FI107586B - Use of anticoagulant as diagnostic agent - Google Patents
Use of anticoagulant as diagnostic agent Download PDFInfo
- Publication number
- FI107586B FI107586B FI922719A FI922719A FI107586B FI 107586 B FI107586 B FI 107586B FI 922719 A FI922719 A FI 922719A FI 922719 A FI922719 A FI 922719A FI 107586 B FI107586 B FI 107586B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- vac
- anticoagulant
- polypeptide
- plasma
- marker
- Prior art date
Links
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 title claims abstract description 26
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 title claims abstract description 25
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 title description 5
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 title description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 25
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 25
- 102000000412 Annexin Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 108050008874 Annexin Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims abstract description 5
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 18
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 14
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 claims description 12
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 claims description 11
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 11
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 11
- 230000001732 thrombotic effect Effects 0.000 claims description 11
- 102100034283 Annexin A5 Human genes 0.000 claims description 9
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 9
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 8
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 claims description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 7
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 6
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 claims description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 4
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 claims description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims description 3
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910052738 indium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- APFVFJFRJDLVQX-UHFFFAOYSA-N indium atom Chemical compound [In] APFVFJFRJDLVQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052713 technetium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N technetium atom Chemical compound [Tc] GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052716 thallium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- BKVIYDNLLOSFOA-UHFFFAOYSA-N thallium Chemical compound [Tl] BKVIYDNLLOSFOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 102100036824 Annexin A8 Human genes 0.000 claims 1
- 101000928300 Homo sapiens Annexin A8 Proteins 0.000 claims 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 claims 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 6
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 abstract description 3
- 239000011630 iodine Substances 0.000 abstract description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 abstract description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 abstract description 3
- 239000002506 anticoagulant protein Substances 0.000 abstract description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 35
- WTBFLCSPLLEDEM-JIDRGYQWSA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC WTBFLCSPLLEDEM-JIDRGYQWSA-N 0.000 description 23
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 22
- SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 0.000 description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 5
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 5
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 5
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N dioleoyl phosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 5
- ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L disodium [3-[2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propoxy-oxidophosphoryl]oxy-2-hydroxypropyl] 2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propyl phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].CCCCCC=CCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COP([O-])(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 5
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- -1 phospho Chemical class 0.000 description 4
- 230000003331 prothrombotic effect Effects 0.000 description 4
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 3
- MHUWZNTUIIFHAS-CLFAGFIQSA-N dioleoyl phosphatidic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MHUWZNTUIIFHAS-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 3
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- LYRFLYHAGKPMFH-UHFFFAOYSA-N octadecanamide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(N)=O LYRFLYHAGKPMFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- DSNRWDQKZIEDDB-SQYFZQSCSA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-(1'-sn-glycerol) Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@@H](O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC DSNRWDQKZIEDDB-SQYFZQSCSA-N 0.000 description 2
- FJQZXCPWAGYPSD-UHFFFAOYSA-N 1,3,4,6-tetrachloro-3a,6a-diphenylimidazo[4,5-d]imidazole-2,5-dione Chemical compound ClN1C(=O)N(Cl)C2(C=3C=CC=CC=3)N(Cl)C(=O)N(Cl)C12C1=CC=CC=C1 FJQZXCPWAGYPSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N L-Dopa Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940030225 antihemorrhagics Drugs 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000000025 haemostatic effect Effects 0.000 description 2
- 229960004502 levodopa Drugs 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003836 peripheral circulation Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 2
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- BBMHARZCALWXSL-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogenphosphate monohydrate Chemical compound O.[Na+].OP(O)([O-])=O BBMHARZCALWXSL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- 235000012431 wafers Nutrition 0.000 description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 2
- 108090000669 Annexin A4 Proteins 0.000 description 1
- 102100034612 Annexin A4 Human genes 0.000 description 1
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 1
- 101150082143 CD24 gene Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QCDFBFJGMNKBDO-UHFFFAOYSA-N Clioquinol Chemical compound C1=CN=C2C(O)=C(I)C=C(Cl)C2=C1 QCDFBFJGMNKBDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 240000003550 Eusideroxylon zwageri Species 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 229910052688 Gadolinium Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000024659 Hemostatic disease Diseases 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N Octadecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 1
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 1
- UOZDOLIXBYLRAC-UHFFFAOYSA-L [2-hydroxy-3-(trimethylazaniumyl)propyl]-trimethylazanium;diiodide Chemical compound [I-].[I-].C[N+](C)(C)CC(O)C[N+](C)(C)C UOZDOLIXBYLRAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N chloroacetic acid Chemical compound OC(=O)CCl FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940106681 chloroacetic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JZULKTSSLJNBQJ-UHFFFAOYSA-N chromium;sulfuric acid Chemical compound [Cr].OS(O)(=O)=O JZULKTSSLJNBQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 230000001112 coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007862 dimeric product Substances 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 238000000572 ellipsometry Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 1
- UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N gadolinium atom Chemical compound [Gd] UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000011544 gradient gel Substances 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002346 iodo group Chemical group I* 0.000 description 1
- 150000002505 iron Chemical class 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 239000005355 lead glass Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- NCYVXEGFNDZQCU-UHFFFAOYSA-N nikethamide Chemical compound CCN(CC)C(=O)C1=CC=CN=C1 NCYVXEGFNDZQCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- LFGREXWGYUGZLY-UHFFFAOYSA-N phosphoryl Chemical group [P]=O LFGREXWGYUGZLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003966 vascular damage Effects 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
- A61K49/0041—Xanthene dyes, used in vivo, e.g. administered to a mice, e.g. rhodamines, rose Bengal
- A61K49/0043—Fluorescein, used in vivo
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
- A61K49/0056—Peptides, proteins, polyamino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/087—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins the peptide being an annexin, e.g. annexin V
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4721—Lipocortins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2123/00—Preparations for testing in vivo
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
- G01N2333/4701—Details
- G01N2333/4718—Lipocortins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2405/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving lipids
- G01N2405/04—Phospholipids, i.e. phosphoglycerides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Separation Of Suspended Particles By Flocculating Agents (AREA)
- Dental Preparations (AREA)
Abstract
Description
1 1075861 107586
Antikoagulantin käyttö diagnostisena aineena. - Användning av anticoagulant som diagnosmedel.Use of anticoagulant as diagnostic agent. - Användning av anticoagulant som diagnosmedel.
Esillä olevan keksinnön kohteena ovat aineet, erityisesti anneksiinit, jotka on leimattu detektoitavalla aineella, sekä näiden käyttö diagnosoinnissa.The present invention relates to agents, particularly annexins, which are labeled with a detectable agent and their use in diagnosis.
Veri muodostuu sitoutumattomista erikoissoluista, jotka ovat jakaantuneet plasma-mediumiin. Nk. plasmamembraanit erottavat solun sisällön ympäröivästä plasmasta. Nämä membraanit muodostuvat kaksoiskerroksena olevista fosfolipideistä ja näihin liittyvistä proteiineista, jotka osittain tunkeutuvat tämän kaksoiskerroksen läpi tai työntyvät siitä ulos.Blood is made up of special unbound cells that are distributed in the plasma medium. Nk. plasma membranes separate the cell contents from the surrounding plasma. These membranes are composed of bilayer phospholipids and related proteins that partially penetrate or protrude through this bilayer.
Eri fosfolipidit eivät ole mielivaltaisesti jakaantuneet kaksoiskerroksen ulompaan ja sisempään kuoreen, vaan solut pitävät nämä epäsymmetrisessä konfiguraatiossa (7, 8).The various phospholipids are not arbitrarily distributed in the outer and inner shells of the bilayer, but are held by the cells in an asymmetric configuration (7, 8).
Fosfatidyylikoliini (PC) ja sfingomyeliini (SPH) ovat dominoivia ulommassa kuoressa, kun taas fosfatidyyl1iseriini (PS), fosfatidyylietanoliamiini (PE) ja fosfatidyyli-inositoli (PI) ovat pääasiallisesti logalisoituneet sisempään kuoreen, joka on kohti sytosoluja. Tällä energiaa kuluttavalla asymmet-risyydellä on tavaton fysiologinen merkitys. PC ja SPH ovat fosfolipidiperheen voimakkaimmin inerttejä yhdisteitä ja ne ... käyttäytyvät äärimmäisen neutraalisti plasmakomponenttien * , suhteen eli täysin päinvastoin kuin muut yhdisteet. Tämä ] ' ulomman kuoren reagoimattomuus plasmaproteiinien suhteen on : " ehdoton edellytys veren nestemäisen tilan takaamiselle. Plasman erikoisproteiinit, jotka kuuluvat veren hyytymiskaskadiin, nk.Phosphatidylcholine (PC) and sphingomyelin (SPH) are dominant in the outer sheath, whereas phosphatidyliserine (PS), phosphatidylethanolamine (PE) and phosphatidylinositol (PI) are predominantly localized to the inner sheath towards the cytoskeleton. This energy-consuming asymmetry has unusual physiological significance. PC and SPH are the most inert compounds in the phospholipid family, and ... behave extremely neutrally with respect to plasma components *, in stark contrast to the other compounds. This inertness of the outer skin to plasma proteins is: "an absolute prerequisite for guaranteeing the fluid state of the blood. Special plasma proteins that belong to the blood coagulation cascade, the so-called.
• · ·."·· hyytymistekijät, voivat nimittäin aktivoituna muuttaa veren : : : nestemäisen tilan kiinteäksi tilaksi (9). Nämä hyytymistekijät voivat aktivoitua fosfoiipidien, kuten fosfatidyyliseriinin vaikutuksesta.Namely, when activated, coagulation factors, when activated, can transform blood::: into a solid state of the liquid state (9). These coagulation factors can be activated by phospholipids such as phosphatidylserine.
; Monissa tapauksissa, esimerkiksi verisuonen vioittumisen • · • · ♦ • · · • · · • · 2 107586 jälkeen, on tarpeellista, jopa elintärkeää, että hyytymistekijät aktivoituvat. Tällaisessa tilanteessa voi erityinen verisolu, verihiutale, luopua membraaniensa epäsymmetrisyydestä aktivointimekani-smien avulla, jotka kuljettavat fosfatidyyli-seriiniä ulompaan kuoreen, jossa se tukee hyytymistekijöiden aktivointia (10).; In many cases, such as vascular damage after 107586, it is necessary, even vital, for the coagulation factors to be activated. In such a situation, a particular blood cell, the platelet, can dispense with the asymmetry of its membranes through activation mechanisms that transport phosphatidylserine to the outer shell where it supports the activation of clotting factors (10).
Tällä verihiutaleen rasvamembraanin ulomman kuoren suunnitelmallisella fosfoiipidikoostumuksen muutoksella on suuri fysiologinen merkitys hemostaasil1 e, kuten esimerkiksi Scott'in. syndrooma osoittaa (11).This systematic change in the phospholipid composition of the platelet fat membrane outer shell is of great physiological importance, such as Scott's. syndrome indicates (11).
Kuitenkin myös patologia on fysiologiaa; siten veren hemostaasi voi eräissä tapauksissa johtua myös patologisesta tilasta, kuten on asianlaita valtimo-, sydän- ja 1askimotromboosien tapauksessa.However, pathology is also physiology; thus, in some cases, blood hemostasis may also be due to a pathological condition, as is the case with arterial, cardiac, and venous thromboses.
Nämä hemostaattiset häiriöt ovat useimmiten idiopaattisia ja tekevät lääkäreille mahdottomaksi niiden esiintymisen ennustamisen ja profylaktisen hoidon kehittämisen.These haemostatic disorders are mostly idiopathic and make it impossible for physicians to predict their occurrence and develop prophylactic treatment.
