ES3036313T3

ES3036313T3 - Narrow emission dyes, compositions comprising same, and methods for making and using same

Info

Publication number: ES3036313T3
Application number: ES20810324T
Authority: ES
Inventors: Christopher J Macnevin; Chih-Yuan Chen
Original assignee: Nirvana Sciences Inc
Current assignee: Nirvana Sciences Inc
Priority date: 2019-05-20
Filing date: 2020-05-19
Publication date: 2025-09-17
Anticipated expiration: 2040-05-19
Also published as: WO2020236828A1; CN120758062A; EP3959292C0; CN114222802B; CA3138406A1; CN114222802A; EP3959292A1; EP3959292A4; EP3959292B1; EP4636054A3; US20220249708A1; JP2022532925A; EP4636054A2

Abstract

Se proporcionan derivados de bacterioclorina con emisión de banda estrecha. En algunas realizaciones, los derivados de bacterioclorina están pegilados. En algunas realizaciones, los derivados de bacterioclorina presentan una alta solubilidad en agua (p. ej., 10 mg/ml o más). En algunas realizaciones, los derivados de bacterioclorina están pegilados y presentan una alta solubilidad en agua. Los derivados de bacterioclorina pueden incluir grupos bioconjugables para formar conjugados, por ejemplo, con anticuerpos y nanopartículas. Los derivados de bacterioclorina y sus conjugados pueden utilizarse en aplicaciones de imagenología y terapéuticas. También se proporcionan métodos para sintetizar los derivados de bacterioclorina. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCION

Colorantes de emisión estrecha, composiciones comprendiendo los mismos, y procedimientos de fabricación y uso de los mismos

REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS

[0001] Esta solicitud reivindica el beneficio de la solicitud de patente provisional de EE. UU. n.° de serie 62/850,446, depositada el 20 de mayo de 2019.

CAMPO TÉCNICO

[0002] La materia objeto descrita en la actualidad se refiere generalmente a derivados de bacterioclorina, en algunas realizaciones, derivados de bacterioclorina solubles en agua, con longitudes de onda de emisión estrecha, a conjugados de los mismos y a procedimientos de fabricación y uso de los mismos.

ANTECEDENTES

[0003] Un número grande y creciente de aplicaciones requiere colorantes fluorescentes que sean solubles en agua y adecuados para la conjugación con otras sustancias, que van desde nanopartículas hasta agentes de direccionamiento biológico. Tales aplicaciones abarcan, por ejemplo, citometría de flujo, formación de imágenes celulares y de organismos enteros, detección y terapia fotodinámica. Las moléculas de bacterioclorina son especialmente interesantes en estas aplicaciones, ya que las bacterioclorinas típicamente absorben en la región del infrarrojo cercano(Near-Infrared,NIR, 700-900 nm), lo que las convierte en uno de los pocos cromóforos disponibles para estudios fotoquímicos en la región del NIR. Los conjugados de bacterioclorina se conocen a partir del documento WO 2018/144886 A1, por poner un ejemplo.

[0004] El éxito de las aplicaciones descritas anteriormente se basa en una serie de factores, que incluyen (1) una solubilidad significativa en soluciones salinas acuosas, evitando de este modo la agregación intermolecular (y la inactivación en estado excitado), (2) una unión no específica mínima a los componentes celulares, (3) la incorporación de un solo grupo reactivo para la conjugación, evitando de este modo la reticulación y las mezclas de productos, y (4) una síntesis robusta que proporciona grandes cantidades para la experimentación. Sin embargo, la gran cara hidrófoba de las bacterioclorinas presenta un desafío para la solubilización en agua.

[0005] Por consiguiente, existe una necesidad continua de proporcionar derivados de bacterioclorina adicionales, que incluyen, aunque sin limitación, aquellos con solubilidad acuosa mejorada (por ejemplo, solubilidad acuosa superior a 1 mg/ml), particularmente aquellos que también se pueden conjugar fácilmente con una amplia variedad de sustancias. También existe una necesidad continua de bacterioclorinas adicionales que combinen una solubilidad acuosa mejorada con bandas de absorción y emisión estrechas.

RESUMEN

[0006] Este Resumen enumera varias realizaciones de la materia objeto descrita en la actualidad y, en muchos casos, enumera variaciones y permutaciones de estas realizaciones. Este Resumen es meramente ejemplar de las numerosas y variadas realizaciones. La mención de una o más características representativas de una realización dada es igualmente ejemplar. Tal realización puede existir típicamente con o sin la(s) característica(s) mencionada(s); del mismo modo, esas características pueden aplicarse a otras realizaciones de la materia objeto descrita en la actualidad, ya sea que se enumeren en este Resumen o no. Para evitar una repetición excesiva, este Resumen no enumera ni sugiere todas las combinaciones posibles de tales características.

[0007] La materia objeto descrita en la actualidad proporciona, en algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (II):

donde: M es un metal o es -H, -H; R<5>, R<10>y R<15>se seleccionan independientemente de H, alcoxi y un grupo enlazador que tiene la fórmula: -Lr(X-i-L<2>)p-G; donde p es 0 o 1; L<1>es alquilideno; X<1>es -C(=O)NH- o -NHC(=O)-; L<2>es -(CH<2>CH<2>O)q-alquileno, donde q es un número entero entre 1 y 24, alquileno, o alquileno sustituido, opcionalmente donde alquileno sustituido es alquileno sustituido por uno o más grupos comprendiendo una cadena de polioxietileno y/o un grupo amida; y G es un grupo bioconjugable;

y R<3>, R<12>y R<13>se seleccionan independientemente de H, ciano, halo, perhaloalquilo, sulfonato, sulfonamida, éster, ácido carboxílico, formilo, acetilo, un grupo enlazador que tiene la fórmula -Lr(Xi-L<2>)p-G, y un grupo solubilizante, donde el grupo solubilizante se selecciona de -arilo-(Rs)w y -alquinilo-arilo-(Rs)w, donde w es un número entero entre 0 y 5 inclusive, y Rs es un grupo que tiene la fórmula:

-X2-(L3)z-R17,

donde: z es 0 o 1; X<2>es -CH<2>NHC(=O)-, -C(=O)NH-alquileno-NH-, o triazolilo; L<3>es -C(=O)-alquileno-C(=O)-NH-, y R<17>se selecciona de -(C<2>H<4>O)m-R<18>, -C(=O)C2H4-(OC2H4)mOR18, y -(C<2>H<4>O)n-C<2>H<4>-C(=O)NH-C(R^)<3>, donde m es un número entero de 12 o más; n es un número entero entre 1 y 5; R<18>es alquilo inferior, opcionalmente metilo; y R<19>es -CH<20>-C<2>H<4>-C(=O)NH-(C<2>H<4>O)mR<18>; sujeto a la condición de que al menos uno de R<2>, R<3>, R<12>, y R<13>sea -arilo-(Rs)w o -alquinilo-arilo-(Rs)w.

[0008] En algunas realizaciones, M es Zn. En algunas realizaciones, R<5>, R<10>y R<15>se seleccionan independientemente de H, metoxi y un grupo enlazador que tiene la fórmula: -L r(X rL<2>)p-G.

[0009] En algunas realizaciones, R<3>y R<13>son cada uno éster, opcionalmente -C(=O)OCH<3>. Según la invención, R<2>es

[0010] En algunas realizaciones, cada Rs es un grupo que tiene la fórmula: -X<2>-(L<3>)z-R<17>, donde: z es 0; X<2>es -C(=O)NH-alquileno-NH-; y R<17>es -C(=O)C<2>H<4>-(OC<2>H<4>)mOR<18>, donde m es un número entero de 12 o más, y R<18>es metilo. En algunas realizaciones, cada Rs es:

[0011] En algunas realizaciones, cada Rs es un grupo que tiene la fórmula: -X<2>-(L<3>)z-R<17>, donde: z es 1; X<2>es -C(=O)NH-alquileno-NH-; L<3>es -C(=O)-propileno-C(=O)-NH-; y R<17>es -(C<2>H<4>O)n-C<2>H<4>-C(=O)NH-C(R<19>)<3>, donde n es un número entero entre 1 y 5, opcionalmente 4; y cada R<19>es -CH<2>O-C<2>H<4>-C(=O)NH-(C<2>H<4>O)mR<18>, donde m es un número entero de 12 o más, opcionalmente donde m es 12; y R<18>es metilo.

[0012] En algunas realizaciones, R<2>y R<12>no son iguales o R<3>y R<13>no son iguales. En algunas realizaciones, uno de R<2>y R<12>es un grupo solubilizante seleccionado de -arilo-(Rs)w y -alquinilo-arilo-(Rs)w y uno de R<2>y R<12>es un grupo enlazador que tiene la fórmula -Li-(X<1>-L<2>)p-G o donde uno de R<3>y R<13>es un grupo solubilizante seleccionado de -arilo-(Rs)w y -alquinilo-arilo-(Rs)w y uno de R<3>y R<13>es un grupo enlazador que tiene la fórmula -L<1>-(X<1>-L<2>)p-G.

[0013] En algunas realizaciones, R<12>es un grupo enlazador que tiene la fórmula: -Lr(X<1>-L<2>)p-G. En algunas realizaciones, R<12>es un grupo que tiene la fórmula: -L r(X rL<2>)p-G;

donde p es 0; L<1>es aralquinileno; y G es un grupo bioconjugable. En algunas realizaciones, R<12>es:

donde G se selecciona de ácido carboxílico y un éster activo.

[0014] En algunas realizaciones, R<12>es un grupo que tiene la fórmula: -Li-(Xi-L<2>)p-G; donde p es 1; Li es aralquinileno; X<1>es -C(=O)NH-; L<2>es alquileno sustituido por uno o más grupos comprendiendo una cadena de polioxietileno y/o un grupo amida; y G es un grupo bioconjugable. En algunas realizaciones, Li es -CeC-(C<6>H<4>)-. En algunas realizaciones, L<2>es -CH(R)-, donde R es alquileno-NH-C(=O)-alquileno-(OC<2>H<4>)q-ORi<6>, donde q es un número entero entre 12 y 24 y Ri6 es metilo.

[0015] En algunas realizaciones, el compuesto se selecciona de:

y

[0016] En algunas realizaciones, la materia objeto descrita en la actualidad proporciona una composición comprendiendo un conjugado covalente formado entre: (a) un compuesto de Fórmula (II) sujeto a la condición de que al menos uno de R<2>, R<3>, R<5>, R<10>, R<12>, R<13>y R<15>sea un grupo de enlace; y (b) uno o más del grupo comprendiendo una molécula pequeña, una micropartícula, una nanopartícula, un polímero, un péptido, una proteína, un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo, un ácido nucleico, una hormona y un factor de crecimiento.

[0017] En algunas realizaciones, la materia objeto descrita en la actualidad proporciona un compuesto de Fórmula (II) o un conjugado formado entre: (a) un compuesto de Fórmula (II) sujeto a la condición de que al menos uno de R<2>, R<3>, R<5>, R<10>, R<12>, R<13>y R<15>sea un grupo de enlace; y (b) uno o más del grupo comprendiendo una molécula pequeña, una micropartícula, una nanopartícula, un polímero, un péptido, una proteína, un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo, un ácido nucleico, una hormona y un factor de crecimiento; y un portador farmacéuticamente aceptable.

[0018] En algunas realizaciones, la materia objeto descrita en la actualidad proporciona un procedimiento de detección de una diana, donde dicha diana es un compuesto, célula o partícula, donde el procedimiento comprende marcar la diana con un conjugado formado entre: (a) un compuesto de Fórmula (II) sujeto a la condición de que al menos uno de R<2>, R<3>, R<5>, R<10>, R<12>, R<13>y R<15>sea un grupo de enlace; y (b) uno o más del grupo comprendiendo una molécula pequeña, una micropartícula, una nanopartícula, un polímero, un péptido, una proteína, un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo, un ácido nucleico, una hormona y un factor de crecimiento. En algunas realizaciones, el procedimiento comprende el uso de citometría de flujo.

[0019] En algunas realizaciones, la materia objeto descrita en la actualidad proporciona un procedimiento de formación de imágenes de una célula, un tejido o un organismo, donde el procedimiento comprende el uso de un compuesto de Fórmula (II) o un conjugado formado entre: (a) un compuesto de Fórmula (II) sujeto a la condición de que al menos uno de R<2>, R<3>, R<5>, R<10>, R<12>, R<13>y R<15>sea un grupo de enlace; y (b) uno o más del grupo comprendiendo una molécula pequeña, una micropartícula, una nanopartícula, un polímero, un péptido, una proteína, un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo, un ácido nucleico, una hormona y un factor de crecimiento.

[0020] En algunas realizaciones, la materia objeto descrita en la actualidad proporciona un procedimiento de tratamiento de una enfermedad en un sujeto que necesita tratamiento, comprendiendo el procedimiento: administrar al sujeto un compuesto de Fórmula (II), un conjugado formado entre: (a) un compuesto de Fórmula (II) sujeto a la condición de que al menos uno de R<2>, R<3>, R<5>, R<10>, R<12>, R<13>y R<15>sea un grupo de enlace; y (b) uno o más del grupo comprendiendo una molécula pequeña, una micropartícula, una nanopartícula, un polímero, un péptido, una proteína, un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo, un ácido nucleico, una hormona y un factor de crecimiento, o una composición farmacéutica de dicho compuesto o dicho conjugado; e irradiar al menos una parte del sujeto con luz, opcionalmente donde dicha enfermedad es una enfermedad hiperproliferativa, además opcionalmente donde la enfermedad es cáncer.

[0021] En algunas realizaciones, la materia objeto descrita en la actualidad proporciona un colorante de bacterioclorina soluble en agua que tiene una solubilidad superior a aproximadamente 1 mg/ml en una solución acuosa, que tiene opcionalmente una solubilidad de aproximadamente 3,0 mg/ml o más en una solución acuosa; que tiene además opcionalmente una solubilidad de aproximadamente 10 mg/ml o más en una solución acuosa. En algunas realizaciones, el colorante tiene una longitud de onda de emisión superior a aproximadamente 850 nanómetros.

[0022] En algunas realizaciones, la materia objeto descrita en la actualidad proporciona un procedimiento de preparación de un producto intermedio sintético de un compuesto de Fórmula (II):

donde: M es un metal o es -H, -H; R<5>, R<10>y R<15>se seleccionan independientemente de H, alcoxi y un grupo enlazador que tiene la fórmula: -L r(X rL<2>)p-G; donde p es 0 o 1; L<1>es alquilideno; X<1>es -C(=O)NH- o -NHC(=O)-; L<2>es -(CH<2>CH<2>O)q-alquileno-, donde q es un número entero entre 1 y 24, alquileno, o alquileno sustituido, opcionalmente donde alquileno sustituido es alquileno sustituido por uno o más grupos comprendiendo una cadena de polioxietileno y/o un grupo amida; y G es un grupo bioconjugable;

y R<3>, R<12>y R<13>se seleccionan independientemente de H, ciano, halo, perhaloalquilo, sulfonato, sulfonamida, éster, ácido carboxílico, formilo, acetilo, un grupo enlazador que tiene la fórmula -L r(X rL<2>)p-G, y un grupo solubilizante, donde el grupo solubilizante se selecciona de -arilo-(Rs)w y -alquinilo-arilo-(Rs)w, donde w es un número entero entre 0 y 5 inclusive, y Rs es un grupo que tiene la fórmula: -X<2>-(L<3>)z-R<17>, donde: z es 0 o 1; X<2>es -CH<2>NHC(=O)-, -C(=O) NH-alquileno-NH-, o triazolilo; L<3>es -C(=O)-alquileno-C(=O)-NH-, y R<17>se selecciona de -(C<2>H<4>O)m-R<18>, -C(=O)C<2>H<4>-(OC2H4)mOR18, y -(C<2>H<4>O)n-C<2>H<4>-C(=O)NH-C(R<19>)<3>, donde m es un número entero de 12 o más; n es un número entero entre 1 y 5; R<18>es alquilo inferior, opcionalmente metilo; y R<19>es -CH<2>O-C<2>H<4>-C(=O)NH-(C<2>H<40>)mR<18>; sujeto a la condición de que al menos uno de R<2>, R<3>, R<12>, y R<13>es -arilo-(Rs)w o -alquinilo-arilo-(Rs)w; donde dicho procedimiento comprende:

(a) proporcionar un compuesto que tiene la fórmula (II'):

donde: M es un metal o es -H, -H; R<5>', R<10>' y R<15>' se seleccionan independientemente de H, alcoxi,

y R<2>', R<3>', R<12>' y R<13>' se seleccionan independientemente de H, ciano, halo, perhaloalquilo, sulfonato, sulfonamida, éster, ácido carboxílico, formilo, acetilo,

sujeto a la condición de que al menos uno de R<2>', R<3>', R<12>V R<13>' sea

y

(b) poner en contacto el compuesto proporcionado en la etapa (a) con una solución comprendiendo HCl 4 molar (M) en dioxano para proporcionar un compuesto de la fórmula (II"):

donde: M es un metal o es -H, -H; R<5>", R<10>" y R<15>" se seleccionan independientemente de H, alcoxi,

y R<2>", R<3>", R<12>" y R<13>" se seleccionan independientemente de H, ciano, halo, perhaloalquilo, sulfonato, sulfonamida, éster, ácido carboxílico, formilo, acetilo,

sujeto a la condición de que al menos uno de R<2>", R<3>", R<12>" y R<13>" sea

[0023] En algunas realizaciones, la materia objeto descrita en la actualidad proporciona un procedimiento de preparación de un compuesto de bacterioclorina asimétrica que tiene la fórmula:

donde: M es un metal o es -H, -H; R<5>, R<10>y R<15>se seleccionan independientemente de H y alcoxi; y R<2>, R<3>, R<12>y R<13>se seleccionan independientemente de H, ciano, halo, perhaloalquilo, sulfonato, sulfonamida, éster, ácido carboxílico, formilo, acetilo, un grupo enlazador y un grupo solubilizante; donde el grupo enlazador tiene una fórmula: -L<1>-(X<1>-L<2>)p-G, donde p es 0 o 1; L<1>es alquilideno; X<1>es -C(=O)NH- o -NHC(=O)-; L<2>es -(CH<2>CH<2>O)q-alquileno-, donde q es un número entero entre 1 y 24, alquileno o alquileno sustituido, opcionalmente donde alquileno sustituido es alquileno sustituido por uno o más grupos comprendiendo una cadena de polioxietileno y/o un grupo amida; y G es un grupo bioconjugable; y donde el grupo solubilizante se selecciona de -arilo-(Rs)w y -alquinilo-arilo-(Rs)w, donde w es un número entero entre 0 y 5 inclusive, y R<s>es un grupo que tiene la fórmula: -X<2>-(L<3>)z-R<17>, donde: z es 0 o 1; X<2>es -CH<2>NHC(=O)-, -C(=O)NH-alquileno-NH-, o triazolilo; L<3>es -C(=O)-alquileno-C(=O)-NH-, y R<17>se selecciona de -(C<2>H<4>O)m-R<18>, -C(=O)C2H4-(OC2H4)mOR18, y -(C<2>H<4>O)n-C<2>H<4>-C(=O)NH-C(R<1>g)<3>, donde m es un número entero de 12 o más; n es un número entero entre 1 y 5; R<18>es alquilo inferior, opcionalmente metilo; y R<1>g es -CH<20>-C<2>H<4>-C(=O)NH-(C<2>H<40>)mR<18>; sujeto a la condición de que R<2>y R<12>no sean iguales o R<3>y R<13>no sean iguales, y donde al menos uno de R<2>, R<3>, R<12>y R<13>es -arilo-(Rs)w o -alquinilo-arilo-(Rs)w; donde dicho procedimiento comprende: (a) proporcionar un compuesto que tiene la fórmula:

donde: M es un metal o es -H, -H; R<5>', R<10>' y R<15>' se seleccionan independientemente de H y alcoxi; y R<2>', R<3>', R<12>' y

g

R<13>' se seleccionan independientemente de H, ciano, halo, perhaloalquilo, sulfonato, sulfonamida, éster, ácido carboxílico, formilo y acetilo, donde R<2>y R<12>son cada uno halo, opcionalmente bromo, o donde R<3>y R<13>' son cada uno halo, opcionalmente bromo; y (b) poner en contacto el compuesto con un catalizador de paladio, una base y uno de: (i) dos alquinos diferentes, opcionalmente donde dichos dos alquinos diferentes son ambos compuestos que tienen la fórmula:

donde y es un número entero entre 1 y 5, opcionalmente 1 o 2; y cada R<20>es una alquilamina N-protegida, un ácido carboxílico protegido, amina protegida por -C(=O)-NH-alquileno, o amina protegida por alquileno sustituido por -C(=O)-NH-, opcionalmente donde el alquileno sustituido de amina protegida por alquileno sustituido por -C(=O)-NH-comprende alquileno sustituido por ácido carboxílico protegido; (ii) dos alquenos diferentes, opcionalmente donde dichos dos alquenos diferentes son ambos compuestos que tienen la fórmula:

donde y es un número entero entre 1 y 5, opcionalmente 1 o 2; y cada R<20>es una alquilamina N-protegida, un ácido carboxílico protegido, amina protegida por -C(=O)-NH-alquileno, amina protegida por alquileno sustituido por -C(=O)-NH-, opcionalmente donde el alquileno sustituido de amina protegida por alquileno sustituido por -C(=O)-NH-comprende alquileno sustituido por ácido carboxílico protegido; y (iii) dos boronatos orgánicos diferentes; opcionalmente donde dichos dos boronatos orgánicos diferentes son dos ácidos aril borónicos o ésteres aril borónicos diferentes de la fórmula:

donde y es un número entero entre 1 y 5, opcionalmente 1 o 2; cada R<20>es una alquilamina N-protegida, un ácido carboxílico protegido, amina protegida por -C(=O)-NH-alquileno, o amina protegida por alquileno sustituido por -C(=O)-NH-, opcionalmente donde el alquileno sustituido de amina protegida por alquileno sustituido por -C(=O)-NH-comprende alquileno sustituido por ácido carboxílico protegido; y cada R<21>es H o alquilo o donde dos R<21>forman en conjunto un alquileno.

[0024] En algunas realizaciones, la relación de los dos alquinos, alquenos o boronatos orgánicos se ajusta para maximizar el rendimiento del producto deseado según la reactividad relativa de los dos alquinos, alquenos o boronatos orgánicos, opcionalmente donde el menos reactivo de los dos se proporciona en mayor exceso molar en comparación con el compuesto de la etapa (a) que el otro de los dos. En algunas realizaciones, el rendimiento del producto deseado es superior al 50 %, opcionalmente donde el rendimiento del producto deseado es superior a aproximadamente el 60 %.

[0025] Por consiguiente, un objeto de la materia objeto descrita en la actualidad es proporcionar bacterioclorinas solubles en agua, sus conjugados y composiciones farmacéuticas, y procedimientos de uso y fabricación de los mismos.

[0026] Estos y otros objetos se logran en su totalidad o en parte por la materia objeto descrita en la actualidad. Además, habiéndose establecido anteriormente los objetos de la materia objeto descrita en la actualidad, otros objetos y ventajas de la materia objeto descrita en la actualidad resultarán evidentes para los expertos en la materia después de un estudio de la siguiente descripción, Figuras y EJEMPLOS.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

[0027]

La Figura 1 es el Esquema 1, un esquema ejemplar para sintetizar elementos básicos representativos para derivados de di-bromo-bacterioclorina de la materia objeto descrita en la actualidad.

La Figura 2 es el Esquema 2, un esquema ejemplar para sintetizar el Compuesto CP-1.

La Figura 3 es el Esquema 3, un esquema ejemplar para sintetizar el Compuesto BC-1.

La Figura 4 es el Esquema 4, un esquema ejemplar para sintetizar el Compuesto BC-2a.

La Figura 5 es el Esquema 5, un esquema ejemplar para sintetizar el Compuesto BC-2.

La Figura 6 es el Esquema 6, un esquema ejemplar para sintetizar el Compuesto BC-3.

La Figura 7 es el Esquema 7, un esquema ejemplar para sintetizar el Compuesto BC-4.

La Figura 8 es el Esquema 8, un esquema ejemplar para sintetizar el Compuesto BC-5.

La Figura 9 es el Esquema 9, un esquema ejemplar para sintetizar el Compuesto BC-6.

La Figura 10 es el Esquema 10, un esquema ejemplar para sintetizar el Compuesto BC-7a.

La Figura 11 es el Esquema 11, un esquema ejemplar para sintetizar el Compuesto BC-7.

La Figura 12 es el Esquema 12, un esquema ejemplar para sintetizar el Compuesto BC-8.

La Figura 13 es el Esquema 13, un esquema ejemplar para sintetizar éster bis-t-butílico de NIRvana 880.

DESCRIPCIÓN DETALLADA

[0028] La materia objeto descrita en la actualidad se describirá ahora más completamente en lo sucesivo, donde se describen algunas, pero no todas las realizaciones de la materia objeto descrita en la actualidad. De hecho, la materia objeto descrita en la actualidad se puede incorporar de muchas formas diferentes y no se debería interpretar como limitada a las realizaciones expuestas en esta invención; más bien, estas realizaciones se proporcionan de modo que esta descripción satisfaga los requisitos legales aplicables.

I. Definiciones

[0029] La terminología usada en esta invención tiene el propósito de describir realizaciones particulares solamente, y no pretende limitar la materia objeto descrita en la actualidad.

[0030] Si bien se cree que los siguientes términos son bien entendidos por un experto en la materia, las siguientes definiciones se establecen para facilitar la explicación de la materia objeto descrita en la actualidad.

[0031] Todos los términos técnicos y científicos usados en esta invención, a menos que se definan de otro modo a continuación, pretenden tener el mismo significado que entiende habitualmente un experto en la materia. Las referencias a las técnicas empleadas en esta invención pretenden hacer referencia a las técnicas según lo entendido habitualmente en la técnica, incluyendo variaciones de esas técnicas o sustituciones de técnicas equivalentes que resultarían evidentes para un experto en la materia. Si bien se cree que los siguientes términos son bien entendidos por un experto en la materia, las siguientes definiciones se establecen para facilitar la explicación de la materia objeto descrita en la actualidad.

[0032] Al describir la materia objeto descrita en la actualidad, se entenderá que se describen una serie de técnicas y etapas. Cada una de éstas tiene un beneficio individual y cada una también se puede usar junto con una o más, o en algunos casos con todas, las otras técnicas descritas.

[0033] Por consiguiente, en aras de la claridad, esta descripción se abstendrá de repetir cada combinación posible de las etapas individuales de manera innecesaria. No obstante, la memoria descriptiva y las reivindicaciones deben leerse con el entendimiento de que tales combinaciones están completamente dentro del alcance de la invención y las reivindicaciones.

[0034] Siguiendo un antiguo convenio del derecho de patentes, los términos “un”, “uno/a” y “el/la” se refieren a “uno/a o más” cuando se usan en esta solicitud, incluyendo las reivindicaciones. Por ejemplo, la expresión “una micropartícula y/o nanopartícula fluorescente” se refiere a una o más micropartículas y/o nanopartículas fluorescentes, que incluyen una pluralidad de la misma micropartícula y/o nanopartícula fluorescente. De manera similar, la expresión “al menos uno/a”, cuando se emplea en este invención para referirse a una entidad, se refiere a, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 75, 100 o más de esa entidad, que incluye, aunque sin limitación, valores de números enteros entre 1 y 100 y superiores a 100.

[0035] A menos que se indique lo contrario, todos los números que expresan cantidades de ingredientes, condiciones de reacción, etc. usados en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones deben entenderse modificados en todos los casos por el término “aproximadamente”. El término “aproximadamente”, como se usa en esta invención cuando se refiere a un valor medible tal como una cantidad de masa, peso, tiempo, volumen, concentración o porcentaje, pretende abarcar variaciones en algunas realizaciones ±20 %, en algunas realizaciones ±10 %, en algunas realizaciones ±5 %, en algunas realizaciones ±1 %, en algunas realizaciones ±0,5 % y en algunas realizaciones ±0,1 % de la cantidad especificada, ya que tales variaciones son apropiadas para realizar los procedimientos descritos. Por consiguiente, a menos que se indique lo contrario, los parámetros numéricos establecidos en esta memoria descriptiva y las reivindicaciones adjuntas son aproximaciones que pueden variar según las propiedades deseadas que se pretende obtener por la materia objeto descrita en la actualidad.

[0036] Como se usa en esta invención, el término “y/o” cuando se usa en el contexto de una lista de entidades, se refiere a las entidades que están presentes individualmente o en combinación. Por tanto, por ejemplo, la expresión “A, B, C y/o D” incluye A, B, C y D individualmente, pero también incluye todas y cada una de las combinaciones y subcombinaciones de A, B, C y D.

[0037] La expresión “comprendiendo”, que es sinónimo de “que incluye”, “que contiene”, o “caracterizado por”, es inclusiva o abierta y no excluye ningún elemento y/o etapa de procedimiento no citado adicional; “Comprendiendo” es un término de la técnica que significa que los elementos y/o etapas nombrados están presentes, pero que otros elementos y/o etapas pueden añadirse y aún encontrarse dentro del alcance de la materia objeto relevante.

