ES2995382B2 - Metodo para mejorar el cultivo de plantas en condiciones de estres abiotico - Google Patents
Metodo para mejorar el cultivo de plantas en condiciones de estres abioticoInfo
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Description
DESCRIPCIÓN
MÉTODO PARA MEJORAR EL CULTIVO DE PLANTAS EN CONDICIONES DE ESTRÉS ABIÓTICO
Campo de la invención
La presente invención se engloba dentro del sector de la agricultura. En concreto se refiere a métodos destinados a mejorar el cultivo de plantas en condiciones de estrés abiótico a través de la aplicación de composiciones bioestimulantes a las partes aéreas de las plantas.
Antecedentes
La sequía y la salinización causadas por el calentamiento global son, con diferencia, los principales factores de estrés ambiental en la agricultura que limitan la productividad global de los principales cultivos al reducir directamente el rendimiento potencial de las plantas, pero también al influir indirectamente en sus interacciones con factores bióticos que desempeñan un papel fundamental en la seguridad alimentaria mundial. Los cambios climáticos previstos tendrán efectos adversos sobre el rendimiento y la funcionalidad de los cultivos, principalmente en cereales (arroz, trigo y maíz), tomate, girasol y algodón1,2. En los países mediterráneos del sur de Europa, se prevé que la sequía y la salinización reduzcan gravemente el rendimiento y la calidad de importantes especies hortícolas como el tomate. Esta reducción será especialmente grave en España, que es uno de los productores de tomate más importantes del mundo. Además de los problemas derivados del calentamiento global provocado por la acción humana, el daño medioambiental infligido por las prácticas basadas en el agotamiento del suelo y de los recursos hídricos y en la aplicación intensiva de fertilizantes a base de nitrógeno y fosfato se ha convertido en una importante limitación de la agricultura convencional. Por lo tanto, es obligatorio establecer estrategias para una agricultura sostenible y respetuosa con el medio ambiente destinadas a mejorar el rendimiento de los cultivos, la tolerancia a la sequía y la salinidad y la eficiencia en el uso del agua y los nutrientes, reduciendo al mismo tiempo el impacto negativo de los productos agroquímicos en el medio ambiente. En los últimos diez años, la recopilación de pruebas ha demostrado que muchos de estos objetivos pueden alcanzarse mediante el uso de bioestimulantes, que se definen como cualquier sustancia o microorganismo aplicado a las plantas que estimula los procesos naturales para mejorar la eficiencia de los nutrientes, la tolerancia al estrés abiótico y/o los rasgos de calidad de los cultivos, independientemente de su contenido en nutrientes3.
Las plantas no son organismos axénicos, sino metaorganismos que albergan un complejo y dinámico consorcio microbiano de bacterias, hongos, arqueas y protistas que se comunican con las plantas mediante el intercambio de señales químicas en toda la fitosfera. Estas interacciones simbióticas son importantes no solo para la productividad, la calidad y la aptitud de las plantas, sino también para el funcionamiento de los ecosistemas terrestres4,5,6. Por lo tanto, comprender las relaciones entre el crecimiento de las plantas y las poblaciones microbianas del suelo es necesario cuando se buscan nuevas y eficientes estrategias agrícolas y de intensificación ecológica para mejorar el rendimiento y la tolerancia a los estreses abióticos y bióticos. Una práctica común, segura y respetuosa con el medio ambiente para aumentar el rendimiento de los cultivos y/o proteger las plantas del estrés abiótico y las plagas, reduciendo al mismo tiempo el uso de agroquímicos, se basa en la inoculación del suelo con microorganismos promotores del crecimiento vegetal que actúan como bioestimulantes7,8,9,10,11.
La patente estadounidense US8716001B2 describe un método para potenciar el crecimiento de las plantas que comprende poner en contacto una cepa deTrichodermacon la planta en condiciones eficaces para que la cepa deTrichodermacolonice las raíces de la planta, creando así un sistema planta-Trichoderma.La patente describe métodos para mejorar la resistencia de las plantas al estrés abiótico, aumentar la eficacia del uso de nitrógeno en las plantas, reducir las emisiones de óxido nitroso en el aire, reducir la lixiviación de nitratos en el suelo y el agua y mejorar el secuestro de carbono del aire.
La solicitud de patente estadounidense US2020275618 también describe un sistema de plantas que fomenta la resistencia de plantas a condiciones de cultivo de estrés abiótico que comprende una pluralidad de plantas en un sustrato; una comunidad fúngica micorriza en el sustrato dispuesta para formar una interfaz biológica con las raíces de las plantas que permite un intercambio de sustancias químicas entre el hongo y la pluralidad de plantas; y al menos un sensor que interactúa con dicha comunidad de hongos micorrízicos y está configurado para recopilar información sensorial sobre una condición fisiológica y un estado fenotípico de dicha pluralidad de plantas.
La patente estadounidense US11118159 se refiere a la bacteria endófita del desierto SA187 que puede proporcionar resistencia o tolerancia a condiciones de estrés abiótico a semillas o plantas. Las composiciones que contienen SA187 se pueden usar para mejorar el desarrollo y el rendimiento d l l t en condiciones de estrés ambiental.
Aunque los productos microbianos tienen un enorme potencial para contribuir al crecimiento económico y al desarrollo sostenible de la agricultura, muchos retos limitan la adopción generalizada de esta tecnología en todo el mundo.
Las limitaciones en su aplicación suelen estar relacionadas con la diferencia de eficacia de los productos microbianos desde condiciones controladas ya sea en laboratorio o invernadero, a condiciones de campo12. Incluso es posible que la eficacia de un producto microbiano varie en función del tipo de suelo, cultivo o entorno utilizado, lo que limita la adopción más amplia del mismo por parte de los agricultores13. La eficacia del producto puede verse comprometida incluso porque las comunidades microbianas autóctonas asociadas a una planta o al suelo pueden llegar a superar a los microbios inoculados, haciendo desaparecer a estos últimos en cuestión de semanas o a persistir en niveles bajos e ineficaces14.