Esillä olevan keksinnön tavoitteena oli tuoda esiin apuaineita, jotka auttavat tunnistamaan ennakolta hemostaattiset häiriöt.It was an object of the present invention to provide adjuvants that aid in the early detection of hemostatic disorders.
... Päinvastoin kuin oireiden kehittyminen häiriöt kehittyvät useimmissa tapauksissa hitaasti. Tämän oireettoman etenemisvai- ’ heen aikana, nk. protromboottisen tilan aikana, koagulaatiojär- • · • ” jestelmä aktivoituu jatkuvasti paikallisesti. Tähän paikalli- seen aktivoitumiseen liittyy ääreisverenkierrossa verihiuta- ·.*: leiden esiintymistä, jotka ovat varhaisessa aktivoitumisti- • · · · lassa. Nämä verihiutaleet ovat siten jo alkaneet muuttaa ulompien plasmamembraanikuoriensa fosfoiipidikoostumusta.... Unlike the development of symptoms, disorders in most cases develop slowly. During this asymptomatic phase, the so-called prothrombotic state, the coagulation system is activated locally. This local activation is accompanied by the occurrence of platelets in the peripheral circulation that are in the early stage of activation. Thus, these platelets have already begun to alter the phospholipid composition of their outer plasma membrane shells.
Ulommissa kuorissa on läsnä fosfatidyyliseriiniä. Apuaineilla, jotka kykenevät diagnosoimaan tämän nk. protromboottisen tilan, : olisi suuri kliininen merkitys.Phosphatidylserine is present in the outer shells. Adjuvants capable of diagnosing this so-called prothrombotic state would have great clinical significance.
« · • » · « · · « · · » · · * · · « · · • · • * « · « • · • « • · * • · · 3 107586 * Esillä .olevan keksinnön kohteena ovat siten myös apuaineet, jotka kykenevät erottamaan spesifisesti fosfatidyyliseriinin fos fatidyylikoliinistä.The present invention also relates to adjuvants, which are capable of specifically separating phosphatidylserine from phosphatidylcholine.
Sen lisäksi, että ääreisverenkierrossa esiintyy heikosti aktivoituneita verihiutaleita, siellä on kiinnittyneinä täysin aktivoituneita verihiutaleita, joiden kohdalla suonen seinämä on patologisessa tilassa. Tätä kohtaa on pidettävä hemostaat-tisen järjestelmän aktivoitumisen laukaisijana. Tämän patologisen kohdan sekä tässä muodostuvan trombin paikallistamisella olisi mitä suurin terapeuttinen mielenkiinto.In addition to the presence of poorly activated platelets in the peripheral circulation, there are fully activated platelets adhered to where the vessel wall is in a pathological state. This point should be considered as the trigger for the activation of the hemostatic system. Locating this pathological site as well as the thrombus formed here would have the greatest therapeutic interest.
Esillä olevan keksinnön kohteena ovat sen vuoksi myös aineet, joilla voidaan paikallistaa hemostaattisen järjestelmän ja/tai trombin aktivoitumisen alkamiskohta.Therefore, the present invention also relates to agents capable of locating the point of onset of activation of the hemostatic system and / or thrombus.
Veren hyytymismekanismi on entsymaattisten reaktioiden kaskadi, jonka päässä on trombiinin muodostuminen, joka lopuksi muuntaa fibrinogeenin fibriiniksi. Erilaisia esikoagulointireaktioita, * kuten esimerkiksi protrombiinin aktivoitumista faktoreiden Xa ja Va vaikutuksesta katalysoivat fosfolipidipinnat, joihin hyytymistekijät sitoutuvat.The blood coagulation mechanism is a cascade of enzymatic reactions that terminate with the formation of thrombin, which ultimately converts fibrinogen into fibrin. Various pre-coagulation reactions, such as prothrombin activation by factors Xa and Va, are catalyzed by phospholipid surfaces to which the coagulation factors bind.
Niihin proteiineihin, jotka sitoutuvat fosfoiipideihin ja jotka • · · *.1 1 häiritsevät f osf olipidipinnoista riippuvia tapahtumia, kuuluu *·"1· yksi ryhmä, jonka sitoutuminen f osf oi ipideihin riippuuProteins that bind to phospholipids and which • · · * .1 1 interfere with events dependent on phospholipid surfaces include * · “1 · one group whose binding to phospholipids depends
Ca2+:sta.Ca 2+.
* · • » · ♦ · · • · Tähän ryhmään, jota kutsutaan myös anneksiineiksi, kuuluvat * ♦This group, also called annexin, includes * ♦
Liookortiini i:n, Ccalpaktiini l:n, proteiini II :n, Lipo- • · · kortiini III:n, p67-Calelektriinin lisäksi myös vaskulaarinen antikoagulanttiproteiini (VAC) ja IBC, PAP, PAPI, PP4, Endoneksiini II ja Lipokortiini V.In addition to lyocortin i, Calpalpinin I, protein II, Lipo · · · cortin III, p67-Calelectrine, also vascular anticoagulant protein (VAC) and IBC, PAP, PAPI, PP4, Endonexin II and Lipocortin V.
* 1* 1
Anneksiinien yhteiset rakenteelliset tunnusmerkit muodostavat f·» • · » • · · • · · * • · · • · · * · · • » · e » • a • · · « » • « 4 107586 _todennäköisesti perustan niiden samankaltaisille sitoutumis-ominaisuuksi11 e Ca2+:n ja fosfoiipidien suhteen. Vaikkakin tämä y1eisominaisuus koskee kaikkia anneksiineja, niiden affiniteetti Ca2+:lle ja eri fosfolipidi1 ajei11 e on selvästi yksilöllistä.The common structural features of the annexins provide a basis for their similar binding properties11. e for Ca 2+ and phospholipids. Although this particular property applies to all annexins, their affinity for Ca 2+ and the different phospholipid species are clearly individual.
Anneksiinien fysiologiset toiminnat koskevat membraaneihin liittyviä tapahtumia. VAC:n hyytymistä estävän vaikutuksen perusmekanismi selvitettiin fosfoiipidien katalyyttisen kapasiteetin estymisenä VAC:n näiden pinnoille sitoutumisen vaikutuksesta, mikä estää hyytymistä edistävien kompleksien muodostumisen näiden pinnoilla.The physiological functions of annexins refer to membrane-related events. The basic mechanism of VAC's anticoagulant activity was elucidated by the inhibition of the catalytic capacity of phospholipids by their binding to VAC, which prevents the formation of anticoagulant complexes on their surfaces.
Sitoutumistutkimukset ovat osoittaneet, että VAC liittyy reversiibelisti ja kalsiumista riippuvalla tavalla esikoa-guloiviin fosfoiipideihin.Binding studies have shown that VAC is reversibly and calcium-dependent associated with pre-coagulating phospholipids.
Myös muut sarjan Cd2+, Zn2+, Mn2+ ja Co2+ kaksivalenssiset kationit vaikuttavat positiivisesti liittymiseen, mutta ei kuitenkaan samassa mitassa kuin Ca2+.Other divalent cations of the Cd2 +, Zn2 +, Mn2 +, and Co2 + series also have positive effects on incorporation, but not to the same extent as Ca2 +.
Lisäksi havaittiin yllättäen, että Ca2 + - ja Zn2+-ionien läsnäololla on erittäin positiivinen vaikutus VAC:n adsor-boitumiseen fosfoiipidei11 e.In addition, it was surprisingly found that the presence of Ca 2+ and Zn 2+ ions has a very positive effect on the adsorption of VAC on phospholipid.
• · · • · · * 1 1• · · • · · * 1 1
Yllättäen todettiin, että VAC sitoutuu plasman kalsiumkon- • « ;·, sentraatioissa f osf atidyyliseriiniin, mutta ei f osf atidyy 1 i - • · » . koliinin ja sfingomyeliiniin. Sen vuoksi VAC tunnistaa ja « ♦ « • · · I 1 sitoutuu spesifisesti perifeerisiin verihiutaleisiin, joiden ♦ · 1 '·,/ ulommissa membraanikuorissa on fosfatidyy1iseriiniä. Lisäksi • · « *·’ VAC tunnistaa myös tällaiset vaskulaarisen järjestelmän kohdat spesifisesti, jotka asettavat PS:n alttiiksi verelle.Surprisingly, it was found that VAC binds to plasma calcium concentrates, but not to phosphoryl, but does not. choline and sphingomyelin. Therefore, VAC recognizes and binds specifically to peripheral platelets that have phosphatidyliserine in their outer membrane shells. In addition, the VAC also specifically recognizes such sites of the vascular system that expose the PS to blood.
Tämä fosfolipidien erikoistuminen tekee VÄC:n kuten muutkin anneksiinit ideaaliseksi reagenssiksi, jolla voidaan ennalta • · • · · • · ♦ t · · • ♦ ♦ * · ♦ * · 1 • · · · · • « » 1 • · · « · • · • ♦ ♦ # ft« • · ♦ » · 5 107586 * tunnistaa edellä kuvatunlainen nk. esitromboottinen tila.This specialization of phospholipids makes VÄC, like other annexins, an ideal reagent for the pre-treatment of Ä * 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 • • • ♦ # ft «• · ♦» · 5 107586 * recognizes the so-called pre-thrombotic state described above.
Esillä oleva keksintö tuo esiin aineita, joiden avulla on yllättäen ensimmäisen kerran mahdollista tunnistaa verisuoni-järjestelmän esitromboottinen tila. Tämän dignoosin tekee mahdolliseksi niiden aineiden spesifisyys, jotka kykenevät tunnistamaan verihiutaleiden normaalitilaan verrattuna muuttuneen, esitromboottisen tilan. Koska tämä tila eroaa verihiutaleiden normaalitilasta siten, että vain esitromboottisten verihiutaleiden ulommassa kuoressa on fosfatidyyliseriiniä, tämän keksinnön mukaisen periaatteen hyödyntämiseen sopii periaatteessa jokainen aine, joka voi erottaa fosfatidyylise-riinin spesifisesti fosfatidyylikoliinista. Keksinnön mukaisesti käytettäville aineille on tunnusomaista niiden spesifisyys fosfatidyyliseriinin suhteen, mikä saadaan selville kuvauksessa annettujen sitoutumiskokeiden avulla.The present invention discloses agents which, for the first time, are surprisingly capable of recognizing a prothrombotic state of a vascular system. This dignosis is made possible by the specificity of substances capable of recognizing a pre-thrombotic state altered relative to normal platelet status. Because this condition differs from the normal platelet state by the presence of phosphatidylserine only in the outer skin of the pre-thrombotic platelets, any agent that can specifically separate phosphatidylcholine from the phosphatidylserine is in principle suitable for utilizing the principle of this invention. The agents used according to the invention are characterized by their specificity with respect to phosphatidylserine, as determined by the binding assays given in the description.
Tämän keksinnön mukaisten aineiden spesifisyyden hyödyntäminen tekee lisäksi mahdolliseksi paikallistaa hemostaattisen järjestelmän ja/tai trombin aktivoitumisen alkamiskohdan.Further, utilization of the specificity of the agents of this invention makes it possible to locate the point of onset of activation of the hemostatic system and / or thrombus.
Esillä oleva keksintö tuo siten ensi kertaa esiin apuaineet, jotka mahdollistavat mahdollisesti kehittyvän, terveydelle vaarallisen tilan diagnosoinnin etukäteen, jolloin voidaan »· · V’ ryhtyä sopiviin terapeuttisiin toimiin.The present invention thus provides, for the first time, adjuvants that allow the prior diagnosis of a potentially developing health-threatening condition, whereby appropriate therapeutic measures can be taken.
