FI13395Y1 - Koostumuksia, jotka käsittävät rekombinanttia ovomukoidiproteiinia - Google Patents

Koostumuksia, jotka käsittävät rekombinanttia ovomukoidiproteiinia Download PDF

Info

Publication number
FI13395Y1
FI13395Y1 FIU20234007U FIU20234007U FI13395Y1 FI 13395 Y1 FI13395 Y1 FI 13395Y1 FI U20234007 U FIU20234007 U FI U20234007U FI U20234007 U FIU20234007 U FI U20234007U FI 13395 Y1 FI13395 Y1 FI 13395Y1
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
rovd
protein
composition
composition according
beverage
Prior art date
Application number
FIU20234007U
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Inventor
Kritika Mahadevan
Farnoosh Ayoughi
Isha Joshi
Joel Andrew Kreps
Harshal Kshirsagar
Frank Douglas Ivey
Weixi Zhong
Alexandre Chapeaux
Wesley Rutherford-Jenkins
Ranjan Patnaik
Original Assignee
Clara Foods Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Clara Foods Co filed Critical Clara Foods Co
Priority claimed from EP20836348.1A external-priority patent/EP3997118A4/en
Publication of FI13395Y1 publication Critical patent/FI13395Y1/fi

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
    • A23J1/08—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from eggs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C12N15/815—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts for yeasts other than Saccharomyces
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C11/00—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions
    • A23C11/02—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions containing at least one non-milk component as source of fats or proteins
    • A23C11/06—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions containing at least one non-milk component as source of fats or proteins containing non-milk proteins
    • A23C11/065—Microbial proteins, inactivated yeast or animal proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
    • A23J1/008—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
    • A23J1/18—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from yeasts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
    • A23J3/04—Animal proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
    • A23J3/20—Proteins from microorganisms or unicellular algae
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L15/00—Egg products; Preparation or treatment thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L15/00—Egg products; Preparation or treatment thereof
    • A23L15/35—Egg substitutes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L19/00—Products from fruits or vegetables; Preparation or treatment thereof
    • A23L19/03—Products from fruits or vegetables; Preparation or treatment thereof consisting of whole pieces or fragments without mashing the original pieces
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/52—Adding ingredients
    • A23L2/66—Proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L21/00—Marmalades, jams, jellies or the like; Products from apiculture; Preparation or treatment thereof
    • A23L21/10—Marmalades; Jams; Jellies; Other similar fruit or vegetable compositions; Simulated fruit products
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/195—Proteins from microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/40—Complete food formulations for specific consumer groups or specific purposes, e.g. infant formula
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/76—Albumins
    • C07K14/77—Ovalbumin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/81—Protease inhibitors
    • C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
    • C07K14/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
    • C07K14/8135—Kazal type inhibitors, e.g. pancreatic secretory inhibitor, ovomucoid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2462—Lysozyme (3.2.1.17)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y101/00—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1)
    • C12Y101/03—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1) with a oxygen as acceptor (1.1.3)
    • C12Y101/03013—Alcohol oxidase (1.1.3.13)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/01—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C12Y204/0123—Kojibiose phosphorylase (2.4.1.230)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/01—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C12Y204/01232—Initiation-specific alpha-1,6-mannosyltransferase (2.4.1.232)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01017—Lysozyme (3.2.1.17)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01096—Mannosyl-glycoprotein endo-beta-N-acetylglucosaminidase (3.2.1.96)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/52—Adding ingredients
    • A23L2/54—Mixing with gases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L23/00—Soups; Sauces; Preparation or treatment thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L27/00—Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L27/60—Salad dressings; Mayonnaise; Ketchup
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C12N2510/02—Cells for production

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pediatric Medicine (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
  • Dairy Products (AREA)

Abstract

Koostumus, joka käsittää rekombinanttia ovomukoidiproteiinia (rOVD), jossa rOVD käsittää ainakin yhden glykosyloidun asparagiinitähteen ja rOVD:ssä ei ole olennaisesti N-kiinnittynyttä mannosylaatiota.