Otros factores, como las condiciones climáticas extremas, las características del suelo y la presencia de contaminantes ambientales o del suelo también pueden disminuir la eficacia de una cepa respecto a la efectividad de la misma cepa en condiciones controladas.
Adicionalmente, otros problemas prácticos del uso de inoculantes microbianos son la incompatibilidad con productos agroquímicos o con el equipo y las prácticas de producción del agricultor. Por último, también son destacables los problemas de almacenamiento y transporte de este tipo de productos, así como las dificultades prácticas correspondientes para implementar su uso en regiones en desarrollo, tanto por falta de conocimiento científico como por falta de concienciación15.
Los microorganismos beneficiosos aplicados directamente al suelo emiten sustancias difusibles que incluyen fitohormonas, carbohidratos, proteínas, ácidos grasos, flavonoles, ácidos orgánicos, aminoácidos y compuestos volátiles que promueven la ramificación de las raíces y la absorción de nutrientes, mejoran la fotosíntesis, alteran el metabolismo, confieren resistencia a estreses abióticos y patógenos16,17, y estimulan las comunidades microbianas beneficiosas residentes en el suelo y la fitosfera
18,19,20,21,22, impulsando así el crecimiento y el rendimiento de las plantas. De forma coherente, los estudios agronómicos han demostrado que la aplicación al suelo de filtrados de cultivos libres de células (FC) de microbios beneficiosos asociados a las plantas mejora la germinación de las semillas, el crecimiento de las plántulas y el rendimiento de los cultivos23,24,11.
Los autores de la presente invención han demostrado anteriormente que la aplicación al suelo de filtrados libres de células d l h b ficiosoTrichoderma harzianumy de fitopatógenos fúngicos (por ejemplo,Alternaría alternatayPenicillium aurantiogriseum)promueve el crecimiento de las raíces y mejora el rendimiento de plantas de pimiento cultivadas en condiciones óptimas de riego25. Por lo tanto, los filtrados libres de células de hongos beneficiosos y fitopatógenos pueden utilizarse como bioestimulantes para mejorar el rendimiento de los cultivos, tal y como se describe en la solicitud de patente internacional WO 2011/135121 A2. Los análisis composicionales de estos filtrados fúngicos libres de células revelaron la presencia de compuestos orgánicos volátiles (COVs), algunos de los cuales han demostrado promover el crecimiento de las plantas 25.
Así la presente invención propone una solución a los problemas técnicos identificados anteriormente, especialmente respecto a métodos para mejorar el rendimiento y la eficacia de cultivo de plantas en condiciones de estrés abiótico, en particular alta salinidad y escasez de agua. Dicha solución se basa en un método que combina dos características técnicas esenciales como son la aplicación a las partes aéreas de la planta de un producto bioestimulante y la selección del determinado producto bioestimulante como un filtrado libre de células obtenido del cultivo de hongos pertenecientes al géneroTrichoderma.
Descripción de la invención
En un aspecto, la presente invención proporciona un método para mejorar el rendimiento, de cultivo de una planta en condiciones de estrés abiótico; es decir un método para aumentar la tolerancia de las plantas al estrés abiótico que comprende: hacer crecer una planta en un sustrato vegetal en presencia de nutrientes; y aplicar sobre las partes aéreas de la planta una cantidad eficaz de una composición bioestimulante para dotar a la planta de resistencia al estrés abiótico, donde la composición bioestimulante comprende un filtrado de cultivo libre de células de uno o más hongos del géneroTrichoderma.
En un aspecto adicional, la invención se refiere al método anterior, donde el filtrado de cultivo libre de células de uno o más hongos del géneroTrichoderma, comprende uno o más compuestos orgánicos volátiles emitidos al medio de cultivo por el/los microorganismos, donde los compuestos orgánicos volátiles se seleccionan del grupo que comprende: etanol, 1-propanol, 1-propanol,2metilo, 1-butanol-3-metilo,, 1-butanol,2-metilo, 3-metil-1-pentanol, 1-butanol,3-metil-,acetato, 1-butanol,2-metil-,acetato, 2-heptanol, 2-nonanol, 2-undecanol, benzaldehído-2-metilo, 2,4-dimetil-1-hepteno, tolueno, alcohol 2-feniletílico, fenol,4-etilo, 2-acetil-3metiltiofeno, benceno-1,3bis(1,1-dimetiletil), 2,5-di-tert-butil-1,4-benzoquinona, acetato de etilo, ácido acético, éster etílico del ácido propenoico, acetato de isobutilo, acido butanoico, etil ester, ácido butanoico, 2-metil-etil ester, 2-pentanona, 2-heptanona, butirolactone, 2-heptanona-4-metilo, 2-heptanona-4,6-dimetilo, 2-nonanona, (+)-isomentol, citronelol, citral, cis-betafarneseno, betahumuleno, alfa-bisabol, beta-selineno, alfa-gurjuneno y alfa-cedreno. En otro aspecto de la invención el método según se define anteriormente se caracteriza porque la composición bioestimulante comprende un filtrado libre de células del cultivo de microorganismos del géneroTrichodermaque comprenden uno o más de:Trichoderma afroharzianum, Trichoderma asperelloides(cepa T203),Trichoderma asperellum(cepa T-203),Trichoderma atroviride (cepasIMI 206040, MUCL 45632,P1), Trichoderma ghanense, Trichoderma hamatum(cepas DIS 219b, GD12),Trichoderma harzanium(cepas 1295-22, ALL-42, AK20G, CECT2413, GT3-2, NF-9, OTPB3, T-1, T-22, T-39, T-203), Trichoderma longibrachiatum,Trichoderma parareesei, Trichoderma virens (cepas G-6, G-6-5, G-11,PDBCTVs 12, PDBCTVs 13,T3,Tv29.8,Apptl), Trichoderma viridae (cepaT-67, TV 97) y/oTrichoderma yunnanense.
En otro aspecto de la invención la aplicación de la composición bioestimulante sobre las partes aéreas de las plantas comprende cubrir al menos el 3%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 99% ó 100% de la superficie total de las partes aéreas de la planta con dicha composición bioestimulante.