• ·• ·
Hyvänä pidetyt keksinnön mukaiset aineet ovat antikoaguloivia ♦\ϊ polypeptidejä, mikäli niillä on tarvittava spesifisyys fosfa- • · .·. : tidyyl iseriini-f osf oi ipidin suhteen.Preferred agents of the invention are anticoagulant polypeptides, provided they have the required specificity of phospho. : thidyl iserine-phospholipid for ipid.
* M * ·* M * ·
Ml * » « » 9 ♦Ml * »« »9 ♦
Erityisen hyvänä pidetään anneksiiniaryhmää, erityisesti VAC:a.The annexin group, especially VAC, is considered particularly good.
Jotta keksinnön mukaisia aineita, erityisesti VAC:a tai muita anneksiineja voitaisiin käyttää diagnostisina aineina, ne • · * ' i leimataan sinänsä tunnetulla tavalla. Sopivina markkereinaIn order to be used as diagnostic agents, the agents of the invention, in particular VAC or other annexins, are labeled in a manner known per se. Suitable markers
«M«M
* · • « • · * • * • · • · · • · * »•I « · » I « • «I * · I* » 6 107586 'toimivat esimerkiksi leimaaminen fluoresoivilla ryhmillä tai radioaktiivinen leimaus. Edullisesti käytettävänä fluoresoin-timarkkerina voidaan mainita fluoreseiini-isotiosyanaatti ja edullisesti käytettävinä radioaktiivisina markkereina halogeenien, erityisesti jodin radioisotoopit, esimerkiksi 131I tai -253 tai myös lyijy, elohopea, tallium, teknetium tai indium (20 3p]3/ 19SHg, 2013^ 9 r Ulin).For example, labeling with fluorescent groups or radioactive labeling work. Fluorescein isothiocyanate as preferred fluorescein marker and radioisotopes of halogens, especially iodine, for example 131 I or -253 or also lead, mercury, thallium, technetium or indium (20 3p) 3 / 19SHg, 2013 ^ 9 r Ulin may be mentioned as preferred radioactive markers. ).
Fluoreseiini-isotiosyanaattia (Serva) voidaan käyttää sinänsä tunnetulla tavalla VAC:n leimaamiseen.Fluorescein isothiocyanate (Serva) can be used in a manner known per se to label VAC.
Mahdollista on myös leimata paramagneettisel1 a kontrastiai-neella, joka voidaan detektoida MRI-systeemissä (Magnetic resonance imaging). Voidaan käyttää gadolinium-, koboltti-, nikkeli-, mangaani- tai rautakomplekseja, joiden konjugaattien kanssa voidaan valmistaa diagnostisia aineita, jotka voidaan detektoida MRI-systeemissä. Tällaisissa järjestelmissä käytetään voimakasta magneettikenttää oikaisemaan organismissa olevien atomien ydinspin-vektorit. Tämän jälkeen kenttä lakkautetaan, jolloin ytimet palaavat lähtötilaansa. Tätä tapahtumaa seurataan ja se lukitaan.It is also possible to label with a paramagnetic contrast agent which can be detected by MRI (Magnetic Resonance Imaging). Gadolinium, cobalt, nickel, manganese, or iron complexes may be used, with conjugates thereof, for the preparation of diagnostic agents that can be detected by MRI. Such systems use a strong magnetic field to correct the core spin vectors of the atoms in the body. The field is then aborted and the kernels return to their initial state. This event will be monitored and locked.
Tällä tavoin detektoitaval1 a markkerilla varustettu antikoa- T ♦ « · : : guloiva polypeptidi annetaan tämän jälkeen vai timonsisäisesti *:1·: tai laskimonsisäisesti. Annettava määrä on mitoitettava siten, ·1· . että se riittää myöhempään mittaukseen riittävän inkubointiajän .·. : kuluttua.An anti-T «·::: gulatory polypeptide with a detectable marker in this manner is then administered intravenously *: 1 ·: or intravenously. The quantity given must be dimensioned in such a way that:. that sufficient incubation time is available for subsequent measurement. : after.
Esitromboottisen tilan osoittamiseksi lisätään tutkittavaan vereen kehon ulkopuolella keksinnön mukaista leimattua poly-peptidiä tai ainetta, mahdollisesti toisen, plasman kalsium-konsentraatiota pienentämättömän antikoagulantin, kuten esimerkiksi hepariinin läsnäollessa, minkä jälkeen analysoidaan *.2: spesifisiin soiutyyppeihin liittyvä markkeeraus.To demonstrate the pre-thrombotic state, the labeled polypeptide or agent of the invention, possibly in the presence of another anticoagulant that does not lower plasma levels of plasma, is added to the blood under test, followed by analysis of * .2: specific cell types.
· • · · 2 « · 7 107586· • · · 2 «· 7 107586
Keksinnön mukaista leimattua polypeptidiä voidaan käyttää keksinnön mukaiseen tarkoitukseen sekä veren kanssa isotonisessa vesiliuoksessa että yhdessä apuaineiden kanssa. Apuaineina voidaan käyttää esimerkiksi TWEEN 80:a, arginiinia, fosfaattipuskuria ja fysiologisesti sopivia säi1ytysaineita. Ammattimiehet tuntevat parhaiten muut aineet, ja myös näitä voidaan mahdollisesti käyttää.The labeled polypeptide of the invention can be used for the purpose of the invention both in blood isotonic aqueous solution and in combination with excipients. For example, TWEEN 80, arginine, phosphate buffer and physiologically compatible preservatives may be used as adjuvants. Other substances are best known to those skilled in the art and may also be used.
Radioaktiivisen leimauksen tekemiseen käytetään esimerkiksi tunnettua iodogen-menetelmää (12) tai tavanomaista kloramiini-T-menetelmää. In vivo diagnosointiin on suositeltavaa käyttää -3iI:a sen 8 päivän pituisen puoliintumisajan vuoksi. Radio-aktiivisesti leimattu aine otetaan veren kanssa isotoniseen vesiliuokseen. Steri1ointisuodatuksen jälkeen se injisoidaan. Kokonaiskiiltograafit otetaan gammakameralla esimerkiksi 13iI:lle 1, 2, 4 ja 7 päivän kuluttua injisoinnin jälkeen.For example, the known iodogen method (12) or the conventional chloramine T method is used for radiolabeling. For in vivo diagnosis, -3iI is recommended because of its 8-day half-life. The radioactively labeled substance is taken up in aqueous isotonic solution with blood. After sterilization, it is injected. Total gloss graphs are taken with a gamma camera, for example, at 13, 1, 2, 4 and 7 days after injection.
Anneksiinien oikeiden muotojen lisäksi voidaan keksinnön mukaisessa käytössä käyttää myös muutettuja muotoja.In addition to the correct forms of annexins, modified forms may also be used in the practice of the invention.
Erityisesti mainittakoon patenttijulkaisussa EPÄ 0 293 567 kuvatut mutantit. Näiden lisäksi voidaan käyttää myös anneksiinien fragmentteja tai kemiallisesti modifioituja johdoksia, ·.· · jotka ovat spesifisiä fosfatidyyliseriini/fosfatidyylikoliini- f osf olipidien suhteen ja jotka sen vuoksi voivat tunnistaa kyseisten verihiutaleiden esitromboottisen tilan.In particular, the mutants described in EP 0 293 567 are mentioned. In addition to these, fragments or chemically modified derivatives of annexins, which are specific for phosphatidylserine / phosphatidylcholine phospholipids and can therefore recognize the pre-thrombotic state of these platelets, may also be used.
• «4 • · : Tarkemmin sanottuna esillä olevan keksinnön kohteena ovat: • · · • « • · · - Anneksiinien ryhmään kuuluva antikoaguloiva polypeptidi, erityisesti VAC, joka on varustettu detektoitavalla mark-keri11a.More particularly, the present invention relates to: an anticoagulant polypeptide belonging to the group of annexins, in particular VAC provided with a detectable marker.
• · ·. 1: - Antikoagul oiva polypeptidi, joka sisältää detektoivana « · · '·.· · markkerina fluoresointimarkkerin, ensisijaisesti • · ♦ • · · « • ♦ · m · 8 107586 fluoreseiini-isotiosyanaattia, halogeenin, teknetiumin, lyijyn, elohopean, talliumin tai indiumin radioisotooppia, erityisen mielellään 131I:a tai 125I:a tai paramagneettista kontrasti-ainetta.• · ·. 1: - An anticoagulant polypeptide containing a fluorescent marker as a detectable marker, preferably 107586 fluorescein isothiocyanate, halogen, technetium, lead, mercury, thallium or an indium radioisotope, most preferably 131I or 125I or a paramagnetic contrast agent.
- Edellä kuvattu antikoaguloiva polypeptidi, jolla erotetaan fosfatidyy1iseriini ja fosfatidyylikoliini.An anticoagulant polypeptide for the separation of phosphatidyliserine and phosphatidylcholine described above.
- Edellä kuvattu antikoaguloiva polypeptidi diagnostisena aineena käyttöä varten.An anticoagulant polypeptide as described above for use as a diagnostic agent.
- Menetelmä hemostaattisen järjestelmän aktivoitumisen alkamiskohdan toteamiseksi, jossa menetelmässä a) systeemiin laitetaan, ensisijaisesti vaitimonsisäisesti tai laskimonsisäisesti, anneksiinien ryhmään kuuluvaa, detektoitavalla markkerilla varustettua antikoaguloivaa polypeptidiä tai ainetta, ensisijaisesti VAC:a, ja b) inkubointiajän jälkeen määritetään mainitun polypeptidin jakaantuminen kehon ulkopuolisesti gamma-tuikekameral1 a tai magneettisen resonanssin mittauksella.- A method for determining the onset of activation of a hemostatic system, comprising (a) injecting, preferably intracytopenically or intravenously, an anticoagulant polypeptide of the annexin family with a detectable marker, preferably VAC, and (b) incubating after incubation. scintillation camera 1a or magnetic resonance measurement.
- Menetelmä esitromboottisen tilan toteamiseksi, jossa mene-telmässä • · • · • « · . a) kehonulkoisesti sekoitetaan tutkittavan veren kanssa ** '] anneksiinien ryhmään kuuluvaa antikoaguloivaa polypeptidiä tai ainetta, parhaiten VAC:a, joka sisältää detektoi tavaa « · ♦ * markkeria ja b) analysoidaan spesifisiin solutyyppeihin liittyvä markkee- raus.- A method for detecting a pre-thrombotic condition in which the method. (a) extracellularly mixed with test blood ** '] an anticoagulant polypeptide or substance of the annexin class, preferably a VAC containing a detectable? · ♦ * marker; and (b) analyzing the labeling for specific cell types.
♦ » · • «1 • » · • · · « · · ♦ i 1 • · · • · · « ·»» • · · 1 107586 9 - Aine,'joka sisältää anneksiinien ryhmään kuuluvan, detektoi-valla markkerilla varustetun antikoaguloivan polypeptidin, ensisijaisesti- VAC:n lisäksi apuainetta, esimerkiksi fysiologista keittosuolaliuosta, TWEEN 80:a, arginiinia ja/tai fosfaattipuskuria, jolloin mahdollisesti voidaan käyttää plasman kaisiumkonsentraatiota alentamatonta anti-koagulanttia, ensisijaisesti hepariinia.107586 9 - Substance containing an anticoagulant with a detectable marker belonging to the group of annexins. ♦ · »1» 1 1 10 10 10 10 in addition to a polypeptide, preferably -VAC, an excipient, e.g., physiological saline, TWEEN 80, arginine and / or phosphate buffer, whereby an anti-coagulant, preferably heparin, which does not lower the plasma concentration of potassium may be used.