Description

KOOSTUMUKSIA, JOTKA KÄSITTÄVÄT REKOMBINANTTIA
OVOMUKOIDIPROTEIINIA
RISTIVIITTAUS LÄHEISIIN HAKEMUKSIIN
Tälle hakemukselle pyydetään etuoikeutta väliaikaisesta US-patenttihakemuksesta nro. 62/873,154, tehty 11.7.2019, ja väliaikaisesta US- patenttihakemuksesta nro. 62/873,159, tehty 11.7.2019.
Edellä mainittujen patenttihakemusten koko sisällöt sisällytetään tähän viittauksella.
SEKVENSSILISTAUS
Esillä oleva hakemus sisältää sekvenssilistauksen, joka on toimitettu ASCII-muodossa
EFS-Web:n kautta ja joka sisällytetään tähän viittauksella kokonaisuudessaan. Mainitun ASCII-kopion, joka on luotu 10.7.2020, nimi on 49160-714.601 ST25.txt ja sen koko on 95504 tavua.
TAUSTA
Proteiinit ovat tärkeitä ruokavalion ravintoaineita. Ne voivat toimia polttoainelähteenä tai aminohappojen lähteinä, mukaan lukien välttämättömät aminohapot, joita keho ei pysty syntetisoimaan.
S Proteiinin päivittäinen saantisuositus terveille
N aikuisille on 10 3 - 35 2 henkilén 8 kokonaiskaloritarpeesta, ja nykyisin pääosa
N proteiininsaannista useimmilla ihmisillä tulee
T 30 eläinperäisistä lähteistä. Lisäksi urheilijat ja
E kehonrakentajat saattavat nauttia enemmän proteiinia 5 lihasmassan kasvattamiseksi ja suorituskyvyn
I parantamiseksi. Maailman väestön kasvaessa ja
S samanaikaisesti globaalin ruoan kysynnän kasvaessa on > 35 tarvetta saada aikaan vaihtoehtoisia kestäviä, ei-
eläinperäisiä proteiininlähteitä käyttökelposeksi proteiininlähteeksi päivittäiseen ruokavalioon, ruokavalion täydentämiseen ja urheiluravitsemukseen.
YHTEENVETO
Esillä olevan julkaisun eräänä näkökulmana on koostumus, joka käsittää rekombinanttia ovomukoidiproteiinia (rOVD). rOVD käsittää ainakin yhden glykosyloituneen asparagiinitähteen ja rTOVD:ssä ei ole olennaisesti N-kiinnittynyttä mannosylaatiota.
Joissakin suoritusmuodoissa jokainen glykosyloitunut asparagiini käsittää yhden N- asetyyliglukosamiinin. rOVD voi käsittää ainakin kolme glykosyloitunutta asparagiinitähdettä. Joissakin tapauksissa rOVD on rOVD-proteiinin eritetty muoto. Eri suoritusmuodossa koostumus on jauhe. Koostumuksella voi olla proteiinisisältö, jossa on vähintään 30 % rOVD- proteiinia, vähintään 40 3 rOVD-proteiinia, vähintään 50 % rOVD-proteiinia, vähintään 60 % rOVD-proteiinia, vähintään 70 % rOVD-proteiinia, vähintään 80 % rOVD- proteiinia, vähintään 85 % rOVD-proteiinia, vähintään 90 % TOVD-proteiinia, tai vähintään 95 % rOVD- proteiinia paino/paino ja/tai paino per koostumuksen kokonaistilavuus. Joissakin tapauksissa jauhe voi liueta nesteeseen.
Esillä olevan julkaisun toisena näkökulmana on en koostumus, joka käsittää rekombinanttia
S ovomukoidiproteiinia (rOVD). Koostumus on ihmisen tai
O eläimen nautittavaksi formuloitu jauhe, ja = 30 koostumuksella voi olla proteiinisisältö, jossa on
N vähintään 70 % rTOVD-proteiinia, vähintään 80 % rOVD- = proteiinia, vähintään 85 % rOVD-proteiinia, vähintään
S 90 % TOVD-proteiinia, tai vähintään 95 % rOVD-
S proteiinia paino/paino ja/tai paino per koostumuksen
N 35 — kokonaistilavuus.
S Jauhe voi käsittää vähemmän kuin 15 %, 12 %, 10 3, 8 % 6 %, 5 %, 3 %, 2 % tai 1 % kosteutta paino/paino ja/tai paino per koostumuksen kokonaistilavuus. Jauhe voi käsittää vähemmän kuin 30 %, 21 %, 25 %, 22 %, 20 %, 17 %, 15 %, 12 %, 10 %, 8 2, 5 3, 3 % tai 1 % vapaata hiilihydraattisisältöä.
Joissakin suoritusmuodoissa jauhe voi liueta nesteeseen.
Suoritusmuodoissa koostumus käsittää yhden tai useamman muun aineosan valittuna ryhmästä, joka koostuu aromista, väriaineesta, makeutusaineesta, aminohaposta, proteiinista, happamuutta lisäävästä aineesta, säilöntäaineesta, ja tuhkasta. Joissakin tapauksissa koostumus käsittää vähemmän kuin 5 %, 4,5 %, 4 %, 3,5
Bö, 3%, 2,5 %$, 2 3, 1,5 3, 1%, 0,75 %, 0,5 %, 0,25 % tai 0,1 % tuhkaa. Aminohappo voi olla valittu tryptofaanista, isoleusiinista, leusiinista, ja valiinista, tai niiden yhdistelmästä.
Esillä olevan julkaisun eräänä toisena näkökulmana on koostumus, joka käsittää rekombinanttia ovomukoidiproteiinia (rOVD). Koostumus on ihmisen tai eläimen nautittavaksi formuloidussa kiinteässä muodossa, jossa TOVD aikaansaa koostumukseen proteiinivahvistuksen ja ainakin yhden lisäominaisuuden valittuna ryhmästä, joka koostuu suutuntumasta, tekstuurista, kovuudesta, lämpökäsittelystabiliteetista, ja pH-stabiliteetista.
Eri suoritusmuodoissa rTOVD käsittää ainakin yhden asparagiinitähteen, joka on sitoutunut N- & asetyyliglukosamiiniin, ja rOVD:ssä ei ole olennaisesti
N N-kiinnittynyttä mannosylaatiota. rOVD:n konsentraatio 3 30 voi olla suurempi kuin noin 5 %, noin 10 %, noin 15 %,
N noin 20 %, tai noin 25 % paino/paino ja/tai paino per = koostumuksen kokonaistilavuus ja/tai paino per
N koostumuksen kokonaistilavuus. Joissakin tapauksissa
S rOVD ei olennaisesti muuta kiinteän nautittavissa olevan 2 35 koostumuksen nähtävissä olevaa ulkonäköä tai suutuntumaa
N verrattuna kiinteään nautittavissa olevaan koostumukseen, jossa ei ole rOVD:tä; rTOvVD ei olennaisesti muuta kiinteän nautittavissa olevan koostumuksen nähtävissä olevaa ulkonäköä tai suutuntumaa verrattuna kiinteään nautittavissa olevaan koostumukseen, joka sisältää heraproteiinia, soijaproteiinia, tai herneproteiinia samana konsentraationa kuin rOVD; rOVD ei olennaisesti vaikuta hajun ja/tai maun aistiarviointiin verrattuna kiinteään nautittavissa olevaan koostumukseen, jossa ei ole
TOVD:tä; ja/tai rOVD ei olennaisesti vaikuta hajun ja/tai maun aistiarviointiin verrattuna vastaavaan koostumukseen, joka sisältää heraproteiinia, soijaproteiinia, tai herneproteiinia samana konsentraationa kuin rOVD. Joissakin suoritusmuodoissa kiinteä nautittavissa oleva koostumus on välipalapatukka, proteiinipatukka, ravintopatukka, energiapatukka, tai proteiinilisä. Joissakin tapauksissa kiinteä nautittavissa oleva koostumus käsittää yhden tai useamman muun aineosan valittuna ryhmästä, joka koostuu aromista, väriaineesta, makeutusaineesta, aminohaposta, proteiinista, happamuutta lisäävästä aineesta, säilöntäaineesta, ja tuhkasta.
Eräänä näkökulmana esillä olevassa julkaisussa esitetään koostumus, joka käsittää rekombinanttia ovomukoidiproteiinia (rOVD). Koostumus on ihmisen tai eläimen nautittavaksi formuloitu neste, jossa rOVD aikaansaa koostumukseen proteiinivahvistuksen ja & ainakin yhden lisäominaisuuden valittuna ryhmästä, joka
N koostuu liukenevuudesta, suutuntumasta, 3 30 lämpökäsittelystabiliteetista, ja pH-stabiliteetista.
N Joissakin tapauksissa koostumuksella on = proteiinisisältö, joka käsittää vähintään 15 % rOVD:tä,
N vähintään 20 % rTOVD-proteiinia, vähintään 30 % rOVD-
S proteiinia, tai vähintään 40 % rOVD-proteiinia 2 35 paino/paino ja/tai paino per koostumuksen
N kokonaistilavuus. Koostumuksella voi olla proteiinisisältö, joka käsittää vähintään 5 % rOvVD:tä,
ja jossa nestemäinen nautittavissa oleva koostumus on olennaisesti optisesti kirkas. Suoritusmuodoissa koostumuksella on optinen kirkkaus, joka on suurempi kuin vastaavalla koostumuksella, joka sisältää 5 heraproteiinia, soijaproteiinia, tai herneproteiinia samana konsentraationa kuin rOVD. Joissakin tapauksissa rOVD ei olennaisesti muuta nestemäisen nautittavissa olevan koostumuksen nähtävissä olevaa ulkonäköä tai suutuntumaa verrattuna nestemäiseen nautittavissa olevaan koostumukseen, jossa ei ole rOVD:ta; rOVD ei olennaisesti muuta nestemäisen nautittavissa olevan koostumuksen nähtävissä olevaa ulkonäköä tai suutuntumaa verrattuna vastaavaan koostumukseen, joka sisältää heraproteiinia, soijaproteiinia, tai herneproteiinia samana konsentraationa kuin rOVD; rOVD ei olennaisesti vaikuta hajun ja/tai maun aistiarviointiin verrattuna nestemäiseen nautittavissa olevaan koostumukseen, jossa ei ole rTOVD:tä; ja/tai rOVD ei olennaisesti vaikuta hajun ja/tai maun aistiarviointiin verrattuna vastaavaan koostumukseen, joka sisältää heraproteiinia, soijaproteiinia, tai herneproteiinia samana konsentraationa kuin rOVD. rOVD voi säilyä olennaisesti liukoisena sen jälkeen, kun nestemäinen nautittavissa oleva koostumus on kuumennettu lämpötilaan, joka on noin 72 °C - noin 121 °C. Joissakin tapauksissa roVD:llä on suurempi liukenevuus, optinen kirkkaus tai sekä liukenevuus että optinen kirkkaus nesteessä & lampokasittelyn jälkeen kuin heraproteiinin,
N soijaproteiinin, tai herneproteiinin stabiliteetti 3 30 samana konsentraationa kuin rOvVD. Joissakin
N suoritusmuodoissa lämpökäsittely käsittää nesteen = saattamisen lämpötilaan, joka on noin 72 °C — noin 121
N °C. rovD:llä voi olla suurempi liukenevuus nesteessä
S kuin heraproteiinin, soijaproteiinin, tai 2 35 herneproteiinin liukenevuus samana konsentraationa kuin
N rOVD. Joissakin tapauksissa nestemäisen nautittavissa > olevan koostumuksen pH on noin 2,0 - noin 8,0.
Joissakin suoritusmuodoissa ihmisen tai eläimen nautittavaksi formuloitu kiinteä muoto tai ihmisen tai eläimen nautittavaksi formuloitu neste voi käsittää yhden tai useamman muun aineosan valittuna ryhmästä, joka koostuu aromista, väriaineesta, makeutusaineesta, aminohaposta, proteiinista, happamuutta lisäävästä aineesta ja säilöntäaineesta.
Eri suoritusmuodoissa aminohappo on valittu tryptofaanista, isoleusiinista, leusiinista, ja valiinista, tai niiden yhdistelmästä. Joissakin tapauksissa proteiini on lysotsyymiproteiini, esim. munanvalkuaisen lysotsyymi (OVL). rOVD:n ja OVL:n suhde voi olla noin 60 % rOVD:40 % OVL - noin 82 % rOVD:18 3
OVL. Lysotsyymi voi olla rekombinantti lysotsyymiproteiini. Joissakin tapauksissa proteiini ja/tai aminohappo aikaansaa parannetun aminohappotasapainon kiinteään muotoon tai nesteeseen.
Suoritusmuodoissa proteiinin sulavuudella korjattu aminohappopistemäärä (PDCAAS) on yhtä suuri tai suurempi kuin noin 0,75, esim. suurempi tai yhtä suuri kuin noin 0,8, 0,85, 0,90, 0,95 tai PDCAAS on noin tai on 1,0.
Nestemäinen nautittavissa oleva koostumus voi käsittää rovD:ta ja OVL:ää ja proteiinit ovat liukenevia ja koostumus on optisesti kirkas.
Joissakin tapauksissa nestemäinen nautittavissa oleva koostumus on juoma, joka on valittu ryhmästä, joka koostuu seuraavista: mehu, liemi, keitto, & virvoitusjuoma, limonadi, maustettu vesi,
N proteiinivesi, vahvistettu vesi, hiilihapotettu vesi, 3 30 ravitsemuksellinen juoma, energiajuoma, urheilujuoma,
N palautusjuoma, kuumennettu juoma, kahvipohjainen juoma, = teepohjainen juoma, kasvipohjainen maito,
N maitopohjainen juoma, maitoa sisältämätön,
S kasvipohjainen maitojuoma, äidinmaidonkorvikejuoma, 2 35 ateriankorvikejuoma. Joissakin suoritusmuodoissa juoma
N käsittää hiilihapotuksen.
Nestemäinen nautittavissa oleva koostumus voi olla siirappi, joka käsittää 20 % rTOVD-proteiinia - ainakin 60 % rOVD-proteiinia paino/paino ja/tai paino per koostumuksen kokonaistilavuus.
Joissakin tapauksissa nestemäinen nautittavissa oleva koostumus on emulsio, esim. kastike, lihan kastike, tai salaatin kastike.
Eräänä näkökulmana esillä olevassa julkaisussa esitetään koostumus, joka käsittää rekombinanttia ovomukoidiproteiinia (rOVD). Koostumus on ihmisen tai eläimen nautittavaksi formuloidussa puolikiinteässä muodossa, johon rOVD aikaansaa ainakin yhden lisäominaisuuden valittuna ryhmästä, joka koostuu suutuntumasta, tekstuurista, kovuudesta, lämpökäsittelystabiliteetista, ja pH-stabiliteetista.
Eri suoritusmuodoissa puolikiinteä nautittavissa oleva koostumus on purukumi, makeinen, hyytelö, siirappi, geeli, geeliytettyvalmiste.
Joissakin tapauksissa rOVD ei olennaisesti muuta puolikiinteän nautittavissa olevan koostumuksen nähtävissä olevaa ulkonäköä tai suutuntumaa verrattuna puolikiinteään nautittavissa olevaan koostumukseen, jossa ei ole rOVD:tä; rTOVD ei olennaisesti muuta puolikiinteän nautittavissa olevan koostumuksen nähtävissä olevaa ulkonäköä tai suutuntumaa verrattuna puolikiinteään nautittavissa olevaan koostumukseen, joka sisältää heraproteiinia, soijaproteiinia, tai & herneproteiinia samana konsentraationa kuin rOVD; rOVD
N ei olennaisesti vaikuta hajun ja/tai maun 3 30 aistiarviointiin verrattuna puolikiinteään
N nautittavissa olevaan koostumukseen, jossa ei ole = rOvVD:tä; ja/tai rOVD ei olennaisesti vaikuta hajun
N ja/tai maun aistiarviointiin verrattuna vastaavaan
S koostumukseen, joka sisältää heraproteiinia, 2 35 soijaproteiinia, tai herneproteiinia samana
N konsentraationa kuin TOVD. Puolikiinteällä > nautittavissa olevalla koostumuksella voi olla optinen kirkkaus, joka on suurempi kuin vastaavalla koostumuksella, joka sisältää heraproteiinia, soijaproteiinia, tai herneproteiinia samana konsentraationa kuin rOVD.
Puolikiinteä nautittavissa oleva koostumus voi käsittää yhden tai useamman muun aineosan valittuna ryhmästä, joka koostuu aromista, väriaineesta, makeutusaineesta, aminohaposta, proteiinista, happamuutta lisäävästä aineesta, ja säilöntäaineesta.
Proteiini ja/tai aminohappo voi aikaansaada parannetun aminohappotasapainon puolikiinteään nautittavissa olevaan koostumukseen. Joissakin tapauksissa aminohappo on valittu tryptofaanista, isoleusiinista, leusiinista, ja valiinista, tai niiden yhdistelmästä. Joissakin suoritusmuodoissa proteiini ja/tai aminohappo aikaansaa parannetun aminohappotasapainon puolikiinteään nautittavissa olevaan koostumukseen. Proteiini ja/tai aminohappo voi aikaansaada parannetun aminohappotasapainon puolikiinteään nautittavissa olevaan koostumukseen. Joissakin tapauksissa aminohappo on valittu tryptofaanista, isoleusiinista, leusiinista, ja valiinista, tai niiden yhdistelmästä.
Suoritusmuodoissa proteiini on lysotsyymiproteiini, esim. lysotsyymiproteiini on munanvalkuaisen lysotsyymi (OVL) . rOVD:n ja OVL:n suhde voi olla noin 60 % rOvVD:40 % OVI - noin 82 % rOVD:18 % OVL. Lysotsyymi voi olla rekombinantti lysotsyymiproteiini. Eri & suoritusmuodoissa proteiinin sulavuudella korjattu
N aminohappopistemäärä (PDCAAS) on yhtä suuri tai suurempi 3 30 kuin noin 0,75, 0,8, 0,85, 0,90, 0,95 tai PDCAAS on noin
N tai on 1,0. = Joissakin tapauksissa rOVD käsittää rOVD:n,
N joka on altistettu hapettavalle aineelle tai happea
S tuottavalle aineelle. Eri suoritusmuodoissa happea 2 35 tuottava aine on vetyperoksidi, natriumperkarbonaatti,
N kuplitettu happi, aktivoitu klooridioksidi, tai otsoni.
Joissakin tapauksissa TOVD käsittää aminohapposekvenssin, joka esiintyy luontaisesti lintulajissa, esim. kanassa, viiriäisessä, kalkkunassa, kalkkunakondorissa, kolibrissa, ankassa, strutsissa, hanhessa, lokissa, helmikanassa, fasaanissa, tai emussa, ja niiden missä tahansa yhdistelmässä. rOVD voi käsittää jonkin sekvensseistä SEQ ID
No. 1-44 mukaisen aminohapposekvenssin tai aminohapposekvenssin, jolla on vähintään 85 3:n sekvenssi-identtisyys jonkin sekvensseista SEQ ID No. 1-44 kanssa.
Suoritusmuodoissa TOVD on olennaisesti täyspitkä rO0VD-aminohapposekvenssi.
Joissakin tapauksissa TOVD aikaansaa koostumukseen proteiinivahvistuksen.
Joissakin suoritusmuodoissa rOVD on mikrobi- isäntäsolun tuottama, esim. joissakin tapauksissa mikrobi-isäntäsolu on hiiva, rihmasieni, tai bakteeri.
Mikrobi-isäntäsolu voi olla Pichia-laji, Saccharomyces- laji, Trichoderma-laji, Pseudomonas-laji tai E. coli - laji. Mikrobi-isäntäsolu voi olla Pichia pastoris tai
Komagataella phaffii.
Fräs näkökulma on nautittavissa oleva koostumus, joka käsittää rekombinanttia ovomukoidiproteiinia (rovD) . rOVD aikaansaa koostumukseen proteiinivahvistuksen; jossa TOVD aikaansaa liukenevuuden, joka on verrattavissa & natiiviin ovomukoidiproteiiniin tai sitä suurempi.
N Esillä olevan julkaisun eräs näkökulma on 3 30 nautittavissa oleva jauheproteiinikoostumus, joka
N käsittää rekombinanttia ovomukoidiproteiinia (rOVD). = Koostumuksen proteiinisisältö on suurempi kuin 70 %;
N jossa koostumus käsittää vähemmän kuin 2 % tuhkaa,
S vähemmän kuin 20 % hiilihydraatteja, ja vähemmän kuin 1 2 35 % rasvaa happohydrolyysillä paino/paino ja/tai paino per
N koostumuksen kokonaistilavuus.
Esillä olevan julkaisun eräs näkökulma on nautittavissa oleva koostumus, joka käsittää rekombinanttia ovomukoidiproteiinia (TOVD) .
Koostumuksella on proteiinisisältö, joka käsittää vähintään 15 % rOVD-proteiinia paino/paino ja/tai paino per koostumuksen kokonaistilavuus.
Eräänä näkökulmana esillä olevassa julkaisussa esitetään nautittavissa oleva koostumus, joka käsittää rekombinanttia ovomukoidiproteiinia (rovD) . rOVD aikaansaa koostumukseen proteiinivahvistuksen; jossa
TOVD aikaansaa vedensitomiskyvyn, joka on suurempi kuin natiivilla ovomukoidiproteiinilla.
Esillä olevan julkaisun vielä eräs näkökulma on juomakoostumus, joka käsittää rekombinanttia ovomukoidiproteiinia (TOVD) ja vähintään yhtä nautittavissa olevaa nestettä, jossa TOVD on olennaisesti liukoinen koostumuksessa, jossa juomakoostumus on olennaisesti optisesti kirkas, ja jossa rOVD:n konsentraatio on suurempi kuin noin 5 3 paino/paino ja/tai paino per koostumuksen kokonaistilavuus. Juoma on valittu ryhmästä, joka koostuu seuraavista: mehu, liemi, keitto, virvoitusjuoma, limonadi, maustettu vesi, proteiinivesi, vahvistettu vesi, hiilihapotettu vesi, ravitsemuksellinen juoma, energiajuoma, urheilujuoma, palautusjuoma, kuumennettu juoma, kahvipohjainen juoma, teepohjainen juoma, kasvipohjainen maito, & maitopohjainen juoma, maitoa sisältämätön,
N kasvipohjainen maitojuoma, äidinmaidonkorvikejuoma, 3 30 ateriankorvikejuoma. Juoma voi käsittää
N hiilihapotuksen. = Eräänä näkökulmana esillä olevassa julkaisussa
N esitetään menetelmä nautittavissa olevan
S elintarvikevalmisteen valmistamiseksi. Menetelmä 2 35 käsittää vaiheet, joissa: järjestetään mikrobi-isännän
N tuottama rekombinantti OVD (rOVD); jossa rOVD käsittää
N-kiinnittyneen glykosylaation ja jossa rOVD:ssä ei ole olennaisesti N-kiinnittynyttä mannosylaatiota; tuotetaan valmiste yhdistämällä tai sekoittamalla rOVD vähintään yhden nautittavissa olevan aineosan Kanssa; jossa TOVD aikaansaa koostumukseen proteiinivahvistuksen ja ainakin yhden lisäominaisuuden valittuna ryhmästä, joka koostuu liukenevuudesta, optisesta kirkkaudesta, suutuntumasta, tekstuurista, kovuudesta, lämpökäsittelystabiliteetista ja pH- stabiliteetista.
Eri suoritusmuodoissa rOVD käsittää yhden tai useamman glykosyloituneen asparagiinitähteen, jossa jokainen glykosyloitunut asparagiinitähde käsittää yhden N-asetyyliglukosamiinin. Joissakin tapauksissa
TOVD:tä on läsnä nautittavissa olevassa elintarvikevalmisteessa määrä, joka on tai joka on noin 1%, 5%, 6%, 7 3, 8%, I 3, 10 %, 11 3, 12 3, 13 %, 14 %$, 15 %, 16 3, 17 %, 18 %, 19 %, 20 %, 21 %, 22 %, 23 3, 24 %, 25 %, 26 %, 27 %, 28 %, 29 %, 30 3, 31 %, 32 %, 33 %, 34 %, 35 %, 36 %, 37 %, 38 23, 39 % tai 40 % paino/paino ja/tai paino per valmisteen kokonaistilavuus.
Menetelmä voi edelleen käsittää valmisteen lämpökäsittelemisen, esim. valmisteen saattamisen lämpötilaan, joka on noin 72 °C —-— noin 121 °C.
Lämpökäsitteleminen voi käsittää kuumatayton, pastöroinnin, retortin, keittämisen, paistamisen, paahtamisen tai grillauksen. Suoritusmuodoissa & valmisteen pH on noin 2 - noin 6.
N Joissakin tapauksissa menetelmä edelleen 3 30 käsittää TOVD-proteiinin ilmentämisen mikrobi- a, isännässä, esim. hiivassa, rihmasienessä, tai = bakteerissa. Joissakin suoritusmuodoissa mikrobi-
N isäntä on pichia-laji, saccharomyces-1laji,
S Trichoderma-laji, pseudomonas-laji tai E. coli -laji.
D 35 Joissakin tapauksissa mikrobi-isäntä on Pichia pastoris
N tai Komagataella phaffii.
Joissakin suoritusmuodoissa menetelmä edelleen käsittää, että ilmennetään entsyymi mikrobi-isännässä, jolla on glykaanin pilkkomalla poistava aktiivisuus paljon mannoosia sisältävien ja hybridioligosakkaridien kitobioosiytimessä N-kiinnittyneessä glykoproteiinissa.
Eri suoritusmuodoissa entsyymi käsittää EndoH:n, OCH1-
EndoH-fuusion tai EndoH:n aktiivisen fragmentin.
Joissakin tapauksissa rOVD eritetään mikrobi- isännästä, ja jossa menetelmä edelleen käsittää eritetyn
TOVD:n eristämisen ennen £rOVD:n yhdistämistä tai sekoittamista vähintään yhden nautittavissa olevan aineosan kanssa.
Menetelmä voi edelleen käsittää erittyneen
TOVD:n erottamisen mikrobi-isännästä ja TOVD:n altistamisen hapettavalle aineelle tai happea tuottavalle aineelle, esim. vetyperoksidille, natriumperkarbonaatille, aktivoidulle klooridioksidille, kuplitetulle hapelle, tai otsonille.
Joissakin tapauksissa menetelmä edelleen käsittää TOVD:n kuivaamisen, jauhamisen ja/tai sumutuskuivaamisen.
Eri suoritusmuodoissa valmiste on sopiva ihmisen nautittavaksi ja/tai eläimen nautittavaksi.
Esillä olevan julkaisun eräs näkökulma on nautittavissa oleva koostumus, joka on tuotettu tässä esitetyllä menetelmällä.
Esillä olevan julkaisun toinen näkökulma on & rekombinantin ovomukoidin (TOVD) proteiini, joka
N käsittää N-kiinnittyneen glykosylaation, jossa N- 3 30 kiinnittynyt glykosylaatio käsittää N-
N asetyyliglukosamiinin, ja siinä ei ole olennaisesti = mannnoositähteitä.
N Joissakin tapauksissa rOVD edelleen käsittää
S O-kiinnittyneen glykosylaation. OVD:n ainakin yksi
Q 35 asparagiinitähde on glykosyloitunut ja siinä on yksi N-
N asetyyliglukosamiinitähde. Suoritusmuodoissa TOVD:n ainakin kolmessa asparagiinitähteessä on yksi N-
asetyyliglukosamiinitähde. rOVD-proteiini voi käsittää
TOVD:n, joka on altistettu hapettavalle aineelle tai happea tuottavalle aineelle, esim. vetyperoksidille, natriumperkarbonaatille, kuplitetulle hapelle, aktivoidulle klooridioksidille, tai otsonille.
Edelleen eräs näkökulma on koostumus, joka käsittää minkä tahansa tässä esitetyn näkökulman tai suoritusmuodon mukaisen rOVD-proteiinin.
Joissakin suoritusmuodoissa koostumus on jauhetussa muodossa ja jossa koostumuksen proteiinisisältö on noin 70 % tai suurempi paino/paino ja/tai paino per koostumuksen kokonaistilavuus.
Joissakin tapauksissa TOVD-proteiinia on läsnä koostumuksessa noin 80 % tai enemmän paino/paino ja/tai paino per koostumuksen kokonaistilavuus.
Eräänä näkökulmana esillä olevassa julkaisussa esitetään menetelmä rOVD-proteiinin valmistamiseksi.
Menetelmä käsittää: TOVD-proteiinin tuottamisen eukaryoottisessa isäntäsolussa, jossa rOVD-proteiini erittyy isäntäsolusta ja jossa isäntäsolu ilmentää entsyymiä, jolla on aktiivisuus, joka poistaa mannoositähteitä N-asetyyliglukosamiinisidoksesta; rOVD-proteiinin erottamisen isäntäsolusta; TOVD- proteiinin altistamisen hapettavalle aineelle tai happea tuottavalle aineelle; ja fTOVD:n erottamisen hapettavasta aineesta tai happea tuottavasta aineesta.
Joissakin suoritusmuodoissa entsyymi käsittää & EndoH:n, OCH1-EndoH-fuusion tai EndoH:n aktiivisen
N fragmentin. Joissakin tapauksissa hapettava aine tai 3 30 happea tuottava aine käsittää vetyperoksidin,
N natriumperkarbonaatin, kuplitetun hapen, aktivoidun = klooridioksidin, tai otsonin. Joissakin
N suoritusmuodoissa isäntäsolu on hiiva- tai sienisolu.
S Joissakin tapauksissa isäntäsolu on Pichia sp. 2 35 Missä tahansa tässä esitetyistä menetelmistä
N tai koostumuksista rOVD voi olla peräisin lintulajista.
Missä tahansa tässä esitetyistä menetelmistä tai koostumuksista rOVD voi käsittää kanan OVD:n, hanhen
OVD-proteiinin, kolibrin OVD:n, tai kalkkunakondorin
OVD:n aminohapposekvenssin.
Missä tahansa tässä esitetyistä menetelmistä tai koostumuksista TOVD voi käsittää aminohapposekvenssin, joka on valittu ryhmästä, joka koostuu sekvensseistä SEO ID No. 1-44, ja aminohapposekvenssin, jolla on vähintään 85 3:n sekvenssi-identtisyys sekvenssien SEO ID No. 1-44 kanssa.
Esillä olevan julkaisun muut näkökulmat ja edut tulevat hyvin ilmi tämän alan ammattilaisille seuraavasta vyksityiskohtaisesta kuvauksesta, jossa esitetään ja kuvaillaan ainoastaan havainnollistavia suoritusmuotoja esillä olevasta julkaisusta. Kuten on selvää, esillä oleva julkaisu voi käsittää muita ja erilaisia suoritusmuotoja, ja sen monet yksityiskohdat voivat käsittää muutoksia monenlaisissa ilmeisissä suhteissa, poistumatta millään tavoin julkaisun puitteista. Piirustukset ja selitys tulee nähdä luonteeltaan havainnollistavina eikä rajoittavina.
Mikä tahansa tässä esitetty kuvaus, joka koskee tiettyä koostumusta ja/tai menetelmää, soveltuu ja sitä voidaan käyttää mihin tahansa muuhun tiettyyn tässä esitettyyn koostumukseen ja/tai menetelmään. Lisäksi mikä tahansa tässä esitetty koostumus on sovellettavissa mihin & tahansa tässä esitettyyn menetelmään. Toisin sanoen
N mikä tahansa tässä kuvattu näkökulma tai suoritusmuoto 3 30 voidaan yhdistää minkä tahansa muun tässä esitetyn
N näkökulman tai suoritusmuodon kanssa. =
N VIITEJULKAISUT
S Kaikki tässä julkaisussa mainitut julkaisut,
N 35 patentit, ja patenttihakemukset sisällytetään tähän
S viittauksella samalla laajuudessa kuin jos kukin yksittäinen julkaisu, patentti, tai patenttihakemus olisi nimenomaisesti ja yksilöllisesti ilmoitettu sisällytettäväksi viittauksella. Mikäli viittauksella sisällytetyt julkaisut ja patentit tai patenttihakemukset ovat ristiriidassa julkaisun sisältämän kuvauksen kanssa, julkaisu on tarkoitettu syrjäyttämään kaikki tällainen ristiriitainen materiaali ja/tai olemaan etusijalla siihen nähden.
PIIRUSTUSTEN LYHYT KUVAUS
Keksinnön uudet piirteet on esitetty yksityiskohtaisesti liitteenä olevissa suojavaatimuksissa. Esillä olevan keksinnön piirteet ja edut käyvät selvemmin ilmi seuraavasta yksityiskohtaisesta kuvauksesta, jossa esitetään havainnollistavia suoritusmuotoja, joissa hyödynnetään keksinnön periaatteita, ja liitteenä olevista piirustuksista (tässä myös "kuva”), joissa:
Kuva 1A esittää TOVD:n ilmentämiseen käytettyjä vektorirakenteita.
Kuva 1B esittää P. pastorisissa tuotetun ja esillä olevan julkaisun mukaisen rekombinantin ovomukoidin ja natiivin ovomukoidin glykosylaatiomallin vertailun. Siitä nähdään kompleksisen haaroittuneen glykosylaation puuttuminen (mukaan lukien mannoositähteiden puuttuminen) rekombinantista ovomukoidista, kun se on tuotettu P. pastorisin kannassa, 2 joka käsittää endoglykosidaaseja.
N Kuva 1C esittää P. pastorisin tuottaman 8 rekombinantin OVD:n glykosylaatiomalleja ilman x 30 endoglykosidaasikäsittelyä. Näin tuotetulla rOVD:llä on
I kompleksiset haaroittuneet glykosylaatiomallit.
E Kuva 1D vertaa natiivin OVD:n, 5 endoglykosidaasilla käsitellyn natiivin OVD:n, ja
I rekombinantin OVD:n näytteiden molekyylipainoa.
S 35 Kuva 2 esittää rOVD-liuoksen ominaisuuksia, > jossa liuoksessa on 4,23 % p/t rOVD:ta.
Kuva 3 esittää rOVD-liuoksen kirkkautta noin pH-arvossa 4 ja noin pH-arvossa 6, jossa liuoksessa on 30 % p/t rovD:tä erilaisten lämpökäsittelyjen jälkeen, mitattuna absorbanssilla 600 nm:ssä.
Kuva 4 esittää TOVD-liuoksen kirkkautta erilaisten lämpökäsittelyjen jälkeen, jossa liuoksessa on 30 % p/t rO0vVD:tä deionisoidussa vedessä.
Kuva 5A esittää rTOVD-liuoksen (9 % p/t) ulkonäköä pH-arvossa 2,5, 4, ja 6 erilaisten lämpökäsittelyolosuhteiden jälkeen.
Kuva 5B esittää diagrammeja, jotka kuvaavat rTOVD-liuoksen (9 % p/t) absorbanssia 600 nm:ssä erilaisten lämpökäsittelyolosuhteiden jälkeen pH- arvossa 2,5, 4 ja 6. Kaikissa datapareissa vasemmanpuoleisten pylväiden tiedot koskevat roVvD:tä ja oikeanpuoleisten pylväiden tiedot koskevat puskuria.
Kuva 6A esittää rOVD:n liukenevuutta eri juomissa.
Kuva 6B on diagrammi, joka kuvaa rOVD-liuoksen absorbanssia 600 nm:ssä eri juomissa. Kaikissa datapareissa vasemmanpuoleisten pylväiden tiedot koskevat juomaa ja oikeanpuoleisten pylväiden tiedot koskevat juomia, joissa on rOVD:ta.
Kuva 7 esittää vasemmalta oikealle huoneenlämpötilassa olevien näytteiden vertailua:
OVL+0VD sekä OVD-kontrolli pH-arvossa 2,5, 4, 6.
Kuva 8 esittää vasemmalta oikealle & pastöroitujen (72 °C) näytteiden vertailua: OVL+OVD sekä
N OVD-kontrolli pH-arvossa 2,5, 4, 6. 3 30 Kuva 9 esittää vasemmalta oikealle
N kuumatäytettyjen (85 °C) näytteiden vertailua: OVL+0VD = sekä OVD-kontrolli pH-arvossa 2,5, 4, 6.
N Kuva 10 esittää vasemmalta oikealle retortissa
S (121 °C) käsiteltyjen näytteiden vertailua: OVL+0VD sekä 2 35 OVD-kontrolli pH-arvossa 2,5, 4, 6.
N
D
Kuva 11 esittää vasemmalta oikealle pastöroitujen (72 °C) näytteiden vertailua: OVL- kontrolli sekä OVD-kontrolli pH-arvossa 2,5, 4, €.
Kuva 12 esittää vasemmalta oikealle kuumatäytettyjen (85 °C) näytteiden vertailua: OVL- kontrolli sekä OVD-kontrolli pH-arvossa 2,5, 4, €.
Kuva 13 esittää vasemmalta oikealle retortissa (121 °C) käsiteltyjen näytteiden vertailua: OVL- kontrolli sekä OVD-kontrolli pH-arvossa 2,5, 4, €.
Kuva 14 esittää vasemmalta oikealle rOVL+rOVD- ja rOVD-naytteiden vertailua huoneenlämpötilassa ja erilaisten lämpökäsittelyjen jälkeen pH-arvossa 2,5, 4, 6.
Kuva 15A ja kuva 15B esittävät heraisolaatin (WPI1 ja WPI3, 9 % p/t) ja rOvVD-liuosten (9 % p/t) kirkkausvertailuja pH-arvossa 2,5, 4 ja €.
Kuva 16 esittää proteiinivesinäytteitä, joissa on 5 % proteiinia, vasemmalta oikealle: heraproteiini- isolaatti (neutraali), heraproteiini-isolaatti (hapan), novD, TOVD, 4 2, herneproteiini (hapan), ja soijaproteiini.
Kuva 17A ja kuva 17B esittävät appelsiinimehunävytteitä, vasemmalta oikealle: vastaavasti 15 % heraproteiinia, 15 % nOVD:tä, 15 % rovD:ta, 20 % rOVD:tä, 30 % rOVD:tä, tai (ei proteiinia) kontrolli. Kuva 17A: liuos 0 tunnin kohdalla ja kuva 17B: 48 tuntia 4 °C:ssa säilyttämisen jälkeen. & Kuva 18A esittää hyytelönäytteitä, vasemmalta
N oikealle: kontrolli (ilman proteiinilisää), lisätty 20 3 30 % rovD:tä, lisätty 20 3 nOVD:ta ja lisätty 20 3
N heraproteiinia. = Kuva 18B esittää hyytelönäytteiden vertailua
N ilman proteiinia (kontrolli), lisättynä 20 % rO0VD:tä ja
S lisättynä 20 % heraproteiinia.
D 35 Kuva 18C —- kuva 18E esittävät hyytelönäytteitä,
N joihin on lisätty 20 % heraproteiinia, 16 % gelatiinia ja 20 % gelatiinia.
Kuva 19A ja kuva 19B esittävät veteen liuotettuja TOVD-H- ja TOVD-T-näytteitä eri konsentraatioina.
Kuva 20 esittää rOVD-näytteiden, kananmunan valkuaisen natiivin ovomukoidin (NOVD) ja deglykosyloidun natiivin ovomukoidin (nOVD + PNGaseF) immunoreaktiivisuuden vertailua.
Kuva 21 esittää rTOVD-liuoksen väriä ilman (vasemmalla) vetyperoksidikäsittelyä ja (oikealla) vetyperoksidikäsittelyn jälkeen.
Kuva 22 esittää kalvonmuodostuksen vertailua eri proteiininäytteillä.
YKSITYISKOHTAINEN SELOSTUS
Vaikka tässä on esitetty ja kuvailtu keksinnön eri suoritusmuotoja, alan ammattilaisille on selvää, että tällaiset suoritusmuodot ovat ainoastaan esimerkinomaisia. Alan ammattilaiset voivat toteuttaa monenlaisia variaatioita, muutoksia ja korvauksia poistumatta keksinnön puitteista. Tulee ymmärtää, että tässä kuvatun keksinnön suoritusmuodoille voi olla useita vaihtoehtoja.
Tässä esitetään koostumuksia ja menetelmiä koostumusten valmistamiseksi ei-eläinperäisinä proteiininlähteinä, jotka ovat hyödyllinen nautittavissa olevan proteiinin lähde eläimen, mukaan en lukien ihmisen, nautittavaksi, kuten päivittäistä
S ruokavaliota, ravintolisää, kuluttajaruokaa ja -juomaa,
O ja ravinnonsaantia varten. = 30 Tässä esitetään nautittavissa olevia
N koostumuksia, jotka käsittävät ovomukoidia (OVD) . z Tällaisia nautittavissa olevia koostumuksia voidaan
S käyttää ruokatuotteessa, juomatuotteessa,
S funktionaalisessa elintarvikkeessa, lääkkeessä,
N 35 kosmetiikkatuotteessa, tai lopullisen tuotteen
S aineosana. Tässä esitetyissä suoritusmuodoissa nautittavissa oleva koostumus on nestemäisessä muodossa tai puolikiinteässä muodossa. Tässä esitetyissä suoritusmuodoissa nautittavissa oleva koostumus on jauhetussa muodossa; tätä jauhetta voidaan käyttää nestemäisen, kiinteän, tai puolikiinteän nautittavissa olevan koostumuksen valmistamiseksi. Fdullisesti tällaisissa nautittavissa olevissa koostumuksissa oleva
OVD valmistetaan rekombinanttisesti, ja siitä voidaan käyttää tässä nimitystä rekombinantti OVD (rOVD).
Ellei toisin ole mainittu, termi OVD sisältää sekä natiivin OVD:n (NOVD) että rTOVD:n. Tässä esitetyissä nautittavissa olevissa koostumuksissa oleva nOVD tai rOVD on läsnä sellaisina konsentraatioina, että ne kumpikin nostavat nautittavissa olevan koostumuksen proteiinisisältöä ja lisäksi säilyttävät yhden tai useamman lisäominaisuuden kuten suuren kirkkauden, suuren liukenevuuden, vähäisemmän sameuden, tai olennaisen aistineutraaliuden.
TOVD:n käyttäminen missä tahansa tässä esitetyistä nautittavissa olevista koostumuksista mahdollistaa ei-eläinperäisen proteiininlähteen, saaden samalla aikaan lisäominaisuuksia kuten liukenevuus, kirkkaus, kovuus, tekstuuri, suutuntuma, yhteensopivuus lämpökäsittelyn kanssa, yhteensopivuus pH-alueiden kanssa ja kuluttajaystävällisen aistiprofiilin säilyttäminen. Tässä esitetään tällaisten koostumusten, niiden valmistusmenetelmien, ja niiden käyttömenetelmien erilaisia suoritusmuotoja. & Joissakin suoritusmuodoissa tässä esitetyt
N koostumukset ja menetelmät koostumusten valmistamiseksi 3 30 nostavat hyödykkeen cproteiinisisältöä, ja lisäksi
N saavat aikaan lisäominaisuuksia kuten yhteensopivuus = muiden aineosien kanssa (kuten, esimerkiksi,
N yhteensopivuus gluteenin, vitamiinien,
S kivennäisaineiden, ja hiilihapotuksen kanssa), väri, 2 35 haju, maku ja yhteensopivuus ruokien ja juomien
N valmistus- ja/tai säilytysolosuhteiden kanssa.
Natiivilla ovomukoidilla (nOVD), kuten kanan tai muun linnun munasta eristetyllä, on erittäin kompleksinen haaroittunut glykosylaation muoto.
Glykosylaatiomalli käsittää N-kiinnittyneitä glykaanirakenteita kuten N- asetyyliglukosamiiniyksikköjä ja N-kiinnittyneitä mannoosiyksikköjä. Ks. esim. kuva 1B (vasemmanpuoleinen sarake). Joissakin tapauksissa tässä esitetyssä nautittavissa olevassa koostumuksessa käytettäväksi tarkoitetulla ja tässä kuvatuilla menetelmillä tuotetulla rOvVD:llä on glykosylaatiomalli, joka eroaa nOVD:n glykosylaatiomallista. Esimerkiksi kun rOVD on tuotettu Pichia-lajissa, proteiini voi olla erittäin glykosyloitunut. Kuva 1C esittää P. pastorisin tuottaman rOVD:n glykosylaatiomalleja kuvaten kompleksisen haaroittuneen glykosylaatiomallin. Tässä esitettyjen koostumusten ja menetelmien joissakin suoritusmuodoissa rOVD on käsitelty siten, että glykosylaatiomallia on modifioitu nOVD:n mallista sekä modifioitu verrattuna
Pichia-lajin tuottamaan rOVD: hen ilman tällaista käsittelyä. Joissakin tapauksissa TOVD:ssä ei ole glykosylaatiota. Joissakin tapauksissa 7TOVD:ssä on vähäisempi glykosylaatio. Joissakin tapauksissa rOVD:ta on modifioitu N-asetyyliglukosamiinilla proteiinin yhdessä tai useammassa asparagiinitähteessä ja siinä ei ole lainkaan tai ei ole olennaisesti N-kiinnittynyttä mannosylaatiota. Ks. esim. kuva 1B (oikeanpuoleinen & sarake). Tässä kuvatut muutokset glykosylaatiossa
N voivat johtaa rOVD:n liukenevuuden ja kirkkauden 3 30 lisääntymiseen verrattuna muihin proteiinimuotoihin
N kuten heraproteiineihin, soijaproteiineihin, = herneproteiineihin, ja nOVD:hen. Modifikaatiot rOVD:n
N glykosylaatiossa voivat johtaa muutokseen proteiinin
S typpi-hiili-suhteessa, niin että vähennettäessä
Q 35 mannoositähteitä tai poistettaessa ne olennaisesti
N kokonaan typpi-hiili-suhde kasvaa (kuten verrattuna nOVD: hen tai rOVD: hen, joka on tuotettu ilman glykosylaatiomallin modifiointia).
Joissakin suoritusmuodoissa koostumus on nautittavissa oleva elintarviketuote. Joissakin suoritusmuodoissa nautittavissa oleva elintarviketuote on valmis tuote. Joissakin suoritusmuodoissa koostumus on valmiin tuotteen aineosa, esim. rOVD:ta käsittävä tai olennaisesti rOVD:stä koostuva jauhe.
Tässä käytettynä termillä "nautittavissa oleva elintarvikekoostumus” tarkoitetaan koostumusta, joka käsittää eristettyä proteiinia ja jota eläin, mukaan lukien mutta näihin rajoittumatta ihminen ja muu nisäkäs, voi nauttia. Nautittavissa olevia elintarvikekoostumuksia ovat ruokatuotteet, juomatuotteet, ravintolisät, elintarvikelisäaineet, ja funktionaaliset elintarvikkeet, ei-rajoittavina esimerkkeinä.
Nautittavissa olevia elintarvikekoostumuksia ovat myös ruoan tai juoman tai eläimen ruokavalion osana nautitun tuotteen aineosana olevat koostumukset.
Koska esillä olevan julkaisun mukaista rOvVD:ta ei ole saatu eläinlähteestä, rOVD: ta kasittava nautittavissa oleva koostumus katsotaan vegetaariseksi ja/tal vegaaniseksi.
Tässä käytettynä "valmis tuote” tarkoittaa nautittavissa olevaa elintarvikekoostumusta, joka on suunnattu tai joka sopii itsessään ruoaksi tai juomaksi & eläimen nautittavaksi. Tässä käytettynä "aineosa” tai
N "komponentti” nautittavissa olevan 3 30 elintarvikekoostumuksen yhteydessä tarkoittaa
N koostumusta, jota käytetään yhden tai useamman muun = aineosan tai komponentin kanssa valmiin tuotteen
N aikaansaamiseksi.
S
Q 35 rOVD: ta kasittavat koostumukset
N Tässä esitetään nautittavissa olevia elintarvikekoostumuksia ja menetelmiä tällaisten koostumusten valmistamiseksi, jossa koostumukset nostavat nautittavissa olevan elintarvikekoostumuksen proteiinisisältöä rekombinantin ovomukoidiproteiinin (rOVD) lisäämisen ansiosta. Joissakin suoritusmuodoissa rOvD:tä lisätään nautittavissa olevaan elintarvikekoostumukseen proteiinisisällön nostamiseksi, kuten ravinnonsaannin lisäämiseksi.
Joissakin suoritusmuodoissa TOVD:tä on läsnä nautittavissa olevassa elintarvikekoostumuksessa noin 1 % - noin 40 % paino per kokonaispaino (p/p) ja/tai paino per kokonaistilavuus (p/t) koostumuksesta. Esimerkiksi 100 ml:n koostumuksessa roVD:tä on läsnä 30 g ja rOvVD on siten 30 3:n konsentraationa. Joissakin suoritusmuodoissa rOVD:n konsentraatio on tai on noin 1 %, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10 3, 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 %, 16 %, 17 %, 18 3, 19 %, 20 3, 21 %, 22 %, 23 %, 24 %, 25 %, 26 %, 27 %, 28 %, 29 3, 30 %, 31 %, 32 %, 33 %, 34 3, 35 %, 36 %, 37 %, 38 %, 39 % tai 40 % p/p ja/tai p/t koostumuksesta. Joissakin suoritusmuodoissa TOVD:tä on läsnä konsentraationa, joka on tai joka on noin 1-5 %, 5-10 %, 10-15 3, 15-20 %, 20-25 %, 25-30 % tai rOvVD: ta on lasna konsentraationa, joka on suurempi kuin 5 %, 10 %, 11 %, 12 8, 13 %, 14 3, 15 %, 16 %, 17 %, 18 %, 19 %, 20 %, 21 %, 22 %, 23 %, 24 3, 25 %, 26 %, 27 %, 28 %, 29 %, %, 31 &, 32 %, 33 3, 34 3, 35 %, 36 %, 37 %, 38 %, 39 % tai 40 % p/p ja/tai p/t. & Nautittavissa oleva tuote voi sisältää yhtä tai
N useampaa muuta proteiinia, kuten ei-OVD-proteiinia tai 3 30 ei-rekombinanttia proteiinia. TOVD voi nostaa
N proteiinisisällön määrää nautittavissa olevassa = tuotteessa, ja/tai se voi myös nostaa yhden tai useamman
N muun proteiinin liukenevuutta. Esimerkiksi
S nautittavissa oleva koostumus voi sisältää 2 35 heraproteiinia, herneproteiinia, soijaproteiinia, x manteliproteiinia, kauraproteiinia, > pellavansiemenproteiinia, kasviproteiinia, tai munanvalkuaisproteiinia. Joissakin tapauksissa yksi tai useampi muu proteiini voi käsittää OVD:n, jolla on aminohapposekvenssi, joka esiintyy luontaisesti linnussa tai matelijassa.
Joissakin suoritusmuodoissa koostumukset ja menetelmät koostumusten valmistamiseksi nostavat proteiinisisältöä, ja aikaansaavat proteiinin liukenevuuden koostumukseen, sekä säilyttävät koostumuksen kirkkauden tai eivät olennaisesti vähennä sitä. Joissakin suoritusmuodoissa koostumukset ja menetelmät koostumusten valmistamiseksi nostavat proteiinisisältöä, ja aikaansaavat liukenevuuden ja säilyttävät kirkkauden, eivätkä vaikuta haitallisesti koostumuksen stabiliteettiin, tai yhteen tai useampaan aistiominaisuuteen.
Joissakin suoritusmuodoissa nautittavissa olevat elintarvikekoostumukset ja menetelmät nautittavissa olevien elintarvikekoostumusten valmistamiseksi käsittävät rovD:tä ja rOVD nostaa nautittavissa olevan elintarvikekoostumuksen proteiinisisältöä ja rOVD on olennaisesti liukoinen nautittavissa olevassa elintarvikekoostumuksessa.
Nautittavissa oleva elintarvikekoostumus voi olla valmis tuote tai aineosa valmiin tuotteen valmistamiseksi, esim. jauhettu rOVD-koostumus. rOVD-proteiinia voidaan käyttää yksinään tai yhdessä muiden komponenttien kanssa koostumuksen & muodostamiseksi. Joissakin suoritusmuodoissa koostumus
N voi sisältää noin tai vähintään noin 10 %, 20 %, 30 %, 3 30 40 3, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %,
N 90 %, 95 3, 96 3, 97 %, 98 %, tai 99 % proteiinia, esim.
Ek rovD: ti, paino/kokonaispaino (P/P) ja/tai
N paino/kokonaistilavuus (p/t). Joissakin tapauksissa
S tässä kuvattu koostumus voi sisältää korkeintaan noin 2 35 10 &, 20 %, 30 3, 40 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %,
N 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, tai 99 % proteiinia, esim. rOVD:t&d, p/p tai p/t.
Joissakin = suoritusmuodoissa tässä kuvattu koostumus sisältää kokonaisproteiinia konsentraationa, joka on noin tai vähintään 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 13,2, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, tai 75 g kokonaisproteiinia per 100 mL nestettä (esim. vettä).
Joissakin tapauksissa tässä kuvattu koostumus sisältää kokonaisproteiinia konsentraationa, joka on noin tai vähintään 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 13,2, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, tai 100 g kokonaisproteiinia per 100 g koostumusta (esim. jauhetta).
Joissakin = suoritusmuodoissa tässä kuvattu koostumus sisältää kokonaisproteiinia konsentraationa, joka on noin tai vähintään 0,1, 0,2, 0,3, 0,5, 0,7, 1,0, 1,2, 1,5, 1,7, 2,0, 2,2, 2,5, 2,7, 3,0, 3,2, 3,5, 3,7, 4,0, 4,2, 4,5, 4,7 tai 5 g kokonaisproteiinia per 100 mL nestettä (esim. vettä). Joissakin tapauksissa tässä kuvattu koostumus sisältää kokonaisproteiinia konsentraationa, joka on noin tai vähintään 0,1, 0,2, 0,3, 0,5, 0,7, 1,0, 1,2, 1,5, 1,7, 2,0, 2,2, 2,5, 2,7, 3,0, 3,2, 3,5, 3,7, 4,0, 4,2, 4,5, 4,7 tai 5 g kokonaisproteiinia per 100 g koostumusta (esim. jauhetta).
Joissakin suoritusmuodoissa TOVD:n nautittavissa oleva koostumus on nestemäinen koostumus. & Tällaisissa tapauksissa TOVD:n konsentraatio
N nestemäisessä koostumuksessa voi olla 0,1 % - 40 3. 3 30 rOVD:n konsentraatio nestemäisessä koostumuksessa voi a, olla vähintään 0,1 %. rOVD:n konsentraatio nestemäisessä = koostumuksessa voi olla korkeintaan 40 %. rOVD:n
N konsentraatio nestemäisessä koostumuksessa voi olla 0,1
S % — 1 %$, 0,1 %$ - 5 %, 0,1 $ — 10 %, 0,1 3 — 15 %, 0,1 % 2 35 - 20%, 0,1 % — 25 %, 0,1 %$ - 30 3, 0,1 & - 35 %, 0,1 %
N - 40 3, 1 %$ - 35%, 13 - 10 3, 13 - 15 3, 1 % - 20 %, > 1 % -— 25 3, 1% - 30 8, 1 %$ - 35 3, 1 3 - 40 3, 5 % -
10 8, 5% - 15%, 5 %$ - 20 3, 5 %$ - 25 2, 58% - 30 %, 5 % - 35 3, 5% - 40 3, 10 3 - 15 %, 10 % — 20 %, 10 % - 25 %, 10 $ - 30 3, 10 % - 35 %, 10 3 — 40 3, 15 % - 20 %, 15 %$ - 25%, 15% - 30 %, 15 &% - 35 %, 15 % — 40 %, 20% -25%, 20% - 30 3, 20 % - 35 %, 20 % — 40 %, 25 % - 30 3, 25% - 35%, 25% — 40 %, 30 % - 35 %, 30 % - 40 %, tai 35 % - 40 % paino/kokonaistilavuus (p/t).
TOVD:n konsentraatio nestemäisessä koostumuksessa voi olla noin 0,1 %, 1 3, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, tai 40 3 »p/t. rOvD:n — konsentraatio nestemäisessä koostumuksessa voi olla vähintään 0,1 %, 1%, 5 %, 10 3, 15 %, 20 %, 25 3, 30 % tai 35 % p/t.
TOVD:n konsentraatio nestemäisessä koostumuksessa voi olla korkeintaan 1 3, 5 %, 10 %, 15 3, 20 3, 25 %, 30 %, 35 % tai 40 % p/t.
Joissakin suoritusmuodoissa TOVD:n nautittavissa oleva koostumus on kiinteä koostumus.