[0038] Como se usa en esta invención, la expresión “que consiste en” excluye cualquier elemento, etapa o ingrediente no mencionado específicamente. Cabe señalar que, cuando la expresión “consiste en” aparece en una cláusula del cuerpo de una reivindicación, en lugar de inmediatamente después del preámbulo, limita sólo el elemento establecido en esa cláusula; otros elementos no están excluidos de la reivindicación en su conjunto.

[0039] Como se usa en esta invención, la expresión “que consiste esencialmente en” limita el alcance de la descripción o reivindicación relacionada a los materiales y/o etapas especificados, más aquellos que no afectan materialmente a la(s) característica(s) básica(s) y novedosa(s) de la materia objeto descrita y/o reivindicada. Por ejemplo, una micropartícula y/o nanopartícula fluorescente puede “consistir esencialmente en” una matriz polimérica y al menos una bacterioclorina asociada con esta, lo que significa que la matriz polimérica mencionada es la única matriz polimérica presente en la micropartícula y/o nanopartícula fluorescente.

[0040] Con respecto a las expresiones “comprendiendo”, “que consiste en” y “que consiste esencialmente en”, donde uno de estos tres términos se usa en esta invención, la materia objeto descrita en la actualidad y reivindicada puede incluir el uso de cualquiera de los otros dos términos. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la materia objeto descrita en la actualidad se refiere a micropartículas y/o nanopartículas fluorescentes. Un experto en la materia entendería después de la revisión de la presente descripción que la materia objeto descrita en la actualidad abarca micropartículas y/o nanopartículas fluorescentes que consisten esencialmente en las matrices poliméricas y al menos una bacterioclorina asociada con las mismas de la materia objeto descrita en la actualidad, así como micropartículas y/o nanopartículas fluorescentes que consisten en las matrices poliméricas y al menos una bacterioclorina asociada con las mismas de la materia objeto descrita en la actualidad.

[0041] “Halo”, como se usa en esta invención, se refiere a cualquier halógeno adecuado, incluyendo -F, -Cl, -Br y -I. “Mercapto”, como se usa en esta invención, se refiere a un grupo -SH.

[0042] “Azido”, como se usa en esta invención, se refiere a un grupo -N<3>.

[0043] “Ciano”, como se usa en esta invención, se refiere a un grupo -CN.

[0044] “Hidroxilo”, como se usa en esta invención, se refiere a un grupo -OH.

[0045] “Nitro”, como se usa en esta invención, se refiere a un grupo -NO<2>.

[0046] “Alquilo”, como se usa en esta invención, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que contiene de 1 o 2 a 10, 20 o 50 átomos de carbono (por ejemplo, alquilo C<1>a C<4>; alquilo C<4>a C<10>; alquilo C<11>a C<50>). Los ejemplos representativos de alquilo incluyen, aunque sin limitación, metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, sec-butilo, iso-butilo, terc-butilo, n-pentilo, isopentilo, neopentilo, n-hexilo, 3-metilhexilo, 2,2-dimetilpentilo, 2,3-dimetilpentilo, n-heptilo, n-octilo, n-nonilo, n-decilo y similares. “Alquilo inferior”, como se usa en esta invención, es un subconjunto de alquilo, en algunas realizaciones preferido, y se refiere a un grupo hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que contiene de 1 a 4 átomos de carbono. Los ejemplos representativos de alquilo inferior incluyen, aunque sin limitación, metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, terc-butilo y similares. El término “alquilo” o “alquilo inferior” pretende incluir tanto alquilo o alquilo inferior sustituido como no sustituido a menos que se indique lo contrario y estos grupos pueden estar sustituidos con grupos seleccionados de halo, alquilo, haloalquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo, arilalquilo, heterociclo, heterocicloalquilo, hidroxilo, alcoxi, alqueniloxi, alquiniloxi, haloalcoxi, cicloalcoxi, cicloalquilalquiloxi, ariloxi, arilalquiloxi, heterociclooxi, heterocicloalquiloxi, mercapto, alquilo-S(O)m, haloalquilo-S(O)m, alquenilo-S(O)m, alquinilo-S(O)m, cicloalquilo-S(O)m, cicloalquilalquilo-S(O)m, arilo-S(O)m, arilalquilo-S(O)m, heterociclo-S(O)m, heterocicloalquilo-S(O)m, amino, carboxi, alquilamino, alquenilamino, alquinilamino, halo alquilamino, cicloalquilamino, cicloalquilalquilamino, arilamino, arilalquilamino, heterocicloamino, heterocicloalquilamino, amino disustituido, acilamino, aciloxi, éster, amida, sulfonamida, urea, alcoxiacilamino, aminoaciloxi, nitro o ciano, donde m = 0, 1, 2 o 3.

[0047] “Alquileno”, como se usa en esta invención, se refiere a un grupo alquilo difuncional lineal, ramificado o cíclico, que puede estar sustituido o no sustituido, y donde “alquilo” es como se definió anteriormente.

[0048] “Alquenilo”, como se usa en esta invención, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que contiene de 1 o 2 a 10, 20 o 50 átomos de carbono (por ejemplo, alquenilo C<1>a C<4>; alquenilo C<4>a C<10>; alquenilo C<11>a C<50>) (o en alquenilo inferior de 1 a 4 átomos de carbono) que incluye de 1 a 4 dobles enlaces en la cadena normal. Los ejemplos representativos de alquenilo incluyen, aunque sin limitación, vinilo, 2-propenilo, 3-butenilo, 2-butenilo, 4-pentenilo, 3-pentenilo, 2-hexenilo, 3-hexenilo, 2,4-heptadienilo y similares. El término “alquenilo” o “alquenilo inferior” pretende incluir alquenilo o alquenilo inferior tanto sustituido como no sustituido a menos que se indique lo contrario y estos grupos pueden estar sustituidos con grupos como se describe en relación con alquilo y alquilo inferior anteriormente.

[0049] “Alquenileno”, como se usa en esta invención, se refiere a un grupo alquenilo difuncional lineal, ramificado o cíclico, que puede estar sustituido o no sustituido, y donde “alquenilo” es como se definió anteriormente.

[0050] “Alquinilo”, como se usa en esta invención, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que contiene de 1 o 20 a 10, 20 o 50 átomos de carbono (por ejemplo, alquinilo C<1>a C<4>; alquinilo C<4>a C<10>; alquinilo C<11>a C<50>) (o en alquinilo inferior de 1 a 4 átomos de carbono) que incluye 1 triple enlace en la cadena normal. Los ejemplos representativos de alquinilo incluyen, aunque sin limitación, 2-propinilo, 3-butinilo, 2-butinilo, 4-pentinilo, 3-pentinilo y similares. El término “alquinilo” o “alquinilo inferior” pretende incluir alquinilo o alquinilo inferior tanto sustituido como no sustituido a menos que se indique lo contrario y estos grupos pueden estar sustituidos con los mismos grupos como se ha establecido anteriormente en relación con alquilo y alquilo inferior.

[0051] “Alquinileno”, como se usa en esta invención, se refiere a un grupo alquinilo difuncional lineal, ramificado o cíclico, que puede estar sustituido o no sustituido, y donde “alquinilo” es como se definió anteriormente.

[0052] “Cadena de alquilideno”, como se usa en esta invención, se refiere a un grupo orgánico difuncional lineal, ramificado y/o cíclico, que puede estar sustituido o no sustituido, que puede estar saturado o insaturado, y que puede contener opcionalmente uno, dos o tres heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en N, O y S. Los ejemplos incluyen, aunque sin limitación, alquileno, alquenileno, alquinileno, arileno, alcarileno y aralquileno. Véase, por ejemplo, la patente de EE. UU. n.° 6,946,533. La cadena de alquilideno puede contener cualquier número adecuado de átomos de carbono (por ejemplo, un C<1>a C<4>; C<4>a C<10>; C<10>a C<20>; C<20>a C<50>).

[0053] “Alcoxi”, como se usa en esta invención, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un grupo alquilo o alquilo inferior, como se define en esta invención, unido al resto molecular original a través de un grupo oxi, -O-. Los ejemplos representativos de alcoxi incluyen, aunque sin limitación, metoxi, etoxi, propoxi, 2-propoxi, butoxi, terc-butoxi, pentiloxi, hexiloxi y similares.

[0054] “Acilo”, como se usa en esta invención, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un radical -C(O)R, donde R es cualquier sustituyente adecuado tal como arilo, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo u otro sustituyente adecuado como se describe en esta invención.

[0055] “Haloalquilo”, como se usa en esta invención, solo o como parte de otro grupo, se refiere a al menos un halógeno, como se define en esta invención, unido al resto molecular original a través de un grupo alquilo, como se define en esta invención. Los ejemplos representativos de haloalquilo incluyen, aunque sin limitación, clorometilo, 2 fluoroetilo, trifluorometilo, pentafluoroetilo, 2-cloro-3-fluoropentilo y similares.

[0056] “Perhaloalquilo”, como se usa en esta invención, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un grupo alquilo donde cada átomo de hidrógeno del grupo alquilo se reemplaza por halo. En algunas realizaciones, el perhaloalquilo es un grupo perfluoroalquilo, donde cada átomo de hidrógeno de un grupo alquilo se reemplaza por fluoro. Un grupo perhaloalquilo representativo es trifluorometilo (es decir, -CF<3>).

[0057] “Alquiltio”, como se usa en esta invención, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un grupo alquilo, como se define en esta invención, unido al resto molecular original a través de un resto tío, como se define en esta invención. Los ejemplos representativos de alquiltio incluyen, aunque sin limitación, metiltio, etiltio, terc-butiltio, hexiltio y similares.

[0058] “Arilo”, como se usa en esta invención, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un sistema de anillo carbocíclico monocíclico o un sistema de anillo condensado carbocíclico bicíclico que tiene uno o más anillos aromáticos. Los ejemplos representativos de arilo incluyen azulenilo, indanilo, indenilo, naftilo, fenilo, tetrahidronaftilo y similares. El término “arilo” pretende incluir arilo tanto sustituido como no sustituido a menos que se indique lo contrario y estos grupos pueden estar sustituidos con los mismos grupos que se exponen anteriormente en relación con alquilo y alquilo inferior.

[0059] “Arileno”, como se usa en esta invención, se refiere a un grupo arilo difuncional, que puede estar sustituido o no sustituido, y donde “arilo” es como se definió anteriormente.

[0060] “Arilalquilo”, como se usa en esta invención, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un grupo arilo, como se define en esta invención, unido al resto molecular original a través de un grupo alquilo, como se define en esta invención. Los ejemplos representativos de arilalquilo incluyen, aunque sin limitación, bencilo, 2-feniletilo, 3 fenilpropilo, 2-naft-2-iletilo y similares.

[0061] “Alcarileno” y “aralquileno”, como se usan en esta invención, solos o como parte de otro grupo, se refieren a un grupo difuncional comprendiendo al menos un grupo arileno y al menos un grupo alquilo, alquenilo o alquinilo, como se define en esta invención.

[0062] “Amino”, como se usa en esta invención, se refiere al radical -NH<2>.

[0063] “Alquilamino”, como se usa en esta invención, solo o como parte de otro grupo, se refiere al radical -NHR, donde R es un grupo alquilo.

[0064] “Arilalquilamino”, como se usa en esta invención, solo o como parte de otro grupo, se refiere al radical -NHR, donde R es un grupo arilalquilo.

[0065] “Amino disustituido”, como se usa en esta invención, solo o como parte de otro grupo, se refiere al radical -NRaRb, donde Ra y Rb se seleccionan independientemente de los grupos alquilo, haloalquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo, arilalquilo, heterociclo y heterocicloalquilo.

[0066] “Acilamino”, como se usa en esta invención, solo o como parte de otro grupo, se refiere al radical -NRaRb, donde Ra es un grupo acilo como se define en esta invención y Rb se selecciona de los grupos hidrógeno, alquilo, haloalquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo, arilalquilo, heterociclo y heterocicloalquilo.

[0067] “Aciloxi”, como se usa en esta invención, solo o como parte de otro grupo, se refiere al radical -OR, donde R es un grupo acilo como se define en esta invención.

[0068] “Éster”, como se usa en esta invención, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un radical -C(O)OR, donde R es cualquier sustituyente adecuado tal como alquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo o arilo.

[0069] “Formilo”, como se usa en esta invención, se refiere a un grupo -C(O)H.

[0070] “Ácido carboxílico”, como se usa en esta invención, se refiere a un grupo -C(O)OH.

[0071] “Sulfoxilo”, como se usa en esta invención, se refiere a un compuesto de fórmula -S(O)R, donde R es cualquier sustituyente adecuado tal como alquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo o arilo.

[0072] “Sulfonilo”, como se usa en esta invención, se refiere a un compuesto de fórmula -S(O)(O)R, donde R es cualquier sustituyente adecuado tal como alquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo o arilo.

[0073] “Sulfonato”, como se usa en esta invención, se refiere a un compuesto de fórmula -S(O)(O)OR, donde R es cualquier sustituyente adecuado tal como alquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo o arilo.

[0074] “Ácido sulfónico”, como se usa en esta invención, se refiere a un compuesto de fórmula -S(O)(O)OH.

[0075] “Amida”, como se usa en esta invención, sola o como parte de otro grupo, se refiere a un radical -C(O)NRaRb, donde Ra y Rb son cualquier sustituyente adecuado tal como H, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo o arilo.

[0076] “Sulfonamida”, como se usa en esta invención, sola o como parte de otro grupo, se refiere a un radical -S(O)<2>NRaRb, donde Ra y Rb son cualquier sustituyente adecuado tal como H, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo o arilo.

[0077] “Urea”, como se usa en esta invención, sola o como parte de otro grupo, se refiere a un radical -N(Rc)C(O)NRaRb, donde Ra, Rb, y Rc son cualquier sustituyente adecuado tal como H, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo o arilo.

[0078] “Alcoxacilamino”, como se usa en esta invención, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un radical -N(Ra)C(O)ORb, donde Ra, Rb son cualquier sustituyente adecuado tal como H, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo o arilo.

[0079] “Aminoaciloxi”, como se usa en esta invención, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un radical -OC(O)NRaRb, donde Ra y Rb son cualquier sustituyente adecuado tal como H, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo o arilo.

[0080] “Cicloalquilo”, como se usa en esta invención, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un grupo hidrocarburo cíclico saturado o parcialmente insaturado que contiene de 3, 4 o 5 a<6>, 7 u<8>carbonos (cuyos carbonos pueden reemplazarse en un grupo heterocíclico como se analiza a continuación). Los ejemplos representativos de cicloalquilo incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y ciclooctilo. Estos anillos pueden estar opcionalmente sustituidos por sustituyentes adicionales como se describe en esta invención tal como haloalquilo inferior. El término “cicloalquilo” es genérico y pretende incluir grupos heterocíclicos como se analiza a continuación a menos que se especifique lo contrario.

[0081] La expresión “cadena de polioxietileno”, como se usa en esta invención, se refiere a un resto comprendiendo o consiste en un grupo poli(etilenglicol) (PEG), por ejemplo, un grupo que tiene la fórmula -(C<2>H<4>OV, donde n es un número entero de 2 o más (por ejemplo, 3, 4, 5,<6>, 7,<8>, 9 o 10 o más). En algunas realizaciones, n es un número entero entre 4 y 5000, entre 4 y 1000, entre 4 y 100, entre 4 y 50, entre 4 y 28, o entre 4 y 25. La expresión “cadena de polioxietileno”, como se usa en esta invención, puede referirse a cadenas de PEG monodispersas o polidispersas y a cadenas de PEG lineales o ramificadas. “Monodisperso” se refiere a un PEG con un índice de polidispersidad(Polydispersity Index,PDI) de 1, mientras que “polidisperso” se refiere a PEG con un PDI superior a 1, donde el PEG comprende una distribución gaussiana de longitudes de cadena y pesos moleculares.

[0082] La expresión “grupo bioconjugable”, como se usa en esta invención, se refiere a un grupo funcional químico reactivo que puede formar un enlace (por ejemplo, un enlace covalente) con un grupo en otra entidad, por ejemplo, una proteína; un péptido; un agente de direccionamiento, tal como un anticuerpo o fragmento de anticuerpo; un polímero; una partícula, tal como una nanopartícula, una microesfera orgánica, polimérica o inorgánica; otra superficie de soporte sólida, etc., para formar un conjugado de uno de los compuestos de bacterioclorina descritos en la presente y la otra entidad. Por ejemplo, el grupo bioconjugable puede ser un aldehído, que puede formar un enlace covalente con un grupo amino en una biomolécula sustituida por amino mediante aminación reductora, o un ácido carboxílico, que puede acoplarse a una biomolécula sustituida por amino mediante activación de carbodiimida). Los grupos bioconjugables incluyen aminas (incluidos derivados de amina) tales como isocianatos, isotiocianatos, yodoacetamidas, azidas, sales de diazonio, etc.; ácidos carboxílicos o derivados de ácidos tales como ésteres de N-hidroxisuccinimida (NHS) (más generalmente, ésteres activos derivados de ácidos carboxílicos; por ejemplo, éster de p-nitrofenilo), hidrazidas ácidas, etc.; y otros grupos tales como, aunque sin limitación, aldehídos, cloruros de sulfonilo, hidrazidas de sulfonilo, epóxidos, grupos hidroxilo, grupos tiol, maleimidas, aziridinas, acriloilos, grupos halo, biotina,<2>-iminobiotina, etc.

[0083] El término “micropartícula” se refiere a una estructura que tiene al menos una región con una dimensión (por ejemplo, longitud, anchura, diámetro, etc.) de menos de aproximadamente<1 00 0>pm pero superior a aproximadamente 1000 nm. La dimensión puede ser en algunas realizaciones inferior a aproximadamente 500 pm, en algunas realizaciones inferior a aproximadamente 250 pm, en algunas realizaciones inferior a aproximadamente 200 pm, en algunas realizaciones inferior a aproximadamente 150 pm, en algunas realizaciones inferior a aproximadamente 125 pm, en algunas realizaciones inferior a aproximadamente 100 pm, en algunas realizaciones inferior a aproximadamente 80 pm, en algunas realizaciones inferior a aproximadamente 70 pm, en algunas realizaciones inferior a aproximadamente 60 pm, en algunas realizaciones inferior a aproximadamente 50 pm, en algunas realizaciones inferior a aproximadamente 40 pm, en algunas realizaciones inferior a aproximadamente 30 pm, en algunas realizaciones inferior a aproximadamente<2 0>pm, en algunas realizaciones inferior a aproximadamente<10>pm, y en algunas realizaciones inferior a aproximadamente 5 pm. En algunas realizaciones, la dimensión está entre aproximadamente 1 pm y aproximadamente 250 pm (por ejemplo, aproximadamente 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, o 250 pm).

[0084] De manera similar, el término “nanopartícula” se refiere a una estructura que tiene al menos una región con una dimensión (por ejemplo, longitud, anchura, diámetro, etc.) de menos de aproximadamente 1000 nm. En algunas realizaciones, la dimensión es más pequeña (por ejemplo, inferior a aproximadamente 500 nm, inferior a aproximadamente 250 nm, inferior a aproximadamente 200 nm, inferior a aproximadamente 150 nm, inferior a aproximadamente 125 nm, inferior a aproximadamente 100 nm, inferior a aproximadamente 80 nm, inferior a aproximadamente 70 nm, inferior a aproximadamente 60 nm, inferior a aproximadamente 50 nm, inferior a aproximadamente 40 nm, inferior a aproximadamente 30 nm o incluso inferior a aproximadamente 20 nm). En algunas realizaciones, la dimensión está entre aproximadamente 5 nm y aproximadamente 250 nm (por ejemplo, aproximadamente 1, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240 o 250 nm).

[0085] En algunas realizaciones, la micropartícula o nanopartícula es aproximadamente esférica. Cuando la micropartícula o nanopartícula es aproximadamente esférica, la dimensión característica puede corresponder al diámetro de la esfera. Además de las formas esféricas, la micropartícula o nanopartícula puede tener forma de disco, forma de placa (por ejemplo, hexagonalmente en forma de placa), oblonga, poliédrica, en forma de varilla, cúbica o de forma irregular.

[0086] La micropartícula o nanopartícula puede comprender una región central (es decir, el espacio entre las dimensiones exteriores de la partícula) y una superficie exterior (es decir, la superficie que define las dimensiones exteriores de la partícula). En algunas realizaciones, la micropartícula o nanopartícula puede tener una o más capas de recubrimiento que rodean o rodean parcialmente el núcleo de micropartícula o nanopartícula. Por tanto, por ejemplo, una micropartícula o nanopartícula esférica puede tener una o más capas de recubrimiento concéntricas, siendo cada capa sucesiva dispersada sobre la superficie exterior de una capa más pequeña más cerca del centro de la partícula.

[0087] Los términos “polímero” y “polimérico” se refieren a estructuras químicas que tienen unidades de repetición (es decir, múltiples copias de una subestructura química dada). Los polímeros pueden formarse a partir de monómeros polimerizables. Un monómero polimerizable es una molécula que comprende uno o más restos que pueden reaccionar para formar enlaces (por ejemplo, enlaces covalentes o de coordinación) con restos en otras moléculas de monómero polimerizable. En algunas realizaciones, cada molécula de monómero polimerizable puede unirse a dos o más otras moléculas/restos. En algunos casos, un monómero polimerizable se unirá a solamente otra molécula, formando un extremo terminal del material polimérico.

[0088] Los polímeros pueden ser orgánicos o inorgánicos, o una combinación de los mismos. Como se usa en esta invención, el término “inorgánico” se refiere a un compuesto o composición que contiene al menos algunos átomos distintos de carbono, hidrógeno, nitrógeno, oxígeno, azufre, fósforo o uno de los haluros. Por tanto, por ejemplo, un compuesto o composición inorgánico puede contener uno o más átomos de silicio y/o uno o más átomos de metal. En algunas realizaciones, el polímero es poliestireno, y la micropartícula y/o nanopartícula está compuesta de poliestireno. En algunas realizaciones, la micropartícula y/o nanopartícula es una microesfera de poliestireno.

[0089] Como se usa en esta invención, el término “porfirina” se refiere a una estructura cíclica típicamente compuesta por cuatro anillos de pirrol junto con cuatro átomos de nitrógeno y dos hidrógenos reemplazables para los cuales se pueden sustituir fácilmente varios átomos de metal. La porfirina atípica es hemina.

[0090] Como se usa en esta invención, una “bacterioclorina” difiere de una porfirina en que tiene dos anillos de pirrol parcialmente saturados, no adyacentes (es decir, trans). Los términos “bacterioclorina” y "derivado de bacterioclorina" se usan indistintamente en esta invención.

[0091] La expresión “asociado con” se refiere a cualquier interacción entre dos entidades, por ejemplo, una matriz polimérica y una bacterioclorina. En algunas realizaciones, una matriz polimérica y una bacterioclorina están asociadas entre sí por un enlace no covalente tal como, aunque sin limitación, una o más de las interacciones hidrófobas, electrostáticas y de van der Walls. En algunas realizaciones, una matriz polimérica y una bacterioclorina están asociadas entre sí como resultado de la matriz polimérica (por ejemplo, una nanopartícula, una micropartícula, una microesfera, etc.) que abarca la bacterioclorina de modo que la bacterioclorina está presente dentro de la matriz polimérica. En una realización de este tipo, la matriz polimérica también se denomina “dopada por” o “dopada con” la bacterioclorina, y la bacterioclorina puede considerarse “incrustada” dentro de la matriz polimérica. En algunas realizaciones, una matriz polimérica y una bacterioclorina están asociadas entre sí por un enlace covalente que fija la bacterioclorina a una superficie de la matriz polimérica.

[0092] “Tratamiento”, como se usa en esta invención, significa cualquier manera donde uno o más de los síntomas de una enfermedad o trastorno mejoran o se alteran de manera beneficiosa. El tratamiento también abarca cualquier uso farmacéutico de las composiciones en esta invención, tal como el uso para tratar enfermedades o trastornos mediados por tejido hiperproliferativo o neovascularización, o enfermedades o trastornos donde está implicado el tejido hiperproliferativo tisular o neovascularización. Como se usa en esta invención, la mejora de los síntomas de un trastorno particular por la administración de un compuesto o composición farmacéutica particular se refiere a cualquier disminución, ya sea permanente o temporal, duradera o transitoria que pueda atribuirse o asociarse con la administración de la composición.

[0093] “Profármaco”, como se usa en esta invención, es un compuesto que, tras la administración in vivo, se metaboliza por una o más etapas o procesos o se convierte de otra manera en la forma biológica, farmacéutica o terapéuticamente activa del compuesto.

[0094] “Anticuerpo”, como se usa en esta invención, se refiere generalmente a inmunoglobulinas o fragmentos de las mismas que se unen específicamente a antígenos para formar complejos inmunitarios. El anticuerpo puede ser una inmunoglobulina entera de cualquier clase, por ejemplo, IgG, IgM, IgA, IgD, IgE, anticuerpos quiméricos o híbridos con especificidades de antígenos o epítopos dobles o múltiples. Puede ser un anticuerpo policlonal, preferentemente un anticuerpo purificado por afinidad de un ser humano o un animal apropiado, por ejemplo, un primate, cabra, conejo, ratón o similares. Los anticuerpos monoclonales también son adecuados para su uso en la materia objeto descrita en la actualidad y pueden preferirse debido a sus altas especificidades. Se preparan fácilmente por lo que ahora se consideran procedimientos convencionales de inmunización de mamíferos con preparación de antígenos inmunogénicos, fusión de linfocitos inmunitarios o células esplénicas con una estirpe celular de mieloma inmortal y aislamiento de clones de hibridoma específicos. No se excluyen procedimientos menos convencionales de preparación de anticuerpos monoclonales, tales como las fusiones entre especies y las manipulaciones de ingeniería genética de regiones hipervariables, ya que es principalmente la especificidad antigénica de los anticuerpos lo que afecta su utilidad. También se pueden usar técnicas más nuevas para la producción de monoclonales, por ejemplo, monoclonales humanos, monoclonales entre especies, monoclonales quiméricos (por ejemplo, humanos/ratones), anticuerpos genéticamente modificados y similares.

[0095] Por consiguiente, los términos “anticuerpo” y “anticuerpos” se refieren a proteínas comprendiendo uno o más polipéptidos sustancialmente codificados por genes de inmunoglobulina o fragmentos de genes de inmunoglobulina. Los genes de inmunoglobulina típicamente incluyen los genes de región constante kappa (k), lambda (A), alfa (a), gamma (<y>), delta (8), épsilon (<e>) y mu (p), así como una miríada de genes de región variable de inmunoglobulina. Las cadenas ligeras se clasifican como k o A. En los mamíferos, las cadenas pesadas se clasifican como y, p, a, 8 o e que, a su vez, definen las clases de inmunoglobulinas, IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, respectivamente. Otras especies tienen otros genes de cadena ligera y pesada (por ejemplo, ciertas aves producen lo que se conoce como IgY, que es un tipo de inmunoglobulina que las aves domésticas depositan en las yemas de sus huevos), que están abarcadas de manera similar por la materia objeto descrita en la actualidad.

[0096] Se sabe que la unidad estructural de la inmunoglobulina (anticuerpo) atípica comprende un tetrámero. Cada tetrámero se compone de dos pares idénticos de cadenas polipeptídicas, teniendo cada par una cadena “ligera” (peso molecular promedio de aproximadamente 25 kiloDalton (kDa)) y una cadena “pesada” (peso molecular promedio de aproximadamente 50-70 kDa). Los dos pares idénticos de cadenas polipeptídicas ligados en forma dimérica por enlaces disulfuro que están presentes dentro de la región de cadena pesada. El extremo terminal N de cada cadena define una región variable de aproximadamente 100 a 110 o más aminoácidos responsables principalmente del reconocimiento del antígeno. Los términos cadena ligera variable (V<l>) y cadena pesada variable (V<h>) se refieren a estas cadenas ligera y pesada, respectivamente.

[0097] Los anticuerpos típicamente existen como inmunoglobulinas intactas o como una cantidad de fragmentos bien caracterizados que se pueden producir por digestión con diversas peptidasas. Por ejemplo, la digestión de una molécula de anticuerpo con papaína escinde el anticuerpo en una posición N-terminal a los enlaces disulfuro. Esto produce tres fragmentos: dos fragmentos “Fab” idénticos, que tienen una cadena ligera y el extremo N-terminal de la cadena pesada, y un fragmento “Fc” que incluye el extremo C-terminal de las cadenas pesadas ligadas por los enlaces disulfuro. La pepsina, por otro lado, digiere un anticuerpo C-terminal en el enlace disulfuro en la región bisagra para producir un fragmento conocido como el fragmento “F(ab)'<2>”, que es un dímero de los fragmentos Fab unidos por el enlace disulfuro. El fragmento F(ab<) '2>se puede reducir en condiciones suaves para romper el enlace disulfuro en la región bisagra, convirtiendo de este modo el dímero F(ab<')2>en dos monómeros “Fab'”. El monómero Fab' es esencialmente un fragmento Fab con parte de la región bisagra. Con respecto a estos diversos fragmentos, los fragmentos Fab, F(ab<')2>y Fab' incluyen al menos un dominio de unión a antígeno intacto (denominado “paratopo”) y, por tanto, son capaces de unirse a antígenos.