- Esitromboottisen tilan tai hemostaattisen järjestelmän ja/tai trombin aktivoitumisen alkamiskohdan osoittamiseen tarkoitettu diagnostinen kitti, joka sisältää keksinnön mukaista ainetta tai antikoaguloivaa polypeptidiä, joka kykenee erottamaan fosfatidyyliseriinin fosfatidyylikoliinista.A diagnostic kit for detecting a pre-thrombotic state or an onset of haemostatic system and / or thrombus activation, containing an agent of the invention or an anticoagulant polypeptide capable of separating phosphatidylserine from phosphatidylcholine.
- Keksinnön mukaisen antikoaguloivan polypeptidin tai aineen käyttö fosfatidyyliseriinin ja fosfatidyylikoliinin erottamiseen.Use of the anticoagulant polypeptide or agent of the invention for the separation of phosphatidylserine and phosphatidylcholine.
- Keksinnön mukaisen antikoaguloivan polypeptidin tai aineen käyttö esitromboottisen tilan tai hemostaattisen järjestelmän häiriön tai trombin alkamiskohdan diagnosoimiseen.Use of the anticoagulant polypeptide or agent of the invention for diagnosing a pre-thrombotic condition or a hemostatic system disorder or a thrombus onset.
Materiaalit la menetelmät • · · • · · • · # • VAC valmistettiin joko patenttijulkaisun EPÄ 0 181 465 tai patenttijulkaisun EPÄ 0 293 567 mukaisesti. Seuraavat kokeet .’.J suoritettiin VACarlla, mutta tulokset ovat siirrettävissä myös • · : muille anneksiineille, erityisesti myös VACfi:lle.Materials la Methods VAC was prepared according to either EPA 0 181 465 or EP 0 293 567. The following experiments were performed on VACar, but the results are transferable to other annexins, particularly VACfi.
• · · • · • · · • · ♦ • ♦ ♦• • • • • • • • • ♦ • ♦ ♦
Lipiditlipids
Dioleoyyli-fosfatidyylikoliini (COPC, n:o P-1013)Dioleoyl phosphatidylcholine (COPC, No. P-1013)
Dioleoyyli-fosfatidyylietnaoliamiini (DOPE, n:o P-0510),Dioleoyl-phosphatidyl-ethnaolamine (DOPE, No. P-0510),
Kardiolipiini (CL, n:o C-5646), Dioleoyyli-• · 1 ' *. 1: fosfatidyyliglyseroli (DOPG, n:o P-9664), *«« ·.· 1 Fosfatidyyli-inositoli (PI, n:o P-0639), • · · • « · • · · · · • » • 1 »·· • · • · • · · ♦ · · • · 10 107586Cardiolipin (CL, No. C-5646), Dioleoyl- • 1 '*. 1: Phosphatidylglycerol (DOPG, No. P-9664), * «« · · 1 Phosphatidyl Inositol (PI, No P-0639), • 1 · »·· • · • · · · · ♦ · 10 · 107586
Dioleoyyli-fosfatidihappo (DOPA, n:o P-2757),Dioleoyl phosphatidic acid (DOPA, No. P-2757),
Stearyy1iamiini (SA, S-6755) ja munankeltuaisen sfingomyeliini (S-0756) saatiin Sigma Chemical Co-yhtiöltä.Stearylamine (SA, S-6755) and egg yolk sphingomyelin (S-0756) were obtained from Sigma Chemical Co.
D0PC:n ja DOPE:n puhtaus tutkittiin ohutlevykromatografisesti. Dioleyyli-fosfatidyyliseriini (DOPS) valmistettiin muuntamalla DOPC viitteen (1) mukaisesti. 14C-leimattu DOPS (ominaisaktii-visuus 100.000 dpm/μg) saatiin Amersham-yhtiö1tä.The purity of D0PC and DOPE was examined by thin layer chromatography. Dioleyl-phosphatidylserine (DOPS) was prepared by converting DOPC according to reference (1). 14C-labeled DOPS (specific activity 100,000 dpm / μg) was obtained from Amersham.
Fosfoijpidi-kaksoiskerrosten valmistaminen piilevyillePreparation of phospho-bilayer bilayers for silicon wafers
Fosfolipidi-kaksoiskerrokset levitettiin Corsel’in et ai. (2) kuvaamalla "Langmuir-film balance"-laitteella (Lauda Typ FW-1).Phospholipid bilayers were applied by Corsel et al. (2) by shooting with a "Langmuir-film balance" (Board Typ FW-1).
Hydrofiiliset piilevyt käsiteltiin 24 tuntia 30-prosenttisessa kromirikkihapossa ja vedessä ja säilytettiin 50-prosenttisessa etanoli/vesi-seoksessa. Ennen niiden käyttöä ne puhdistettiin perusteellisesti detergenti11ä ja vedellä. "Film balance” täytettiin demineralisoidulla vedellä ja 50 μΜ CaCl2:lla. Tämän alafaasin päälle laitettiin 20 μΐ liuosta, joka sisälsi noin 2 g/1 fosfolipidiä kloroformissa. Kaksoiskerrosten DOPS-jakeet tutkittiin 14C-leimatulla DOPS:11a seoksena DOPC:n kanssa.Hydrophilic silica plates were treated for 24 hours in 30% chromium sulfuric acid and water and stored in 50% ethanol / water. Prior to their use, they were thoroughly cleaned with detergent and water. "Film balance" was filled with demineralized water and 50 μΜ CaCl 2 A 20 μΐ solution containing about 2 g / L phospholipid in chloroform was applied to this subphase. DOPS fractions of the double layers were examined with 14C-labeled DOPS in a mixture with DOPC.
Tehdyt kaksoiskerrokset poistettiin piilevyiltä tuike- , ^ detergentillä (Du Pont Formel-989) ja kokonaisradioaktiivisuus ♦ · · '·1 2 1 mitattiin tuikelaskimessa.The double layers made were removed from the silicon wafers with scintillation detergent (Du Pont Formel-989) and total radioactivity ♦ · · · · 1 2 1 was measured in a scintillation counter.
• · • · • 1·· Sitoutumisen mittaaminen el 1 ipsometrisesti • · • « » • · · • · :1·.· VAC:n adsorptio fosfolipidi-kaksoiskerroksiin mitattiin • 1 .1!1. kuvatulla tavalla automaattisen el lipsomittarin avulla (2,3).• · • · • 1 ·· Measurement of binding by el 1 ipsometrically • · • • • • · ·: · 1: · · · · · · · · · · · · · VAC adsorption to phospholipid bilayers was measured. using the automatic el lipometer (2,3).
Sitoutumistutkimukset suoritettiin hydrofii1isessä kyvetissä, joka sisälsi 5 ml sekoitettua puskuria (0,05 M Tris/HCl; 0,1 M NaCl; pH=7,5; T=20°C). Kahdenarvoiset kationit lisättiin vähi- « » 1 *· 1· telien kloridina. < 0,1 ug/ml VAC-konsentraatioissa lisättiin »«» • ♦ 1 V 1 jatkuvatoimisesti puskuria, joka sisälsi tämän VAC-konsentraa- • · · · ♦ # 1 2 • »· • 1 • « ·»» • · * · i · « • ♦♦ • · , , 107586 _L. _L.Binding studies were performed in a hydrophilic cuvette containing 5 ml of mixed buffer (0.05 M Tris / HCl; 0.1 M NaCl; pH = 7.5; T = 20 ° C). The divalent cations were added as the chloride of the minor batches. At <0.1 µg / ml VAC concentrations, »1» 1 V 1 was continuously added with buffer containing this VAC concentration. · I · «• ♦♦ • ·,, 107586 _L. _L.
* tion, j-otta VAC:lla olisi riittävä puskurikapasiteetti .* tion, j-take VAC would have sufficient buffer capacity.
Yhdistetyistä polarisaatio- ja analyysiarvoista määritettiin adsorboituheen kaivon taitekerroin ja paksuus d (4). Adsorboituneen proteiinikerroksen määrä Γ määritettiin taitekertoimesta ja paksuudesta modifioidun Lorentz'in ja Lorenz’in yhtälön [1] avulla (3,5): [1] r=3d(n2-nb2)/[(n2+2)(r(nb2+2)-v(nb2-l))]; nb on puskurin taitekerroin. Spesifiselle moolidefraktiol1 e ja spesifiselle osatilavuudelle käytettiin arvoja r=0,254 ja v=0,71 (3).From the combined polarization and analysis values, the refractive index and thickness d (4) of the adsorbed well were determined. The amount of adsorbed protein layer Γ was determined by the refractive index and thickness modified by Lorentz and Lorenz's equation [3,5]: [1] r = 3d (n2-nb2) / [(n2 + 2) {r (nb2 + 2) -v (Nb 2 l)]); nb is the refractive index of the buffer. For the specific molar fraction and for the specific fraction volume, r = 0.254 and v = 0.71 (3) were used.
TuloksetScore
Kahdenarvoisten kationien vaikutus VAC:n sitoutumiseen fosfoiipideihin VAC sitoutuu kaisiumkonsentraatiosta riippuvalla tavalla fosfoiipidimembraaneihin, jotka muodostuvat 20-prosenttisesti DO?S:sta ja 80-prosenttisesti DOPC:sta. EDTA:n myöhempi lisääminen johti heti tapahtuvaan ja täydelliseen desorptioon (kuvio 1). Muuttamalla vapaata Ca2+-kosnentraaticta voitiin adsorptio ;T: käynnistää useita kertoja muuttamatta merkittävästi adsorboi- ..··· tunutta määrää tai adsorptionopeutta. Adsorption tai desorption ;·. aiheuttamat VAC-molekyylin tai fosfolipidi-kaksoiskerrosten » · · ; irreversiibelit muutokset eivät sen vuoksi ole todennäköisiä.Effect of divalent cations on VAC binding to phospholipids VAC binds in a potassium concentration dependent manner to phospholipid membranes consisting of 20% DO? S and 80% DOPC. Subsequent addition of EDTA resulted in immediate and complete desorption (Figure 1). By changing the free Ca 2+ cosentric concentration, adsorption; T: was started several times without significantly altering the adsorbed volume or adsorption rate. Adsorption or desorption; caused by a VAC molecule or phospholipid bilayers »· ·; irreversible changes are therefore unlikely.
» ·· ! *. Sitoutuminen oli myös täysin reversiibeliä, kun kyvetti huuh- ♦ · · • · · *..* del tiin Ca2+-ioneja sisältämättömällä puskurilla.»··! *. Binding was also completely reversible when the cuvette was rinsed with Ca2 + -free buffer.