En otro aspecto de la invención se contempla que la aplicación del producto bioestimulante a la planta se realice a las partes aéreas de la planta que comprenden: tallo(s), hipocótilos, cotiledones, hoja(s), flor(es), fruto(s) y/o semilla(s).
En otro aspecto de la invención según se define en párrafos anteriores aplicar la composición bioestimulante sobre las partes aéreas de la planta comprende: regar, rociar, esparcir, atomizar, pulverizar, pulverizar a presión por aspersión, microaspersión o nebulización.
En otro aspecto de la invención descrita anteriormente la aplicación de la composición bioestimulante sobre las partes aéreas de la planta se lleva a cabo, 1-4 veces al mes. En otro aspecto de la invención el método para mejorar el rendimiento, de cultivo de una planta comprende condiciones de estrés abiótico seleccionadas del grupo que consiste en: temperatura fría, congelación, enfriamiento, calor o alta temperatura, sequía, reducción del riego aportado o estrés hídrico, salinidad o alta conductividad eléctrica en suelo o agua de riego, alta intensidad de luz, baja intensidad de luz, ozono, alta concentración de metales pesados en suelo y/o agua de riego y cualquier combinación de las mismas.
En otro aspecto de la invención se contempla que el método sea de aplicación en condiciones de estrés abiótico que comprendan una combinación de estrés por sequía y salinidad.
En oro aspecto de la invención se contempla que el método definido en párrafos anteriores sea de aplicación en plantas seleccionadas del grupo que comprende: planta de trigo, centeno, avena, trigo sarraceno, chía, lino, arroz, maíz, patata, boniato, tomate, pimiento, berenjena, lechuga, canónigo, endivia, escarola, rúcula y otras hortícolas de hoja, calabacín, pepino, coliflor, brócoli, cebolla, ajo, zanahoria, chufa, jengibre, fresa, arándano, frambuesa, mora, cereza, grosella y otros frutos rojos, alcachofa, melón, sandía, calabaza, legumbres verdes, garbanzo, lenteja, alubia, soja, algodón, girasol, tabaco, orégano, tomillo, lavanda, alfalfa, albahaca, menta, perejil, melocotonero, almendro, ciruelo, nectarino, albaricoque y otras especies de árboles de interés agronómico del géneroPrunussp., viña, aguacate, mango, chirimoya, papaya, kiwi, níspero, guayaba, carambola, granado, platanero, mandarino, naranjo, limonero, pomelo, olivo, nogal, avellano y/o anacardo.
Otro aspecto de la invención contempla que el método definido en párrafos anteriores sea de aplicación en una planta de tomate de la especieSolanum lycopersicum L.Otro aspecto de la invención contempla como mejora el rendimiento de cultivo de una planta: aumentar el número de frutos por planta y/o aumentar el peso de frutos totales por planta y/o aumentar el peso y tamaño de los frutos y/o reducir la cantidad de agua y/o nutrientes necesaria para obtener la misma cantidad de frutos que en plantas cultivadas en condiciones normales.
También es un aspecto de la presente invención que la composición bioestimulante utilizada en el método de la invención comprenda además otros compuestos activos adicionales seleccionados del grupo que consiste en: pesticidas, hormonas vegetales, insecticidas, bactericidas, fungicidas, antibióticos, proteínas, péptidos, aminoácidos, ácidos orgánicos y/o carbohidratos y/o un vehículo aceptable en agricultura.
Y finalmente también es un aspecto de la presente invención que el método para mejorar el rendimiento de cultivo de una planta en condiciones de estrés abiótico descrito en párrafos anteriores sea de aplicación para crecimiento de la planta en condiciones de campo o en una maceta en un invernadero.
Figuras
Figura 1. Número de frutos comerciales (A) y no comerciales (B), y producción total de frutos comerciales (C) de plantas d t t lti adas en condiciones de riego CNT, WS60 y WS30 con o sin aplicación foliar de producto bioestimulante CF de 3 diluciones (D1, D2, D3) deTrichoderma harzianum.Las plantas tratadas con W-MS y las plantas no tratadas (NT) se utilizaron como controles negativos. Los datos son la media de 10 réplicas y las barras de error representan las desviaciones estándar. Letras distintas indican diferencias significativas a P < 0,05 (prueba LSD).
Figura 2. Peso medio del fruto de plantas de tomate cultivadas en condiciones de riego CNT, WS60 y WS30 con o sin aplicación foliar de producto bioestimulante CF de 3 diluciones (D1, D2, D3) deTrichoderma harzianum.Las plantas tratadas con W-MS y las plantas no tratadas (NT) se utilizaron como controles negativos. Los datos son la media de 10 réplicas y las barras de error representan las desviaciones estándar. Letras distintas indican diferencias significativas a P < 0,05 (prueba LSD).
Figura 3. Volumen de agua necesario para obtener 1 kg de frutos comerciales por planta de tomate cultivadas en condiciones de riego CNT, WS60 y WS30 con o sin aplicación foliar de producto bioestimulante CF de 3 diluciones (D1, D2, D3) deTrichoderma harzianum.Las plantas tratadas con W-MS y las plantas no tratadas (NT) se utilizaron como controles negativos. Los datos son la media de 10 réplicas y las barras de error representan las desviaciones estándar. Letras distintas indican diferencias significativas a P < 0,05 (prueba LSD).
Figura 4. Nitrógeno (A), fósforo (B) y potasio (C) necesarios para obtener 1 kg de frutos comerciales por planta de tomate, cultivadas en condiciones de riego CNT, WS60 y WS30 con o sin aplicación foliar de producto bioestimulante CF de 3 diluciones (D1, D2, D3) deTrichoderma harzianum.Las plantas tratadas con W-MS y las plantas no tratadas (NT) se utilizaron como controles negativos. Los datos son la media de 10 réplicas y las barras de error representan las desviaciones estándar. Letras distintas indican diferencias significativas a P < 0,05 (prueba LSD).