Tällaisissa tapauksissa rOVD:n konsentraatio kiinteässä koostumuksessa voi olla 0,1 % - 70 %. TOVD:n konsentraatio kiinteässä koostumuksessa voi olla vähintään 0,1 2. rOvVD:n konsentraatio kiinteässä koostumuksessa voi olla korkeintaan 70 %. rOVD:n konsentraatio kiinteässä koostumuksessa voi olla 0,1 3 - 1 %, 0,1 3 — 10 %, 0,1 % - 20%, 0,1 % - 30 3, 0,1 % -— 40 %, 0,1 % - 50%, 0,1 3 — 60 3, 0,1 3 — 70 3, 1 % - 10 8, 1 %$ — 20 3, 1% - 30 3, 1 3 - 40 3, 1 %$ - 50 %, 1 % - 60 3, 1 % - 70 3, 10 3 — 20 %, 10 % — 30 %, 10 % - & 40 %, 10 3 - 50 %, 10 3 - 60 %, 10 & - 70 3, 20 % - 30
N %, 20 % - 40 %, 20 % - 50 3, 20 % — 60 %, 20 % — 70 %, 3 30 30 % - 40 %, 30 3 - 50 %, 30 % - 60 3, 30 % - 70 %, 40
N % - 50 %, 40 3 - 60 %, 40 % — 70 3, 50 3 — 60 %, 50 % - = 70 %, tai 60 % - 70 % paino/kokonaispaino (p/p) ja/tai
N paino/kokonaistilavuus (p/t). TOVD:n — konsentraatio
S kiinteässä koostumuksessa voi olla 0,1 %, 1 3, 10 %, 20 2 35 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, tai 70 % p/p tai p/t. rovD:n
N konsentraatio kiinteässä koostumuksessa voi olla vähintään 0,1 %3, 1 %, 10 %, 20 %, 30 %, 40 3, 50 % tai
60 % p/p tai p/t. rovD:n konsentraatio kiinteässä koostumuksessa voi olla korkeintaan 1 %, 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, tai 70 % p/p tai p/t.
Joissakin suoritusmuodoissa TOVD:n nautittavissa oleva koostumus on jauhettu koostumus.
Tällaisissa tapauksissa TOVD:n konsentraatio jauhekoostumuksessa voi olla 15 % - 99 % paino/kokonaispaino (p/p) ja/tai paino/kokonaistilavuus (p/t). rOvVD:n konsentraatio jauhekoostumuksessa voi olla vähintään 15 % p/p tai p/t. Suoritusmuodoissa
TOVD:n — konsentraatio jauhekoostumuksessa voi olla korkeintaan 99 % p/p tai p/t. rOVD:n konsentraatio jauhekoostumuksessa voi olla 15 3 - 30 %, 15 % - 45 %, 3 - 60 3, 15 3 - 75 3, 15 3 - 80 3, 15 % - 85 %, 15 15 % - 90 3, 15% - 95 3, 15% - 99 3, 30 3 — 45 %, 30 % - 60 %, 30 %$ - 75 %, 30 % - 80 %, 30 % - 85 %, 30 % — 90 %, 30 %$ - 95 %, 30 % - 99 3, 45 % - 60 3, 45 % - 75 %, 45 % - 80 %, 45 % - 85 %, 45 % - 90 3, 45 % - 95 %, 45 % — 99 3, 60 3 - 75%, 60 $ — 80 3, 60 3 — 85 %, 60 % - 90 %, 60 3 - 95 %, 60 3 - 99 3, 75 % - 80 %, 75 % - 85 %, 715 %$ - 90 %, 75 %$ - 95 3, 75 &% - 99 3, 80 % - 85 %, 80 % - 90 %, 80 % - 95 3, 80 3 - 99 %, 85 % - 90 %, 85 % - 95%, 85% - 99%, 90 % - 95 3, 90 % - 99 %, tai 95 % - 99 % p/p tai p/t. rOVD:n — konsentraatio jauhekoostumuksessa voi olla noin 15 %, 30 3, 45 %, 60 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, tai 99 % p/p tai p/t.
TOVD:n — konsentraatio jauhekoostumuksessa voi olla & vähintään 15 %, 30 &, 45 %, 60 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90
N % tai 95 % p/p tai p/t. rovD:n konsentraatio 3 30 jauhekoostumuksessa voi olla korkeintaan 30 %, 45 %, 60
N %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, tai 99 % p/p tai p/t. = Joissakin suoritusmuodoissa TOVD:n
N nautittavissa oleva koostumus on konsentroitu
S siirappikoostumus. Tällaisissa tapauksissa TOVD:n 2 35 — konsentraatio siirappikoostumuksessa voi olla 10 % - 60
N % paino/kokonaispaino (p/p) ja/tai paino/kokonaistilavuus (p/t). TOVD:n — konsentraatio siirapissa voi olla vähintään 10 % p/p tai p/t. rOVD:n konsentraatio siirapissa voi olla korkeintaan 60 % p/p tai p/t. rOVD:n konsentraatio siirapissa voi olla 10 % - 20 %, 10 3 - 30 3, 10 % - 40 3, 10 3 - 50 %, 10 % - 60 %, 20% - 30 %, 20 3 — 40 %, 20 3 - 50 3, 20 % - 60 %, 30 %$ — 40 %, 30 $ - 50 %, 30 3 - 60 %, 40 & - 50 %, 40 % - 60 %, tai 50 3 - 60 % p/p tai p/t. rovD:n konsentraatio siirapissa voi olla noin 10 %, 20 %, 30 %, 40 3, 50 %, tai 60 % p/p tai p/t. rOVD:n konsentraatio siirapissa voi olla vähintään 10 %, 20 %, 30 %, 40 % tai 50 % p/p tai p/t. rOVD:n konsentraatio siirapissa voi olla korkeintaan 20 %, 30 3, 40 3, 50 3, tai 60 % p/p tai p/t. Siirappi voi sisältää mitä tahansa liuotinta, esim. vettä ja mehua.
Liukenevuus ja kirkkaus
Tässä esitetään erityisesti OVD:n koostumuksia, joissa OVD-proteiini säilyy liukenevana koostumuksessa. Minkä tahansa tässä kuvatun koostumuksen joissakin suoritusmuodoissa proteiinit ovat täysin liukenevia proteiinikonsentraationa, joka on TOVD:n pienimpien määrien (esim. 0,1 g tai vähemmän) ja kasvavien määrien välillä aina noin 30 tai 40 grammaan rOVD-proteiinia per 100 mL liuosta asti. Minkä tahansa tässä kuvatun koostumuksen joissakin suoritusmuodoissa proteiinit ovat täysin liukenevia konsentraationa, joka on noin 1, 2, 5, 7, 10, 12 tai & 15 g kokonais-OVD-proteiinia per 100 mL:n tilavuus,
N esimerkiksi formuloituna nesteeseen kuten veteen. Minkä 3 30 tahansa tässä kuvatun koostumuksen joissakin
N suoritusmuodoissa proteiinit ovat täysin liukenevia = konsentraationa, joka on noin 15, noin 20, noin 25,
N noin 30, tai noin 40 g kokonais-OVD-proteiinia per 100
S mL:n tilavuus, esimerkiksi formuloituna nesteeseen 2 35 kuten veteen. Tässä esitetyissä koostumuksissa OVD voi
N olla natiivi OVD tai rekombinantti OVD. Joissakin suoritusmuodoissa OVD on eristetty frekombinantti proteiini. Joissakin suoritusmuodoissa OVD on rOVD, jossa on modifioitu glykosylaatio, kuten jossa on yksi tai useampi asparagiinitähde, joka on modifioitu N- asetyyliglukosamiinilla, ja jossa ei ole olennaisesti
N-kiinnittynyttä mannosylaatiota.
TOVD:n liukenevuus voidaan mitata monenlaisilla tekniikoilla kuten visuaalisella havainnoinnilla ja mittaamalla liuoksen absorbanssi aallonpituudella 600 nm (0D600) . Joissakin suoritusmuodoissa tässä kuvatulla liuenneella proteiinikoostumuksella on absorbanssi, joka on pienempi kuin 1 (<1) mitattuna 600 nm:n aallonpituudella. Joissakin suoritusmuodoissa tässä kuvatuilla liuenneilla rOVD-koostumuksilla on havaittu mitattu transmittanssi 600 nm:ssä, joka on suurempi kuin noin 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % tai 99 %. Joissakin — suoritusmuodoissa rOVD:n lisääminen koostumukseen ei muuta tai muuttaa vain vähän 0D600-mittausta verrattuna koostumukseen ilman rOVD: ta.
Joissakin suoritusmuodoissa rOVD:n lisääminen koostumukseen voi nostaa 0OD600-mittausta verrattuna koostumukseen ilman rOVD:tä ja nousu on vähemmän kuin mitä nähtäisiin lisättäessä toista proteiinia, kuten heraproteiinia tai natiivia 0OVD:tä, jota lisätään koostumukseen sama määrä.
Joissakin suoritusmuodoissa TOVD:n lisäämisellä koostumukseen saadaan parempi liukenevuus & kuin heraproteiinilla tai natiivilla OVD:ll1ä,
N verrattaessa samana proteiinikonsentraationa ja 3 30 vastaavissa olosuhteissa (kuten pH ja
N lämpötilakäsittely). Joissakin suoritusmuodoissa rOVD:n = lisäämisellä koostumukseen saadaan parempi liukenevuus
N kuin heraproteiinilla tai natiivilla OVD:llä
S verrattaessa samana proteiinikonsentraationa ja 2 35 koostumus on nautittavissa oleva elintarvikekoostumus
N kuten aineosa tai valmis tuote.
“Kirkas” tai "kirkkaus” tässä käytettynä tarkoittaa sameuden puuttumista. Kirkkaus voidaan arvioida visuaalisella havainnoinnilla, kuten vertaamalla liuokseen, jossa ei ole proteiinia.
Tällaisia vertailuja voi suorittaa kone, yksittäinen henkilö tai testaajien raati, esim. testaajat, jotka on koulutettu kirkkauden havaitsemiseen. Liuoksen kirkkautta voi testata raati (vähintään 3, 5, 7, 10, tai 12 henkilöä) tai ihmiset, jotka hallitsevat tällaiset testit. Edullisesti vähintään enemmistö testaajista voi olla kykenemättömiä erottamaan silmämääräisesti rOVD- koostumusta liuoksesta, joka ei käsitä proteiinia, tai joka käsittää eri proteiinia samana konsentraationa.
Joissakin suoritusmuodoissa TOVD- koostumuksilla on parempi kirkkaus verrattuna koostumukseen ja muihin koostumuksiin, joissa on toista proteiinia vastaavana konsentraationa, kuten koostumukseen, joka sisältää herneproteiinia, heraisolaatteja tai heraproteiinia, natiiveja munanvalkuaisproteiineja (esim. nOVD) , tai kokomunanvalkuaista. Joissakin suoritusmuodoissa vähintään enemmistö tai useampi testaajista voi olla kykenemättömiä erottamaan silmämääräisesti koostumukseen lisättyä rOVD:tä liuoksesta, joka ei käsitä proteiinia.
Kirkas liuos voi olla värillinen tai voi olla väritön. Joissakin suoritusmuodoissa koostumuksessa & olevasta liuenneesta rOVD-proteiinista voi puuttua
N väriä mitattuna vähemmän kuin 0,15 absorbanssilla 3 30 aallonpituuksilla 350 nm = 850 nm. Joissakin
N suoritusmuodoissa koostumuksessa oleva liuennut rOVD- = proteiini voi aikaansaada värin kuten keltainen, vihreä
N tai ruskea tai niiden sävyjä nautittavissa olevaan
S elintarvikekoostumukseen. Joissakin tapauksissa rOVD 2 35 ja/tai liuennut rOVD-proteiini voi olla käsitelty
N hapettavalla aineella tai happea tuottavalla aineella liuoksen värin muuttamiseksi vaaleammaksi tai vähemmän voimakkaaksi väriksi.
Joissakin suoritusmuodoissa rOVD:n koostumus liuoksessa, kuten nestemäisessä nautittavissa olevassa elintarvikekoostumuksessa, on olennaisesti kirkas proteiinikonsentraationa, joka on rOVD:n pienimpien määrien (esim. 0,1 g) ja kasvavien määrien välillä aina noin 30 grammaan rOVD-proteiinia per 100 mL liuosta asti. Joissakin suoritusmuodoissa frTOVD:n koostumus liuoksessa, kuten nestemäisessä nautittavissa olevassa elintarvikekoostumuksessa, on olennaisesti kirkas suurena proteiinikonsentraationa, joka on noin 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 tai 30 grammaa rOVD-proteiinia per 100 mL liuosta. Joissakin suoritusmuodoissa rOVD-koostumus on olennaisesti kirkas vähintään noin 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, tai 30 g:lla kokonais-rOVD-proteiinia per 100 mL liuosta (esim. kuten 100 mL:ssa vettä).
Joissakin suoritusmuodoissa TOVD- koostumuksella on parempi kirkkaus kuin heraproteiinilla, kuten heraproteiini-isolaatilla tai heraproteiinikonsentraatilla, verrattaessa samana proteiinikonsentraationa ja vastaavissa olosuhteissa (kuten pH ja lämpötila). Joissakin suoritusmuodoissa rOVD-koostumuksella on parempi kirkkaus kuin heraproteiinilla verrattaessa samana
N proteiinikonsentraationa ja TOVD-koostumus on
N nautittavissa olevan elintarvikekoostumuksen kuten 3 30 valmiin tuotteen komponentti tai aineosana valmiissa
N tuotteessa. = Joissakin suoritusmuodoissa rOVD-
N koostumuksella on parempi kirkkaus kuin natiivilla
S OVD: 1lä (NOVD) verrattaessa samana 2 35 proteiinikonsentraationa ja vastaavissa olosuhteissa
N (kuten pH ja lämpötila). Joissakin suoritusmuodoissa
TOVD-koostumuksella on parempi kirkkaus kuin nOVD-
koostumuksella verrattaessa samana proteiinikonsentraationa ja TOVD-koostumus on nautittavissa olevan elintarvikekoostumuksen kuten valmiin tuotteen komponentti tai aineosana valmiissa tuotteessa.
Joissakin tässä esitetyissä suoritusmuodoissa
TOVD:n koostumuksella on sekä olennainen liukenevuus että se on olennaisesti kirkas konsentraatioina, jotka ovat vähintään noin 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 g tai enemmän kuin 30 g kokonais-rOVD-proteiinia per 100 mL liuosta (esim. kuten 100 mL:ssa vettä).
Joissakin tapauksissa rOVD säilyy liukenevana ja kirkkaana nautittavissa olevassa koostumuksessa, kun koostumus kuumennetaan lämpötilaan, joka on suurempi kuin 50 °C, 60 °C, tai 70 °C tai noin 70 °C - noin 120 °C, jopa silloin kun rOVD on konsentraationa, joka on vähintään 2 3, 4 %, 10 %, 20, 30 %, 40 %, tai 50 % p/t.
Yhdessä tapauksessa tässä esitetyn nautittavissa olevan koostumuksen kirkkaus määritetään käyttämällä näkyvän valon absorbanssia, kuten mittaamalla liuoksen absorbanssi aallonpituudella 600 nm (0D600). Edullisesti tässä esitetyllä nestemäisellä tai puolinestemäisellä nautittavissa olevalla koostumuksella on absorbanssi, joka on pienempi kuin 1,2, 1,1, 1, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,1, 0,09, 0,08, 0,07, 0,06, 0,05 tai 0,04 määritettynä käyttämällä näkyvää & valoa 600 nm:ssa. Muita menetelmiä liukenevuuden
N mittaamiseksi ovat liukenevuuden tutkiminen 3 30 sentrifugikonsentraatiolla Ja sen jälkeen
N proteiinikonsentraatiomäärityksillä kuten Coomassie = Plus (Bradford) Protein Assay (Thermo Scientific) ja
N Bicinchoninic Acid (BCA) Protein Assay (Sigma-Aldrich).
S Joissakin tapauksissa nautittavissa olevan 2 35 — koostumuksen kirkkaus ei eroa olennaisesti liuoksen
N kirkkaudesta ennen rOVD:n lisäämistä. Esimerkiksi
TOVD:n lisääminen liuokseen (nautittavissa olevaan koostumukseen) ei muuta tai ei olennaisesti muuta (muutos on pienempi kuin 0,03, 0,02, 0,01) 0D600- mittausta verrattuna koostumukseen ilman rOVD:tä.
Siten TOVD:tä käsittävällä nautittavissa olevalla koostumuksella voi olla kirkkaus, joka on pienempi kuin 2 mitattuna 0D600:lla huoneenlämpötilassa, jossa rOVD:n konsentraatio on vähintään tai noin 10 3, 15 3, 20 %3, 25 %, tai 30 % rOvVD: ta paino/kokonaispaino (p/P) ja/tai paino/kokonaistilavuus (p/t). Vaihtoehtoisesti liuoksella, joka käsittää rOVD: tad konsentraationa, joka on suurempi kuin 10 % p/p tai p/t, voi olla kirkkaus, joka on pienempi kuin 2, 1,8, 1,6, 1,4, 1,2, 1, 0,8, 0,6, 0,4, 0,2, 0,1, 0,08, 0,06, 0,04 tai 0,02 mitattuna
OD 600:lla huoneenlämpötilassa. Olennaisesti optisesti kirkkaalla liuoksella voidaan tarkoittaa liuosta, jossa 0D600-mittaus on pienempi tai yhtä suuri kuin noin 0,1.
Joissakin tapauksissa olennaisesti optisesti kirkkaalla liuoksella on OD600-mittaus, joka on pienempi kuin 0,08, 0,06, 0,05 tai 0,02.
Joissakin suoritusmuodoissa rOVD:n lisääminen nostaa proteiinikonsentraatiota vähintään 1 3, 2 %, 3 %3, 4 %, 5 3, 6%, 7 3, 8%, I 3, 10 %, 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 3, 16 3, 17 %, 18 %, 19 % tai 20 % paino/kokonaispaino (p/p) ja/tai paino/kokonaistilavuus (p/t) vähentämättä kirkkautta tai lisäämättä sameutta enempää kuin 1 3, 2 %, 3 3, 4 3, 5 3, 6 3, 7 %, 8 %, 9 & %, tai 10 % p/p tai p/t liuoksesta verrattuna liuokseen
N ennen rOVD:n lisäämistä. 3 30 Joissakin suoritusmuodoissa rOVD-proteiinia
N voidaan lisätä määränä (kuten prosenttiosuutena = nautittavissa olevan elintarvikekoostumuksen
N kokonaispainosta tai -tilavuudesta), joka on suurempi
S kuin mitä pystyttäisiin lisäämään muilla syötävissä
Q 35 tuotteissa käytetyillä proteiininlähteillä kuten
N heraproteiineilla (kuten heraproteiini-isolaatilla (WPI) ja heraproteiinikonsentraatilla (WPC)), kaikilla herneproteiinin, soijaproteiinin, kokomuna- tai munanvalkuaisproteiinien suoritusmuodoilla (esim. natiivilla OVD:llä), säilyttäen edelleen koostumuksen liukenevuus-, tai liukenevuus- ja kirkkausominaisuudet.
Aistineutraalius ja parannettu aistimuksellinen miellyttävyys
Joissakin suoritusmuodoissa kasvaneen proteiiniravintosisällön lisäksi rTOVD:n lisääminen nautittavissa olevaan elintarvikekoostumukseen saa aikaan aistineutraaliuden tai parannetun aistimuksellisen miellyttävyyden verrattuna muihin proteiineihin tällaisissa koostumuksissa. Tässä käytettynä "aistineutraalius” tarkoittaa voimakkaan tai erottuvan maun, tuoksun (hajun) tai maun ja hajun yhdistelmän, sekä tekstuurin, suutuntuman, jälkimaun ja värin puuttumista. Aistiarviointiraatina, kuten julkaisussa Kemp et al. 2009 kuvattuna raatina, voidaan käyttää koulutettujen analysoijien raatia.
Aistineutraalius voi aikaansaada parannetun aistimuksellisen miellyttävyyden maistajalle, kuten elintarvikkeiden testaajalle tai kuluttajalle, kun
TOVD:tä sisältävää nautittavissa olevaa elintarvikekoostumusta ja toista vastaavaa koostumusta, jossa on eri proteiinia kuten heraproteiinia, herneproteiinia, soijaproteiinia, kokomuna- tai munanvalkuaisproteiinia samana konsentraationa. & Joissakin suoritusmuodoissa nautittavissa
N olevaan elintarvikekoostumukseen lisätty TOVD on 3 30 olennaisesti hajuton, kuten koulutetun
N aistiarviointiraadin mittaamana, verrattuna erilaisiin = liuoksiin, joissa on läsnä eri proteiinikomponenttia
N vastaavana konsentraationa kuin rTOVD:tä sisältävässä
S liuoksessa, esimerkiksi verrattuna heran, soijan, 2 35 kollageenin, herneen, munanvalkuaisen kiinteisiin x isolaatteihin ja/tai natiiviin OVD:hen. Tässä > kuvattujen TOVD-koostumusten joissakin suoritusmuodoissa tällaiset koostumukset ovat olennaisesti hajuttomia proteiinikonsentraationa, joka on noin 5-10 %, 1015 %, 15-20 %, 20-25 %, 25-30 % tai enemmän kuin 30 % rTOVD:tä paino/kokonaispaino (p/p) ja/tai paino/kokonaistilavuus (p/t) tai proteiinikonsentraationa, joka on noin 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 tai enemmän kuin 30 g kokonais-rOVD- proteiinia per 100 mL liuosta (esim. per 100 mL vettä).
Joissakin suoritusmuodoissa rOVD:n lisääminen nautittavissa olevaan elintarvikekoostumukseen saa aikaan myös neutraalin maun sellaisten ominaisuuksien lisäksi kuten kasvanut proteiiniravintosisältö, liukenevuus, kirkkaus, ja/tai hajuttomuus. Neutraali maku voidaan mitata esimerkiksi käyttämällä koulutettua aistiarviointiraatia verrattuna liuoksiin, jotka sisältävät eri proteiinia, jota on läsnä vastaavana konsentraationa kuin rOvVD:tä, esimerkiksi heran, soijan, kollageenin, herneen, kokomunaan, ja kananmunanvalkuaisen kiinteät isolaatit (mukaan lukien natiivi OVD).
Joissakin suoritusmuodoissa rOVD:n lisääminen saa aikaan muihin lisäravinteissa käytettyihin proteiineihin yhdistetyn tietyn hajun ja/tai maun vähenemisen. Esimerkiksi rTOVD:n lisäämisellä saadaan vähemmän "munamainen” haju tai maku verrattuna kokomunan, fraktioidun munan tai munanvalkuaisen
N lisäämiseen nautittavissa olevaan
N elintarvikekoostumukseen. Joissakin suoritusmuodoissa 3 30 rOVD:n lisäämisellä on vähemmän metallinen haju tai maku
N verrattuna muihin proteiininlähteisiin. = Joissakin suoritusmuodoissa TOVD:n
N lisäämisellä on parannettu suutuntuma verrattuna muiden
S proteiininlähteiden lisäämiseen. Esimerkiksi rOVD:n 2 35 lisääminen on vähemmän rakeista tai siinä on vähemmän
N sakkaa tai kiinteitä aineita verrattuna muihin > proteiininlähteisiin.
Joissakin suoritusmuodoissa TOVD:n lisäämisellä on parempi tekstuuri, esimerkiksi verrattuna muihin saatavilla oleviin lisäproteiininlähteisiin.
Joissakin suoritusmuodoissa TOVD:n lisäämisellä on parempi tai miellyttävä väri tai visuaalinen miellyttävyys verrattuna muihin saatavilla oleviin lisäproteiininlähteisiin. Esimerkiksi fTOVD:n lisääminen voi säilyttää nesteen (kuten hiilihapotetun juoman, proteiiniveden, urheilujuoman) kirkkauden ja saada aikaan visuaalista miellyttävyyttä kuluttajalle. rOVD:tä sisältävällä nautittavissa olevalla koostumuksella voi olla myös parannettu aistimuksellinen miellyttävyys verrattuna koostumukseen, jossa ei ole rOVD:ta tai jossa on läsnä eri proteiinia vastaavana konsentraationa kuin rOVD:ta.
Tällainen parannettu aistimuksellinen miellyttävyys voi liittyä makuun ja/tai hajuun. Makua ja hajua voidaan mitata esimerkiksi koulutetun aistiarviointiraadin avulla. Joissakin tapauksissa aistiarviointiraati vertaa TOVD:tä sisältävää nautittavissa olevaa koostumusta koostumukseen, jossa ei ole sitä tai jossa on eri proteiinia vastaavana määränä.
Kuten tässä on kuvattu, tässä esitetty nautittavissa oleva koostumus voi olla nestemäisessä muodossa. Nestemäinen muoto voi olla välituote kuten liukenevan TOVD:n liuos. Joissakin tapauksissa & nestemäinen muoto voi olla lopullinen tuote, kuten
N rTOvVD:tä käsittävä juoma. Esimerkkejä tässä 3 30 mahdollisista erityyppisistä juomista ovat: mehu, a, virvoitusjuoma, limonadi, maustettu vesi, = proteiinivesi, vahvistettu vesi, hiilihapotettu vesi,
N ravitsemuksellinen juoma, energiajuoma, urheilujuoma,
S palautusjuoma, kuumennettu juoma, kahvipohjainen juoma, 2 35 teepohjainen juoma, kasvipohjainen maito,
N maitopohjainen juoma, maitoa sisältämätön,
kasvipohjainen maitojuoma, äidinmaidonkorvikejuoma, ja ateriankorvikejuoma.
Ei-rajoittavia esimerkkejä mehujuomista ovat
Odwalla®, Naked®, ja MinuteMaid&.
Ei-rajoittavia esimerkkejä virvoitusjuomista ovat: Coca-Cola&, Pepsi&, Sprite® ja 7Up®.
Ei-rajoittavia esimerkkejä palautusjuomista ovat Gatorade™, Pedialyte&, Powerade® ja Propel®.
Ei-rajoittavia esimerkkejä energiajuomasta ovat Red Bull™, Monster™, Full Throttle&, AMP®,
Rockstar®, Bangrm, Reignm, Nose, Venom®, ja energiashotit kuten 5-Hour Energy™.
Muita esimerkkejä nestemäisessä muodossa olevista lopullisista tuotteista ovat liemi, keitto ja nestemäinen elintarvike.
Nestemäinen muoto voi olla kylmä juoma, kuuma tai lämmin juoma, tai huoneenlämpöinen juoma
Mikä tahansa tässä esitetyistä nestemäisistä muodoista voi olla hiilihapotettu. Hiilihapotus voidaan saada aikaan käyttämällä mitä tahansa turvallista kaasua kuten hiilidioksidia.
Eräässä suoritusmuodossa nautittavissa oleva koostumus on kivennäisvesi (kuten San Pellegrinom) ja siinä on 0,5 - 30 % p/p tai p/t rovD:tä. Tällaisen tuotteen OD 600 on pienempi kuin 0,2, edullisesti pienempi kuin 0,15, ja se säilyy olennaisesti värittömänä, hajuttomana ja mauttomana. & Eräässä suoritusmuodossa nautittavissa oleva
N koostumus on virvoitusjuoma (kuten Diet Cokerm, Pepsim, 3 30 Cokem) ja siinä on 0,5 - 30 % p/p tai p/t rovD:tä. a, Tällainen tuote säilyttää aistiprofiilin (maku, tuoksu, = haju ja kirkkaus), joka on verrattavissa koostumukseen,
N johon ei ole lisätty roVD:tä.
S Joissakin suoritusmuodoissa nautittavissa 2 35 oleva koostumus on puolikiinteässä muodossa.
N Esimerkkejä puolikiinteistä nautittavissa olevista koostumuksista ovat: hyytelö, makeinen, liemi, keitto,
siirappi, gelatiinia sisältävä tuote, geeliytetty tuote, ja purukumituote, tai niiden yhdistelmä.
Yhteensopivuus muiden aineosien kanssa
Tässä esitetään TOVD:tä sisältäviä koostumuksia, jossa TOVD on yhteensopiva yhden tai useamman muun aineosan kanssa, joita aineosia käytetään nautittavissa olevan elintarvikekoostumuksen, mukaan lukien valmiin tuotteen, valmistuksessa. Tällainen yhteensopivuus aikaansaa proteiinisisällön vahvistuksen nautittavissa olevaan elintarvikekoostumukseen, ja samalla säilyttää nautittavissa olevan elintarvikekoostumuksen yhden tai useamman halutun ominaisuuden.
Joissakin suoritusmuodoissa TOVD on yhteensopiva gluteenia sisältävien aineosien Kanssa.
Esimerkiksi rOVD:tä voidaan lisätä gluteenia sisältävän aineosan kanssa proteiinivahvistuksen aikaansaamiseksi ja aineosan ja/tai valmiin tuotteen tarvitseman gluteenirakenteen säilyttämiseksi. Esimerkiksi rOVD:ta voidaan käyttää aineosana proteiinivahvistettujen paistettujen tuotteiden, leivän, keksin, voileipäkeksin, pikkuleivän, pakastetun maitotuotteen, pakastetun "maidonkaltaisen” tuotteen, valmisaterian, lihatuotteen, lihattoman tuotteen, hampurilaisen, jauhelihapihvin, proteiinilisän, välipalapatukan, proteiinipatukan, ravintopatukan, energiapatukan,
N jälkiruoan, salaattikastikkeen, voitelumunatuotteen,
N tai "munankaltaisen” tuotteen, leivonnaisten, kakkujen 3 30 ja nuudelien valmistamiseksi. Valmiissa tuotteessa rOVD
N ei olennaisesti häiritse gluteenirakennetta tai = häiritsee olennaisesti vähemmän gluteenirakennetta
N verrattuna muihin proteiininlähteisiin.
S Joissakin suoritusmuodoissa TOVD on 2 35 — yhteensopiva gluteenittomien aineosien kanssa.
N Esimerkiksi rOVD:tä voidaan lisätä gluteenittoman aineosaseoksen kanssa proteiinivahvistuksen aikaansaamiseksi ja rakenteen ja/tai tekstuurin aikaansaamiseksi valmiiseen tuotteeseen. Gluteenittomia aineosia ja valmiita tuotteita ovat tällaiset viljat ja tärkkelykset (riisi, maissi, durra, ja muut viljakasvit), juurimukulat kuten peruna, ja palkokasvit ja palkokasvin siemenet kuten kikherneet ja linssit.
Esimerkiksi rTOvVD:tä voidaan käyttää aineosana proteiinivahvistettujen gluteenittomien tuotteiden mukaan lukien paistettujen tuotteiden, leivän, keksin, voileipäkeksin, pikkuleivän, pakastetun maitotuotteen, pakastetun "maidonkaltaisen” tuotteen, valmisaterian, lihatuotteen, lihattoman tuotteen, hampurilaisen, jauhelihapihvin, proteiinilisän, välipalapatukan, proteiinipatukan, ravintopatukan, energiapatukan, jälkiruoan, tai "munankaltaisen” tuotteen, leivonnaisten, kakkujen ja nuudelien valmistamiseksi.
Joissakin suoritusmuodoissa TOVD on yhteensopiva suolojen kanssa, niin että rOVD-proteiini ei saostu liuoksesta. Esimerkiksi käytettäessä ruoissa ja juomissa kuten proteiinismoothieissa, vegaanisessa maidossa ja hedelmämehuissa, jotka on vahvistettu rOVD:llä, proteiini säilyy olennaisesti liuoksessa.
Lisättäessä rOVD ei saostu vitamiinilla/kivennäisellä vahvistetussa ympäristössä kuten hedelmämehussa ja mehunkaltaisissa tuotteissa, ja rOVD saa aikaan korkeamman proteiinisisällön ja ravintosisällön. & rOVD:n yhdistelmät toisen aminohappojen
N lähteen kanssa 3 30 Joissakin suoritusmuodoissa rOVD:ta lisätään
N nautittavissa olevaan elintarvikekoostumukseen ja = lisätään toinen aminohappojen lähde, niin että
N yhdistelmällä on korkeampi proteiinisisaltd ja se
S aikaansaa aminohapposisällön halutun määrän tai 2 35 tasapainon. Joissakin suoritusmuodoissa toinen
N aminohappojen lähde on toinen proteiini (joko natiivi proteiini tai rekombinantti proteiini). Joissakin suoritusmuodoissa toinen aminohappojen lähde saadaan aikaan lisäämällä yhtä tai useampaa vapaata aminohappoa.
Joissakin suoritusmuodoissa rOVD:tä lisätään nautittavissa olevaan elintarvikekoostumukseen ja lisätään toista proteiinia, niin että yhdistelmällä on korkeampi proteiinisisältö ja se aikaansaa aminohapposisällön halutun määrän tai tasapainon.
Joissakin suoritusmuodoissa toinen proteiini on rekombinantti proteiini. Joissakin suoritusmuodoissa toinen proteiini on natiivi proteiini, esim. eristetty sen natiivista lähteestä.
Koostumusten proteiinisisältö voidaan mitata erilaisilla menetelmillä kuten proteiinin sulavuudella korjatun aminohappopistemäärän (PDCAAS) menetelmällä.
PDCAAS tarkoittaa menetelmää ihmisen ravinnossa olevan proteiiniarvon mittaamiseksi. Menetelmä perustuu testiproteiinissa olevan ensimmäisen rajoittavan välttämättömän aminohapon konsentraation vertaamiseen tämän aminohapon konsentraatioon referenssi (pisteytys) -mallissa. Menetelmä vertaa tietyn ruokaproteiinin aminohappoprofiilia standardiaminohappoprofiiliin, jossa korkein mahdollinen pistemäärä on 1,0, ja tällainen 1,0 pistemäärä tarkoittaa, että tietty ruokaproteiini aikaansaa proteiiniyksikköä kohti 100 3 tai enemmän ihmisen ravinnoksi tarvittavista välttämättömistä aminohapoista (ks. esim. FAO/WHO/UNU
Expert Consultation 1985). & Kaava PDCAAS-prosentin laskemiseksi on: (mg
N rajoittavaa aminohappoa 1 g:ssa testiproteiinia / mg 3 30 samaa aminohappoa 1 g:ssa referenssiproteiinia) x
N ulosteen todellinen sulavuusprosentti. Yli 1,0 olevat = PDCAAS-pistemäärät typistetään 1,0:aan.
N Aminohappopistemäärä (ei korjattu tai typistetty) voi
S ylittää 1,0:n.
Q 35 Joissakin suoritusmuodoissa rOVD:n ja toisen
N proteiinin yhdistelmä nostaa proteiinisisältöä ja saa aikaan PDCAAS:n, joka on suurempi kuin noin 0,75.
Joissakin suoritusmuodoissa yhdistelmä saa aikaan
PDCAAS:n, joka on tai joka on noin 0,75, 0,76, 0,77, 0,78, 0,79, 0,80, 0,81, 0,82, 0,83, 0,84, 0,85, 0,86, 0,87, 0,88, 0,89, 0,90, 0,91, 0,92, 0,93, 0,94, 0,95, 0,96, 0,97, 0,98, 0,99 tai 1,0. Joissakin suoritusmuodoissa yhdistelmä saa aikaan PDCAAS:n, joka on suurempi kuin tai joka on suurempi kuin noin 0,75, 0,76, 0,77, 0,78, 0,79, 0,80, 0,81, 0,82, 0,83, 0,84, 0,85, 0,86, 0,87, 0,88, 0,89, 0,90, 0,91, 0,92, 0,93, 0,94, tai 0,95. Joissakin suoritusmuodoissa yhdistelmä saa aikaan PDCAAS:n, joka on tai joka on noin 1,0.
Joissakin suoritusmuodoissa rOVD:n ja toisen proteiinin suhde on valittu aikaansaamaan PDCAAS, joka on vähintään noin 0,75, ja jossa rOVD:n ja toisen proteiinin yhdistelmä säilyy liukenevana nautittavissa olevassa elintarvikekoostumuksessa. Tässä esitetyn
TOVD:n ja toisen proteiinin yhdistelmän joissakin suoritusmuodoissa rOVD:td on läsnä yhdistelmässä määrä, joka on tai joka on noin 95 %, 90 %, 89 %, 88 %, 87 %, 86 %, 85 %, 84 %, 83 3, 82 %, 81 %, 80 %, 79 %, 78 %, 77%, 76 %, 75 %, 74 %, 73 %, 72 %, 71 %, tai 70 3 paino/kokonaispaino (p/p) ja/tai paino/kokonaistilavuus (p/t). Tässä esitetyn rOVD:n ja toisen proteiinin yhdistelmän joissakin suoritusmuodoissa rTOVD:tä on läsnä yhdistelmässä määrä, joka on tai joka on noin 69 %, 78 %, 67 %, 66 %, 65 3, 64 %, 63 3, 62 %, 61 %, 60 %, 59 3, 58 %, 57 %, 56 3, 55 %, 54 3, 53 %, 52 %, 51 & %, tai 50 % p/p tai p/t. rOVD:n ja toisen proteiinin
N yhdistelmän joissakin suoritusmuodoissa rTOVD:tä on 3 30 läsnä yhdistelmässä prosenttiosuutena
N kokonaisproteiinista vähintään tai vähintään noin 60 %, = 65 %, 70 %, 75 %, 80 % tai enemmän kuin 80 % p/p tai
N p/t. Tässä esitetyn rOVD:n ja toisen proteiinin
S yhdistelmän joissakin suoritusmuodoissa toista 2 35 proteiinia on läsnä yhdistelmässä yllä mainittuna
N prosenttiosuutena, niin että rOVD:tä on pienempi määrä kuin toista proteiinia.
Joissakin suoritusmuodoissa toinen proteiini on valittu sen aminohappokoostumuksen perusteella.
Joissakin suoritusmuodoissa toinen proteiini tuottaa tryptofaania koostumukseen. Joissakin suoritusmuodoissa toinen proteiini tuottaa tryptofaania siten, että yhdistelmällä rOVD:n kanssa on tryptofaanisisältö, joka on vähintään noin 1,7 g per 100 g kokonaisproteiinia.
Joissakin suoritusmuodoissa toinen proteiini on lysotsyymi. Joissakin suoritusmuodoissa toinen proteiini on munanvalkuaisen lysotsyymi. Joissakin suoritusmuodoissa toinen proteiini on rekombinantti proteiini. Joissakin suoritusmuodoissa toinen proteiini on rekombinantti munanvalkuaislysotsyymi (rOVL).
TOVD ja rOVL voidaan prosessoida yhdessä tai sekoittaa yhteen ennen sekoittamista minkään muiden elintarvikeaineosien tai nautittavissa olevien elintarviketuotteiden kanssa. Vaihtoehtoisesti joko rTOVD tai rOVL voidaan prosessoida tai sekoittaa yksinään, joka samanaikaisesti tai erikseen, minkä tahansa muiden elintarvikeaineosien tai nautittavissa olevien elintarviketuotteiden kanssa. Suoritusmuodoissa yksi transformoitu solu ilmentää sekä rTOVL:ää että rovD: ta.
Joissakin suoritusmuodoissa toinen proteiini on rOVL ja rTOVD:n ja rOVL:n yhdistelmä saa aikaan proteiinivahvistuksen säilyen samalla liukenevana koostumuksessa ja saaden aikaan PDCAAS:n, joka on noin & 1,0. rOVD:n suhde rOVL:ään voi olla noin 60 % rOVD:40 %
N rOVL - noin 82 % rOVD:18 % TOVI, tai noin 75 % rOVD:25 3 30 % rOVL - noin 82 % rOVD:18 % rOVL paino/kokonaispaino
N (p/p) ja/tai paino/kokonaistilavuus (p/t). = Natiivin OVD:n PDCAAS on noin 0,02. rOVL:n
N lisääminen rOVD: hen nostaa yhdistelmän
S aminohappopistemäärää ja PDCAAS:ää. Esimerkiksi seos, 2 35 jossa on 78,3 % rovVD:tä ja 21,7 % rOVL:ää saa aikaan
N aminohappopistemäärän, joka on 0,86, ja PDCAAS:n, joka on 0,79. rOVD:n ja rOVL:n välinen suhde, joka on noin
78,3 % rO0VD:tä + 21,7 % roVL:ää — noin 60 % rOVD:ta + 40 % rTOVL:ää, saa aikaan aminohappopistemäärän, joka on alueella 0,86 -— 1,06. Näillä esimerkinomaisilla alueilla rOVD:n Ja rOVL:n yhdistelmä säilyy liukenevana.
Joissakin suoritusmuodoissa nautittavissa oleva koostumus käsittää rTOVD:n ja rOVL:n proteiiniseoksen. Joissakin tapauksissa rOVD:n ja rOVL:n seoksen käsittävässä koostumuksessa on noin 20 3 — 99 % rovD:tä ja 1 - 20 % rOVL:aa. Joissakin esimerkeissä TOVD:n konsentraatio rOVD:n ja rOVL:n proteiiniseoksessa voi olla vähintään 20 %. rOVD:n konsentraatio rOVD:n ja rOVL:n proteiiniseoksessa voi olla korkeintaan 99 %. rOVD:n konsentraatio rOVD:n ja rOVL:n proteiiniseoksessa voi olla noin 20 % - 30 %, %$ — 40 %, 20 $ — 50 3, 20 3 — 60 %, 20 3 - 70 %, 20 % — 80 3, 20 3 - 90 3, 20 3 — 99 3, 30 % — 40 %, 30 % - 50 %, 30 3 - 60 3, 30 3 - 70 3, 30 %$ - 80 3, 30 % - 90 %, 30 3 - 99 3, 40 3 - 50 %, 40 %$ — 60 %, 40 % — 70 20 %, 40 % - 80 %, 40 % — 90 3, 40 % — 99 3, 50 % - 60 %, 50 %$ - 70 %, 50 % - 80 3, 50 3 - 90 %, 50 % - 99 %, 60 % — 70 3, 60 3 - 80 %, 60 3 — 90 3, 60 % - 99 %, 70 % - 80 %, 70 3 — 90 %, 70 % - 99 3, 80 % - 90 %, 80 % - 99 2%, tai 90 % - 99 % paino/kokonaispaino (p/p) ja/tai paino/kokonaistilavuus (p/t). r0VD:n konsentraatio
TOVD:n ja rOVL:n proteiiniseoksessa voi olla noin 20 %, 30 %, 40 %, 50 3, 60 3, 70 %, 80 %, 90 %, tai 99 % & p/p tai p/t. rovVL:n konsentraatio rOVD:n ja rOVL:n
N proteiiniseoksessa voi olla 1 3 - 20 %. rOVL:n 3 30 konsentraatio rOVD:n ja rOVL:n proteiiniseoksessa voi
N olla vähintään 1 %. rOVL:n konsentraatio rOVD:n ja = rOVL:n proteiiniseoksessa voi olla korkeintaan 20 3.
N rOVL:n konsentraatio rOvVD:n ja rOVL:n
S proteiiniseoksessa voi olla 1 % - 5 %9, 1 % - 10 3, 1 % 2 35 —-— 15 3, 1 % - 20%, 5% - 10 3, 5% - 15 3, 5 % - 20 %,
N 10 %2 - 15 %, 10 % - 20 3, tai 15 % - 20 % p/p tai p/t. rOVL:n konsentraatio rOvVD:n ja rOVL:n proteiiniseoksessa voi olla noin 1 %, 5 3, 10 %, 15 %, tai 20 % p/p tai p/t.
Joissakin suoritusmuodoissa rOVD ja toinen proteiini saavat aikaan PDCAAS:n, joka on samankaltainen kuin muilla proteiininlähteillä kuten heraproteiinilla ja heraproteiini-isolaatilla, ja rOVD ja toinen proteiini saavat aikaan vähintään yhden ominaisuuden, joka on parannettu verrattuna muuhun proteiininlähteeseen, mukaan lukien liukenevuus, kirkkaus, aistineutraalius tai parempi maku ja/tai haju, parempi suutuntuma, ja yhteensopivuus muun aineosan kanssa. Joissakin suoritusmuodoissa TOVD ja toinen proteiini saavat aikaan PDCAAS:n, joka on samankaltainen kuin muilla proteiininlähteillä, ja saavat aikaan parannetun liukenevuuden ja kirkkauden elintarvikkeen valmistus- ja prosessointiolosuhteissa, kuten pH, kuumennus ja hiilihapottaminen.
Joissakin = suoritusmuodoissa rOVD:n kanssa lisättävä toinen aminohappojen lähde on yksi tai useampi vapaa aminohappo. Joissakin suoritusmuodoissa rOVD voidaan yhdistää vapaiden aminohappojen kuten tryptofaanin, isoleusiinin, leusiinin ja valiinin kanssa PDCAAS:n nostamiseksi valikoivasti. Joissakin suoritusmuodoissa yhden tai useamman vapaan aminohapon lisääminen saa aikaan aminohappotasapainon, joka on samankaltainen kuin lisättäessä toista proteiinia, kuten samankaltainen kuin PDCAAS, joka saavutetaan & lisäämällä £rOVL:ää. Esimerkiksi yksi tai useampi
N seuraavista voidaan lisätä rOVD:n kanssa: Tryptofaani = 3 30 1,7 9g/100 g näytettä, Isoleusiini = 2,03 g/100 g
N näytettä, Leusiini = 4,55 g/100 g näytettä, Valiini = x 4,94 g/100 g näytettä. = Koostumusten kuumennusolosuhteet ja pH 2 35 Joissakin suoritusmuodoissa nautittavissa
N olevat elintarvikekoostumukset ja menetelmät tällaisten koostumusten valmistamiseksi käsittävät tietyn pH-
alueen, ja tällaisella alueella rOVD säilyy liukenevana koostumuksessa. Joissakin suoritusmuodoissa pH on noin 1,0 — noin 8,0. Joissakin suoritusmuodoissa pH on noin 2,0 — noin 6,0, 6,5, tai 7,0. Joissakin suoritusmuodoissa pH on noin 2,0 - noin 2,5, noin 2,5 - noin 3,0, noin 2,5 — noin 3,5, noin 3,5 — noin 4,0, noin 2,5 — noin 4,5, noin 2,0 - noin 4,0, noin 4,0 —- noin 6,0, noin 2,0 —- noin 6,0, noin 4,0 — noin 6,5, tai noin 2,0 - noin 6,5. Joissakin suoritusmuodoissa pH on pienempi kuin 2,0, tai yhtä suuri kuin 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5 tai suurempi kuin 4,5. Tällaisella pH-arvolla tai pH-alueella rOVD säilyy liukenevana nautittavissa olevassa elintarvikekoostumuksessa, kun rOVD on valmiin tuotteen aineosa (esim. jauhettuna muotona käytettäväksi valmiissa tuotteessa) tai valmiissa tuotteessa itsessään. Tällaisella pH-arvolla tai pH-alueella rOVD säilyy liukenevana nautittavissa olevassa elintarvikekoostumuksessa vaikuttamatta koostumuksen tekstuuriin tai rakeisuuteen. Puolikiinteissä ja kiinteissä elintarvikkeissa rOVD:n liukenevuus mahdollistaa proteiinivahvistuksen vaarantamatta elintarviketuotteen funktionaalisia ja aistiominaisuuksia. Esimerkiksi rTOVD:n lisääminen saa aikaan vahvistuksen ja säilyttää aistimuksellisen miellyttävyyden kuten hyvän suutuntuman ja & rakeettomuuden. Joissakin suoritusmuodoissa rOVD:n
N lisääminen saa aikaan vahvistuksen, säilyttää 3 30 liukenevuuden ja sellaisenaan saa aikaan rOVD:n kyvyn
N sekoittua muiden aineosien kanssa. = Joissakin suoritusmuodoissa nautittavissa
N olevat elintarvikekoostumukset ja menetelmät tällaisten
S koostumusten valmistamiseksi käsittävät 2 35 —kuumennusolosuhteen. Esimerkiksi nautittavissa oleva
N elintarvikekoostumus voidaan kuumentaa (esim. paistaa pannulla, keittää, tai paistaa unissa) tai se voi olla kuuma juoma, kuten lämmin tai kuuma juoma, keitto tai liemi. Joissakin tapauksissa nautittavissa oleva elintarvikekoostumus voi käsittää kuumennusvaiheen osana valmistus- tai sterilointiprosessia aineosan tai valmiin tuotteen valmistamiseksi. Esimerkiksi kuumennusvaihe voi sisältää pastöroinnin, kuumatävytön ja/tai retorttikäsittelyn. Joissakin suoritusmuodoissa kuumennusvaihe sisältää kuumentamisen lämpötilaan, joka on noin 72 °C - noin 121 *C. Esimerkiksi kuumennusvaihe voi olla pastörointi, jossa koostumus kuumennetaan 72 °C:seen 1 minuutiksi ja sen jälkeen jäähdytetään ja varastoidaan, mukaan lukien varastointi huoneenlämpötilassa tai kylmässä. Kuumatäytössä koostumus voidaan kuumentaa 85 ©°C:seen - 95 ©°C:seen, kuten 30 sekunnin ajaksi ja sen jälkeen asettaa huoneenlämpötilaan. Retorttikäsittely voi sisältää kuumentamisen 121 oC: seen paineen alla, kuten kuumentamisen 15 minuutin ajan 19 psi:ssä, ja sen jälkeen säilyttämisen huoneenlämpötilassa.
Nautittavissa olevan koostumuksen valmistaminen voi myös sisältää yhden tai useamman kuumennusvaiheen. Kuumennusvaihe voi käsittää pastöroinnin, kuumatäytön ja/tai retorttikäsittelyn.
Joissakin suoritusmuodoissa kuumennusvaihe sisältää kuumentamisen lämpötilaan, joka on noin 70 °C — noin 150 °C.
Eräässä esimerkissä pastörointikuumennusvaihe & suoritetaan lämpötiloissa, jotka ovat alueella 70 °C -
N 100 °C. 3 30 Eräässä esimerkissä kuumatäytön kuumennusvaihe
N suoritetaan noin 90 °C:ssa — noin 97 °C:ssa. = Eräässä esimerkissä retorttikäsittely
N suoritetaan noin 100 ”C:ssa —-— noin 140 ”C:ssa.
S Retorttikäsittely voidaan suorittaa noin 10 tai useamman 2 35 minuutin ajan ja noin tai vähintään 12 psi:ssä.
N Joissakin suoritusmuodoissa rOVD:tä käsittävät nautittavissa olevat elintarvikekoostumukset ja menetelmät tällaisten koostumusten valmistamiseksi saavat aikaan suuremman proteiinin liukenevuuden tai suuremman proteiinin liukenevuuden ja parannetun kirkkauden pH-alueilla ja/tai kuumennettaessa verrattuna koostumukseen, joka sisältää eri proteiinia, kuten heraproteiinia, soijaproteiinia, herneproteiinia, kokomunaproteiinia (esim. natiivi OVD), tai kokomunanvalkuaisproteiinia samana konsentraationa.
Joissakin tapauksissa TOVD saa aikaan proteiinin liukenevuuden nautittavissa olevassa elintarvikekoostumuksessa pH-arvossa, joka on noin 2 - noin 6, rOVD:n konsentraatioina, jotka ovat noin 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 g tai enemmän kuin 30 g kokonais-
TOVD-proteiinia per 100 mL liuosta (esim. kuten 100 mL:ssa vettä) tai prosenttiosuutena, joka on noin 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 prosenttia paino per kokonaiskoostumuksen tilavuus. Joissakin tapauksissa rOVD saa aikaan proteiinin liukenevuuden ja kirkkauden nautittavissa olevassa elintarvikekoostumuksessa pH- arvossa, joka on noin 2 = noin 6, rOovD:n konsentraatioina, jotka ovat noin 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 g tai enemmän kuin 30 g kokonais-rOVD-proteiinia per 100 mL liuosta (esim. kuten 100 mL:ssa vettä) tai prosenttiosuutena, joka on noin 9, 10, 11, 12, 13, 14, & 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28,
N 29, 30 prosenttia paino per koostumuksen 3 30 kokonaistilavuus.
N Joissakin tapauksissa TOVD saa aikaan = proteiinin liukenevuuden nautittavissa olevassa
N elintarvikekoostumuksessa, kun koostumus kuumennetaan
S lämpötilaan, joka on noin 72 °C - noin 121 °C, rOVD:n 2 35 konsentraatioina, jotka ovat noin 9, 10, 11, 12, 13,
N 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 g tai enemmän kuin 30 g kokonais-rO0VD-
proteiinia per 100 mL liuosta (esim. kuten 100 mL:ssa vettä) tai prosenttiosuutena, joka on noin 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 prosenttia paino per koostumuksen kokonaistilavuus. Joissakin tapauksissa rOVD saa aikaan proteiinin liukenevuuden ja kirkkauden nautittavissa olevassa elintarvikekoostumuksessa, kun koostumus kuumennetaan lämpötilaan, joka on noin 72 °C - noin 121 °C, rOVD:n konsentraatioina, jotka ovat noin 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 g tai enemmän kuin 30 g kokonais- rOVD-proteiinia per 100 mL liuosta (esim. kuten 100 mL:ssa vettä) tai prosenttiosuutena, joka on noin 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 prosenttia paino per koostumuksen kokonaistilavuus.
Joissakin tapauksissa TOVD saa aikaan proteiinin liukenevuuden nautittavissa olevassa elintarvikekoostumuksessa, kun koostumus kuumennetaan lämpötilaan, joka on noin 72 °C - noin 121 °C, ja jossa koostumuksen pH on noin 2 - noin 4, tai pH on noin 2 - noin 6, rOVD:n konsentraatioina, jotka ovat noin 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 g tai enemmän kuin 30 g kokonais-
TOVD-proteiinia per 100 mL liuosta (esim. kuten 100 mL:ssa vettä) tai prosenttiosuutena, joka on noin 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, & 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 prosenttia paino per
N koostumuksen kokonaistilavuus. Joissakin tapauksissa 3 30 rOVD saa aikaan proteiinin liukenevuuden ja kirkkauden
N nautittavissa olevassa elintarvikekoostumuksessa, kun = koostumus kuumennetaan lämpötilaan, joka on noin 72 °C
N - noin 121 °C, ja jossa koostumuksen pH on noin 2 - noin
S 4, tai pH on noin 2 - noin 6, rOVD:n konsentraatioina, 2 35 jotka ovat noin 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18,
N 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 g tai enemmän kuin 30 g kokonais-rOVD-proteiinia per 100 mL liuosta (esim. kuten 100 mL:ssa vettä) tai prosenttiosuutena, joka on noin 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 prosenttia paino per koostumuksen kokonaistilavuus.
Nautittavissa olevat elintarvikekoostumukset
Tässä kuvatut nautittavissa olevat elintarvikekoostumukset käsittävät ruokatuotteita, juomatuotteita, ravintolisiä, elintarvikelisäaineita, ja funktionaalisia elintarvikkeita ei-rajoittavina esimerkkeinä, sekä käsittävät lisäksi koostumuksia ruoan tai juoman tai osana eläimen ruokavaliota nautittavan tuotteen aineosana. Joissakin suoritusmuodoissa nautittavissa oleva elintarvikekoostumus on valmis tuote, kuten ruoka tai juoma eläimen nautittavaksi tai ihmisen nautittavaksi, ravintolisä, tai funktionaalinen elintarviketuote.
Joissakin suoritusmuodoissa valmis tuote on juoma, joka sisältää rOvVD:tä, ja valinnaisesti toista proteiinia, kuten rOVL:ää. Juoma voi olla kirkas juoma, ja se voidaan valita seuraavista: mehu, virvoitusjuoma, limonadi, maustettu vesi, maustamaton vesi, vahvistettu vesi, hiilihapotettu vesi, ravitsemuksellinen juoma, energiajuoma, urheilujuoma, palautusjuoma, kuumennettu juoma, kahvipohjainen juoma, teepohjainen juoma, kaakaopohjainen juoma, smoothie, maitopirtelö, & kookosvesi, olut, viini, alkoholijuoma, pähkinämaidot,
N mehupohjaiset juomat, maitopohjaiset juomat, ja 3 30 kasvipohjainen maito. Monilla näistä juomista on pH,
N joka on noin 2 — noin 7, ja rOVD ja/tai rOVD:n ja toisen = proteiinin yhdistelmä säilyy liukenevana tällaisissa
N juomissa. Joissakin suoritusmuodoissa juoma on
S kuumennettu juoma. Joissakin suoritusmuodoissa juoma on 2 35 kylmä juoma tai huoneenlämpötilassa tarjottava tai
N säilytettävä juoma. Joissakin suoritusmuodoissa juoma sisältää alkoholia 3 - 40 % paino/kokonaispaino (p/p) ja/tai paino/kokonaistilavuus (p/t).