• * · i · ♦ VAC:n fosfoiipideihin sitoutumisen riippuvuus Ca2^:sta on esitetty kuviossa 2. Ca2+-annos-vaikutus-käyrä näyttää täysin yksiselitteisesti Ca2+-konsentraation, jossa saavutetaan puolet • · · maksimaalisesta VAC:n adsorptiosta: [Ca2 + ]:/2. [Ca2 + ]i/2-arvo riippuu fosfolipidin pinnan koostumuksesta. Fosfoiipidipin- • · • « · « · * • · * • · · • * « · · « · « · • · -• · * ♦ · 107586 12 noilla, ;;o2ka sisälsivät 100 %, 20 ·ί, 5 % jsl 1 % DOPSia, mitattiin 'Ca24]i/2-arvoiksi 36 μΜ, 220 μΜ, 1,5 mM ja 3,6 mM (taulukko 1). Nämä tulokset sopivat varsin hyvin yhteen ΓCa2+]1/2-a-von 53 μΜ kanssa, joka on mitattu endoneksiinin II (=VAC) sitoutumiselle samamoolisiin PS/Pc-vesikkelien seoksiin (S). Adsorboituneen proteiinin maksimaalinen määrä (Tmax) ei riippunut membraanin DOPS-jakeesta ja oli noin 0,217 ug/'cm2. Puhtailla DOPC-kaksoiskerroksi11 a ei voitu todeta mitään adsorptiota 3 mM Ca2+-konsentraatioon asti.• * · i · ♦ The dependence of VAC on phospholipids binding to Ca 2+ is shown in Figure 2. The Ca 2+ dose-effect curve shows unequivocally the Ca 2+ concentration at which half of the maximal VAC adsorption of VAC is achieved: [Ca 2+ ] / 2. The [Ca 2+] 1/2 value depends on the surface composition of the phospholipid. Phosphoipidipine- • · • «·« · * • · * · · · * ♦ · 107586 12 those, ;; o2ka contained 100%, 20 · ί, 5% jsl of 1% DOPS, were measured with 'Ca24] i / 2 values of 36 μΜ, 220 μΜ, 1.5 mM and 3.6 mM (Table 1). These results are quite consistent with ΓCa2 +] 1/2-a-von 53 μΜ, as measured for the binding of endonexin II (= VAC) to the same molar mixtures of PS / Pc vesicles (S). The maximum amount of adsorbed protein (Tmax) was independent of membrane DOPS fraction and was approximately 0.217 µg / cm 2. No adsorption up to a concentration of 3 mM Ca 2+ could be detected in the pure DOPC bilayer 11a.
VAC:n adsorptio koostumukseltaan erilaisiin fosfolipidi-kaksoiskerroksiin on esitetty kuviossa 5. Myös tästä käy selväksi, että puhtailla DOPC-kaksoiskerroksi1 la ei havaita käytännöllisesti katsoen mitään VAC:n adsorptiota. Myös VÄC:n adsorptio stearyyliamidiin (SA) on heikkoa.The adsorption of VAC on phospholipid bilayers of different compositions is shown in Figure 5. Again, it becomes clear that virtually no VAC adsorption is observed on pure DOPC bilayers. The adsorption of VÄC on stearylamide (SA) is also poor.
Muilla kuin Ca2 + -kationei11 a suoritetuissa kokeissa todettiin, että VAC:n sitoutuminen fosfoiipideihin on voimakkaasti Ca2 + -spesifinen (kuvio 3). Cd24·, Zn2+, Mn2+ ja Co2+ edistivät sitoutumista vähäisesti; Ba2+:lla ja Mg2+:lla ei ollut mitään vaikutusta. Tämä kationien ominaisuus voidaan tietyllä tavalla korreloida niiden ionisäteisiin.In experiments performed with non-Ca2 + cations, it was found that VAC binding to phospholipids is highly Ca2 + specific (Figure 3). Cd24 ·, Zn2 +, Mn2 +, and Co2 + slightly promoted binding; Ba2 + and Mg2 + had no effect. This property of cations can be correlated in some way with their ionic rays.
• · · • « · » · * .;··· Sinkkisynerqia • ♦ « · - .·, : Suuret sinkki-ionikonsentraatiot (1 mM) eristävät vähäisessä • · · määrin VAC:n adsorptiota (kuvio 3); konsentraatiol la 50 μΜ ei • ·« !..* ollut mitään vaikutusta adsorptioon. Yllättäen tämä konsentraa- • * » * • · * * tio vaikuttaa sitoutumiseen Ca24_:n läsnäollessa; kyseessä on synergia. fCa2+]i/2-arvo laski 8,6:sta 2,7 mMraan kaksoisker-roksilia, joissa oli vain 1 % D0PS:a ([Zn2+]=50 μΜ) (kuvio 4). 50 μΜ [Zn24-] on plasman normaaleissa sinkkikonsentraation • · V\ rajoissa.• Zinc Synergism • ♦ · · -. ·,: High zinc ion concentrations (1 mM) isolate to a small extent · · · VAC adsorption (Fig. 3); at 50 μΜ had no effect on adsorption. Surprisingly, this concentration affects binding in the presence of Ca24_; it is about synergy. The fCa2 +] i / 2 value decreased from 8.6 to 2.7 mM in double layer containing only 1% D0PS ([Zn2 +] = 50 μΜ) (Figure 4). 50 μΜ [Zn24-] is within the normal plasma zinc concentration • · V \ range.
• ·« * * « · * • · « • · * · # »·· • · · • · ··· • · • « • · · V · * « « , * 107586 13• · «* *« · * • · «• · * · #» ··· · · · · · · V · * ««, * 107586 13
Diagnostiset menetelmät 1. in vitro-diagnoosi a) VAC leimataan sinänsä tunnetulla menetelmällä iluore-seiiniryhmäl1ä, esimerkiksi f 1uoreseiini-isotiosyanaatin avulla (13)/ t ä x i a - a v a i.. a saadaan VAC-F X TC.Diagnostic Methods 1. In Vitro Diagnosis (a) VAC is labeled by a method known per se, for example, with fluorescein isothiocyanate (13) / t x i a - a v a i.
b) Potilaan verta kerätään muoviputkeen, joka sisältää plasman kalsiumkonsentraatiota alentamatonta antikoa-gulanttia (esim. hepariinia) ja VAC-?ITC:a.b) The patient's blood is collected in a plastic tube containing an anticoagulant (e.g., heparin) and VAC-ITC that does not lower plasma calcium concentration.
c) Sekoittamisen jälkeen verisolut analysoidaan käyttämällä FACS-1aitetta (fluorescence activated ceil sorter). Tämä analyysi antaa spesifisiin soiutyyppeihin liittyvän fluoresenssin intensiteetin.c) After mixing, the blood cells are analyzed using a FACS-1 (fluorescence activated cell sorter). This assay gives the fluorescence intensity associated with specific cell types.
d) Analyysiprofiilit antavat verihiutaleiden, joihin on sitoutunut VAC-FITC:a, so. verihiutaleiden, joissa on kulkeutunutta PS:a, määrän ja siten esitromboottisen tilan olemassaolon. Tällä tavoin tämä terveydelle vaarallinen tila voidaan ennakolta todeta ja siten hoitaa ' »’·1; etukäteen.d) Assay profiles give platelets to which VAC-FITC is bound, i. the presence of platelets containing migrated PS and thus the presence of a prothrombotic state. In this way, this health-threatening condition can be detected beforehand and thus be treated '' '· 1; in advance.
* » • · ·1, 2. in νίχο.-diagnoosi * ·· • · * 1 a) VAC leimataan lyhytikäisellä isotoopilla, esimerkiksi « 1 ♦ ** ** -311:11 a sinänsä tunnetuilla menetelmillä; saadaan -3-I- b) i3iI-VAC appiikoidaan laskimonsisäisesti potilaalle.Diagnosis of νίχο. * A · VAC is labeled with a short-lived isotope, for example «1 ♦ ** ** -311: 11, by methods known per se; resulting in -3-I-b) 13 I-VAC is administered intravenously to the patient.
c) Tietyn inkubointiajän jälkeen potilaalle tehdään koko » · .'Γ kehon tai osakehon skintigrafia. Radioaktiivisuuden ’/ jakaantumista voidaan seurata 1arge-field-of-view gamma- ; ί’ί «f· M1 « I·1c) After a certain incubation period, the patient undergoes scintigraphy of the whole body. The radioactivity '/ distribution can be followed by 1arge-field-of-view gamma; ί’ί «f · M1« I · 1
» I»I
t » * 1 1t »* 1 1
• M• M
< · ' «··«<· '«··«
4 I4 I
107586 14 kameral1 a .107586 14 kameral1 a.
d) Laskimonsisäiset kohdat, joihin on kerääntynyt 1311-VAC : a, ilmoittavat paikat, joihin tromboosi kehittyy.d) Intravenous sites with accumulation of 1311-VAC indicate sites where thrombosis develops.
Näin voidaan ryhtyä etukäteen sopiviin, trombooseja estäviin tai trombooseja parantaviin toimiin.This allows you to take appropriate antithrombotic or thrombotic steps in advance.
1. Radioaktiivinen leimaus 1.1 Esivalmistelut 1.1.1. Valmistetaan 500 mi 11imoolia/1 natriumfosfaatti-puskuria 24,4 g natrium-di-vetyfosfaattimonohydraattia liuotetaan 1 litraan kahdesti tislattua vettä ja lisätään liuokseen, jossa on 35,5 g di-natrium-vetyfosfaattia 1 litrassa kahdesti tislattua vettä, pH-arvoon 7,5.1. Radioactive labeling 1.1 Preparations 1.1.1. Prepare 500 ml 11 mmol / l sodium phosphate buffer 24.4 g of sodium dihydrogen phosphate monohydrate are dissolved in 1 liter of double-distilled water and added to a solution of 35.5 g of di-sodium hydrogen phosphate in 1 liter of double-distilled water, pH 7. 5.
1.1.2. Valmistetaan 20 mi 11imoolia/1 natriumvetyfosfaat-tipuskuria + 150 millimoolia/ natriumkloridia (eluointi-puskuri) 2,76 g natrium-divetyfosfaattimonohydraattia liuotetaan 1 litraan tislattua vettä ja lisätään liuokseen, jossa on —: 2,84 g di-natrium-vetyfosfaattia 1 litrassa kahdesti • · :·. tislattua vettä, pH-arvoon 7,2. Eluointipuskuri valmiste- • · · : taan lisäämällä 8,77 g natriumkloridia (150 millimoolia) 1 • · · I I litraan puskuria.1.1.2. Prepare 20 ml of 11 mmol / l sodium hydrogen phosphate buffer + 150 mmol / sodium chloride (elution buffer) Dissolve 2.76 g of sodium dihydrogen phosphate monohydrate in 1 liter of distilled water and add to a solution of: - 2.84 g of di-sodium hydrogen phosphate twice • ·: ·. distilled water, pH 7.2. The elution buffer is prepared by adding 8.77 g of sodium chloride (150 mmol) to 1 L of l buffer.
• · · • · · • · ··» *’ 1.1.3. Puhdistuspylvään tasapainoitus PD-10-pylväs (Sephadex G25, Fa. Pharmacia) tasapaino!tetaan noin 30 ml :11a eluointipuskuria.• · · • · · • · ·· »* '1.1.3. Purification column equilibration The PD-10 column (Sephadex G25, Fa. Pharmacia) is equilibrated with about 30 ml of elution buffer.
• · · 1.1.4. Reaktioastian esikäsittely V 2 mg IODO-geniä (moolimassa: 32,09 g/mooli; kuvio 6) • · · « » « 1 « · · « · · • · 107586 15 liuotetaan 50 ml:aan dikloorimetaania (reinst). 200 μΐ tätä liuosta pipetoidaan 1,5 ml:n Sppendorf"astiaan ja sen jälkeen, liuotin haihdutetaan pois OT^C^ssa (lämpö levy) . Reaktioastian seinämään on näin laitettu tasaisesti 3 ug (1,85 x 10'2 millimoolia) ICDO-geniä.• · · 1.1.4. Reaction vessel pre-treatment V 2 mg of IODO gene (MW: 32.09 g / mol; Figure 6) is dissolved in 50 ml of dichloromethane (reinst). Pipette 200 μΐ of this solution into a 1.5 ml Sppendorf 'vessel and then evaporate off the solvent in an O 2 CO 3 (heat plate). Thus, 3 ug (1.85 x 10'2 mmol) of ICDO are uniformly placed on the wall of the reaction vessel. -geniä.