Figura 5. Número de frutos comerciales (A) y no comerciales (B), y producción total de frutos comerciales (C) de plantas de tomate cultivadas en condiciones de riego CNT y SS40 con o sin aplicación foliar de producto bioestimulante CF de 3 diluciones (D1, D2, D3) deTrichoderma harzianum.Las plantas tratadas con W-MS y las plantas no tratadas (NT) se utilizaron como controles negativos. Los datos son la media de 10 réplicas y las barras de error representan las desviaciones estándar. Letras distintas indican diferencias significativas a P < 0,05 (prueba LSD).
Figura 6. Peso medio de los frutos de las plantas de tomate cultivadas bajo condiciones de riego CNT y SS40 con o sin aplicación foliar de producto bioestimulante CF de 3 diluciones (D1, D2, D3) deTrichode h i .Las plantas tratadas con W-MS y las plantas no tratadas (NT) se utilizaron como controles negativos. Los datos son la media de 10 réplicas y las barras de error representan las desviaciones estándar. Letras distintas indican diferencias significativas a P < 0,05 (prueba LSD).
Figura 7. Volumen de agua necesario para obtener 1 kg de frutos comerciales por planta de tomate cultivadas en condiciones de riego CNT y SS40 con o sin aplicación foliar de producto bioestimulante CF de 3 diluciones (D1, D2, D3) deTrichoderma harzianum.Las plantas tratadas con W-MS y las plantas no tratadas (NT) se utilizaron como controles negativos. Los datos son la media de 10 réplicas y las barras de error representan las desviaciones estándar. Letras distintas indican diferencias significativas a P < 0,05 (prueba LSD).
Figura 8. Nitrógeno (A), fósforo (B) y potasio (C) necesarios para obtener 1 kg de frutos comerciales por planta de tomate, cultivadas en condiciones de riego CNT y SS40 con o sin aplicación foliar de producto bioestimulante CF de 3 diluciones (D1, D2, D3) deTrichoderma harzianum.Las plantas tratadas con W-MS y las plantas no tratadas (NT) se utilizaron como controles negativos. Los datos son la media de 10 réplicas y las barras de error representan las desviaciones estándar. Letras distintas indican diferencias significativas a P < 0,05 (prueba LSD).
Descripción detallada de la invención
Como resultado de un intenso proceso de investigación, los inventores de la presente invención han logrado diseñar un método para mejorar el rendimiento de cultivo de una planta en condiciones de estrés abiótico; es decir un método para aumentar la tolerancia de las plantas al estrés abiótico y así revertir los procesos perjudiciales que acontecen en el crecimiento y desarrollo de la planta en tales circunstancias. El método de la invención es de aplicación tanto en condiciones de campo como en una maceta en invernadero.
Por tanto, la invención está destinada a la mejora del rendimiento de cultivo de plantas hortícolas y plantas leñosas. Ejemplos no limitativos de plantas hortícolas y leñosas que pueden beneficiarse con el método de la presente invención son: planta de trigo, centeno, avena, trigo sarraceno, chía, lino, arroz, maíz, patata, boniato, tomate, pimiento, berenjena, lechuga y otras hortícolas de hoja, calabacín, pepino, coliflor, brócoli, cebolla, ajo, zanahoria, chufa, jengibre, fresa, y otros frutos rojos, alcachofa, melón, sandía, calabaza, legumbres verdes, garbanzo, lenteja, alubia, soja, algodón, girasol, tabaco, orégano, tomillo, lavanda, alfalfa, albahaca, menta, perejil, melocotonero y otras especies de árboles de interés agronómico del géneroPrunus sp.,viña, aguacate, mango, chirimoya, papaya, kiwi, níspero, guayaba, carambola, granado, platanero, mandarino, naranjo, limonero, pomelo, olivo, nogal, avellano y/o anacardo. De forma preferente el método de la presente invención esta destinado a la mejora del rendimiento de plantas de tomate de la especieSolanum lycopersicum L.
Tal y como se utiliza en la presente solicitud de patente el término "estrés abiótico” se refiere al efecto causado por factores externos no biológicos, como las lluvias, altas o bajas temperaturas, sequía, reducción de aporte de agua, viento, salinidad, problemas de suelo, productos químicos, etc., esto es, factores externos, en los que se impide un correcto desarrollo de las plantas pudiendo causar a éstas efectos perjudiciales en el crecimiento y desarrollo. Así de acuerdo con la presente invención, estrés abiótico comprende bajas temperaturas, temperatura fría que tiene como resultado la congelación, enfriamiento, calor o alta temperatura, sequia, reducción del riego aportado o estrés hídrico, salinidad o alta conductividad eléctrica en suelo o agua de riego, alta intensidad de luz, baja intensidad de luz, ozono, alta concentración de metales pesados en suelo y/o agua de riego y cualquier combinación de las citadas condiciones. Estos factores externos afectan directamente al metabolismo de las plantas, incluyendo fotosíntesis, respiración, transporte de solutos, translocación, síntesis de proteínas, asimilación de nutrientes, diferenciación de tejidos, formación de carbohidratos, lípidos, sustancias estructurales de las plantas y en las diferentes fases del desarrollo del cultivo, lo que provoca importantes pérdidas de rendimiento.
Tal y como se define con anterioridad el método de la presente invención se dirige hacia la mejora del rendimiento de cultivo de plantas y como tal comprende aumentar el número de frutos por planta y/o aumentar el peso de frutos totales por planta y/o aumentar el peso y tamaño de los frutos y/o reducir la cantidad de agua y nutrientes necesaria para obtener un número determinado de frutos. Tales mejoras podrán ser determinadas en comparación con el rendimiento de cultivo en las mismas plantas sin que estas se sometan al método de la presente invención, el cual comprende hacer crecer una planta en un sustrato vegetal en presencia de los nutrientes necesarios para el crecimiento y desarrollo de la planta, y aplicar sobre las partes aéreas de la planta una cantidad eficaz de una composición bioestimulante, donde la composición bioestimulante comprende un filtrado de cultivo, libre de células, de uno o más hongos del géneroTrichoderma.
Por tanto, el método de la presente invención se caracteriza principalmente por hacer crecer una planta y aplicar una cantidad eficaz de una composición bioestimulante a las partes aéreas de dicha planta durante el crecimiento de la misma.