Joissakin suoritusmuodoissa juoma on hiilihapotettu. Hiilihapotus voidaan saada aikaan esimerkiksi hiilidioksidilla, hiilihapolla, natriumbikarbonaatilla, ja kaliumbikarbonaatilla. Tässä kuvattu koostumus voi olla hiilihapotettu. Joissakin tapauksissa tässä kuvatussa koostumuksessa on noin tai vähintään noin 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, tai 4 tilavuusosaa hiilidioksidikaasua per tilavuusosa juomaa. Joissakin tapauksissa tässä kuvatussa koostumuksessa on korkeintaan noin 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, tai 4 tilavuusosaa hiilidioksidikaasua per tilavuusosa juomaa. Joissakin tapauksissa tässä kuvatussa koostumuksessa on noin 0,1 tilavuusosaa — noin 4 tilavuusosaa tai noin 1,5 tilavuusosaa = noin 3,5 tilavuusosaa hiilidioksidikaasua per tilavuusosa juomaa.
Joissakin suoritusmuodoissa proteiinikoostumus voi käsittää hiilidioksidia, ja jossa liukenevaan proteiinikoostumukseen lisätyn hiilidioksidin määrä voi olla 0,01 g - 4,4 g 355 mL:ssa tai kaasumaista hiilidioksidia voi olla 0,02 tilavuusosaa - 5 tilavuusosaa liukenevan proteiinikoostumuksen jokaista 1 tilavuusosaa kohti, ja jossa juoman pH-alue voi olla noin 2 — noin 6 tai noin 2 —- noin 4. Joissakin & suoritusmuodoissa hiilihapotetun juoman pH on 1,0 — 6,0
N tai noin 1,0 - noin 4 tai noin 1,6 —- noin 3,4. 3 30 Joissakin suoritusmuodoissa juoman valmistus
N sisältää kuumennusvaiheen, kuten kuumatayton, = pastöroinnin tai retorttikasittelyn ja juomassa oleva
N TOVD säilyy liukenevana kuumennusvaiheen aikana ja sen
S jälkeen. Joissakin suoritusmuodoissa rOVD:n lisääminen 2 35 juomaan ei olennaisesti muuta juoman nähtävissä olevaa
N ulkonäköä, hajua, makua tai suutuntumaa verrattuna juomaan, joka ei sisällä koostumusta. Joissakin suoritusmuodoissa TOVD:n lisääminen juomaan on aistineutraalia ja saa aikaan parannetun aistimuksellisen miellyttävyyden verrattuna muihin proteiineihin, kun niitä lisätään juomaan samana konsentraationa, kuten heraproteiiniin, soijaproteiiniin, herneproteiiniin, munanvalkuaisproteiineihin tai kokomunaproteiineihin.
Joissakin suoritusmuodoissa juoman valmistus sisältää myös toisen proteiinin kuten rOVL:n ja rOVD:n ja toisen proteiinin yhdistelmä säilyy liukenevana kuumennusvaiheen aikana ja sen jälkeen.
Joissakin suoritusmuodoissa valmis tuote on rTOVD:tä sisältävä elintarviketuote. Elintarviketuote voi olla hyytelö, makeinen, liemi, keitto, gelatiinia sisältävä tuote, geelivytetty tuote ja purukumituote.
Muita esimerkinomaisia elintarviketuotelajeja, joihin voidaan lisätä rOvVD: ta, ovat kastikkeet, salaatinkastikkeet, maustevalmisteet. rTOVD:tä voidaan lisätä myös mausteseoksiin ja mausteaineisiin. rTOvVD:tä voidaan käyttää myös kuorruttamisessa ja leivittämisessä. rOoVD:tä voidaan käyttää myös nostamaan välipalojen kuten hedelmä- ja kasvipohjaisten välipalojen proteiinisisältöä. rTOvVD:tä voidaan käyttää voitelumunana edistämään siementen tai jyvien kiinnittymistä paistettavaan tuotteeseen ja/tai parantamaan paistettavan tuotteen nähtävissä olevaa ulkonäköä, & kuten ruskistumista.
N Joissakin tässä esitetyissä suoritusmuodoissa 3 30 rovD: ta sisaltava nautittavissa oleva
N elintarvikekoostumus on koostumus, jota käytetään = aineosana yhden tai useamman muun aineosan tail
N komponentin kanssa valmiin tuotteen aikaansaamiseksi.
S Esimerkiksi rOVD voidaan sekoittaa veden tai muun 2 35 nesteen kanssa, ja sen jälkeen käyttää tätä seosta
N aineosana juoman, ruokatuotteen, ravintolisan tai funktionaalisen elintarvikkeen aikaansaamiseksi.
Joissakin tapauksissa TOVD sekoitetaan muiden aineosien, kuten muiden nesteiden (esim. pähkinämaitojen, hedelmämehujen, kasviuutteiden tai hiilihapotettujen liuosten kanssa. Tämä liuos voi olla aineosa, joka sitten sekoitetaan muiden aineosien kanssa lopullisen tuotteen valmistamiseksi loppukäyttäjälle; esimerkiksi liuos voi olla konsentroitua rOVD:ta sisältävä siirappi. Lopullinen tai valmis tuote on valmis loppukäyttäjän nautittavaksi. Valmis tuote voi olla prosessoitu tuote, kuten prosessoitu ruoka tai prosessoitu juoma. Joissakin tapauksissa TOVD järjestetään erilliseen säiliöön, josta loppukäyttäjä sekoittaa sen lopulliseen tuotteeseen. Joissakin tapauksissa rOVD sekoitetaan muiden aineosien, kuten hyytelöimisaineiden kanssa makeisten, purukumituotteiden, geeliytettyjen tuotteiden (kuten
Jellom) tai urheilugeelien valmistamiseksi.
TOVD:tä sisältävän nautittavissa olevan elintarviketuotteen valmistamisen aikana tai sen jälkeen se voidaan formuloida nesteeksi, kiinteäksi aineeksi, siirapiksi, tai jauheeksi. Koostumus voidaan pitää kylmässä, pakastaa, säilyttää lämpimänä, säilyttää huoneenlämpötilassa tai pitää kuumennetussa lämpötilassa. Flintarviketuotteen valmistus voi sisältää kuumennusvaiheen tai elintarviketuotetta säilytetään tai se tarjoillaan kuumennetussa lämpötilassa, ja TOVD säilyy liukenevana & elintarviketuotteessa kuumennusvaiheen aikana ja sen
N jälkeen. Joissakin tapauksissa elintarviketuotteen pH 3 30 voi olla noin 2 —- noin 6, ja rOVD säilyy liukenevana
N elintarviketuotteessa. = Esimerkkejä nestemäisistä nautittavissa
N olevista koostumuksista tai juomista ovat:
S virvoitusjuoma, vitamiinijuoma, proteiinipirtelö, 2 35 ateriankorvikepirtelö, mehu, virvokejuoma,
N maitopohjainen juoma tai ei-maitopohjainen juoma, > maustettu vesi, hiilihapotettu juoma, kahvi,
kofeiinipitoinen juoma, tee, kukkapohjainen juoma, olut, alkoholijuoma, ja urheilujuoma.
Mikä tahansa tässä esitetyistä nestemäisistä tai puolikiinteistä nautittavissa olevista koostumuksista voidaan saada aikaan sekoittamalla jauhettua rOVD:ta liuokseen. Liuos voi olla lopullinen tuote tai välituoteliuos, jota muokataan sitten edelleen lopullisen tuotteen aikaansaamiseksi.
Esimerkkejä liuottimista, joita voidaan käyttää rOVD-liuoksen valmistamiseksi, ovat liikkumaton vesi, hiilihapotettu vesi, alkoholi, mehut, ja mikä tahansa muu kaupallisesti saatavilla oleva juoma, mukaan lukien tässä yksityiskohtaisemmin kuvatut juomat.
Menetelmä rOVD:tä käsittävän nautittavissa olevan koostumuksen aikaansaamiseksi voi käsittää
TOVD:n sekoittamisen liuottimen ja valinnaisesti yhden tai useamman muun komponentin kanssa. Sekoittaminen voi tapahtua millä tahansa tavanomaisesti käytetyllä sekoitusmenetelmällä mukaan lukien huhmare ja survin, mekaaninen jauhin, sekoittaminen tasaiseksi, homogenointiprosessi tai sonikaatioprosessi.
Liuokseen lisättävän rOVD:n määrä voi olla sellainen, että se saa aikaan tässä kuvatun rOVD- konsentraation (joko lopullisessa tuotteessa tai välituotteessa).
Fdullisesti rOVD:n lisääminen liuokseen saa aikaan rOVD:sta suurimman osan tai lähes kaiken & liukenemisen liuokseen huoneenlämpötilassa. Eräässä
N tapauksessa liukenevuus määritetään kirkkauden tai 3 30 sameudettomuusasteen perusteella.
N Tässä esitetyt nautittavissa olevat = koostumukset voidaan saattaa myös kuumennusvaiheeseen.
N Tällainen vaihe voi muuttaa tai kasvattaa rOVD:n
S liukenevuutta. Esimerkiksi havaittiin, että 2 35 kuumennusvaiheen kuten retorttikäsittelyn, kuumatävytön,
N tai pastöroinnin suorittaminen tuotteen valmistusprosessissa voi kasvattaa tässä esitetyn rOVD- liuoksen liukenevuutta ja siten sen kirkkautta. rTOvVD:tä sisältävän nautittavissa olevan elintarviketuotteen valmistus voi sisältää prosessointivaiheita, esimerkiksi seuraavia: pakastaminen, jäähdyttäminen, kuumentaminen, paistaminen, paahtaminen, grillaaminen, keittäminen, ryöppääminen, pakkaaminen, purkittaminen, valkaiseminen, rikastaminen, kuivaaminen, puristaminen, jauhaminen, sekoittaminen, osittainen kypsentäminen, kypsentäminen, kohottaminen, marinoiminen, leikkaaminen, viipaloiminen, kuutioiminen, rouhiminen, repiminen, paloitteleminen, ravisteleminen, osien poistaminen, spiralisoiminen, pyörittäminen, mehustaminen, siivilöiminen, suodattaminen, vaivaaminen, vispaaminen, vatkaaminen, vaahdottaminen, raastaminen, täyttäminen, kuoriminen, siementen poistaminen, savustaminen, säilytyskäsitteleminen, suolaaminen, säilöminen, pikkelöiminen, fermentoiminen, homogenoiminen, pastöroiminen, steriloiminen, säteilyttäminen, kylmäplasmaprosessoiminen, korkeapaineprosessoiminen, pulssisähkökenttäprosessoiminen, mikroaaltoavusteinen lämpösterilointi, stabiloiminen, sekoittaminen tasaiseksi, soseuttaminen, vahvistaminen, raffinoiminen, hydraaminen, kypsyttäminen, käyttöiän pidentäminen, tai entsyymien lisääminen. & rovD: ta sisaltavan nautittavissa olevan
N elintarviketuotteen valmistus voi sisältää kuivaamisen 3 30 ja/tai konsentroimisen. Joissakin tapauksissa
N kuivaaminen muodostaa kuivan, vedettömän, = konsentroidun, ja/tai kiinteän proteiinin tai
N koostumuksen. Joitakin ei-rajoittavia esimerkkejä
S kuivausmenetelmistä ovat lämpökuivaaminen, haihdutus 2 35 (esim. tyhjiön tai ilman avulla), tislaus, keittäminen,
N kuumentaminen uunissa, tyhjiökuivaaminen,
sumutuskuivaaminen, pakastekuivaaminen, ja lyofilisointi, tai niiden mikä tahansa yhdistelmä.
TOVD:tä sisältävän nautittavissa olevan elintarviketuotteen valmistus voi sisältää laimentamisen ja/tai hydratoimisen. Joissakin tapauksissa laimentaminen voi käsittää nesteen lisäämisen, jossa neste voi olla vesi tai muu nestemäinen muoto. Esimerkiksi koostumus voidaan laimentaa (esim. 20 %:sta vettä 99,9 %:iin vettä).
Toisessa esimerkissä kuiva koostumus voidaan hydratoida (esim. kuivasta kiintoaineesta 99,9 %:iin vettä).
Joissakin suoritusmuodoissa rOVD:tä sisältävä nautittavissa oleva elintarvikekoostumus on jauhemuodossa ja kun jauhettu koostumus formuloidaan liuokseksi, rOVD on olennaisesti kokonaan liukeneva.
Joissakin suoritusmuodoissa, kun jauhettu koostumus formuloidaan liuokseksi, rOVD on olennaisesti kokonaan liukeneva ja liuos on olennaisesti kirkas. Joissakin suoritusmuodoissa, kun jauhettu koostumus formuloidaan liuokseksi, rOVD on olennaisesti kokonaan liukeneva, liuos on olennaisesti kirkas ja liuos on olennaisesti aistineutraali tai sillä on parannettu aistimuksellinen miellyttävyys verrattuna liuoksiin, jotka on valmistettu muiden jauhettujen proteiinien kuten heraproteiinin, soijaproteiinin, herneproteiinin, munanvalkuaisproteiinin tai kokomunaproteiinien kanssa. Joissakin suoritusmuodoissa jauhettu koostumus & liukenee vedessä, jossa rOVD:n konsentraatio on tai on
N noin 1 $, 5%, 6 %, 7%, 8 %, 9%, 10 %, 11 %, 12 %, 13 3 30 %, 14 %, 15 %, 16 3, 17 %, 18 %, 19 %, 20 %, 21 %, 22
N %, 23 %, 24 %, 25 %, 26 %, 27 %, 28 %, 29 %, 30 %, 31 = %, 32 %, 33 3, 34 %, 35 %, 36 3, 37 %, 38 %, 39 % tai
N 40 % paino/kokonaispaino (p/P) ja/tai
S paino/kokonaistilavuus (p/t) koostumuksesta. 2 35 Tässä kuvattujen nautittavissa olevien
N elintarvikekoostumusten joissakin suoritusmuodoissa > koostumus ei sisällä olennaisesti eläinperäistä komponenttia, heraproteiinia, kaseinaattia, rasvaa, laktoosia, hydrolysoitua laktoosia, soijaproteiinia, kollageenia, hydrolysoitua kollageenia, tai gelatiinia, tai niiden mitään yhdistelmää. Tässä kuvattu koostumus voi olla sisältämättä olennaisesti kolesterolia, glukoosia, rasvaa, tyydyttynyttä rasvaa, transrasvaa, tai niiden mitään yhdistelmää. Joissakin tapauksissa tässä kuvattu koostumus käsittää vähemmän kuin 10 %, 5 %, 4 %, 3%, 2%, 1 3, tai 0,5 % rasvaa kuivapainosta.
Joissakin suoritusmuodoissa koostumus voi olla rasvaa sisältävä (esim. kuten majoneesi) ja tällainen koostumus voi sisältää korkeintaan noin 60 % rasvaa tai vähärasvainen koostumus (esim. vähärasvainen majoneesi) ja tällainen koostumus voi sisältää pienempiä prosentteja rasvaa. Fläinperäistä komponenttia sisältämätön koostumus voidaan katsoa vegetaariseksi ja/tai vegaaniseksi.
Joissakin suoritusmuodoissa TOVD:n jauhekoostumus käsittää vähemmän kuin 5 % tuhkaa. Termi "tuhka” on alalla tunnettu termi ja edustaa epäorgaanisia aineita kuten yhtä tai useampia ioneja, alkuaineita, mineraaleja, ja/tai yhdisteitä. Joissakin tapauksissa rTOVD:n jauhekoostumus käsittää vähemmän kuin 5 %, 4,5 %, 4 %, 3,5 %, 3 3, 2,5 3, 2%, 1,5 %, 1 %, 0,75 %, 0,5 %, 0,25 % tai 0,1 % tuhkaa paino/kokonaispaino (p/p) ja/tai paino/kokonaistilavuus (p/t). & Joissakin suoritusmuodoissa TOVD:n
N jauhekoostumuksen kosteussisältö voi olla vähemmän kuin 3 30 15 %. TOVD:n jauhekoostumuksessa voi olla vähemmän kuin
N 15 %, 12 %, 10 %, 8 %, 6 %, 5 %, 3 %, 2 % tai 1 %
Ek kosteutta paino/kokonaispaino (P/P) ja/tai
N paino/kokonaistilavuus (p/t). Joissakin
S suoritusmuodoissa rOVD:n jauhekoostumuksen 2 35 hiilihydraattisisältö voi olla vähemmän kuin 30 &%.
N TOVD:n jauhekoostumuksessa voi olla vähemmän kuin 30 %,
27 %, 25 %, 22 %, 20 3, 17 %, 15 %, 12 %, 10 %, 8 %, 5 %, 3 %3 tai 1 % oleva hiilihydraattisisältö p/p tai p/t.
Joissakin tapauksissa rOVD:n jauhekoostumuksen proteiinisisältö voi olla 30 % - 99 % paino/kokonaispaino (p/p) ja/tai paino/kokonaistilavuus (p/t). Joissakin tapauksissa rOVD:n jauhekoostumuksen proteiinisisältö voi olla vähintään 30 % p/p tai p/t.
Joissakin tapauksissa TOVD:n jauhekoostumuksen proteiinisisältö voi olla korkeintaan 99 % p/p tai p/t.
Joissakin tapauksissa TOVD:n jauhekoostumuksen proteiinisisältö voi olla 30 3 - 40 3, 30 3 - 50 %, 30 % - 60 %, 30% - 70 %, 30% - 75 3, 30 3 - 80 %, 30 % - 85 3, 30 3 - 90 3, 30 3 - 95 3, 30 % — 99 %, 40 & - 50 %, 40 %$ - 60 %, 40 % - 70 3, 40 & — 795 %, 40 % — 80 %, 40 % - 85 %, 40 %$ - 90 3, 40 % - 95 %, 40 3 - 99 %, 50 % - 60 3, 50 %$ - 70 %, 50 $ - 75 %, 50 3 - 80 %, 50 % - 85 3, 50 3 - 90 3, 50 & - 95 3, 50 % - 99 3, 60 % — 70 %, 60 % - 75 %, 60 % - 80 3, 60 & — 85 %, 60 % — 90 %, 60 %$ - 95 3, 60 % - 99 3, 70 % - 75 %, 70 $ — 80 3, 70 % - 85%, 70 & — 90 %, 70 $ — 95 %, 70 3 — 99 3, 795 % - 80 3, 75 % - 85 3, 75 % - 90 3, 75 %$ - 95 %, 75 % - 99 %, 80 % - 85 %, 80 % - 90 3, 80 %$ — 95 %, 80 % — 99 3, 85 % - 90 %, 85 3 - 95 3, 85 3 - 99 %, 90 & - 95 %, 90 % - 99 3, tai 95 % - 99 % p/p tai p/t. Joissakin tapauksissa rOVD:n jauhekoostumuksen proteiinisisältö voi olla noin 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, tai 99 % p/p tai p/t. Joissakin & tapauksissa rOVD:n jauhekoostumuksen proteiinisisältö
N voi olla vähintään 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 3 30 80 3, 85 %, 90 % tai 95 % p/p tai p/t. Joissakin
N tapauksissa rOVD:n jauhekoostumuksen proteiinisisältö = voi olla korkeintaan 40 %, 50 3, 60 %, 70 %, 75 %, 80
N %, 85 %, 90 %, 95 3, tai 99 % p/p tai p/t.
S
2 35 Koostumusten muut komponentit
N Tässä esitetyt rTOvVD:tä sisältävät nautittavissa olevat elintarvikekoostumukset ja menetelmät tällaisten koostumusten valmistamiseksi voivat sisältää yhden tai useamman aineosan lisäämisen tai sekoittamisen TOVD:n kanssa. Esimerkiksi koostumuksiin voidaan lisätä tai niiden kanssa sekoittaa elintarvikelisäaineita. Elintarvikelisäaineet voivat lisätä tilavuutta ja/tai massaa koostumukseen.
Elintarvikelisäaine voi parantaa funktionaalista tehokkuutta ja/tai fysikaalisia ominaisuuksia.
Esimerkiksi elintarvikelisäaine voi estää geeliytymistä tai viskositeetin kasvamista lipoproteiinien lipidiosan vaikutuksesta pakastus-sulatus-syklissä.
Paakkuuntumisenestoainetta voidaan lisätä vapaasti virtaavan koostumuksen valmistamiseksi.
Hiilihydraatteja voidaan lisätä kasvattamaan kestävyyttä lämpövaurioitumista vastaan, esim. vähentämään proteiinin denaturoitumista kuivaamisen aikana ja parantamaan kuivattujen koostumusten stabiliteettia ja virtaavuutta. Elintarvikelisäaineita ovat, seuraaviin rajoittumatta, elintarvikeväri, pH- säätöaine, luontainen aromi, keinotekoinen aromi, arominvahvenne, erän merkkiaine, elintarvikehappo, filleri, paakkuuntumisenestoaine (esim. natriumaluminiumsilikaatti), vihertymisenestoaine (esim. sitruunahappo), elintarvikkeen stabilointiaine, vaahdon stabilointiaine tai sideaine, antioksidantti, happamuudensäätöaine, täyteaine, värinsäilytysaine, vaahdotusaine (esim. esterityyppinen vaahdotusaine, & trietyylisitraatti, natriumlauryylisulfaatti),
N emulgointiaine (esim. lesitiini), kosteuttava aine, 3 30 sakeuttamisaine, apuaine, kiinteä laimennusaine,
N suolat, ravintoaine, makeutusaine, pintakäsittelvyaine, = säilöntäaine, vitamiini, ravitsemukselliset alkuaineet,
N hiilihydraatit, polyoli, kumit, tärkkelykset, jauho,
S öljy, tai lese. 2 35 Elintarvikeväri käsittää seuraavat, niihin
N rajoittumatta: FD&C Yellow #5, FD&C Yellow #6, FD&C Red #40, FD&C Red #3, FD&C Blue No. 1, FD&C Blue No. 2, FD&C
Green No. 3, karotenoidit (esim. sahrami, [B-karoteeni), antosyaanit, annatto, betaniini, siniherne, karamelliväri, klorofylliini, seljanmarjamehu, lykopeeni, karmiini, pandan, paprika, kurkuma, kurkuminoidit, kinoliinikeltainen, karmosiini, Ponceau 4R, patenttisininen V, ja vihreä $£.
Aineosia pH-arvon säätämiseksi ovat, seuraaviin rajoittumatta, tris-puskuri, kaliumfosfaatti, natriumhydroksidi, kaliumhydroksidi, sitruunahappo, natriumsitraatti, natriumbikarbonaatti, ja kloorivetyhappo.
Suoloja ovat, seuraaviin rajoittumatta, happamat suolat, alkalisuolat, orgaaniset suolat, epäorgaaniset suolat, fosfaatit, kloridisuolat, natriumsuolat, natriumkloridi, kaliumsuolat, kaliumkloridi, magnesiumsuolat, magnesiumkloridi, magnesiumperkloraatti, kalsiumsuolat, kalsiumkloridi, ammoniumkloridi, rautasuolat, rautakloridit, sinkkisuolat, ja sinkkikloridi.
Ravintoaine käsittää seuraavat, niihin rajoittumatta: makroravintoaine, mikroravintoaine, välttämätön ravintoaine, ei-välttämätön ravintoaine, ravintokuitu, aminohappo, välttämättömät rasvahapot, omega-3-rasvahapot, ja konjugoitunut linolihappo.
Makeutusaineita ovat, seuraaviin rajoittumatta, sokerinkorvike, keinotekoinen makeutusaine, asesulfaami K, advantaami, alitaami, & aspartaami, natriumsyklamaatti, dulsiini, glusiini,
N neohesperidiinidihydrokalkoni, neotaami, P-4000, 3 30 sakariini, aspartaami-asesulfaami-suola, sukraloosi,
N brazzeiini, kurkuliini, glykyrritsiini, glyseroli, = inuliini, mogrosidi, mabinlin, malto-oligosakkaridi,
N mannitoli, mirakuliini, monatiini, monelliini,
S osladiini, pentadiini, stevia, trilobatiini, ja 2 35 taumatiini.
N Hiilihydraatteja ovat, seuraaviin rajoittumatta, sokeri, sakkaroosi, glukoosi, fruktoosi,
galaktoosi, laktoosi, maltoosi, mannoosi, alluloosi, tagatoosi, ksyloosi, arabinoosi, runsaasti fruktoosia sisältävä maissisiirappi, runsaasti maltoosia sisältävä maissisiirappi, maissisiirappi (esim. glukoositon maissisiirappi), siaalihappo, monosakkaridit, disakkaridit, ja polysakkaridit (esim. polydekstroosi, maltodekstriini).
Polyoleja ovat, seuraaviin rajoittumatta, ksylitoli, maltitoli, erytritoli, sorbitoli, treitoli, arabitoli, hydrogenoidut tärkkelyshydrolysaatit, isomalti, laktitoli, mannitoli, ja galaktitoli (dulsitoli).
Kumeja ovat, seuraaviin rajoittumatta, arabikumi, gellaanikumi, guarkumi, karobikumi, Acacia- kumi, selluloosakumi, ja ksantaanikumi.
Vitamiineja ovat, seuraaviin rajoittumatta, niasiini, riboflaviini, pantoteenihappo, tiamiini, foolihappo, A-vitamiini, B6-vitamiini, Bl2-vitamiini,
D-vitamiini, E-vitamiini, luteiini, tseaksantiini, koliini, inositoli, ja biotiini.
Ravitsemuksellisia alkuaineita ovat, seuraaviin rajoittumatta, kalsium, rauta, magnesium, fosfori, kalium, natrium, sinkki, kupari, mangaani, seleeni, kloori, jodi, rikki, koboltti, molybdeeni, nikkeli, ja bromi.
Pakkaus & Eräs tässä esitettyjen nautittavissa olevien
N koostumusten eduista on, että ne mahdollistavat 3 30 yksikertaisemman pakkauksen. Yhtenä esimerkkinä tässä
N esitetty nautittavissa oleva nestemäinen koostumus = voidaan pakata kirkkaaseen astiaan, koska koostumuksen
N sameudettomuus aikaansaa kuluttajalle miellyttävämmän
S tuotteen.
Q 35 Nautittavissa oleva koostumus voidaan pitää
N kylmässä, pakastaa, säilyttää lämpimänä, säilyttää huoneenlämpötilassa tai pitää kuumennetussa lämpötilassa. rOVD-koostumus voidaan pakata jauheena, konsentroituna siirappina, nautittavissa olevana elintarviketuotteena, juomana, käyttövalmiina ruoka- aineena, aineosana, tai valmiina tuotteena.
Rekombinantti OVD ja OVL
Missä tahansa tässä kuvatussa koostumuksessa proteiini voi olla ilmennetty rekombinanttisesti isäntäsolussa. Rekombinantti proteiini voi olla OVD, ensimmäinen ei-rekombinantti proteiini (esim. OVD) ja toinen rekombinantti proteiini kuten lysotsyymi (esim. rOVL), tai OVD ja ainakin yksi toinen proteiini voivat molemmat olla rekombinanttisesti tuotettuja (esimerkiksi rOVD ja rOVL). rOvD: 114 tai rOvVL:llä voi olla aminohapposekvenssi mistä tahansa lajista. Esimerkiksi rOVD:llä voi olla OVD:n aminohapposekvenssi, joka on natiivi linnulle (Aves) tai matelijalle tai vesinokkaeläimelle, ja rOvVL:llä voi olla OVL:n aminohapposekvenssi, joka on natiivi linnulle tai matelijalle tai vesinokkaeläimelle. rOVD ja/tai rOVL, jolla on aminohapposekvenssi linnun OVD:stä ja/tai
OVL:stä, voi olla valittu ryhmästä, joka koostuu seuraavista: siipikarja, kanalintu, vesilintu, riistalintu, kana, viiriäinen, kalkkuna, & kalkkunakondori, kolibri, sorsa, strutsi, hanhi, lokki,
N helmikana, fasaani, emu, ja niiden mikä tahansa 3 30 vyhdistelma. rOvVD:llä ja/tai rOVL:llä voi olla
N aminohapposekvenssi, joka on natiivi yhdelle lajille, = kuten Gallus gallus domesticus. Vaihtoehtoisesti
N rOvD: 11a ja/tai rOVL:llä voi olla aminohapposekvenssi,
S joka on natiivi kahdelle tai useammalle lajille, ja 2 35 sellaisena ne voivat olla hybridejä.
N Tässä mahdollisia esimerkinomaisia OVD:n ja
OVL:n aminohapposekvenssejä on esitetty seuraavassa
Taulukossa 1 vastaavasti sekvensseinä SEO ID NO: 1-44 ja 45-51.
Taulukko 1: Sekvenssit = ET kuvaus
Ovomukoidi SEO ID | AEVDCSRFPNATDKEGKDVLVCNKDLRPICGTDGVTYTNDC (kanoninen) NO: 1 LLCAYSIEFGTNISKEHDGECKETVPMNCSSYANTTSEDGK aikuisen kanan VMVLCNRAFNPVCGTDGVTYDNECLLCAHKVEOGASVDKRH
OVD DGGCRKELAAVSVDCSEYPKPDCTAFDRPLCGSDNKTYGNK
CNFCNAVVESNGTLTLSHFGKC
Sekvenssin SEO SEQ ID | AEVDCSRFPNATDMEGKDVLVCNKDLRPICGTDGVTYTNDCLLCA
ID NO: 1 ovo- NO: 2 YSVEFGTNISKEHDGECKETVPMNCSSYANTTSEDGKVMVLCNRA mukoidivariantti FNPVCGTDGVTYDNECLLCAHKVEOGASVDKRHDGGCRKELAAVS
VDCSEYPKPDCTAFDRPLCGSDNKTYGNKCNFCNAVVESNGTLTL
SHFGKC
Kanan OVD:n SEQ ID | AEVDCSRFPNATDMEGKDVLVCNKDLRPICGTDGVTYTNDCLLCA
G162M F167A NO: 3 YSVEFGTNISKEHDGECKETVPMNCSSYANTTSEDGKVMVLCNRA ovomukoidivari- FNPVCGTDGVTYDNECLLCAHKVEOGASVDKRHDGGCRKELAAVS antti Genbank- VDCSEYPKPDCTAFDRPLCGSDNKTYMNKCNACNAVVESNGTLTL tietokannassa SHFGKC
Ovomukoidi SEO ID | MAMAGVFVLFSFVLCGFLPDAAFGAFVDCSRFPNATDKEGKDVLV isoformi 1 NO: 4 CNKDLRPICGTDGVTYTNDCLLCAYSIEFGTNISKEHDGECKETV prekursori PMNCSSYANTTSEDGKVMVLCNRAFNPVCGTDGVTYDNECLLCAH täyspitkä KVFOGASVDKRHDGGCRKFLAAVSVDCSEYPKPDCTAFDRPLCGS
O DNKTYGNKCNFCNAVVESNGTLTLSHFGKC
S Ovomukoidi SEO ID | MAMAGVFVLFSFVLCGFLPDAVFGAFVDCSRFPNATDMEGKDVLV se [Gallus gallus] NO: 5 CNKDLRPICGTDGVTYTNDCLLCAYSVEFGTNISKEHDGECKETV + PMNCSSYANTTSEDGKVMVLCNRAFNPVCGTDGVTYDNECLLCAH
N KVEOGASVDKRHDGGCRKELAAVSVDCSEYPKPDCTAEDRPLCGS
& DNKTYGNKCNFCNAVVESNGTLTLSHFGKC 5 Ovomukoidi SEO ID | MAMAGVFVLFSFVLCGFLPDAAFGAFVDCSRFPNATDKEGKDVLV
I isoformi 2 NO: 6 CNKDLRPICGTDGVTYTNDCLLCAYSIEFGTNISKEHDGECKETV
N prekursori PMNCSSYANTTSEDGKVMVLCNRAFNPVCGTDGVTYDNECLLCAH
S [Gallus gallus]
ee
KTYGNKCNFCNAVVESNGTLTLSHFGKC
Ovomukoidi SEO ID AEVDCSRFPNATDKEGKDVLVCNKDLRPICGTDGVTYNNECLLCA [Gallus gallus] NO: 7 YSIEFGINISKEHDGECKETVPMNCSSYANTTSEDGKVMVLCNRA
FNPVCGTDGVTYDNECLLCAHKVEOGASVDKRHDGECRKELAAVS
VDCSEYPKPDCTAEDRPLCGSDNKTYGNKCNFCNAVVESNGTLTL
SHFGKC
Ovomukoidi SEO ID MAMAGVFVLFSFALCGFLPDAAFGVEVDCSRFPNATNEEGKDVLV [Numi da NO: 8 CTEDLRPICGTDGVTYSNDCLLCAYNIEYGTNISKEHDGECREAV meleagris] PVDCSRYPNMTSEEGKVLILCNKAFNPVCGTDGVTYDNECLLCAH
NVEOGT SVGKKHDGECRKELAAVDCSEYPKPACTMEYRPLCGSDN
KTYDNKCNFCNAVVESNGTLTLSHFGKC
ENNUSTETTU: SEO ID MOTITWROPOGDHIRSRAPAATCRAGOYLTMAMAGIFVLFSFALC
Ovomukoidi NO: 9 GFLPDAAFGVEVDCSREPNTTNEEGKDVLVCTEDLRPICGTDGVT isoformi X1 HSECLLCAYNIEYGTNISKEHDGECREAVPMDCSRYPNTTNEEGK [Meleagris VMILCNKALNPVCGTDGVTYDNECVLCAHNLEOGTSVGKKHDGGC gallopavo] RKELAAVSVDCSEYPKPACTLEYRPLCGSDNKTYGNKCNFCNAVV
ESNGTLTLSHFGKC
Ovomukoidi SEO ID VEVDCSRFPNTTNEEGKDVLVCTEDLRPICGTDGVTHSECLLCAY [Meleagris NO: 10 NIEYGINISKEHDGECREAVPMDCSRYPNTTSEEGKVMILCNKAL gallopavo] NPVCGTDGVTYDNECVLCAHNLEOGTSVGKKHDGECRKELAAVSV
DCSEYPKPACTLEYRPLCGSDNKTYGNKCNFCNAVVESNGTLTLS
HFGKC
ENNUSTETTU: SEO ID MOTITWROPOGDHIRSRAPAATCRAGOYLTMAMAGIFVLFSFALC
Ovomukoidi NO: 11 GFLPDAAFGVEVDCSRFPNTTNEEGKDVLVCTEDLRPICGTDGVT isoformi X2 HSECLLCAYNIEYGTNISKEHDGECREAVPMDCSRYPNTTNEEGK en [Meleagris VMILCNKALNPVCGTDGVT YDNECVLCAHNLEOGTSVGKKHDGGC
N gallopavo] RKELAAVDCSEYPKPACTLEYRPLCGSDNKTYGNKCNFCNAVVES
N NGTLTLSHFGKC
= Ovomukoidi SEO ID EYGTNISIKHNGECKETVPMDCSRYANMTNEEGKVMMPCDRTYNP
N [Bambusicola NO: 12 VCGTDGVTYDNECOLCAHNVEOGTSVDKKHDGVCGKELAAVSVDC
E thoracicus] SEYPKPECTAEERPICGSDNKTYGNKCNFCNAVVYVOP
K Ovomukoidi SEO ID VDCSRFPNTTNEEGKDVLACTKELHPICGTDGVTYSNECILLCYYN
S [Callipepla NO: 13 IEYGTNISKEHDGECTEAVPVDCSRYPNTTSEEGKVLIPCNRDFEN
N sguamata] PVCGSDGVTYENECLLCAHNVEOGTSVGKKHDGGCRKEFAAVSVD
S CSEYPKPDCTLEYRPLCGSDNKTYASKCNFCNAVVIWEOEKNTRH
HASHSVFFISARLVC
Ovomukoidi SEO ID MLPLGLREYGTNTSKEHDGECTEAVPVDCSRYPNTTSEEGKVRILC [Colinus NO: 14 KKDINPVCGTDGVTYDNECLLCSHSVGOGASIDKKHDGGCRKEFAA virginianus] VSVDCSEYPKPACMSEYRPLCGSDNKTYVNKCNFCNAVVYVOPWLH
SRCRLPPTGTSFLGSEGRETSLLTSRATDLOVAGCTAISAMEATRA
AALLGLVLLSSFCELSHLCFSOASCDVYRLSGSRNLACPRIFOFVC
GTDNVTYPNECSLCROMLRSRAVYKKHDGRCVKVDCTGYMRATGGL
GTACSOOYSPLYATNGVIYSNKCTFCSAVANGEDIDLLAVKYPEEE
SWISVSPTPWRMLSAGA
Ovomukoidin . SEO ID MSWWGIKPALERPSOEOSTSGOFPVDSGSTSTTTMAGIFVLLSLVLC kaltainen isoformi X2 NO: 15 CFPDAAFGVEVDCSRFPNTTNEEGKEVLLCTKDLSPICGTDGVTYS [Anser . NECLLCAYNIEYGTNISKDHDGECKEAVPVDCSTYPNMTNEEGKVM cygnoides domesticus] LVCNKMFSPVCGTDGVTYDNECMLCAHNVEOGTSVGKKYDGKCKKE
VATVDCSDYPKPACTVEYMPLCGSDNKTYDNKCNFCNAVVDSNGTL
TLSHFGKC
Ovomukoidin . SEO ID MSSONOLHRRRRPLPGGODLNKYYWPHCTSDRFSWLLHVTAFOFR kaltainen isoformi X1 NO: 16 HCVCIYLOPALERPSOEOSTSGOPVDSGSTSTTTMAGIFVLLSLV [Anser . LCCFPDAAFGVEVDCSRFPNTTNEEGKEVLLCTKDLSPICGTDGV cygnoides domesticus] TYSNECLLCAYNIT EYGTNI SKDHDGECKEAVPVDCSTYPNMINEE
GKVMLVCNKMFSPVCGTDGVTYDNECMLCAHNVEOGTSVGKKYDG
KCKKEVATVDCSDYPKPACTVEYMPLCGSDNKTYDNKCNFCNAVV
DSNGTLTLSHFGKC
Ovomukoidi SEO ID VEVDCSRFPNTTNEEGKDEVVCPDELRLICGTDGVITYNHECMLCF [Coturnix NO: 17 YNKEYGTNISKEODGECGETVPMDCSRYPNTTSEDGKVTILCTKD japonica] FSFVCGTDGVTYDNECMLCAHNVVOGTSVGKKHDGECRKELAAVS
VDCSEYPKPACPKDYRPVCGSDNKTYSNKCNFCNAVVESNGTLTL
NHFGKC e Ovomukoidi SEO ID MAMAGVFLLFSFALCGFLPDAAFGVEVDCSRFPNTTNEEGKDEVVC
N [Coturnix NO: 18 PDELRLICGTDGVT YNHECMLCFYNKEYGTNISKEODGECGETVPM
N
O japonica] DCSRYPNTTSEDGKVTILCTKDFSFVCGTDGVTYDNECMLCAHNIV
O
! OGTSVGKKHDGECRKELAAVSVDCSEYPKPACPKDYRPVCGSDNKT <t
N YSNKCNFCNAVVESNGTLTLNHFGKC
I Ovomukoidi & [Anas SEO ID MAGVFVLLSLVLCCFPDAAFGVEVDCSRFPNTTNEEGKDVLLCTK
K platyrhynchos] NO: 19 ELSPVCGTDGVTYSNECLLCAYNIEYGTNI SKDHDGECKEAVFPAD
O
S CSMYPNMINEEGKMILLCNKMFSPVCGTDGVTYDNECMLCAHNVE
O)
Ql OGTSVGKKYDGKCKKEVATVDCSGYPKPACTMEYMPLCGSDNKTY
O
S GNKCNFCNAVVDSNGTLTLSHFGEC
Ovomukoidi, SEO ID OVDCSRFPNTTNEEGKEVLLCTKELSPVCGTDGVTYSNECLLCAY osittainen [Anas NO: 20 NIEYGTNISKDHDGECKEAVPADCSMYPNMTNEEGKMTLLCNKMF platyrhynchos] SPVCGTDGVTYDNECMLCAHNVEOGT SVGKKYDGKCKKEVATVSV
DCSGYPKPACTMEYMPLCGSDNKTYGNKCNFCNAVV
Ovomukoidin SEO ID MITMPGAFVVLSFVLCCFPDATFGVEVDCSTYPNTTNEEGKEVLVC kaltainen [Tyto NO: 21 SKILSPICGTDGVTYSNECLLCANNIEYGTNISKYHDGECKEFVP alba] VNCSRYPNTTNEEGKVMLICNKDLSPVCGTDGVTYDNECLLCAHN
LEPGTSVGKKYDGECKKEIATVDCSDYPKPVCSLESMPLCGSDNK
TYSNKCNFCNAVVDSNETLTLSHFGKC
Ovomukoidi SEO ID MITMAGVFVLLSFAILCCFPDAAFGVEVDCSTYPNTTNEEGKEVLVC [Balearica NO: 22 TKILSPICGTDGVTYSNECLLCAYNIEYGTNVSKDHDGECKEVVP regulorum VDCSRYPNSTNEEGKVVMLCSKDLNPVCGTDGVTYDNECVLCAHN gibbericeps] VESGTSVGKKYDGECKKETATVDCSDYPKPACTLEYMPFCGSDSK
TYSNKCNFCNAVVDSNGTLTLSHFGKC
Kalkkuna- . SEO ID MTTAGVFVLLSFALCSFPDAAFGVEVDCSTYPNTTNEEGKEVLVCT kondorin [Cathartes NO: 23 KILSPICGTDGVTYSNECLLCAYNIEYGTNVSKDHDGECKEEVPVD aura] OVD
Ce. CSRYPNTTNEDGKVVLLCNKDLSPICGTDGVTYDNECLLCARNLEP (natiivi sekvenssi) GTSVGKKYDGECKKEIATVDCSDYPKPVCSLEYMPLCGSDSKTYSN lihavoitu on natiivi KCNFCNAVVDSNGTLTLSHFGKC signaalisek- venssi
Ovomukoidin . SEO ID MTTAGVFVLLSFTICSFPDAAFGVEVDCSPYPNTTNEEGKEVLVC kaltainen [Cuculus NO: 24 NKILSPICGTDGVTYSNECLLCAYNLEYGTNISKDYDGECKEVAP canorus]
VDCSRHPNTTNEEGKVELLCNKDLNPICGTNGVTYDNECLLCARN
LESGTSIGKKYDGECKKEIATVDCSDYPKPVCTLEEMPLCGSDNK
TYGNKCNFCNAVVDSNGTLTLSHFGKC
Ovomukoidi
SEO ID MTTAVVFVLLSFAICCFPDAAFGVEVDCSTYPNSTNEEGKDVLVC
[Antrostomus
S carolinensis] NO: 25 PKILGPICGTDGVTYSNECLLCAYNIOYGTNVSKDHDGECKEIVP
O
N VDCSRYPNTTNEEGKVVFLCNKNFDPVCGTDGDTYDNECMLCARS
I
S LEPGTTVGKKHDGECKREIATVDCSDYPKPTCSAEDMPLCGSDSK
I
+ TYSNKCNFCNAVVDSNGTLTLSRFGKC
N Ta
Ovomukoidi
I . SEO ID MIMTGVFVLLSFAICCFPDAAFGVEVDCSTYPNTTNEEGKEVLVC ic [Cariama a cristata] NO: 26 TKILSPICGTDGVTYSNECLLCAYNIEYGTNVSKDHDGECKEVVP
VDCSKYPNTTNEEGKVVLLCSKDLSPVCGTDGVTYDNECLLCARN
O
I LEPGSSVGKKYDGECKKEIATIDCSDYPKPVCSLEYMPICGSDSK
N
S TYDNKCNFCNAVVDSNGTLTLSHFGKC
D
Ovomukoidin . SEQ ID MTTAGVFVLLSFVLCCFPDAVFGVEVDCSTYPNTTNEEGKEVLVC kaltainen isoformi X2 NO: 27 TKILSPICGTDGVTYSNECLLCAYNIEYGTNVSKDHDGECKEVVP [Pygoscelis . VNCSRYPNTTNEEGKVVLRCSKDLSPVCGTDGVTYDNECLMCARN adeliae]
LEPGAVVGKNYDGECKKEIATVDCSDYPKPVCSLEYMPLCGSDSK
TYSNKCNFCNAVVDSNGTLTLSHFGKC
Ovomukoidin . SEO ID MTTAGVFVLLSIALCCFPDAAFGVEVDCSAYSNTTSEEGKEVLSCT kaltainen [Nipponia NO: 28 KILSPICGTDGVTYSNECLLCAYNIEYGTNISKDHDGECKEVVSVD nippon]
CSRYPNTTNEEGKAVLLCNKDLSPVCGTDGVTYDNECLLCAHNLEP
GTSVGKKYDGACKKEIATVDCSDYPKPVCTLEYLPLCGSDSKTYSN
KCDFCNAVVDSNGTLTLSHFGKC
Ovomukoidin . SEO ID MTTAGVFVLLSFALCCFPDAAFGVEVDCSTYPNTTNEEGKEVLVC kaltainen [Phaethon NO: 29 TKILSPICGTDGTTYSNECLLCAYNI EYGTNVSKDHDGECKVVPV lepturus]
DCSKYPNTTNEDGKVVLLCNKALSPICGTDRVTYDNECLMCAHNL
EPGTSVGKKHDGECOKEVATVDCSDYPKPVCSLEYMPLCGSDGKT
YSNKCNFCNAVVNSNGTLTLSHFEKC
Ovomukoidin . SEO ID MTTAGVFVLLSFVLCCFFPDAAFGVEVDCSTYPNTINEEGKEVLV kaltainen isoformi X1 NO: 30 CAKILSPVCGTDGVTYSNECLLCAHNIENGTNVGKDHDGKCKEAV [Melopsittacus
PVDCSRYPNTTDEEGKVVLLCNKDVSPVCGTDGVTYDNECLLCAH undulatus]
NLEAGTSVDKKNDSECKTEDTTLAAVSVDCSDYPKPVCTLEYLFPL
CGSDNKTYSNKCRFCNAVVDSNGTLTLSRFGKC
Ovomukoidi . SEO ID MTTAGVFVLLSFALCCSPDAAFGVEVDCSTYPNTTNEEGKEVLAC [Podiceps cristatus] NO: 31 TKILSPICGTDGVTYSNECLLCAYNMEYGTNVSKDHDGKCKEVVP
VDCSRYPNTTNEEGKVVLLCNKDLSPVCGTDGVTYDNECLLCARN
LEPGASVGKKYDGECKKEIATVDCSDYPKPVCSLEHMPLCGSDSK
TYSNKCTFCNAVVDSNGTLTLSHFGKC
Ovomukoidin . SEQ ID MTTAGVFVLLSFALCCFPDAAFGVEVDCSTYPNTTNEEGREVLVC kaltainen [Fulmarus NO: 32 TKILSPICGTDGVTYSNECLLCAYNIEYGTNVSKDHDGECKEVAP
Q glacialis] o VGCSRYPNTTNEEGKVVLLCNKDLSPVCGTDGVTYDNECLLCARH
N
O LEPGTSVGKKYDGECKKEIATVDCSDYPKPVCSLEYMPLCGSDSK
O
! TYSNKCNFCNAVLDSNGTLTLSHFGKC < <.
N Ovomukoidi
SEO ID MTTAGVFVLLSFALCCFPDAVFGVEVDCSTYPNTTNEEGKEVLVC
I [Aptenodytes & forsteri] NO: 33 TKILSPICGTDGVTYSNECLLCAYNIEYGTNVSKDHDGECKEVVP
K VDCSRYPNTTNEEGKVVLRCNKDLSPVCGTDGVTYDNECLMCARN
O
S LEPGAIVGKKYDGECKKEIATVDCSDYPKPVCSLEYMPLCGSDSK
O)
IN TYSNKCNFCNAVVDSNGTLILSHFGKC
S Ovomukoidin 5 . SEO ID MTTAGVFVLLSFVLCCFPDAVFGVEVDCSTYPNTTNEEGKEVLVC kaltainen isoformi X1 NO: 34 TKILSPICGTDGVTYSNECLLCAYNIEYGTNVSKDHDGECKEVVP
[Pygoscelis . VDCSRYPNTTNEEGKVVLRCSKDLSPVCGTDGVTYDNECLMCARN adeliae]
LEPGAVVGKNYDGECKKEIATVDCSDYPKPVCSLEYMPLCGSDSK
TYSNKCNFCNAVVDSNGTLTLSHFGKC
Ovomukoidi . SEO ID MSSONOLPSRCRPLPGSODLNKYYOPHCTGDRFCWLFYVIVEOFRH isoform X1 [Aptenodytes NO: 35 CICIYLOLALERPSHEOSGOPADSRNTSITMTTAGVFVLLSFALCCF forsteri]
PDAVFGVEVDCSTYPNTTNEEGKEVLVCTKILSPICGTDGVTYSNE
CLLCAYNIEYGTNVSKDHDGECKEVVPVDCSRYPNTTNEEGKVVLR
CNKDLSPVCGTDGVTYDNECLMCARNLEPGAIVGKKYDGECKKEIA
TVDCSDYPKPVCSLEYMPLCGSDSKTYSNKCNFCNAVVDSNGTLIL
SHFGKC
Ovomukoidi, . . SEO ID MTTAVVFVLLSFALCCFPDAAFGVEVDCSTYPNSTNEEGKDVLVC osittainen [Antrostomus NO: 36 PKILGPICGTDGVTYSNECLLCAYNIOYGTNVSKDHDGECKEIVP carolinensis]
VDCSRYPNTTNEEGKVVFLCNKNFDPVCGTDGDTYDNECMLCARS
LEPGTTVGKKHDGECKREIATVDCSDYPKPTCSAEDMPLCGSDSK
TYSNKCNFCNAVV rovD . i SEO ID EAFAAFVDCSRFPNATDKEGKDVLVCNKDLRPICGTDGVITYTNDCL ilmennettynä pichiassa NO: 37 LCAYSIEFGTNISKEHDGECKETVPMNCSSYANTTSEDGKVMVLCN eritetty muoto 1 RAFNPVCGTDGVTYDNECLLCAHKVEOGASVDKRHDGGCRKELAAV
SVDCSEYPKPDCTAEDRPLCGSDNKTYGNKCNEFCNAVVESNGTLTL
SHEGKC rovD . i SEO ID EEGVSLEKREAFAAEVDCSRFPNATDKEGKDVLVCNKDLRPICGT ilmennettynä pichiassa NO: 38 DGVTYTNDCLLCAYSIEFGTNISKEHDGECKETVPMNCSSYANTT eritetty muoto 2 SEDGKVMVLCNRAFNPVCGTDGVTYDNECLLCAHKVEOGASVDKR
HDGGCRKELAAVSVDCSEYPKPDCTAFDRPLCGSDNKTYGNKCNF
CNAVVESNGTLTLSHFGKC rovD:n [gallus] SEQ ID MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAQI PAEAVIGYSDLE en koodaussek- NO: 39 GDFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKREAEAA
N venssi, joka o K n EVDCSRFPNATDKEGKDVLVCNKDLRPICGTDGVTYTNDCLLCAY & sisaltaa alfa
O mating factor SIEFGTNISKEHDGECKETVPMNCSSYANTTSEDGKVMVLCNRAF o -signaalisek- ! venssin NPVCGTDGVTYDNECLLCAHKVEOGASVDKRHDGGCRKELAAVSV <t
N (lihavoitu) DCSEYPKPDCTAEDRPLCGSDNKTYGNKCNFCNAVVESNGTLTLS
T ilmennettynä & pichiassa HFGKC
Kalkkuna-
R . SEO ID MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAQI PAEAVIGYSDLE
S kondorin + OVD:n NO: 40 GDFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKREAEAV
Q koodaussek- o . . EVDCSTYPNTTNEEGKEVLVCTKILSPICGTDGVTYSNECLLCAY
S venssi, joka > sisältää NIEYGTNVSKDHDGECKEFVPVDCSRYPNTTNEDGKVVLLCNKDL eritys-
signaaleja . . SPICGTDGVTYDNECLLCARNLEPGTSVGKKYDGECKKEIATVDC ilmennettynä pichiassa SDYPKPVCSLEYMPLCGSDSKTYSNKCNFCNAVVDSNGTLTLSHF lihavoitu on alfa mating GRC factor - signaalisek- venssi
Kalkkunakon- . SEQ ID EAEAVEVDCSTYPNTTNEEGKEVLVCTKILSPICGTDGVTYSNEC dorin OVD eritetyssa NO: 41 LLCAYNIEYGTNVSKDHDGECKEFVPVDCSRYPNTTNEDGKVVLL muodossa . CNKDLSPICGTDGVTYDNECLLCARNLEPGTSVGKKYDGECKKEI ilmennetty
Pichiassa ATVDCSDYPKPVCSLEYMPLCGSDSKTYSNKCNFCNAVVDSNGTL
TLSHFGKC
Kolibrin OVD (natiivi SEO ID MTMAGVFVLLSFILCCFPDTAFGVEVDCSIYPNTTSEEGKEVIVCT sekvenssi) NO: 42 ETLSPICGSDGVTYNNECOLCAYNVEYGTNVSKDHDGECKEIVPVD lihavoitu on se. CSRYPNTTEEGRVVMLCNKALSPVCGTDGVTYDNECLLCARNLESG natiivi signaalisek- TSVGKKFDGECKKEIATVDCTDYPKPVCSLDYMPLCGSDSKTYSNK venssi
CNFCNAVMDSNGTLTINHFGKC
Kolibrin OVD:n
SEO ID MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAOIPAEAVIGYSDLE koodaussek- venssi NO: 43 GDFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLDKREAEAV ilmennettynä . . EVDCSIYPNTTSEEGKEVLVCTETLSPICGSDGVTYNNECQLCAY
Pichiassa lihavoitu on NVEYGTNVSKDHDGECKEIVPVDCSRYPNTTEEGRVVMLCNKALS alpha mating factor - PVCGTDGVTYDNECLLCARNLESGTSVGKKFDGECKKEIATVDCT signaalisek- DYPKPVCSLDYMPLCGSDSKTYSNKCNFCNAVMDSNGTLTLNHFG venssi
KC
Kolibrin OVD . . SEO ID EAEAVEVDCSIYPNTTSEEGKEVLVCTETLSPICGSDGVTYNNEC erietyssä muodossa NO: 44 OLCAYNVEYGTNVSKDHDGECKEIVPVDCSRYPNTTEEGRVVMLC
Pichiasta
NKALSPVCGTDGVTYDNECLLCARNLESGTSVGKKFDGECKKEIA
TVDCTDYPKPVCSLDYMPLCGSDSKTYSNKCNFCNAVMDSNGTLT on LNHFGKC
N rOvL
O . . SEO ID MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAOIPAEAVIGY SDLEG
N ilmennettynä 0 pichiassa NO: 45 DFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLDKREAEAKVE
S lihavoitu on . GRCELAAAMKRHGLDNYRGYSLGNWVCAAKFESNFNTOATNRNTDG alpha mating factor - STDYGILOINSRWWCNDGRTPGSRNLCNIPCSALLSSDITASVNCA = signaalisek- a : KKIVSDGNGMNAWVAWRNRCKGTDVOAWIRGCRL venssi
K rOVL Pichiasta o . o. SEO ID EAEAKVFGRCELAAAMKRHGLDNYRGYSLGNWVCAAKFESNFNTOA
S erittamisen = jälkeen NO: 46 TNRNTDGSTDYGILOINSRWWCNDGRTPGSRNLCNIPCSALLSSDI
N o TASVNCAKKIVSDGNGMNAWVAWRNRCKGTDVOAWIRGCRL
N
>”
Lysotsyymi
SEO ID | KVFGRCELAAAMKRHGLDNYRGYSLGNWVCAAKFESNFNTOATNRN (OVL) Gallus gallus:sta NO: 47 | TDGSTDYGILOINSRWWCNDGRTPGSRNLCNIPCSALLSSDITASV (ilman . . NCAKKIVSDGNGMNAWVAWRNRCKGTDVOAWIRGCRL signaalisek- venssiä)
Lysotsyymi
SEO ID | KVFGRCELAAAMKRHGLDNYRGYSLGNWVCVAKFESNFNTOATNRN
NO: 48 | TDGSTDYGILOINSRWWCNDGRTPGSRNLCNIPCSALLSSDITASV
NCAKKIVSDGNGMSAWVAWRNRCKGTDVOAWIRGCRL
Lysozyme C i SEQ ID | KVFERCELARTLKRLGMDGYRGI SLANWMCLAKWESGYNTRATNY (humaani)
NO: 49 | NAGDRSTDYGIFOINSRYWCNDGKTPGAVNACHLSCSALLODNIA
DAVACAKRVVRDPOGIRAWVAWRNRCONRDVROYVOGCGV
Lysotsyymi C
SEQ ID | KVFERCELARTLKKLGLDGYKGVSLANWLCLTKWESSYNTKATNY (Bos taurus)
NO: 50 | NPSSESTDYGIFQINSKWWCNDGKTPNAVDGCHVSCRELMENDIA
KAVACAKHIVSFOGITAWVAWKSHCRDHDVSSYVEGCTL
Lysotsyymi
SEO ID | MRSLLILVLCFLPLAALGKVFGRCFLAAAMKRHGLDNYRGYSLGN (OVL) Gallus gallus:sta NO: 51 | WVCAAKFESNFNTOATNRNTDGSTDYGILOINSRWWCNDGRTPGS
Natiivi . . . RNLCNIPCSALLSSDITASVNCAKKIVSDGNGMNAWVAWRNRCKG erityssignaali on lihavoitu TDVOAWIRGCRL
OCH1:EndoH
SEQ ID | MAKADGSLLYYNPHNPPRRYYFYMAIFAVSVICVLYGPSQQLSSP fuusioprote- iini NO: 52 | KIDASAPAPVKOGPTSVAYVEVNNNSMLNVGKYTLADGGGNAFDV
AVIFAANINYDTGTKTAYLHFNENVORVLDNAVTOIRPLO00GIK
VLLSVLGNHOGAGFANFPSO0AASAFAKOLSDAVAKYGLDGVDFD
DEYAFYGNNGTAOPNDSSFVHLVTALRANMPDKIISLYNIGPAAS
RLSYGGVDVSDKFDYAWNPYYGTWOVPGIALPKAOLSPAAVEIGR
TSRSTVADLARRTVDEGYGVYLT YNLDGGDRTADVSAFTRELYGS
EAVRTP
0 TOVD tai rOVL voi sisältää muitakin
N
S sekvenssejä. rTOVD:n ja rOVL:n lilmentäminen 0 isäntäsolussa, esimerkiksi Pichia-lajissa, o + 5 Saccharomyces-lajissa, Trichoderma-lajissa,
N L. Lo ny CL
Pseudomonas-lajissa voi johtaa peptidien lisääntymiseen
I oc . . MN a OVD:n tai OVL:n sekvenssissa osana posttranskriptionaalisia tai posttranslationaalisia
S modifikaatioita. Tällaiset peptidit eivät välttämättä 0
N 10 kuulu natiivin OVD:n tai OVL:n sekvensseihin.
N , . . . . oa . . 5 Esimerkiksi OVD:n sekvenssin ilmentäminen Pichia-
lajissa, kuten Komagataella phaffii ja Komagataella pastoris voi johtaa peptidin lisäykseen N-terminuksessa tai C-terminuksessa. Joissakin tapauksissa OVD:n sekvenssin N-terminukseen tulee tetrapeptidi EAFA (SFO
ID NO: 53) isäntäsolussa ilmentämisen johdosta.
Joissakin suoritusmuodoissa rOVD tai rOVL tai molemmat sisältävät aminohapot EAEA N-terminuksessa. OVD- tai
OVL-proteiinisekvenssi voi sisältää signaalisekvenssin, kuten ohjaamaan erittymistä isäntäsolusta. Joissakin tapauksissa signaalisekvenssi voi olla natiivi signaalisekvenssi. Joissakin tapauksissa signaalisekvenssi voi olla heterologinen signaalisekvenssi. Esimerkiksi alfa mating factor - signaalisekvenssi voidaan fuusioida OVD:n tai OVL:n sekvenssiin ilmennettäväksi ja eritettäväksi hiivasolussa kuten Pichia sp. Joissakin tapauksissa signaalisekvenssi poistuu kokonaan tai osittain, kun proteiini, kuten rOVD tai rOVL, erittyy isäntäsolusta.
TOVD ja/tai rOVL voi olla OVD:n ja/tai OVL:n ei-luonnollisesti esiintyvä variantti. Tällainen variantti voi käsittää yhden tai useamman aminohappoinsertion, -deleetion, tai -substituution suhteessa natiivin OVD:n tai natiivin OVL:n sekvenssiin.
Tällaisella TOVD-variantilla voi olla — vähintään 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 3, 98 3, tai 99 % sekvenssi-identtisyyttä sekvensseihin
SEO ID NO: 1-44 nähden. rOVL-variantilla voi olla & vähintään 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97
N 2, 98 %, tai 99 % sekvenssi-identtisyyttä sekvensseihin 3 30 SEQ ID NO: 45-51 nähden. Tässä aminohapposekvenssien
N yhteydessä käytetty termi "sekvenssi-identtisyys” = määritellään siten, mikä prosenttiosuus
N kandidaattisekvenssissä olevista aminohappotähteistä on
S identtisiä valitussa sekvenssissä olevien 2 35 aminohappotähteiden kanssa, kun sekvenssit on
N kohdennettu keskenään ja lisätty tarvittaessa välejä sekvenssi-identtisyyden maksimiprosentin saavuttamiseksi, ja ottamatta huomioon mitään konservatiivisia substituutioita osana sekvenssi- identtisyyttä. Kohdentaminen prosentuaalisen aminohapposekvenssi-identtisyyden määrittämiseksi voidaan saada aikaan eri tavoilla, jotka ovat tunnettuja alan ammattilaiselle, esimerkiksi käyttämällä yleisesti saatavilla olevia tietokoneohjelmistoja kuten BLAST,
BLAST-2, ALIGN, ALIGN-2 tai Megalign (DNASTAR) - ohjelmistoa. Alan ammattilaiset osaavat määrittää sopivat parametrit kohdentamisen mittaamiseksi, mukaan lukien mitkä tahansa algoritmit, joita tarvitaan maksimaalisen kohdentamisen aikaansaamiseksi verrattavien sekvenssien koko pituudella.
Joissakin suoritusmuodoissa variantti on sellainen, että se saa aikaan lisäominaisuuksia, kuten vähäisemmän allergeenisuuden. Esimerkiksi rOVD voi sisältää G162M:n ja/tai F167A:n (kuten sekvenssissä SEQ
ID NO: 3) suhteessa villityyppisen OVD:n sekvenssiin SEO
ID NO: 2, ja sillä voi olla vähäisempi allergeenisuus verrattuna villityyppisen OVD:n sekvenssiin.
TOVD:n ja/tai rOVL:n ilmentämiseen käytetystä isäntäorganismista riippuen rOVD:llä ja/tai rOVL:llä voi olla glykosylaatio-, asetylaatio-, tai fosforylaatiomalli, joka eroaa villityyppisestä OVD:stä (esim. natiivi OVD) tai villityyppisestä OVL:stä (esim. natiivi OVL). Esimerkiksi tässä esitetty rOVD ja/tai rOVL voi olla tai ei välttämättä ole glykosyloitunut, & asetyloitunut, tai fosforyloitunut. rOVD:llä ja/tai
N rOVL:llä voi olla linnun, ei-linnun, mikrobin, ei- 3 30 mikrobin, nisäkkään, tai ei-nisäkkään glykosylaatio-,
N asetylaatio-, tai fosforylaatiomalli. z rOVD ja/tai rOVL on ilmennetty
N rekombinanttisesti isäntäsolussa. Tässä käytettynä
S "isäntä” tai "isäntäsolu” tarkoittaa tässä mitä tahansa 2 35 proteiinia tuottavaa isäntää, joka on valittu tai
N muunneltu geneettisesti tuottamaan haluttu tuote.
Esimerkinomaisia isäntiä ovat sieni-, kuten rihmasieni-
, sekä bakteeri-, hiiva-, kasvi-, hyönteis-, ja nisäkässolut. Isäntäsolu voi olla Arxula spp., Arxula adeninivorans, Kluyveromyces spp. Kluyveromyces lactis, Komagataella phaffii, Pichia spp., Pichia angusta, Pichia pastoris, Saccharomyces spp.,
Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces spp.,
Schizosaccharomyces pombe, Yarrowia spp., Yarrowia lipolytica, Agaricus spp., Agaricus bisporus,
Aspergillus spp., Aspergillus awamori, Aspergillus fumigatus, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger,
Aspergillus oryzae, Bacillus subtilis, Colletotrichum spp., Colletotrichum gloeosporiodes, Endothia spp.,
Endothia parasitica, Escherichia coli, Fusarium spp.,
Fusarium graminearum, Fusarium solani, Mucor spp., Mucor miehei, Mucor pusillus, Myceliophthora Spp.,
Myceliophthora thermophila, Neurospora spp., Neurospora crassa, Penicillium spp., Penicillium camemberti,
Penicillium canescens, Penicillium chrysogenum,
Penicillium (Talaromyces) emersonii, Penicillium funiculo sum, Penicillium purpurogenum, Penicillium rogueforti, Pleurotus sPpp., Pleurotus ostreatus,
Rhizomucor spp., Rhizomucor miehei, Rhizomucor pusillus, Rhizopus spp., Rhizopus arrhizus, Rhizopus oligosporus, Rhizopus oryzae, Trichoderma sPpp.,
Trichoderma altroviride, Trichoderma reesei, tai
Trichoderma vireus. Isäntäsolu voi olla organismi, jonka
U.S. Food and Drug Administration on hyväksynyt & yleisesti turvalliseksi katsotuksi.
N Rekombinantti proteiini voi olla ilmennetty 3 30 rekombinanttisesti hiivassa, rihmasienessa tai
N bakteerissa. Joissakin suoritusmuodoissa rekombinantti = proteiini on ilmennetty rekombinanttisesti Pichia-
N lajissa ( Komagataella phaffii ja Komagataella
S pastoris), Saccharomyces-lajissa, Trichoderma-lajissa, 2 35 Trichoderma-lajissa, Pseudomonas-lajissa tai E. coli -
N lajissa.
Isäntäsolu voi olla transformoitu niin, että se sisältää yhden tai useampia ekspressiokasetteja.
Esimerkiksi isäntäsolu voi olla transformoitu niin, että se ilmentää yhtä ekspressiokasettia, kahta ekspressiokasettia, kolmea ekspressiokasettia tai useampia ekspressiokasetteja.
Joissakin tapauksissa rOVD ja/tai rOVL voi olla deglykosyloitunut tai sen glykosylaatiota on voitu modifioida (esim. kemiallisesti, entsymaattisesti endoglukanaaseilla (kuten EndoH), endoglykosidaaseilla, mannosidaaseilla (kuten alfa-1,2-mannosidaasi), PNGaasi