1.1.5. Leimaamiseen käytetty VAC-a Lähdetään liuoksesta, joka sisältää 50 mg VAC-a:a 4 ml:ssa 20 mi 11imoolia/1 natriumfosfaattipuskuria + 150 millimoo-lia/1 KaCl, pH 7,2, laimennettu 1 ml :11a kahdesti tislattua vettä. VAC-a:n moolimassa: 34000 g/mooli.1.1.5. VAC-a used for labeling Start with a solution of 50 mg of VAC-a in 4 ml of 20 ml of 11 mmol / l sodium phosphate buffer + 150 mmol / l of KaCl, pH 7.2, diluted with 1 ml of double-distilled water. Molecular weight of VAC-α: 34000 g / mol.
1.1.5. Leimaamiseen käytetty J-1251.1.5. Used for stamping J-125
Na125J:n (Dupont, NEN Products) kokonaisradioaktiivisuus kaiibrointipäivänä 67,3 MBq (=1,82 mCi). Ominaisaktiivisuus on 15,9 Ci/mg jodi = 1,98 kCi/millimooii 1/2 J2, joka vastaa 0,115 ug jodia (9,2 x 10~7 millimooli 1/2 J2). Aktiivinen NaJ on liuotettu 5,5 pl:aan 0,1 mooli/1 NaOH:a.The total radioactivity of Na125J (Dupont, NEN Products) on the day of calibration was 67.3 MBq (= 1.82 mCi). The specific activity is 15.9 Ci / mg iodine = 1.98 kCi / millimole 1/2 J 2 which corresponds to 0.115 µg iodine (9.2 x 10 ~ 7 millimole 1/2 J 2). Active NaJ is dissolved in 5.5 µl of 0.1 mol / L NaOH.
1.2 Jodaus1.2 Iodization
Kaikki työt suoritettiin isotooppivetokaapissa lyijylasi-suojien takana. 20 μΐ (= 200 pg) kohdassa 2.1.5 kuvattua • · : VAC-a-liuosta laitettiin IODO-genillä esikäsiteltvvn *:··· reaktioastiaan. Tämä suljettiin ja ravisteltiin 20 minuut- # tia huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioliuas lai- : tettiin pipetillä esivalmistettuun PD-10-py1vääseen (kts.All work was done in an isotope fume cupboard behind the lead glass shields. 20 μΐ (= 200 pg) of the · ·: VAC-α solution described in 2.1.5 was placed in a pre-treated *: ··· reaction vessel. This was sealed and shaken for 20 minutes at room temperature. The reaction solution was then pipetted into a pre-prepared PD-10 cake (see
; 2.1.3.). Reaktioastia huuhdeltiin vielä 500 ulilla eluoin- • · · I..* tipuskuria (kts. 2.1.2.) ja myös tämä liuos laitettiin PD- * 10-pylvääseen. Tällöin ulosvirtaava eluaatti heitettiin pois.; 2.1.3.). The reaction vessel was rinsed with an additional 500 µL of elution buffer (see 2.1.2) and this solution was also applied to a PD-10 column. The effluent was then discarded.
1.3 Puhdistaminen '·/·· VAC-α [125J] erotettiin vielä vapaasta 125j/jja i25j:sta :T: lisäämällä kulloinkin 0,5 ml eluointipuskuria (kts. 2.1.2.) V 2 minuutin välein. 12 jakeen jälkeen tämä puhdistusvaihe • » » ·»· • « · • · * · • · · • » • · • · · • · · ♦ · # · 107586 16 oli tapahtunut loppuun. Jakeiden suhteellinen aktiivisuus-pitoisuus mitattiin 1aboratoriomonitori11 a (GMZ) (kuvio 2).1.3 Purification '· / ·· VAC-α [125J] was further separated from free 125j / j and i25j: T by adding 0.5 ml of elution buffer (see 2.1.2.) V every 2 minutes. After 12 verses, this purification step was completed. The relative activity concentration of the fractions was measured on a Laboratory Monitor 11 (GMZ) (Figure 2).
Jakeet 6 ja 7 puhdistettiin, täytettiin eiuointipuskuri11 a tarkalleen 2,0 ml:ksi, jaettiin 100 μΐ osiin ja pakastettiin -20°C:een. Aine oli näissä erissä valmiina käytettäväksi analyysien tekoon ja kehitystyöhön.Fractions 6 and 7 were purified, filled with elution buffer to exactly 2.0 mL, split into 100 μΐ and frozen at -20 ° C. The substance in these batches was ready to be used for analysis and development.
2. Analyyttinen osa 2.1 Pitoisuuden määritys2. Analytical part 2.1. Determination of concentration
Kromogeenisel1ä substraattimenetelmäl1ä mitattiin VAC-a-pitoisuudeksi 71,8 ug/2,0 ml liuosta.The chromogenic substrate method measured a VAC-α concentration of 71.8 µg / 2.0 ml solution.
2.2 Radioaktiivisuuden määrittäminen 2.2.1. Kokonais radioaktiivisuus2.2. Determination of radioactivity 2.2.1. Total radioactivity
Yhden 100 μΐ erän sulattamisen jälkeen pipetoitiin 50 μΐ tätä [125] VAC-a-liuosta 950 μ1:33η epäaktiivista VÄC-α- liuosta (kts. 2.1.5.), sekoitettiin hyvin ja tästä otettiin kulloinkin 50 μΐ LSC-laskimessa (3eckman) tapahtuvaa mit- tausta varten. 24,5 MBq (= 0,663 mCi) / 2,0 ml kokonais- ' : liuosta.After thawing one 100 μΐ aliquot, 50 μΐ of this [125] VAC-α solution was pipetted into 950 μ1: 33η inactive VÄC-α solution (see 2.1.5.), Mixed well and withdrawn at 50 μΐ in each LSC (3eckman). ) for measurement. 24.5 MBq (= 0.663 mCi) / 2.0 mL total: solution.
• · • · • · · . 2.2.2. Spesifinen aktiivisuus • · · ’· Pitoisuuden määrityksestä ja kokonaisradioaktiivisuudesta • · saatiin spesifiseksi aktiivisuudeksi: • 1 1 ’.· · 341,5 MBq/mg = 11,61 TBq/mi 11 imool i (9,23 mCi/mg = 313,8 Ci(mi 11imooli) 2.2.3. Proteiiniin sitoutuneen radioaktiivisuuden määritys : TCA-saostuksel 1 a 100 pl:aan VAC-α-1 iuosta lisättiin 50 μΐ 3-prosenttista *· · BSA-liuosta ja 150 μΐ 40-prosenttista vesipitoista tri- • · · » · · «·( · » · • · · • · • · · • · 107586 17 kloorietikkahappoa, ravisteltiin hyvin ja annettiin seistä 60 minuuttia kylmäkaapissa. Muodostunut sakka poistettiin sentrifugoimal1 a. Supernatantista otettiin tasamäärät LSC-1askimeen mittausta varten.• · • · • · ·. 2.2.2. Specific Activity • · · · · Concentration Assay and Total Radioactivity • · gave specific activity: • 1 1 · · 341.5 MBq / mg = 11.61 TBq / mL 11 mmol (9.23 mCi / mg = 313, 8 Ci (mi 11 mmol) 2.2.3 Determination of Protein-Bound Radioactivity: 50 μΐ of a 3% * · · BSA solution and 150 μΐ of a 40% aqueous tri - 107586 17 chloroacetic acid was shaken well and allowed to stand for 60 minutes in the refrigerator. The precipitate formed was removed by centrifugation. .
Tulos: 99,3 % radioaktiivisuudesta oli saostuvaa.Result: 99.3% of the radioactivity was precipitated.
2.2.4. Radioaktiivisuussaanto Käytetystä 67,3 MBq:sta löydettiin uudelleen 24,5 MBq VAC-a:ssa. Aktiivisuussaanto oli siten 36,4 %.2.2.4. Radioactivity Yield 24.5 MBq of VAC-a was re-detected from the 67.3 MBq used. The activity yield was thus 36.4%.
2.3 Modifiointiaste2.3 Modification level
Spesifisestä aktiivisuudesta ja käytetystä epäaktiivisen VAC-a:n määrästä laskettiin, että tilastollisesti joka 6. VAC-a-molekyyli oli leimautunut 125J-atomi11 a.From the specific activity and the amount of inactive VAC-α used, it was calculated that statistically every 6 VAC-α molecule was labeled with 125 I atoms.
3.4 Identtisyys ja puhtaus Käyttämällä SDS-PAGE:a (gradienttigeeli 7 - 17 %, ei-pelkistävissä olosuhteissa) ja sen jälkeen arvioimalla geeli hopeavärjäyksellä (Oakley-menetelmä), autoradio-grafoimalla ja detektoimalla lineaarianalysaattorilla (Berthold LB 282, sondi LB 2820) (kuvio 3) tutkittiin aine *:··· käytettyyn VAC-a:an verrattuna. Aineet olivat identtisiä, dimeerisen tuotteen osuus oli selvästi pienempi kuin • : epäaktiivisi 1 le erille hyväksytty 8 % raja.3.4. Identity and purity Using SDS-PAGE (gradient gel 7-17%, non-reducing conditions) followed by evaluation of the gel by silver staining (Oakley method), autoradiography and detection with a linear analyzer (Berthold LB 282, probe LB 2820) Figure 3) examined substance *: ··· compared to VAC-α used. The substances were identical, the proportion of the dimeric product was clearly less than the: 8% limit accepted for inactive lots.
« · · • · • · • · · • · ·«· · · · · · · · · · ·
Piirustuksissa: * · t • · 1In the drawings: * · t • · 1
Kuvio 1: VAC:n vuorotellen tapahtuva adsorptio ja desorptio fosfolipidipinnalle Ca2+-konsentraation nostamisen tai alentamisen indusoimana. VAC:n (1 ug/ml) adsorptio 20 % DOPS/80 % • · DOPC fosfoiipidi-kaksoiskerrokseen. Ca2+:n lisäys (3,4,6 mM) on merkitty ^ :11a tai ^:lla.Figure 1: Alternative adsorption and desorption of VAC on phospholipid surface induced by raising or lowering Ca 2+ concentration. VAC (1 µg / ml) adsorption to 20% DOPS / 80% DOPC phospholipid bilayer. The addition of Ca 2+ (3.4,6 mM) is denoted by ^ or ^.
« · « · « • « · • · · • 1 « « · • · • · • «· • · 107586 18«« «« «« «« «I« 1 «« «• • 107586 18
Kuvio 2: Fosfoiipidikoostumuksen ja Ca2+-konsentraation vaikutus VAC:n adsorptioon fosfoiipidipinnal1 e. o 100 % DOPS; o 20 % DOPS; Δ 5 % DOPS; O 1 % DOPS; 100 % DOPC; kaikki seokset täydennettiin DOPC:lla [VAC] = 1 ug/ml.Figure 2: Effect of phospholipid composition and Ca 2+ concentration on adsorption of VAC on phospholipid surface. 100% DOPS; o 20% DOPS; Δ 5% DOPS; O 1% DOPS; 100% DOPC; all mixtures were supplemented with DOPC [VAC] = 1 µg / ml.
Kuvio 3: Kahdenarvoisten ionien vaikutus VAC:n adsorptioon. VAC:n adsorptio kaksoiskerroksiin, joissa oli 20 % DOPS:a ja 80 % DOPC:a, annettujen ionien läsnäollessa (1 tai 3 mM).Figure 3: Effect of divalent ions on VAC adsorption. VAC adsorption to bilayers with 20% DOPS and 80% DOPC in the presence of ions (1 or 3 mM).
[VAC] = 1 ug/ml.[VAC] = 1 µg / ml.