[0098] Si bien varios fragmentos de anticuerpo se definen en términos de la digestión de un anticuerpo intacto, un experto apreciará que varios de estos fragmentos (que incluyen, aunque sin limitación, fragmentos Fab') se pueden sintetizar de novo ya sea químicamente o utilizando metodología de ADN recombinante. Por tanto, el término “anticuerpo”, como se usa en esta invención también incluye fragmentos de anticuerpo producidos por la modificación de anticuerpos completos o sintetizados de novo usando metodologías de AdN recombinante. En algunas realizaciones, el término “anticuerpo” comprende un fragmento que tiene al menos un dominio de unión a antígeno.

[0099] Los anticuerpos, fragmentos y derivados de la materia objeto descrita en la actualidad también pueden incluir anticuerpos quiméricos. Como se usa en esta invención en el contexto de los anticuerpos, el término “quimérico”, y variantes gramaticales del mismo, se refiere a derivados de anticuerpo que tienen regiones constantes derivadas sustancial o exclusivamente de regiones constantes de anticuerpo de una especie y regiones variables derivadas sustancial o exclusivamente de la secuencia de la región variable de otra especie. Un tipo particular de anticuerpo quimérico es un anticuerpo “humanizado”, donde los anticuerpos se producen sustituyendo las regiones determinantes de complementariedad(Complementarity Determining Regions,CDR) de, por ejemplo, un anticuerpo de ratón, por las CDR de un anticuerpo humano (véase, por ejemplo, la publicación de solicitud de patente internacional PCT n.° WO 1992/22653). Por tanto, en algunas realizaciones, un anticuerpo humanizado tiene regiones constantes y regiones variables distintas de las CDR que se derivan sustancial o exclusivamente de las regiones de anticuerpo humano correspondientes, y CDR que se derivan sustancial o exclusivamente de un mamífero distinto de un ser humano.

[0100] Los anticuerpos, fragmentos y derivados de la materia objeto descrita en la actualidad también pueden ser anticuerpos monocatenarios y fragmentos de anticuerpos monocatenarios. Los fragmentos de anticuerpos monocatenarios contienen secuencias de aminoácidos que tienen al menos una de las regiones variables y/o CDR de los anticuerpos completos descritos en esta invención pero carecen de algunos o todos los dominios constantes de esos anticuerpos. Estos dominios constantes no son necesarios para la unión al antígeno, pero constituyen una parte importante de la estructura de los anticuerpos completos.

[0101] Los fragmentos de anticuerpos monocatenarios pueden superar algunos de los problemas asociados con el uso de anticuerpos que contienen una parte o la totalidad de un dominio constante. Por ejemplo, los fragmentos de anticuerpos monocatenarios tienden a estar libres de interacciones no deseadas entre moléculas biológicas y la región constante de cadena pesada, u otra actividad biológica no deseada. Adicionalmente, los fragmentos de anticuerpos monocatenarios son considerablemente más pequeños que los anticuerpos completos y, por lo tanto, pueden tener una mayor permeabilidad capilar que los anticuerpos completos, lo que permite que los fragmentos de anticuerpos monocatenarios se localicen y se unan a los sitios de unión a antígeno diana de manera más eficiente. Asimismo, los fragmentos de anticuerpos se pueden producir a una escala relativamente grande en células procariotas, lo que facilita su producción. Es más, el tamaño relativamente pequeño de los fragmentos de anticuerpos monocatenarios los hace menos propensos a provocar una respuesta inmunitaria en un receptor que los anticuerpos completos. Los fragmentos de anticuerpos monocatenarios de la materia objeto descrita en la actualidad incluyen, aunque sin limitación, anticuerpos variables de fragmentos monocatenarios(single chain Fragment variable,scFv) y derivados de los mismos tales como, aunque sin limitación, di-scFv en tándem, tri-scFv en tándem, diacuerpos, entre los que se incluyen diacuerpos biespecíficos, triacuerpos, tetracuerpos, minianticuerpos, minicuerpos, moléculas biespecíficas tetravalentes, fragmentos F(ab')2 biespecíficos, etc.

[0102] “Agente infeccioso”, como se usa en esta invención, indica microbios o parásitos invasores. Como se usa en esta invención, “microbio” indica virus, bacterias, rickettsias, micoplasmas, protozoos, hongos y microorganismos similares, y “parásito” indica invertebrados multicelulares infecciosos, generalmente microscópicos o muy pequeños, u óvulos o formas juveniles de los mismos, que son susceptibles a la depuración o destrucción lítica o fagocítica inducida por anticuerpos, por ejemplo, parásitos de la malaria, espiroquetas y similares.

[0103] “Tumor”, como se usa en esta invención, indica una neoplasia e incluye tumores tanto benignos como malignos. Este término incluye particularmente tumores malignos que pueden ser sólidos (tales como un carcinoma de mama, hígado o próstata) o no sólidos (tales como leucemia). Los tumores también se pueden dividir además en subtipos, tales como los adenocarcinomas (por ejemplo, de mama, próstata o pulmón).

[0104] “Diana”, como se usa en esta invención, indica el objeto que se pretende detectar, diagnosticar, alterar o destruir por los procedimientos proporcionados en esta invención, e incluye células diana, tejidos diana y composiciones diana.

[0105] “Tejidos diana” y “células diana”, como se usan en esta invención, son aquellos tejidos que están destinados a ser alterados o destruidos por este procedimiento de tratamiento. Los compuestos fotosensibilizantes se unen o se acumulan en estos tejidos o células diana; a continuación, cuando se aplica suficiente radiación, estos tejidos o células se alteran o destruyen. Las células diana son células en el tejido diana, y el tejido diana incluye, aunque sin limitación, tejido endotelial vascular, paredes vasculares anormales de tumores, tumores sólidos tales como (aunque sin limitación) tumores de la cabeza y el cuello, tumores del ojo, tumores del tracto gastrointestinal, tumores del hígado, tumores de la mama, tumores de la próstata, tumores del pulmón, tumores no sólidos y células malignas del tejido hematopoyético y linfoide, tejido neovascular, otras lesiones en el sistema vascular, médula ósea y tejido o células que se relacionan con la enfermedad autoinmunitaria. También se incluyen entre las células diana las células que experimentan una división sustancialmente más rápida en comparación con las células no diana.

[0106] “Tejidos no diana”, como se usa en esta invención, son todos los tejidos del sujeto que no están destinados a ser alterados o destruidos por el procedimiento de tratamiento. Estos tejidos no diana incluyen, aunque sin limitación, células sanguíneas sanas y otros tejidos normales no identificados como diana.

[0107] “Composiciones diana”, como se usa en esta invención, son aquellas composiciones que se pretende que se alteren o destruyan mediante este procedimiento de tratamiento, y pueden incluir uno o más agentes patógenos, que incluyen, aunque sin limitación, bacterias, virus, hongos, protozoos y toxinas, así como células y tejidos, infectados o infiltrados con los mismos. La expresión “composiciones diana” también incluye, aunque sin limitación, partículas orgánicas infecciosas tales como priones, toxinas, péptidos, polímeros y otros compuestos que pueden identificarse selectiva y específicamente como una diana orgánica que se pretende que se altere o destruya mediante este procedimiento de tratamiento.

[0108] “Tejido hiperproliferativo”, como se usa en esta invención, significa tejido que crece fuera de control e incluye tejido neoplásico, tumores y crecimiento incontrolado de vasos, tal como el crecimiento de vasos sanguíneos que se encuentra en la degeneración macular relacionada con la edad y que a menudo ocurre después de cirugías de glaucoma.

[0109] “Trastornos hiperproliferativos”, como se usa en esta invención, indica aquellas afecciones o trastornos que comparten como patología subyacente una proliferación celular excesiva causada por un crecimiento celular no regulado o anormal e incluye angiogénesis no controlada. Los ejemplos de tales trastornos hiperproliferativos incluyen, aunque sin limitación, cánceres o carcinomas, glomerulonefritis aguda y membrano-proliferativa, mielomas, psoriasis, aterosclerosis, artritis psoriásica, artritis reumatoide, retinopatías diabéticas, degeneración macular, neovascularización corneal, hemangioma coroideo, recurrencia de pterigiones y cicatrización por cirugía con láser excimer y cirugía de filtrado de glaucoma.

[0110] “Dosis terapéuticamente eficaz”, como se usa en esta invención, es una dosis suficiente para prevenir el avance, o para provocar la regresión de la enfermedad, o que es capaz de aliviar los síntomas provocados por la enfermedad.

[0111] “Materiales biológicos”, como se usa en esta invención, se refiere tanto a tejidos (tales como tejidos de biopsia) como a células, así como a fluidos biológicos tales como sangre, orina, plasma, líquido cefalorraquídeo, moco, esputo, etc.

[0112] “Irradiar” e “irradiación”, como se usan en esta invención, incluyen exponer a un sujeto a todas las longitudes de onda de la luz. Preferentemente, la longitud de onda de irradiación se selecciona para que coincida con la(s) longitud(es) de onda que excita(n) el compuesto fotosensible. Preferentemente, la longitud de onda de radiación coincide con la longitud de onda de excitación del compuesto fotosensible y tiene una baja absorción por parte de los tejidos no diana del sujeto, incluidas las proteínas sanguíneas.

[0113] La irradiación se define además en esta invención por su coherencia (láser) o no coherencia (no láser), así como la intensidad, duración y tiempo con respecto a la dosificación usando el compuesto fotosensibilizante. La intensidad o tasa de fluencia debe ser suficiente para que la luz alcance el tejido diana. La duración o dosis de fluencia total debe ser suficiente para fotoactivar suficiente compuesto fotosensibilizante con el fin de actuar sobre el tejido diana. El tiempo con respecto a la dosificación con el compuesto fotosensibilizante es importante, porque 1) el compuesto fotosensibilizante administrado requiere algún tiempo para dirigirse al tejido diana y 2) el nivel en sangre de muchos compuestos fotosensibilizantes disminuye con el tiempo. La energía de radiación es proporcionada por una fuente de energía, tal como una fuente de luz láser o de cátodo frío, que es externa al sujeto, o que se implanta en el sujeto, o que se introduce en un sujeto, tal como por un catéter, fibra óptica o ingiriendo la fuente de luz en forma de cápsula o píldora (por ejemplo, como se describe en la patente de EE. UU. n.° 6,273,904).

[0114] Si bien algunas realizaciones de la materia objeto descrita en la actualidad se centran en el uso de energía luminosa para administrar terapia fotodinámica(Photodynamic Therapy,PDT) para destruir tumores, otras formas de energía están dentro del alcance de la materia objeto descrita en la actualidad, como entenderán los expertos en la materia. Tales formas de energía incluyen, aunque sin limitación: térmica, sónica, ultrasónica, química, luminosa, de microondas, ionizante (tal como rayos X y rayos gamma), mecánica y eléctrica. Por ejemplo, los agentes inducidos o activados sonodinámicamente incluyen, aunque sin limitación: complejo de galio-porfirina (véase Yumita y col. (1997) Cancer Letters 112:79-86), otros complejos de porfirina, tales como protoporfirina y hematoporfirina (véase Umemura y col. (1996) Ultrasonics Sonochemistry 3:S187-S191); otros fármacos contra el cáncer, tales como daunorrubicina y adriamicina, usados en presencia de terapia de ultrasonidos (véase Yumita y col. (1987) Japanese Journal of Hyperthermic Oncology 3(2):175-182).

[0115] “Agente de acoplamiento”, como se usa en esta invención, se refiere a un reactivo capaz de acoplar un fotosensibilizador a un agente de direccionamiento.

[0116] “Agente de direccionamiento” se refiere a un compuesto que se aloja o se asocia preferentemente o se une a un tejido, receptor, agente infeccioso u otra área particular del cuerpo del sujeto a tratar, tal como un tejido diana o composición diana. Los ejemplos de un agente de direccionamiento incluyen, aunque sin limitación, un anticuerpo, un ligando, un miembro de un par de unión a receptor de ligando, ácidos nucleicos, ácidos nucleicos peptídicos(Peptide-Nucleic Acids,PNA), aptámeros, proteínas y péptidos, y suspensiones liposómicas, incluyendo liposomas dirigidos al tejido.

[0117] “Par de unión específica” y “par de unión a ligando-receptor”, como se usa en esta invención, se refiere a dos moléculas diferentes, donde una de las moléculas tiene un área en la superficie o en una cavidad que atrae o se une específicamente a una organización espacial o polar particular de la otra molécula, haciendo que ambas moléculas tengan afinidad entre sí. Los miembros del par de unión específica se denominan ligando y receptor (anti ligando). Los términos ligando y receptor pretenden abarcar todo el ligando o receptor o partes de este suficientes para que se produzca la unión entre el ligando y el receptor. Los ejemplos de pares de unión a ligando-receptor incluyen, aunque sin limitación, hormonas y receptores de hormonas, por ejemplo, factor de crecimiento epidérmico y receptor del factor de crecimiento epidérmico, factor de necrosis tumoral-a y receptor del factor de necrosis tumoral, e interferón y receptor de interferón; avidina y biotina o antibiotina; pares de anticuerpos y antígenos; enzimas y sustratos, fármaco y receptor de fármaco; antígeno de superficie celular y lectina; dos cadenas de ácido nucleico complementarias; cadenas de ácido nucleico y oligonucleótidos complementarios; interleucina y receptor de interleucina; y factores estimulantes y sus receptores, tales como factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos(Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor,GMCSF) y receptor de GMCSF y factor estimulante de colonias de macrófagos(Macrophage Colony Stimulating Factor,MCSF) y receptor de MCSF.

[0118] Los “enlazadores” son grupos aromáticos o alifáticos (que pueden estar sustituidos o no sustituidos y pueden contener opcionalmente heteroátomos tales como N, O o S) que se utilizan para acoplar un grupo bioconjugable, un grupo de acoplamiento cruzado, un grupo de unión a la superficie, un grupo hidrófilo o similares a la molécula original. Los ejemplos incluyen, aunque sin limitación, enlazadores de arilo, alquilo, heteroarilo, heteroalquilo (por ejemplo, oligoetilenglicol), péptido y polisacárido, etc.

[0119] Los sujetos a tratar por los procedimientos de la materia objeto descrita en la actualidad con fines diagnósticos o terapéuticos incluyen tanto sujetos humanos como otros sujetos animales (particularmente sujetos mamíferos tales como perros, gatos, caballos, monos, chimpancés, etc.) con fines veterinarios.

[0120] Más particularmente, los términos “sujeto”, “paciente” y “receptor”, como se usan en esta invención, pueden usarse indistintamente y pueden referirse a un miembro de cualquier especie de invertebrado o vertebrado. Por consiguiente, el término “sujeto” pretende abarcar cualquier miembro del reino Animalia que incluye, aunque sin limitación, el filoChordata(por ejemplo, miembros de las clasesOsteichythyes(peces óseos),Amphibia(anfibios),Reptilia(reptiles),Aves(aves) yMammalia(mamíferos)), y todos los órdenes y familias abarcados en el mismo.

[0121] Las composiciones y procedimientos de la materia objeto descrita en la actualidad son particularmente útiles para vertebrados de sangre caliente. Por tanto, la materia objeto descrita en la actualidad se refiere a mamíferos y aves. Más particularmente, se proporcionan composiciones y procedimientos derivados de y/o para su uso en mamíferos tales como seres humanos y otros primates, así como aquellos mamíferos de importancia debido a estar en peligro de extinción (tales como tigres siberianos), de importancia económica (animales criados en granjas para consumo humano) y/o de importancia social (animales mantenidos como mascotas o en zoológicos) para los seres humanos, por ejemplo, carnívoros distintos de seres humanos (tales como gatos y perros), porcinos (cerdos, puercos y jabalíes), rumiantes (tales como ganado vacuno, bueyes, ovejas, jirafas, ciervos, cabras, bisontes y camellos), roedores (tales como ratones, ratas, hámsteres, cobayas y conejos), marsupiales y caballos. También se proporciona el uso de los procedimientos y composiciones descritos en aves, que incluyen aquellos tipos de aves que están en peligro de extinción, mantenidas en zoológicos o como mascotas (por ejemplo, loros, cacatúas y similares), así como aves en general, y más particularmente aves en general domesticadas, por ejemplo, aves de corral, tales como pavos, pollos, patos, gansos, gallinas de Guinea y similares, ya que también son de importancia económica para los humanos. Por tanto, también se proporciona el uso de los procedimientos y composiciones descritos en el ganado, que incluyen, aunque sin limitación, porcinos domesticados (cerdos y puercos), rumiantes, caballos, aves de corral y similares. II. Compuestos de bacterioclorina

[0122] En algunas realizaciones, la materia objeto descrita en la actualidad proporciona una bacterioclorina soluble en agua, donde la bacterioclorina tiene una solubilidad de aproximadamente<1>miligramo por mililitro (mg/ml) o más en una solución acuosa (por ejemplo, agua, solución salina, PBS, etc.). La solubilidad en agua se proporciona, por ejemplo, por la adición de grupos solubilizantes comprendiendo cadenas de PEG en posiciones de p-pirrol. En algunas realizaciones, las cadenas de PEG están fijadas a la bacterioclorina a través de diferentes grupos y/o son más largas que las cadenas de PEG que se han fijado a los compuestos de bacterioclorina pegilados descritos anteriormente. En algunas realizaciones, la bacterioclorina tiene una solubilidad en una solución acuosa de aproximadamente 3,0 mg/ml o más. En algunas realizaciones, la bacterioclorina tiene una solubilidad en una solución acuosa de aproximadamente 5,0 mg/ml o más. En algunas realizaciones, la bacterioclorina tiene una solubilidad en una solución acuosa de aproximadamente 10 mg/ml o más. En algunas realizaciones, la bacterioclorina tiene una solubilidad de aproximadamente 500, aproximadamente 600, aproximadamente 700, aproximadamente 800 o aproximadamente 900 pM o más en solución acuosa. En algunas realizaciones, esa bacterioclorina tiene una solubilidad de aproximadamente 1, 1,5, 2, 2,5 o 3 mM o más en solución acuosa.

[0123] En algunas realizaciones, la bacterioclorina tiene una longitud de onda de emisión superior a aproximadamente 700 nm. En algunas realizaciones, la bacterioclorina tiene una longitud de onda de emisión superior a aproximadamente 800 nm. En algunas realizaciones, la bacterioclorina tiene una longitud de onda de emisión de aproximadamente 850 nm o más.

[0124] En algunas realizaciones, la bacterioclorina soluble en agua comprende un resto enlazador comprendiendo un grupo bioconjugable que se puede usar para conjugar la bacterioclorina con otra sustancia, por ejemplo, que puede actuar como un agente de direccionamiento o como una sustancia a detectar. En algunas realizaciones, la sustancia a la que se puede conjugar la bacterioclorina puede ser una molécula pequeña (por ejemplo, una molécula sintética no polimérica que tiene un peso molecular de aproximadamente 900 dalton (Da) o menos), un antígeno, una micropartícula, una nanopartícula, un polímero, un péptido, una proteína, un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo, un ácido nucleico, una hormona o un factor de crecimiento. El grupo bioconjugable puede incluir, por ejemplo, un ácido carboxílico o éster activo, un hidroxilo, una amina, un tiol o un aldehído. En algunas realizaciones, el resto enlazador incluye además tanto grupos arileno como alquileno. En algunas realizaciones, el resto enlazador incluye un grupo arileno y/o alquinileno proximal a la estructura principal de bacterioclorina, mientras que un grupo alquileno es proximal al grupo bioconjugable.

[0125] En algunas realizaciones, la bacterioclorina comprende al menos un grupo solubilizante. En algunas realizaciones, el grupo solubilizante incluye una o más (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5,<6>, 7,<8>o más) cadenas de polioxietileno (por ejemplo, cadenas de PEG). En algunas realizaciones, el grupo solubilizante comprende al menos dos cadenas de PEG. En algunas realizaciones, las cadenas de PEG son monodispersas y comprenden al menos 4 unidades de repetición -CH<2>CH<2>O-. En algunas realizaciones, las cadenas de PEG comprenden al menos 6, 8, 10 o 12 unidades de repetición -CH<2>CH<2>O-. Por tanto, el grupo solubilizante puede comprender dos grupos PEG6, PEG8, PEG10 o PEG12. En algunas realizaciones, las cadenas de PEG comprenden 12 o más unidades de repetición -CH<2>CH<2>O- (por ejemplo, entre aproximadamente 12 y aproximadamente 24 o aproximadamente 28 unidades de repetición -CH<2>CH<2>O-). En algunas realizaciones, el compuesto comprende dos grupos solubilizantes fijados a dos carbonos pirrólicos diferentes. En algunas realizaciones, cada uno de los dos grupos solubilizantes comprende dos cadenas de PEG.

[0126] En algunas realizaciones, los grupos solubilizantes son sustituyentes de p-pirrol, que comprenden un grupo arileno o alquinilo-arileno fijado directamente a un átomo de carbono de pirrol de bacterioclorina, pero donde el grupo está libre de un enlazador oxo directamente entre una cadena de PEG y el grupo arilo. En algunas realizaciones, los grupos solubilizantes comprenden uno o más enlaces amídicos entre el grupo arilo y las cadenas de PEG. En algunas realizaciones, los enlaces amídicos incluyen además uno o más espaciadores de alquileno (por ejemplo, etileno, propileno, etc.).

[0127] En algunas realizaciones, la bacterioclorina es un compuesto de Fórmula (II):

donde:

M es un metal o es -H, -H;

R<5>, R<10>y R<15>se seleccionan independientemente de H, alcoxi y un grupo enlazador que tiene la fórmula: -L|-(X<1>-L<2>)p-G, donde p es 0 o 1; L<1>es alquilideno; X<1>es -C(=O)NH- o -NHC(=O)-; L<2>es -(CH<2>CH<2>O)q-alquileno-, donde q es un número entero entre 1 y 24, alquileno, o alquileno sustituido (por ejemplo, alquileno sustituido por uno o más grupos comprendiendo una cadena de polioxietileno y/o un grupo amida); y G es un grupo bioconjugable; y R<2>, R<3>, R<12>y R<13>se seleccionan independientemente de H, halo, ciano, perhaloalquilo (por ejemplo, perfluoroalquilo, tal como perfluorometilo), sulfonato, sulfonamida, éster, ácido carboxílico, formilo, acetilo, un grupo enlazador que tiene la fórmula -Lr(X<1>-L<2>)p-G y un grupo solubilizante, donde el grupo solubilizante se selecciona de -arilo-(Rs)w y -alquinilo-arilo-(Rs)w, donde w es un número entero entre 0 y 5 inclusive, donde cuando w es 0, el derivado de clorina es insoluble en agua (es decir, hidrófobo) y donde cuando w es 1, 2, 3, 4 o 5, el derivado de clorina es soluble en agua (es decir, hidrófilo) y R<s>es un grupo que tiene la fórmula:

-X2-(L3)z-R17,

donde: z es 0 o 1; X<2>es -CH<2>NHC(=O)-, -C(=O) NH-alquileno-NH-, o triazolilo; L<3>es -C(=O)-alquileno-C(=O)-NH-, y R<17>se selecciona de -(C<2>H<4>O)m-R<18>, -C(=O)C2H4-(oC2H4)mOR18, y -(C<2>H<4>O)n-C<2>H<4>-C(=O)NH-C(R<1>g)<3>, donde m es un número entero de 12 o más (por ejemplo, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, o 28); n es un número entero entre 1 y 5 (es decir, 1, 2, 3, 4 o 5); R<18>es alquilo inferior (por ejemplo, metilo); y R<1>g es -CH<2>O-C<2>H<4>-C(=O)NH-(C<2>H<4>O)mR<18>; sujeto a la condición de que al menos uno de R<2>, R<3>, R<12>, y R<13>es -arilo-(Rs)w o -alquinilo-arilo-(Rs)w. M puede ser cualquier ion metálico adecuado (por ejemplo, Pd, Pt, Mg, Al, Ga, In, Sn, Au, Ni, Cu, Co, Fe o Zn) o estar ausente (por ejemplo, en cuyo caso se reemplaza por dos hidrógenos (-H, -H), es decir, de modo que dos de los átomos de nitrógeno del anillo de bacterioclorina estén protonados. En algunas realizaciones, M es Zn o se reemplaza por -H, H. Por tanto, los compuestos de Fórmula (II) incluyen metalobacterioclorinas y bacterioclorinas de base libre. En algunas realizaciones, M es Zn.

[0128] En algunas realizaciones, R<5>, R<10>y R<15>se seleccionan independientemente de H, metoxi y un grupo enlazador que tiene la fórmula: -Lr(X<1>-L<2>)p-G. En algunas realizaciones, R<5>es metoxi. En algunas realizaciones, uno de R<10>y R<15>es un grupo enlazador. En algunas realizaciones, R<15>es un grupo enlazador. Alternativamente, en algunas realizaciones, R<12>es un grupo enlazador.

[0129] En algunas realizaciones, el grupo enlazador p del grupo enlazador -L<1>-(X<1>-L<2>)p-G es 0. En algunas realizaciones, G es un ácido carboxílico o un éster activo (por ejemplo, un éster de NHS). En algunas realizaciones, L<1>es alquinileno, arileno (por ejemplo, fenileno) o un resto bivalente comprendiendo tanto grupos alquinileno como arileno (es decir, un grupo aralquinileno). En algunas realizaciones, L<1>es -C = C-fenilo- o -C = C-alquileno- (por ejemplo, -C = C-(CH<2>)<4>-). En algunas realizaciones, el grupo enlazador es:

opcionalmente donde G es un ácido carboxílico (es decir, -C(=O)OH o un éster activo.

[0130] En algunas realizaciones, el grupo enlazador es:

opcionalmente donde G es un ácido carboxílico o un éster activo del mismo.

[0131] En algunas realizaciones, p es 1 y el grupo enlazador incluye una cadena de polioxietileno para mejorar la solubilidad y/o un espaciador para mejorar la reactividad de G en comparación con la reactividad de G en una bacterioclorina comparable donde G está fijada directamente a L|. En algunas realizaciones, L<1>es fenileno o -C = C-fenilo-, p es 1, X<1>es -C(=O)NH-, L<2>es alquileno, y G es un ácido carboxílico o un éster activo (por ejemplo, un éster de NHS). En algunas realizaciones, L<2>es etileno. Por tanto, el grupo enlazador puede incluir un espaciador de 13-alanina para mejorar la reactividad de G.

[0132] En algunas realizaciones, p es 1; L<1>es aralquinileno (por ejemplo, -C = C-(C<6>H<4>)-); X<1>es -C(=O)NH-; L<2>es alquileno sustituido por uno o más grupos comprendiendo una cadena de polioxietileno y/o un grupo amida; y G es un grupo bioconjugable. En algunas realizaciones, X<1>es -C(=O)NH- y L<2>es -(CH<2>CH<2>O)q-alquileno-. En algunas realizaciones, q es 12 y alquileno es etileno. En algunas realizaciones, L<2>es un grupo metileno sustituido por un grupo comprendiendo una cadena de PEG y/o un grupo amida. Por ejemplo, en algunas realizaciones, L<2>es -CH(R), donde R es -alquileno-NH-C(=O)-alquileno-pEG-OMe. En algunas realizaciones, R comprende dos grupos alquileno C<2>-C<6>y una cadena de PEG12-PEG25. En algunas realizaciones, R es -(CH<2>)<4>-NH-C(=O)-CH<2>CH<2>-(OC<2>H<4>)<24>oMe. En algunas realizaciones, el grupo enlazador es:

o un éster activo de este, opcionalmente donde el PEG es PEG12. En algunas realizaciones, el grupo enlazador es:

o un éster activo del mismo, opcionalmente donde PEG es PEG24.

[0133] En algunas realizaciones, la bacterioclorina es asimétrica. En algunas realizaciones, R<2>y R<12>no son iguales o R<3>y R<13>no son iguales. Por ejemplo, en algunas realizaciones, uno de R<2>y R<12>(por ejemplo, R<2>) es un grupo solubilizante seleccionado de -arilo-(Rs)w y -alquinilo-arilo-(Rs)wy el otro de R<2>y R<12>(por ejemplo, R<12>) es un grupo enlazador que tiene la fórmula -Li-(X<1>-L<2>)p-G o un grupo solubilizante que tiene una estructura diferente (por ejemplo, que el grupo solubilizante de R<2>). Alternativamente, en algunas realizaciones, uno de R<3>y R<13>es un grupo solubilizante seleccionado de -arilo-(Rs)w y -alquinilo-arilo-(Rs)wy uno de R<3>y R<13>es un grupo enlazador que tiene la fórmula -L<1>-(X<1>-L<2>V-G o un grupo solubilizante de una estructura diferente. En algunas realizaciones, uno de R<2>y R<12>es un grupo solubilizante y el otro es un grupo enlazador o uno de R<3>y R<13>es un grupo solubilizante y el otro es un grupo enlazador.

[0134] En algunas realizaciones, R<3>y R<13>son cada uno un éster. En algunas realizaciones, R<3>y R<13>son cada uno un éster metílico, es decir, -C(=O)OCH<3>.