F:llä, O-glykosidaasilla, OCH1:llä, neuraminidaasilla, £3,1-4-galaktosidaasilla, £3-N- asetyyliglukosaminidaaseilla, jne.), deasetyloitunut (esim. proteiinideasetylaasi, histonideasetylaasi, sirtuiini), tai defosforyloitunut (esim. hapan fosfataasi, lambdaproteiinifosfataasi, vasikan suolen fosfataasi, alkalinen fosfataasi). Deglykosylaatio, deasetylaatio tai defosforylaatio voi tuottaa proteiinin, joka on yhtenäisempi tai joka Pystyy tuottamaan koostumuksen, jossa on vähemmän vaihtelua.
Esillä olevassa julkaisussa esitetään rekombinantin OVD:n glykosylaation modifioiminen proteiinin ja/tai sen tuotannon yhden tai useamman funktionaalisen ominaisuuden muuttamiseksi tai parantamiseksi. Isäntäsolu voi käsittää heterologisia entsyymejä, jotka modifioivat ovomukoidin & glykosylaatiomallia. Joissakin tapauksissa TOVD-
N proteiinin glykosylaation modifioimiseen voidaan 3 30 kayttaa yhtä tai useampaa entsyymiä. TOVD:n
N glykosylaation modifioimiseen käytettävä entsyymi voi = olla entsyymi tai fuusioproteiini, joka käsittää
N entsyymin tai entsyymin aktiivisen fragmentin,
S esimerkiksi EndoH tai OCHl:n fuusio EndoH:hon (kuten 2 35 EndoH-entsyymin Golgin retention aikaansaamiseksi)
N voidaan järjestää isäntäsoluun.
Natiivilla ovomukoidilla (nOVD), kuten kanan tai muun linnun munasta eristetyllä, on erittäin kompleksinen haaroittunut glykosylaation muoto.
Glykosylaatiomalli käsittää N-kiinnittyneitä glykaanirakenteita kuten N- asetyyliglukosamiiniyksikköjä ja N-kiinnittyneitä mannoosiyksikköjä. Ks. esim. kuva 1B (vasemmanpuoleinen sarake). Joissakin tapauksissa tässä esitetyssä nautittavissa olevassa koostumuksessa käytettävällä ja tässä kuvattuja menetelmiä käyttämällä tuotetulla rTOVD:llä on glykosylaatiomalli, joka eroaa nOVD:n glykosylaatiomallista. Esimerkiksi kun rOVD on tuotettu
Pichia-lajissa, proteiini voi olla erittäin glykosyloitunut. Kuva 1C esittää P. pastorisin tuottaman
TOVD:n glykosylaatiomalleja, ja siitä näkyy kompleksinen haaroittunut glykosylaatiomalli. Tässä esitettyjen koostumusten ja menetelmien joissakin suoritusmuodoissa TOVD on käsitelty niin, että glykosylaatiomallia on modifioitu suhteessa nOVD:hen ja modifioitu myös verrattuna Pichia-lajin tuottamaan rOVD: hen ilman tällaista käsittelyä. Joissakin tapauksissa roVD:llä ei ole glykosylaatiota. Toisissa tapauksissa rOVD:11a on vähäisempi glykosylaatio.
Joissakin tapauksissa rOvD: ta on modifioitu N- asetyyliglukosamiinilla proteiinin yhdessä tai useammassa asparagiinitähteessä ja siinä ei ole tai siinä ei ole olennaisesti N-kiinnittynyttä & mannosylaatiota. Ks. esim. kuva 1B (oikeanpuoleinen
N sarake). Tässä kuvatut muutokset glykosylaatiossa 3 30 voivat johtaa rOVD:n liukenevuuden Ja kirkkauden
N kasvamiseen verrattuna muihin proteiinimuotoihin kuten = heraproteiineihin, soijaproteiineihin,
N herneproteiineihin, ja nOVD:hen.
S Joissakin tapauksissa glykosylaation
Q 35 modifioimiseen kaytettava entsyymi voi olla
N transformoitu isäntäsoluun. Joissakin tapauksissa glykosylaation modifioimiseen käytettävä entsyymi voi olla transformoitu samaan isäntäsoluun, joka tuottaa rOovD: ta. Joissakin tapauksissa entsyymi voidaan järjestää väliaikaisesti isäntäsoluun, kuten indusoitavalla ekspressiojärjestelmällä. Joissakin tapauksissa kun isäntäsolu ilmentää glykosylaation modifioimiseen käytettävää entsyymiä, rekombinantti proteiini (esim. rOVD ja rOVL) erittyy isäntäsolusta modifioidussa tilassa.
Yhtenä esimerkkinä OVD:tä tuottava isäntäsolu käsittää EndoH ja OCHl-entsyymien fuusion.
Esimerkinomainen OCH1-EndoH-proteiinisekvenssi on esitetty sekvenssinä SEQ ID No: 52. Tällaisissa tapauksissa isäntäsolusta tuotettu TOVD käsittää glykosylaatiomallin, joka eroaa olennaisesti rOVD:stä, joka on tuotettu solussa ilman tällaisia entsyymejä.
Tällaisissa tapauksissa tuotettu TOVD on myös olennaisesti erilainen verrattuna natiiviin OVD:hen (esim. kanan tai muun linnun munasta tuotettuun). Kuva 1B esittää nOVD:n (jossa on mannoositähteitä) ja rOVD:n glykosylaatiomallien vertailua, jossa rOVD on käsitelty
EndoH:lla ja käsittää N-asetyyliglukosamiinitähteen asparagiinissa mutta ei mannoositähteitä. Kuva 1C esittää isäntäsolussa kuten P. pastorisissa tuotetun
TOVD:n glykosylaatiomallin, jossa rOVD:ta ei ole käsitelty EndoH:lla ja siinä on sekä N- asetyyliglukosamiinitähteitä että N-kiinnittyneiden mannoositähteiden ketjuja. TOVD:n glykosylaation & modifioiminen voi aikaansaada rOVD:lle
N ravitsemuksellisia etuja, kuten suuremman typpi-hiili- 3 30 suhteen, ja voi parantaa proteiinin kirkkautta ja
N liukenevuutta. Joissakin tapauksissa TOVD:n = glykosylaation modifioiminen tapahtuu TOVD:tä
N tuottavassa isäntäsolussa ennen kuin rOVD erittyy
S isäntäsolusta ja/tai ennen rOVD:n eristamista. 2 35 Joissakin tapauksissa TOVD:n glykosylaation
N modifioiminen tapahtuu sen erittymisen jälkeen ja/tai sen jälkeen kun rOVD on eristetty isäntäsolusta.
TOVD:n molekyylipaino voi olla eri verrattuna nOVD:hen. Proteiinin molekyylipaino voi olla pienempi kuin nOVD:n molekyylipaino tai pienempi kuin rOVD:llä, joka on tuotettu isäntäsolulla, jossa TOVD:n glykosylaatiota ei ole modifioitu. Suoritusmuodoissa
TOVD:n molekyylipaino voi olla 20 kDa — 40 kDa. Joissakin tapauksissa rOVD:llä, jonka glykosylaatiota on modifioitu, on eri molekyylipaino, kuten verrattuna natiiviin OVD:hen (lintuisäntälajin tuottamana) tai verrattuna isäntäsoluun, joka glykosyloi rOVD:n, kuten jossa rTOVD sisältää N-kiinnittyneen mannosylaation.
Joissakin tapauksissa rOVD:n molekyylipaino on suurempi kuin rOVD:n, jossa ei ole lainkaan posttranslatorisia modifikaatioita, tai rOVD:n, jossa ei ole mitään N- kiinnittyneen glykosylaation muotoja. rOVD:n tai rOVL:n ilmentäminen voidaan aikaansaada ekspressiovektorilla, plasmidilla, nukleiinihapolla, joka integroidaan isännän genomiin, tai muilla välineillä. Esimerkiksi ilmentämisessä käytettävä vektori voi sisältää: (a) promoottorielementin, (b) signaalipeptidin, (c) heterologisen OVD- tai OVL-sekvenssin, ja (d) terminaattorielementin.
Ekspressiovektoreita, joita voidaan käyttää
OVD:n ja OVL:n ilmentämiseen, ovat sellaiset, jotka sisältävät ekspressiokasetin, jossa on elementit (a), (b), (c) ja (d) . Joissakin suoritusmuodoissa & signaalipeptidin (c) ei tarvitse sisältyä vektoriin.
N Yleensä ekspressiokasetti on suunniteltu välittämään 3 30 siirtogeenin transkriptiota, kun se integroidaan samaa
N alkuperää olevan isäntämikro-organismin genomiin. = Vektorin monistamisen helpottamiseksi ennen
N transformaatiota isäntämikro-organismiin voidaan
S vektoriin sisällyttää replikaation alkukohta (e) (kuten 2 35 PUC ORIC ja PUC (DNA2.0)) . Fkspressiovektorilla
N stabiilisti transformoitavan mikro-organismin valitsemisen helpottamiseksi vektori voi sisältää myös selektiomarkkerin (f) kuten URA3-geenin ja Zeocin- resistenssigeenin (ZeoR) . Fkspressiovektori voi sisältää myös restriktioentsyymikohdan (9), joka mahdollistaa ekspressiovektorin linearisoinnin ennen transformoimista isäntämikro-organismiin ekspressiovektorin stabiilin isännän genomiin integroitumisen helpottamiseksi. Joissakin suoritusmuodoissa ekspressiovektori voi sisältää elementtien (b), (e), (f), ja (g) minkä tahansa osajoukon, tai ei mitään elementeistä (b), (e), (f), ja (g). Tässä kuvattujen elementtien kanssa tai niiden sijaan voidaan käyttää muitakin alan ammattilaisen tuntemia ekspressioelementtejä ja vektorielementtejä.
Esimerkinomaisia promoottorielementtejä (a) voivat olla, seuraaviin rajoittumatta, konstitutiivinen promoottori, indusoituva promoottori, ja hybridipromoottori. Promoottoreita ovat, seuraaviin rajoittumatta, acu-5, adhl+, alkoholidehydrogenaasi (ADH1, ADH2, ADH4), AHSB4m, AINV, alcA, o-amylaasi, vaihtoehtoinen oksidaasi (AOD), alkoholioksidaasi I (AOX1), alkoholioksidaasi 2 (A0X2), AXDH, B2, CaMV, sellobiohydrolaasi I (cbh1), ccg-1, cDNA1, solufilamenttipolypeptidi (cfp), cpc-2, ctr4+, CUPL, dihydroksiasetonisyntaasi (DAS), enolaasi (ENO, ENO1), formaldehydidehydrogenaasi (FLD1), FMD, formaattidehydrogenaasi (FMDH), Gl, G6, GAA, GALl, GAL2,
GAL3, GAL4, GALL, GAL6, GAL7, GALS, GALS, GAL10, GCW14,
N gdhA, gla-1, «-glukoamylaasi (glaA), glyseraldehydi-3-
N fosfaattidehydrogenaasi (gpdA, GAP, GAPDH) , 3 30 fosfoglyseraattimutaasi (GPM1) , glyserolikinaasi
N (GUT1), —HSP82, invlt, isositraattilyaäsi (ICL1), = asetohydroksihappoisomeroreduktaasi (ILV5), KAR2,
N KEX2, f3-galaktosidaasi (lac4), LEU2, mel0, MET3,
S metanolioksidaasi (MOX), nmtl, NSP, pcbC, PETS, 2 35 peroksiini 8 (PEX8), fosfoglyseraattikinaasi (PGK,
N PGK1), pho1, PHOS, PHO89, fosfatidyyli- inositolisyntaasi (PIS1), PYK1, pyruvaattikinaasi
(pkil), RPS7, sorbitolidehydrogenaasi (SDH) , 3- fosfoseriiniaminotransferaasi (SER1), SSA4, sV40, TEF, translaation pidennystekijä 1 alfa (TEF1), 1THI11, homoseriinikinaasi (THR1), tpi, TPS1, trioosifosfaatti- isomeraasi (TPI1), XRP2, YPT1, sekvenssi tai alasekvenssi, joka on valittu sekvensseistä SEO ID No: 121 - 132, ja niiden mikä tahansa yhdistelmä.
Esimerkinomaisia indusoituvia promoottoreita ovat metanoli-indusoituvat promoottorit, esim. DAS1 ja pPEX11.
Signaalipeptidi (b), josta käytetään myös nimitystä signaalisekvenssi, kohdistussianaali, lokalisaatiosignaali, lokalisaatiosekvenssi, signaalipeptidi, kuljetuspeptidi, johtosekvenssi, tai johtopeptidi, voi tukea proteiinin tai polynukleotidin erittymistä. Rekombinantin tai heterologisesti ilmennetyn proteiinin solunulkoinen erittyminen isäntäsolusta voi helpottaa proteiinin puhdistusta.
Signaalipeptidi voi olla peräisin proteiinin prekursorista (esim. prepropeptidi, preproteiini).
Signaalipeptidit voivat olla peräisin muun proteiinin prekursorista kuin signaalipeptidit natiivissa OVD:ssä ja/tai OVL:ssä.
Mitä tahansa nukleiinihapposekvenssiä, joka koodaa OVD:tä ja/tai OVL:ää, voidaan käyttää elementtinä (c). Edullisesti tällainen sekvenssi on kodonioptimoitu isäntäsolulle. & Esimerkinomaisia transkription
N terminaattorielementtejä ovat, seuraaviin 3 30 rajoittumatta, acu-5, adhl+, alkoholidehydrogenaasi
N (ADH1, ADH2, ADH4), AHSB4m, AINV, alcA, oo-amylaasi, = vaihtoehtoinen oksidaasi (AOD), alkoholioksidaasi I
N (AOX1), alkoholioksidaasi 2 (AO0X2), AXDH, B2, CaMV,
S sellobiohydrolaasi I (cbh1), ccg-1, cDNA1, 2 35 solufilamenttipolypeptidi (cfp), cpc-2, ctr4+, CUPL,
N dihydroksiasetonisyntaasi (DAS), enolaasi (ENO, ENO1), formaldehydidehydrogenaasi (FLD1), FMD,
formaattidehydrogenaasi (FMDH), Gl, G6, GAA, GALl, GAL2,
GAL3, GAL4, GALL, GAL6, GAL7, GALS, GALS, GAL10, GCW14, gdhA, gla-1, «-glukoamylaasi (glaA), glyseraldehydi-3- fosfaattidehydrogenaasi (gpdA, GAP, GAPDH) , fosfoglyseraattimutaasi (GPM1) , glyserolikinaasi (GUT1), HSP82, invl+, isositraattilyaasi (ICL1), asetohydroksihappoisomeroreduktaasi (ILV5), KAR2,
KEX2, f3-galaktosidaasi (lac4), LEU2, mel0, MET3, metanolioksidaasi (MOX), nmtl, NSP, pcbC, PETO9, peroksiini 8 (PEX8), fosfoglyseraattikinaasi (PGK,
PGK1), phol, PHOS, PHO89, fosfatidyyli- inositolisyntaasi (PIS1), PYK1, pyruvaattikinaasi (pkil), RPS7, sorbitolidehydrogenaasi (SDH) , 3- fosfoseriiniaminotransferaasi (SER1), SSA4, SV40, TEF, translaation pidennystekijä 1 alfa (TEF1), 1THI11, homoseriinikinaasi (THR1), tpi, TPS1, trioosifosfaatti- isomeraasi (TPI1), XRP2, YPT1, ja niiden mikä tahansa yhdistelmä.
Esimerkinomaisia selektiomarkkereita (f) voivat olla seuraaviin rajoittumatta: antibioottiresistenssigeeni (esim. zeocin, ampisilliini, blastisidiini, kanamysiini, nurseotrisiini, kloramfenikoli, tetrasykliini, triklosaani, gansikloviiri, ja niiden mikä tahansa yhdistelmä), auksotrofinen markkeri (esim. adel, arg4, his4, ura3, met2, ja niiden mikä tahansa yhdistelmä).
Yhtenä esimerkkinä vektori Pichia-lajissa & ilmentämistä varten voi sisältää A0X1-promoottorin,
N joka on liitetty toiminnallisesti signaalipeptidiin 3 30 (alpha mating factor), joka on fuusioitu kehyksessä
N OVD:tä ja/tai OVL:ää koodaavan nukleiinihapposekvenssin = kanssa, ja terminaattorielementin (AOXl-terminaattori)
N välittömästi alavirtaan OVD: tä ja/tai OVL:ää
S koodaavasta nukleiinihapposekvenssistä. 2 35 Toisena esimerkkinä vektori käsittää DAS1-
N promoottorin, joka on liitetty toiminnallisesti signaalipeptidiin (alpha mating factor), joka on fuusioitu kehyksessä OVD:tä ja/tai OVL:ää koodaavan nukleiinihapposekvenssin kanssa, ja terminaattorielementin (AOX1-terminaattori) välittömästi alavirtaan OVD:stä ja/tai OVL:sta.
Tässä kuvattu rekombinantti proteiini voi olla erittynyt yhdestä tai useammasta isäntäsolusta.
Joissakin suoritusmuodoissa rOVD- ja/tai rOVL-proteiini erittyy isäntäsolusta. Erittynyt rOVD ja/tai rOVL voidaan eristää ja puhdistaa menetelmillä kuten sentrifugointi, fraktiointi, suodatus, affiniteettipuhdistus ja muilla menetelmillä proteiinin erottamiseksi soluista, nestemäisistä ja kiinteistä väliainekomponenteista ja muista sellulaarisista tuotteista ja sivutuotteista. Joissakin suoritusmuodoissa rOVD ja/tai rOVL on tuotettu Pichia- lajissa ja se erittyy isäntäsoluista viljelyväliaineeseen. Erittynyt TOVD ja/tai rOVL erotetaan sitten muista valiainekomponenteista jatkokäyttöä varten.
Joissakin tapauksissa useita OVD:n käsittäviä vektoreita voidaan transfektoida yhteen tai useampaan isäntäsoluun. Isäntäsolu voi käsittää useamman kuin yhden kopion OVD:stä. Yksi isäntäsolu voi käsittää 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 tai 20 kopiota OVD:stä. Yksi isäntäsolu voi käsittää yhden tai useamman vektorin OVD:n ilmentämiseksi. Yksi isäntäsolu voi käsittää 2, 3, 4, & 5 6, 7, 8, 9 tai 10 vektoria OVD:n ilmentämiseksi.
N Jokainen vektori isäntäsolussa voi käynnistää OVD:n 3 30 ilmentamisen käyttämällä samaa promoottoria.
N Vaihtoehtoisesti eri promoottoreita voidaan käyttää eri = vektoreissa OVD:n ilmentämiseksi.
N Tässä esitetyt nautittavissa olevat tuotteet
S ja TOVD:n ja/tai rOVL:n koostumukset voivat olla 2 35 sisältämättä olennaisesti mitään mikrobisoluja tai
N mikrobisolukontaminantteja. Esimerkiksi rOVD ja/tai rOVL voidaan eristää mikrobikasvustoa käsittävästä viljelmästä.
TOVD voidaan käsitellä kemiallisesti tai entsymaattisesti ennen kuin se puhdistetaan käytettäväksi nautittavissa olevassa koostumuksessa.
Tällaisia käsittelyjä voidaan suorittaa epäpuhtauksien vähentämiseksi rTOVD-proteiinikoostumuksesta. Tällaisia käsittelyjä voidaan suorittaa TOVD- proteiinikoostumuksen aistiominaisuuksien parantamiseksi. Käsittelyjä voivat olla seuraaviin rajoittumatta puhdistusvaiheet, suodatus, kemialliset käsittelyt, ja entsymaattiset käsittelyt.
Joissakin tapauksissa TOVD-proteiini ja koostumukset, jotka sisältävät rOVD-proteiinia, mukaan lukien TOVD:n muodot, joissa glykosylaatiota on modifioitu (esim. sellaiset muodot, joissa on N- asetyyliglukosamiini mutta joissa ei ole N- kiinnittyneitä mannoositähteitä) voidaan käsitellä hapettavalla aineella tai happea tuottavalla aineella
TOVD-koostumuksen komponenttien, kuten epäpuhtauksien, modifioimiseksi. Hapettava aine tai happea tuottava aine voi käsittää vetyperoksidin, natriumperkarbonaatin, aktivoidun klooridioksidin, kuplitetun hapen tai otsonin. Käsittely voi parantaa rOVD-koostumuksen liukenevuutta ja kirkkautta. Käsittely voi vähentää
TOVD-koostumuksen hajua. Käsittely voi neutraloida rOVD- koostumuksen väriä; esimerkiksi rOVD-koostumus voi & menettää väriä käsittelyn jälkeen, esim. vähemmän
N voimakkaan/vaaleamman väriseksi. Suoritusmuodoissa väri 3 30 voi muuttua vihertävästä kellertäväksi ja/tai
N kellertävästä olennaisesti värittömäksi. = Joissakin esimerkeissä rOVD voidaan käsitellä
N hapettavalla aineella tai happea tuottavalla aineella,
S esim. vetyperoksidilla tai natriumperkarbonaatilla, 2 35 ennen kuin se puhdistetaan käytettäväksi nautittavissa
N olevassa koostumuksessa. Erittynyttä tai eristettyä rTOVD:tä käsittävä viljelyväliaine voidaan käsitellä happea tuottavalla aineella, esim. vetyperoksidilla tai natriumperkarbonaatilla. Kun käytetään esimerkkinä vetyperoksidia, vetyperoksidikäsittelyä voi seurata yksi tai useampi pesuvaihe ja/tai suodatusvaihe vetyperoksidin poistamiseksi tuloksena olevista rOVD:n koostumuksista. Tällaiset vaiheet voidaan suorittaa muillakin happea tuottavilla aineilla, esim. natriumperkarbonaatilla, tehtyjen käsittelyjen jälkeen.
Joissakin tapauksissa rOVD:n käsittelemiseen käytetyn vetyperoksidin konsentraatio voi olla 1 % - 20
Zz. TOVD:n — käsittelemiseen käytetyn vetyperoksidin konsentraatio voi olla vähintään 1 Zz. TOVD:n käsittelemiseen käytetyn vetyperoksidin konsentraatio voi olla korkeintaan 20 3. frTOVD:n käsittelemiseen käytetyn vetyperoksidin konsentraatio voi olla 1 % - 2 %3, 1 % - 35%, 1 %8 - 7 5, 1 %3 - 10 3, 1 8% - 12 3, 1 % - 15%, 1 %3 - 17 3, 1 %3 - 20 3, 2 3 - 53 , 285 - 7 %, 2 % - 10 %, 2 %$ — 12 3, 2 %$ - 15%, 2 & — 17 %, 2 % - 20 %, 5 3-7 3, 5 % - 10 3, 5% - 12 %, 5% - 15%, 5 % - 17 %, 5% - 20%, 7% - 10 3, 7% — 12 83, 7 % - 15 3, 7 % - 17 %, 7% - 20 3, 10 & - 12 &, 10 %$ - 15 %, 10 3 — 17 %, 10 %$ - 20 %, 12 & - 15 %, 12 & — 17 %, 12 % — 20 %, 15 %$ - 17 %, 15 % - 20 3, tai 17 % - 20 % paino/kokonaispaino (p/p) ja/tai paino/kokonaistilavuus (p/t). rOVD:n käsittelemiseen käytetyn vetyperoksidin konsentraatio voi olla noin 1 3, 2 3, 5 3, 7 %, 10 %, 12 %, 15 %, 17 3, tai 20 % p/p tai p/t. rOVD:n & käsittelemiseen käytetyn vetyperoksidin konsentraatio
N voi olla vähintään 1 %, 2 3, 5%, 7 %, 10 %, 12 3, 15 % 3 30 tai 17 % p/p tai p/t. rOVD:n käsittelemiseen käytetyn
N vetyperoksidin konsentraatio voi olla korkeintaan 2 %, = 5%, 7%, 10%, 12 3, 15 %, 17 %, tai 20 % p/p tai p/t.
N rOvD:ta voidaan käsitellä vetyperoksidilla
S rajoitettu aika. Esimerkiksi rOVD voidaan altistaa 2 35 vetyperoksidille vähintään 1 tunnin, 2 tunnin, 3 tunnin,
Q 5 tunnin, 7 tunnin, 10 tunnin, 12 tunnin, 15 tunnin, 17 > tunnin, 20 tunnin, 22 tunnin, 24 tunnin, 26 tunnin, 28 tunnin, 30 tunnin, 34 tunnin, 36 tunnin, 40 tunnin, 44 tunnin tai 48 tunnin ajaksi. rOVD:n viljelyväliaineeseen voidaan lisätä vetyperoksidia koko viljelyprosessin ajan.
TOVD voidaan käsitellä vetyperoksidilla pH- arvossa, joka on noin 3 - 6. rOVD voidaan käsitellä vetyperoksidilla pH-arvossa, joka on noin 3, 3,2, 3,4, 3,6, 3,8, 4, 4,1, 4,2, 4,4, 4,6, 4,8, 5, 5,2, 5,4, 5,6, 5,8 tai 6. rOVD voidaan käsitellä vetyperoksidilla pH- arvossa, joka on vähintään 3, 3,2, 3,4, 3,6, 3,8, 4, 4,1, 4,2, 4,4, 4,6, 4,8, 5, 5,2, 5,4, 5,6 tai 5,8. rOvD voidaan käsitellä vetyperoksidilla pH-arvossa, joka on korkeintaan 3,2, 3,4, 3,6, 3,8, 4, 4,1, 4,2, 4,4, 4,6, 4,8, 5, 5,2, 5,4, 5,6, 5,8 tai 6.
TOVD voidaan suodattaa ennen käsittelyä happea tuottavalla aineella. Joissakin tapauksissa TOVD voidaan suodattaa ennen käsittelyä happea tuottavalla aineella ja sen jälkeen. — MÄÄRITELMÄT
Tässä käytetty terminologia on tarkoitettu ainoastaan tiettyjen tapausten kuvaamiseksi eikä sen ole tarkoitus olla rajoittava.
Tässä käytettynä, ellei toisin ilmoiteta, yksikössä käytetyt termit on tarkoitettu sisältämään monikkomuodot sekä yksikkömuodot, ellei asiayhteydestä e ilmene selvästi muuta.
S Termit *"käsittää”, “kasittava”, "sisältää,”
O "sisältävä,” “on”, tai niiden variaatiot käytettynä joko = 30 esillä olevassa selityksessä ja/tai suojavaatimuksissa
N on tarkoitettu inklusiivisiksi samalla tavoin kuin termi
E "käsittävä.”
S Termi “noin” tai "suunnilleen” tarkoittaa
S hyväksyttävän virhemarginaalin sisällä kyseiselle
N 35 arvolle alan normaalin ammattitaidon hallitsevan
S henkilön määrittelemänä, riippuen osittain siitä, kuinka arvo mitataan tai määritetään, esim.
mittausjärjestelmän rajoituksista. Esimerkiksi "noin” voi tarkoittaa 10 % suurempaa tai pienempää kuin mainittu arvo. Toisena esimerkkinä "noin” voi tarkoittaa 1 tai useamman kuin 1 keskihajonnan sisällä per käytäntö annetussa arvossa. Kun hakemuksessa ja suojavaatimuksissa kuvataan tiettyjä arvoja, ellei toisin mainita, termin "noin” tulee olettaa tarkoittavan hyväksyttävää virhemarginaalia kyseiselle arvolle.
Termi "olennaisesti” on tarkoitettu ilmaisemaan merkittävää laajuutta, tai suurimmaksi osaksi; tai essentiaalisesti. Toisin sanoen termi olennaisesti voi tarkoittaa lähes täsmälleen haluttua ominaisuutta tai vähäistä eroa täsmälliseen ominaisuuteen. Olennaisesti voi olla lähestulkoon sama kuin haluttu ominaisuus. Olennaisesti voi olla erotettavissa halutusta ominaisuudesta mutta ero on merkityksetön tai olematon.
Mikä tahansa tässä kuvattu näkökulma tai suoritusmuoto voidaan yhdistää minkä tahansa muun tässä esitetyn näkökulman tai suoritusmuodon kanssa.
ESIMERKIT
Seuraavat esimerkit annetaan keksinnön eri suoritusmuotojen havainnollistamiseksi eikä niitä ole tarkoitettu rajoittamaan esillä olevaa keksintöä millään tavalla. Esillä olevat esimerkit, sekä tässä en kuvatut menetelmät, kuvaavat esillä olevia edullisia
S suoritusmuotoja, ovat esimerkinomaisia, eikä niitä ole
O tarkoitettu rajoituksiksi keksinnön suojapiiriin. Alan = 30 ammattilaiset pystyvät tekemään niihin muutoksia ja
N käyttämään niitä muilla tavoilla, jotka kuuluvat z keksinnöllisen ajatuksen puitteisiin, jotka on
S määritelty suojavaatimuksissa.
I
S 35
D
Esimerkki 1: Ekspressiorakenteet, transformointi, proteiinin puhdistus ja prosessointi
OVD:n (SEQ ID NO: 1) ilmentämiseksi Pichia pastorisissa muodostettiin kaksi ekspressiorakennetta.
Ensimmäinen rakenne sisälsi alkoholioksidaasi 1 (A0X1) -promoottorin. OVD:n koodaussekvenssi fuusioitiin kehykseen alpha mating factor -signaalisekvenssin kanssa alavirtaan promoottorisekvenssistä.
Transkription terminaattori AO0X1-geenistä sijoitettiin alavirtaan OVD:n sekvenssistä. Ekspressiorakenne sijoitettiin Kpas-URA 3 -vektoriin.
Muodostettiin toinen ekspressiorakenne, joka sisälsi metanoli-indusoituvan DAS1-promoottorin (ATCC
No. 28485) ylävirtaan alpha mating factor - signaalisekvenssistä, joka fuusioitiin kehykseen samaa
OVD-proteiinisekvenssiä kuin ensimmäisessä ekspressiorakenteessa koodaavan nukleiinihapposekvenssin kanssa. Transkription terminaattori 4A0X1-geenistä sijoitettiin alavirtaan
OVD:n sekvenssistä.
Kummassakin ekspressiorakenteessa OVD:n sekvenssi oli kanasta (Gallus gallus) ja sillä oli sekvenssin SEO ID NO: 1 mukainen aminohapposekvenssi.
Molemmat ekspressiorakenteet transformoitiin
Pichia pastorisiin. Kummankin rakenteen onnistunut integroituminen varmistettiin genomisekvensoinnilla.
Fermentointi: Kummastakin & ekspressiorakenteesta tuotettiin rekombinanttia OVD:tä
N (rOVD) bioreaktorissa ympäristön olosuhteissa. Ympin 3 30 kasvatus fermentointiprosessiin aloitettiin
N inokuloimalla nestemäistä kasvatuslientä = ravistelupulloihin. Inokuloituja ravistelupulloja
N pidettiin ravistimessa, minkä jälkeen kasvatettu Pichia
S pastoris siirrettiin tuotantomittakaavan reaktoriin. 2 35 Viljelmää kasvatettiin 30 °C:ssa, asetetussa
N pH-arvossa ja liuenneessa hapessa (DO). Viljelmää syötettiin hiililähteellä.
Erittynyt rOVD puhdistettiin erottamalla solut nestemäisestä kasvatusliemestä, suorittamalla useita suodatusvaiheita, suorittamalla kromatografia käyttämällä ja kuivaamalla lopullinen proteiinituote puhtaan rOVD-jauheen tuottamiseksi.
Esimerkki 2: Ekspressiorakenne, transformointi, proteiinin puhdistus ja prosessointi
OVD:n (SEO ID NO: 1) kypsän muodon ilmentämiseksi Pichia pastorisissa muodostettiin kolme ekspressiorakennetta. Ensimmäinen rakenne sisälsi
AOX1-promoottorin. OVD:n koodaussekvenssi fuusioitiin kehykseen alpha mating factor -signaalisekvenssin kanssa alavirtaan promoottorisekvenssistä (SEO ID NO: 39). Transkription terminaattori AOX1-geenistä sijoitettiin alavirtaan OVD:n sekvenssistä.
Isäntäsoluissa oli yksitoista kopiota OVD:stä, ja niistä kymmenen oli hybridipromoottorijärjestelmässä, ja niistä viisi käynnistettiin lyhennetyllä pAOX1:llä.
Yhdestoista kopio käynnistettiin täyspitkällä pA0X1- promoottorilla.
Muodostettiin toinen ekspressiorakenne, joka sisälsi nukleiinihapon, joka koodasi P. pastorisin transkriptiotekijää HAC1 vahvan metanoli-indusoituvan promoottorin ohjauksessa. Transkription terminaattori
AOX1-geenistä sijoitettiin alavirtaan HAC1:n sekvenssistä. & Muodostettiin kolmas ekspressiorakenne, joka
N koodasi fuusioproteiinia. Rakenne käsitti 3 30 nukleiinihapon, joka koodaa ensimmäistä 48 tähdettä
N Pichia OCHl1 -proteiinista fuusioituna katalyyttisesti = aktiiviseen versioon Streptomyces coelicoflavus
N EndoH:sta (SEO ID NO.: 52) ja vahvan metanoli-
S indusoituvan promoottorin, pPEX11:n, alaisuudessa. 2 35 Transkription terminaattori A0X1-geenistä sijoitettiin
N alavirtaan EndoH-OCH1 -fuusioproteiinin sekvenssistä.
P. pastoris -kantaa modifioitiin sytoplasmisten tappajaplasmidien poistamiseksi ja modifioitiin sitten edelleen deleetion aikaansaamiseksi
AOX1-geenissä. Tämä deleetio tuotti metanolia hitaasti hyödyntävän (mutS) fenotyypin, joka vähentää kannan kykyä kuluttaa metanolia. Tämä peruskanta transformoitiin kolmella ekspressiorakenteella.
Lineaariset metanoli-indusoituva promoottori: ScPrePro (Saccharomyces pre-pro - sekvenssi) ::ovomukoidi::A0Xlterm -kasetit; lineaariset metanoli-indusoituva promoottori::HAC1::AO0Xl1term - kasetit; ja lineaarinen metanoli-indusoituva promoottori::EndoH-OCH1::AO0Xlterm -kasetti vietiin P. pastoris -peruskantaan käyttämällä normaaleja elektroporaatiomenetelmiä. Kuvassa 1A on esitetty rOVD:n ilmentämiseen käytetyt vektorirakenteet.
Fermentointi: Jokaisesta ekspressiorakenteesta tuotettiin rekombinanttia OVD: tä bioreaktorissa ympäristön olosuhteissa. Ympin kasvatus fermentointiprosessiin aloitettiin inokuloimalla nestemäistä kasvatuslientä ravistelupulloihin.
Inokuloituja ravistelupulloja pidettiin ravistimessa, minkä jälkeen kasvatettu P. pastoris siirrettiin tuotantomittakaavan reaktoriin.
Viljelmää kasvatettiin 30 °C:ssa, asetetussa pH-arvossa ja liuenneessa hapessa (DO). Viljelmää syötettiin hiililähteellä. & Tuotannon laajentamiseksi rOVD:n P. pastoris -
N ymppikanta poistettiin kylmäsäilytyksestä ja 3 30 sulatettiin huoneenlämpötilaan. Sulatettujen
N ymppipullojen sisältöä käytettiin nestemäisen = ymppialustan inokuloimiseen vekatuissa pulloissa, joita
N kasvatettiin 30 °C:ssa ravisteluinkubaattoreissa. Nämä
S ymppipullot siirrettiin sitten kasvatettavaksi sarjaan 2 35 suurenevia ymppifermentoreja (lukumäärä vaihteli
N riippuen mittakaavasta), jotka sisälsivät perussuolaliuosta, hivenmetalleja, ja glukoosia.
Lämpötila ymppireaktoreissa säädettiin 30 °C:seen, pH- arvoksi säädettiin 5, ja DO säädettiin 30 %:iin. pH- arvoa ylläpidettiin syöttämällä ammoniakkihydroksidia, joka toimii myös typpilähteenä. Kun saavutettiin riittävä solumassa, kasvatettua rOVD P. pastorista inokuloitiin tuotantomittakaavan reaktorissa, joka sisälsi perussuolaliuosta, hivenmetalleja, ja glukoosia. Kuten ymppitankeissa, viljelmä säädettiin myös 30 °C:seen, pH-arvoon 5 ja 30 %:n DO:hon koko prosessin ajaksi. pH-arvoa ylläpidettiin jälleen syöttämällä ammoniakkihydroksidia. Alkupanoksen glukoosivaiheen aikana viljelmän annettiin kuluttaa kaikki glukoosi ja sen jälkeen tuotettu etanoli. Kun tavoitesolutiheys saavutettiin ja glukoosi- ja etanolikonsentraatioiden varmistettiin olevan nolla, aloitettiin glukoosisyöttöpanoksen kasvatusvaihe.
Tässä vaiheessa syötettiin glukoosia, kunnes viljelmä saavutti tavoitesolutiheyden. Glukoosia syötettiin rajoittavalla nopeudella etanolin kertymisen estämiseksi ei-nollaglukoosikonsentraatioiden läsnä ollessa. Lopullisessa induktiovaiheessa viljelmään syötettiin yhdessä glukoosia ja metanolia, mikä indusoi sen tuottamaan TOVD:tä. Glukoosia syötettiin määränä, joka tuotti halutun kasvunopeuden, kun taas metanolia syötettiin metanolikonsentraation pitämiseksi 1 %:ssa sen varmistamiseksi, että ilmentyminen indusoituu konsistentisti. Koko fermentointiprosessin ajan & otettiin säännöllisiä näytteitä määrättyjen
N prosessiparametrien analysoimiseksi (esim. solutiheys, 3 30 glukoosi/metanolikonsentraatiot, tuotteen tiitteri, ja
N laatu). Määrätyn fermentointiajan jälkeen erittynyt = rOVD kerattiin Ja siirrettiin myöhempään
N prosessointiin.
S rOVD-tuotteet puhdistettiin erottamalla solut 2 35 nestemäisestä kasvatusliemestä, suorittamalla useita
N suodatusvaiheita, suorittamalla kromatografia, ja/tai kuivaamalla lopullinen proteiinituote puhtaan rOVD- jauheen tuottamiseksi.
Translaation jälkeinen modifikaatio OCH1-
FndoH-fuusioproteiinista aiheutti alfa factor pre-pro - sekvenssin poiston. N-terminaalisissa sekvensointituloksissa näkyi N-terminaalisen pro- sekvenssin epätäsmällinen pilkkoutuminen Pichia-isännän posttranskriptiojärjestelmällä, jossa ylimääräiset neljä aminohappotähdettä (major) tai 6 aminohappotähdettä (minor) fuusioitui tuotetun rOVD:n (SEQ ID NO: 37) tai (SEQ ID N0:38) N-terminukseen verrattuna kypsän OVD:n aminohapposekvenssiin (SEQ ID
NO: 1).
Pichiasta saadun TOVD:n molekyylipainoa verrattiin natiiviin kanan ovomukoidiin (NOVD) käyttämällä SDS-PAGE:a. rOVD:ssa nakyi ero migraatiossa. Sen varmistamiseksi, johtuiko ero geelimigraatiossa differentiaalisesta posttranslationaalisesta glykosylaatiosta, deglykosyloitu natiivi ovomukoidi käsiteltiin PNGaasi
F:llä, entsyymillä, joka deglykosyloi spesifisesti proteiineja (BioLabs 2020), ja sitä verrattiin rOVD- näytteeseen. Deglykosyloidulla natiivilla ovomukoidilla (nOVD + PNGaseF) näkyi samat raitakuviot ja molekyylipaino kuin kolmella testatulla rOVD- näytteellä (kuva 1D). Eron glykosylaatiossa katsotaan johtuvan OCH1-EndoH:n vaikutuksesta Pichia-kannassa, & jolloin rOVD: ssa vain N-asetyyliglukosamiinin
N ydinyksikkö liittyy Asn-tähteeseen 3 30 kananmunanvalkuaisesta saadun nOVD:n kompleksisen
N haaroittuneen glykosylaation (joka sisältää mannoosin) = sijaan (kuva 1B ja kuva 1C).
N TOVD:n, joka ilmennettiin Pichiassa ilman
S EndoH:ta, massaspektrometria-analyysissä näkyy 2 35 kahdeksan eri N-glykaanirakennetta (kuva 1C). Rakenteet
N ovat Man9 GlcNAc2, Man9 GlcNAc? Hex, Man9 G1cNAc2Hex2,
Man9 GlcNAc2Hex3, Man9 G1l1cNAc2Hex4, Man9 GC1lcNAc2 Hex5,v
Man9 GIcNAc2Hex6, ja Man9 GlcNAc? Hex7. Alla olevassa taulukossa 2 on esitetty N-kiinnittyneiden glykaanien prosenttiosuus rOVD-näytteessä, joka tuotettiin ilman endoglykosidaasikäsittelvä.
Taulukko 2: N-kiinnittyneet glykaanit näytteestä, ilmaistu MAIDI
TOF/TOF MS:llä.
Permetyloitu Rakenteiden Prosenttiosuus massa (m/z)? tekstikuvaus 2396, 2 2600, 3 2804, 4 Man9 GlcNAc? Hex? 3008, 5 Man9 GlcNAc? Hex3 3212, 6 Man9 GloNAc2 Hex4 3416,7 Man9 G1cNAc2 Hex5 3620,8 Man9 GLCNAC? Hex6 3824,9 Man9 GlcNAc? Hex7
Esimerkki 3: Liukenevuuden ja kirkkauden testaus vaihtelevilla rOVD:n konsentraatioilla
Pakastuskuivattu TOVD (esimerkistä 2) sekoitettiin vesiliuokseen (tislattu vesi) eri konsentraatioina ja eri pH-arvoissa. rOVD:n liuosten kirkkaus ja liukenevuus arvioitiin sitten visuaalisesti (esim. sameuden, sakan, viskositeetin, ja värin suhteen) sekä mittaamalla absorbanssi 600 nm:ssä.
Kuvassa 2 on esitetty deionisoidun veden absorbanssi 600 nm:ssä verrattuna liuoksen, joka käsittää rovD: ta deionisoidussa vedessä 0 proteiinikonsentraationa 4,23 % p/t, absorbanssiin 600
N
S nm:ssä. rOVD-liuoksen pH oli 4,11. Deionisoidun veden se 20 absorbanssi oli 0,037 (0D600). 4,23 % p/t rOvD:tä + käsittävän liuoksen absorbanssi oli 0,047, nousu 27 %.
N . < . . - Kuvan 2 valokuvassa rOVD-liuoksesta näkyy kirkas ja a väritön liuos, jossa ei ole sakkaa eikä selviä 5 viskositeetin muutoksia nesteen ulkonäössä ja o . . 3 25 visuaalisessa virtauksessa.
N
O
N
D
Esimerkki 4: Liukenevuuden ja kirkkauden testaus vaihtelevissa lämpötiloissa
Esimerkin 3 vesipitoisia 30 % rOVD:tä (p/t) sisältäviä näytteitä, pH 4,06 tai pH 6,3, inkuboitiin huoneenlämpötilassa ja niille tehtiin kolme lämpökäsittelyä: pastörointi, kuumatäyttö, ja retorttikäsittely. TOVD:n liuosten kirkkaus ja liukenevuus arvioitiin sitten visuaalisesti (esim. sameuden, sakan, viskositeetin, ja värin suhteen) sekä mittaamalla absorbanssi 600 nm:ssä.
Kullekin näytteelle suoritettiin lämpökäsittelyt seuraavasti:
Pastörointia varten näytteet kuumennettiin 72 *C:seen 1 minuutiksi ja laitettiin sitten jäähauteeseen 10 minuutiksi. Jäähauteen jälkeen näytteet laitettiin huoneenlämpötilaan ja arvioitiin sitten liukenevuuden ja kirkkauden suhteen.
Kuumatäyttöä varten näytteet kuumennettiin 85 *C:seen 30 sekunniksi ja laitettiin sitten huoneenlämpötilaan liukenevuuden ja kirkkauden arvioimiseksi.
Retorttikäsittelvyä varten näytteet kuumennettiin 121 ”C:seen 15 minuutiksi 19 psi:ssä ja pidettiin sitten huoneenlämpötilassa liukenevuuden ja kirkkauden arvioimiseksi.
Kuvassa 3 on esitetty tulokset 30 % rOVD:ta deionisoidussa vedessä käsittävän rTOVD-liuoksen pH- & arvolle, absorbanssille ja kirkkaudelle. rOVD liukeni
N yllättävästi deionisoidussa vedessä 30 3:n 3 30 konsentraationa (p/t proteiinimäärän perusteella) joko
N arvossa pH 4,06 tai pH 6,3. rOVD-liuoksista otetut = kuvat seka pH-arvossa 4,06 että 6,3 näyttävät
N kirkkailta, vaalean vihreiltä, ja viskoosisilta,
S vaikkakin vähemmän sellaisilta "ennen prosessointia” - 2 35 olosuhteissa, jotka edelsivät lämpökäsittelyä. Kuvasta
N 3 voidaan päätellä, että rOVD voi säilyä liukenevana sekä happamissa (pH ~4,0) että lievästi happamissa (pH
~6) liuoksissa rOVD:n konsentraationa, joka on 30 % p/t. Tarkemmin ottaen 30 %:n rOVD-liuoksella pH-arvossa 4,06 oli OD600, joka oli 0,101, pastöroinnin jälkeen ja 0D600, joka oli 0,104, kuumatäytön jälkeen. Vähemmän happamassa pH-arvossa 6,3 30 %:n rOVD-liuoksen O0D600 oli pastöroinnin jälkeen 0,089 ja kuumatäytön jälkeen 0,094. Näin ollen rOVD:n kirkkaus ja liukenevuus näytti olevan suurempi korkeammissa pH-arvoissa.
Kuvassa 4 on esitetty kuvan 3 pH 4,06 -kokeista otetut kuvat. Kuvasta 4 voidaan päätellä, että rOVD voi säilyä yllättävästi liuoksessa lämpökäsittelyn jälkeen. 30 % p/t.
Esimerkki 5: Liukenevuuden ja kirkkauden testaaminen vaihtelevissa lämpötiloissa ja pH-arvoissa
Pakastekuivattu TOVD (esimerkistä 2) sekoitettiin vesiliuokseen (tislattu vesi) konsentraationa, joka oli 9 % (p/t). Liuosten pH-arvot säädettiin natriumsitraattipuskurilla (0,1 M) pH- arvoihin 2,5, 4 tai 6, jotka on esitetty seuraavassa taulukossa 3:
Natriumsitraatti rovD dT Rt (mL) (mL) pH osa | os | so [as] sues en a 1 a | 0 | 6] 2500
S Taulukko 3: Sitraattipuskurin koostumus pH- se arvossa 2,5, 4 tai 6 x 25 , pH-arvon säätämisen jälkeen erillisiä a. vesipitoisia TOVD-näytteitä kussakin pH-arvossa 5 inkuboitiin huoneenlämpötilassa ja niille suoritettiin
I kolmentyyppisiä lämpökäsittelyjä: pastörointi,
N 30 kuumatäyttö ja retorttikäsittely (kuten kuvataan
S jäljempänä). rOVD:n kirkkaus ja liukenevuus arvioitiin sitten visuaalisesti (esim. sameuden, sakan, viskositeetin, ja värin suhteen) ja mittaamalla absorbanssi 600 nm:ssä.
Kullekin näytteelle suoritettiin lämpökäsittelyt seuraavasti:
Pastörointia varten näytteet kuumennettiin 72 *C:seen 1 minuutiksi ja laitettiin sitten jäähauteeseen minuutiksi. Jäähauteen jälkeen näytteet laitettiin huoneenlämpötilaan ja arvioitiin sitten liukenevuuden 10 ja kirkkauden suhteen.
Kuumatäyttöä varten näytteet kuumennettiin 85 *C:seen 30 sekunniksi ja laitettiin sitten huoneenlämpötilaan liukenevuuden ja kirkkauden arvioimiseksi.
Retorttikäsittelvyä varten näytteet kuumennettiin 121 ”C:seen 15 minuutiksi 19 psi:ssä ja pidettiin sitten huoneenlämpötilassa liukenevuuden ja kirkkauden arvioimiseksi.
Näytteiden visuaalisen tarkastelun ja 0D600- mittausten tulokset on esitetty kuvassa 5A ja kuvassa 5B.
Kuvat näytteistä on esitetty kuvassa 5A. Eri lämpökäsittelyjen vaikutus rOVD-liuoksen ja puskurin absorbanssiin (600 nm).
TOVD:n lisäämisen havaittiin nostavan puskuriliuoksen absorbanssia. rTOVD-liuoksen absorbanssi säilyi samana pastöroinnin ja kuumatäytön & jälkeen (ei merkittävää eroa arvojen pH 2,5 ja pH 4
N välillä). Absorbanssi laski retorttikäsittelyn 3 30 jälkeen. Oli yllättävää, että eri pH-arvoissa rOVD-
N liuos sailyi kirkkaana jopa pastörointi- ja = kuumatäyttölämpökäsittelyjen jälkeen. Poikkeuksena oli
N se, että TOVD-liuos koaguloitui
S retorttikäsittelyolosuhteissa arvossa pH 4 tai pH 6. 2 35 Nämä tulokset osoittavat, että esillä olevan julkaisun
N TOVD säilyy liukenevana liuokseen erilaisissa happamissa pH-arvoissa, ennen lämpökäsittelyä ja sen jälkeen.
Esimerkki 6: rOVD:n liukenevuus ja kirkkaus kaupallisesti saatavilla olevissa juomissa
Kirjallisuudessa julkaistujen hiilihapotustasojen (taulukko 4, alla) perusteella San
Pellegrino& valittiin edustamaan vähähiilihappoista juomaa, kun taas Diet Coke™ valittiin juomaksi, jossa oli korkeampi hiilihapotustaso. Gatorade™ ja Red Bull™ edustivat (hiilihapottamatonta) energiajuomakategoriaa.
Pedialyte& valittiin juomassa olevien elektrolyyttien
TOVD:n liukenevuuteen aiheuttaman vaikutuksen tutkimiseksi. = sä Te |!)
Taulukko 4: Hiilihapotustasot erilaisille kaupallisesti saatavilla oleville juomille
Pakastekuivattu rOVD sekoitettiin erilaisiin
S 20 juomaliuoksiin eri konsentraatioina, jotka olivat 30-50
N % (% ilmaistu proteiinin painona/tilavuus). 3 Yllättävästi esillä olevan julkaisun rOVD liukeni
S konsentraationa 30 % p/t Pedialyte®: een, San
I Pellegrino&:oon, Diet Coke™:een ja Gatorade™:een. Red - 25 Bull'M':in kohdalla liukenevuus oli konsentraationa 26 3 = p/t proteiinia. Korkeampina konsentraatioina (esim. >30 3 2) TOVD osoitti liukenevuutta joinakin
S konsentraatioina, mutta siihen liittvi kirkkauden > heikentyminen ja viskositeetin kasvaminen. Vielä korkeampina konsentraatioina (esim. lähes 50 % p/t) rovD ei enää liuennut ja joissakin näytteissä ei kostunut, kun se lisättiin juomaliuokseen. Tulokset on esitetty alla olevissa taulukoissa konsentraatioille, jotka olivat 30 % ja enemmän (26 % Redbull™:ille). rOVD:ta lisättäessä havaittiin merkittävä värinmuutos juomilla, jotka ovat värittömiä, kun taas värillisillä juomilla (esim. Diet Coke™) rOVD:tä lisättäessä havaittiin vain vähän tai ei lainkaan värinmuutosta.
Proteiini- Visuaalinen pH, San pH, San konsentraatio tarkastelu Pellegrino&| Pellegrino® ja (8) rOvVD 50 Proteiinijauhe ei kostunut kokonaan. Ei muodostanut liuosta 40 Proteiinijauhe kostui kokonaan. Muodosti paksun, vaaleanvihreän siirappimaisen seoksen 35 Viskoosinen suspensio, vaaleanruskea siirappimainen
Kirkas liuos, 6,46 5,03 vaaleanvihreä, viskoosinen
Taulukko 5: rOVD:n liukenevuustutkimus San
Pellegrino®: ssa 0 Proteiini- Visuaalinen pH, Diet pH, Diet
N konsentraatio (%) tarkastelu Coke® Coke® ja
N
-pohja rOVD 0)
O kaan : ! 50 Proteiinijauhe ei kostunut
S kokonaan. Ei muodostanut
T liuosta a a
Proteiinijauhe kostui
K
O kokonaan. Muodosti paksun,
O
S vaaleanvihreän
N siirappimaisen seoksen
N
D
35 Viskoosinen suspensio, vaaleanruskea siirappimainen viskoosinen
Taulukko 6: rOVD:n liukenevuustutkimus Diet
Coke®:ssa
Proteiini- Visuaalinen pH, pH, konsentraatio tarkastelu Gatorade Gatorade (3) ja rovD 50 Proteiinijauhe ei kostunut paljoa. Ei muodostanut liuosta. 40 Proteiinijauhe ei kostunut kokonaan. Muodosti paksun, vaaleankeltaisen siirappimaisen seoksen 35 Viskoosinen suspensio, vaaleankeltainen siirappimainen 30 Kirkas liuos, 2,78 3,7 vaaleankeltainen/vihreä, viskoosinen
Taulukko 7: TOVD:n liukenevuustutkimus
Gatorade™:ssa (Thirst Ouencher sitruuna-lime)
Proteiini- Visuaalinen pH, pH, Red konsentraatio tarkastelu Red Bull™ ja (3) Bull™ roOvVD
N paljoa. Ei muodostanut
N liuosta. se 40 Proteiinijauhe ei kostunut + kokonaan. Muodosti paksun,
N luonnonvalkoisen = siirappimaisen seoksen. - 35 Erittäin viskoosinen 5 suspensio, luonnon-
S valkoinen siirappimainen.
O) .
S vaaleanvihreä liuos.
26 Kirkas liuos, 3,26 3,63 vaaleankeltainen/vihreä, viskoosinen.
Taulukko 8: rOVD:n liukenevuustutkimus Red
Bull'M:issa
Proteiini- Visuaalinen pH, pH, konsentraatio ($) tarkastelu Pedialyte® Pedialyte® ja rOvVD 50 Proteiinijauhe ei kostunut kokonaan. Ei muodostanut liuosta. 40 Proteiinijauhe kostui kokonaan. Muodosti paksun, luonnonvalkoisen siirappimaisen seoksen. 35 Viskoosinen suspensio, vaaleanruskea siirappimainen. 30 Kirkas liuos, vaalean- 5,51 5,75 vihreä, viskoosinen.
Taulukko 9: TOVD:n liukenevuustutkimus
Pedialyte&:ssä
Kuvat alkuperäisistä juomista (ei rOVD:tä) ja 30 %:n rOVD-liuoksista (26 % RedBull™:illa) on esitetty kuvassa 6A. Absorbanssitulokset rOVD-liuoksille on esitetty kuvan 6B diagrammeissa. rOVD-liuokset, joiden konsentraatio oli 30 % p/t (26 % p/t RedBull™:illa) 2 arvioitiin käyttämällä absorbanssia 600 nm:ssä. pH-
S arvon muutos lisättäessä rOVD:tä riippui juoman
I
S koostumuksesta ja alkuperäisen pohjan pH-arvosta.
I
+ 15
N - - - - = on - r Esimerkki 7: Rekombinantin OVL-proteiinin oc - - - o tuottaminen Pichiassa 5 Tehtiin rekombinantin lysotsyymin (rOVL) kanta = transformoimalla Pichia-laji Komagataella phaffii
O 20 ekspressiokasetilla, joka sisälsi sekvenssin SEO ID NO:
N
> 45 mukaisen OVL:n, joka ilmennettiin metanoli-
indusoituvan promoottorin ohjauksessa. OVL:n koodaussekvenssi koodasi kypsää OVL-proteiinia, joka fuusioitiin koodaussekvenssiin alfa-tekijän pre-pro- erityssignaalille Saccharomyces cerevisiaesta. rOVL- kanta eritti roVL:ää, kun sitä kasvatettiin metanolia sisältävässä väliaineessa. TOVI :n rekombinantin proteiinin sisältävä liemi sentrifugoitiin solujen poistamiseksi ja saatu supernatantti prosessoitiin samalla tavoin kuin rOVD:n kohdalla, kuten edellä on kuvattu.
Esimerkki 8: OVD:n ja OVL:n yhdistelmät
Tässä esimerkissä tehtiin liuokset, jotka sisälsivät 2,5 % (p/t) rOovVL:ää ja nOVD:tä 9 % (p/t).
Saatu proteiiniseos sisälsi 21,7 % rOVL:ää ja 78,3 % ja.
TOVL+0VD-seos lämpökäsiteltiin sitten seuraavissa olosuhteissa:
Pastörointi: 72 °C 1 minuutti, minkä jälkeen 10 minuuttia jäähauteessa.
Kuumatäyttö: 85 °C 30 sekuntia.
Retorttikäsittely: 121 °C 15 minuuttia 19 psi:ssä.
Huoneenlämpötilassa pidettyä OVD:n kontrollinäytettä käytettiin aseptisten prosessointiolosuhteiden jäljittelemiseksi.
Testiliuosten pH-arvon säätämiseen käytettiin natriumsitraattipuskuria (0,1 M), kuten taulukossa 10
Q on kuvattu.
N
: a | 7 a (mL) i s [ov wae
E
> EG AA 3 30 Taulukko 10: Sitraattipuskurin koostumus pH-
N arvoissa 2,5, 4 ja 6
N
D
Kuten kuvissa 7 - 10 ja taulukossa 11 on esitetty, rOVL+OVD-seos lämpökäsiteltiin pastöroimalla, kuumatäyttämällä tai retorttikäsittelyllä. rOVL+OVD- seoksen kirkkaus/liukenevuus, mitattuna absorbanssilla 600 nm:ssä, säilyi muuttumattomana pH-arvossa 2,5 verrattuna huoneenlämpötilassa pidettyihin OVD:n kontrollinäytteisiin. pH-arvossa 4 rOVL+OVD-seos säilytti kirkkauden/liukenevuuden, kun se pastöroitiin tai kuumataytettiin. Retorttikäsittelyolosuhteet tuottivat sameutta, mikä mitattiin kasvaneena optisena tiheytenä (taulukko 11). Lämpökäsittely pH-arvossa 6 aiheutti kirkkauden menetyksen kaikilla näytteillä. pH 2,5 Kontrolli Pastörointi Kuumatäyttö Retortti- käsittely 0,043 AB 0,039 B 0,038 B 0,045 AB 0,044 AB* 0,042 AB 0,050 A 0,046 AB 0,038 B 0,038 B 0,037 B 0,037 B
Kontrolli Pastorointi Kuumatäyttö Retortti- käsittely 0,044 C 0,065 C 0,056 C 0,154 A 0,055 C 0,166 A 0,126 B 0,315 D 0,049 C 0,042 C 0,042 C 0,040 C 0) -
N Kontrolli Pastérointi Kuumatäyttö Retortti-
N käsittely
I
2 0,063 E 0,610 B 0,384 C 0,898 B
I
S 0,041 E 0,202 D 0,228 D 0,525 B = 0,039 E 1,425 A 0,588 B valkoinen sakka F o
N
O
S
0 * kussakin osataulukossa näytteet, joiden
N
S kohdalla on samat kirjaimet, ovat tilastollisesti >” L samankaltaisia (p>0,05)
Taulukko 11: rOVL:ää ja natiivia 0OVD:ta sisältävien näytteiden absorbanssi 600 nm:ssä