Kuvio 4: Zn^in synergistinen vaikutus VAC:n Ca2+-riippuvaan adsorptioon fosfolipidipinnoille. Mitattiin Ca2+:n vaikutus VAC:n adsorptioon (1 % DOPS ja 99 % DOPC), kun mukana oli 50 μΜ Zn2+:a. [VAC] = 1 pg/ml.Figure 4: Synergistic effect of Zn 4 on Ca 2+ -dependent adsorption of VAC on phospholipid surfaces. The effect of Ca 2+ on VAC adsorption (1% DOPS and 99% DOPC) was measured with 50 μΜ Zn 2+. [VAC] = 1 pg / ml.
Kuvio 5: VAC:n adsorptio koostumukseltaan erilaisiin fosfoli-pidi-kaksoiskerroksiin. VAC:n adsorptio dioleoyylifosfatidyy-liseriiniin (DOPS), kardiolipiiniin (CL) ja dioleoyylifos-fatidyylietanoliamiiniin (DOPE) joko sellaisenaan tai sekoitettuna 80 % kanssa seuraavia: dioleoyylifosfatidyylikoliini (DOPC), dioleoyylifosfatidyyliglyseroli (DOPG), fosfatidyyli-inositoli (PI) ja stearyy1iamiini sekoitettuna 80 % kanssa : DOPCra tai puhtaaseen DOPC:an. [VAC] = 1 ug/ml; [Ca2+] = 3 mM.Figure 5: VAC adsorption on phospholipid bilayers of different compositions. VAC adsorption to dioleoylphosphatidylserine (DOPS), cardiolipin (CL) and dioleoylphosphatidylethanolamine (DOPE) either alone or in admixture with 80% of the following: With 80%: DOPC or pure DOPC. [VAC] = 1 µg / ml; [Ca 2+] = 3 mM.
• «• «
Kuvio 6: 1,3,4,6-Tetrakloridi-3o-6a-difenyyli-qlykoluriili : (IODO-GEN) « · ♦ • · * » • · · • · · i..1 Kuvio 7: Radioaktiivisuuden jakaantuminen jakeisiin 1-12.Figure 6: 1,3,4,6-Tetrachloride-30-6a-diphenyl-glycoluril: (IODO-GEN) Figure 7: Distribution of Radioactivity in Fractions 1 -12.
• # ♦• # ♦
Kuvio 8: Radioaktiivisuuden jakaantuminen 1ineaarianalysaatto-rissa.Figure 8: Distribution of radioactivity in a 1-linear analyzer.
• · • · · • ·« • · ·«· • · · « · · » • · • · · • « · • t · • · · • · • · • · · * · • · • « · • i» • 1 · · · • « 107586 19• • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • ••••••• »• 1 · · · •« 107586 19
Taulukko 1:Table 1:
Pii levyjen1päälle laitettujen fosfoiipidi-kaksoiskerrosten arviointi.Evaluation of Phospholipid Double Layers on Silicon Plates.
14-poPS film Fosfoiipidien Aktiivisuus DOPS-jakeet balance-mene- määrä (ellipso- mitattu telmällä metrisesti) % pg/cm2 DPM % 2 0,396 453 1,9 5 0,409 1133 4,5 20 0,401 5006 20 100 0,442 27174 9914-poPS film Activity Phospholipids Activity DOPS fractions balance method (ellipsoidal by metric method)% pg / cm 2 DPM% 2 0.396453 1.9 5 0.409 1133 4.5 20 0.401 5006 20 100 0.442 27174 99
Laskettava seos vietiin "film balance"-laitteeseen. Kaksois-kerroksen määrä mitattiin ellipsometrisesti ja 14C-leimatun DOPS:n aktiivisuus mitattiin Beckmann 6S 3801 tuikelaskimella (standardipoikkeama <2 %) ja korjattiin taustasäteilyn suhteen (60 DPM). DOPS-jakeet kaksoiskerroksessa laskettiin yhtälöllä 2: ·#· ♦ · 1 • · · Määrä(pg/cm2) x ominaisaktiivisuus (DPM.g-1) • · ... ... Jae .=__ • · :t " Aktiivisuus (DPM) x pinta-ala (cm2) • · » • ♦ 1 • · • · *.**: DOPS:n spesifinen aktiivisuus oli 100.000 DPM.g-1, ja fosfoli- • · · : pideillä päällystetty pinta 0,62 cm2.The mixture to be counted was transferred to a film balance apparatus. The amount of double layer was measured by ellipsometry and the activity of 14C-labeled DOPS was measured on a Beckmann 6S 3801 scintillation counter (standard deviation <2%) and corrected for background radiation (60 DPM). The DOPS fractions in the double layer were calculated by equation 2: · # · ♦ · 1 · · · Volume (pg / cm 2) x Specific Activity (DPM.g-1) • · ... ... Fraction = __ • · (DPM) x area (cm 2) · · · · · 1: · · · · *. 62 cm 2.
« · · • · ♦ • · • · · « · « « · · • « • · « * « « • · · • · · • « • · · « · • · # · 4 • · # • · n 107586 20· • ♦ ♦ · * «« «« * * 10 10 10 10 10 10 75 75 107586 20
Taulukko 2:Table 2:
Puolitettu" arvo maksimaaliselle VAC:n sitoutumiselle eri fosfoiipidipinnoi1 la.Half-value for maximum VAC binding on different phospholipid coatings.
lipidi (mol%/rnol%) Fmaz ± 3.D. [C3“+J , ,---3 . o .lipid (mol% / rnol%) Fmaz ± 3.D. [C3 + J,, --- 3. o.
(pg/cm“) mM(pg / cm ') mM
DOPS (100) 0,195 ± 0,025 0,02a ± 0,012 DOPS / DOPC (20/80) 0,222 ± 0,014 0,22 ±0,05 DOPS / DOPC ('5/95) 0,229 ± 0,004 1,5 ± 0,5 DOPS / DOPC (1/99) 0,234 ± 0,007 3,5 ± 2,5DOPS (100) 0.195 ± 0.025 0.02a ± 0.0122 DOPS / DOPC (20/80) 0.222 ± 0.014 0.22 ± 0.05 DOPS / DOPC (’5/95) 0.229 ± 0.004 1.5 ± 0.5 DOPS / DOPC (1/99) 0.234 ± 0.007 3.5 ± 2.5
Kardiolipiini / DOPC (20/30) 0,209 ± 0,011 0,029 ± 0,022 DOPG / DOPC (20/80) 0,212 ± 0,003 0,155 ± 0,027 PI / DOPC (20/80) 0,221 ± 0,005 0,47 ± 0,05 DOPA / DOPC (20/80) 0,207 ± 0,006 0,75 ± 0,25 DOPE / DOPC (20/80) 0,213 ± 0,003 0,86 ± 0,21Cardiolipin / DOPC (20/30) 0.209 ± 0.011 0.029 ± 0.022 DOPG / DOPC (20/80) 0.212 ± 0.003 0.155 ± 0.027 PI / DOPC (20/80) 0.221 ± 0.005 0.47 ± 0.05 DOPA / DOPC ( 20/80) 0.207 ± 0.006 0.75 ± 0.25 DOPE / DOPC (20/80) 0.213 ± 0.003 0.86 ± 0.21
Sfingomyeliini / D0PC (20/80) 0,225 ± Q, 014 7 ±3Sphingomyelin / D0PC (20/80) 0.225 ± Q, 014 7 ± 3
DOPC (100) n.d. >30 mMDOPC (100) n.d. > 30 mM
Maksimaalinen VAC-adsorptio (Tmax) annetuille fosfolipidipin- *:··· noille sekä se kalsiumkonsentraatio, joka puolittaa maksimaa- :·, lisen VAC:n sitoutumisen [Ca2 + ]i/2/ on annettu vähintään kolmen • · # j eri kokeen keskiarvoina yhdessä vastaavien standardipoikkeamien • · · I ! kanssa.The maximum VAC adsorption (Tmax) for the given phospholipid surfaces *: ··· and the calcium concentration which halves the maximal · · VAC binding [Ca2 +] i / 2 / are given in at least three different experiments. averaged together with the corresponding standard deviations • · · I! with.
• « i n.d. = ei määritetty.• «i n.d. = not specified.
• · > « · « • · • · 4 • *« • · • · · • « « • · « e • · • « *· • * ·• ·> «·« • • • 4 • * «• • • • • • • • • • • • • • • • • • • • •
• M• M
• · · ··· ♦ ♦ • · • · · • · ···»* 107586 21• · · ··· ♦ ♦ • · • · · · ··· »* 107586 21
Kiriallisuusviitteet 1. Confurius, P & Zwaal, R. F. A. (1977) Biochim.References 1. Confurius, P & Zwaal, R. F. A. (1977) Biochim.
Biophys. Acata 488, -42.Biophys. Acata 488, -42.
2. Corsel, J. W., Willems, G. M., Kop, J. M. M.,2. Corsel, J.W., Willems, G.M., Kop, J.M.M.
Cuypers, P. A. & Hermens, W. Th. (1986) J. Colloid Interface Sci. 111, 544-554.Cuypers, P. A. & Hermens, W. Th. (1986) J. Colloid Interface Sci. 111, 544-554.
3. Cuypers, P. A., Corsel, J. W., Janssen, M. P., Kop, J. M. M.,.Hermens, W. TH. & Hemker, H. C. (1983) J.3. Cuypers, P. A., Corsel, J. W., Janssen, M. P., Kop, J. M. M., Hermens, W. TH. & Hemker, H. C. (1983) J..
Biol. Chem. 258, 2426-2431.Biol. Chem. 258, 2426-2431.
4. McCrackin, F. L., Passaglia, E., Strömberg, R. R· & Steinberg, H. L. (1963) J.Res.Nat.Bur. Stand. Sect.A 67, 3-377.4. McCrackin, F. L., Passaglia, E., Strömberg, R. R · & Steinberg, H. L. (1963) J.Res.Nat.Bur. Stand. Sect.A 67, 3-377.
5. Kop, J. M. M., Cuypers, P. A., Lindhout, Th.,5. Kop, J.M.M., Cuypers, P.A., Lindhout, Th.
Hemker, H. C. & Hermens, W. Th. (1984) J. Biol.Hemker, H. C. & Hermens, W. Th. (1984) J. Biol.
Chem. 259, 13993-13998.Chem. 259, 13993-13998.
6. Schlaepfer, D. D., Mehlman, T., Burgess, W. H. &6. Schlaepfer, D. D., Mehlman, T., Burgess, W. H. &
’ ... Haigler. H. T. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA'... Haigler. H. T. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.
♦ · · 84, 6078-6082.♦ · · 84, 6078–6082.
♦ r 9 · ·♦· • 4 • · ί *' 7. Op den Kamp, J.A. F. Ann. Rev. Biochem. 1979, 48: V·! 47-71.♦ r 9 · · ♦ · • 4 • · ί * '7. Op den Kamp, J.A. F. Ann. Rev. Biochem. 1979, 48: V ·! 47-71.
• · * » » • ·ν • ♦ 8. Zwaal, R.F.A. Biochim. Biophys. Acta 1978, 515: 163-205.• · * »» • · ν • ♦ 8. Zwaal, R.F.A. Biochim. Biophys. Acta 1978, 515: 163-205.
9. Jackson, C.M. ja Nemerson, Y. Ann. Rev. Biochem.9. Jackson, C.M. and Nemerson, Y. Ann. Rev. Biochem.
. . 1980, 49: 765-811.. . 1980, 49: 765-811.
• · * ' * · • * • · » * « • · ' • t • .·* ♦ • ·· ♦ 4 t ··» • · ♦ 9 4 4 » «· « · « « 22 107586 10. Bevers, E.M., Comfurius, P. ja Zwaal, R.F.A.• · * '* • • • • »*« • ·' • t •. · * ♦ • ·· ♦ 4 t ·· »• · ♦ 9 4 4» «·« · «« 22 107586 10. Bevers , EM, Comfurius, P. and Zwaal, RFA
Biochim. Biophys. Acata 1983, 736: 57-66.Biochim. Biophys. Acata 1983, 736: 57-66.