Dicha composición se caracteriza por ser el resultado de hacer crecer en un medio de cultivo apropiado un microorganismo del géneroTrichodermay retirar este microorganismo del medio de cultivo cuando el crecimiento del microorganismo haya iniciado la fase de crecimiento logarítmico y así obtener la composición libre de microorganismos.
A los efectos de la presente invención se contempla el uso de una composición resultado del procedimiento anterior, utilizando una o más de las siguientes especies y cepas del géneroTrichoderma: Trichoderma afroharzianum, Trichoderma asperelloides(cepa T203),Trichoderma asperellum(cepa T-203),Trichoderma atroviride(cepas IMI 206040, MUCL 45632, P1),Trichoderma ghanense, Trichoderma hamatum(cepas DIS 219b, GD12),Trichoderma harzanium(cepas 1295-22, ALL-42, AK20G, CECT2413, GT3-2, NF-9, OTPB3, T-1, T-22, T-39, T-203),Trichoderma longibrachiatum, Trichoderma parareesei, Trichoderma virens(cepas G-6, G-6-5, G-11, PDBCTVs 12, PDBCTVs 13, T3,Tv29.8, Apptl),Trichoderma viridae(cepa T-67, TV 97) y/oTrichoderma yunnanense.
Así de forma preferente se contempla el uso deTrichoderma harzaniumcepa CECT2413, siendo preferible el uso de composiciones bioestimulantes obtenibles a partir de la citada cepa y descritas en la solicitud de patente WO2017174503.
Dicha composición se caracteriza además por no contener células, es decir, ser libre de cualquier célula y contener partes por billón de uno o más compuestos orgánicos volátiles emitidos al medio de cultivo por el/los microorganismos del géneroTrichoderma,donde los compuestos orgánicos volátiles se seleccionan del grupo que comprende: etanol, 1-propanol, 1-propanol,2metilo, 1-butanol-3-metilo,, 1-butanol,2-metilo, 3-metil-1-pentanol, 1-butanol,3-metil-,acetato, 1-butanol,2-metil-,acetato, 2-heptanol, 2-nonanol, 2-undecanol, benzaldehído-2-metilo, 2,4-dimetil-1-hepteno, tolueno, alcohol 2-feniletílico, fenol,4-etilo, 2-acetil-3metiltiofeno, benceno-1,3-bis(1,1-dimetiletil), 2,5-di-tert-butil-1,4-benzoquinona, acetato de etilo, ácido acético, éster etílico del ácido propenoico, acetato de isobutilo, acido butanoico, etil ester, ácido butanoico, 2-metil-etil ester, 2-pentanona, 2-heptanona, butirolactone, 2-heptanona-4-metilo, 2-heptanona-4,6-dimetilo, 2-nonanona, (+)-isomentol, citronelol, citral, cis-betafarneseno, betahumuleno, alfa-bisab l b t li o, alfa-gurjuneno y alfa-cedreno.
Dicha composición puede ser utilizada directamente o de forma diluida en proporciones 1:2; 1:4; 1:6; 1:8; 1:9 sobre las partes aéreas de la planta.
Opcionalmente dicha composición puede contener además otros principios activos tales como: pesticidas, hormonas vegetales, insecticidas, bactericidas, fungicidas, antibióticos, proteínas, péptidos, aminoácidos, ácidos orgánicos y/o carbohidratos, comúnmente conocidos y utilizados en agricultura por el experto en la técnica.
Y finalmente puede también contener cualquiera de los vehículos aceptados en agricultura y bien conocidos para el experto en la materia. Entre los ejemplos de portadores agrícolamente aceptables se incluyen, sin limitación, adyuvantes, diluyentes, tensioactivos, agentes acondicionadores, anticongelantes, agentes antiespumantes, espesantes, agentes humectantes, agentes esparcidores, agentes dispersantes, agentes emulsionantes, agentes antimicrobianos y similares. Las composiciones agrícolas deben presentar una forma aceptable para su aplicación a las partes aéreas de la planta, por lo que pueden presentarse en forma de sólidos particulados, soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones.
Una de las características más relevantes de la presente invención es que para conseguir los efectos de mejora de rendimiento, la composición descrita anteriormente debe ser aplicada sobre las partes áreas de la planta a tratar.
A estos efectos se entiende como parte aérea de la planta, los tallos, hipocótilos, cotiledones, hojas, flores, frutos y/o semillas. Para que la aplicación de la composición resulte efectiva a efectos de mejora de rendimiento de cultivo de la planta, la aplicación debe cubrir al menos el 3% de la superficie total de las partes aéreas de la planta, esto es, debe cubrir al menos el 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 99% o el 100% de dicha superficie total de parte aérea de la planta que se trata. La forma en la cual se aplica la composición sobre la parte aérea de la planta se realiza a través de regar, rociar, esparcir, atomizar, pulverizar, pulverizar a presión por aspersión, microaspersión o nebulización.
No existe una limitación en cuanto a las veces que debe aplicarse la composición sobre la parte aérea de la planta durante su cultivo para conseguir mejorar el rendimiento de cultivo de la planta, si bien se contempla la aplicación de entre 1 a 6 veces al mes, de forma preferente de 1 a 4 veces al mes, mas preferentemente de 2 a 3 veces al mes.
A diferencia de las propuestas existentes en el mercado que se basan en la aplicación de los tratamientos de diversa índole, a las semillas para producir sobre todo un incremento del vigor germinativo, es d i d l ntaje y velocidad de germinación, en este caso, el tratamiento se aplica en una fase determinada del crecimiento una vez completadas las distintas fases de la germinación, y que visualmente coincide mayoritariamente desde la formación de 2 a 4 hojas verdaderas hasta la fructificación, cuando el método de la invención se aplica a plantas hortícolas, y durante cualquier época del año cuando se trata de plantas leñosas.