Kuten kuvissa 11 - 13 ja taulukossa 12 on esitetty, natiivin OVL:n (nOVL) näytteillä oli samanlainen vaikutus OVD:hen kuin rekombinantin OVL:n (rOVL) kanssa nähtiin. pH-arvossa 2,5 nOVL+0VD-liuosten kirkkaus/liukenevuus säilyi, kun ne lämpökäsiteltiin kaikissa kolmessa olosuhteessa (pastörointi, kuumatäyttö tai retorttikäsittely). nOVL+0VD-liuokset säilyttivät kirkkautensa pH-arvossa 4, ja sameutta kehittyi ainoastaan retorttiolosuhteissa. pH-arvo 6 ei ollut sopiva kirkkauden säilymiseen lämpökäsittelyn jälkeen. tely
AM NORR tely ; ot mt | mem [at piin
N tely ; ; : = = * kussakin osataulukossa näytteet, joiden
I 20 kohdalla on samat kirjaimet, ovat tilastollisesti
S samankaltaisia (p>0,05)
D
Taulukko 12: Kaupallista natiivia 0OVL:ää (nOVL) ja natiivia OVD:tä (nOVD) sisältävien näytteiden absorbanssi 600 nm:ssä rOVL:n lisääminen OVD:hen näytteessä huoneenlämpötilassa tai lämpökäsiteltynä nosti näytteen proteiinisisältöä vaikuttamatta näytteen kirkkauteen tai liukenevuuteen. Siten rOVL:n lisääminen OVD:hen juomassa nostaa juoman proteiinisisältöä vaikuttamatta kirkkauteen tai liukenevuuteen, tai aistimukselliseen laatuun (ulkonäkö, haju, maku ja suutuntuma) joko huoneenlämpötilassa tai lämpökäsittelyn jälkeen.
Tehtiin näytteet, jotka sisälsivät esillä olevan julkaisun rekombinanttia OVD:tä (rOVD) 9 % (p/t), ja 2,5 % (p/t) rOVL:ää. Saatu proteiiniseos sisälsi 78,3 % TOVD:tä ja 21,7 % rOVL:ää. Kuvassa 14 on verrattu liuoksia huoneenlämpötilassa ja eri lämpökäsittelyjen jälkeen pH-arvoissa 2,5, 4, 6: rOVL+rOVD ja rOoVvVD- kontrolli. pH 2,5 Huoneen- Pastörointi Kuumatäyttö Retorttikä- lämp. sittely
EE seal Ref mut
Huoneen- Pastörointi Kuumatäyttö Retorttikä-
S lämp. sittely
O
N rOVD+rovVL 0,065 B* 0,109 A 0,066 B .
O alkoinen
O koagulaatti a, rovD 0,062 B 0,060 B 0,061 B alkoinen = koagulaatti a
PP o
S Huoneen- Pastörointi Kuumatäyttö Retorttikä-
Q lamp. sittely
O
S rOVD+rovVL 0,066 C* 0,256 A 0,091 B Valkoinen koagulaatti rovD 0,072 C 0,056 D 0,058 D alkoinen koagulaatti * kussakin osataulukossa näytteet, joiden kohdalla on samat kirjaimet, ovat tilastollisesti samankaltaisia (p>0,05)
Taulukko 13: rOVL:ää ja rOVD:tä sisältävien näytteiden absorbanssi 600 nm:ssä
Esimerkki 9: Vertailu heraproteiiniliuoksiin
TOVD:n tulosten vertaamiseksi vaihtoehtoiseen proteiiniin (hera) rOVD- tai heraproteiinit liuotettiin veteen konsentraationa, joka oli 9 % (p/t). Esillä olevan julkaisun rOVD: hen verrattiin neljaa kaupallisesti saatavilla olevaa heraproteiini- isolaattia (WP1, WP2, WP3 ja WP4). pH mitattiin Hanna
Lab pH -koettimella kullekin näytteelle ja absorbanssi mitattiin SpectroMax:illa 600 nm:n aallonpituudella.
Tulokset on esitetty taulukossa 14. Ulkonäkö arvioitiin visuaalisella tarkastelulla; haju arvioitiin haistelutestillä; ja maku arvioitiin maistamalla käyttämällä 3 koulutetun henkilön raatia. [ora | ma | mis | ra | sow pH 8,45 %:n 3,15 6,53 3, 92 6,13 5,05 liuoksessa
O
N Absorbanssi + + 0,0002 I
N 600 mm:ssä | 9099 * |0,423 + 0,123]0,344 + 0,038| 9/9 + 0.000 , 0,001 0,016 3 ! . lievästi kirkas, + kirkas, samea, valkoinen itä
N Ulkonäkö : : samea, ' väritön keltainen keltainen samea
I keltainen jami a
N maitohapon| negatiivinen ; : . . maitomainen
S Tuoksu vivahteita! maitomainen navettamainen ei tuoksua + tuoksu tuoksu
O
N
O
N
D muovinen maku, lievästi neutraali lievä suolainen, o. MN : epämiellyttävä hapan, maku, ei (proteiinin maitohapon kia tuoksu & maku | negatiivinen [happamuutta maku
Maku vivahteita . . maitomainen , maku/tuoksu |maitomainen sivumaku
Taulukko 14: Heraproteiiniliuosten (WPI) liuosominaisuudet verrattuna rOVD-liuoksiin.
Heraproteiini-isolaatit (WPI 1 ja WPI 3) olivat konsentraationa, joka oli 9 g per 100 ml tislattua vettä, säädettynä pH-arvoon 2, 4, tai 6. Komparatiiviset tulokset heraproteiiniliuosten (WPI 1 ja WPI 3) ja rOVD- liuosten välillä pH-arvoissa 2, 4 ja 6 on esitetty kuvassa 15A ja kuvassa 15B. rOVD-liuoksissa näkyy olennaisesti suurempi liuoskirkkaus verrattuna heraproteiiniliuoksiin samoina konsentraatioina.
Esimerkki 10: Erilaisten proteiinivesiliuosten kirkkauden vertailu
Tässä esimerkissä esillä olevan julkaisun rekombinantin ovomukoidin (rOVD) proteiinin liukenevuutta verrattiin muihin proteiineihin.
Sopivat määrät happamia heraproteiini- isolaatteja (WP1, jossa 90 % p/p proteiinia, ja WP2, jossa 92,7 % p/p proteiinia), nOVD:tä - 85 &%:n proteiinisisältö, rOVD:tä - 85,6 %:n proteiinisisältö, herneproteiinia = 920 2:n proteiinisisältö; ja & soijaproteiinia — 90 %:n proteiinisisältö, sekoitettiin
N (käyttäen pyörrettä) veden kanssa 5 3:n
O Keen. . .
O 25 proteiiniliuosten muodostamiseksi. <t
N
I Herne- id teiini
WP1 WP2 Protettnil Soija- 5 (neutraali)| (hapan) novD TOVD (hapan) proteiini
S (5 %) (5 %) (5 8) | (5 %) (58 (5 %) & | ainosa | s [| + [| = | = | > | >»
N Aineosa % % % % % %
O
94,4 94,6 94,1 94,2 94,4 94,4
Taulukko 15: Aineosien luettelo ja niiden osuudet.
Kuvassa 16 on esitetty esimerkkejä erilaisista proteiiniliuoksista. 100 nl:n alikvootit kustakin proteiiniliuoksesta siirrettiin tasapohjaiseen, kirkkaaseen 96-kuoppalevyyn kolmena replikaattina (kuten esitetty taulukossa 15). Kunkin näytteen absorbanssi mitattiin 600 nm:ssä levyadapterilla
Spectramax:illa. Tulokset on esitetty taulukossa 16.
EE el] proteiini |proteiini ernen eristetty | eristetty N (neutraali)| (hapan) eI | 0148 novD rovD (napan) |proteiini| Vesi po] san | öronen Joon ava | vis Joo
Taulukko 16. Eri proteiiniliuosten absorbanssitulokset.
Esimerkki 11: Proteiinivahvistettujen liuosten suspensiostabiliteetin vertailu
Tässä esimerkissä määritettiin mahdollisuutta vahvistaa appelsiinimehua (jossa oli lisättyä kalsiumia ja D-vitamiinia) rOVD:llä. & Appelsiinimehu (ilman hedelmälihaa; sisälsi
N 350 mg kalsiumia, ja 2,5 mcg D-vitamiinia per annoskoko, <Q joka oli 8 nesteunssia) proteiinivahvistettiin
N käyttämällä nOVD:tä, heraproteiinia, tai rO0VD:tä (86 %:n
E 25 proteiinisisältö). Näytteet käsiteltiin seuraavasti.
N Kiinnostuksen kohteena olevaa proteiinia lisättiin eri
S määrinä 10 g:aan appelsiinimehua ja sekoitettiin, kunnes
Q se liukeni kokonaan vahvistetun appelsiinimehun
N aikaansaamiseksi. Alkuperäisen appelsiinimehun, jossa ei ollut proteiinivahvistusta (kontrollinäytteenä) pH mitattiin ja se otettiin tavoitteelliseksi pH-arvoksi.
Vahvistettujen appelsiinimehunäytteiden pH säädettiin käyttämällä 1 M sitruunahappoa ja/tai ruokasoodaa lähelle tavoitteellista pH-arvoa. Proteiinin liukenevuutta ja/tai saostumista tarkkailtiin visuaalisesti kaikissa näytteissä ennen lämpökäsittelyä. 70 °C:n lämpökäsittely suoritettiin 1 min ajan appelsiinimehussa olevan mikrobikuorman vähentämiseksi riittävästi. Sitten näytteet jäähdytettiin välittömästi 4 °C:seen 10 minuutin ajaksi.
Näytteiden fysikaalinen ja suspensiostabiliteetti arvioitiin välittömästi kuumennusprosessin jälkeen (kuva 17A) ja sen jälkeen kun niitä oli säilytetty 48 tuntia 4 °C:ssa (kuva 17B). 15 %:11a noVD:tä tai 15 %:1la rOovD:tä vahvistetun appelsiinimehun suspensiostabiliteetin havaittiin olevan samankaltainen kuin kontrollilla, joka ei sisältänyt proteiinivahvistusta. 48 tunnin jälkeen 15 2:lla heraproteiinia vahvistettu appelsiinimehu oli muodostanut lievästi geelin, joten tässä näytteessä ei havaittu erottumista. Suurena konsentraationa (30 %) oleva rOVD ei saostunut ja liukeni kokonaan appelsiinimehuun, jopa kun läsnä oli 0,25 meg D-vitamiinia ja 35 mg kalsiumia.
TOVD:n havaittiin olevan myös lämpöstabiili eikä se muodostanut geeliä pastöroinnin aikana. Ulkonäön suhteen ei havaittu merkittävää eroa kontrollin ja & appelsiinimehun, joka oli vahvistettu 15 %:1la nOVD:ta
N tai rovD:llä kahtena pitoisuutena: 15 % tai 20 %, 3 30 välillä.
N
= Esimerkki 12: Proteiinivahvistetun hyytelön
N suspensiostabiliteetin vertailu
S Tässä esimerkissä arvioitiin mahdollisuutta 2 35 vahvistaa hyytelöä rOVD:llä.
N Jellom—hyytelda kaytettiin proteiinivahvistukseen käyttämällä nOVD: tä (80 %
proteiinia), rOvVD:tä (8693 % proteiinia), maustamattomia heraisolaattiproteiineja (87,5-92,7 % proteiinia), maustamatonta gelatiinia (92 % proteiinia). Näytteet valmistettiin seuraavasti:
Kontrollihyytelön menetelmä: hyytelöseosjauheeseen lisättiin kuumaa vettä ja sekoitettiin kaksi minuuttia, kunnes se liukeni kokonaan. Sitten lisättiin kylmää vettä täyttäen 2 cm 1 oz:n kuppeihin, joihin laitettiin kansi ja jotka sen jälkeen jäähdytettiin.
Vahvistetun hyytelön menetelmä: hyytelöseosjauheeseen lisättiin kuumaa vettä ja sekoitettiin kaksi minuuttia, kunnes se liukeni kokonaan. Proteiinijauheeseen lisättiin vähitellen kylmää vettä ja sekoitettiin hitaasti sen liuottamiseksi. Liuotettu hyytelöliuos siirrettiin proteiiniseokseen ja sekoitettiin kokonaan. Täytettiin 2 cm 1 oz:n kuppeihin, joihin laitettiin kansi ja jotka sen jälkeen jäähdytettiin.
Proteiinihyytelöformulaatiot: Aineosien luettelo ja niiden osuudet, joita käytettiin kontrollissa ja muissa kokeellisissa hyytelönäytteissä, sekä nimenomainen kiinnostuksen kohteena oleva proteiini, on esitetty seuraavassa taulukossa 17.
Lemons | tera 20.3 | now 203 kom 20 i 3
N
S Taulukko 17: Aineosien luettelo
O
S
S (* aineosamäärät säädetty proteiini-%:n p/p- sisällön perusteella) Hyytelönäytteiden tekstuurit mitattiin käyttämällä Brookfield CT3 Texture Analyzer - laitetta (taulukko 18). Jokaisesta hyytelönäytteestä otettiin kolme lukemaa. Hyytelöt sijoitettiin keskelle näytteenottimen alle ja puristettiin 5 mm:n matkalle alla olevien koeasetusten mukaan. Adheesio (tunnetaan myös tarttuvuutena) mittasi energiaa, joka vaaditaan erottamaan hyytelön pinnan ja näytteenottimen pinnan välisiä vetovoimia (mikä vastaa suunnilleen tarttuvuutta kieleen, hampaisiin, ja/tai kitalakeen).
Kovuus on voima, joka vaaditaan hyytelön puristamiseksi tietyn deformaation aikaansaamiseksi.
Tekstuuriominaisuudet adhesiivisuus (mj) en [=
Näytteen koko
H: 20 mm D: 36 mm
Taulukko 18: Tekstuurianalysaattorin koeasetukset
Adheesion suhteen ei havaittu tilastollisesti n merkittävää eroa 20 %:lla nOVD:tä vahvistetun hyytelön
N ja kontrollin välillä. Sen sijaan adheesioarvot
N hyytelölle, jossa oli 20 % hera- ja rOVD-proteiineja, <Q 20 olivat merkittävästi pienemmät (taulukko 19).
N
= a
EGT fasa i
O
D
KA A
(mJ) 0,09 + 0,03 a|0,03 + 0,005 ¢|0,08 + 0,01 abl0,04 + 0,02 be
Taulukko 19: Tekstuurianalyvysin tulokset. *Keskiarvo + keskihajonta; Hyytelönäytteet, joilla on eri kirjaimet annetulle kvantitatiiviselle parametrille (esimerkiksi kovuus), eroavat tilastollisesti toisistaan p-arvolla < 0,05.
Hyytelö, joka oli vahvistettu 20 %:lla heraa, nOvD: ta, tai roVD:tä, oli merkittävästi vähemmän kovaa kuin kontrollihyytelö.
Kontrollihyytelön ja 20 %3:lla rOvD: ta vahvistetun hyytelön kirkkauden välillä ei havaittu merkittävää eroa (p<0,05). Heraisolaattiproteiinilla vahvistettu hyytelö oli samea ja epäkirkas. (Kuva 18A ja kuva 18B). %:lla heraproteiinia vahvistetun Jellorm:n tekstuuri oli erittäin pehmeä eikä verrattavissa kontrolliin. (Kuva 18C).
Jellom:n, jossa oli joko 16 % tai 20 3 hydrolysoitua gelatiinia, tekstuuri oli kumimainen, ja 20 sillä oli voimakas kimmoisuus ja deformaatiovastus.
Tässä kokeessa näytealikvoottien siirtäminen ei ollut mahdollista, koska hyytelö kovettui erittäin nopeasti huoneenlämpötilassa. (Kuva 18D ja kuva 18E).
S
N 25 Esimerkki 13: Eri lajeista peräisin olevan se rekombinantin OVD:n testaaminen x Tässä esimerkissä arvioitiin rOVD:n, jossa oli
I muun lintulajin kuin kanan aminohapposekvenssejä,
E ominaisuuksia. = 30 Muodostettiin kaksi ekspressiorakennetta = ilmentämään kahta ei-kanan rOVD:tä (SEQ ID NO: 40,
S jäljempänä rOVD-T (kalkkunakondori) ja SEO ID NO:43, > jäljempänä rOVD-H (kolibri)) Pichia pastorisissa, ja ne ilmennettiin, puhdistettiin ja prosessoitiin samalla tavoin kuin esimerkissä 2. Pakastekuivatut rOVD- näytteet sekoitettiin vesiliuokseen (tislattu vesi) eri konsentraatioissa ja pH-arvoissa. TOVD-liuosten kirkkaus ja liukenevuus määritettiin sitten visuaalisesti (esim. sameuden, sakan, viskositeetin, ja värin suhteen) sekä mittaamalla absorbanssi 600 nm:ssä.
Kuvassa 19A on esitetty proteiini-vesi- näytteet, jotka käsittivät rOVD-H:ta deionisoidussa vedessä proteiinikonsentraatioina 4,23 %, 10 %, 20 % tai 30 % p/t. Liuosten pH oli 4,15. Kuten aikaisempien esimerkkien kanan rOVD:n kohdalla, kuvassa 19A näkyy kirkas ja väritön liuos, jossa ei ole sakkaa eikä selviä viskositeettimuutoksia nesteen ulkonäössä ja visuaalisessa virtauksessa liuoksilla, jotka käsittivät korkeintaan 20 % rOVD-H:ta.
Kuvassa 19B on esitetty proteiini-vesi- näytteet, jotka käsittivät rOVD-T:tä deionisoidussa vedessä proteiinikonsentraatioina 4,23 %, 10 % tai 20 % p/t. Liuosten pH oli 3,69. Kuten aikaisempien esimerkkien kanan rOVD:n kohdalla, kuvassa 19B näkyy kirkas liuos, jossa ei ole sakkaa eikä selviä viskositeettimuutoksia nesteen ulkonäössä ja visuaalisessa virtauksessa liuoksilla, jotka käsittivät korkeintaan 10 % rOVD-T:tä. 20 %:n konsentraationa proteiini ei liuennut kokonaan.
Näytteitä inkuboitiin huoneenlämpötilassa ja & niille tehtiin kolmentyyppiset lämpökäsittelyt:
N pastörointi, kuumatäyttö, tai retorttikäsittely kuten 3 30 esimerkissä 4 tai esimerkissä 5. Eri rOVD:ien kirkkaus
N ja liukenevuus määritettiin sitten visuaalisesti (esim. = sameuden, sakan, viskositeetin, ja värin suhteen) sekä
N mittaamalla absorbanssi 600 nm:ssä. Taulukossa 20 on
S esitetty tulokset rOVD-liuoksen, joka käsitti 4,23 % 2 35 rOVD-H- tai rOVD-T-liuoksia puskurissa tai vedessä, pH-
N arvolle, absorbanssille, ja kirkkaudelle. "Ennen prosessointia” -sarakkeessa esitetyt tiedot mitattiin ennen mitään lämpökäsittelyä. Oli yllättävää, että eri pH-arvoissa rOVD-liuokset säilyivät kirkkaina jopa äärimmäisen kuumentamisen kuten pastöroinnin, kuumatäytön, tai retortin jälkeen. Nämä tulokset osoittavat, että rOVD-naytteet säilyvät liukenevina liuokseen erilaisissa happamissa pH-arvoissa, ennen lämpökäsittelyä ja sen jälkeen.
Tämä data osoittaa, että edellä rekombinantille kanan OVD:lle esitetyt edulliset ominaisuudet (ks. esimerkki 2) ovat saatavissa myös muilla rekombinanteilla OVD:illä.
OD ennen oD [prosessointia autoklaavin uoneenlämpötion oD / ilassa pPastöroinnin |kuumatäytön retortin
Näyte Pp jälkeen jälkeen jälkeen rOVD-H + 0,0569 0,0547 0,0548 0,0537 puskuri 2,5 rOVD-T + 0,058 0,059 0,057 0,056 puskuri rOVD-H + 0,0546 0,0544 0,0552 0,0641 puskuri 4 rOVD-T + 0,055 0,055 0,057 0,055 puskuri rOVD-H + 0,053 0,053 0,055 0,061
O puskuri
N
S rOVD-T + ! 0,054 0,054 0,054 0,068 0) puskuri <Q x rr 1 1 1.
N
I rovor + vesi] 5- 0,067 0,084 0,090 0,236 [ont , a 3,9
N rOVD-T + vesi 0,097 0,106 0,116 0,219 o 3 Taulukko 20: rOVD-H:n ja rOVD-T:n liukenevuus-
Q ja kirkkaustutkimus
O
N
S 15
Esimerkki 14: Naudan trypsiini- inhibiittoriaktiivisuuden vertailu
Tässä esimerkissä käytettiin esimerkissä 2 tuotettua rovD:tä. Trypsiini-inhibiittoriaktiivisuutta verrattiin natiivin OVD:n (nOVD) ja rekombinantin OVD:n (rOVD) välillä standardimäärityksessä (AACC #22-40.01) käyttämällä naudan trypsiiniä. rOVD:n ja nOVD:n vertailu on esitetty taulukossa 21. Yksi trypsiiniyksikkö on määritelty sattumanvaraisesti 0,01 absorbanssiyksikön kasvuksi 410 nm:ssä per 10 ml reaktioseosta määrityksen olosuhteissa. Trypsiini-inhibiittoriaktiivisuus ilmaistaan trypsiini-inhibiittoriyksikköinä (TIU).
Kolmea eri rOVD-erää (näytteet 1-3) verrattiin natiiviin kanan ovomukoidiin. aktiivisuus ovomukoidi
Taulukko 21: Trypsiini- inhibiittoriaktiivisuuden vertailu
Esimerkki 15: In vitro -sulavuuden vertailu
S rOVD-näytteiden in vitro -sulavuus mitattiin & käyttämällä Protein Digestibility Assay -menetelmää 8 (Megazyme, Medallion Labs). rOVD-nadytteiden ja nOVD:n
S vertailu on esitetty taulukossa 22. Data osoittaa
I 25 vastaavan in vitro -sulavuuden natiivin ovomukoidin ja = rOVD:n välillä.
S
! ===
S
5
Taulukko 22: Vertailu in vitro -sulavuus
Esimerkki 16: Ovomukoidin määrittelyt
Esillä olevan julkaisun rOVD:1lle muodostettiin tuotemäärittelyt (taulukko 23) ja laaduntarkkailumäärittelyt (taulukko 24) tuotettujen rOVD-koostumusten ja natiivin kanan ovomukoidin karakterisoinnin perusteella.
Proteiiniprosentit mitattiin käyttämällä seuraavia: AOAC 2006. Ks. Protein (crude) in animal feed, combustion method, 990.03. Julkaisussa: Official methods of analysis of AOAC International. 18. painos.
Gaithersburg: ASA-SSA Inc. ja AOAC 2006. Proximate
Analysis and Calculations Crude Protein Meat and Meat
Products Including Pet Foods - kohta 80. Julkaisussa:
Official methods of analysis Association of Analytical
Communities, Gaithersburg, MD, 17. painos, referenssidata: menetelmä 992.15 (39.1.16); NFNAP;
NITR; NT.
Kosteusprosentit mitattiin menetelmällä
Association of Official Analytical Chemists. 1995.
Julkaisussa Official Methods of Analysis.
Hiilihydraattiprosentit mitattiin käyttämällä menetelmiä, jotka on kuvattu julkaisussa J AOAC Int. 2012 Sep-O0ct;95(5):1392-7.
Rasva happohydrolyysillä mitattiin käyttämällä
N seuraavaa: AOAC International. 2012. Official Method Fat
N (crude) or ether extraction in pet food. Gravimetric 3 method, 954.02. Julkaisussa: Official Methods of
S 30 Analysis of AOAC International, 19. painos, AOAC z International, Gaithersburg, MD, USA, 2012. > Standardipesäkeluku mitattiin käyttämällä = seuraavaa: AOAC International. 2005. Aerobic plate count 2 in foods, dry rehydratable film, method 990.12. AOAC
S 35 International, 17. painos. Gaithersburg, MD. Hiiva- ja > homelukemat mitattiin käyttämällä seuraavaa: AOAC
Official Method 997.02. Yeast and Mold Counts in Foods
Dry Rehydratable Film Method (Petrifilmm Method) First
Action 1997 Final Action 2000. Salmonella mitattiin käyttämällä seuraavaa: AOAC International. 2005.
Salmonella in selected foods, BAX automated system, method 2003.09. Julkaisussa Official methods of analysis of AOAC International, 17. painos, AOAC International,
Gaithersburg, MD. Kokonaiskolibakteerit mitattiin käyttämällä seuraavaa: AOAC International. 2005. E. coli count in foods, dry rehydratable film, method 991.14.
Julkaisussa: Official methods of analysis of AOAC
International, 17. painos. AOAC International,
Gaithersburg, MD.
Fysikaaliset ominaisuudet Määrittely
Valkoinen-luonnonvalkoinen amorfinen
Ulkonäkö . jauhe
Kemialliset ominaisuudet . . Määrittely Menetelmä (jauheessa sellaisenaan)
Proteiini > 75 % AOAC 990.031a
AOAC 992.15%
Maksimi 10,0 3 ADAC 925.092 0
AN AOAC 942.05
N
O Rasva happohydrolyysillä < 0,1 % AOAC 954.024 <Q — 5 : et jm ems
I i n o
S
<t
N
O Mikrobiominaisuudet (jauheessa .
N . Määrittely Menetelmä
I sellaisenaan)
Standardipesäkeluku < 10000 CFU/g AOAC 990.126 < 100 cFu/g AOAC 997.027
Kokonaiskolibakteerit < 30 CFU/g
Taulukko 23: Määrittely ovomukoidille, tuotettu P. pastorisilla DFB-003
Analyysiparametri Määrittely SOL19303 SOL19317 SOL19351
Proteiini > 80 3 82,2 82,5 87,8 (5 jauheen kuivapainosta)
Kosteus ja < 10 % 8,4 haihtuvat aineet
Hiilihydraatit, < 20 % 15,53 15,28 11,06 laskettu [runka cee Joe oes fos
Rasva < 0,1 % <0,10 <0,10 <0,10 happohydrolyysillä
Elohopea (Ha) < 1 mg/kg <0,010 <0,010 <0,010
Lyijy (Pb) < 1 mg/kg 0,05 [0,063 0,168 n Kadmium (Cd) < 1 mg/kg <0.010 <0.010 <0.010
N Aerobinen
N < 10000 CFU/g |<10 <10 <10 & pesäkeluku
S
S Homeet < 100 CFU/g <10 <10 <10
I
=
Hiiva < 100 CFU/g <10 <10 <10
K
O
+ Ei Ei Ei Fi
O) al Salmonella . . . o havaittu / havaittu havaittu havaittu
N
ID 25 g
Escherichia Coli Ei Ei Ei Ei havaittu / 25 | navaittu —|navaittu —["avaittu = [of [ouu frön
Lähdeorganismin Ei Ei Ei Ei
SE fam fe fre [o tuotteesta mg näytettä
Koodaavan DNA:n Ei Fi Fi Ei puuttuminen havaittu ** / | havaittu — [havaittu |revaittu tuotteesta mg näytettä * Lähdeorganismin havaitsemisen raja = 11 CFU/mg näytettä *x Koodaavan DNA:n havaitsemisen raja = 10 femtogrammaa
Taulukko 24: Laadunvalvontatulokset kolmelle ovomukoidierälle, tuotettu P. pastorisilla DFB-003
Esimerkki 17: Tuotanto-organismin ja DNA:n puuttuminen rOVD-valmisteista rTOVD-jauhe maljattiin PGA-maljoille, ja jos näytteet muodostivat pesäkkeitä, ne levitettiin uudelleen ja analysoitiin PCR:llä Pichia-organismin esiintymisen suhteen. Tämä menettely tehtiin kolmelle rekombinantista kannasta tuotetulle rO0VD-jauhe-erälle.
Valmistusorganismia ei havaittu missään erässä (taulukko 24).
PCR-analyysiä käytettiin sen varmistamiseksi, & että rOVD-valmisteessa ei ollut läsnä rekombinantin
N DNA:n koodaavia kappaleita, käyttämällä alukkeita rOVD- 3 kasetille. Positiivisena kontrollina käytettiin OVD-
N 20 plasmidi-DNA:ta, joka tuotti 570 bp:n raidan, joka = vastasi OVD:n PCR-tuotetta. Tätä raitaa ei ollut missään
N testatuista kolmesta rOVD-jauhe-erästä.
S
D Esimerkki 18: Vertailu immunoreaktiivisuus
Q 25 Kolmelle rOVD-erälle suoritettiin Western Blot > -vertailut käyttämällä primaarista anti-
ovomukoidivasta-ainetta kaniinista (NBP1-74676 Novus) laimennettuna 1:2500. Käytetty sekundaarinen vasta-aine oli vuohen anti-kaniini-IgG konjugoituna alkaliseen fosfataasiin (AP ab97048 Abcam) . Käytetty molekyylipainon markkerivalmiste oli Bio Rad:ltä (161- 0394). Vertailu osoitti saman immunoreaktiivisuuden
TOVD-näytteille, natiiville ovomukoidille kananmunanvalkuaisesta (NOVD) ja deglykosyloidulle natiiville ovomukoidille (nOVD + PNGaseF) (kuva 20).
Esimerkki 19: rOVD:n fermentointi ja puhdistus rTOVD P. pastoris -ymppikanta poistettiin kylmäsäilytyksestä ja sulatettiin huoneenlämpötilaan.
Sulatettujen ymppipullojen sisältöjä käytettiin nestemäisen viljelyalustan inokuloimiseen primaarifermentorissa ja niitä kasvatettiin prosessilämpötilassa, kunnes saavutettiin tavoitesolutiheys. Sen jälkeen kasvatettu rOVD P. pastoris siirrettiin tuotantomittakaavan reaktoriin.
Viljelmää kasvatettiin tuotantobioreaktorissa tavoitefermentointiolosuhteissa ja siihen svötettiin joukko substraatteja. Fermentointia analysoitiin viljelmän puhtauden suhteen useita kertoja prosessin aikana.
Rekombinantti OVD puhdistettiin erottamalla solut nestemäisestä alustasta sentrifumoimalla ja sen jälkeen mikrosuodatuksella. Fermentointiliemi & säädettiin ensin pH-arvoon 3 ja laimennettiin DI-
N vedellä. Solut poistettiin käyttämällä 3 30 korisentrifugointia. Kerätty supernatantti säädettiin
N pH-arvoon 7 käyttämällä natriumhydroksidia, ja = suoritettiin 0,2 tm: n suodatus ja sen jälkeen
N kalvosuodatus, jossa käytettiin viisi tilavuutta
S deionisoitua vettä. 0,2 tm:n permeaatit säädettiin pH- 2 35 arvoon 5 ja konsentroitiin sitten 5 kDa:n TFF-membraanin
N avulla. 5 kDa:n retentaatti saostettiin käyttämällä 65 % kylläistä ammoniumsulfaattia. Suolan lisäämisen jälkeen pH säädettiin pH-arvoon 4-4,1 fosforihapolla.
Seosta inkuboitiin sekoittaen huoneenlämpötilassa vyön yli. Seuraavana päivänä sakat lingottiin käyttämällä korisentrifugointia. rTOVD-saostumat liuotettiin DI- veteen ja pH säädettiin arvoon 5 käyttämällä natriumhydroksidia. rOVD-liuos kalvosuodatettiin tämän jälkeen ja sitten retentaatti syötettiin 0,2 tm:n pullosuodatinten läpi.
TOVD-liuos dehydratoitiin TOVD-jauheeksi käyttämällä sumutuskuivainta.
Esimerkki 20: Vetyperoksidikäsittely rOVD:n puhdistuksen aikana
Nestemäinen rOVD konsentroitiin pitoisuuteen 50-60 g/L käyttämällä 5 kDa:n TFF-membraania. rOVD- liuos johdettiin 0,2 tm:n suodattimen läpi mikrobien poistamiseksi. rTOVD-liuokseen lisättiin hitaasti samalla sekoittaen vetyperoksidia, happea tuottavaa ainetta, määränä, joka oli yhtä suuri kuin 10 tilavuus- % liuoksesta. Seosta inkuboitiin sekoittaen ja tarkkailtiin sen varmistamiseksi, että väri muuttui käsittelyä edeltävästä tumman vihreästä-ruskeasta väristä käsittelyn jälkeiseksi vaalean keltaiseksi väriksi. 1,5 tunnin kuluttua suoritettiin kalvosuodatus 5 kDa:n TFF-membraanin avulla käyttämällä 5 tilavuutta
DI-vettä. 5 kDa:n kalvosuodatusretentaatissa oleva rOVD saostettiin käyttämällä ammoniumsulfaattia 65 %:n & suolasaturaationa huoneenlämpötilassa. Suolan
N lisäämisen jälkeen pH säädettiin pH-arvoon 4-4,1 3 30 fosforihapolla. Seosta inkuboitiin sekoittaen vyön vli
N saostumien muodostamiseksi. Seuraavana päivänä = saostumat lingottiin käyttämällä korisentrifugointia.
N Saostumat poistettiin, liuotettiin deionisoituun veteen
S ja pH säädettiin arvoon 5 käyttämällä 2 35 natriumhydroksidia. Viiden kDa:n TFF-membraanit
N puhdistettiin ja suoritettiin kalvosuodatus käyttämällä
DI-veden tilavuusmääriä, kunnes saavutettiin retentaatin johtavuus, joka oli pienempi kuin 2,0 mS.
Retentaatti johdettiin 0,2 tm:n pullosuodatinten läpi.
Suodatettu rOVD-liuos sumutuskuivattiin tämän jälkeen ja varastoitiin.
Esimerkki 21: Uudelleen prosessoitu rOVD, käsitelty vetyperoksidilla
OVD-jauhe liuotettiin deionisoituun veteen pitoisuuteen 50-60g/L ja suodatettiin onttokuituisen 0,2 tm:n tangentiaalivirtaussuodattimen läpi ja sitten 0,2 tm:n pullosuodattimen läpi. TOVD-liuokseen sekoitettiin hitaasti vetyperoksidia määränä, jolla saatiin 10 %:n liuos, ja inkuboitiin kolmenkymmenen minuutin ajan. Käsitelty liuos pestiin 5 kDa:n membraanin läpi käyttämällä 5 tilavuutta DI-vettä.
Retentaattiliuokseen lisättiin hitaasti ammoniumsulfaattia ja pH säädettiin arvoon 4 -—- 4,1 käyttämällä fosforihappoa. Yön yli kestäneen inkuboinnin ja keskivoimakkaan sekoittamisen jälkeen liuos sentrifugoitiin, ja supernatantit poistettiin.
Saostumat kerättiin, liuotettiin DI-veteen ja säädettiin pH-arvoon 5 käyttämällä natriumhydroksidia.
Proteiiniliuos desalinoitiin 5 kDa:n membraanilla ja suodatettiin 0,2 jm:n pullosuodattimen läpi. Sen jälkeen proteiiniliuos sumutuskuivattiin TOVD-jauheen tuottamiseksi. & Esimerkki 22: Aistimuksellinen testaus ja
N tulokset 3 30 rOvVD-nayte ja H202-uudelleenprosessoitu näyte,
N josta käytetään nimitystä RE-RC, analysoitiin = aistiominaisuuksien suhteen vetyperoksidikäsittelyn
N vaikutusten määrittämiseksi.
S Kummastakin kuivasta näytteestä valmistettiin 2 35 liuos deionisoidulla vedellä konsentraationa 4,23 &%
N p/t. Molemmat näytteet esitettiin raadin jäsenille samassa istunnossa monadisesti. Koulutetut jäsenet
(n=6) arvioivat molemmat näytteet niiden ulkonäön, hajun, maun, suutuntuman ja jälkimaun suhteen.
Jokaisessa kategoriassa jäsenet kuvailivat havaitut ominaisuudet ja sen jälkeen arvioivat kunkin ominaisuuden voimakkuuden (Kemp et al. 2009) käyttämällä voimakkuuden arviointiasteikkoa (taulukko 25).
Taulukko 26 osoittaa, että vetyperoksidilla käsitelty näyte oli väriltään vaaleampi ja sillä oli puhtaampi aistiprofiili ja vähemmän aistiominaisuuksia verrattuna kontrollinäytteeseen.
ULKONÄKÖ ULKONÄKÖ HAJU, MAKU, JÄLKIMAKU & (Kirkkaus) (Värin SUUTUNTUMA (Voimakkuuden voimakkuus) arviointi yksittäisille ominaisuuksille jokaisessa kategoriassa) 1 = erittäin 1 = erittäin . . . . 1 = hyvin vähäinen lievästi samea | vaalea 2 = lievästi 2 = vaalea 2 = vähäinen samea 3 = 3 = 3 = kohtalainen vahainen/kohtal| kohtalainen ainen sameus voimakkuus 4 = . kohtalaisesti 4 = tumma 4 = voimakas 5 = erittäin 5 = erittäin 5 = hyvin voimakas samea tumma
N
2 Taulukko 25: Ominaisuuksien voimakkuuden 0 arviointiasteikko ? 15 <t
N Jauhe-erän H202- = nimi uudelleenprosessointu a ~~ Ulkonäkö vaaleankeltainen/vihreä (2), erittäin
S kirkas (0), kupliva, ei helppo vaaleankeltainen (1),
I sekoittaa (näkyvää sakkaa) kirkas (0), erittäin
N vaahtoava
N
D lievästi/kohtalaisesti tunkkainen tunkkainen (1) (2,5), lievästi pähkinäinen (2)
Maku lievästi kirnupiimäinen (2), erittäin lievästi
TEER Jt 0 paahdetun pähkinän makuinen (2,5), lievästi hiivainen (2)
EE
Taulukko 26: Aistiarvioinnin tulokset
Esimerkki 23: H202-kasitelty rOVD, testattu liukenevuuden ja kirkkauden suhteen
Kontrolli- ja vetyperoksidikäsiteltyjen näyteliuosten (4,23 % p/t) liukenevuus ja kirkkaus mitattiin optisena tiheytenä (A600) käyttämällä spektrofotometria. Pienempi absorbanssiarvo (600 nm:n aallonpituudella) ilmaisee näyteliuoksen suurempaa kirkkautta ja liukenevuutta.
Vetyperoksidikäsitellyllä näytteellä oli pienempi absorbanssi (taulukko 27) ja vaaleampi väri verrattuna kontrolliin. Tämä osoitti, että käsittely sai aikaan parannetun ulkonäön vähemmän voimakkaana värinä ja kirkkaana liuoksena. Nämä ominaisuudet on esitetty kuvassa 21. rc.
S Taulukko 27: Näyteliuosten (4,23 % p/t)
N absorbanssi (600 nm:ssä) < 20
J Esimerkki 24: Proteiinipatukan valmistus ja
E testaus kovuuden ja aistimuksellisen miellyttävyyden
K suhteen
S Pilkottujen taatelien pilkottujen pähkinöiden
S 25 (mantelien ja saksanpähkinöiden), ja kaakaon
N homogeeniset seokset yhdistettiin kiinnostuksen kohteena olevaan proteiinijauheeseen kuten esitetty taulukossa 28. Taatelien ja pähkinöiden määrää vähennettiin formulaatioissa, jotka sisälsivät proteiinijauheita taulukon 29 mukaisesti.
Taateli :pähkinä-suhde pidettiin vakiotasolla 4,6.
Munanvalkuaisproteiinijauhe ja nOVD valmistettiin sisältöinä 2, 8, 16 tai 23 % ja rOVD valmistettiin sisältöinä 2, 4, 8, 12, tai 16 %. (Taulukko 28 — taulukko 31).
Puolet jokaisesta seoksesta paistettiin uunissa 350 F-asteessa kymmenen minuuttia. "Toinen puolisko kustakin seoksesta testattiin paistamattomana seoksena. rion Josa
Taulukko 28: Kontrolliformulaatiossa käytettyjen aineosien luettelo ja niiden osuudet isoa tao [pa
Aineosat 0, 0, 0, 0, 0, proteiinia | proteiinia | proteiinia proteiinia proteiinia
N
O
N
I
I
<t
N
E a
N
S Prote-
J MO 2,33 9,33 18,67 26,83 37,33 07 11N1
N
O
N
> nile Joo J fee fw
Taulukko 29:
Munanvalkuaisproteiiniformulaatioissa käytettyjen aineosien luettelo ja niiden osuudet 2 % 8 % 16 %
Aineosat CL 0, CL 23 % proteiinia proteiinia proteiinia proteiinia 76,67 70,67 62,33 55,25 vateensä EE PE J100 Jao
Taulukko 30: nOVD-formulaatioissa käytettyjen aineosien luettelo ja niiden osuudet 2 % 4 % 8 % 12 % 16 %
Alneosat proteiinia | proteiinia | proteiinia proteiinia proteiinia 76,71 74,95 71,14 67,28 63,61
Prote- 11N1
Yhteensä | 100 100 100 100 100
O
S
N Taulukko 31: rOVD-formulaatioissa käytettyjen
I
S aineosien luettelo ja niiden osuudet.
I
= 10
N
I Esimerkki 25: Proteiinipatukan jami - kovuus/tekstuuritesti
N . K . . . . . o Esimerkissä 25 valmistettujen paistettujen ja o
I paistamattomien proteiinipatukoiden 2 15 tekstuuriominaisuudet mitattiin käyttämällä CT3 = Brookfield Texture Analyzer -laitetta (1500 gin punnituskenno). Proteiinipatukoiden katkaisemiseen, taivuttamiseen ja kovuuden mittaamiseen käytettiin kolmen kohdan taivutustestiä. Jokaista proteiinisisältöä kohti analysoitiin yksi näyte.
Käytetyt testiparametrit on esitetty taulukossa 32.
Paistettujen proteiinipatukoiden kovuustulokset olivat paljon suuremmat kuin kovuustulokset paistamattomassa versiossa.
Paistamattomissa proteiinipatukoissa kaikkien proteiinijauheiden 8 3:n sisällöllä saatiin samankaltaiset kovuusarvot. Kaikkien paistamattomien proteiinipatukoiden kovuusprofiili kasvoi asteittaisesti proteiinisisältöjen kasvaessa.
Kovuusarvot 16 %:n ja 23 %:n proteiinisisällöllä olivat myös verrattavissa munanvalkuaisproteiinin, natiivin
OVD:n ja rOVD:n osalta. Ks. taulukko 33 ja taulukko 34.
Munanvalkuaisproteiinia voitiin lisätä korkeintaan 32 %:n proteiinitasoille. Natiivilla ja rOVD:llä havaittiin 23 %:n maksimiproteiinisisällöt proteiinipatukassa. Suurempia proteiinikonsentraatioita ei pystytty lisäämään proteiinipatukkamuodossa. nOVD:n kovuusarvo 8 %:n sisältönä oli paljon pienempi kuin munanvalkuaisproteiinilla ja rTOVD:llä.
Kaikilla proteiinipatukkanäytteillä havaittiin kuitenkin samankaltaiset kovuusarvot 16 %:n ja 23 %:n sisällöillä. Natiivia ja rTOvVD:tä käsittävissä paistetuissa proteiinipatukoissa oli huokoinen sisus ja & kova ulkokuori suuremmilla 16 %:n ja 23 %:n sisällöillä.
N Kaiken kaikkiaan 8 %:n proteiinijauhesisältö oli 3 30 toivottavin (paremmat miellyttävyys- ja
N tekstuuriominaisuudet) kaikilla proteiinijauheilla. = a : s o 5
Näytetaajuus 30 pistettä/s
Tukivarsien välinen etäisyys
Tekstuuriominaisuudet
Taulukko 32: Kolmen kohdan taivutustestissä käytetyt testiparametrit kovuuden mittaamiseksi käyttämällä CT3 Brookfield Texture Analyzer -laitetta
Kovuus (g) proteiinisisällöillä
Kontrolli 8 % 12 % 16 % 23 % 32 % (0 3)
Munanvalku- 86,33 186,2 386,6 [299,2 434,6 393,6 aisproteiini ei novD 173,2 463, 8 360 411 . saatavilla ei rOvVD 182,2 291,2 |338,2 402,4 . saatavilla
N
IN 5 Taulukko 33: Testitulokset paistamattomille 0 proteiinipatukkanäytteille
O
I
<t
N
T Kovuus (g) proteiinisisällöillä =
Kontrolli
K 8 % 12 % 16 % 23 % 32 % (0 3)
S
0 Munanvalku- 1525,2| 1490 1544,4 1506,6/| 1534,2
S aisproteiini
N
D
1193 ei novD 1072,8] 1054,4 | 1506,2 1433,8 saatavilla ei rovD 1380, 4 1499 1504 1565, 4 saatavilla
Taulukko 34: Testitulokset paistetuille proteiinipatukkanäytteille
Esimerkki 26: Proteiinipatukan aistitesti
Koulutetut yrityksen sisäiset arviointiraadin jäsenet arvioivat esimerkissä 26 kuvatulla tavalla valmistetut näytteet laatuominaisuuksien suhteen.
Testatut laatuominaisuudet sisälsivät ulkonäön, hajun, maun/sivumaun, suutuntuman/tekstuurin ja yleisen miellyttävyyden yhdeksänportaisella asteikolla 1: äärimmäisen epämiellyttävä, 2: hyvin epämiellyttävä, 3: kohtalaisen epämiellyttävä, 4: hieman epämiellyttävä, 5: ei miellyttävä eikä epämiellyttävä, 6: hieman miellyttävä, 7: kohtalaisen miellyttävä, 8: hyvin miellyttävä, ja 9: äärimmäisen miellyttävä.
Paistama-|8 %:n Paistettu|8 %:n ton proteiinisisältö proteiinisisältö (paistamaton) (paistettu)
Ominaisuus] kontrolli Munan- novD| rovD| Kontrolli | Munan- n0vD| rovpD den valku- valku- miellyttä- : : e aispro- aispro-
N vyys teiini teiini
O
N
: on |e [osk [s [I <Q x su b ble L bl
N
I Maku/ jami a sivumaku 6,5 4 7 4 7 5 .
S Tekstuuri/ 4,5 4 4,5
I suutuntuma
N
S Yleinen 7 7 4 7 5 4 7
D
Taulukko 35: Aistimuksellisen miellyttävyyden tulokset 8 %:n proteiinipatukkanäytteille
Paistamattoman kontrollinäytteen kohdalla raadin jäsenet totesivat, että sillä oli hyvä ulkonäkö, hieman pehmeä tekstuuri/purutuntuma mutta vyleisesti hyvä maku eikä epämiellyttävää jälkimakua. Paistetun version kohdalla jäsenet pitivät näytteen kaikista ominaisuuksista korkeimman pistemäärän verran ja antoivat sille täydet pisteet.
Paistamattomien (8 %:n) proteiinipatukoiden kohdalla jäsenet antoivat seuraavat kommentit: munanvalkuaisproteiinipatukka maistui tootsie roll - makeiselta, se oli makea ja pysyi koossa mutta siinä oli kuiva suutuntuma; natiivin OVD:n patukka ei ollut niin tahmea verrattuna kontrolliin mutta siinä oli voimakas
OVDmainen, metallinen ja hapan maku ja kuiva suutuntuma; ja rOVD-patukassa ei ollut happamuutta, se ei ollut ihan niin makea mutta pysyi koossa ja siinä oli miellyttävä jälkimaku.
Paistettujen (8 2:n) proteiinipatukoiden kohdalla jäsenet antoivat seuraavat kommentit: munanvalkuaisproteiinipatukka oli hieman hapan, siinä oli keksimäinen/paahdetun viljan kaltainen maku ja jälkimaku; natiivin OVD:n patukka oli kovempi ja tahmea verrattuna kontrolliin sekä maukkaampi; ja rOvVD- patukoissa ei ollut happamuutta, ne olivat sitkeitä ja
O . . CL
N tahmeita, mistä raadin jäsenet pitivät.
N
O
Q 30 <t
N
I . . 16 %:n oc Paistama-|16 %:n Paistettu , ee lee ton proteiinisisältö
K . (paistettu)
O (paistamaton) o <t
O
N
O
N
D
E El] ET den valku- valku- miellyttä- aispro- aispro- vyys teiini teiini
PYSYN ps ts fo EN ää fa dss fa sels (k |r fs ll pl lt Bf 1 7 3 1 sivumaku
Tekstuuri/ mis | PEE [ Fl an [lel k EI
Taulukko 36: Aistimuksellisen miellyttävyyden tulokset 16 %:n proteiinipatukkanäytteille
Paistettujen (16 2:n) proteiinipatukoiden 5 kohdalla jäsenet antoivat seuraavat kommentit: munanvalkuaisproteiinipatukka maistui paahdetulle ja leipämäiselle, oli valkoiseen vivahtava ja siinä oli jauhoinen suutuntuma; nOVD-patukka oli erittäin kova ja hankala purra, näytti kovalta leivältä, siinä oli voimakas hapan maku, josta jäi poltteleva tunne; rOVD- patukassa oli pehmeää makeutta, jauhoinen ja paahdetun oloinen sivumaku, eikä happamuutta tai jälkimakua, ja se oli tahmea mutta kova.
Kaiken kaikkiaan TOVD-patukat pärjäsivät 0 15 paremmin kuin nOVD-patukat ja olivat verrattavissa
S munanvalkuaisproteiininäytteisiin esimerkeissä 25 — 27 0 kuvatuissa testeissä. 23 %:n maksimiproteiinisisältö = näytti mahdolliselta nOVD:lle ja rOVD:1lle, kun taas
N munanvalkuaisproteiininäytteet ylsivät jopa 32 %:n
E 20 sisältöihin. Kahdeksan prosentin patukat katsottiin 5 parhaiksi sisällöiksi kaikille proteiinipatukoille.
S Kahdentoista prosentin rOVD-patukoissa oli
N lievää happamuutta paistamattomissa patukoissa, mutta
N
D paistetuissa patukoissa ei havaittu happamuutta.
Paistetut patukat olivat sitkeitä, tahmeita ja kovia.
Esimerkki 27: rOVD-salaatinkastike
Valmistettiin salaatinkastike käyttämällä
L5M-A-homogenisaattoria (Silverson) ympäristön lämpötilassa. Fmulsiot valmistettiin dispergoimalla proteiinijauhetta ja suolaa vesifaasiin (vesi ja etikka) ja sekoittamalla 2000 rpm:n nopeudella 5 minuuttia käyttämällä General Purpose Disintegrating
Head -päätä. Sekoittamisen jälkeen lisättiin canola- öljyä kontrolloidusti ja homogenisoitiin 6000 rpm:n nopeudella 15 minuuttia käyttämällä Square Hole High
Shear Screen -seulaa stabiilin öljy-vedessä-emulsion muodostamiseksi.
Kaikki emulsionäytteet siirrettiin lasiputkiin, suljettiin muovikannella, ja varastoitiin 4 C-asteeseen seitsemän vuorokauden ajaksi. Näytteiden stabiliteetteja arvioitiin tarkkailemalla visuaalisesti näkyvää seerumin erottumiskorkeutta pohjafaasissa varastointiaikana. Fysikaalista stabiliteettia tarkkailtiin, kunnes visuaalista faasierottumista ei tapahtunut. Emulsion stabiliteetti ilmaistiin seuraavasti: seerumi-% = (Ht /H0) *100. HO on alkuperäinen emulsiokorkeus ja näkyvän seerumin erottumiskerroksen korkeus (Ht).
Esitettiin kontrolli- ja muissa & salaatinkastikenaytteissa kaytettyjen aineosien
N luettelo ja niiden osuudet tietyn kiinnostuksen kohteena 3 30 olevan proteiinin kanssa (taulukko 37).
N
= a
S
3 35
S
D lemons [nov os lowes aineosa | [0
EE Jaa = eessä oe es fs
INN ssä RB kk |]
Taulukko 37: Aineosien luettelo.
Taulukossa 38 on esitetty kastikkeiden emulsiostabiliteetti varastointiaikana. Sekä nOVD- että rOVD-naytteilla oli parempi emulsiostabiliteetti verrattuna kontrollinäytteeseen, jossa faasierottuminen tapahtui ensimmäisen 4 C-asteessa varastointipäivän aikana. Päivän 2 jälkeen nOVD:tä ja rOVD:tä sisältävissä näytteissä ei tapahtunut juurikaan muutosta emulsion faasierottumisessa. Korkeammat arvot ilmaisevat alhaisempaa emulsiostabiliteettia.
Emulsiostabiliteetti
Aika Näyte o
O
N
O Päivä 1 9 % rovD 17
N
O
Q 9 % noOVD 15 <t
N ees Jw
I jami a
PINNI
N o
S 9 % nOVD 18,8
O
N
S | | konsti [aka
N
D
Päivä 3 9 % rovD 26
EE o jaa = en fr
EE o jaa = Jen fa
IEE ja = n fo
IEE ja en fo
Taulukko 38. Emulsiostabiliteetin tulokset
Esimerkki 28: rOVD-voitelumunan muodostaminen
TOVD:n kalvonmuodostus- ja kiillonmuodostustoimintaa arvioitiin leipäsovelluksessa. Leivontaohjeet: a. Sekoitetaan pienessä astiassa yhteen hiivaa ja sokeria, ja lisätään lämmintä vettä (85-95 F).
Annetaan olla 5 min. b. Lisästään vesi sekoituskulhoon. c. Sekoitetaan hitaasti joukkoon jauhoa (30 s), @ kunnes muodostuu kiinteä taikina (sekoitetaan 2 min
S nopeudella 3). se d. Vaivataan taikinaa (taitellen 7 kertaa) + 15 kevyesti jauhotetulla tasolla 30 s, lisäten pieniä
N
- ripauksia jauhoa ainoastaan tarvittaessa. = e. laitetaan taikina frasvattuun kulhoon. 5 Heitetään taikina ympäri kulhon sisällä, niin että
I taikinan yläosa saadaan myös rasvattua kevyesti.
S 20 Peitetään ja annetaan nousta 45 minuuttia 80 F-asteen
N
D kohotuslämpötilassa (1. kohotus).
f. Kumotaan taikina jauhotetulle tasolle ja vaivataan ilma pois (taitellaan 7 kertaa). g. Muotoillaan pieneksi leiväksi ja laitetaan rasvattuun pieneen vuokaan. h. Peitellään ja annetaan nousta 30 minuuttia huoneenlämpötilassa (2. kohotus). i. levitetään sopivaa voiteluainetta taikinapallojen päälle 3 3:n määrä. (Mikäli käytetään seesaminsiemeniä, laitetaan 10 seesaminsiementä jokaiseen taikinapalloon voiteluaineen päälle). j. Paistetaan 350 F-asteessa 8 minuuttia tai kullanruskeaksi (vaihdetaan leivän paikkaa 4 min kohdalla tasaisen paistumisen aikaansaamiseksi kaikilla näytteillä). k. Päälle lisättiin 3 % voiteluainetta koko leipätaikinan painosta. Käytettiin 25 g kutakin näytettä (koko voitelumuna = 0,75 g). 1. Näytteille, joissa käytettiin kokomunaa ja kaupallista voitelumunankorviketta, taikinan pinnalle levitettiin 0,75 g kutakin näytettä.
Kiinnostuksen kohteena olevalle proteiinille käytetyt formulaatiot on esitetty taulukossa 39:
Teme fe ese |e |e : & & Kalvonmuodostusa 9,33 8,79 : rel | 0 <
N 25 Taulukko 39: Voitelumunaformulaatiossa
E käytettyjen aineosien luettelo ja niiden osuudet. 5
S Seesaminsiementen kiinnityskyky: Minkä tahansa
N päällysteen kiinnityskyky kakun, leivän, rinkelien tai
S 30 muiden paistotuotteiden päälle on tärkeä tekijä voitelumunassa. Kunkin kalvonmuodostusaineen sitomiskyvyn arvioimiseen paistamisen jälkeen käytettiin seesaminsiemeniä. Voiteluaineen levittämisen jälkeen ja ennen paistamista laitettiin kuhunkin taikinapalloon 10 seesaminsiementä. Näiden seesaminsiementen kiinnityskyky laskettiin leipään paistamisen jälkeen kiinni jääneiden siementen määrän perusteella.
Saatiin seuraavat tulokset: [fm kontrolli |voitelumunan- kuaispro- korvike teiini määrä
Taulukko 40: Seesaminsiementen kiinnittymismäärät
Voitelumunattomalla kontrollinäytteellä ei ollut sitomiskykyä seesaminsiemenille ja pintaan oli kiinnittyneenä nolla seesaminsiementä paistamisen jälkeen. Kaikki muut kalvonmuodostusaineet olivat kuitenkin pystyneet pitämään kiinni kaikki 10 siementä paistamisen jälkeen, mistä seurasi 100 %:n kiinnityskyky päällysteille.
Kolorimetrinen määritys: Yksittäisiä näytekuvia analysoitiin väridatan suhteen RGB- spektrillä käyttämällä Colorgrab-sovellusta (Loomatix). & Naytearvot muodostettiin käyttämällä leivänpinnan
N keskeltä otettua 2x2 cm:n poikkileikkausta. RGB-data <Q 25 muunnettiin sitten CIELAB-järjestelmään käyttämällä
N online-ohjelmistoa www.colormine.org. CIELAB-malli on
E väriavaruusjärjestelmä, joka ilmaisee värin 3 arvona:
N L* valoisuudelle mustasta (0) valkoiseen (100), a*
S vihreästä (-) punaiseen (+), b* sinisestä (-) keltaiseen
Q 30 (+).
N
D
NNN N EN te | 000 | em voitelumunankorvike 68,349 0,04763 34,7033 iini e | ee oe [eee
Taulukko 42: CIELAB-tulokset leivälle paistamisen jälkeen
TOVD- ja munanvalkuaisproteiininäytteillä oli korkeampi L*-arvo, mikä viittasi suurempaan kirkkauteen tai luminanssiin. Kontrolli- (ei voitelumunaa), kaupallisilla voitelumunankorvike- ja munanvalkuaisproteiininäytteillä oli alhainen a*-arvo, mikä viittasi alhaisempaan punaisuuteen tai ruskeuteen verrattuna kokomuna- ja rOVD-naytteisiin.
Kokovoitelumuna- ja rOVD-naytteilld oli myös samankaltaiset b*-arvot, mikä viittasi samankaltaisiin keltaisen sävyihin verrattuna muihin näytteisiin.
Visuaalinen tarkastelu: Kontrollinäyte näytti vaalealta, ryppyiseltä ja siinä ei ollut kiiltoa.
Voitelumunanäytteellä oli hyvä fruskistuminen, hyvä kiilto ja sileä pinta. Voitelumunankorvikenäytteessä & oli sileä pinta ja vähäinen havaittava kiilto.
N Munanvalkuaisproteiinijauhenäytteellä sekä TOVD-
S 20 näytteellä oli hyvä kiilto ja ruskistuminen.
N TOVD toimi hyvin kalvonmuodostus- ja = kiillonmuodostusaineena. Kaikki seesaminsiemenet
N pysyivät pinnalla ruskistamisen jälkeen, minkä viittasi
S hyviin kalvonmuodostus- ja sitomiskykyihin. Visuaalisen 2 25 tarkastelun ja väriarvojen perusteella sillä oli hyvä
N kiillonmuodostus ja ruskistuminen verrattuna muihin näytteisiin (kuva 22).