11. Rosing, J., Bevers, E.M., Comfurius, P., Hemker H.C. can Dieijen, G., Weiss, H.J. ja Zwaal, R.F.A. Blood 1985, 65: 1557-1561.11. Rosing, J., Bevers, E.M., Comfurius, P., Hemker H.C. can Dieijen, G., Weiss, H.J. and Zwaal, R.F.A. Blood 1985, 65: 1557-1561.
12. Fraker P.J., Speck, J.C., Biochem. Biophys. Res. Comm. 80./ 849-857, 1978.12. Fraker P.J., Speck, J.C., Biochem. Biophys. Res. Comm. 80./849-857, 1978.
13. Reisher, J.I. & Orr, H.C., Anal. Biochem. 1968, 26. 178-179.13. Reisher, J.I. & Orr, H.C., Anal. Biochem. 1968, 26. 178-179.
• · ·• · ·
• · I• · I
> • » • · • · ♦ ft • · • * · • · · • · » · • I · » ·« * · « · · « 9 « « · · • · « · · » * • · • » · « t * » f · « · · • * ♦ • · · I») ti» • * • « « · • ·« * · ♦ *> • »• • • • ♦ ft • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • ••••••••••••••••••••• I · «T *» f · «· · • * ♦ • · · I») ti »• * •« «· • ·« * · ♦ *
Claims (14)
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3942988 | 1989-12-27 | ||
| DE3942988 | 1989-12-27 | ||
| EP9002257 | 1990-12-19 | ||
| PCT/EP1990/002257 WO1991009628A1 (en) | 1989-12-27 | 1990-12-19 | Use of an anticoagulant as a diagnostic agent |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI922719A0 FI922719A0 (en) | 1992-06-12 |
| FI107586B true FI107586B (en) | 2001-09-14 |
Family
ID=6396455
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI922719A FI107586B (en) | 1989-12-27 | 1992-06-12 | Use of anticoagulant as diagnostic agent |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (2) | EP0509026B1 (en) |
| JP (1) | JP3135261B2 (en) |
| KR (1) | KR0181520B1 (en) |
| AT (2) | ATE429644T1 (en) |
| AU (1) | AU642202B2 (en) |
| CA (1) | CA2070647C (en) |
| DE (3) | DE59010815D1 (en) |
| ES (1) | ES2113372T3 (en) |
| FI (1) | FI107586B (en) |
| HU (2) | HU209650B (en) |
| NO (1) | NO305276B1 (en) |
| NZ (1) | NZ236620A (en) |
| PT (1) | PT96385B (en) |
| WO (1) | WO1991009628A1 (en) |
| ZA (1) | ZA9010319B (en) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993025240A2 (en) * | 1992-06-09 | 1993-12-23 | Neorx Corporation | Pretargeting methods and compounds |
| US5627036A (en) * | 1989-12-27 | 1997-05-06 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Use of an anticoagulant as a diagnostic agent |
| AU1186295A (en) * | 1993-11-24 | 1995-06-13 | University Of Washington | Blood coagulation retardants and devices |
| DE69530375T2 (en) * | 1994-01-24 | 2004-02-05 | Neorx Corp., Seattle | RADIOACTIVE-MARKED ANNEXINE |
| US20030220233A1 (en) | 1994-01-24 | 2003-11-27 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexins |
| US5968477A (en) * | 1994-01-24 | 1999-10-19 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexin conjugates with hexose and a chelator |
| HUT76623A (en) * | 1994-03-16 | 1997-10-28 | Mallinckrodt Medical Inc | Stabilization of peptides and proteins for radiopharmaceutical use |
| AU689248B2 (en) * | 1994-04-11 | 1998-03-26 | Nexins Research B.V. | A method for detecting and/or optionally quantifying and/or separating apoptotic cells in or from a sample |
| JPH10504534A (en) * | 1994-06-16 | 1998-05-06 | ネオルクス コーポレイション | Radiolabeled annexin-galactose conjugate |
| EP1364964A1 (en) * | 1994-06-16 | 2003-11-26 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexingalactose conjugates |
| EP1486509A3 (en) * | 1994-12-07 | 2005-03-23 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexin-galactose cluster conjugates |
| EP0799050B1 (en) * | 1994-12-07 | 2004-08-11 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexin-galactose cluster conjugates |
| US5886143A (en) * | 1994-12-07 | 1999-03-23 | Neorx Corporation | Hepatic-directed compounds and reagents for preparation thereof |
| US5955605A (en) * | 1995-02-21 | 1999-09-21 | Neorx Corporation | Biotinidase resistant biotin-DOTA conjugates |
| FR2736197B1 (en) * | 1995-06-29 | 1997-09-12 | Univ Paris Curie | MAGNETIC NANOPARTICLES COUPLED WITH ANNEXIN AND THEIR USE |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4427646A (en) * | 1981-04-02 | 1984-01-24 | Research Corporation | Use of radiolabeled peptide derived from crosslinked fibrin to locate thrombi in vivo |
| US4455290A (en) * | 1981-04-02 | 1984-06-19 | Research Corporation | Inhibition of fibrin polymerization by a peptide isolated from fibrin Fragment D1 |
| US4820505A (en) * | 1985-04-04 | 1989-04-11 | Scripps Clinic And Research Foundation | Detection of activated platelets with antibodies to thrombospondin |
| PT87083B (en) * | 1987-03-28 | 1992-07-31 | Boehringer Ingelheim Int | A PROCESS FOR THE PREPARATION OF A VASCULAR ANTICOAGULANT PROTEIN, OF DNA THAT CODIFIES FOR THIS PROTEIN AND OF PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING IT |
| DE3810331A1 (en) * | 1988-03-26 | 1989-10-05 | Boehringer Ingelheim Int | Monoclonal VAC antibodies |
-
1990
- 1990-12-19 EP EP91902118A patent/EP0509026B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 JP JP03502409A patent/JP3135261B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 DE DE59010815T patent/DE59010815D1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 EP EP97113801A patent/EP0806670B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 AT AT97113801T patent/ATE429644T1/en not_active IP Right Cessation
- 1990-12-19 AU AU70711/91A patent/AU642202B2/en not_active Expired
- 1990-12-19 DE DE59010946T patent/DE59010946D1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 KR KR1019920701497A patent/KR0181520B1/en not_active IP Right Cessation
- 1990-12-19 AT AT91902118T patent/ATE164083T1/en not_active IP Right Cessation
- 1990-12-19 ES ES91902118T patent/ES2113372T3/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 DE DE4040817A patent/DE4040817A1/en not_active Withdrawn
- 1990-12-19 HU HU9202149A patent/HU209650B/en unknown
- 1990-12-19 WO PCT/EP1990/002257 patent/WO1991009628A1/en active IP Right Grant
- 1990-12-19 HU HU9202149A patent/HUT61491A/en unknown
- 1990-12-19 CA CA002070647A patent/CA2070647C/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-21 ZA ZA9010319A patent/ZA9010319B/en unknown
- 1990-12-21 NZ NZ236620A patent/NZ236620A/en unknown
- 1990-12-27 PT PT96385A patent/PT96385B/en not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-06-12 FI FI922719A patent/FI107586B/en active
- 1992-06-26 NO NO922528A patent/NO305276B1/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PT96385B (en) | 1998-06-30 |
| ZA9010319B (en) | 1992-08-26 |
| HU209650B (en) | 1994-09-28 |
| HUT61491A (en) | 1993-01-28 |
| ATE164083T1 (en) | 1998-04-15 |
| DE59010815D1 (en) | 1998-04-23 |
| DE4040817A1 (en) | 1991-07-04 |
| JP3135261B2 (en) | 2001-02-13 |
| JPH05502877A (en) | 1993-05-20 |
| NO305276B1 (en) | 1999-05-03 |
| DE59010946D1 (en) | 2009-06-04 |
| WO1991009628A1 (en) | 1991-07-11 |
| KR920703121A (en) | 1992-12-17 |
| CA2070647C (en) | 2001-04-10 |
| AU7071191A (en) | 1991-07-24 |
| AU642202B2 (en) | 1993-10-14 |
| NO922528L (en) | 1992-08-26 |
| KR0181520B1 (en) | 1999-05-01 |
| EP0806670A2 (en) | 1997-11-12 |
| PT96385A (en) | 1991-10-31 |
| EP0806670B1 (en) | 2009-04-22 |
| CA2070647A1 (en) | 1991-06-28 |
| EP0806670A3 (en) | 1997-12-10 |
| FI922719A0 (en) | 1992-06-12 |
| NZ236620A (en) | 1997-03-24 |
| ATE429644T1 (en) | 2009-05-15 |
| EP0509026A1 (en) | 1992-10-21 |
| HU9202149D0 (en) | 1992-10-28 |
| EP0509026B1 (en) | 1998-03-18 |
| ES2113372T3 (en) | 1998-05-01 |
| NO922528D0 (en) | 1992-06-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5955437A (en) | Use of an anticoagulant as a diagnostic agent | |
| FI107586B (en) | Use of anticoagulant as diagnostic agent | |
| DiDonato et al. | Function and distribution of apolipoprotein A1 in the artery wall are markedly distinct from those in plasma | |
| Shaikh et al. | Quantitative studies of transfer in vivo of low density, Sf 12-60, and Sf 60-400 lipoproteins between plasma and arterial intima in humans. | |
| Gregg et al. | Abnormal in vivo metabolism of apolipoprotein E4 in humans. | |
| Hwang et al. | Hepatic uptake and degradation of unilamellar sphingomyelin/cholesterol liposomes: a kinetic study. | |
| Vigushin et al. | Metabolic and scintigraphic studies of radioiodinated human C-reactive protein in health and disease. | |
| Murakami et al. | 18 F-labelled annexin V: a PET tracer for apoptosis imaging | |
| Biere et al. | Amyloid β-peptide is transported on lipoproteins and albumin in human plasma | |
| Valleix et al. | D25V apolipoprotein C-III variant causes dominant hereditary systemic amyloidosis and confers cardiovascular protective lipoprotein profile | |
| RU2228765C2 (en) | Method for visualizing cell deaths in the mammalian object body area in vivo | |
| Hwang et al. | Fate of lipid vesicles in vivo: a gamma-ray perturbed angular correlation study. | |
| Lahorte et al. | Biodistribution and dosimetry study of 123I-rh-annexin V in mice and humans | |
| Hwang | The use of gamma ray perturbed angular correlation technique for the study of liposomal integrity in vitro and in viva | |
| Brzoska et al. | Imaging analyses of coagulation-dependent initiation of fibrinolysis on activated platelets and its modification by thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor | |
| Assmann et al. | Apoprotein A metabolism in Tangier disease | |
| Dekker et al. | MBP–annexin V radiolabeled directly with iodine-124 can be used to image apoptosis in vivo using PET | |
| Furmaniak-Kazmierczak et al. | Protein S enhances C4b binding protein interaction with neutrophils | |
| England et al. | Studies on the transcobalamins | |
| Krempler et al. | Studies on the metabolism of the lipoprotein Lp (a) in man | |
| Esmon et al. | Lupus anticoagulants, thrombosis and the protein C system | |
| Wardell | Drug displacement from protein binding: source of the sulphadoxine liberated by phenylbutazone | |
| Nigam et al. | Serum and platelet sialic acid in acute myocardial infarction | |
| Lecomte et al. | Cholesterol content of circulating immune complexes in patients with coronary stenosis and subjects without evidence of atherosclerosis | |
| Zhou et al. | Mechanism of Bile Acid in Regulating Platelet Function and Thrombotic Diseases |