Los efectos beneficiosos del método de la invención en condiciones de estrés abiótico por reducción de aporte de agua, se traducen en una mejora sustancial del rendimiento de cultivo de las plantas. En concreto, con el método de la invención se consigue un incremento del número total de frutos comerciales por planta en comparación con plantas no tratadas con el método según la invención. Dicho incremento, según se demuestra en la parte experimental que sigue alcanza al menos un 13%, preferiblemente entre un 15% y un 30%, por ejemplo, 16% o 17%, o incluso superior al 30%, por ejemplo 32%.
También en condiciones de estrés abiótico por reducción de aporte de agua el método de la presente invención se puede traducir en un incremento del número total de frutos comerciales tal y como se demuestra en la parte experimental dónde dicho incremento es de al menos el 15%, preferiblemente entre el 20% y el 30%, en concreto, 21%, 24% o 26%.
Igualmente, el rendimiento del cultivo de plantas en condiciones de reducción de aporte de agua se puede medir a través de un incremento del peso medio de los frutos, donde según se demuestra a continuación, se produce un incremento del peso medio de los frutos en la planta tratada de un 7%.
Adicionalmente, la mejora en el rendimiento de cultivo de las plantas se puede conseguir a través de una reducción del agua necesaria para obtener un kilo de frutos comerciales. Esto es, en condiciones normales como de reducción de aporte de agua, la planta tratada con el método de la invención requiere una cantidad sustancialmente menor de agua para producir un kilo de frutos en comparación con las plantas no tratadas. Así la reducción de agua necesaria para producir un kilo de frutos es de al menos el 10%, preferiblemente entre el 20 y el 30% e incluso a valores superiores al 30% tales como, 34% o 35%. Del mismo modo, las plantas tratadas, tanto en condiciones normales como de sequía realizan una mejor eficiencia del uso de nutrientes, nitrógeno (N), fósforo (P) y potasio (K), llegando a los mismos valores de eficiencia que los conseguidos en el caso de reducción de aporte de agua.
Los efectos beneficiosos del método de la invención en condiciones de estrés salino, se traducen en una mejora sustancial d l di i t de cultivo de las plantas. En concreto, con el método de la invención se consigue un incremento del número total de frutos comerciales por planta en comparación con plantas no tratadas con el método según la invención. Dicho incremento, según se demuestra en la parte experimental que sigue alcanza al menos un 30%, preferiblemente al menos 60%. Así, en condiciones de estrés salino, las pérdidas de fruta no comercial fueron muy inferiores a plantas no tratadas, alcanzándose solamente perdidas de fruta no comercial en valores no superiores al 30% frente a valores superiores al 40% en plantas cultivadas en condiciones de normalidad. En cuanto al rendimiento total de fruta comercial, las pérdidas en plantas tratadas fueron inferiores al 48% frente a plantas no tratadas donde las pérdidas se pueden cuantificar en al menos un 60%. El peso medio de los frutos en plantas tratadas en condiciones de estrés salino refleja un aumento del peso medio de los frutos superior al 11% frente a plantas cultivadas en las mismas condiciones y no tratadas. Igualmente, la reducción del agua y NPK necesarios para producir la misma cantidad de frutos se estima en valores de hasta el 41 % y 28% según se ilustra en los ejemplos prácticos de la invención.
Ejemplos:
Ejemplo 1: Aplicación foliar de un filtrado libre de células en base aTrichoderma harzianumCECT2413 a plantas de tomateSolanum lycopersicum L.en condiciones de estrés abiótico
La investigación se llevó a cabo en las instalaciones del "Instituto de Hortofruticultura Subtropical y Mediterránea" (IHSM), situadas en Algarrobo (Málaga) en un invernadero multitúnel de plástico de 800 galgas. En el estadio de 6-8 hojas verdaderas, las plantas de tomate de la variedad Macizo F1, se trasplantaron a macetas de 17 L con una mezcla de turba: fibra de coco: vermiculita (45:45:10). Tras el trasplante, las plantas fueron regadas con una solución nutritiva que contenía como macronutrientes NO3- (1,27 mM), NH3(3,52 mM), CaO (2,31 mM), MgO (0,74 mM), P2O5(0,48 mM), K2O (2,16 mM) y SO3(1,11 mM). En cuanto a los micronutrientes, la solución nutritiva contenía B (23,12<j>M), Cu (2,36|jM), Fe (67,15|jM), Mn (36,40|jM), Mo (1,042|jM) y Zn (3,82|jM). La conductividad eléctrica (CE) fue de 1,5 dS m-1 y el pH de 6,73. Quince días después del trasplante, las plantas de tomate fueron sometidas a dos tipos de estrés abiótico que se mantuvieron hasta el final del experimento. (i) 40 mM (SS40) de cloruro sódico (NaCl) y (ii) reducción hasta el 60% (WS60) y el 30% (WS30) del volumen de agua utilizado para el 100% del riego. Las plantas sin t t i t NaCl ni reducción del contenido de agua se utilizaron como control (CNT). La conductividad eléctrica del agua de riego SS40 fue de 5,78 dS m-1 y el pH de 6,63. Se establecieron diez plantas por condición de estrés y tratamiento fúngico libre de células (CF). La especie fúngica que se utilizó para obtener la composición bioestimulante libre de células (CF) utilizada en el ensayo sobre el rendimiento y la calidad del fruto de plantas de tomate cultivadas en condiciones de estrés por reducción de aporte de agua y salinidad fueThrichoderma harzianum(TH; código CECT 2413).
Obtención de composición bioestimulante
Para obtener la composición bioestimulante en base a los cultivos fúngicos deThrichoderma harzianum(TH; código CECT 2413), primero se cultivaron los hongos en placas Petri que contenían 0,22% (p/v) de medio basal sólido Murashige & Skoog con vitaminas (PhytoTech, número de código M519; MS), 3% (p/v) de D-sacarosa (PanReac AppliChem, número de código A3925) y 0,8% (p/v) de agar vegetal (Duchefa Biochemie, número de código P1001), pH ajustado a 5,74 y esterilizado. Los cultivos se mantuvieron a 28 °C durante 7 días en condiciones de oscuridad. A continuación, las colonias se transfirieron a matraces Erlenmeyer de 500 mL, que contenían 200 mL de medio de cultivo líquido esterilizado (0,22 % p/v de MS y 3% p/v de D-sacarosa). Dichos cultivos se mantuvieron durante 7 días en un agitador a 150 rpm y 28 °C en oscuridad y se transfirieron a matraces Erlenmeyer de 2 L, que contenían 900 mL de medio de cultivo líquido. Los cultivos se colocaron en un agitador y se incubaron a 28 °C bajo agitación continua (150 rpm) durante 3 días en oscuridad, tras lo cual se eliminó el micelio fúngico utilizando papel de filtro Whatman n° 1. El filtrado resultante se esterilizó utilizando un filtro de membrana Millipore de 0,22 ^m y se almacenó a 4 °C a la espera de su uso posterior.