[0135] Según la invención, R<2>es

-X2-(L3)z-R17,

donde: z es 0; X<2>es -C(=O)NH-alquileno-NH-; y R<17>es -C(=O)C2H4-(OC2H4)mOR18, donde m es un número entero de 12 o más, y R<18>es metilo. En algunas realizaciones, m es un número entero entre 12 y 24 (por ejemplo, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 o 24). En algunas realizaciones, cada Rs es:

[0136] En algunas realizaciones, cada Rs es un grupo que tiene la fórmula:

-X2-(L3)z-R17,

donde: z es 1; X<2>es -C(=O)NH-alquileno-NH-; L<3>es -C(=O)-propileno-C(=O)-NH; y R<17>es -(C<2>H<4>O)n-C<2>H<4>-C(=O)NH-C(R<19>)<3>, donde n es un número entero entre 1 y 5 (es decir, 1, 2, 3, 4 o 5); y cada R<19>es -CH<2>O-C<2>H<4>-C(=O) NH-(C<2>H<4>O)mR<18>, donde m es un número entero de 12 o más; y R<18>es metilo. En algunas realizaciones, m es un número entero entre 12 y 24. En algunas realizaciones, n es 4. En algunas realizaciones, m es 12.

[0137] En algunas realizaciones, el compuesto se selecciona de BC-1, BC-2, BC-3, BC-4, BC-5, BC-6 y BC-7, es decir, los compuestos que tienen las estructuras:

y

[0138] En algunas realizaciones, la materia objeto descrita en la actualidad proporciona una composición comprendiendo un conjugado covalente formado entre: (a) un compuesto de Fórmula (II) como se define anteriormente, sujeto a la condición de que al menos uno de R<2>, R<3>, R<5>, R<10>, R<12>, R<13>, y R<15>sea un grupo de enlace; y (b) uno o más del grupo comprendiendo una molécula pequeña, un antígeno, una micropartícula, una nanopartícula, un polímero, un péptido, una proteína, un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo, un ácido nucleico, una hormona y un factor de crecimiento. En algunas realizaciones, por ejemplo, el conjugado se puede formar haciendo reaccionar un compuesto de Fórmula (II) comprendiendo un grupo de enlace que comprende un ácido carboxílico o éster activo (es decir, como el grupo bioconjugable G) con un grupo amino de una molécula pequeña, péptido, proteína, anticuerpo o polímero.

III. Procedimientos de síntesis

[0139] Los procedimientos de síntesis de bacterioclorinas que se pueden adaptar para su uso en la preparación de las bacterioclorinas descritas en la actualidad se describen, por ejemplo, en las patentes de EE. UU. N.° 8.664.260 y 8.980.565. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula (II) descritos en la actualidad se pueden preparar preparando una bacterioclorina trans-beta-sustituida adecuada, tal como una bacterioclorina donde dos sustituyentes de beta-bacterioclorina son sustituyentes halo (por ejemplo, Br) y, a continuación, haciendo reaccionar además los sustituyentes beta para reemplazarlos por grupos solubilizantes en agua adecuados. Los procedimientos de síntesis de bacterioclorinas trans-beta-sustituidas se han descrito anteriormente. Véase, por ejemplo, Jiang y col. (2014) Organic & Biomolecular Chemistry 12:86-103.

[0140] Por ejemplo, en algunas realizaciones, las bacterioclorinas de Fórmula (II) se pueden preparar autocondensando un elemento básico de dihidrodipirrina o condensando un par de elementos básicos de dihidrodipirrina en un disolvente orgánico en presencia de un ácido. En algunas realizaciones, el elemento básico de dihidrodipirrina puede tener una estructura de la siguiente manera:

donde R es un grupo acetal o aldehído; y S<1>, S<2>, S<3>, S<7>y S6 se seleccionan cada uno independientemente de H, arilo, arilo sustituido, fenilo, cicloalquilo, alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquinilo, halo, alcoxi, alquiltio, perfluoroalquilo, perfluoroarilo, piridilo, ciano, tiocianto, nitro, amino, alquilamino, acilo, sulfoxilo, sulfonilo, imido, éster, amido y carbamoilo, y donde S<4>y S<5>son cada uno H o forman en conjunto un enlace covalente. En algunas realizaciones, al menos uno de S<1>y S<2>es halo.

[0141] Más particularmente, se han descrito anteriormente procedimientos de preparación de di-bromobacterioclorinas sustituidas y sus correspondientes elementos básicos de dihidropirrina. Véase Jiang y col. (2014) Organic & Biomolecular Chemistry 12:86-103. Por ejemplo, una bacterioclorina comprendiendo dos sustituyentes bromo en las posiciones 2 y 12 de la bacterioclorina se puede preparar a partir de un elemento básico preparado, por ejemplo, a partir de 3,4-dibromopirrol N-protegido como se muestra en el Esquema 1 (véase la Figura 1).

[0142] Como se muestra en el Esquema 1 (véase la Figura 1), 3,4-dibromopirrol N-protegido (por ejemplo, 3,4-dibromo-(N-triisopropilsilil)pirrol) se trata con una base, tal como alquil litio (por ejemplo, terc-butil-litio) y carbonato de dimetilo y, a continuación, se desprotege para proporcionar 3-bromo-4(-metoxicarbonil)pirrol (a). La formilación de Vilsmeier de a (por ejemplo, usando POCh-DMF) proporciona el aldehído b. El aldehído b se puede tratar con acetato de potasio y un ligero exceso de clorhidrato de metilamina en nitrometano para proporcionar el producto de condensación aldólica c. La reducción del doble enlace carbono-carbono en c usando un agente de reducción adecuado (por ejemplo, NaBH<4>) proporciona el compuesto d, que se trata con 1,1-dimetoxi-4-metil-3-penten-2-ona en presencia de una base no nucleófila (por ejemplo, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU)) para someterse a una reacción de adición de Michael. La ciclación reductora del producto de adición de Michael e desprotonando primero e (por ejemplo, mediante tratamiento con metóxido de sodio anhidro) para proporcionar un producto intermedio de anión nitronato y, a continuación, ciclando el producto intermedio con un agente de desoxigenación (por ejemplo, una solución acuosa tamponada de TiCh) proporciona el elemento básico de bacterioclorina de dihidrodipirrina (BB). Las condiciones de ciclación alternativas incluyen tratar e con un metal (por ejemplo, zinc y ácido acético en etanol) para producir un producto intermedio de N-óxido y, a continuación, ciclar el producto intermedio con un agente de desoxigenación (por ejemplo, (Ti(0), Zn, NaOH/metanol; Zn, NH<4>Cl/THF acuoso; FeSO<4>, NH<4>Cl/CH<3>CN acuoso; Mg o Fe, AcONHVmetanol; Ph<3>P/tolueno; S/tolueno; NaN<3>/tolueno, Zn, NaI, Me<3>SiCl/CH<3>CN; etc.).

[0143] BB se puede autocondensar en presencia de un ácido (por ejemplo, un ácido de Bronsted o de Lewis, tal como ácido trifluoroacético, TMSOTf o ácido tosílico (TsOH)) para formar un producto de condensación en presencia de un depurador de protones (por ejemplo, 2,6-di-terc-butilpiridina (DTBP)) para proporcionar una bacterioclorina. La condensación se puede realizar en un disolvente orgánico, tal como acetonitrilo (ACN), diclorometano (DCM), cloroformo, tetrahidrofurano (THF), clorobenceno, etanol y combinaciones de los mismos. Opcionalmente, por ejemplo, cuando el elemento básico de bacterioclorina no contiene un doble enlace carbonocarbono entre anillos heterocíclicos, se puede incluir un reactivo oxidante, tal como aire o DDQ, en la mezcla de reacción de condensación. En algunas realizaciones, la bacterioclorina puede tener la estructura:

[0144] Los sustituyentes halo de las di-halo-bacterioclorinas, tales como la bacterioclorina anterior, se pueden elaborar además para proporcionar grupos solubilizantes usando la química de acoplamiento conocida en la técnica, que incluye, aunque sin limitación, las reacciones de acoplamiento de Stille, de acoplamiento de Hiyama, de acoplamiento de Suzuki, de acoplamiento de Negishi, de acoplamiento de Sonogashira y de acoplamiento de Kumada. Por ejemplo, la di-halo-bacterioclorina se puede hacer reaccionar con una boronicacidina en presencia de un catalizador de Pd(0); un compuesto de organoestaño en presencia de un catalizador de Pd; un pseudohaluro o un organosilano en presencia de un catalizador de Pd; un compuesto de organozinc en presencia de un catalizador de Ni o Pd, o un reactivo de Grignard en presencia de un catalizador de Ni o Pd. En algunas realizaciones, la di-halobacterioclorina (por ejemplo, la di-bromo-bacterioclorina, tal como la bacterioclorina de base libre mostrada anteriormente) se puede hacer reaccionar con el otro componente que interviene en la reacción de acoplamiento de Suzuki de ácido aril borónico. Véase Jiang y col. (2015) New Journal of Chemistry 39(7):5694-5714; y Zhang y col. (2016) New Journal of Chemistry 40(9):7750-7767. En algunas realizaciones, el ácido aril borónico puede incluir grupos funcionales químicos adicionales o grupos funcionales químicos protegidos que pueden elaborarse además después de la reacción de acoplamiento de Suzuki. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la reacción de acoplamiento de Suzuki puede incluir uno o más grupos amino protegidos que, después de la desprotección, pueden hacerse reaccionar con un reactivo de PEG adecuado (por ejemplo, un éster de PEG activado).

[0145] En algunas realizaciones, los compuestos descritos en la actualidad pueden emplear grupos protectores de terc-butiloxicarbonilo (BOC) para los grupos amino presentes en Suzuki u otro tipo de agente de acoplamiento, opcionalmente en combinación con el uso de la protección de ésteres de terc-butilo de ácidos carboxílicos (por ejemplo, en grupos enlazadores). De manera sorprendente, se descubrió que la desprotección de los grupos BOC durante la preparación de los compuestos descritos en la actualidad usando ácido trifluoroacético (TFA), un procedimiento común de desprotección de BOC, conduce a una descomposición significativa, por ejemplo, en compuestos que incluyen enlaces alquino. Por tanto, en algunas realizaciones, la desprotección de BOC se realiza usando otras condiciones, por ejemplo, HCl 4 M en dioxano.

[0146] En algunas realizaciones, la materia objeto descrita en la actualidad proporciona un procedimiento de preparación de una bacterioclorina asimétrica soluble en agua, donde el procedimiento comprende realizar una reacción de acoplamiento mixto (o hetero). Por ejemplo, el procedimiento puede comprender proporcionar una di-halobacterioclorina (por ejemplo, una di-bromo-bacterioclorina simétrica) donde dos carbonos trans-p-pirrol están sustituidos por grupos halo (por ejemplo, grupos bromo) y realizar una reacción de acoplamiento mixto (por ejemplo, una reacción de acoplamiento mixto de Sonogashira, Heck o Suzuki) poniendo en contacto la di-halo-bacterioclorina con dos alquinos diferentes, dos alquenos diferentes o dos boronatos orgánicos diferentes (por ejemplo, ácidos o ésteres borónicos) en presencia de un catalizador adecuado (por ejemplo, un catalizador de paladio, tal como un catalizador de paladio (0)) y una base (por ejemplo, una trialquilamina, tal como trietilamina o acetato de sodio o potasio).

[0147] En algunas realizaciones, la materia objeto descrita en la actualidad proporciona un procedimiento de preparación de un compuesto de bacterioclorina asimétrica que tiene la fórmula:

donde:

M es un metal o es -H, -H;

R<5>, R<10>' y R<15>se seleccionan independientemente de H y alcoxi; y

R<2>como en la reivindicación 1 y definido anteriormente, y R<3>, R<12>y R<13>se seleccionan independientemente de H, ciano, halo, perhaloalquilo, sulfonato, sulfonamida, éster, ácido carboxílico, formilo, acetilo, un grupo enlazador y un grupo solubilizante; donde el grupo enlazador tiene una fórmula:

-L1-(X1-L2)p-G,

donde p es 0 o 1; L<1>es alquilideno; X<1>es -C(=O)NH- o -NHC(=O)-; L<2>es -(CH<2>CH<2>O)q-alquileno-, donde q es un número entero entre 1 y 24, alquileno, o alquileno sustituido, opcionalmente donde alquileno sustituido es alquileno sustituido por uno o más grupos comprendiendo una cadena de polioxietileno y/o un grupo amida; y G es un grupo bioconjugable;

y donde el grupo solubilizante se selecciona de -arilo-(Rs)w y -alquinilo-arilo-(Rs)w, donde w es un número entero entre 0 y 5 inclusive, y Rs es un grupo que tiene la fórmula:

-X<2>-(L<3>)<z>-R<17>,

donde: z es O o 1; X<2>es -CH<2>NHC(=O)-, -C(=O)NH-alquileno-NH-, ortriazolilo; L<3>es -C(=O)-alquileno-C(=O)-NH-, y R<17>se selecciona de -(C<2>H<4>O)m-R<18>, -C(=O)C2H4-(oC2H4)mOR18, y -(C<2>H<4>O)n-C<2>H<4>-C(=O)NH-C(R<1>g)<3>, donde m es un número entero de 12 o más; n es un número entero entre 1 y 5; R^es alquilo inferior, opcionalmente metilo; y R<19>es - CH<2>O-C<2>H<4>-C(=O)NH-(C<2>H<4>O)mR18;

sujeto a la condición de que R<2>y R<12>no sean iguales o R<3>y R<13>no sean iguales, y donde al menos uno de R<2>, R<3>, R<12>y R<13>es -arilo-(Rs)w o -alquinilo-arilo-(Rs)w; donde dicho procedimiento comprende: (a) proporcionar un compuesto que tiene la fórmula:

donde:

M es un metal o es -H, -H;

R<5>', R<10>' y R<15>' se seleccionan independientemente de H y alcoxi; y

R<2>', R<3>', R<12>' y R<13>' se seleccionan independientemente de H, ciano, halo, perhaloalquilo, sulfonato, sulfonamida, éster, ácido carboxílico, formilo y acetilo, donde R<2>y R<12>son cada uno halo, opcionalmente bromo, o donde R<3>y R<13>' son cada uno halo, opcionalmente bromo; y (b) poner en contacto el compuesto con un catalizador de paladio, una base y uno de: (i) dos alquinos diferentes, opcionalmente donde dichos dos alquinos diferentes son ambos compuestos que tienen la fórmula:

donde y es un número entero entre 1 y 5 (por ejemplo, 1, 2, 3, 4 o 5), opcionalmente 1 o 2; y cada R<20>es una alquilamina N-protegida, un ácido carboxílico protegido, amina protegida por -C(=O)-NH-alquileno, o amina protegida por alquileno sustituido por -C(=O)-NH-, opcionalmente donde el alquileno sustituido de amina protegida por alquileno sustituido por -C(=O)-NH- comprende alquileno sustituido por ácido carboxílico protegido; (ii) dos alquenos diferentes, opcionalmente donde dichos dos alquenos diferentes son ambos compuestos que tienen la fórmula:

donde y es un número entero entre 1 y 5 (por ejemplo, 1, 2, 3, 4 o 5), opcionalmente 1 o 2; y cada R<20>es una alquilamina N-protegida, un ácido carboxílico protegido, amina protegida por -C(=O)-NH-alquileno, amina protegida por alquileno sustituido por -C(=O)-NH-, opcionalmente donde el alquileno sustituido de amina protegida por alquileno sustituido por -C(=O)-NH- comprende alquileno sustituido por ácido carboxílico protegido; y (iii) dos boronatos orgánicos diferentes; opcionalmente donde dichos dos boronatos orgánicos diferentes son dos ácidos aril borónicos o ésteres aril borónicos diferentes de la fórmula:

donde y es un número entero entre 1 y 5 (por ejemplo, 1, 2, 3, 4 o 5), opcionalmente 1 o 2; cada R<20>es una alquilamina N-protegida, un ácido carboxílico protegido, amina protegida por alquileno sustituido por -C(=O)-NH-, opcionalmente donde el alquileno sustituido de amina protegida por alquileno sustituido por -C(=O)-NH-comprende alquileno sustituido por ácido carboxílico protegido; y cada R21 es H o alquilo o donde dos R21 forman en conjunto un alquileno. En el producto resultante (por ejemplo, el producto intermedio sintético del compuesto de Fórmula (II)), los sustituyentes halo en R<2>y R<12>o en R<3 7>R<13>' se reemplazan cada uno por un sustituyente diferente (por ejemplo, diferentes grupos -alquinilo-arilo-(R<20>)y, -alquenilo-arilo-(R<20>)y o arilo-(R<20>)y).

[0148] En algunas realizaciones, la relación de los dos alquinos, alquenos o boronatos orgánicos se ajusta para maximizar el rendimiento del producto deseado. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la relación se ajusta según las reactividades relativas de los dos alquinos, alquenos o boronatos diferentes. La reactividad relativa de los dos componentes que intervienen en la reacción de acoplamiento se puede determinar supervisando las reacciones por HPLC de fase inversa. En algunas realizaciones, el menos reactivo de los dos componentes que intervienen en la reacción de acoplamiento se proporciona en mayor exceso molar en comparación con el segundo componente que interviene en la reacción de acoplamiento para maximizar los rendimientos de la bacterioclorina asimétrica.

[0149] En algunas realizaciones, el rendimiento del producto deseado de la reacción de acoplamiento mixto es mayor de lo esperado. Por tanto, en algunas realizaciones, el rendimiento del producto deseado es superior al 50 % o superior al 55 %. En algunas realizaciones, el rendimiento es superior al 60 %. En algunas realizaciones, el rendimiento es de aproximadamente el 62 %.

IV. Composiciones farmacéuticas

[0150] Los compuestos de la materia objeto descrita en la actualidad pueden proporcionarse como sales farmacéuticamente aceptables. Tales sales incluyen, aunque sin limitación, sales de amina, tales como, aunque sin limitación, N,N'-dibenciletilendiamina, cloroprocaína, colina, amoníaco, dietanolamina y otras hidroxialquilaminas, etilendiamina, N-metilglucamina, procaína, N-bencilfenetilamina, 1-para-clorobencil-2-pirrolidin-1'-ilmetil-bencimidazol, dietilamina y otras alquilaminas, piperazina y tris(hidroximetil)aminometano; sales de metales alcalinos, tales como, aunque sin limitación, litio, potasio y sodio; sales de metales alcalinotérreos, tales como, aunque sin limitación, bario, calcio y magnesio; sales de metales de transición, tales como, aunque sin limitación, zinc; y otras sales metálicas, tales como, aunque sin limitación, hidrogenofosfato de sodio y fosfato de disodio; y también incluyen, aunque sin limitación, sales de ácidos minerales, tales como, aunque sin limitación, clorhidratos y sulfatos; y sales de ácidos orgánicos, tales como, aunque sin limitación, acetatos, lactatos, malatos, tartratos, citratos, ascorbatos, succinatos, butiratos, valeratos y fumaratos. Los ésteres farmacéuticamente aceptables incluyen, aunque sin limitación, ésteres de alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, aralquilo, heteroaralquilo, cicloalquilo y heterociclilo de grupos ácidos, que incluyen, aunque sin limitación, ácidos carboxílicos, ácidos fosfóricos, ácidos fosfínicos, ácidos sulfónicos, ácidos sulfínicos y ácidos borónicos.

[0151] Los compuestos de la materia objeto descrita en la actualidad también pueden incluir profármacos de los compuestos descritos en esta invención. Como se señaló anteriormente, un “profármaco” es un compuesto que, tras la administración in vivo, se metaboliza por una o más etapas o procesos o se convierte de otra manera en la forma biológica, farmacéutica o terapéuticamente activa del compuesto. Para producir un profármaco, el compuesto farmacéuticamente activo se modifica de manera que el compuesto activo se regenerará por procesos metabólicos.

El profármaco puede diseñarse para alterar la estabilidad metabólica o las características de transporte de un fármaco, para enmascarar los efectos secundarios o la toxicidad, para mejorar el sabor de un fármaco o para alterar otras características o propiedades de un fármaco. En virtud del conocimiento de los procesos farmacodinámicos y el metabolismo de los fármacos in vivo, los expertos en la materia, una vez que se conoce un compuesto farmacéuticamente activo, pueden diseñar profármacos del compuesto (véase, por ejemplo, Nogrady (1985) Medicinal Chemistry A Biochemical Approach, Oxford University Press, Nueva York, Nueva York, Estados Unidos de América, páginas 388-392).

[0152] Utilidad. Los procedimientos y productos intermedios descritos en esta invención son útiles para la síntesis de compuestos de Fórmula (II) como se describe en esta invención. Tales compuestos son útiles per se o en forma modificada adicional (por ejemplo, como una sal, compuesto metalado, conjugado o profármaco) para fines de diagnóstico y terapéuticos de la misma manera que otros compuestos descritos para terapia fotodinámica, tal como se describe en la publicación de solicitud de patente de EE. UU. n.° 2004/0044197 de Pandey y col. y como se expone con más detalle a continuación.

[0153] Estabilidad. Una ventaja de algunas realizaciones de los compuestos de bacterioclorina de la materia objeto descrita en la actualidad es su estabilidad y características de absorción. Por tanto, la materia objeto descrita en la actualidad proporciona una composición “pura” que consiste en un compuesto activo de la materia objeto descrita en la actualidad (por ejemplo, compuestos de Fórmula (II), o las sales, profármacos o conjugados farmacéuticamente aceptables de los mismos (por ejemplo, con un agente de direccionamiento tal como una proteína, péptido o anticuerpo)), donde la composición tiene o se caracteriza por un coeficiente de absorción molar máximo en solución de al menos 10.000 hasta 300.000 M-1 cm-1 o más, a una longitud de onda entre aproximadamente 600 y aproximadamente 800 nanómetros (entendiéndose que (a) el compuesto activo debe colocarse en solución para determinar su coeficiente de absorción molar máximo a la longitud de onda indicada; y (b) el compuesto puede presentar picos adicionales fuera de este intervalo, o múltiples picos dentro de este intervalo).

[0154] De manera adicional, la materia objeto descrita en la actualidad proporciona composiciones comprendiendo o que consisten esencialmente en un compuesto de Fórmula (II), o una sal, profármaco o conjugado farmacéuticamente aceptable del mismo (por ejemplo, con un agente de direccionamiento tal como una proteína, péptido o anticuerpo)) en un disolvente. La cantidad de disolvente no es crítica y puede comprender de 0,01 o 1 a 99 o 99,99 por ciento en peso de la composición. La composición tiene o se caracteriza por un coeficiente de absorción molar máximo en solución de al menos 10.000 hasta 300.000 M-1 cm-1 o más, a una longitud de onda entre aproximadamente 600 y aproximadamente 800 nanómetros. Se apreciará que la agitación se puede usar según sea necesario para romper las partículas aglomeradas de nuevo en solución antes de determinar la absorción molar, pero que cierto nivel de aglomeración puede desearse para el uso práctico de la composición. Los disolventes adecuados dependen del compuesto particular y del uso previsto para ese compuesto, pero incluyen tanto disolventes orgánicos como disolventes acuosos y combinaciones de los mismos.

[0155] Las composiciones, ya sea el compuesto o compuestos de bacterioclorina en forma “pura” o el compuesto o compuestos de bacterioclorina mezclados con un disolvente, tienen o presentan una pérdida de no más de aproximadamente 10, 15, o 20 por ciento en peso del compuesto de bacterioclorina de la materia objeto descrita en la actualidad (debido a la degradación del mismo) cuando se almacenan en un recipiente sellado (por ejemplo, una ampolla o vial de matraz), a temperatura ambiente en ausencia de luz ambiental durante al menos 3 o 4 meses. La degradación puede determinarse por espectroscopía, cromatografía de capa fina, espectroscopía de RMN y/o espectrometría de masas, según las técnicas conocidas.

[0156] Solubilidad. Una ventaja de algunas realizaciones de los compuestos de la materia objeto descrita en la actualidad es su solubilidad acuosa. Por tanto, la materia objeto descrita en la actualidad proporciona composiciones, que incluyen, aunque sin limitación, formulaciones farmacéuticas, comprendiendo, que consisten en o consisten esencialmente en: (a) un disolvente acuoso (por ejemplo, agua destilada, solución salina, solución tampón); y (b) de aproximadamente 1, 2, 5 o 10 pM hasta 200, 300 o 500 mM de un compuesto activo como se describe en esta invención solubilizado en el disolvente acuoso.

[0157] Formulación de composiciones farmacéuticas. Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en esta invención contienen cantidades terapéuticamente eficaces de uno o más de los compuestos proporcionados en esta invención que son útiles en la prevención, tratamiento o mejora de uno o más de los síntomas de enfermedades o trastornos asociados con el tejido hiperproliferativo o la neovascularización, o donde está implicado el tejido hiperproliferativo o la neovascularización, en un portador farmacéuticamente aceptable. Las enfermedades o trastornos asociados con el tejido hiperproliferativo o la neovascularización incluyen, aunque sin limitación, cáncer, psoriasis, aterosclerosis, enfermedad cardíaca y degeneración macular relacionada con la edad. Los portadores farmacéuticos adecuados para la administración de los compuestos proporcionados en esta invención incluyen cualquiera de tales portadores conocidos por los expertos en la materia como adecuados para el modo particular de administración.

[0158] Las composiciones farmacéuticas presentan preferentemente las características de absorción y las características de almacenamiento o estabilidad descritas anteriormente.

[0159] De manera adicional, los compuestos se pueden formular como el único ingrediente farmacéuticamente activo en la composición o se pueden combinar con otros ingredientes activos.

[0160] Las composiciones contienen uno o más compuestos (por ejemplo, compuestos de Fórmula (II)) proporcionados en esta invención. En algunas realizaciones, los compuestos se formulan en preparaciones farmacéuticas adecuadas tales como soluciones, suspensiones, comprimidos, comprimidos dispersables, píldoras, cápsulas, polvos, formulaciones de liberación sostenida o elixires, para administración oral o en soluciones o suspensiones estériles para administración parenteral, así como preparación de parches transdérmicos e inhaladores de polvo seco. En algunas realizaciones, los compuestos descritos anteriormente se formulan en composiciones farmacéuticas usando técnicas y procedimientos bien conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, Ansel (1985) Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, Cuarta Edición, Lea y Febiger, Filadelfia, Pensilvania, Estados Unidos de América, página 126).

[0161] En las composiciones, las concentraciones eficaces de uno o más compuestos o derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos se mezclan con un portador farmacéutico adecuado. Los compuestos se pueden derivar como las sales, ésteres, éteres o ésteres enólicos, acetales, cetales, ortoésteres, hemiacetales, hemicetales, ácidos, bases, solvatos, hidratos o profármacos correspondientes antes de la formulación, como se describió anteriormente. Las concentraciones de los compuestos en las composiciones son eficaces para el suministro de una cantidad, tras la administración, que trata, previene o mejora uno o más de los síntomas de enfermedades o trastornos asociados con el tejido hiperproliferativo o la neovascularización o donde está implicado el tejido hiperproliferativo o la neovascularización.

[0162] En algunas realizaciones, las composiciones se formulan para administración de dosis única. Para formular una composición, la fracción en peso del compuesto se disuelve, suspende, dispersa o mezcla de otro modo en un portador seleccionado a una concentración eficaz de tal manera que la afección tratada se alivia, previene o se mejoran uno o más síntomas.

[0163] El compuesto activo (es decir, el compuesto de Fórmula (II), o una sal, profármaco o conjugado farmacéuticamente aceptable del mismo) se incluye en el portador farmacéuticamente aceptable en una cantidad suficiente para ejercer un efecto terapéuticamente útil en ausencia de efectos secundarios indeseables en el paciente tratado. La concentración terapéuticamente eficaz se puede determinar empíricamente analizando los compuestos en sistemas in vitro e in vivo descritos en esta invención y en la patente de EE: UU. n.° 5,952,366 de Pandey y col. y, a continuación, se extrapola a partir de estos para determinar las dosis para humanos.

[0164] La concentración de compuesto activo en la composición farmacéutica puede depender de las tasas de absorción, inactivación y excreción del compuesto activo, de las características fisicoquímicas del compuesto, del régimen de dosificación y de la cantidad administrada, así como de otros factores conocidos por los expertos en la materia. Por ejemplo, la cantidad que se suministra es suficiente para mejorar uno o más de los síntomas de enfermedades o trastornos asociados con tejido hiperproliferativo o neovascularización o donde está implicado tejido hiperproliferativo o neovascularización, como se describe en esta invención.

[0165] En algunas realizaciones, una dosificación terapéuticamente eficaz debería producir una concentración sérica de principio activo de aproximadamente 0,1 ng/ml a aproximadamente 50-100 pg/ml. En una realización, una dosis terapéuticamente eficaz es de 0,001, 0,01 o 0,1 a 10, 100 o 1000 mg de compuesto activo por kilogramo de peso corporal por día. Las formas farmacéuticas unitarias de dosificación se preparan para proporcionar de aproximadamente 0,01 mg, 0,1 mg o 1 mg a aproximadamente 500 mg, 1000 mg o 2000 mg, y en algunas realizaciones de aproximadamente 10 mg a aproximadamente 500 mg del principio activo o una combinación de principios esenciales por forma farmacéutica unitaria.

