattiliuosta, jonka koostumus on 0,1 mooli/1 Tris-HCl-puskuria, pH 8,0, 5 mmooli/1 MgCl„, 0,01 % BSA11-succinyl-BSA antiserum, add 20 μl of testosterone standard solution or sample extract to 100 μl of immunoreaction solution containing 0.133 mol / l borate buffer, pH 8.0, 0.02% gelatin, and simultaneously or thereafter testosterone -3-carboxy-methyloxime-glucose-6-phosphate dehydrogenase (labeled testosterone). The tubes are incubated overnight at + 4 ° C. The liquid is then aspirated off and the tubes are washed three times with 0.1 M Tris-HCl buffer, pH 8.0. Pipette 1 ml of a glucose-6-phosphate dehydrogenase substrate solution containing 0,1 mol / l Tris-HCl buffer, pH 8.0, 5 mmol / l MgCl 2, 0,01% BSA into the cuvette tube of the fluorometer.
J- ^ 0,2 mmooli/1 NADP , 1 mmooli/1 glukoosi-6-fosfaattia. Tyhjä reagenssiputki sovitetaan tiiviisti fluorometrikyvetin päälle, yhteen liitetyt putket käännetään ylösalaisin ja entsyymireaktion annetaan tapahtua +37°C:ssa ravistellen 60 minuuttia (reaktio on lineaarinen ainakin 90 minuuttia). Tämän jälkeen entsyymireaktio keskeytetään kääntämällä yhteen liitetyt putket niin, että inkubaationeste valuu kyvettiputkeen, immunoreagenssiputki poistetaan ja fluoresenssi .mitataan f^gorome-trillä. '· ‘ * y * 'J - 0.2 mmol / l NADP, 1 mmol / l glucose-6-phosphate. Place the empty reagent tube tightly on top of the fluorometer cuvette, invert the connected tubes and allow the enzyme reaction to proceed at + 37 ° C with shaking for 60 minutes (the reaction is linear for at least 90 minutes). The enzyme reaction is then stopped by inverting the connected tubes so that the incubation fluid flows into the cuvette tube, the immunoreact tube is removed and the fluorescence is measured with a f-gorometer. '·' * Y * '
Claims (7)
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI791397A FI58839C (en) | 1979-04-30 | 1979-04-30 | SAETT ATT UTFOERA ENZYM-IMMUNBESTAEMNING OCH FOER UTFOERANDE AV SAETTET AVSETT REAGENSROER |
| SE8003206A SE8003206L (en) | 1979-04-30 | 1980-04-28 | METHOD AND REAGENT RANGE FOR ENZYMIMMUN TESTS |
| DE19803016391 DE3016391C2 (en) | 1979-04-30 | 1980-04-29 | Enzyme immunoassay and apparatus for performing the same |
| GB8014006A GB2049185B (en) | 1979-04-30 | 1980-04-29 | Enzyme immunoassay method and reagent tube |
| FR8009755A FR2455742A1 (en) | 1979-04-30 | 1980-04-30 | IMMUNOASSAY PROCESS WITH ENZYMES AND TEST TUBE FOR IMPLEMENTING IT |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI791397 | 1979-04-30 | ||
| FI791397A FI58839C (en) | 1979-04-30 | 1979-04-30 | SAETT ATT UTFOERA ENZYM-IMMUNBESTAEMNING OCH FOER UTFOERANDE AV SAETTET AVSETT REAGENSROER |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI58839B FI58839B (en) | 1980-12-31 |
| FI58839C true FI58839C (en) | 1981-04-10 |
Family
ID=8512611
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI791397A FI58839C (en) | 1979-04-30 | 1979-04-30 | SAETT ATT UTFOERA ENZYM-IMMUNBESTAEMNING OCH FOER UTFOERANDE AV SAETTET AVSETT REAGENSROER |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE3016391C2 (en) |
| FI (1) | FI58839C (en) |
| FR (1) | FR2455742A1 (en) |
| GB (1) | GB2049185B (en) |
| SE (1) | SE8003206L (en) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58189558A (en) * | 1982-04-28 | 1983-11-05 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | Vessel for immunological measurement |
| FI833207A0 (en) * | 1983-09-08 | 1983-09-08 | Farmos Oy | REAKTIONSKAERL FOER IMMUNOLOGISKA BESTAEMNINGAR |
| GB2149105B (en) * | 1983-10-26 | 1988-02-10 | Univ Pennsylvania | Method of diagnosing infection |