Claims (80)

SUOJAVAATIMUKSET
1. Koostumus, joka käsittää frekombinanttia ovomukoidiproteiinia (rovD) , jossa rOVD kasittaa ainakin yhden glykosyloidun asparagiinitähteen ja rOVD: ssa ei ole olennaisesti N-kiinnittynyttä mannosylaatiota.
2. Suojavaatimuksen 1 mukainen koostumus, jossa jokainen glykosyloitunut asparagiini käsittää yhden N-asetyyliglukosamianin.
3. Suojavaatimuksen 1 tai suojavaatimuksen 2 mukainen koostumus, jossa rOVD käsittää ainakin kolme glykosyloitunutta asparagiinitähdettä.
4. Jonkin suojavaatimuksista 1 - 3 mukainen koostumus, jossa koostumus on jauhe.
5. Suojavaatimuksen 4 mukainen koostumus, jossa koostumuksella on proteiinisisältö, jossa on vähintään 70 % rOVD-proteiinia paino/paino ja/tai paino per koostumuksen kokonaistilavuus.
6. Suojavaatimuksen 4 tai suojavaatimuksen 5 mukainen koostumus, jossa koostumuksella on proteiinisisältö, jossa on vähintään 80 3 rOVD- proteiinia paino/paino ja/tai paino per koostumuksen kokonaistilavuus.
7. Jonkin suojavaatimuksista 4-6 mukainen koostumus, jossa koostumuksella on proteiinisisältö, jossa on vähintään 85 % rOVD-proteiinia paino/paino 0 ja/tai paino per koostumuksen kokonaistilavuus.
S 8. Jonkin suojavaatimuksista 4-7 mukainen O koostumus, jossa koostumuksella on proteiinisisältö, = 30 jossa on vähintään 90 % rOVD-proteiinia paino/paino N ja/tai paino per koostumuksen kokonaistilavuus.
E
9. Jonkin suojavaatimuksista 4-8 mukainen S koostumus, jossa koostumuksella on proteiinisisältö, S jossa on vähintään 95 % rOVD-proteiinia paino/paino N 35 ja/tai paino per koostumuksen kokonaistilavuus. S
10. Jonkin suojavaatimuksista 4-9 mukainen koostumus, jossa jauhe käsittää vähemmän kuin 10 2 kosteutta paino/paino ja/tai paino per koostumuksen kokonaistilavuus.
11. Jonkin suojavaatimuksista 4-10 mukainen koostumus, jossa jauhe käsittää vähemmän kuin 8 &% kosteutta paino/paino ja/tai paino per koostumuksen kokonaistilavuus.
12. Jonkin suojavaatimuksista 4-11 mukainen koostumus, jossa jauhe käsittää vähemmän kuin 6 % kosteutta paino/paino ja/tai paino per koostumuksen kokonaistilavuus.
13. Jonkin suojavaatimuksista 4-12 mukainen koostumus, jossa jauhe käsittää vähemmän kuin 5 % kosteutta paino/paino ja/tai paino per koostumuksen kokonaistilavuus.
14. Jonkin suojavaatimuksista 4-13 mukainen koostumus, jossa jauhe käsittää vähemmän kuin 3 % kosteutta paino/paino ja/tai paino per koostumuksen kokonaistilavuus.
15. Jonkin suojavaatimuksista 4-14 mukainen koostumus, jossa jauhe käsittää vähemmän kuin 2 % kosteutta paino/paino ja/tai paino per koostumuksen kokonaistilavuus.
16. Jonkin suojavaatimuksista 4-15 mukainen koostumus, jossa jauhe käsittää vähemmän kuin 1 % kosteutta paino/paino ja/tai paino per koostumuksen kokonaistilavuus.
17. Suojavaatimuksen 4 mukainen koostumus, & jossa jauhekoostumus on olennaisesti optisesti kirkas N vesiliuoksessa, joka käsittää noin 10 % rovD:tä 3 30 paino/paino ja/tai paino per vesiliuoksen N kokonaistilavuus. =
18. Suojavaatimuksen 4 mukainen koostumus, N jossa jauhekoostumus on olennaisesti optisesti kirkas S vesiliuoksessa, joka käsittää noin 20 % rovD:tä 2 35 paino/paino ja/tai paino per vesiliuoksen N kokonaistilavuus.
19. Suojavaatimuksen 4 mukainen koostumus, jossa jauhekoostumus on olennaisesti optisesti kirkas vesiliuoksessa, joka käsittää noin 30 % rovD:tä paino/paino ja/tai paino per vesiliuoksen kokonaistilavuus.
20. Jonkin suojavaatimuksista 1 - 19 mukainen koostumus, jossa koostumus käsittää vähemmän kuin 5 % tuhkaa p/p.
21. Suojavaatimuksen 1 mukainen koostumus, jossa rOVD on kanan rOVD.
22. Suojavaatimuksen 1 mukainen koostumus, jossa rOVD on kalkkunakondorin rOVD.
23. Suojavaatimuksen 1 mukainen koostumus, jossa rOVD on kolibrin rOVD.
24. Suojavaatimuksen 1 mukainen koostumus, jossa rOVD on hanhen rOVD.
25. Suojavaatimuksen 1 mukainen koostumus, jossa rOVD on ilmennetty mikrobiorganismilla.
26. Suojavaatimuksen 25 mukainen koostumus, jossa rOVD on ilmennetty Pichia-lajilla.
27. Suojavaatimuksen 25 mukainen koostumus, jossa rOVD on ilmennetty Saccharomyces-lajilla.
28. Suojavaatimuksen 25 mukainen koostumus, jossa rOVD on ilmennetty Trichoderma-lajilla.
29. Suojavaatimuksen 25 mukainen koostumus, jossa rOVD on ilmennetty Pseudomonas-lajilla.
30. Suojavaatimuksen 25 mukainen koostumus, & jossa rOVD on ilmennetty Aspergillus-lajilla. N
31. Suojavaatimuksen 25 mukainen koostumus, 3 30 jossa rOVD on ilmennetty E. coli -lajilla. N
32. Suojavaatimuksen 1 mukainen koostumus, = jossa koostumus on kiinteä nautittavissa oleva N koostumus. S
33. Suojavaatimuksen 32 mukainen koostumus, 2 35 jossa rOVD ei olennaisesti muuta kiinteän nautittavissa N olevan koostumuksen nähtävissä olevaa ulkonäköä verrattuna kiinteään nautittavissa olevaan koostumukseen, jossa ei ole rovVD:tä.
34. Suojavaatimuksen 32 mukainen koostumus, jossa rOVD ei olennaisesti muuta kiinteän nautittavissa olevan koostumuksen suutuntumaa verrattuna kiinteään nautittavissa olevaan koostumukseen, jossa ei ole rovD: ta.
35. Suojavaatimuksen 32 mukainen koostumus, jossa koostumus käsittää vähintään 0,1 % p/t rOovD:tä.
36. Suojavaatimuksen 32 mukainen koostumus, jossa koostumus käsittää korkeintaan 10 % p/t rOVD:ta.
37. Suojavaatimuksen 32 mukainen koostumus, jossa koostumus käsittää vähemmän kuin 20 % p/t rOVD:ta.
38. Suojavaatimuksen 32 mukainen koostumus, jossa koostumus käsittää vähemmän kuin 30 % p/t rOVD:ta.
39. Juomakoostumus, joka käsittää rekombinanttia ovomukoidiproteiinia (rOVD) ja vähintään yhtä nautittavissa olevaa nestettä, jossa rOVD on olennaisesti liukoinen koostumuksessa, jossa rOVD on olennaisesti optisesti kirkas vesiliuoksessa, joka käsittää enemmän kuin noin 10 % rOVD:tä paino/paino ja/tai paino per vesiliuoksen kokonaistilavuus.
40. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa rOVD muodostaa kirkkaan liuoksen konsentraationa, joka on noin 26 % - noin 30 % p/t vesiliuoksessa, pH-arvossa, joka on noin 2,5 - noin 6, huoneenlämpötilassa. &
41. Suojavaatimuksen 39 tai suojavaatimuksen N 40 mukainen juomakoostumus, jossa rOVD:n käsittävällä 3 30 juomakoostumuksella on olennaisesti korkeampi N liuoskirkkaus verrattuna heraproteiiniliuokseen samana = konsentraationa (p/t) vesiliuoksessa. N
42. Suojavaatimuksen 41 mukainen S juomakoostumus, jossa juomakoostumus ja 2 35 heraproteiiniliuos ovat pH:ssa, joka on noin 2 - noin
N 6. D
43. Suojavaatimuksen 42 mukainen juomakoostumus, jossa juomakoostumus ja heraproteiiniliuos ovat samassa lämpötilassa.
44. Suojavaatimuksen 43 mukainen juomakoostumus, jossa juomakoostumuksen pH on noin 2,0 = noin 6,0.
45. Jonkin suojavaatimuksista 39-44 mukainen juomakoostumus, jossa rOVD käsittää ainakin yhden glykosyloituneen asparagiinitähteen.
46. Jonkin suojavaatimuksista 39-45 mukainen juomakoostumus, jossa roVD:ssä ei ole olennaisesti N- kiinnittynyttä mannosylaatiota.
47. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa rOVD on kanan rOVD.
48. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa rOVD on kalkkunakondorin rOVD.
49. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa rOVD on kolibrin rOVD.
50. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa rOVD on hanhen rOVD.
51. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa TOVD on ilmennetty mikrobiorganismilla.
52. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa rOVD on ilmennetty Pichia- lajilla.
53. Suojavaatimuksen 39 mukainen & juomakoostumus, jossa rOVD on ilmennetty Saccharomyces- N lajilla. 3 30
54. Suojavaatimuksen 39 mukainen N juomakoostumus, jossa rOVD on ilmennetty Trichoderma- = lajilla. N
55. Suojavaatimuksen 39 mukainen S juomakoostumus, jossa rOVD on ilmennetty Pseudomonas- 2 35 lajilla. N D
56. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa rOVD on ilmennetty Aspergillus- lajilla.
57. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa rOVD on ilmennetty E. coli - lajilla.
58. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa juomakoostumus käsittää vähintään 0,1 % p/t rovD:tä.
59. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa juomakoostumus käsittää korkeintaan 10 % p/t rOVD:ta.
60. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa juomakoostumus käsittää vähemmän kuin 20 % p/t rovD:tä.
61. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa juomakoostumus käsittää vähemmän kuin 30 % p/t rovD:tä.
62. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa juomakoostumus on kylmä juoma.
63. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa juomakoostumus on kuumennettu juoma.
64. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa juomakoostumus on huoneenlämpöinen juoma.
65. Suojavaatimuksen 39 mukainen & juomakoostumus, jossa juomakoostumuksessa oleva rOVD N säilyy olennaisesti liukoisena sen jälkeen, kun sille 3 30 on tehty lämpökäsittely lämpötilaan, joka on noin 72 °C N - noin 121 °C. =
66. Suojavaatimuksen 65 mukainen N juomakoostumus, jossa lämpökäsittely on kuumataytto. S
67. Suojavaatimuksen 65 mukainen 2 35 juomakoostumus, jossa lämpökäsittely on pastörointi. N
68. Suojavaatimuksen 65 mukainen juomakoostumus, jossa lämpökäsittely on retortti.
69. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa juomakoostumus on juoma, joka on valittu seuraavista: liemi, keitto, virvoitusjuoma, limonadi, maustettu vesi, proteiinivesi, vahvistettu vesi, ravitsemuksellinen juoma, energiajuoma, urheilujuoma, palautusjuoma, kuumennettu juoma, kahvipohjainen juoma, ja teepohjainen juoma.
70. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa juomakoostumus on juoma, joka on valittu kasvipohjaisesta maidosta, maitopohjaisesta juomasta, ja kasvipohjaisesta maitojuomasta.
71. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa juomakoostumus on maitoa sisältämätön juona.
72. Suojavaatimuksen 71 mukainen juomakoostumus, jossa juomakoostumus on mehupohjainen juoma.
73. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa juomakoostumus on äidinmaidonkorvikejuona.
74. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa juomakoostumus on ateriankorvikejuoma.
75. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, joka edelleen käsittää toisen proteiinin, jossa rOVD ja toinen proteiini aikaansaavat yhdessä proteiinin sulavuudella korjatun & aminohappopistemäärän (PDCAAS), joka on suurempi kuin N noin 0,85. 3 30
76. Suojavaatimuksen 75 mukainen N juomakoostumus, jossa toinen proteiini on = munanvalkuaisen lysotsyymi (OVL). N
77. Suojavaatimuksen 76 mukainen S juomakoostumus, jossa rOVD:n ja OVL:n suhde on noin 60 2 35 % TOVD:40 % OVL — noin 82 % rOVD:18 % OVL. N
78. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa rOVD ei olennaisesti muuta juomakoostumuksen nähtävissä olevaa ulkonäköä tai suutuntumaa verrattuna juomakoostumukseen, joka sisältää heraproteiinia samana konsentraationa kuin rTOVD.
79. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa rOVD ei olennaisesti muuta juomakoostumuksen nähtävissä olevaa ulkonäköä tai suutuntumaa verrattuna juomakoostumukseen, joka sisältää soijaproteiinia samana konsentraationa kuin rTOVD.
80. Suojavaatimuksen 39 mukainen juomakoostumus, jossa rOVD ei olennaisesti muuta juomakoostumuksen nähtävissä olevaa ulkonäköä tai suutuntumaa verrattuna juomakoostumukseen, joka sisältää herneproteiinia samana konsentraationa kuin rTOVD. O N O N O <Q <t N I jami a N o o <t O N O N D
FIU20234007U 2019-07-11 2020-07-10 Koostumuksia, jotka käsittävät rekombinanttia ovomukoidiproteiinia FI13395Y1 (fi)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962873159P 2019-07-11 2019-07-11
US201962873154P 2019-07-11 2019-07-11
EP20836348.1A EP3997118A4 (en) 2019-07-11 2020-07-10 PROTEIN COMPOSITIONS AND CONSUMABLE PRODUCTS THEREOF