[0166] El principio activo se puede administrar de una vez, o se puede dividir en una serie de dosis más pequeñas que se administrarán a intervalos de tiempo. Se entiende que la dosificación precisa y la duración del tratamiento es una función de la enfermedad que se está tratando y se puede determinar empíricamente usando protocolos de ensayo conocidos o por extrapolación de datos de ensayo in vivo o in vitro. Cabe señalar que las concentraciones y los valores de dosificación también pueden variar con la gravedad de la afección a aliviar. Debe entenderse además que para cualquier sujeto particular, los regímenes de dosificación específicos deben ajustarse a lo largo del tiempo según la necesidad individual y el juicio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones, y que los intervalos de concentración establecidos en esta invención son sólo ejemplares y no pretenden limitar el alcance o la práctica de las composiciones reivindicadas.

[0167] En los casos donde los compuestos presentan una solubilidad insuficiente, se pueden usar procedimientos de solubilización de compuestos. Tales procedimientos son conocidos por los expertos en la materia e incluyen, aunque sin limitación, el uso de codisolventes, tales como dimetilsulfóxido (DMSO), el uso de tensioactivos, tales como ésteres de polioxietilensorbitol (por ejemplo, vendidos con el nombre comercial TWEEN®) o la disolución en bicarbonato de sodio acuoso. Los derivados de los compuestos, tales como profármacos de los compuestos, también se pueden usar en la formulación de composiciones farmacéuticas eficaces.

[0168] Tras la mezcla o adición del o de los compuestos, la mezcla resultante puede ser una solución, suspensión, emulsión o similares. La forma de la mezcla resultante depende de una serie de factores, que incluyen el modo de administración previsto y la solubilidad del compuesto en el portador o vehículo seleccionado. La concentración eficaz es suficiente para mejorar los síntomas de la enfermedad, trastorno o afección tratada y se puede determinar empíricamente.

[0169] Las composiciones farmacéuticas se proporcionan para administración a seres humanos y animales en formas de dosificación unitaria, tales como comprimidos, cápsulas, píldoras, polvos, gránulos, soluciones o suspensiones parenterales estériles, y soluciones o suspensiones orales, y emulsiones de aceite-agua que contienen cantidades adecuadas de los compuestos o derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos. Los compuestos farmacéutica y terapéuticamente activos y derivados de los mismos, en algunas realizaciones, se formulan y administran en formas de dosificación unitaria o formas de dosificación múltiple. Las formas de dosificación unitaria como se usa en esta invención se refieren a unidades físicamente discretas adecuadas para sujetos humanos y animales y envasadas individualmente como se conoce en la técnica. Cada dosis unitaria contiene una cantidad predeterminada del compuesto terapéuticamente activo suficiente para producir el efecto terapéutico deseado, en asociación con el portador, vehículo o diluyente farmacéutico requerido. Los ejemplos de formas de dosis unitaria incluyen ampollas y jeringas y comprimidos o cápsulas envasados individualmente. Las formas de dosis unitarias se pueden administrar en fracciones o múltiplos de las mismas. Una forma de dosis múltiple es una pluralidad de formas de dosificación unitaria idénticas envasadas en un único recipiente para administrarse en forma de dosis unitaria segregada. Los ejemplos de formas de dosis múltiples incluyen viales, frascos de comprimidos o cápsulas o frascos de pintas o galones. Por ende, la forma de dosis múltiple es un múltiplo de dosis unitarias que no se segregan en el envase.

[0170] Las composiciones líquidas farmacéuticamente administrables se pueden preparar, por ejemplo, disolviendo, dispersando o mezclando de otro modo un compuesto activo como se definió anteriormente (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (II) o una sal, profármaco o conjugado farmacéuticamente aceptable del mismo) y adyuvantes farmacéuticos opcionales en un portador, tal como, por ejemplo, agua, solución salina, dextrosa acuosa, glicerol, glicoles, etanol y similares, para formar de este modo una solución o suspensión. Si se desea, la composición farmacéutica a administrar también puede contener cantidades menores de sustancias auxiliares no tóxicas tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes, agentes solubilizantes, agentes tampón del pH y similares, por ejemplo, acetato, citrato de sodio, derivados de ciclodextrina, monolaurato de sorbitán, acetato de sodio de trietanolamina, oleato de trietanolamina y otros agentes de este tipo.

[0171] Los procedimientos actuales de preparación de dichas formas de dosificación son conocidos, o serán evidentes, para los expertos en esta técnica; por ejemplo, véase Remington's Pharmaceutical Sciences, 15a Edición, 1975, Mack Publishing Company, Easton, Pensilvania, Estados Unidos de América.

[0172] Se pueden preparar formas de dosificación o composiciones que contienen un principio activo en el intervalo de 0,005 % a 100 % con el resto compuesto por un portador no tóxico. Los procedimientos de preparación de estas composiciones son conocidos por los expertos en la materia. Las composiciones contempladas pueden contener 0,001 %-100 % de principio activo, en una realización de 0,1-95 %, en otra realización de 75-85 %.

[0173] Composiciones para administración por vía oral. Las formas de dosificación farmacéuticas orales son sólidas, en gel o líquidas. Las formas de dosificación sólidas son comprimidos, cápsulas, gránulos y polvos a granel. Los tipos de comprimidos orales incluyen grageas y comprimidos masticables y comprimidos que pueden tener un recubrimiento entérico, un recubrimiento de azúcar o un recubrimiento de película. Las cápsulas pueden ser cápsulas de gelatina duras o blandas, mientras que los gránulos y polvos pueden proporcionarse en forma no efervescente o efervescente con la combinación de otros ingredientes conocidos por los expertos en la materia.

[0174] Composiciones sólidas para administración por vía oral. En algunas realizaciones, las formulaciones son formas de dosificación sólidas, en algunas realizaciones, cápsulas o comprimidos. Los comprimidos, píldoras, cápsulas, trociscos y similares pueden contener uno o más de los siguientes ingredientes o compuestos de naturaleza similar: un aglutinante; un lubricante; un diluyente; un deslizante; un agente disgregante; un agente colorante; un agente edulcorante; un agente aromatizante; un agente humectante; un recubrimiento emético; y un recubrimiento de película. Los ejemplos de aglutinantes incluyen celulosa microcristalina, goma tragacanto, solución de glucosa, mucílago de acacia, solución de gelatina, melaza, poliinilpirrolidina, povidona, crospovidonas, sacarosa y pasta de almidón. Los lubricantes incluyen talco, almidón, estearato de magnesio o calcio, licopodio y ácido esteárico. Los diluyentes incluyen, por ejemplo, lactosa, sacarosa, almidón, caolín, sal, manitol y fosfato dicálcico. Los deslizantes incluyen, aunque sin limitación, dióxido de silicio coloidal. Los agentes disgregantes incluyen croscarmelosa sódica, glicolato sódico de almidón, ácido algínico, almidón de maíz, almidón de patata, bentonita, metilcelulosa, agar y carboximetilcelulosa. Los agentes colorantes incluyen, por ejemplo, cualquiera de los colorantes FD y C solubles en agua certificados y aprobados, mezclas de los mismos; y colorantes FD y C insolubles en agua suspendidos en hidrato de alúmina. Los agentes edulcorantes incluyen sacarosa, lactosa, manitol y agentes edulcorantes artificiales tales como sacarina, y cualquier cantidad de sabores secados por pulverización. Los agentes saborizantes incluyen sabores naturales extraídos de plantas tales como frutas y combinaciones sintéticas de compuestos que producen una sensación agradable, tal como, aunque sin limitación, menta y salicilato de metilo. Los agentes humectantes incluyen monoestearato de propilenglicol, monooleato de sorbitán, monolaurato de dietilenglicol y polioxietileno éter laural. Los recubrimientos eméticos incluyen ácidos grasos, grasas, ceras, goma laca, goma laca amoniacal y ftalatos de acetato de celulosa. Los recubrimientos de película incluyen hidroxietilcelulosa, goma gellan, carboximetilcelulosa de sodio, polietilenglicol 4000 (PEG4000) y ftalato de acetato de celulosa.

[0175] El compuesto, o derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, podría proporcionarse en una composición que lo proteja del entorno ácido del estómago. Por ejemplo, la composición se puede formular en un recubrimiento entérico que mantiene su integridad en el estómago y libera el compuesto activo en el intestino. La composición también se puede formular en combinación con un antiácido u otro ingrediente de este tipo. Cuando la forma de dosificación unitaria es una cápsula, puede contener, además del material del tipo anterior, un portador líquido tal como un aceite graso. De manera adicional, las formas de dosificación unitarias pueden contener otros diversos materiales que modifican la forma física de la unidad de dosificación, por ejemplo, recubrimientos de azúcar y otros agentes entéricos. Los compuestos también se pueden administrar como un componente de un elixir, suspensión, jarabe, oblea, preparados en polvo, goma de mascar o similares. Un jarabe puede contener, además de los compuestos activos, sacarosa como agente edulcorante y ciertos conservantes, colorantes, tintes y sabores.

[0176] Los materiales activos también pueden mezclarse con otros materiales activos que no alteren la acción deseada, o con materiales que complementen la acción deseada, tales como antiácidos, bloqueadores de H<2>y diuréticos. El principio activo es un compuesto o derivado farmacéuticamente aceptable del mismo como se describe en esta invención. Se pueden incluir concentraciones más altas, hasta aproximadamente del 98 % en peso del principio activo.

[0177] En algunas realizaciones, las formulaciones de comprimidos y cápsulas se pueden recubrir como es conocido por los expertos en la materia con el fin de modificar o mantener la disolución del principio activo. Por tanto, por ejemplo, se pueden recubrir con un recubrimiento convencional digerible entéricamente, tal como fenilsalicilato, ceras y ftalato de acetato de celulosa.

[0178] Composiciones líquidas para administración por vía oral. Las formas de dosificación orales líquidas incluyen soluciones acuosas, emulsiones, suspensiones, soluciones y/o suspensiones reconstituidas a partir de gránulos no efervescentes y preparaciones efervescentes reconstituidas a partir de gránulos efervescentes. Las soluciones acuosas incluyen, por ejemplo, elixires y jarabes. Las emulsiones son de aceite en agua o de agua en aceite.

[0179] Los elixires son preparaciones hidroalcohólicas claras y azucaradas. Los portadores farmacéuticamente aceptables usados en los elixires incluyen disolventes. Los jarabes son soluciones acuosas concentradas de un azúcar, por ejemplo, sacarosa, y pueden contener un conservante. Una emulsión es un sistema de dos fases donde un líquido se dispersa en forma de pequeños glóbulos en otro líquido. Los portadores farmacéuticamente aceptables usados en emulsiones son líquidos no acuosos, agentes emulsionantes y conservantes. Las suspensiones usan agentes de suspensión y conservantes farmacéuticamente aceptables. Las sustancias farmacéuticamente aceptables usadas en gránulos no efervescentes, que se reconstituirán en una forma de dosificación oral líquida, incluyen diluyentes, edulcorantes y agentes humectantes. Las sustancias farmacéuticamente aceptables usadas en gránulos efervescentes, que se reconstituirán en una forma de dosificación oral líquida, incluyen ácidos orgánicos y una fuente de dióxido de carbono. Los agentes colorantes y aromatizantes se usan en todas las formas de dosificación anteriores. Los disolventes incluyen glicerina, sorbitol, alcohol etílico y jarabe. Los ejemplos de conservantes incluyen glicerina, metilo y propilparabeno, ácido benzoico, benzoato de sodio y alcohol. Los ejemplos de líquidos no acuosos utilizados en emulsiones incluyen aceite mineral y aceite de semilla de algodón. Los ejemplos de agentes emulsionantes incluyen gelatina, goma arábiga, tragacanto, bentonita y tensioactivos tales como monooleato de polioxietilensorbitán. Los agentes de suspensión incluyen carboximetilcelulosa de sodio, pectina, tragacanto, goma xantana, Veegum y goma arábiga. Los agentes edulcorantes incluyen sacarosa, jarabes, glicerina y agentes edulcorantes artificiales tales como sacarina. Los agentes humectantes incluyen monoestearato de propilenglicol, monooleato de sorbitán, monolaurato de dietilenglicol y polioxietilen lauril éter. Los ácidos orgánicos incluyen ácido cítrico y tartárico. Las fuentes de dióxido de carbono incluyen bicarbonato de sodio y carbonato de sodio. Los agentes colorantes incluyen cualquiera de los colorantes FD y C solubles en agua certificados y aprobados, y mezclas de los mismos. Los agentes aromatizantes incluyen sabores naturales extraídos de plantas, tales como frutas, y combinaciones sintéticas de compuestos que producen una sensación de sabor agradable. Para una forma de dosificación sólida, la solución o suspensión, por ejemplo, en carbonato de propileno, aceites vegetales o triglicéridos, en una realización está encapsulada en una cápsula de gelatina. Tales soluciones, y la preparación y encapsulación de las mismas, se describen en las patentes de EE. UU. n.° 4,328,245; 4,409,239; y 4,410,545. Para una forma de dosificación líquida, la solución, por ejemplo, en un polietilenglicol, se puede diluir con una cantidad suficiente de un portador líquido farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, agua, para medirse fácilmente para su administración.

[0180] Alternativamente, las formulaciones orales líquidas o semisólidas se pueden preparar disolviendo o dispersando el compuesto activo o sal en aceites vegetales, glicoles, triglicéridos, ésteres de propilenglicol (por ejemplo, carbonato de propileno) y otros portadores de este tipo, y encapsulando estas soluciones o suspensiones en cubiertas de cápsulas de gelatina duras o blandas. Otras formulaciones útiles incluyen las establecidas en la patente de EE. UU. n.° RE28,819 y la patente de EE. UU. n.° 4,358603. Brevemente, tales formulaciones incluyen, aunque sin limitación, las que contienen un compuesto proporcionado en esta invención, un mono- o polialquilenglicol dialquilado, que incluye, aunque sin limitación, 1,2-dimetoximetano, diglima, triglima, tetraglima, polietilenglicol-350-dimetil éter, polietilenglicol-550-dimetil éter, polietilenglicol-750-dimetil éter, donde 350, 550 y 750 se refieren al peso molecular promedio aproximado del polietilenglicol, y uno o más antioxidantes, tales como hidroxitolueno butilado (BHT), hidroxianisol butilado (BHA), galato de propilo, vitamina E, hidroquinona, hidroxicumarinas, etanolamina, lecitina, cefalina, ácido ascórbico, ácido málico, sorbitol, ácido fosfórico, ácido tiodipropiónico y sus ésteres, y ditiocarbamatos.

[0181] Otras formulaciones incluyen, aunque sin limitación, soluciones alcohólicas acuosas que incluyen un acetal farmacéuticamente aceptable. Los alcoholes usados en estas formulaciones son cualquier disolvente miscible en agua farmacéuticamente aceptable que tenga uno o más grupos hidroxilo, que incluyen, aunque sin limitación, propilenglicol y etanol. Los acetales incluyen, aunque sin limitación, di(alquilo inferior)acetales de aldehidos de alquilo inferior tales como acetaldehído dietil acetal.

[0182] Inyectables, soluciones y emulsiones. También se contempla en esta invención la administración parenteral, en algunas realizaciones caracterizada por inyección, ya sea por vía subcutánea, intramuscular o intravenosa. Los inyectables pueden prepararse en formas convencionales, ya sea en soluciones o suspensiones líquidas, formas sólidas adecuadas para la solución o suspensión en líquido antes de la inyección, o como emulsiones. Los inyectables, soluciones y emulsiones también contienen uno o más excipientes. Los excipientes adecuados son, por ejemplo, agua, solución salina, dextrosa, glicerol o etanol. De manera adicional, si se desea, las composiciones farmacéuticas que se administrarán también pueden contener cantidades menores de sustancias auxiliares no tóxicas tales como agentes humectantes o emulsionantes, agentes tampón de pH, estabilizadores, potenciadores de la solubilidad y otros agentes de este tipo, tales como, por ejemplo, acetato de sodio, monolaurato de sorbitán, oleato de trietanolamina y ciclodextrinas.

[0183] También se contempla en esta invención la implantación de un sistema de liberación lenta o liberación sostenida, de modo que se mantenga un nivel constante de dosificación (véase, por ejemplo, la patente de EE. UU. n.° 3,710,795). En resumen, un compuesto proporcionado en esta invención se dispersa en una matriz interna sólida, por ejemplo, polimetilmetacrilato, polibutilmetacrilato, cloruro de polivinilo plastificado o no plastificado, nailon plastificado, tereftalato de polietileno plastificado, caucho natural, poliisopreno, poliisobutileno, polibutadieno, polietileno, copolímeros de etilenvinilacetato, cauchos de silicona, polidimetilsiloxanos, copolímeros de carbonato de silicona, polímeros hidrófilos tales como hidrogeles de ésteres de ácido acrílico y metacrílico, colágeno, alcohol polivinílico reticulado y acetato de polivinilo parcialmente hidrolizado reticulado, que está rodeado por una membrana polimérica externa, por ejemplo, polietileno, polipropileno, copolímeros de etileno/propileno, copolímeros de etileno/acrilato de etilo, copolímeros de etileno/acetato de vinilo, cauchos de silicona, polidimetilsiloxanos, caucho de neopreno, polietileno clorado, cloruro de polivinilo, copolímeros de cloruro de vinilo con acetato de vinilo, cloruro de vinilideno, etileno y propileno, tereftalato de polietileno ionómero, cauchos de epiclorohidrina de caucho de butilo, copolímero de etileno/alcohol vinílico, terpolímero de etileno/acetato de vinilo/alcohol vinílico y copolímero de etileno/viniloxietanol, que es insoluble en fluidos corporales. El compuesto se dispersa a través de la membrana polimérica externa en una etapa de control de la tasa de liberación. El porcentaje de compuesto activo contenido en tales composiciones parenterales depende en gran medida de la naturaleza específica del mismo, así como de la actividad del compuesto y de las necesidades del sujeto.

[0184] La administración parenteral de las composiciones incluye administraciones intravenosa, subcutánea e intramuscular. Las preparaciones para administración parenteral incluyen soluciones estériles listas para inyección, productos solubles secos estériles, tales como polvos liofilizados, listos para combinarse con un disolvente justo antes del uso, incluyendo comprimidos hipodérmicos, suspensiones estériles listas para inyección, productos insolubles secos estériles listos para combinarse con un vehículo justo antes del uso y emulsiones estériles. Las soluciones pueden ser acuosas o no acuosas.

[0185] Si se administran por vía intravenosa, los portadores adecuados incluyen solución salina fisiológica o solución salina tamponada con fosfato (PBS) y soluciones que contienen agentes espesantes y solubilizantes, tales como glucosa, polietilenglicol y polipropilenglicol y mezclas de los mismos.

[0186] Los portadores farmacéuticamente aceptables usados en preparaciones parenterales incluyen vehículos acuosos, vehículos no acuosos, agentes antimicrobianos, agentes isotónicos, tampones, antioxidantes, anestésicos locales, agentes de suspensión y dispersión, agentes emulsionantes, agentes secuestrantes o quelantes y otras sustancias farmacéuticamente aceptables.

[0187] Los ejemplos de vehículos acuosos incluyen inyección de cloruro de sodio, inyección de Ringer, inyección de dextrosa isotónica, inyección de agua estéril, inyección de dextrosa y Ringer lactato. Los vehículos parenterales no acuosos incluyen aceites fijos de origen vegetal, aceite de semilla de algodón, aceite de maíz, aceite de sésamo y aceite de cacahuete. Los agentes antimicrobianos en concentraciones bacteriostáticas o fungistáticas se pueden añadir a las preparaciones parenterales envasadas en recipientes de dosis múltiples que incluyen fenoles o cresoles, mercuriales, alcohol bencílico, clorobutanol, ésteres de ácido metil y propil p-hidroxibenzoico, timerosal, cloruro de benzalconio y cloruro de bencetonio. Los agentes isotónicos incluyen cloruro de sodio y dextrosa. Los tampones incluyen fosfato y citrato. Los antioxidantes incluyen bisulfato de sodio. Los anestésicos locales incluyen clorhidrato de procaína. Los agentes de suspensión y dispersión incluyen carboximetilcelulosa de sodio, goma xantana, hidroxipropilmetilcelulosa y polivinilpirrolidona. Los agentes emulsionantes incluyen polisorbato 80 (TWEEN® 80). Un agente secuestrante o quelante de iones metálicos incluye EDTA. Los portadores farmacéuticos también incluyen alcohol etílico, polietilenglicol y propilenglicol para vehículos miscibles en agua; e hidróxido de sodio, ácido clorhídrico, ácido cítrico o ácido láctico para el ajuste del pH.

[0188] La concentración del compuesto farmacéuticamente activo se puede ajustar para que una inyección proporcione una cantidad eficaz para producir el efecto farmacológico deseado. La dosis exacta depende de la edad, el peso y la condición del paciente o animal como se conoce en la técnica.

[0189] Las preparaciones parenterales de dosis unitaria se envasan en una ampolla, un vial o una jeringa con una aguja. Todas las preparaciones para administración parenteral deben ser estériles, como se conoce y pone en práctica en la técnica.

[0190] De manera ilustrativa, la infusión intravenosa o intraarterial de una solución acuosa estéril que contiene un compuesto activo es un modo eficaz de administración. Otra realización es una solución o suspensión acuosa u oleosa estéril que contiene un material activo inyectado según sea necesario para producir el efecto farmacológico deseado.

[0191] Los inyectables están diseñados para la administración local y sistémica. En una realización, se formula una dosificación terapéuticamente eficaz para contener una concentración de al menos aproximadamente 0,1 % p/p hasta aproximadamente 90 % p/p o más, en determinadas realizaciones más del 1 % p/p del compuesto activo para el o los tejidos tratados.

[0192] El compuesto se puede suspender en forma micronizada u otra forma adecuada o se puede derivar para producir un producto activo más soluble o para producir un profármaco. La forma de la mezcla resultante depende de una serie de factores, que incluyen el modo de administración previsto y la solubilidad del compuesto en el portador o vehículo seleccionado. La concentración eficaz es suficiente para mejorar los síntomas de la afección y se puede determinar empíricamente.

[0193] Polvos liofilizados. Los polvos liofilizados, que se pueden reconstituir para su administración como soluciones, emulsiones y otras mezclas, también se pueden usar para llevar a cabo la materia objeto descrita en la actualidad. También se pueden reconstituir y formular como sólidos o geles.

[0194] El polvo liofilizado estéril se prepara disolviendo un compuesto proporcionado en esta invención, o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, en un disolvente adecuado. El disolvente puede contener un excipiente que mejora la estabilidad u otro componente farmacológico del polvo o solución reconstituida, que se prepara a partir del polvo. Los excipientes que se pueden usar incluyen, aunque sin limitación, dextrosa, sorbital, fructosa, jarabe de maíz, xilitol, glicerina, glucosa, sacarosa u otro agente adecuado. El disolvente también puede contener un tampón, tal como citrato, fosfato de sodio o potasio u otro tampón conocido por los expertos en la materia a, en una realización, aproximadamente pH neutro. La posterior filtración estéril de la solución seguido de liofilización en condiciones convencionales conocidas por los expertos en la materia proporciona la formulación deseada. En una realización, la solución resultante se dividirá en viales para la liofilización. Cada vial puede contener una dosis única o múltiples dosis del compuesto. El polvo liofilizado se puede almacenar en condiciones apropiadas, tales como de aproximadamente 4 °C a temperatura ambiente.

[0195] La reconstitución de este polvo liofilizado con agua para inyección proporciona una formulación para su uso en la administración parenteral. Para la reconstitución, el polvo liofilizado se añade a agua estéril u otro portador adecuado. La cantidad precisa depende del compuesto seleccionado. Tal cantidad se puede determinar empíricamente.

[0196] Administración tópica. Las mezclas tópicas se preparan como se describe para la administración local y sistémica. La mezcla resultante puede ser una solución, suspensión, emulsiones o similares y se formulan como cremas, geles, ungüentos, emulsiones, soluciones, elixires, lociones, suspensiones, tinturas, pastas, espumas, aerosoles, irrigaciones, pulverizaciones, supositorios, vendajes, parches dérmicos o cualquier otra formulación adecuada para administración tópica.

[0197] Los compuestos o derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos se pueden formular como aerosoles para aplicación tópica, tal como por inhalación (véase, por ejemplo, las patentes de EE: UU. n.° 4,044,126; 4,414,209; y 4,364,923, que describen aerosoles para el suministro de un esteroide útil para el tratamiento de enfermedades inflamatorias, particularmente asma). Estas formulaciones para administración al tracto respiratorio pueden estar en forma de un aerosol o solución para un nebulizador, o como un polvo microfino para insuflación, solo o en combinación con un portador inerte tal como lactosa. En tal caso, las partículas de la formulación tendrán, en algunas realizaciones, diámetros de menos de 50 micrómetros, en alguna realización de menos de 10 micrómetros.

[0198] Los compuestos se pueden formular para la aplicación local o tópica, tal como para la aplicación tópica a la piel y a las membranas mucosas, tal como en el ojo, en forma de geles, cremas y lociones y para la aplicación al ojo o para la aplicación intracisternal o intraespinal. Se contempla la administración tópica para el suministro transdérmico y también para la administración a los ojos o a la mucosa, o para terapias de inhalación. También se pueden administrar soluciones nasales del compuesto activo solo o en combinación con otros excipientes farmacéuticamente aceptables. Estas soluciones, particularmente aquellas destinadas para uso oftálmico, pueden formularse como soluciones isotónicas al 0,01 %-10 %, pH de aproximadamente 5-7, con sales apropiadas.

[0199] Composiciones para otras vías de administración. También se contemplan en esta invención otras vías de administración, tales como parches transdérmicos, que incluyen dispositivos iontoforéticos y electroforéticos, y administración rectal.

[0200] Los parches transdérmicos, incluidos los dispositivos iontoforéticos y electroforéticos, son bien conocidos por los expertos en la materia. Por ejemplo, tales parches se describen en las patentes de EE. UU. n.° 6,267,983; 6,261,595; 6,256,533; 6,167,301; 6,024,975; 6,010715; 5,985,317; 5,983,134; 5,948,433; y 5,860,957.

[0201] Por ejemplo, las formas de dosificación farmacéuticas para administración rectal son supositorios rectales, cápsulas y comprimidos para un efecto sistémico. Los supositorios rectales usados en esta invención significan cuerpos sólidos para su inserción en el recto que se funden o ablandan a temperatura corporal liberando uno o más ingredientes farmacológica o terapéuticamente activos. Las sustancias farmacéuticamente aceptables utilizadas en los supositorios rectales son bases o vehículos y agentes para elevar el punto de fusión. Los ejemplos de bases incluyen manteca de cacao (aceite de teobroma), glicerina-gelatina, carbowax (polioxietilenglicol) y mezclas apropiadas de mono-, di- y triglicéridos de ácidos grasos. Se pueden usar combinaciones de las diversas bases. Los agentes para elevar el punto de fusión de los supositorios incluyen espermaceti y cera. Los supositorios rectales se pueden preparar por el procedimiento comprimido o por moldeo. El peso de un supositorio rectal, en una realización, es de aproximadamente 2 a 3 gramos.

[0202] Los comprimidos y cápsulas para administración rectal se fabrican usando la misma sustancia farmacéuticamente aceptable y por los mismos procedimientos que para las formulaciones para administración por vía oral.

[0203] Formulaciones dirigidas. Los compuestos proporcionados en esta invención, o derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos, también se pueden formular para dirigirse a un tejido, receptor, agente infeccioso u otra área del cuerpo del sujeto a tratar en particular. Muchos de estos procedimientos de direccionamiento son bien conocidos por los expertos en la materia. Todos estos procedimientos de direccionamiento se contemplan en esta invención para su uso en las presentes composiciones. Para ejemplos no limitativos de procedimientos de direccionamiento, véanse, por ejemplo, las patentes de EE. UU. n.° 6,316,652; 6,274,552; 6,271,359; 6,253,872; 6,139,865; 6,131,570; 6,120,751; 6,071,495; 6,060,082; 6,048,736; 6,039,975; 6,004,534; 5,985,307; 5,972,366; 5,900,252; 5,840,674; 5,759,542; y 5,709874.

[0204] Liposomas. En algunas realizaciones, las suspensiones liposómicas, que incluyen liposomas dirigidos a tejidos, tales como liposomas dirigidos a tumores, también pueden ser adecuadas como portadores farmacéuticamente aceptables. Estas pueden prepararse según procedimientos conocidos por los expertos en la materia. Por ejemplo, las formulaciones de liposomas se pueden preparar como se describe en la patente de EE. UU. n.° 4,522,811, que se incorpora en esta invención en su totalidad. En resumen, los liposomas tales como vesículas multilamelares(Multilamellar Vesicles,MLV) pueden formarse secando fosfatidilcolina de huevo y fosfatidilserina cerebral (relación molar 7:3) en el interior de un matraz. Se añade una solución de un compuesto proporcionado en esta invención en solución salina tamponada con fosfato (PBS) que carece de cationes divalentes y el matraz se agita hasta que la película lipídica se dispersa. Las vesículas resultantes se lavan para retirar el compuesto no encapsulado, se sedimentan mediante centrifugación y, a continuación, se vuelven a suspender en PBS.