Aplicación foliar de los productos bioestimulantes
Los productos bioestimulantes CF fúngicos, se pulverizaron sobre las hojas de las plantas con tres diluciones diferentes en agua: sin diluir, dilución 1:2 y dilución 1:4 (D1, D2 y D3, respectivamente). Como controles se utilizaron plantas no tratadas (NT) y plantas tratadas con un medio de cultivo en base a MS (W-MS). W-MS contenía una dilución 1:6 de MS y 0,036 g/L de D(+)-glucosa (Carlo Erba, número de código 454337) y D(-)-fructosa (VWR, número de código 103674Y). Las aplicaciones se realizaron en cuatro fases diferentes: i) 2-4 hojas verdaderas; ii) después del trasplante; iii) durante la floración; y iv) en la época de fructifi ió
Resultados
La aplicación foliar de los productos bioestimulantes CFs fúngicos deTrichodermaincrementa la producción de fruta en plantas cultivadas bajo condiciones de reducción del aporte de agua. En las Figuras 1-3 se muestran los parámetros de producción de fruta de plantas tratadas y no tratadas con los productos bioestimulantes CF deT. harzianumcultivadas bajo condiciones de estrés por reducción del aporte de agua leve y severo (WS60 y WS30, respectivamente). Se encontraron diferencias estadísticamente significativas tanto en el tipo de estrés como en la aplicación. En plantas cultivadas bajo el régimen de riego leve WS60, la aplicación foliar de D1, D2 y D3 incrementó el número total de frutos comerciales por planta en aproximadamente 16, 13 y 17%, respectivamente, en comparación con los tratamientos control NT y W-MS (Fig. 1A). Además, la aplicación foliar de D2 y D3 incrementó la producción total de frutos comerciales en un 15 y 21%, respectivamente, en comparación con los tratamientos NT y W-MS (Fig. 1C). En condiciones CNT, las plantas tratadas con D1 y D2 incrementaron un 7% el peso medio de los frutos en comparación con las combinaciones NT y W-MS (Fig. 2). En cuanto al volumen de agua necesario para obtener 1 kg de frutos comerciales, cabe destacar la reducción significativa cuando se aplica D2 y D3 en comparación con NT y W-MS bajo condiciones WS60 (13 y 20% de reducción, respectivamente) y en comparación con D2 y D3 condiciones CNT (35 y 34% de reducción, respectivamente) (Fig. 3); tales cambios se reflejaron en una mejor eficiencia de uso de los nutrientes NPK (Fig. 4). En plantas cultivadas bajo el régimen de riego WS30, la aplicación foliar D1 y D2 incrementó el número total de frutos comerciales en 32% y 26 %, respectivamente, en comparación con los tratamientos control NT y W-MS (Fig. 1A). En plantas cultivadas bajo el régimen de riego WS60, la aplicación foliar D1, D2 y D3 incrementó el número total de frutos comerciales en 12%, 15% y 20% respectivamente. Además, los tratamientos con WS30 incrementaron el rendimiento comercial total en un 26 y 24% respectivamente, en comparación con los tratamientos control NT y W-MS (Fig. 1C). La aplicación foliar de D1 y D2 redujo en un 40% el número de frutos no comerciales (Fig. 1B).
La aplicación foliar de los productos bioestimulantes FCs fúngicos incrementó la producción de fruta en plantas cultivadas bajo condiciones de estrés salino. Los parámetros de producción de las plantas cultivadas en condiciones de SS40 se presentan en las Figuras 5-8. En cuanto al número de frutos comerciales, las plantas tratadas con D1- y D2 produjeron 67 y 31 % más frutos comerciales que las plantas tratadas con NT y W-MS (controles negativos en las mismas condiciones de estrés), respectivamente (Fig. 5A). Las pérdidas en las plantas tratadas con D1- y D2 (15 y 31%, respectivamente) fueron significativamente menores que en los controles NT y W-MS (54 y 45%, respectivamente) en comparación con las plantas no sometidas a estrés (Fig. 5A). En cuanto al rendimiento total de fruta comercial, las pérdidas en las plantas tratadas con D1- y D2- (43% y 48%, respectivamente) fueron menores que en las plantas NT y W-MS (65% y 61%, respectivamente) respecto a las plantas no estresadas (Fig. 5C). Los resultados positivos en las diluciones D1 y D2 se reflejaron también en un aumento del peso medio de los frutos en comparación con NT y W-MS bajo SS40 de hasta un 11 y un 13%, respectivamente (Fig. 6), así como en una reducción del agua y NPK necesarios para producir la misma cantidad de frutos de hasta un 41 y un 28% (Figs. 7 y 8). En consecuencia, bajo estrés salino queda probado la capacidad para reducir la cantidad de agua y nutrientes necesaria para producir frutos de tomate de calidad comercial y mejorar el rendimiento utilizando estos productos bioestimulantes.
En conclusión, la aplicación foliar de productos bioestimulantes CFs en base a microorganismos del géneroTrichoderma,y en particular,T. harzianum,mejoran la producción de frutos en plantas de tomate cultivadas en condiciones de estrés por reducción del aporte de agua y salinidad y reducen la cantidad de agua y nutrientes necesarios para producir la misma cantidad de frutos que las plantas no tratadas.