Publications (1)

Publication Number Publication Date
FI13395Y1 true FI13395Y1 (fi) 2023-06-06

Family

ID=74115272

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FIU20234007U FI13395Y1 (fi) 2019-07-11 2020-07-10 Koostumuksia, jotka käsittävät rekombinanttia ovomukoidiproteiinia

Country Status (4)

Country Link
DE (1) DE202020005913U1 (fi)
DK (1) DK202300014Y9 (fi)
FI (1) FI13395Y1 (fi)
WO (1) WO2021007565A1 (fi)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3146649A1 (en) 2019-07-11 2021-01-14 Clara Foods Co. Protein compositions and consumable products thereof
AU2021353004A1 (en) 2020-09-30 2023-04-13 Nobell Foods, Inc. Recombinant milk proteins and food compositions comprising the same
US10947552B1 (en) 2020-09-30 2021-03-16 Alpine Roads, Inc. Recombinant fusion proteins for producing milk proteins in plants
WO2023004153A1 (en) * 2021-07-23 2023-01-26 Clara Foods Co. Purified protein compositions and methods of production
CN113896778B (zh) * 2021-09-27 2024-06-07 华南理工大学 一种改性麦糟蛋白及其制备方法与应用
WO2023122770A1 (en) * 2021-12-23 2023-06-29 Clara Foods Co. Protein compositions and consumable products thereof
WO2023154467A1 (en) * 2022-02-11 2023-08-17 Clara Foods Co. Protein compositions and consumable products thereof
WO2023192957A1 (en) * 2022-04-01 2023-10-05 Clara Foods Co. Recombinant protein recovery methods
US20240206509A1 (en) * 2022-12-22 2024-06-27 Clara Foods Co. Protein compositions and consumable products thereof

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003056914A1 (en) * 2001-12-27 2003-07-17 Glycofi, Inc. Methods to engineer mammalian-type carbohydrate structures
KR101698200B1 (ko) * 2013-08-22 2017-02-02 한국식품연구원 저항원성 식품 제조방법 및 그 방법에 의해 제조된 저항원성 식품
MX2017006127A (es) * 2014-11-11 2017-11-08 Clara Foods Co Metodos y composiciones para produccion de proteina de clara de huevo.
WO2016160655A1 (en) * 2015-03-27 2016-10-06 Kedar Challakere Synthetic avian-free egg white substitute and uses thereof
EP3840582A4 (en) * 2018-08-21 2022-08-03 Clara Foods Co. MODIFICATION OF PROTEIN GLYCOSYLATION IN MICROORGANISMS

Also Published As

Publication number Publication date
WO2021007565A1 (en) 2021-01-14
DK202300014U9 (da) 2024-07-05
DK202300014Y3 (da) 2023-07-03
DE202020005913U1 (de) 2023-07-04
DK202300014Y9 (da) 2024-07-05
DK202300014U1 (da) 2023-06-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK202300014Y3 (da) Proteinsammensætninger og konsumerbare produkter deraf
US11974592B1 (en) Protein compositions and consumable products thereof
US20230329294A1 (en) Protein compositions and consumable products thereof
US20230189857A1 (en) Recombinant proteins with functional properties
WO2023122770A1 (en) Protein compositions and consumable products thereof
US20230192811A1 (en) Non-animal based protein sources with functional properties
US12096784B2 (en) Protein compositions and consumable products thereof
US20240260636A1 (en) Protein compositions and consumable products thereof
US20240206509A1 (en) Protein compositions and consumable products thereof