[0205] Ligandos. En algunas realizaciones, los compuestos descritos pueden dirigirse a tejidos diana específicos o composiciones diana usando ligandos específicos para el tejido diana o la composición diana, por ejemplo, usando ligandos o pares de receptores de ligandos tales como anticuerpos y antígenos. Se conocen anticuerpos contra antígenos tumorales y contra patógenos. Por ejemplo, se han descrito anticuerpos y fragmentos de anticuerpo que se unen específicamente a marcadores producidos por o asociados con tumores o lesiones infecciosas, incluyendo infecciones víricas, bacterianas, fúngicas y parasitarias, y antígenos y productos asociados con tales microorganismos, entre otros, en Hansen y col., la patente de EE.<u>U. n.° 3,927,193 y Goldenberg, las patentes de EE. UU. n.° 4,331,647; 4,348,376; 4,361,544; 4,468,457; 4,444,744; 4,818,709; y 4,624846. Se pueden usar anticuerpos contra un antígeno, por ejemplo, un tumor gastrointestinal, pulmonar, de mama, de próstata, ovárico, testicular, cerebral o linfático, un sarcoma o un melanoma.

[0206] Se ha desarrollado una amplia variedad de anticuerpos monoclonales contra agentes de enfermedades infecciosas y se resumen en una revisión de Polin (1984) European Journal of Clinical Microbiology 3(5):387-398, que muestra una disponibilidad inmediata. Estos incluyen anticuerpos monoclonales(monoclonal antibodies,MAb) contra patógenos y sus antígenos, como los siguientes: Mabs antibacterianos tales como aquellos contraStreptococcus agalactiae, Legionella pneumophilia, Streptococcus pyogenes, Esherichia coli, Neisseria gonorrhosae, Neisseria meningitidis, Pneumococcus, Hemophilis influenzae B, Treponema pallidum,enfermedad de Lyme, espiroquetas,Pseudomonas aeruginosa, Mycobacterium leprae, Brucella abortus, Mycobacterium tuberculosis,toxina del tétanos, Mabs antiprotozoos tales como aquellos contraPlasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Toxoplasma gondii, Trypanosoma rangeli, Trypanosoma cruzi, Trypanosoma rhodesiensei, Trypanosoma brucei, Schistosoma mansoni, Schistosoma japanicum, Mesocestoides corti, Emeria tenella, Onchocerca volvulus, Leishmania tropica, Trichinella spiralis, Theileria parva, Taenia hydatigena, Taenia ovis, Taenia saginata,MAbs antivirales tales como aquellos contra el VIH-1, -2 y -3, Hepatitis A, B, C, D, Virus de la rabia, Virus de la gripe, Citomegalovirus, Herpes simple I y II, Virus similar al parvo del suero humano, Virus sincitial respiratorio, Virus de la varicela y el zóster, Virus de la hepatitis B, Virus del sarampión, Adenovirus, Virus de la leucemia de linfocitos T humanos, Virus de Epstein-Barr, Virus de las paperas, Virus Sindbis, Virus del tumor mamario de ratón, Virus de la leucemia felina, Virus de la coriomeningitis linfocítica, Virus de la verruga, Virus de la lengua azul, Virus de Sendai, Virus Reo, Virus de la polio, Virus del dengue, Virus de la rubeola, Virus de la leucemia murina, MAbs antimicoplasmáticos tales como aquellos contraAcholeplasma laidlawii, Mycoplasma arthritidis, M. hyorhinis, M. orale, M. arginini, M. pneumonia;etc.

[0207] Se han desarrollado MAb adecuados contra la mayoría de los microorganismos (bacterias, virus, protozoos, otros parásitos) responsables de la mayoría de las infecciones en seres humanos, y muchos se han usado previamente con fines de diagnósticoin vitro.Estos anticuerpos, y los MAb más nuevos que se pueden generar mediante procedimientos convencionales, son apropiados para su uso como agentes diana con los compuestos proporcionados en esta invención.

[0208] Los mAb contra los parásitos de la malaria pueden dirigirse contra los estadios de esporozoitos, merozoitos, esquizontes y gametocitos. Se han generado anticuerpos monoclonales contra los esporozoitos (antígeno de circumsporozoitos) y se ha demostrado que neutralizan los esporozoitosin vitroy en roedores. Véase Yoshida y col. (1980) Science 207:71-73. Se han desarrollado anticuerpos monoclonales contraTgondii,el parásito protozoario involucrado en la toxoplasmosis. Véase Kasper y col. (1982) Journal of Immunology 129:1694-1699. Se han desarrollado MAb contra antígenos de superficie esquistosomulares y se ha descubierto que actúan contra esquistosomulasin vivooin vitro.Véase Simpson y col. (1981) Parasitology 83:163-177; Smith y col. (1982) Parasitology 84:83-91; Gryzch y col. (1982) Journal of Immunology 129:2739-2743; Zodda y col. (1982) Journal of Immunology 129:2326-2328; y Dissous y col. (1982) Journal of Immunology 129:2232-2234.

[0209] Se pueden usar mezclas de anticuerpos y clases de inmunoglobulinas, al igual que anticuerpos híbridos. Se prefieren especialmente anticuerpos y fragmentos de anticuerpos multiespecíficos, incluidos biespecíficos e híbridos, en los procedimientos de la materia objeto descrita en la actualidad para detectar y tratar tejido diana y están compuestos por al menos dos anticuerpos o fragmentos de anticuerpos sustancialmente monoespecíficos diferentes, donde al menos dos de dichos anticuerpos o fragmentos de anticuerpo se unen específicamente a al menos dos antígenos diferentes producidos o asociados con la lesión diana o al menos dos epítopos o moléculas diferentes de una sustancia marcadora producida o asociada con el tejido diana. Los anticuerpos multiespecíficos y los fragmentos de anticuerpo con especificidades duales se pueden preparar de forma análoga a los híbridos de marcadores antitumorales descritos en la patente de EE. UU. n.° 4,361,544. Otras técnicas para preparar anticuerpos híbridos se describen, por ejemplo, en las patentes de EE. UU. n.° 4,474,893 y 4,479,895, y en Milstein y col. (1984) Immunology Today 5:299.

[0210] Los fragmentos de anticuerpo útiles en la materia objeto descrita en la actualidad incluyen F(ab')<2>, F(ab)<2>, Fab', Fab, Fv y similares que incluyen fragmentos híbridos. Los fragmentos preferidos son Fab', F(ab')<2>, Fab y F(ab)<2>. También son útiles cualquier subfragmento que retenga la región de unión al antígeno hipervariable de una inmunoglobulina y que tenga un tamaño similar o más pequeño que un fragmento Fab'. Esto puede incluir proteínas genéticamente modificadas y/o recombinantes, ya sean monocatenarias o multicatenarias, que incorporan un sitio de unión al antígeno y de otro modo funcionanin vivocomo vehículos de direccionamiento sustancialmente de la misma manera que los fragmentos de inmunoglobulina naturales. Tales moléculas de unión monocatenarias se describen en la patente de EE. UU. n.° 4,946,778. Los fragmentos de anticuerpo Fab' se pueden preparar convenientemente por escisión reductora de fragmentos F(ab')<2>, que a su vez se pueden preparar por digestión con pepsina de inmunoglobulina intacta. Los fragmentos de anticuerpo Fab pueden prepararse por digestión con papaína de inmunoglobulina intacta, en condiciones reductoras, o por escisión de fragmentos F(ab)<2>que resultan de una digestión cuidadosa con papaína de inmunoglobulina completa.

[0211] Un ligando o un miembro de un par de unión ligando-receptor puede conjugarse con los compuestos proporcionados en esta invención para dirigir los compuestos a tejidos diana o composiciones diana específicos. Los ejemplos de pares de unión ligando-receptor se establecen en las patentes de EE. Uu . n.° 4,374,925 y 3,817,837.

[0212] Conjugación con ligandos. Se han identificado muchos compuestos que pueden servir como dianas para los pares de unión ligando-receptor y, más específicamente, anticuerpos, y las técnicas para construir conjugados de tales ligandos con los compuestos de Fórmula (I) son bien conocidas por los expertos en la materia. Por ejemplo, Rakestraw y col. enseñan la conjugación de Sn(IV) clorina a través de enlaces covalentes con anticuerpos monoclonales usando un portador de dextrano modificado. Véase Rakestraw y col. (1990) Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America 87:4217-4221. Los compuestos descritos en esta invención también se pueden conjugar con un ligando, como un anticuerpo, mediante el uso de un agente de acoplamiento. Es adecuado cualquier enlace que sea capaz de unir los componentes de modo que sean estables en condiciones fisiológicas durante el tiempo necesario para la administración y el tratamiento, pero se prefieren los enlaces covalentes. La unión entre dos componentes puede ser directa, por ejemplo, cuando un compuesto de Fórmula (I) está unido directamente a un agente de direccionamiento, o indirectamente, por ejemplo, cuando un compuesto de Fórmula (I) está unido a un producto intermedio y ese producto intermedio está unido al agente de direccionamiento.

[0213] Un agente de acoplamiento debe funcionar en condiciones de temperatura, pH, sal, sistema de disolventes y otros reactivos que retengan sustancialmente la estabilidad química del fotosensibilizador, la estructura principal (si está presente) y el agente de direccionamiento. Los agentes de acoplamiento deben unir restos de componentes de forma estable, pero de modo que solamente haya una desnaturalización o desactivación mínima o nula del compuesto de Fórmula (I) o el agente de direccionamiento. Muchos agentes de acoplamiento reaccionan con una amina y un carboxilato, para formar una amida, o un alcohol y un carboxilato para formar un éster. Los agentes de acoplamiento son conocidos en la técnica. Véanse, por ejemplo, Bodansky (1993) Principles of Peptide Synthesis, 2a ed., Springer y Hermanson (1996) Bioconjugate Techniques, 1a Ed., Academic Press, Nueva York, Nueva York, Estados Unidos de América.

[0214] Los conjugados de los compuestos proporcionados en esta invención con ligandos tales como anticuerpos se pueden preparar acoplando el compuesto a restos de direccionamiento acoplando un resto éster o ácido carboxílico en el compuesto a través de enlaces peptídicos al anticuerpo a través de un extremo N-terminal, o por otros procedimientos conocidos en la técnica. Se puede usar una variedad de agentes de acoplamiento, incluidos agentes de reticulación, para la conjugación covalente. Los ejemplos de agentes de reticulación incluyen N,N'-diciclohexilcarbodiimida (DCC), N-succinimidil-5-acetil-tioacetato (SATA), N-succinimidil-3-(2-piridildi-tio)propionato (SPDP), orto-fenileno-dimaleimida (o-PDM) y 4-(N-maleimido-metil)-ciclohexano-1-carboxilato de sulfosuccinimidilo (sulfo-SMCC). Véase, por ejemplo, Karpovsky y col. (1984) Journal of Experimental Medicine 160(6): 1686-1701; y Liu y col. (1985) Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America 82(24):8648-8652. Otros procedimientos incluyen los descritos por Brennan y col. (1985) Science 229:81-83 y Glennie y col. (1987) Journal of Immunology 139:2367-2375.

[0215] Por ejemplo, DCC es un agente de acoplamiento útil que se puede usar para promover el acoplamiento del alcohol NHS a un grupo de ácido clorincarboxílico en DMSO que forma un éster activado que se puede reticular a polilisina. El DCC es un reticulante carboxirreactivo comúnmente usado como agente de acoplamiento en la síntesis de péptidos y tiene un peso molecular de 206,32. Otro agente de reticulación útil es SPDP, un reticulante heterobifuncional para su uso con aminas primarias y grupos sulfhidrilo. El SPDP tiene un peso molecular de 312,4, una longitud de brazo espaciador de 6,8 angstroms, es reactivo a los ésteres de NHS y los grupos piridilditio, y produce una reticulación escindible de modo que, tras una reacción adicional, el agente se elimina para que el fotosensibilizador pueda unirse directamente a una estructura principal o agente de direccionamiento. Otros agentes de conjugación útiles son SATA para la introducción de grupos SH bloqueados para la reticulación en dos etapas, que se desbloquea con hidroxilamina-HCl, y sulfo-SMCC, reactivo hacia aminas y sulfhidrilos. Otros agentes de reticulación y acoplamiento también están disponibles en Pierce Chemical Co. En la patente europea EP 0243929 B1 se describen compuestos y procesos adicionales, particularmente aquellos que implican una base de Schiff como producto intermedio, para la conjugación de proteínas con otras proteínas o con otras composiciones, por ejemplo, con grupos indicadores o con quelantes para el marcado de iones metálicos de una proteína.

[0216] Los fotosensibilizadores que contienen grupos carboxilo pueden unirse a grupos £-amino de lisina en los polipéptidos diana por ésteres reactivos preformados (tales como éster de N-hidroxisuccinimida (NHS)) o ésteres conjugados in situ por una reacción mediada por carbodiimida. Lo mismo se aplica a los fotosensibilizadores que contienen grupos ácido sulfónico, que pueden transformarse en cloruros de sulfonilo que reaccionan con grupos amino. Las bacterioclorinas que tienen grupos carboxilo pueden unirse a grupos amino en el polipéptido por un procedimiento de carbodiimida in situ. Las bacterioclorinas también se pueden unir a grupos hidroxilo, de residuos de serina o treonina o a grupos sulfhidrilo de residuos de cisteína.

[0217] Los procedimientos de unión de componentes de un conjugado, por ejemplo, acoplamiento de cadenas de poliaminoácidos que portan fotosensibilizadores a polipéptidos antibacterianos, pueden usar reactivos de reticulación heterobifuncionales. Estos agentes se unen a un grupo funcional en una cadena y a un grupo funcional diferente en la segunda cadena. Estos grupos funcionales son típicamente amino, carboxilo, sulfhidrilo y aldehído. Hay muchas permutaciones de restos apropiados que reaccionarán con estos grupos y con estructuras formuladas de manera diferente, para conjugarlos entre sí. Véanse Hermanson (1996) Bioconjugate Techniques, 1a Ed., Academic Press, Nueva York, Nueva York, Estados Unidos de América; y Merrifield y col. (1994) Ciba Foundation Symposium 186:5-20.

[0218] Los compuestos o derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos pueden envasarse como artículos de fabricación que contienen material de envasado, un compuesto o derivado farmacéuticamente aceptable de los mismos proporcionados en esta invención, que es eficaz para modular la actividad de tejido hiperproliferativo o neovascularización, o para el tratamiento, prevención o mejora de uno o más síntomas de enfermedades o trastornos mediados por tejido hiperproliferativo o neovascularización, o enfermedades o trastornos donde está implicada la actividad de tejido hiperproliferativo o neovascularización, dentro del material de envasado, y una etiqueta que indica que el compuesto o composición, o derivado farmacéuticamente aceptable de los mismos, se usa para modular la actividad de tejido hiperproliferativo o neovascularización, o para el tratamiento, prevención o mejora de uno o más síntomas de enfermedades o trastornos mediados por tejido hiperproliferativo o neovascularización, o enfermedades o trastornos donde está implicado el tejido hiperproliferativo o neovascularización.

[0219] Los artículos de fabricación proporcionados en esta invención contienen materiales de envasado. Los materiales de envasado para su uso en el envasado de productos farmacéuticos son bien conocidos por los expertos en la materia. Véanse, por ejemplo, las patentes de EE.UU. n.° 5,323,907, 5,052,558 y 5,033,252. Los ejemplos de materiales de envasado farmacéuticos incluyen, aunque sin limitación, envases tipo alveolados, frascos, tubos, inhaladores, bombas, bolsas, viales, recipientes, jeringas, botellas y cualquier material de envasado adecuado para una formulación seleccionada y un modo de administración y tratamiento previsto. Se contempla un amplio abanico de formulaciones de los compuestos y composiciones proporcionados en esta invención, así como una variedad de tratamientos para cualquier enfermedad o trastorno donde esté implicado tejido hiperproliferativo o neovascularización como mediador o contribuyente a los síntomas o la causa.

V. Terapia fotodinámica, aplicaciones diagnósticas y terapéuticas

[0220] En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula (II) descritos en la actualidad (o sus sales o conjugados farmacéuticamente aceptables) pueden actuar como un fotosensibilizador en un procedimiento de tratamiento de una enfermedad (por ejemplo, una enfermedad hiperproliferativa, tal como cáncer) que implica terapia fotodinámica(Photodynamic Therapy,PDT). En resumen, el compuesto fotosensibilizante, conjugado o composición farmacéutica del mismo se administra generalmente al sujeto antes de que un tejido diana, composición diana o sujeto se someta a iluminación con luz. El compuesto fotosensibilizante se administra como se describe en otra parte en esta invención.

[0221] La dosis de compuesto fotosensibilizante se puede determinar clínicamente. Dependiendo del compuesto fotosensibilizante usado, se tendrá que establecer un nivel terapéutico óptimo equivalente. Se deja pasar un cierto periodo de tiempo para que el fotosensibilizador circulante o suministrado localmente sea absorbido por el tejido diana. El fotosensibilizador no unido se elimina de la circulación durante este periodo de espera, o se puede proporcionar opcionalmente un tiempo adicional para la eliminación del compuesto no unido del tejido no diana. El periodo de espera se puede determinar clínicamente y puede variar de un compuesto a otro.

[0222] Al final de este periodo de espera, se usa una fuente de luz láser o una fuente de luz que no sea láser (incluyendo, aunque sin limitación, fuentes de luz artificial, tales como luz fluorescente o incandescente, o fuentes de luz natural, tales como luz solar ambiental) para activar el fármaco unido. El área de iluminación está determinada por la ubicación y la dimensión de la región patológica que se va a detectar, diagnosticar o tratar. La duración del periodo de iluminación puede depender de si se está realizando la detección o el tratamiento y se puede determinar empíricamente. Se puede usar un periodo de tiempo total o acumulado entre aproximadamente 4 minutos y aproximadamente 72 horas. En algunas realizaciones, el periodo de iluminación está entre aproximadamente 60 minutos y 148 horas. En algunas realizaciones, el periodo de iluminación está entre aproximadamente 2 horas y 24 horas.

[0223] Preferentemente, la fluencia o energía total de la luz usada para la irradiación, medida en julios, está entre aproximadamente 10 julios y aproximadamente 25.000 julios; más preferentemente, entre aproximadamente 100 julios y aproximadamente 20.000 julios; y lo más preferentemente, entre aproximadamente 500 julios y aproximadamente 10.000 julios. Se selecciona la luz de una longitud de onda y fluencia suficientes para producir el efecto deseado, ya sea para la detección por fluorescencia o para el tratamiento terapéutico para destruir o alterar un tejido diana o composición diana. La luz que tiene una longitud de onda correspondiente, al menos en parte, a la longitud de onda de absorción de luz característica del agente fotosensibilizante se usa preferentemente para irradiar el problema diana.

[0224] La intensidad o potencia de la luz usada se mide en vatios, con cada julio siendo igual a un vatio-s. Por lo tanto, la intensidad de la luz usada para irradiar en los procedimientos descritos en la actualidad puede ser sustancialmente inferior a 500 mW/cm2. Dado que la fluencia total o la cantidad de energía de la luz en julios se divide por la duración del tiempo de exposición total en segundos, cuanto mayor sea la cantidad de tiempo que la diana esté expuesta a la irradiación, mayor será la cantidad de energía total o fluencia que se puede usar sin aumentar la cantidad de la intensidad de la luz usada. La materia objeto descrita en la actualidad emplea una cantidad de fluencia total de irradiación que es lo suficientemente alta como para activar el agente fotosensibilizante.

[0225] En algunas realizaciones del uso de los compuestos descritos en esta invención para la terapia fotodinámica, los compuestos se inyectan en el mamífero, por ejemplo, un ser humano, para ser diagnosticado o tratado. El nivel de inyección suele estar entre aproximadamente 0,1 y aproximadamente 0,5 umol/kg de peso corporal. En el caso del tratamiento, el área a tratar se expone a la luz a la longitud de onda y energía deseadas, por ejemplo, de aproximadamente 10 a 200 J/cm2. En el caso de la detección, la fluorescencia se determina tras la exposición a la luz a una longitud de onda suficiente para hacer que el compuesto emita fluorescencia a una longitud de onda diferente a la usada para iluminar el compuesto. La energía usada en la detección es suficiente para causar fluorescencia y generalmente es significativamente menor que la requerida para el tratamiento.

[0226] Uno cualquiera de los compuestos fotosensibilizantes descritos en esta invención o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo se puede suministrar en un kit junto con instrucciones para llevar a cabo cualquiera de los procedimientos descritos en esta invención. Las instrucciones pueden estar en cualquier forma tangible, como papel impreso, un disco de ordenador que instruye a una persona sobre cómo llevar a cabo el procedimiento, un casete de vídeo que contiene instrucciones sobre cómo llevar a cabo el procedimiento o una memoria de ordenador que recibe datos de una ubicación remota e ilustra o proporciona de otro modo las instrucciones a una persona (tal como a través de Internet). Se puede instruir a una persona sobre cómo usar el kit usando cualquiera de las instrucciones anteriores o recibiendo instrucciones en un aula o en el curso del tratamiento de un paciente usando cualquiera de los procedimientos descritos en esta invención, por ejemplo.

[0227] Los ejemplos adicionales y ejemplos específicos de procedimientos de uso de compuestos y composiciones de la materia objeto descrita en la actualidad incluyen, aunque sin limitación, los siguientes:

(i) Tratamiento de infecciones oportunistas. Los compuestos, composiciones y procedimientos de la materia objeto descrita en la actualidad son útiles para la PDT de infecciones oportunistas, particularmente de tejidos blandos. Para el tratamiento antimicrobiano (a través de PDT) de infecciones, particularmente infecciones de heridas, el organismo infectado puede incluir (como ejemplos no limitantes)Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli.En las infecciones nosocomiales,P. aeruginosaes responsable del 8 % de las infecciones de heridas quirúrgicas y del 10 % de las infecciones del torrente sanguíneo. En algunas realizaciones, los sujetos son sujetos inmunocomprometidos, tales como aquellos que padecen SIDA o sometidos a tratamiento con agentes inmunosupresores.

(ii) Tratamiento de quemaduras. Las infecciones por S.aureusy las bacterias grampositivas en general son particularmente pronunciadas en las quemaduras. La resistencia a múltiples fármacos de S.aureuspresenta desafíos médicos significativos. En este sentido, los compuestos, composiciones y procedimientos de la materia objeto descrita en la actualidad son útiles para el tratamiento de infecciones oportunistas de quemaduras.

(iii) Sepsis. Los compuestos, composiciones y procedimientos de la materia objeto descrita en la actualidad son útiles para el tratamiento por PDT de sujetos que padecen infecciones oportunistas deVibrio vulnificus. V. vulnificus,una bacteria gramnegativa, provoca sepsis primaria, infecciones de heridas y enfermedades gastrointestinales en humanos.

(iv) Úlceras. Los compuestos, composiciones y procedimientos de la materia objeto descrita en la actualidad son útiles para el tratamiento por PDT de la bacteria que provoca úlceras(Helicobacter pylori).En la clínica, el tratamiento puede efectuarse de cualquier manera adecuada, tal como por la inserción de un cable de fibra óptica (similar a un endoscopio pero con disposiciones para la administración de luz roja o infrarroja cercana) en el estómago o la región afectada.

(v) Enfermedad periodontal. Los compuestos, composiciones y procedimientos de la materia objeto descrita en la actualidad son útiles en la PDT para el tratamiento de la enfermedad periodontal, incluida la gingivitis. La enfermedad periodontal es causada por el crecimiento excesivo de bacterias, tales como el anaerobio gramnegativoPorphyromonas gingivalis.Al igual que con muchos tratamientos por PDT, las entidades de direccionamiento o solubilización junto con las especies fotoactivas son esenciales para el suministro adecuado de las especies fotoactivas a las células deseadas. Los patógenos orales de interés para el direccionamiento incluyenPorphyromonas gingivalis, Actinobacillus actinonzycetemcomitans, Bacteroides forsythus, Campylobacter rectus, Eikenella corrodens, Fusobacterium nucleatum subsp. Polymorphum, Actinomyces viscosusy los estreptococos. Para tales aplicaciones, los compuestos o composiciones de la materia objeto descrita en la actualidad pueden aplicarse tópicamente (por ejemplo, como un colutorio o enjuague) y a continuación administrarse con luz con un dispositivo externo, un instrumento en la boca o una combinación de los mismos. (vi) Aterosclerosis. Los compuestos, composiciones y procedimientos de la materia objeto descrita en la actualidad son útiles en la PDT para tratar la placa aterosclerótica vulnerable. Sin desear quedar limitado a teoría alguna en particular, se cree que los macrófagos inflamatorios invasores secretan metaloproteinasas que degradan una capa delgada de colágeno en las arterias coronarias, lo que resulta en trombosis, que a menudo es letal. Los compuestos activos dirigidos a tales macrófagos inflamatorios son útiles para la PDT de la placa vulnerable.

(vii) Aplicaciones cosméticas y dermatológicas. Los compuestos, composiciones y procedimientos de la materia objeto descrita en la actualidad son útiles en la PDT para tratar un amplio intervalo de problemas dermatológicos cosméticos, tales como eliminación de vello, tratamiento de la psoriasis o eliminación de la decoloración de la piel. Los láseres de rubí se usan actualmente para la eliminación de vello; en muchos tratamientos con láser, la melanina es el cromóforo fotosensibilizado. Tales tratamientos funcionan razonablemente bien para personas de piel clara con cabello oscuro. Los compuestos, composiciones y procedimientos de la materia objeto descrita en la actualidad pueden usarse como sensibilizadores de IR cercano para la eliminación de vello, lo que permite dirigirse a un cromóforo con una banda de absorción más específica y nítida.

(viii) Acné. Los compuestos, composiciones y procedimientos de la materia objeto descrita en la actualidad son útiles en la PDT para tratar el acné. El acné vulgar es causado porPropionibacterium acnes,que infecta la glándula sebácea; alrededor del 80 % de los jóvenes se ven afectados. Una vez más, la creciente resistencia de las bacterias al tratamiento con antibióticos está provocando un aumento del acné que es difícil de tratar. Los tratamientos actuales de PDT del acné generalmente se basan en la adición de ácido aminolevulínico, que en el folículo piloso o la glándula sebácea se convierte en porfirinas de base libre. Los compuestos y composiciones de la materia objeto descrita en la actualidad pueden administrarse a sujetos por vía tópica o parenteral (por ejemplo, por inyección subcutánea) dependiendo de la afección particular.

(ix) Enfermedades infecciosas. Los compuestos, composiciones y procedimientos de la materia objeto descrita en la actualidad son útiles en la PDT para tratar enfermedades infecciosas. Por ejemplo, la leishmaniasis cutánea y la leishmaniasis subcutánea, muy extendidas en las regiones del Mediterráneo y Oriente Medio, se tratan actualmente con compuestos que contienen arsénico. La PDT se ha usado con un efecto razonable recientemente, al menos en un caso, en un paciente humano. El uso de compuestos y composiciones de la materia objeto descrita en la actualidad son igualmente útiles y potencialmente ofrecen ventajas tales como facilidad de síntesis y mejores propiedades de absorción espectral.

(x) Selladores de tejidos. Los compuestos, composiciones y procedimientos de la materia objeto descrita en la actualidad son útiles en PDT como selladores de tejidos en sujetos que lo necesitan. Los selladores de tejido activados por luz son atractivos para sellar heridas, unir tejido y cerrar defectos en el tejido. Hay muchas aplicaciones donde las suturas o grapas no son deseables y el uso de tales procedimientos mecánicos de sellado a menudo conduce a infección y cicatrización.

(xi) Enfermedad neoplásica. Los compuestos, composiciones y procedimientos de la materia objeto descrita en la actualidad son útiles en PDT para tratar enfermedades o cánceres neoplásicos, incluyendo cáncer de piel, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de cuello uterino, cáncer de ovario, carcinoma de células basales, leucemia, linfoma, carcinoma de células escamosas, melanoma, linfoma cutáneo de linfocitos T en estadio de placa y sarcoma de Kaposi.

[0228] Además de la PDT, las composiciones proporcionadas en esta invención se pueden usar como agentes potenciadores de la formación de imágenes en técnicas de formación de imágenes de diagnóstico, o para el marcaje de tejidos diana o composiciones diana para radiología de diagnóstico. En el campo de la medicina moderna, hay una variedad de tratamientos que incluyen imágenes de resonancia magnética(Magnetic Resonance Imaging,MRI) para el diagnóstico de enfermedades. La detección del cáncer en sus primeros estadios debería mejorar la capacidad de curar y eliminar el tejido canceroso. El diagnóstico precoz de las regiones precancerosas y el cáncer diminuto son temas importantes en los tratamientos modernos contra el cáncer. La MRI se ha convertido en una herramienta poderosa en entornos clínicos porque no es invasiva y produce una representación precisa del volumen del sujeto. La imagen se crea imponiendo uno o más gradientes de campo magnético ortogonal sobre el sujeto o la muestra mientras se excitan los espines nucleares con pulsos de radiofrecuencia como en el experimento de resonancia magnética nuclear(Nuclear Magnetic Resonance,NMR) atípica. Después de la recopilación de datos con una variedad de campos de gradiente, la deconvolución produce una imagen unidimensional, bidimensional o tridimensional de la muestra/sujeto. Por lo general, la imagen se basa en la señal de RMN de los protones del agua, donde la intensidad de la señal en un elemento de volumen dado es una función de la concentración de agua y los tiempos de relajación. La variación local en estos parámetros proporciona el contraste vívido observado en las imágenes de RM.