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Claims (15)
1. Un método para mejorar el rendimiento de cultivo de una planta bajo condiciones de estrés abiótico que comprende:
- hacer crecer una planta en un sustrato vegetal en presencia de nutrientes; y
- aplicar sobre las partes aéreas de la planta una cantidad eficaz de una composición bioestimulante para dotar a la planta de resistencia al estrés abiótico,
donde la composición bioestimulante comprende un filtrado de cultivo libre de células de uno o más hongos del géneroTríchoderma.
2. El método según la reivindicación 1,donde el filtrado de cultivo libre de células de uno o más hongos del géneroTrichoderma, comprende uno o más compuestos orgánicos volátiles emitidos al medio de cultivo por el/los microorganismos, donde los compuestos orgánicos volátiles se seleccionan del grupo que comprende: etanol, 1-propanol, 1-propanol,2metilo, 1-butanol-3-metilo,, 1-butanol,2-metilo, 3-metil-1-pentanol, 1-butanol,3-metil-,acetato, 1-butanol,2-metil-,acetato, 2-heptanol, 2-nonanol, 2-undecanol, benzaldehído-2-metilo, 2,4-dimetil-1-hepteno, tolueno, alcohol 2-feniletílico, fenol,4-etilo, 2-acetil-3metiltiofeno, benceno-1,3-bis(1,1-dimetiletil), 2,5-di-tert-butil-1,4-benzoquinona, acetato de etilo, ácido acético, éster etílico del ácido propenoico, acetato de isobutilo, acido butanoico, etil ester, ácido butanoico, 2-metil-etil ester, 2-pentanona, 2-heptanona, butirolactone, 2-heptanona-4-metilo, 2-heptanona-4,6-dimetilo, 2-nonanona, (+)-isomentol, citronelol, citral, cis-beta-farneseno, betahumuleno, alfa-bisabol, betaselineno, alfa-gurjuneno y alfa-cedreno.
3. El método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque microorganismos del géneroTrichodermacomprenden uno o más de:Trichoderma afroharzianum, Trichoderma asperelloides(cepa T203),Trichoderma asperellum(cepa T-203),Trichoderma atroviride (cepasIMI 206040, MUCL 45632,P1), Trichoderma ghanense, Trichoderma hamatum(cepas DIS 219b, GD12),Trichoderma harzanium(cepas 1295-22, ALL-42, AK20G, CECT2413, GT3-2, NF-9, OTPB3 T 1 T-22, T-39, T-203), Trichoderma longibrachiatum,Trichoderma parareesei, Trichoderma virens (cepas G-6, G-6-5, G-11,PDBCTVs 12, PDBCTVs 13,T3,Tv29.8,Apptl), Trichoderma viridae (cepaT-67, TV 97) y/oTrichoderma yunnanense.
4. El método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores dónde aplicar sobre las partes aéreas de las plantas la composición bioestimulante comprende cubrir al menos el 3%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 99% ó 100% de la superficie total de las partes aéreas de la planta con la composición bioestimulante.
5. El método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores dónde las partes aéreas de la planta comprenden: tallo(s), hipocótilos, cotiledones, hoja(s), flor(es), fruto(s) y/o semilla(s).
6. El método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde aplicar la composición bioestimulante sobre las partes aéreas de la planta comprende: regar, rociar, esparcir, atomizar, pulverizar, pulverizar a presión por aspersión, microaspersión o nebulización.
7. El método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la aplicación de la composición bioestimulante sobre las partes aéreas de la planta se lleva a cabo, 1-4 veces al mes.
8. El método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en las que las condiciones de estrés abiótico se seleccionan del grupo que consiste en: temperatura fría, congelación, enfriamiento, calor o alta temperatura, sequia, reducción del riego aportado o estrés hídrico, salinidad o alta conductividad eléctrica en suelo o agua de riego, alta intensidad de luz, baja intensidad de luz, ozono, alta concentración de metales pesados en suelo y/o agua de riego y cualquier combinación de las mismas.
9. El método según la reivindicación 8, en el que el estrés abiótico es una combinación de sequía y salinidad.
10. El método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la planta se selecciona del grupo que comprende: planta de trigo, centeno, avena, trigo sarraceno, chía, lino, arroz, maíz, patata, boniato, tomate, pimiento, berenjena, lechuga, canónigo, endivia, escarola, rúcula, calabacín, pepino, coliflor, brócoli, col, cebolla, ajo, zanahoria, chufa, jengibre, fresa, arándano, frambuesa, mora, cereza, grosella, madroño, alcachofa, melón, sandía, calabaza, legumbres verdes, garbanzo, lenteja, alubia, judía, soja, algodón, girasol, tabaco, orégano, tomillo, lavanda, alfalfa, albahaca, menta, perejil, hierbabuena, melocotonero, almendro, ciruelo, nectarino, albaricoque, viña, aguacate, mango, chirimoya, papaya, kiwi, níspero, guayaba, carambola, granado, platanero, mandarino, naranjo, limonero, árbol de lima, pomelo, olivo, nogal, avellano y/o anacardo.
11. El método según la reivindicación 10, dónde la planta es una planta de tomate de la especieSolanum lycopersicum L.
12. El método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde mejorar el rendimiento de cultivo de una planta comprende: aumentar el número de frutos por planta y/o aumentar el peso de frutos totales por planta y/o aumentar el peso y tamaño de los frutos y/o reducir la cantidad de agua y nutrientes necesaria para obtener el mismo rendimiento que plantas cultivadas en condiciones normales.
13. El método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la composición bioestimulante comprende además otros compuestos activos adicionales seleccionados del grupo que consiste en: pesticidas, hormonas vegetales, insecticidas, bactericidas, fungicidas, antibióticos, proteínas, péptidos, aminoácidos, ácidos orgánicos y/o carbohidratos.
14. El método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la composición bioestimulante comprende además un vehículo aceptable en agricultura.
15. El método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que la planta o una parte de la misma crece en condiciones de campo o en una maceta en un invernadero.
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BA2A | Patent application published |
Ref document number: 2995382 Country of ref document: ES Kind code of ref document: A1 Effective date: 20250210 |
|
| FG2A | Definitive protection |
Ref document number: 2995382 Country of ref document: ES Kind code of ref document: B2 Effective date: 20250709 |