| GB8620893D0 (en) * | 1986-08-29 | 1986-10-08 | Unilever Plc | Assays |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3654090A (en) * | 1968-09-24 | 1972-04-04 | Organon | Method for the determination of antigens and antibodies |
| US3684455A (en) * | 1969-12-19 | 1972-08-15 | Mallinckrodt Chemical Works | Apparatus for mixing liquids |
| FI56750C (en) * | 1978-02-27 | 1980-03-10 | Reijo Vihko | RECOVERY FOR IMMUNOLOGICAL RECONSTRUCTION |
-
1979
- 1979-04-30 FI FI791397A patent/FI58839C/en not_active IP Right Cessation
-
1980
- 1980-04-28 SE SE8003206A patent/SE8003206L/en not_active Application Discontinuation
- 1980-04-29 DE DE19803016391 patent/DE3016391C2/en not_active Expired
- 1980-04-29 GB GB8014006A patent/GB2049185B/en not_active Expired
- 1980-04-30 FR FR8009755A patent/FR2455742A1/en active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SE8003206L (en) | 1980-10-31 |
| GB2049185B (en) | 1983-05-18 |
| DE3016391A1 (en) | 1980-11-13 |
| DE3016391C2 (en) | 1983-04-07 |
| FI58839B (en) | 1980-12-31 |
| FR2455742A1 (en) | 1980-11-28 |
| GB2049185A (en) | 1980-12-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0709678B1 (en) | Immunoassay plate | |
| AU617090B2 (en) | Qualitative immunochromatographic method and device | |
| US4789628A (en) | Devices for carrying out ligand/anti-ligand assays, methods of using such devices and diagnostic reagents and kits incorporating such devices | |
| CA2081559A1 (en) | Determination of analytes in biological fluids in the presence of substances interfering with assays therefor | |
| EP0154884A2 (en) | Nucleic acid-protein conjugate | |
| NO822750L (en) | DEVICE AND PROCEDURE FOR DETECTING ANTIGENS AND ANTIBODIES. | |
| CN101363861A (en) | Hepatitis b virus surface antigen chemiluminescence immune assay determination kit and method for preparing same | |
| US9903856B2 (en) | Optical biosensor | |
| FI58839C (en) | SAETT ATT UTFOERA ENZYM-IMMUNBESTAEMNING OCH FOER UTFOERANDE AV SAETTET AVSETT REAGENSROER | |
| JP2002207039A (en) | Immunoassay for hiv protease inhibitor | |
| FI875210A0 (en) | FOERFARANDE OCH TESTANORDNING FOER PAOVISNING AV ETT AEMNE I ETT PROV. | |
| Kricka et al. | Immobilized enzymes in analysis | |
| WO2021078029A1 (en) | Enzymatic chemiluminescence immunoassay method for reducing background of luminescent substrate | |
| EP0441469A1 (en) | Immunospecific and bioluminescent assay of cellular ATP | |
| US5888728A (en) | Hapten derivatized capture membrane and diagnostic assays using such membrane | |
| EP0241140A1 (en) | Assay method with a multivalently labelled reagent, and means therefor | |
| US7381374B2 (en) | Immunoassay devices and methods of using same | |
| CN109406772A (en) | The method of chemiluminescent enzyme-linked immunosorbent immune detection DNMT1 based on Magnetic Isolation | |
| CN112557666B (en) | Kit for simultaneously detecting multiple biomarkers based on nucleic acid rolling circle amplification reaction | |
| Maeda et al. | Chemiluminescent assay of various enzyme activites and its application to enzyme immunoassays | |
| CN115201181A (en) | Method for eliminating blood cell interference in magnetic particle chemiluminescence detection | |
| CN105044356A (en) | Novel prostate-specific antigen detection kit | |
| AU2002303065A1 (en) | A method for measuring DNA polymerization and applications of the method | |
| CN104007256A (en) | Method for manufacturing total PSA and free PSA two-in-one chemiluminescence immunologic diagnosis kit | |
| US20220145353A1 (en) | Sensitive glucose assay |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: ADLERCREUTZ, CARL HERMAN THOMAS Owner name: ORION-YHTYMAE OY Owner name: HAERKOENEN, MATTI HEIKKI ALEKSI |