[0229] Los agentes de contraste de MRI actúan aumentando la tasa de relajación, aumentando así el contraste entre las moléculas de agua en la región donde se acumula el agente de imagen y las moléculas de agua en otras partes del cuerpo. Sin embargo, el efecto del agente es disminuir tanto T<1>como T<2>, el primero da como resultado un mayor contraste, mientras que el segundo da como resultado un menor contraste. En consecuencia, el fenómeno depende de la concentración, y normalmente hay una concentración óptima de una especie paramagnética para una máxima eficacia. Esta concentración óptima puede variar con el agente particular usado, el locus de formación de imágenes, el modo de formación de imágenes, es decir, eco de espín, recuperación de saturación, recuperación de inversión y/o varias otras técnicas de formación de imágenes fuertemente dependientes de T<1>o dependientes de T<2>, y la composición del medio donde se disuelve o suspende el agente. En la técnica se conocen estos factores y su importancia relativa. Véase, por ejemplo, Pykett (1982) Scientific American 246:78; y Runge y col. (1983) American Journal of Radiology 141:1209. Cuando se usan agentes de contraste de MRI para el diagnóstico, se perfunden vascularmente, mejorando el contraste de los vasos sanguíneos e informando sobre lesiones e infiltración de órganos.

Sin embargo, el marcado de tejidos específicos para la radiología de diagnóstico sigue siendo un desafío difícil para la MRI. Los esfuerzos para desarrollar agentes de mejora de imágenes de MRI específicos de células y tejidos mediante la modificación de las técnicas inmunológicas existentes han sido el foco de muchas investigaciones en radiología diagnóstica. Por ejemplo, se han generado y analizado anticuerpos marcados con iones paramagnéticos, generalmente el quelato de gadolinio Gd-DTPA, para determinar sus efectos sobre el contraste de MRI de tumores y otros tejidos. Véase, la patente de EE. UU. n.° 5,059,415. Desafortunadamente, se ha descubierto que la capacidad de relajación del Gd unido a los anticuerpos es sólo ligeramente mejor que la del Gd-DTPA no unido. Véase Paajanen y col. (1990) Magnetic Resononance in Medicine 13:38-43.

[0230] La MRI se usa generalmente para detectar núcleos de 1H en el cuerpo vivo. Sin embargo, la MRI es capaz de detectar espectros de RMN de otras especies nucleares, incluyendo 13C, 15N, 31P y 19F. El 19F no es abundante en el cuerpo vivo. Al incorporar isótopos útiles en MRI, tales como 13C, 15N, 31P o 19F, y particularmente 19F en las composiciones proporcionadas en esta invención y su administración a un sujeto, los compuestos proporcionados en esta invención se acumularían en el tejido diana, y las imágenes de MR posteriores producirían datos de RMN con señal mejorada del tejido diana o composiciones diana debido a la presencia del compuesto acumulado con el isótopo reconocible por MRI, tal como 19F. Por tanto, los compuestos descritos se pueden usar como agentes potenciadores de la imagen y proporcionan el marcado de tejidos diana o composiciones diana específicos para radiología de diagnóstico, incluida la MRI.

[0231] Además de la PDT, las composiciones proporcionadas en esta invención se pueden usar para detectar células diana, tejido diana o composiciones diana en un sujeto. Cuando los compuestos proporcionados en esta invención se van a usar para la detección de tejido diana o composición diana, los compuestos se introducen en el sujeto y se deja suficiente tiempo para que los compuestos se acumulen en el tejido diana o se asocien con la composición diana. A continuación se irradia el área de tratamiento, generalmente usando luz de una energía suficiente para causar fluorescencia del compuesto, y la energía usada suele ser significativamente menor que la requerida para el tratamiento de terapia fotodinámica. La fluorescencia se determina tras la exposición a la luz a la longitud de onda deseada, y la cantidad de fluorescencia se puede correlacionar con la presencia del compuesto, cualitativa o cuantitativamente, por procedimientos conocidos en la técnica.

[0232] Las composiciones proporcionadas en esta invención también se pueden usar para diagnosticar la presencia de un agente infeccioso, o la identidad de un agente infeccioso en un sujeto. Los compuestos proporcionados en esta invención se pueden conjugar con uno o más ligandos específicos para un agente infeccioso, tal como un anticuerpo o fragmento de anticuerpo, que se asocia selectivamente con el agente infeccioso, y después de permitir suficiente tiempo para que el compuesto diana se asocie con el agente infeccioso y se elimine del tejido no diana, el compuesto se puede visualizar, tal como por la exposición a la luz de una energía suficiente para causar fluorescencia del compuesto, o por formación de imágenes usando radiología de diagnóstico, incluida la MRI. A modo de ejemplo, uno cualquiera de los compuestos proporcionados en esta invención puede conjugarse con un anticuerpo que se dirige contra un antígeno deHelicobacter pyloriadecuado, y formularse en una preparación farmacéutica que, cuando se introduce en un sujeto, libera el compuesto conjugado a una capa de moco gástrico/epitelial donde se encuentra la bacteria. Después de un tiempo suficiente para que el compuesto se asocie selectivamente con el agente infeccioso diana, y para que cualquier compuesto no unido se elimine del tejido no diana, se puede examinar al sujeto para determinar si está presente algunaHelicobacter pylori.Esto puede hacerse por MRI para detectar el compuesto acumulado debido a la presencia de sustituyentes de 19F, por ejemplo, o irradiando el área diana sospechosa con luz de una energía suficiente para causar fluorescencia del compuesto, tal como por el uso de fibra óptica, y detectando cualquier fluorescencia del compuesto diana.

[0233] En algunas realizaciones, los compuestos descritos en la actualidad o sus conjugados pueden ser útiles en citometría de flujo. La citometría de flujo se conoce y se describe, por ejemplo, en las patentes de EE: UU. n.° 5,167,926; 5,915,925; 6,248,590; 6,589,792; y 6890,487. En algunas realizaciones, la partícula que se detecta, tal como una célula, se marca con un compuesto luminiscente tal como un fósforo o fluoróforo para la detección. El marcado se puede llevar a cabo por cualquier técnica adecuada, tal como acoplamiento del compuesto luminiscente a otro compuesto, tal como un anticuerpo que a su vez se une específicamente a la partícula o célula, por absorción o internalización del compuesto luminiscente en la célula o partícula, por adsorción no específica del compuesto luminiscente a la célula o partícula, etc. Los compuestos activos descritos en esta invención son útiles en citometría de flujo como tales compuestos luminiscentes, cuyas técnicas de citometría de flujo (incluida la clasificación de células activadas por fluorescencia o FACS) se pueden llevar a cabo según las técnicas conocidas o variaciones de las mismas que resultarán evidentes para los expertos en la materia según la presente descripción.

EJEMPLOS

[0234] Los siguientes Ejemplos proporcionan realizaciones ilustrativas. A la luz de la presente descripción y el nivel general de experiencia en la técnica, los expertos en la materia apreciarán que los siguientes Ejemplos pretenden ser sólo ejemplares y que se pueden emplear numerosos cambios, modificaciones y alteraciones sin desviarse del alcance de la materia objeto descrita en la actualidad.

EJEMPLO 1

Síntesis del compuesto CP-1

[0235] El componente que interviene en la reacción de acoplamiento de Suzuki protegido por Di-BOC 1 (CP-1) se preparó como se muestra en el Esquema 2 (véase la Figura 2).

[0236] 1-bromo-3,5-bis(bromometil)benceno(CP-1a). Se añadió N-bromosuccinimida (NBS, 35,60 g, 200,0 mmol) a un matraz de fondo redondo(Round Bottom Flask,RBF) de 3 bocas y 1 l secado con llama con barra de agitación y el matraz se equipó con un tapón de vidrio, un condensador cubierto con tabique y un tabique de caucho. El NBS se secó a alto vacío durante 30 min, a continuación el matraz se purgó con argón y se añadió acetonitrilo (ACN, 400 ml) a través de una cánula hasta aproximadamente la mitad del volumen (~450 ml). Se añadió 1-bromo-3,5-dimetilbenceno (15,26 g, 80,0 mmol) mediante una jeringa, seguido de una breve apertura del sistema bajo flujo de argón y la adición a granel de azobisisobutironitrilo sólido (AIBN, 0,670 g, 4,00 mmol). El matraz se calentó a reflujo suave (baño de aceite ajustado a 90 °C) bajo argón.

[0237] Después de 16 h, la mezcla de reacción se transfirió a un RBF de 1 l de una sola boca y se concentró para eliminar ACN. El residuo sólido se secó adicionalmente a alto vacío, se suspendió en diclorometano (DCM, 75 ml) y se calentó a ebullición suave. La mezcla se dejó equilibrar a temperatura ambiente y se filtró con lavado de DCM. El filtrado se concentró, se secó a alto vacío y se recristalizó en etanol (EtOH, 55 ml en total) con calentamiento en baño de agua ajustado a 65 °C. El sólido se filtró y se lavó con EtOH enfriado con hielo, a continuación se secó a alto vacío. Compuesto CP-1a aislado como un sólido cristalino blanco (17,40 g, 51 %).

[0238] RMN-1H (400 MHz, CDCh) 64,41 (s, 4H), 7,34 (s, 1H), 7,47 (d, J = 2,0 Hz, 2H).

[0239] 2,2'-((5-bromo-1,3-fenileno)bis(metileno))bis(isoindolina-1,3-diona) (CP-1b). El compuesto CP-1a (18,43 g, 53,75 mmol) se secó en un RBF de 500 ml con barra de agitación. El matraz se purgó con argón y se añadió dimetilformamida (DMF, 215 ml, 0,25 M). La solución transparente e incolora se agitó y se añadió ftalimida de potasio (23,37 g, 123,63 mmol) en partes. El matraz se equipó con un condensador cubierto con un tubo de secado y se calentó en un baño de aceite ajustado a 90 °C.

[0240] Después de 16 h, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con agua (1 l total) y se extrajo con cloroformo (400, 300 y 200 ml, 1 x cada uno). Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con NaOH ac. 0,2 N (500 ml) y agua (500 ml). La capa orgánica se separó, se secó con sulfato de sodio, se filtró y se concentró. El sólido se secó además a alto vacío, a continuación se transfirió a un filtro y se lavó con éter dietílico a temperatura ambiente (Et<2>O) (3x). Compuesto CP-1b aislado como un sólido en polvo de color blanco (17,98 g, 70 %).

[0241] RMN-1H (400 MHz, CDCla): 64,78 (s, 4H), 7,42-7,47 (m, 3H), 7,78-7,70 (m, 4H), 7,87-7,82 (m, 4H).

[0242] (5-bromo-1,3-fenileno)dimetanamina (CP-1c). El compuesto CP-1b (7,63 g, 16,06 mmol) se suspendió en EtOH (70,0 ml)y se calentó en un baño de aceite a 85 °C. Se añadió hidrato de hidrazina (4,88 ml, 80,29 mmol) a granel y el matraz se cubrió con un condensador. La mezcla se calentó además a temperatura de reflujo durante 15 min, a continuación, la mezcla de reacción se dejó enfriar gradualmente a temperatura ambiente.

[0243] Se añadió HCl ac. 6 N hasta que la solución se volvió ácida por la prueba de tornasol (20 ml en total). La mezcla resultante se calentó a temperatura de reflujo nuevamente. El matraz se purgó con argón, se agitó durante 1 h y a continuación se dejó enfriar y helar en un baño de hielo. La mezcla se filtró para proporcionar una solución transparente de color ámbar pálido. El filtrado se enfrió en un baño de hielo y se basificó con NaOH ac. 2 N (30 ml en total). La capa acuosa se extrajo con cloroformo (3 x 75 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron hasta un volumen de aprox. 10 ml. Se observó un residuo blanco en las paredes del matraz. La solución restante se filtró y el filtrado se concentró para proporcionar 2,3 g de aceite amarillento. Se almacenó en el frigorífico.

[0244] La muestra se solidificó después del almacenamiento durante la noche a 4 °C y se secó además a alto vacío para proporcionar 2,047 g (59 %) del compuesto CP-1c como un semisólido ámbar.

((5-bromo-1,3-fenileno)bis(metileno))dicarbamato de di-terc-butilo (CP-1d).

[0245] Se añadió el compuesto CP-1c (2,00 g, 9,11 mmol) a un RBF secado con llama de 250 ml con barra de agitación. El matraz se evacuó y se purgó con argón. Se añadió tetrahidrofurano (THF, 45 ml) y el matraz se bajó a un baño de agua. Se añadió diisopropiletilamina (3,83 ml, 21,86 mmol) y la mezcla heterogénea se heló en un baño de hielo. Se preparó anhídrido de Boc (4,86 g, 21,86 mmol) como una solución en THF (10 ml) y se añadió gota a gota en partes de 1 ml. La solución se agitó a 0 °C durante 1 h, a continuación se dejó equilibrar a temperatura ambiente.

[0246] La reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se concentró para proporcionar un sólido blanco, que se volvió a disolver en acetato de etilo (EtOAc, 70 ml). La capa orgánica se lavó con NH<4>Cl ac. sat. agua, NaHCO<3>ac. sat. y salmuera (1 x 50 ml cada uno). A continuación, la capa orgánica se secó con sulfato de sodio, se filtró y se concentró hasta obtener un aceite de color ámbar pálido que cristalizó al reposar. El sólido se lavó en un filtro de frita con Et<2>O/hexanos 1:1 enfriado. El sólido se secó a alto vacío para proporcionar 3,50 g (93 %) del compuesto CP-1d como un sólido en polvo blanco.

[0247] Componente que interviene en la reacción de acoplamiento 1 (CP-1). Se añadió dimetilsulfóxido (DMSO, grado reactivo, 20,0 ml) a un RBF de 100 ml y se burbujeó argón con agitación durante un total de 45 min. Se añadió el compuesto CP-1d (1,25 g, 3,01 mmol), bis(binacolato)diboro (0,917 g, 3,61 mmol), acetato de potasio (0,886 g, 9,03 mmol) y Pd(dppf)CÍ<2>(0,066 g, 0,090 mmol) en conjunto en un RBF seco de 250 ml y el matraz se evacuó durante 30 min. El matraz se purgó con argón y se añadió DMS<o>desgasificado. La solución se congeló en un baño de hielo seco/acetona y se colocó al vacío, a continuación se dejó descongelar bajo argón. A continuación, la mezcla de reacción se calentó en un baño de aceite a 85 °C.

[0248] Después de 16 h, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó en EtOAc (100 ml) y se lavó con salmuera (3 x 100 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró.

[0249] El concentrado se añadió puro con un enjuague mínimo de DCM en una columna de sílice de 40 g y se eluyó con MeOH al 0-2 % en DCM. Las fracciones principales del producto se combinaron y concentraron para dar un aceite transparente. El producto se solidificó tras un secado adicional a alto vacío con una barra de agitación presente. Compuesto CP-1 aislado como un sólido ceroso de color blanco (1,224 g, 88 %).

EJEMPLO 2

Síntesis del compuesto BC-1

[0250] El compuesto del título se preparó como se muestra en el Esquema 3 (véase la Figura 3), a partir de dibromo-bacterioclorina descrita anteriormente (BC-SM). Véase Jiang y col. (2014) Organic & Biomolecular Chemistry 12:86-103.

[0251] BC-1a. Se añadió BC-SM (362,8 mg, 0,538 mmol), componente que interviene en la reacción de acoplamiento (es decir, CP-1, véase el Ejemplo 1 anterior; 547,3 mg, 1,184 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (373,0 mg, 0,323 mmol) y carbonato de cesio (525,9 mg, 1,614 mmol) a un RBF de 250 ml secado al horno con barra de agitación y los componentes se secaron a alto vacío durante 1 h. El matraz se purgó con argón y se añadió tolueno/DMF (mezcla 2:1 desgasificada, 53,8 ml en total). El matraz se colocó en un baño de aceite y se calentó a 90 °C en atmósfera de argón.

[0252] Después de 22 h, la mezcla de reacción se enfrió, se añadió tolueno (4 x volumen de DMF) y la mezcla se concentró hasta sequedad. El residuo se disolvió en EtOAc (200 ml) y se lavó con NaHCO<3>ac. sat. agua y salmuera (150 ml para cada uno). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró para dar 1,09 g de residuo de color púrpura.

[0253] El residuo bruto se cargó en sílice (3,28 g) y se eluyó en una columna de sílice de 40 g con 5-30 % de EtOAc en DCM durante 25 min. Las fracciones principales del producto se combinaron, se concentraron y se secaron a alto vacío para proporcionar 0,466 g (73 %) de BC-1a como un sólido de color púrpura.

[0254] BC-1b. Se añadió BC-1a (146,0 mg, 0,123 mmol) a un RBF de 50 ml secado al horno con barra de agitación. El matraz se evacuó y se purgó con argón y se añadió THF (20 ml). Se disolvió NBS (23,0 mg, 0,129 mmol) en THF (4,0 ml) y se añadió rápidamente gota a gota. La mezcla se agitó a temperatura ambiente bajo argón.

[0255] Después de 1,5 h, la reacción se diluyó en DCM (25 ml) y se inactivó con NaHCO<3>ac. sat. (25 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró.

[0256] El residuo se cargó en DCM mínimo (aprox. 5 ml) en una columna de sílice de 12 g y se eluyó con MeOH al 0-3 % en DCM durante 22 min. Las fracciones del pico principal se combinaron, se concentraron y se secaron a alto vacío para proporcionar 0,115 g (79 %) de BC-1b como un sólido de color púrpura.

[0257] BC-1c. Se añadió BC-1b (114,5 mg, 90,6 pmol) con Pd<2>(dba<)3>(12,5 mg, 13,6 pmol) y P(o-tol<)3>(32,0 mg, 105,1 pmol) a un RBF de 25 ml secado al horno con barra de agitación. El matraz se tapó y se evacuó durante 30 min. El matraz se purgó con argón y se añadió DMF (3,63 ml), seguido de trietilamina (0,363 ml) y ácido 6-heptinóico (228,7 mg, 1812,0 pmol). El matraz se calentó en un baño de aceite a 40 °C y se agitó en argón.

[0258] Después de 16 h, la reacción se diluyó con EtOAc (10 x volumen de DMF) y se lavó con un volumen igual de cada uno de HCl ac. 0,2 N, agua y salmuera, secuencialmente. La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, se concentró, se volvió a disolver en tolueno, se concentró y se secó a alto vacío.

[0259] El residuo se cargó en sílice (1,05 g) y se eluyó en una columna de sílice de 24 g con EtOAc al 0-33 % en DCM durante 15 min, con retención hasta que se eluyó cualquier material de partida. El disolvente se cambió a continuación a 0-4 % de MeOH en DCM durante 15 minutos. Las fracciones de pico de producto se combinaron, se concentraron y se secaron a alto vacío para proporcionar 45,0 mg (38 %) de BC-1c como un sólido de color púrpura oscuro.

[0260] BC-1. Se añadió BC-1c (17,5 mg, 13,36 pmol) a un RBF de 25 ml secado al horno con barra de agitación. El matraz se puso al vacío durante 30 min, a continuación se purgó con argón, y el ciclo de vacío/argón se repitió 2x. Se añadió solución de cloruro de hidrógeno (4,0 M en dioxano, 2,9 ml) a granel con agitación y la reacción se agitó bajo argón. Después de 30 min, se interrumpió la agitación y el precipitado se dejó reposar durante 10 min. La mayoría del dioxano se eliminó bajo argón con una jeringa. El residuo se sometió a alto vacío durante 2 h.

[0261] El matraz de reacción se purgó con argón y se añadió tributilamina (5 gotas) y se mezcló con agitación. A continuación, se añadió una solución 2:1 de hexanos/THF (3 ml) y se agitó brevemente. A continuación, la mezcla se sometió a ultrasonidos durante 3 min, se transfirió a tubos de muestra de 1,5 ml y se centrifugó (9000 g x 3 min). El sobrenadante transparente e incoloro se retiró y los tubos se cubrieron con parafilm, que se perforó con una aguja y se colocó en un matraz para que se secara a alto vacío durante la noche.

[0262] El producto intermedio sólido resultante se transfirió a un RBF seco de 25 ml con barra de agitación junto con carbonato de cesio (48,1 mg, 147,6 pmol) y mPEG11-NHS (101,2 mg, 147,6 pmol). El matraz se selló con un tabique, se evacuó, se purgó con argón y se añadió DMF (2,95 ml). La mezcla se protegió de la luz y se agitó en atmósfera de argón durante 2 h.

[0263] La mezcla de reacción bruta se sometió a cromatografía de fase inversa en una columna de oro C18 de 50 g. Las fracciones que contenían el producto se combinaron, se concentraron, se volvieron a disolver en ACN y se volvieron a concentrar. El residuo se secó a alto vacío durante la noche para proporcionar 7,2 mg (16 %) de BC-1 como un semisólido de color púrpura.

[0264] MS: obs. 1645.1, calc. 1644,4 [M 2H]2+; Aabs 378, 545, 754 nm (H<2>O); Factor de corrección: A280/A754 = 0,11; Aem 760 nm (H<2>O); Rendimiento cuántico: 8,2 % (PBS); Coeficiente de ext.: 132.000 M'1 cirr1 (380 nm, tolueno); 104.000 M'1 cm'1 (751 nm, tolueno); FWHM: 26 nm.

[0265] Solubilidad: BC-1 se disolvió en PBS, pH 7,2 (5,8 mg/0,58 ml) a una concentración final de 10 mg/ml. Una parte de esta muestra ("precentrifugación") se diluyó a 10 pM en PBS para una lectura de absorbancia. La muestra inicial de 10 mg/ml se centrifugó en una microcentrífuga a 14.000 g durante 10 min. Se tomó una segunda parte de la muestra centrifugada ("poscentrifugación") y se diluyó a 10 pM en PBS para una lectura de absorbancia. Los datos se muestran en la Tabla 1 a continuación. No se observaron precipitados en la muestra. Los valores de absorbancia se mantuvieron constantes (dentro del error esperado /- 10 %) desde la precentrifugación hasta la poscentrifugación. Una reducción en la absorbancia poscentrifugación indicaría que existían precipitados insolubles en la muestra inicial. Por tanto, se concluye que BC-1 es soluble a 10 mg/ml en PBS, pH 7,2.

T l 1

EJEMPLO 3

Síntesis del compuesto BC-2

[0266] BC-2a se preparó como se muestra en el Esquema 4 (véase la Figura 4). Una mezcla de ácido 5-etinil1,3-bencenodicarboxílico (500 mg, 2,63 mmol), N-(2-aminoetil)carbamato de terc-butilo (2,08 ml, 13,2 mmol), 1 -etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDCI, 2,00 g, 10,4 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (DMAP, 1,48 g, 13,2 mmol) se disolvió en DMF (3,3 ml). El matraz se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla de reacción se cargó directamente en gel de sílice y se cromatografió [sílice, CH<2>Ch/MeOH (<0 - 1 0>%)] para proporcionar un sólido de color blanco. Se descubrió que el sólido resultante contenía DMAP por RMN-1H y, por lo tanto, se volvió a disolver en acetato de etilo y se lavó con HCl acuoso al 1,0 %, se secó sobre Na<2>SO<4>y se concentró para proporcionar BC-2a como un sólido de color blanco (938 mg, 75 %).

[0267] BC-2 se preparó como se muestra en el Esquema 5 (véase la Figura 5), a partir de una di-bromobacterioclorina descrita anteriormente (BC-SM). Véase Jiang y col. (2014) Organic & Biomolecular Chemistry 12:86-103.

[0268] BC-2b. Una mezcla de BC-SM (135 mg, 200 pmol), 4-etinilbenzoato de terc-butilo (48,5 mg, 240 pmol), Pd(Pph<3)4>(23,1 mg, 20,0 pmol) y K<2>CO<3>(276 mg, 2,00 mmol) se colocó en un RBF equipado con un grifo de 3 vías. El matraz se colocó a alto vacío durante 1 h y, a continuación, se desaireó por tres ciclos de evacuación-relleno. Se añadió DMF anhidro (20 ml) a través de una jeringa y la mezcla se calentó a 80 °C durante 16 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo, se lavó con NaHCO<3>acuoso y se secó sobre Na<2>SO<4>. La mezcla resultante se cromatografió [oro de sílice 12 g, hexanos/acetato de etilo (0-40 %)] para proporcionar BC-2b como un sólido oscuro (39,4 mg, 25 %).

[0269] BC-2c. Una mezcla de BC-2b (26,6 mg, 33,4 pmol), BC-2a (79,4 mg, 167 pmol) y (PPI^PdCh (2,3 mg, 3,34 pmol) se colocó en un RBF equipado con un grifo de 3 vías. El matraz se colocó a alto vacío durante 1 h y, a continuación, se desaireó por tres ciclos de evacuación-relleno. Se añadió DMF anhidro/TEA (2:1,10 ml) a través de una jeringa y la mezcla de reacción se calentó a 80 °C durante 16 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo, se lavó con NaHCO<3>acuoso y se secó sobre Na<2>SO<4>. La mezcla resultante se concentró por cromatografía [sílice, hexanos/acetato de etilo (0-40 %)] para proporcionar un BC-2c como un sólido oscuro (11,3 mg, 28 %).

[0270] BC-2. BC-2c (4,4 mg, 3,7 pmol) se trató con HCl 4,0 M en dioxano (926 pl). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente en la oscuridad bajo argón. Después de 4,5 h, la mezcla de reacción se colocó a alto vacío durante 16 h. A la mezcla resultante se le añadió CH<3>(OC<2>H<4>)<24>CONHS (mPEG<24>-NHS, 18,0 mg, 14,8 pmol), Cs<2>CO<3>(19,3 mg, 59,2 pmol) y DMF (926 pl). La mezcla de reacción se agitó y se supervisó mediante LCMS a temperatura ambiente. Después de 2 h, la mezcla de reacción se cromatografió [C18 15,5 g, H<2>O/CH<3>CN (0-40 %)] para proporcionar BC-2 en forma de un sólido de color verde (<1 0 , 8>mg, 93 %). m S: obs. 1066,64, calc. 1066,55 [M 3Na]'3+ M = C<152>H<248>N<8>O<59>; Aabs 383, 533, 792 nm (H<2>O/CH<3>CN); Factor de corrección: A280/A791 = 0,24 (H<2>O/CH<3>CN); Aem 800 nm (DMF, estimado); Coeficiente de ext.: 106.000 M<‘ 1>cm<-1>(791 nm); 83.000 M<‘ 1>cm<-1>(384 nm)' 23.000 M<' 1>cm<' 1>(551 nm) en DMF, estimado.

EJEMPLO 4

Síntesis del compuesto BC-3

[0271] BC-3 se preparó a partir de BC-2 como se muestra en el Esquema<6>(véase la Figura<6>). Se añadió un sólido de tetrafluoroborato de O-(N-succinimidil)-N,N,N',N'-tetra-metiluronio (TSTU; 0,45 mg, 1,51 pmol) a un vial cónico de 5 ml con una paleta de centrifugación. El vial se selló, se evacuó y se purgó con argón. Se disolvió BC-2 (4,3 mg, 1,37 pmol) en DCM (0,5 ml) y se transfirió al vial de reacción, seguido de la adición de trietilamina (0,29 ul, 2,06 pmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. A continuación, se añadió directamente aminoPEG<12>CH<2>CH<2>COOH (4,24 mg, 6,87 pmol) a la mezcla de reacción, seguido de DCM adicional (300 ul) y la mezcla se agitó protegida de la luz a temperatura ambiente en atmósfera de argón.

[0272] Después de 16 h, la reacción se diluyó con DCM y se lavó con NH<4>Cl ac. sat. (2 ml x 2) y a continuación agua (1 ml x 1). Las capas acuosas se retiraron con una pipeta y la capa orgánica se concentró en el vial de reacción. El residuo se disolvió en ACN/agua y se eluyó en una columna Iscogold C18 de 15,5 g. BC-3 se aisló como un semisólido de color rojo oscuro (3,3 g, 65 %) después del secado completo.

EJEMPLO 5

Síntesis del compuesto BC-4

[0273] BC-4 se prepara a partir de BC-2 como se muestra en el Esquema 7 (véase la Figura 7). BC-2 se trata con Zn(OAc)<22>H<2>O (30 equiv.) en DMF (4 mM) y se calienta a 80 °C durante 16 h, después de lo cual la mezcla de reacción se concentra y se purifica mediante LC preparativa de fase inversa.

EJEMPLO<6>

Síntesis del compuesto BC-5

[0274] BC-5 se preparó como se muestra en el Esquema 8 (véase la Figura 8). BC-5a (es decir, 7-bromo-2,3-dihidro-8-(metoxicarbonil)-1-(1,1-dimetoximetil)-3,3-dimetil-dipirrina) se preparó como se describió anteriormente. Véase Jiang y col., Org. Biomol. Chem. 2014, 12, 86-103.

[0275] BC-5b. Se añadió BC-5a (0,771 g, 2,00 mmol) a un RBF secado con llama de 250 ml con una barra de agitación. El matraz se evacuó y se purgó con argón. Se añadió acetonitrilo (111,1 ml) a través de una jeringa. Mientras se agitaba, se añadió rápidamente gota a gota BF<3>OEt<2>(2,96 ml, 24,00 mmol) cerca de la superficie del disolvente. Se observó un cambio de color rápido. El matraz se protegió de la luz y se agitó a temperatura ambiente bajo argón de bajo flujo.

[0276] Después de 16 h, se añadió trietilamina (3,68 ml, 26,4 mmol). El tabique se retiró y la mezcla de reacción se agitó hasta que desapareció la formación de humos. La mezcla de reacción se concentró y se secó además a alto vacío hasta que el matraz ya no se enfriase al tacto.

[0277] El residuo se disolvió en DCM y se preparó como una torta de sílice (5 g). La torta se eluyó en una columna de 80 g de SiO<2>con un gradiente de 20-60 % de DCM en hexanos durante 17 min. Las fracciones principales del producto se combinaron, se concentraron y se secaron a alto vacío para proporcionar 0,11 g (17%) de BC-5b como un sólido de color rojo oscuro.

[0278] BC-5c. A un RBF de 100 ml purgado con argón y secado con llama con una barra de agitación se le añadió BC-5b (56,7 mg, 0,088 mmol) y Zn(OAc)22H2O (579 mg, 2,64 mmol, 30 equiv.). El matraz se selló con un tabique, se evacuó y se purgó con argón. Se añadió DMF (13,9 ml) y el matraz se añadió a un baño de aceite precalentado a 80 °C y se agitó bajo argón de bajo flujo durante la noche.

[0279] Después de 17 h, la mezcla de reacción se diluyó con DCM (5x volumen de DMF) y la capa orgánica se lavó con NaHCO<3>ac. sat. (3x volumen de DMF DCM) hasta que la capa acuosa parecía transparente. La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró, se concentró y se secó además a alto vacío. El residuo se transfirió a un vial de 20 ml en DCM y se secó a alto vacío para dar 61,6 mg (99 %) de sólido de color rojo oscuro. El material se llevó a cabo sin purificación adicional.

[0280] BC-5d. A un RBF secado al horno de 25 ml con barra de agitación secada a alto vacío y purgado con argón se le añadió BC-5c (17,7 mg, 25,0 jmol), benzoato de t-butil-4-etinilo (12,6 mg, 62,5 jmol, 2,5 equiv.), BC-2a (preparado como se describe en el Ejemplo 3 anterior; 17,8 mg, 37,5 jmol, 1,5 equiv.), Pd(PPh<3>)<2>Ch (4,4 mg, 6,25 |jmol, 0,25 equiv.) y Cul (2,4 mg, 12,5 jmol, 0,5 equiv.). Se determinaron las reactividades relativas de los dos componentes que intervienen en la reacción de acoplamiento benzoato de t-butil-4-etinilo y BC-2a supervisando los productos de reacción por HPLC de fase inversa. El matraz se selló con tabique (el tabique también se selló en la base con parafilm) y se evacuó/se purgó con argón (3x). Se añadió tolueno (4,17 ml), se inició la agitación y se añadió trietilamina (2,08 ml). El matraz se bajó a un baño de aceite precalentado a 85 °C y se agitó bajo argón de bajo flujo.

[0281] Después de 16 h, el matraz se retiró del baño de aceite y los residuos se disolvieron en el matraz con EtOAc hasta un volumen total aproximado de 12 ml. La mezcla de reacción se concentró hasta sequedad, a continuación se disolvió en DCM y se preparó como una torta de sílice (475 mg de SiO<2>en total en 2 cargas). La torta se eluyó en una columna de SiO<2>de 12 g con EtOAc al 20-50 % en hexano durante 7 min. Después de que el primer producto principal se hubiese eluido, el sistema de disolvente se cambió a un gradiente de MeOH al 0-5 % en DCM durante 5 min. El producto deseado se eluyó durante esta fase. Las fracciones principales del producto se combinaron, concentraron y secaron a alto vacío para dar 18,9 mg (62 %) de BC-5d como un sólido de color verde.

[0282] BC-5. A un RBF de 10 ml secado al horno se le añadió BC-5d (18,0 mg, 14,72 jmol). El matraz se selló con un tabique, se evacuó y se purgó con argón. Se añadió solución de HCl (2,0 ml). La reacción se protegió de la luz y se agitó en argón.

[0283] Después de 4 h, el matraz se puso en un baño de agua caliente y se purgó con argón de flujo rápido con ventilación de la aguja de salida hasta que se hubo eliminado todo el disolvente. A continuación, se retiró la ventilación y el matraz se equipó con un adaptador de vidrio y se colocó a alto vacío durante la noche. El producto se hizo avanzar sin purificación adicional.

[0284] El residuo (en un RBF de 10 ml) se puso en argón. La barra de agitación todavía estaba presente. Se añadió un sólido de PEG<24>NHS (55,6 mg, 44,16 jmol, 3,0 equiv.). El matraz se evacuó y se purgó con argón. Se añadió DMF (3,68 ml), seguido rápidamente de trietilamina (24,6 jl, 176,64 jmol, 12,0 equiv.) añadida por pipeta. El matraz se protegió de la luz y se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h, cuando se determinó que la reacción se había completado por LCMS.

[0285] Se añadió Zn(OAc)<2>(81,0 mg, 441,6 jmol, 30,0 equiv.) y el matraz de reacción se colocó en un baño de aceite calentado a 60 °C. Después de 2 h, sólo se observó una ligera conversión. La mezcla de reacción se calentó en un microondas a 100 °C durante 10 min, y a continuación a 110 °C durante 20 min, después de lo cual se observó que la reacción se había completado por LCMS. La mezcla de reacción se concentró para eliminar DMF y el residuo se disolvió en ACN al 40 % en agua (1,3 ml) y se sometió a LC preparativa de fase inversa con un gradiente de ACN al 35-85 % en agua durante 35 min. Los picos principales del producto se combinaron, se concentraron, se transfirieron a un vial de almacenamiento en ACN, se concentraron y se secaron a alto vacío para dar 13,3 mg (28 % de BC-5d) de BC-5 como un residuo de color verde.

[0286] MS: obs. 1627,4, calc. 1626,8 [M 2H]2+; Aabs 345, 595, 839 (CH<3>CN); Xem 855 nm (CH<3>CN); FWHM: 35 nm (CH<3>CN); Aabs 345, 609, 848 (H<2>O); Aem 863 nm (H<2>O); FWHM: 38 nm (H<2>O);

EJEMPLO 7

Síntesis del compuesto BC-6

[0287] BC-6. El compuesto del título se preparó a partir de BC-5 como se muestra en el Esquema 9 (véase la Figura 9). Se añadió tetrafluoroborato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(N-succinimidil)uronio (TSTU, 0,61 mg, 2,03 pmol) a un vial cónico seco de 5 ml con una paleta de centrifugación. El vial se tapó con un tabique, se evacuó y se purgó con argón. Se añadió BC-5 (6,0 mg, 1,84 pmol), disuelto en DCM (0,75 ml), mediante jeringa, seguido de la adición directa de trietilamina (0,39 pl, 2,77 pmol) mediante pipeta. El vial estaba protegido de la luz y la mezcla se agitó a temperatura ambiente. Después de 1,5 h, se determinó que la formación del producto intermedio de éster de NHS se había completado por LCMS. El ácido aminoPEG<12>se añadió directamente al vial de reacción a granel como un sólido. El vial se volvió a sellar, se purgó con argón y se agitó a temperatura ambiente durante 16 h.

[0288] Se retiró el DCM y la muestra se cargó en ACN al 40 % en agua en una columna C18250 x 20 con un gradiente de ACN al 40-70 % en agua durante 30 min. Las fracciones de producto principales se combinaron, se concentraron y se secaron a alto vacío para dar 5,0 mg (70 %) de BC-6 como un semisólido de color verde. UV-Vis: 346/392, 602, >800 nm.

EJEMPLO 8

Síntesis del compuesto BC-7

[0289] BC-7a. El compuesto del título se preparó como se muestra en el Esquema 10 (véase la Figura 10). Se añadió TSTU (0,444 g, 1,48 mmol) a una solución de ácido 4-etinilbenzoico (0,196 g, 1,34 mmol), trietilamina (0,47 ml, 3,38 mmol) y CH<2>Ch (10 ml) a temperatura ambiente. La solución se agitó durante 1 h a esta temperatura y se añadió H-Lys(Boc)-OtBu HCl (0,5 g, 1,48 mmol). La solución se agitó a temperatura ambiente durante la noche y a continuación se diluyó con CH<2>Ch (20 ml). La solución de CH<2>Ch se lavó con NH<4>Cl acuoso saturado (2 x 20 ml), agua (2 x 20 ml) y salmuera (20 ml). La capa orgánica se secó, se filtró y se concentró. El producto bruto se cargó en seco en gel de sílice (~1,5 g) y se purificó en una columna Isco de 12 g que se eluyó con un gradiente de hexanos:EtOAc (100:0 a 1:1). El producto deseado se aisló como una espuma vítrea de color amarillo pálido, que se solidificó tras un secado prolongado a alto vacío (0,35 g, 61 %). LCMS: 7,92 min; MS: 431.

[0290] BC-7b. Como se muestra en el Esquema 11 (véase la Figura 11), se añadió BC-5c (17,7 mg, 25,0 pmol), BC-2a (23,7 mg, 50,0 pmol), BC-7a (21,5 mg, 50,0 pmol), Pd(PPh<3>)<2>Ch (4,4 mg, 6,25 pmol) y yoduro de cobre (I) (2,4 mg, 12,5 pmol) a un vial a presión de 20 ml secado al horno y purgado con argón con barra de agitación. El vial se selló con un tabique y se evacuó/se purgó con argón (3x). Se añadió tolueno y trietilamina y el tabique se cambió rápidamente con un tapón de rosca del vial. El vial se calentó en un baño de aceite precalentado a 100 °C durante 16 h.

[0291] El vial se enfrió y se transfirió a un RBF de 100 ml con un enjuague de EtOAc. Los disolventes se eliminaron y el residuo se secó además a alto vacío durante 30 min. La muestra se preparó como una torta de sílice (450 mg) y la torta se eluyó en una columna de SO<2>(24 g) con 0-5 % de MeOH en gradiente de DCM durante 20 min. Las fracciones principales del producto se combinaron y se concentraron para dar 13,9 mg de BC-7b como un sólido de color verde oscuro (38 %).

[0292] BC-7. Como se muestra además en el Esquema 11 anterior, BC-7b (13,9 mg, 9,58 pmol) se secó en un RBF de 10 ml. Se añadió una barra de agitación y el matraz se selló con un tabique, se evacuó y se purgó con argón (2x). Se añadió solución de HCl (1,9 ml de HCl 4,0 M en dioxano) a granel con agitación. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 h.

[0293] A continuación, el matraz se ventiló con una aguja, se colocó en un baño de agua caliente y se purgó con argón de flujo rápido hasta que se hubo eliminado todo el líquido. A continuación, se retiró la ventilación de la aguja y la reacción se colocó a alto vacío durante 2 h. El matraz se purgó con argón y se añadió tributilamina (50 pl) y la mezcla se agitó. A continuación, se añadió hexanos/THF (2:1, 3 ml) y la solución se sometió a ultrasonidos. La suspensión se transfirió a tubos de centrífuga 1.5 y se centrifugó a 11 K g durante 3 min. El sobrenadante se eliminó. Se añadió hexanos/THF 2:1 a los tubos de centrífuga, que a continuación se sometieron a ensayo y se centrifugaron de nuevo a 11 K g durante 3 min. Este ciclo se repitió una vez más. El sobrenadante se eliminó, los tubos se cubrieron con parafilm, se perforaron con una aguja de calibre 20, se colocaron dentro de un RBF de 100 ml y se sometieron a alto vacío durante 30 min, a continuación se purgaron con argón. Se aislaron 9,3 mg de sólido de color rojo oscuro (94 %).

[0294] Se añadió el producto desprotegido (8,8 mg, 8,53 pmol), mPEG24-NHS (64,4 mg, 51,18 pmol) y carbonato de cesio (33,4 mg, 102,36 pmol) a un RBF de 10 ml purgado con argón con una barra de agitación. El matraz se evacuó y se purgó con argón y se añadió DMF (2,13 ml). La reacción se protegió de la luz y se agitó a temperatura ambiente en atmósfera de argón. Después de 1,5 h, se añadió agua (0,5 ml) y la solución se concentró. El residuo se diluyó en agua (1 ml) y se sometió a LC preparativa de fase inversa con un gradiente de ACN al 10-85 % en agua durante 35 min. Las fracciones principales del producto se combinaron, se concentraron y se secaron para dar un residuo de color rojo oscuro (5,1 mg, 13 %).

[0295] El producto intermedio pegilado (6,8 mg, 1,52 pmol) se secó en un vial de vidrio de 4 ml con barra de agitación y se añadió Zn(OAc)22H2O (10,0 mg, 45,73 pmol), seguido de DMF (0,6 ml). El vial se equipó con un adaptador con una entrada de argón y se calentó en un baño de aceite a 60 °C. Después de 16 h, se retiró la barra de agitación y se concentró la reacción. El residuo se disolvió en agua (0,7 ml) y se sometió a LC preparativa de fase inversa con un gradiente de ACN al 10-85 % en agua durante 30 min. Se aislaron 3,9 mg (57 %) de BC-7 como un semisólido de color verde oscuro.

EJEMPLO 9

Síntesis del compuesto BC-8

[0296] BC-8. El compuesto del título se preparó como se muestra en el Esquema 12 (véase la Figura 12), a partir de BC-5d. BC-5d (18,9 mg, 15,46 pmol, preparado como se describe en el Ejemplo 6) se secó en un RBF de 10 ml con una barra de agitación. El matraz se selló con un tabique, se evacuó y se purgó con argón (2x). Se añadió solución de HCl (2,1 ml de 4,0 M en dioxano) a granel con agitación. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4,5 h. El disolvente se eliminó mediante un flujo rápido de argón con salida de aguja (aprox. 30 min). A continuación, el matraz se colocó a alto vacío durante 16 h.

[0297] El residuo se disolvió en DMF (3,87 ml, 4,0 mM) y se añadió trietilamina (25,9 pl, 185,5 pmol). Se añadió el sólido de éster de NHSPEG<4>-(mPEG-i<2)3>(89,8 mg, 37,1 pmol). La mezcla se agitó durante 1 h.

[0298] Se añadió Zn(OAc)22H2O (101,8 mg, 463,8 pmol) a granel y el matraz de reacción se transfirió a un baño de aceite a 80 °C. La reacción se completó después de 4 h. El disolvente se eliminó y el residuo se disolvió en ACN al 40 % en agua (1,4 ml) y se sometió a cromatografía preparativa de fase inversa con un gradiente de ACN al 35-85 % en agua durante 35 min. El producto principal BC-8 se aisló después del secado completo como 12,0 mg de semisólido de color verde oscuro (14 % de BC-5d).

EJEMPLO 10

Síntesis del éster bis-t-butílico de NIRvana 880

[0299] Dialcohol de HBC12. El éster bis-t-butílico de NIRvana 880 se sintetizó como se establece en el Esquema 13, que se muestra en la Figura 13. Se añadió HBC12 (115,7 mg, 179,6 umol) a RBF secado con llama con barra de agitación. El matraz se evacuó y se purgó con argón, y se añadió DCM (18,0 ml, 10 mM). La solución se enfrió a -78 °C y se añadió DIBAL-H (1,0 M en tolueno, 1,437 ml) gota a gota durante 2 min. La reacción se agitó y se equilibró gradualmente a temperatura ambiente. La agitación continuó durante un total de 4 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se inactivó con sal de Rochelle ac. sat. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. El sólido de color verde oscuro aislado se llevó a cabo sin purificación adicional.

[0300] Dialdehído de HBC12. Se añadió dialcohol de HBC12 (108,2 mg, 183,9 umol), tamices moleculares de 4 angstroms (en polvo, 92,0 mg, 0,5 mg/umol de dialcohol) y N-metilmorfolina (seca, 107,7 mg, 919,5 umol, 5 equiv.) a un RBF de 50 ml secado al horno con barra de agitación. El matraz se evacuó y se purgó con argón y se añadió DCM/ACN (9:1, 9,3 ml en total, 20 mM), seguido de la adición de perrutenato de tetrapropilamonio (TPAP, 12,9 mg, 36,8 mmol, 20 % en moles) a granel. El matraz se cubrió con papel de aluminio y se agitó a temperatura ambiente durante 3,5 h. La mezcla de reacción se filtró a través de una almohadilla de Celite cubierta con arena y se lavó con DCM. Los filtrados se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio. La solución se filtró, se concentró hasta sequedad y se purificó en una columna de sílice de 40 g con 25-65 % de DCM en hexanos hasta que todo el producto deseado se eluyese. Se aislaron 36,2 mg (34 %) de sólido de color rojo.

[0301] Dialdehído de ZnHBC12. Se añadió dialdehído de HBC12 (8,0 mg, 13,7 umol) a un RBF secado al horno de 25 ml con barra de agitación y se añadió Zn(OAc)22H2O (90,2 mg, 411 umol). El matraz se selló con un tabique, se evacuó y se purgó con argón, y se añadió DMF (2,74 ml). El matraz se bajó a un baño de aceite precalentado. La reacción se calentó a 75 °C durante 4 h. La reacción se enfrió, se diluyó con DCM y se inactivó con bicarbonato de sodio ac. sat. La capa orgánica se separó y se lavó además con bicarbonato de sodio acuoso saturado. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. El producto se llevó a cabo sin purificación adicional (rendimiento casi cuantitativo del producto sólido).

[0302] Éster bis-t-butílico de NIRvana 880. Se añadió dialdehído de ZnHBC12 (10,0 mg, 15,44 umol), benzoato de t-butiletinilo, Pd(PPh<3>)<2>Ch (2,7 mg, 3,86 umol) y CuI (1,5 mg, 7,72 umol) a un RBF junto con una barra de agitación. El matraz se selló con un tabique, se evacuó y se purgó con argón. Se añadió tolueno/trietilamina (2:1, 3,9 ml en total) y la reacción se calentó a 85 °C durante 4 h. La mezcla de reacción se concentró y se purificó por cromatografía en columna. MS: [M H]+ calc. 889,3; obs. agrupamiento 888,3-890,4; UV (ACN): 352, 404, 613, 763, 859 nm; em máx (ACN): 876 nm.

EJEMPLO 11

Citometría de flujo

[0303] Instrumentación: Las muestras se analizaron en un citómetro de flujo SORP LSR-II de diecinueve parámetros (BD Biosciences, San José, California, Estados Unidos de América) equipado con 7 láseres (355, 405, 488, 532, 561, 594 y 633 nm) o un LSRFortessa (BD Biosciences, San José, California, Estados Unidos de América) equipado con 5 láseres (355, 405,488, 561 y 640 nm) y usando el software de adquisición FACSDiva 8.0. Los datos de BC-1 usaron un láser de 100 mW y 355 nm con un filtro de 690 LP y un filtro de 780/60 BP en el Canal A. El análisis posexperimental se realizó con el software FlowJo (versión 10.0.8, FlowJo, LLC, Ashland, Oregón, Estados Unidos de América).

[0304] Bioconjugación de anticuerpos: Las soluciones se prepararon en tubos de microcentrífuga a partir de 106 |jl de 9,4 mg/ml (1,0 mg) de anticuerpo monoclonal de ratón anti-CD8 humano (clon UCHT-4, Leinco Technologies, Inc., St. Louis, Missouri, Estados Unidos de América), 15 j l de bicarbonato 1 M (pH 8,4) y 44 ml de éster de NHS de colorante PEGilado en PBS (entre 5 y 20 equivalentes molares). Los tubos se protegieron de la luz y giraron suavemente durante 1-2 horas a temperatura ambiente. La reacción se inactivó por la adición de 15 j l de Tris 200 jM a temperatura ambiente durante 1 hora más. Los bioconjugados se purificaron usando columnas de cromatografía de exclusión por tamaño Sephadex G50M, G75M o G100M eluyendo con PBS. Los bioconjugados de anticuerpos preparados a partir de colorantes con cadenas de PEG más largas (12 unidades o más) típicamente se purificaron con los medios G75M o G100M. Las fracciones de columna se caracterizaron por absorciones a 280 nm (proteína) y los máximos de absorción de colorante rojo o NIR. Las relaciones de marcado de fluoróforo a proteína (F/P) de las fracciones agrupadas se determinaron a partir de estos dos máximos con correcciones para la absorción del colorante a 280 nm.

[0305] Tinción de células: Las células mononucleares de sangre periférica humana(Peripheral Blood Mononuclear Cells,PBMC) crioconservadas se obtuvieron de ZenBio, Inc. (Research Triangle Park, Carolina del Norte, Estados Unidos de América; Producto SER-PBMC-F), se descongelaron y se prepararon para la tinción según las pautas del proveedor. Las células se dividieron en seis tubos de microcentrífuga de 1,5 ml y se centrifugaron a 400 x g (2000 rpm) durante 5 minutos. Las células se lavaron tres veces con tampón de lavado (PBS con BSA al 0,5 %) y se volvieron a suspender en 0,5 ml de tampón de lavado. Se diluyó una alícuota 1:2 con azul de tripano y se determinó el número de células y la viabilidad contando el cuadrado de 4 nl en un hemocitómetro. La viabilidad típicamente era >96 %. Las células se diluyeron a 1 x 106/ml con tampón de lavado y se dividieron en alícuotas de 50 j l (500.000 células) en tubos de microcentrífuga. Típicamente, una concentración máxima de anticuerpo marcado fue de 4,74 jg/5 x 105 células (designadas 3,16X) y se prepararon diluciones semilogarítmicas. Para todos los anticuerpos, excepto los de control, estas diluciones se hicieron de forma que se añadieran 15 j l a las alícuotas de células. Las células y los anticuerpos se incubaron con mezcla durante 30 minutos a TA. Cada tubo se lavó dos veces con 1 ml de tampón de lavado, a continuación las células se volvieron a suspender en 0,5 ml de tampón de lavado que contenía formaldehído al 1 %. Las muestras se filtraron a través de una tela de filtración de nailon en tubos de citometría de flujo antes de la caracterización por citometría de flujo.

[0306] Según sea necesario, los bioconjugados de control positivo se seleccionaron de CD8 (UCHT-4)-isotiocianato de fluoresceína (FITC) (Leinco Technologies, Inc., St. Louis, Missouri, Estados Unidos de América; cat. n.° C119). El anticuerpo CD4 (RPA-T4)-BUV737 (BD Biosciences, San José, California, Estados Unidos de América; n.° de catálogo 564306) y/o el anticuerpo CD8 (UCHT-4)-DY650 (Leinco Technologies, Inc., St. Louis, Missouri, Estados Unidos de América; n.° de catálogo C2064) y se titularon con PBMC por los mismos procedimientos generales. El índice de tinción(Stain Index,SI) se calculó a partir de los valores medios de intensidad de fluorescencia(mean fluorescence intensity,MFI) según Maecker y col. (2004) Cytometry A 62:169-173 de la siguiente manera: SI = (M ed ia :pos itiva -M ed ia :fondo )/(2xD T .fondo )

[0307] La Tabla 2, a continuación, muestra los datos del índice de tinción para titulaciones de bioconjugados anti-CD8 de BC-1,así como para un bioconjugado anti-CD8 de una bacterioclorina pegilada similar a BC-1, comprendiendo sólo cadenas de PEG4 en lugar de cadenas de PEG12.

Para la comparación, el bioconjugado anti-CD8 preparado a partir de FITC (Leinco Technologies, Inc., St. Louis, Missouri, Estados Unidos de América; Catálogo N.° C119) también se proporciona.

[0308] Estos resultados muestran una mejora significativa en el rendimiento para el diseño de pegilación de BC-1 en comparación con la bacterioclorina pegilada PEG4.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de Fórmula (II):

donde: M es un metal o es -H, -H; R<5>, R<10>y R<15>se seleccionan independientemente de H, alcoxi y un grupo enlazador que tiene la fórmula: -L1-(X1-L2)p-G; donde p es 0 o 1; L<1>es alquilideno; X<1>es -C(=O)NH- o -NHC(=O)-; L<2>es -(CH<2>CH<2>O)q-alquileno-, donde q es un número entero entre 1 y 24, alquileno, o alquileno sustituido, opcionalmente donde alquileno sustituido es alquileno sustituido por uno o más grupos comprendiendo una cadena de polioxietileno y/o un grupo amida; y G es un grupo bioconjugable; R<2>es

y R<3>, R<12>y R<13>se seleccionan independientemente de H, ciano, halo, perhaloalquilo, sulfonato, sulfonamida, éster, ácido carboxílico, formilo, acetilo, un grupo enlazador que tiene la fórmula -L r(X rL<2>)p-G y un grupo solubilizante, donde el grupo solubilizante se selecciona de -arilo-(Rs)w y -alquinilo-arilo-(Rs)w, donde w es un número entero entre 0 y 5 inclusive, y Rs es un grupo que tiene la fórmula: -X2-(L3)<z>-R17, donde: z es 0 o 1; X<2>es -CH<2>NHC(=O)-, -C(=O)NH-alquileno-NH-, o triazolilo; L<3>es -C(=O)-alquileno-C(=O)-NH-, y R<17>se selecciona de -(C<2>H<4>O)m-R<18>, -C(=O)C2H4-(OC2H4)mOR18, y -(C<2>H<4>O)n-C<2>H<4>-C(=O)NH-C(R<1>g)<3>, donde m es un número entero de 12 o más; n es un número entero entre 1 y 5; R<18>es alquilo inferior, opcionalmente metilo; y R<19>es -CH<2>O-C<2>H<4>-C(=O)NH-(C<2>H<4>O)mR18; sujeto a la condición de que al menos uno de R<2>, R<3>, R<12>y R<13>sea -arilo-(Rs)w o -alquinilo-arilo-(Rs)w.
2. El compuesto según la reivindicación 1, donde M es Zn y/o donde R<5>, R<10>y R<15>se seleccionan independientemente de H, metoxi y un grupo enlazador que tiene la fórmula: -L r(X rL<2>)p-G, y/o, donde R<3>y R<13>son cada uno éster, opcionalmente -C(=O)OCH<3>.
3. El compuesto según la reivindicación 1 o 2, donde cada Rs es un grupo que tiene la fórmula: -X2-(L3)z-R17, donde: z es 0; X<2>es -C(=O)NH-alquileno-NH-; y R<17>es -C(=O)C2H4-(OC2H4)mOR18, donde m es un número entero de 12 o más, y R<18>es metilo, preferentemente cada Rs es:

y/o donde cada Rs es un grupo que tiene la fórmula: -X2-(L3)z-Rl7, donde:<z>es 1; X<2>es -C(=O)NH-alquileno-NH-; L<3>es -C(=O)-propileno-C(=O)-NH; y R<17>es -(C<2>H<4>OVC<2>H<4>-C(=O)NH-C(R-ig)<3>, donde n es un número entero entre 1 y 5, opcionalmente 4; y cada R<19>es -CH<2>O-C<2>H<4>-C(=O)NH-(C<2>H<4>O)mR<18>, donde m es un número entero de 12 o más, opcionalmente donde m es 12; y R<18>es metilo.
4. El compuesto según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, donde R<2>y R<12>no son iguales o donde R<3>y R<13>no son iguales, preferentemente, donde uno de R<2>y R<12>es un grupo solubilizante seleccionado de -arilo-(Rs)w y -alquinilo-arilo-(Rs)w y uno de R<2>y R<12>es un grupo enlazador que tiene la fórmula -Lr(X<1>-L<2>)p-G o donde uno de R<3>y R<13>es un grupo solubilizante seleccionado de -arilo-(Rs)w y -alquinilo-arilo-(Rs)w y uno de R<3>y R<13>es un grupo enlazador que tiene la fórmula -L<1>-(X<1>-L<2>)p-G.
5. El compuesto según la reivindicación 4, donde R<12>es un grupo enlazador que tiene la fórmula: -L<1>-(X<1>-L<2>)p-G, preferentemente, donde R<12>es un grupo que tiene la fórmula: -L1-(X1-L2)p-G; donde p es 0; L<1>es aralquinileno; y G es un grupo bioconjugable, más preferentemente, donde R<12>es:

donde G se selecciona de ácido carboxílico y un éster activo. y/o, donde R<12>es un grupo que tiene la fórmula: -L1-(X1-L2)p-G; donde p es 1; L<1>es aralquinileno; X<1>es -C(=O)NH-; L<2>es alquileno sustituido por uno o más grupos comprendiendo una cadena de polioxietileno y/o un grupo amida; y G es un grupo bioconjugable, preferentemente, donde L<1>es -C<e>C-(C<6>H<4>)-, preferentemente, donde L<2>es -CH(R)-, donde R es alquileno-NH-C(=O)-alquileno-(OC<2>H<4>)q-OR<16>, donde q es un número entero entre 12 y 24 y R<16>es metilo.
6. El compuesto según la reivindicación 1, donde el compuesto se selecciona de: