ES2962330T3 - Inhibidor de jak - Google Patents

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ES2962330T3 ES16739772T ES16739772T ES2962330T3 ES 2962330 T3 ES2962330 T3 ES 2962330T3 ES 16739772 T ES16739772 T ES 16739772T ES 16739772 T ES16739772 T ES 16739772T ES 2962330 T3 ES2962330 T3 ES 2962330T3
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Fei Wang
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Abstract

Se divulga una serie de inhibidores de JAK, y específicamente se divulgan compuestos de fórmula (I) o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos y una aplicación de los mismos en la preparación de fármacos para tratar enfermedades relacionadas con JAK. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Inhibidor de JAK
La presente invención se refiere a una serie de inhibidores de JAK y, en particular, se refiere a un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
JAK pertenece a la familia de las tirosina quinasas y participa en la inflamación, enfermedades autoinmunitarias, enfermedades proliferativas, rechazo de trasplantes, enfermedades relacionadas con la alteración del recambio del cartílago, acondrogénesis y/o enfermedades relacionadas con la hipersecreción de IL6. La presente invención también proporciona un compuesto, un método para preparar el compuesto y una composición que comprende el mismo, y un método para prevenir y/o tratar inflamación, enfermedades autoinmunitarias, enfermedades proliferativas, rechazo de trasplantes, enfermedades relacionadas con la alteración del recambio del cartílago, acondrogénesis. y/o enfermedades relacionadas con la hipersecreción de IL6 mediante la administración del compuesto de la presente invención.
Janus quinasa (JAK) es una tirosina quinasa del citoplasma que transduce la señal de citocinas de un receptor de membrana al factor de transcripción STAT. Hay cuatro miembros de la familia JAK, incluidos JAK1, JAK2, JAK3 y TYK2 en el estado de la técnica. Cuando una citocina se combina con su receptor, los miembros de la familia JAK se autofosforilan y/o transfosforilan entre sí, después las STAT se fosforilan y se mueven hacia el núcleo para regular la transcripción. La vía de señalización celular JAK-STAT incluye interferón, la mayoría de las interleucinas, múltiples citocinas y factores endocrinos, como EPO, TPO, GH, OSM, LIF, CNTF, GM-CSF y PRL (Vain chenker W. etc. (2008)).
La investigación combinada de modelos genéticos y micromoléculas inhibidoras de JAK describe la potencia terapéutica de varias JAK. Se confirma mediante estudios genéticos en ratones y humanos que JAK3 es un objetivo de inmunosupresión (O'SheaJ. etc. (2004)). El inhibidor de JAK3 se ha usado con éxito en el desarrollo clínico y se usó inicialmente en el rechazo de trasplantes de órganos, y posteriormente también se usó en otras indicaciones de inflamación inmunológica, como la artritis reumatoide (AR), la psoriasis y la enfermedad de Crohn (http://clinicaltrials.gov/). TYK2 es un objetivo potencial de la enfermedad inmunoinflamatoria, lo que se ha confirmado mediante estudios genéticos humanos e investigaciones de desactivación génica en ratones (Levy D. y Loomis C. (2007)). JAK1 es un nuevo objetivo en el campo de las enfermedades inmunoinflamatorias. JAK1 se heterodimeriza con otras JAK para transducir señales proinflamatorias activadas por citocinas. Por lo tanto, se espera que JAK1 y/u otras JAK tengan un beneficio terapéutico para una serie de enfermedades inflamatorias y otras enfermedades impulsadas por la transducción de señales mediada por JAK.
Tofacitinib fue desarrollado por Pfizer, las patentes relacionadas son WO02/096909, US7301023 y WO2015087201, y se lanzó con éxito en Estados Unidos el 7 de noviembre de 2012 para el tratamiento de la artritis reumatoide y la enfermedad de Crohn con el nombre de propiedad Xeljanz®.
Las patentes de Filgotinib incluyen US8808764 y WO2009047514A1, y Filgotinib es un inhibidor selectivo de Jk1 desarrollado por Galapagos Company y usado para la artritis reumatoide y la enfermedad de Crohn, y ahora se encuentra en ensayos clínicos de fase II. Se informó que el IC50 de Jak1 activo = 10 nM IC50 de Jak2 = 28 nM.
El documento WO 2010/020905 A1 describe una familia de N-triazoles de tricarboyanina de cromóforos NIR brillantes, fotoestables y permeables a las células que contienen grupos triazol neutros. En particular, se describe un compuesto de fórmula (I), un derivado o una sal del mismo. Fórmula (I) en donde R1 está ausente o se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-C6 y alquilo C1-C9 sustituido con uno o más de los siguientes grupos: halógeno, hidroxilo, arilo, ácidos carboxílicos; cicloalquilo C3-C6, grupos arilo sustituidos con uno o más de los siguientes grupos: alquilo, cicloalquilo, naftalenilo, fenantrenilo, amino, aminoalquilo, aminocicloalquilo, formilo, trifluorometilo, carboilo, halógeno, hidroxilo, hidroxialquilo, alcoloxi, hidroxiarilo, nitro; tiofenilo, piridinilo, imidazolilo, acetal, bencilo; Cada uno de R2 y R3 se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 y alquilo C1-C6 sustituido con uno o más de los siguientes grupos: ácidos carboxílicos, amidas sustituidas, grupos sulfonato, arilo, ésteres de succinimidilo, maleimidas, polietilenglicol- sustituyentes básicos; R4, R5, R6 y R9 están cada uno independientemente ausentes.
alquilo C1-C6 o H; R6 y R10 son cada uno independientemente H; cada uno de R7 y R11 se selecciona independientemente del grupo que consiste en H, Me y sulfonato; o R6-R7 y/o R10-R11 forman un anillo aromático y/o R5-R6 y/o R9-R10 forman un anillo aromático; R12 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C1-C6 y alquilo C1-C9 sustituido con uno o más de los siguientes grupos: hidroxilo, arilo, ésteres carboxílicos, ácidos carboxílicos; amina, aminoalquilo, aminocicloalquilo, aminoarilo, tosilo, hidroxialquilo, hidroxiarilo, tioalquilo, tioarilo; X y Y se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en C, S, O y N; y Z es C o N; Se describen procesos adicionales para la preparación de los compuestos y usos de los compuestos en aplicaciones terapéuticas, de diagnóstico, quirúrgicas y analíticas. Se describen especialmente compuestos que poseen un grupo ciclohexilo.
Mark E, Flanagen y otros describe en Journal of Medicinal Chemistry, vol. 53, núm. 24, 23 de diciembre de 2010 (2010 12-23), páginas 8468-8484, XP 055222844, ISSN: 0022-2623, DOI: 10-1021/jm1004286 el descubrimiento de CP-690, 550 como un inhibidor de Janus quinasa potente y selectivo (JAK) para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias y rechazo de trasplantes de órganos. Se describen especialmente compuestos que poseen un grupo ciclohexilo o un grupo piperidin-3-ilo.
El documento CN 1729 192 A describe la resolución óptica de (1-bencil-4-metilpiperidin-3-il)-metilamina y su uso para la preparación de derivados de pirrolo 2,3-pirimidina como inhibidores de proteínas quinasas.
El documento CN 1489 590 A describe compuestos específicos de los receptores de adenosina A1, A2 y A3 y sus usos. Se describen especialmente compuestos con sustituyentes en el núcleo de deaza-purina.
El documento US 2002/094974 A1 se refiere a compuestos que inhiben específicamente el receptor de adenosina A3 y el uso de estos compuestos para tratar enfermedades asociadas con el receptor de adenosina A3 en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de los compuestos. Se describen especialmente compuestos con sustituyentes en el núcleo de deaza-purina.
Un objetivo de la presente invención es proporcionar inhibidor adicional de JAK. Este objetivo se logra mediante un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de acuerdo con la reivindicación 1. Se presentan soluciones adicionales en las reivindicaciones dependientes o en la descripción.
La enseñanza técnica de la presente invención proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
en donde,
el anillo A se selecciona de
Ri-L- se selecciona de:
R2 se selecciona de H, metilo, etilo o ciclopropilo;
opcionalmente, la unidad estructural
se puede reemplazar por
En una modalidad de la presente invención, el compuesto se selecciona de:
�
La presente invención también proporciona el compuesto anterior para uso en el tratamiento de la artritis.
A menos que se indique lo contrario, los siguientes términos y frases usados en contexto tienen los siguientes significados. Un término o frase en particular no debe considerarse incierto o poco claro en ausencia de una definición particular y debe entenderse de acuerdo con sus significados comunes. Cuando se usa un nombre patentado en el presente documento, se pretende hacer referencia al producto correspondiente o a sus ingredientes activos.
C-M2 se selecciona y C12; C3-1 C9, C10, C11 y C12.
Alquilo o heteroalquilo C1-12, grupo cíclico o alquilo heterocíclico C3-12, alquilo o heteroalquilo C1-12 sustituido por alquilo cíclico o heterocíclico C3-12 incluyen, entre otros:
alquilo C1-12, alquilamino C1-12, N, N-di(alquil C1-12)amino, alcoxi C1-12, alquilacilo C1-12, alcoxicarbonilo C1-12, alquilsulfonilo C1-12, alquilo C1-12 sulfinilo, cicloalquilo C3-12, alquilamino cíclico C3-12, alquilamino heterocíclico C3-12, alcoxi cíclico C3-12, alquil acilo cíclico C3-12, alcoxicarbonilo cíclico C3-12, alquilsulfonilo cíclico C3-12, C3-12 alquilsulfinilo cíclico, arilo o hereroarilo de 5~12 miembros, aralquilo o hereroaralquilo de 5~12 miembros;
metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, -CH2C(CH3)(CH3)(OH), ciclopropilo, ciclobutilo, propilmetileno, ciclopropilacilo, benciloxi, trifluorometilo, aminometilo, hidroximetilo, metoxilo, formilo, metoxicarbonilo, mesilo, metilsulfinilo, etoxilo, etanoilo, etilsulfonilo, etoxicarbonilo, dimetilamino, dietilamino, dietilaminocarbonilo y dietilaminocarbonilo;
N(CH3)2, NH(CH3), -CH2CF3, -CH2CH2CH3, -CH2CH2F, -CH2CH2S(=O)2CH3, -CH2CH2CN,
-CH2CH(OH)(CHa)2, -CH2CH(F)(CH)2, -CH2CH2F, -CH2CF3, -CH2CH2CF3, -CH2CH2NH2, -CH2CH2OH, -CH2CH2OCH3, -CH2CH2CH2OCH3, -CH2CH2N(CH3)2, -S(=O)2CH3, -CH2CH2S(O)2CH3; y
fenilo, tiazolilo, bifenilo, naftilo, ciclopento, furilo, 3-pirrolina, pirrolidilo, 1,3-dioxolano, pirazolilo, 2-pirazolinilo, pirazolidinilo, imidazolilo, oxazol, tiazolilo, 1,2, 3-imidazolilo, 1, 2, 3-triazolilo, 1,2, 4-triazolilo, 1, 3, 4-tiadiazol, 4H-piranilo, piridilo, piperidilo, 1,4-dioxano, morfolinilo, piridazinilo, pirimidilo, pirazinilo, piperazinilo, 1, 3, 5-tritiano, 1, 3, 5-triazinilo, benzofurilo, benzotiofenilo, indolilo, bencimidazolilo, benzotiazolilo, purinilo, quinolilo, isoquinolilo, cinolina o quinoxalinilo;
El término "farmacéuticamente aceptable" usado en este documento es para describir compuestos, materiales, combinaciones y/o formulaciones que pueden entrar en contacto con tejido humano y animal dentro de un rango de juicio médico confiable sin demasiada toxicidad, irritación y reacciones alérgicas, u otros problemas o complicaciones, que se corresponde con el interés/riesgo razonable.
El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a la sal del compuesto de acuerdo con la presente invención, que se prepara mediante el compuesto con un sustituyente particular descubierto por la presente invención con un ácido o álcali relativamente no tóxico. Cuando el compuesto de la presente invención contiene un grupo funcional relativamente ácido, la sal de adición de base se puede obtener poniendo en contacto suficiente álcali con la forma neutra de este tipo de compuesto en solución pura o en un disolvente inerte adecuado. La sal de adición de base farmacéuticamente aceptable incluye sal de sodio, sal de potasio, sal de calcio, sal de amonio, sal de amino orgánica o sal de magnesio, o sal similar. Cuando el compuesto de la presente invención contiene un grupo funcional relativamente alcalino, la sal de adición de ácido se puede obtener poniendo en contacto suficiente ácido con la forma neutra de este tipo de compuesto en la solución pura o en un disolvente inerte adecuado. Ejemplos de sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable incluyen sales de ácidos inorgánicos, que incluyen, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido nítrico, ácido carbónico, bicarbonato, ácido fosfórico, hidrogenofosfato, dihidrogenofosfato, ácido sulfúrico, hidrogenosulfato, ácido yodhídrico. ácido fosforoso, etc.; y sal de ácido orgánico, dicha sal de ácido orgánico incluye ácido acético, ácido propiónico, ácido isobutírico, ácido maleico, ácido malónico, ácido benzoico, ácido succínico, ácido subérico, ácido fumárico, ácido láctico, ácido mandélico, ácido ftálico, ácido bencenosulfónico, ácido paratoluenosulfónico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido metanosulfónico y otros ácidos similares; e incluyen además sales de aminoácidos (tales como arginina), y las sales de ácido glucurónico y otros ácidos orgánicos (Berge y otros, “Pharmaceutical Salts”, Journal of Pharmaceutical Science 66: 1-19 (1977)). Un compuesto particular de la presente invención contiene un grupo funcional alcalino y ácido para convertirse en cualquier base o sal de adición de ácido.
Preferiblemente, la sal se pone en contacto con el álcali o ácido de manera convencional y después se separa el compuesto original, para preparar así la forma neutra del compuesto. La forma original del compuesto es diferente de las formas de sus diversas sales en algunas propiedades físicas, por ejemplo, la solubilidad es diferente en un disolvente polar.
La "sal farmacéuticamente aceptable" usada en el presente documento pertenece a los derivados del compuesto de la presente invención, en los que el compuesto original se modifica mediante adición de ácido o adición de base formando sales. Los ejemplos de sal farmacéuticamente aceptable incluyen, entre otros: sal de ácido inorgánico o sal de ácido orgánico de grupo básico, por ejemplo amina, y metal alcalino o sal orgánica de ácido, por ejemplo, ácido carboxílico, etc. La sal farmacéuticamente aceptable incluye sal no tóxica regular o sal de amonio cuaternario del compuesto original, tal como sales formadas por ácido inorgánico o ácido orgánico no tóxico. La sal no tóxica regular incluye, entre otras, sales derivadas del ácido inorgánico o ácido orgánico, dicho ácido inorgánico o ácido orgánico se selecciona de ácido 2-acetoxibenzoico, ácido 2-hidroxietilsulfónico, ácido acético, ácido ascórbico, ácido bencenosulfónico, ácido benzoico, bicarbonato, ácido carbónico, ácido cítrico, ácido edético, ácido etano disulfónico, ácido etano sulfónico, ácido fumárico, glucoheptosa, ácido glucónico, ácido glutámico, ácido glicólico, ácido bromhídrico, ácido clorhídrico, hidroyodato, hidroxilo, hidroxinaftoato, isetiónico ácido, ácido láctico, lactina, dodecilsulfonato, ácido maleico, ácido málico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido nítrico, ácido oxálico, ácido pamoico, ácido pantoténico, ácido fenilacético, ácido fosfórico, ácido poligalacturónico, ácido propiónico, ácido salicílico, ácido esteárico, ácido etilideno, ácido succínico, ácido sulfámico, ácido sulfanílico, ácido sulfúrico, tanino, ácido tartárico y ácido para-toluenosulfónico.
La sal farmacéuticamente aceptable de la presente invención puede sintetizarse mediante el compuesto original que contiene un grupo ácido o básico mediante un proceso químico regular. Generalmente, la preparación de la sal es la siguiente: los compuestos en forma de ácido libre o álcali libre se hacen reaccionar con un álcali o ácido estequiométrico adecuado en agua o disolvente orgánico, o la mezcla de ellos para preparar la sal. Generalmente, son preferibles éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo y otros medios no acuosos.
Además de la sal, el compuesto proporcionado por la presente invención también tiene forma de profármaco. El profármaco del compuesto descrito en el presente documento se puede convertir fácilmente en el compuesto de la presente invención experimentando cambios químicos en condiciones fisiológicas. Además, el profármaco se puede convertir en el compuesto de la presente invención por vía química o bioquímica in vivo.
Algunos compuestos de la presente invención existen en formas solvatadas o no solvatadas, incluida la forma hidratada. En general, la forma no solvatada es equivalente a la forma solvatada y ambas están dentro del alcance de la presente invención. Algunos compuestos de la presente invención pueden tener carbono asimétrico (centro óptico) o doble enlace. El racemato, el diastereoisómero, el isómero geométrico y el isómero único están todos dentro del alcance de la presente invención.
La representación gráfica del racemato y del único estereoisómero posible; y la mezcla de racematos, la mezcla de enantiómeros desiguales o el compuesto de enantiómero puro son de Maehr, J.CHem.Ed. 1985, 62:114-120. 1985, 62: 114-120. A menos que se indique lo contrario, la configuración absoluta de un centro estereoscópico se muestra mediante el enlace en forma de cuña y el enlace de línea de puntos. Cuando el compuesto como se describe en el presente documento contiene un doble enlace olefínico u otro centro geométricamente asimétrico, a menos que se indique lo contrario, incluye los isómeros geométricosEyZ.Asimismo, todas las formas tautoméricas están dentro del alcance de la presente invención.
El compuesto de la presente invención puede tener isómeros o estereoisómeros geométricos particulares. La presente invención concibe todos estos compuestos, incluidos los isómeros cis y trans, los enantiómeros pares (-)- y (+)-, los enantiómeros (R)- y (S)-, los diastereoisómeros, los isómeros (D)-, los isómeros (L)-, y la mezcla racemato de los mismos y otras mezclas, tales como la mezcla enriquecida con enantiómeros o diastereómeros, todas estas mezclas están dentro del alcance de la presente invención. Puede existir otro carbono asimétrico en sustituyentes, por ejemplo, alquilo. Todos estos isómeros y sus mezclas están dentro del alcance de la presente invención.
Los isómeros (R)- y (S)-, y los isómeros D- y L- con actividad óptica se pueden preparar mediante síntesis quiral, reactivo quiral u otras tecnologías convencionales. Un enantiómero de un compuesto particular de la presente invención se puede preparar mediante síntesis asimétrica o derivatización con un auxiliar quiral, en donde la mezcla de diastereómeros obtenida se separa y el grupo auxiliar se rompe para proporcionar el enantiómero puro requerido. Alternativamente, una molécula con un grupo funcional alcalino (tal como amino) o un grupo funcional ácido (tal como carboxilo) puede formar una sal de diastereoisómero con un ácido y un álcali adecuados de actividad óptica, después la resolución del diastereoisómero se lleva a cabo mediante el método de resolución bien conocido en la industria. art, y después se recupera el enantiómero puro. Además, la separación del enantiómero y el diastereoisómero se realiza mediante cromatografía, donde se usa una fase estacionaria quiral y, opcionalmente, se combina con un método de derivatización química (por ejemplo, se puede producir carbamato a partir de una amina).
El compuesto de la presente invención puede incluir un isótopo atómico de uno o más átomos del compuesto en una proporción no natural. Por ejemplo, el compuesto puede marcarse con radioisótopos, como tritio (3H), yodo-125(125I) o C-14(14C). Todas las variantes isotópicas del compuesto de la presente invención, ya sean radiactivas o no, están dentro del alcance de la presente invención.
El término "vehículo farmacéuticamente aceptable" representa cualquier agente o vehículo que puede liberar una cantidad eficaz del presente compuesto activo sin interferir con su bioactividad y no tiene toxicidad ni efectos secundarios para el huésped o el paciente. Los vehículos representativos incluyen agua, aceite, base vegetal y mineral, base de crema, base de loción, base de ungüento, etc. Estos materiales incluyen agente de suspensión, agente adherente, potenciador transdérmico, etc. Sus formulaciones son bien conocidas por los expertos en el campo de la cosmética o de la medicina tópica. Para obtener más información sobre el vehículo, consulte Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21a Ed., Lippincott, Williams & Wilkins (2005), que se incorpora en el presente documento como referencia.
El término "excipiente" generalmente se refiere al vehículo, diluyente y/o medio requerido para preparar una composición médica eficaz.
Con respecto al fármaco o agente farmacológico activo, el término “cantidad eficaz” o “cantidad terapéuticamente eficaz” se refiere a la cantidad de fármaco suficiente para lograr el efecto esperado sin toxicidad. Con respecto a la formulación oral de la presente invención, la "cantidad eficaz" de un agente activo en la composición se refiere a la cantidad requerida para lograr el efecto esperado cuando se combina con otro agente activo en la composición. La cantidad eficaz varía de un individuo a otro y depende de la edad y el estado general del sujeto, así como del agente activo particular. La cantidad eficaz adecuada en cada caso individual puede determinarse mediante pruebas convencionales realizadas por expertos del sector.
El término "ingrediente activo", "agente terapéutico", "ingrediente activo" o "agente activo" se refiere a una entidad química que puede tratar eficazmente trastornos, enfermedades o afecciones diana.
El término "sustituido" se refiere a uno o más átomos de hidrógeno en un átomo particular reemplazado por uno o más sustituyentes, incluido hidrógeno pesado y variantes de hidrógeno, siempre que el estado de valencia del átomo particular sea normal y el compuesto sustituido sea estable. Cuando el sustituyente es un grupo cetona (es decir, =O), significa que se reemplazan dos átomos de hidrógeno. La sustitución de cetonas no ocurrirá en arilo. El término "opcionalmente sustituido" significa que se puede reemplazar y se puede no reemplazar. A menos que se indique lo contrario, el tipo y número del sustituyente pueden ser opcionales siempre que sean químicamente realizables.
Cuando cualquier variante (como R) aparece más de una vez en el compuesto, su definición en cada condición es independiente. Así, por ejemplo, si un grupo se reemplaza por 0 a 2 R, entonces el grupo puede ser reemplazado opcionalmente por como máximo dos R, y la R en cada condición tiene una opción independiente. Además, la combinación del sustituyente y/o sus variantes sólo está permitida bajo la condición de que la combinación pueda generar un compuesto estable.
Cuando los enlaces de un sustituyente pueden unirse a través de dos átomos de un anillo, el sustituyente puede unirse a cualquier átomo del anillo. Cuando no hay indicación de que a través del átomo el sustituyente ilustrado esté unido al compuesto incluido en la fórmula de la estructura química general pero no esté descrito específicamente, el sustituyente puede estar unido a cualquier átomo. La combinación del sustituyente y/o su variante se permite sólo bajo la condición de que la combinación pueda generar un compuesto estable. Por ejemplo, la unidad estructural
indica que puede estar sustituido en cualquier posición de ciclohexilo o ciclodieno.
El sustituyente alquilo y hereroalquilo se denomina generalmente "sustituyente arilo" y puede seleccionarse de, entre otros, uno o más de los siguientes grupos: -R', OR', =O, =NR', =N-OR', -NR'R”, -SR', halógeno, - SiR'R”R”', OC(O)R', -C(O)R', -CO2R', -CONR'R”, -OC(O)NR'R”, -NR”C(O)R', NR'C(O)NR”R”', -NR”C(O)2R', -NR..-C(NR'R”R”')=NR””, NR””C(NR'R”)=NR”', -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R”, NR”SO2R', -CN, -NO2, -N3, -CH(Ph)2y fluoroalquilo (C1 -C4) y el número de sustituyentes varía de 0 a (2m'+1), en donde m' es el número total de átomos de carbono en estos grupos. R', R”, R”', R”” y R..se seleccionan independientemente entre hidrógeno, hereroalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido (tal como arilo sustituido de 1 a 3 halógenos), alquilo sustituido o no sustituido, alcoxi, sulfoalcoxi o aralquilo . Cuando el compuesto de la presente invención incluye más de un R, por ejemplo, cada R se selecciona independientemente, al igual que cada grupo de ellos cuando hay más de un R', R”, R”', R”” y R.... Cuando R' y R” se unen al mismo átomo de nitrógeno, pueden combinarse con el átomo de nitrógeno para formar un anillo de 5, 6 o 7 miembros. Por ejemplo, -NR'R" pretende incluir, entre otros, 1 -pirrolidilo y 4-morfolinilo. Según la discusión de sustituyentes anterior, los expertos en la técnica pueden entender que el término "arilo" pretende incluir el grupo formado por un átomo de carbono unido a un grupo que no es hidrógeno, como haloalquilo (como -CF3 y -CH2CF3) y acilo (como -C(O)CH3, -C(O)CF3, -C(O)CH2CH3 etc.).
De manera similar al sustituyente alquilo, el sustituyente en el sustituyente arilo y heteroarilo generalmente se denomina "sustituyente arilo", que se selecciona, por ejemplo, -R', -OR', -NR'R”, -SR', -halógeno, -SiR'R”R ”', OC(O)R', -C(O)R', -CO2R', -CONR'R”, -OC(O)NR'R”, -NR”C(O)R', NR'C(O)NR”R”', -NR”C(O)2R', -NR””'-C(NR'R”R'”)=NR””, NR””C(NR'R”)=NR'”, -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R”, NR”SO2R', -CN, -NO2, -N3, -CH(Ph)2, fluoroalcoxi(Ci-C4) y fluoroalquilo(Ci-C4), etc., el número del sustituyente está entre 0 y el número total de valencias abiertas en el anillo aromático; en donde, R', R", R"', R"" y R...se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido y heteroarilo sustituido o no sustituido. Cuando el compuesto de la presente invención incluye más de un R, por ejemplo, cada R se selecciona independientemente, al igual que cada grupo de ellos cuando hay más de un R', R”, R”', R”” y R...
Dos sustituyentes en los átomos de arilo o heteroarilo adyacentes pueden sustituirse por el sustituyente con fórmula general de -T-C(O)-(CRR')q-U- opcionalmente, en donde T y U se seleccionan independientemente entre -NR, -O-, CRR'- o enlace sencillo, y q es un número entero de 0 a 3. Alternativamente, dos sustituyentes en átomos de arilo o hereroarilo adyacentes pueden reemplazarse por el sustituyente con fórmula general de -A(CH2) rB- opcionalmente, en donde A y B se seleccionan independientemente de -CRR'-, -O-, -NR-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2NR'- o enlace sencillo, r es un número entero entre 1 y 4. Opcionalmente, el enlace simple de un anillo recién formado se puede reemplazar por un enlace doble. Alternativamente, dos sustituyentes en el átomo de arilo o heteroarilo adyacente pueden reemplazarse por el sustituyente con la fórmula general de -A(CH2)rB- opcionalmente, en donde s y d se seleccionan independientemente de un número entero de 0 a 3, y es -O-, -NR', -S-, -S(O)-, -S(O)2-o -S(O)2NR'-. Los sustituyentes R, R', R" y R"' se seleccionan independientemente entre hidrógeno y alquilo (C1-C6) sustituido o no sustituido.
A menos que se indique lo contrario, el término "halo" o "halógeno" en sí mismo o como parte de otro sustituyente representa un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo. Además, se pretende que el término "haloalquilo" incluya un alquilo halogenado único y un alquilo polihalogenado. Por ejemplo, el término "haloalquilo (C1-C4)" pretende incluir, entre otros, trifluorometilo, 2, 2, 2-trifluoroetilo, 4-clorobutilo, 3-bromopropilo, etc.
Los ejemplos de haloalquilo incluyen, entre otros: trifluorometilo, triclorometilo, pentafluoroetilo y pentacloroetilo. "Alcoxi" representa el alquilo mencionado anteriormente que tiene un número particular de átomos de carbono unidos por un puente de oxígeno. Alcoxi C1-6 incluye alcoxilo de C1, C2, C3, C4, C5 y Ca. Los ejemplos de alcoxi incluyen, entre otros: metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, sec-butoxi, terc-butoxi, n-pentiloxi y S-pentiloxi. "Cicloalquilo" incluye un grupo cíclico saturado, tal como ciclopropilo, ciclobutilo o ciclopentilo. Cicloalquilo 3-7 incluye cicloalquilo C3, C4, C5, C6 y C7. "Alquenilo" incluye una cadena hidrocarbonada lineal o ramificada, en donde uno o más dobles enlaces carbono-carbono, como vinilo y propenilo, están presentes en cualquier sitio estable de la cadena.
El término "halo" o "halógeno" significa flúor, cloro, bromo y yodo.
A menos que se especifique lo contrario, el término "hetero" significa heteroátomo o heterorradical (es decir, radical que contiene heteroátomos), incluidos átomos distintos de carbono (C) e hidrógeno (H) y el radical que los contiene, por ejemplo, incluido oxígeno (O), nitrógeno (N), azufre (S), silicio (Si), germanio (Ge), aluminio (Al), boro (B), -O-, -S-, =O, =S, -C(=O)O-, -C(=O)-, -C(=S)-, -S(=O), -S(=O)2-, y -C(=O)N(H)-, -N(H)-, -C(=NH)-, -S(=O)2N(H)- o -S(=O)N(H)-opcionalmente sustituido.
A menos que se especifique lo contrario, "anillo" se refiere a un cicloalquilo, heterocicloalquilo, cicloalquenilo, heterocicloalquenilo, cicloalquinilo, heterocicloalquinilo, arilo o heteroarilo, sustituido o no sustituido. El llamado anillo incluye un anillo único, un anillo enlazado, un anillo espiro y un anillo fusionado o un anillo con puente. El número de átomos en el anillo generalmente se define como el número de miembros de los anillos; por ejemplo, "anillo de 5~7 miembros" se refiere a la disposición circundante de 5~7 átomos. A menos que se especifique lo contrario, el anillo contiene opcionalmente de 1-3 heteroátomos. Por lo tanto, el término "anillo de 5~7 miembros" incluye, por ejemplo, fenilpiridina y piperidinilo; y, por otro lado, el término "anillo alquilo heterocíclico de 5-7 miembros" incluye piridilo y piperidinilo, pero no incluye fenilo. El término "anillo" también incluye un sistema de anillos que contiene al menos un anillo, en donde cada "anillo" satisface independientemente la definición mencionada anteriormente.
A menos que se indique lo contrario, el término "heterociclo" significa un anillo monocíclico estable, un anillo bicíclico o un triciclo que contiene un heteroátomo o un grupo heteroatómico, que puede ser saturado, parcialmente insaturado o insaturado (aromático) y que contiene átomos de carbono y 1, 2, 3 o 4 heteroátomos en el anillo seleccionados independientemente de N, O y S, en donde cualquiera de dichos heterociclos puede fusionarse con un anillo de benceno para formar un anillo diciclo. Los heteroátomos de nitrógeno y azufre pueden oxidarse opcionalmente (es decir, NO y S (O) p). El átomo de nitrógeno puede estar sustituido o no sustituido (es decir, N o NR, en donde R es H u otro sustituyente ya definido en el presente documento). El anillo heterocíclico puede unirse a los grupos laterales de cualquier heteroátomo o átomo de carbono para formar una estructura estable. Si el compuesto generado es estable, los heterociclos descritos en el presente documento pueden sufrir sustituciones en las posiciones de carbono o nitrógeno. El átomo de nitrógeno del heterociclo está opcionalmente cuaternizado. En una modalidad preferida, cuando el número total de átomos de S y O en el heterociclo excede 1, estos heteroátomos no son adyacentes entre sí. En otra modalidad preferida, el número total de átomos de S y O en el heterociclo no excede 1. Como se usa en el presente documento, el término "heterociclo aromático" o "heteroarilo" significa anillo monocíclico estable de 5 miembros o anillo bicíclico, anillo monocíclico de 6 miembros o anillo bicíclico, anillo monocíclico de 7 miembros o anillo bicíclico, o ciclo aromático que contiene heterociclilo bicíclico de 7, 8, 9 o 10 miembros, que contiene átomos de carbono y 1, 2, 3 o 4 heteroátomos seleccionados independientemente entre N, O y S. El átomo de nitrógeno puede estar sustituido o no sustituido (es decir, N o NR, en donde R es H u otro sustituyente ya definido en el presente documento). Los heteroátomos de nitrógeno y azufre pueden oxidarse opcionalmente (es decir, NO y S (O) p). Cabe señalar que el número total de átomos de S y O en el heterociclo aromático no excede de 1. El anillo con puente también está incluido en la definición de heterociclo. Un anillo con puente se forma cuando uno o más átomos (es decir, C, O, N o S) están unidos a dos átomos de carbono o nitrógeno no adyacentes. Los anillos con puente preferidos incluyen, entre otros, un átomo de carbono, dos átomos de carbono, un átomo de nitrógeno, dos átomos de nitrógeno y un grupo carbono-nitrógeno. Cabe señalar que un puente siempre convierte el anillo monocíclico en un anillo tricíclico. En el anillo con puente, los sustituyentes del anillo también pueden aparecer en el puente.
Los ejemplos de compuestos heterocíclicos incluyen, entre otros, acridinilo, azocina, bencimidazolilo, benzofuranilo, benzotiofuranilo, benzotiofenilo, benzoxazolilo, benzoxazolinilo, benzotiazolilo, benzotriazolilo, benzotetrazolilo, benzoisoxazolilo, benzoisotiazolilo, bencimidazolinilo, carbazolilo, 4a H-carbazolilo, carbolinilo, cromanilo, cromeno, cinolinil decahidroquinolilo, 2H, 6H-1,5,2-ditiazinilo, dihidrofuro [2,3-6] tetrahidrofuranilo, furilo, furazanilo, imidazolidinilo, imidazolinilo, imidazolilo, 1H-indazolilo, indolalquenilo, dihidroindolilo, indolizinilo, indolilo, 3H-indolilo, isatinoilo, isobenzofuranilo, pirano, isoindolilo, isoindolinilo, isoindolilo, indolilo, isoquinolilo, isotiazolilo, isoxazolilo, metilendioxifenilo, morfolinilo, naftiridinilo, octahidroisoquinolinilo, oxadiazolilo, 1,2,3-oxadiazolilo, 1,2,4-oxadiazolilo, 1,2,5-oxadiazolilo, 1,3,4-oxadiazolilo, oxazolidinilo, oxazolilo, isoxazolilo, oxindolilo, pirimidinilo, fenantridinilo, fenantrolinilo, fenazina, fenotiazina, benzoxantina, fenoxazinilo, ftalazinilo, piperazinilo, piperidinilo, piperidona, 4-piperidona, piperonilo, pteridinilo, purinilo, piranilo, pirazinilo, pirazolidinilo, pirazolinilo, pirazolilo, piridazinilo, piridoxazoles, piridindimidazoles, piridoxazoles, piridilo, pirimidinilo, pirrolidilo, pirrolinilo, 2H-pirrolilo, pirrolilo, pirazolilo, quinazolinilo, quinolilo, 4H-quinolizinilo, quinoxalinilo, quinuclidinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidroisoquinolilo, tetrahidroquinolilo, tetrazolilo, 6H-1,2,5-tiadiazinilo, 1,2,3-tiadiazolilo, 1,2,4-tiadiazolilo, 1,2,5-tiadiazinilo, 1,3,4-tiadiazolilo, tienotrenilo, tiazolilo, isotiazoliltiatilo, tienooxazolilo, tienotiazolilo, tienoimidazolilo, tienoilo, triazinilo, 1,2,3-triazolilo, 1,2,4-triazolilo, 1,2,5-triazolilo, 1,3,4 -triazolilo y xantenilo. Los ejemplos también incluyen compuesto con anillo fusionado y anillo espiro.
A menos que se indique lo contrario, el término "alquilo" o concepto subordinado (como alquilo, alquenilo, alquinilo, fenilo, etc.) en sí mismo o como parte de otro sustituyente representa grupos atómicos de hidrocarburos o la combinación de los mismos de la cadena lineal, cadena ramificada o anillo, puede estar completamente saturado o insaturado en un solo miembro o en múltiples miembros, puede estar monosustituido, bisustituido o múltiplemente sustituido, puede ser monovalente (como metilo), divalente (como metileno) o multivalente (como metino) y puede incluir grupos atómicos divalentes o multivalentes, con átomos de carbono de una cantidad fija (tales como C1 -C10 que representan de 1 a 10 átomos de carbono). "Alquilo" incluye, entre otros, hidrocarbilo alifático y arilhidrocarbilo. El hidrocarbilo alifático incluye formas de cadena y anillo y, en particular, incluye, entre otros, alquilo, alquenilo y alquinilo, y el arilhidrocarbilo incluye, entre otros, arilhidrocarbilo de 6-12 miembros, tal como benceno, naftaleno, etc. En algunas modalidades, el término "alquilo" significa grupos atómicos de cadena lineal y cadena ramificada o la combinación de los mismos, puede estar completamente saturado o insaturado en un solo miembro o en múltiples miembros, y pueden incluir un grupo atómico divalente o multivalente. Los ejemplos del radical hidrocarbonado saturado incluyen, entre otros, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, terc -butilo, isobutilo, sec-butilo, isobutilo, ciclohexilo, (ciclohexil)metilo, ciclopropilmetilo y n-amilo, n-hexilo, n- heptilo, n-octilo, etc., y homólogos o isómeros de los mismos. El alquilo insaturado tiene uno o más enlaces dobles o triples, ejemplos de los cuales incluyen, entre otros, vinilo, 2-propenilo, butenilo, crotilo, 2-isopentenilo, 2-(butadienilo), 2,4-pentadienilo, 3-(1,4 -pentadienilo), acetenilo, 1- y 3-propinilo, 3-butileno y homólogos o isómeros superiores.
A menos que se indique lo contrario, el término “hereroalquilo” o concepto subordinado (tal como hereroalquilo, hereroalquenilo, hereroalquinilo, hereroarilo, etc.) en sí mismo o combinado con otro término representa el grupo hidrocarburo estable o la combinación del mismo de la cadena lineal, cadena ramificada o anillo, que está formado por un número determinado de átomos de carbono y al menos un heteroátomo. En algunas modalidades, el término "hereroalquilo" en sí mismo o combinado con otro término para representar el radical hidrocarburo estable o la combinación del mismo de la cadena lineal, cadena ramificada o anillo, que está formado a partir de varios átomos de carbono y al menos un heteroátomo. En una modalidad particular, el heteroátomo se selecciona entre B, O, N y S, en donde los átomos de nitrógeno y azufre están opcionalmente oxidados y el heteroátomo de nitrógeno opcionalmente cuaternizado. Los heteroátomos B, O, N y S pueden estar en cualquier posición interna del hereroalquilo (incluida la posición donde el alquilo se une al resto de la molécula). Los ejemplos incluyen, entre otros, -CH2-CH2-O-CH3, -CH2-CH2-NH-CH3, -CH2-CH2-N(CH3)-CH3, -CH2-S-CH2-CH3, -CH2-CH2, -S(O)-CH3, -CH2-CH2-S(O)2-CH3, -CH=CH-O-CH3, -CH2-CH=N-OCH3 y-CH=CH-n(CH3)-CH3. Como máximo dos heteroátomos pueden ser continuos, como por ejemplo -CH2-NH-OCH3.
Los términos “alcoxi”, “alquil amino” y “alquilsulfanilo” (o sulfo-alcoxi) son expresiones convencionales, que se refieren al grupo alquilo unido al resto de la molécula a través de un átomo de oxígeno, amidógeno o azufre.
A menos que se indique lo contrario, el término “cicloalquilo”, “heterocicloalquilo” o el concepto subordinado (tal como arilo, heteroarilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, cicloalquenilo, heterocicloalquenilo, cicloalquinilo, heterocicloalquinilo, etc.) en sí mismo o combinado con otros términos representa “alquilo” y “heteroalquilo” ciclado. Además, con respecto al heteroalquilo o heterocicloalquilo (como heteroalquilo y heterocicloalquilo), el heteroátomo puede ocupar la posición donde el heterociclo se une al resto de la molécula. Los ejemplos de cicloalquilo incluyen, entre otros, ciclopentilo, ciclohexilo, 1-ciclohexenilo, 3-ciclohexenilo, cicloheptilo, etc. Los ejemplos no restrictivos de heterociclilo incluyen 1-(1, 2, 5, 6-tetrahidropiridina), 1 -piperidilo, 2-piperidilo, 3-piperidilo, 4-morfolinilo, tetrahidrofuran-2-ilo, tetrahidrofuran indol-3-ilo, tiofan-2-ilo, tiofan-3-ilo, 1 -piperazinilo y 2-piperazinilo.
A menos que se especifique lo contrario, el término "arilo" se refiere al sustituyente aromático poliinsaturado, que puede estar monosustituido, disustituido o polisustituido, y puede ser monovalente, divalente o multivalente, y puede ser monocíclico o policíclico (como monocíclico a tricíclico; en donde al menos un anillo es aromático) y están fusionados entre sí o en enlace covalente. El término "heteroarilo" se refiere a arilo (o anillo) que contiene de 1 a 4 heteroátomos. En una modalidad ilustrativa, el heteroátomo se selecciona de B, N, O y S, en donde los átomos de nitrógeno y azufre están opcionalmente oxidados, y el átomo de nitrógeno está opcionalmente cuaternizado. El heteroarilo se puede unir a otras partes de una molécula mediante un heteroátomo. Los ejemplos no restrictivos de arilo y heteroarilo incluyen 1-naftilo, 2-naftilo, 4-bifenilo, 1-pirilo, 2-pirilo, 3-pirilo, 3-pirazolilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, pirazinilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 2-bencil-4-oxazolilo, 5-oxazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5-isoxazolilo, 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5-tiazolilo, 2-furilo, 3-furilo, 2 - tienilo, 3-tienilo, 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 2-pirimidilo, 4-pirimidilo, 5-benzotiazolilo, purinilo, 2-bencimidazolilo, 5-indolilo, 1 -isoquinolilo, 5-isoquinolilo, 2-quinoxalinilo, 5-quinoxalinilo, 3-quinolilo y 6-quinolilo. El sustituyente de cualquier anillo arilo y heteroarilo anterior se selecciona entre los sustituyentes aceptables que se indican a continuación.
Por conveniencia, cuando arilo se usa junto con otros términos (tales como ariloxi, ariltio y aralquilo) incluye el anillo arilo y heteroarilo como se definió anteriormente. Por lo tanto, el término "aralquilo" pretende incluir aquellos grupos atómicos con arilo unido a alquilo (como bencilo, fenetilo, piridilmetilo, etc.) e incluye aquellos alquilos con átomo de carbono (como metileno) que ya han sido reemplazados por, por ejemplo, átomo de oxígeno, tal como fenoximetilo, 2-piridinmetil oxígeno, 3-(1-naftoxi)propilo, etc.
El término "grupo saliente" se refiere al grupo funcional o átomo que puede ser reemplazado por otro grupo funcional o átomo mediante sustitución (tal como sustitución nucleofílica). Por ejemplo, el grupo saliente representativo incluye triflato; cloro, bromo y yodo; sulfonato, tal como metanosulfonato, toluenosulfonato, p-bromobencenosulfonato, ptoluenosulfonato; aciloxi, tal como acetoxi y trifluoroacetilo.
El término "grupo protector" incluye, entre otros, "grupo protector de amino", "grupo protector de hidroxi" o "grupo protector de sulfhidrilo". El término "grupo protector de amino" se refiere al grupo protector adecuado para prevenir la reacción secundaria en el nitrógeno del amino. El grupo protector de amino representativo incluye, entre otros: formilo; acilo, tal como alcanoilo de cadena (tal como acetilo, tricloroacetilo y trifluoroacetilo); alcoxicarbonilo, tal como tbutiloxicarbonilo (Boc); arilmetoxicarbonilo, tal como carbobenzoxi (Cbz) y 9-fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc); arilmetilo, tal como bencilo (Bn), trifenilmetilo (Tr), 1,1-di-(4'-metoxifenil) metilo; silicilo, tal como trimetilsililo (TMS) y tbutildimetilsililo (TBS). El término "grupo protector de hidroxilo" se refiere al grupo protector adecuado para prevenir la reacción secundaria del hidroxilo. Un grupo protector de hidroxilo representativo incluye, entre otros: alquilo, tal como metilo, etilo y terc-butilo; acilo, como acil alcano (como acetilo); arilmetilo, tal como bencilo (Bn), p-metoxibencilo (PMB), 9-fluorenilmetilo (Fm) y difenilmetilo (bencihidrilo, DPM); silicilo, tal como trimetilsililo (TMS) y t-butildimetilsililo (TBS).
El compuesto de la presente invención se puede preparar mediante una pluralidad de métodos de síntesis conocidos por los expertos en la técnica, incluidas las modalidades detalladas enumeradas a continuación, modalidades formadas por la combinación de dichas modalidades detalladas y otros métodos de síntesis química, y reemplazo equivalente conocido por los expertos en la técnica. Las modalidades preferibles incluyen, entre otras, las modalidades de la presente invención.
El disolvente utilizado en la presente invención está disponible comercialmente. En la presente invención se utilizan las siguientes abreviaturas: ac representa agua; HATU representa hexafluorofosfato de O-(7-aza-benzotriazol-1-il)-N, N, N', N'-tetrametilurea; EDC representa clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida; m-CPBA representa ácido 3-cloroperoxibenzoico; eq representa el peso equivalente y el equivalente; CDI representa carbonilo diimidazol; DCM representa diclorometano; PE representa éter de petróleo; DIAD representa el éster diisopropílico del ácido azodicarboxílico; DMF representa N,N-dimetilformamida;<d>M<s>O representa dimetilsulfóxido; EtOAc representa acetato de etilo; EtOH representa alcohol etílico; MeOH representa alcohol metílico; CBz representa carbobenzoxi, que es un grupo protector de amino; BOC representa butilcarbonilo terciario, que es un grupo protector de amino; HOAc representa ácido acético; NaCNBH3 representa cianoborohidruro de sodio; rt representa temperatura ambiente; O/N representa durante toda la noche; THF representa tetrahidrofurano ; Boc2O representa éster dicarbónico de butilo diterciario; TFA representa ácido trifluoroacético; DIPEA representa diisopropiletilamina; SOC12 representa cloruro de tionilo; CS2 representa disulfuro de carbono; TsOH representa ácido p-toluenosulfónico; NFSI representa N-fluoro-N-(bencensulfonil) benzosulfamida; NCS representa 1-cloropirrolidina-2,5-dicetona; n-Bu4NF representa fluorotetrabutil amonio; iProOH representa alcohol 2-propílico; pf representa el punto de fusión; LDA representa diisopropilamiduro de litio; TLC representa cromatografía en capa fina; MS ESI representa el espectro de masas de la ionización por electropulverización; DCM representa diclorometano; LCMS representa cromatografía líquida-espectrometría de masas; SFC representa cromatografía de fluidos supercríticos; DMF representa N,N-dimetilformamida; HOBt representa 1-hidroxibenzotriazol; y EDCI representa clorhidrato de 1-(3-dimetilamino propil)-3-etilcarbodiimida.
El compuesto se nombra manualmente o mediante el software ChemDraw®, y el compuesto disponible comercialmente utiliza el nombre del catálogo del proveedor.
Descripción detallada
Para ilustrar la presente invención con mayor detalle, se presentan las siguientes modalidades, pero el alcance de la presente invención no se limita a ellas.
Síntesis de intermediario 1, intermediario 2 e intermediario 3 claves:
Paso 1: se añadió gota a gota ácido clorhídrico/dioxano (10 M, 200 ml) a una solución (50 ml) de 1 -Boc-piperidil-3-carboxilato de etilo (50 g, 194,30 mmol) en DCM a 0 °C, después la solución de reacción se calentó hasta 25 °C y se agitó durante 2 h. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se concentró a presión reducida para obtener clorhidrato de piperidil-3- carboxilato de etilo que era un sólido amarillo (42,63 g, producto bruto). El producto se usó directamente en el siguiente paso sin purificación adicional. El valor de CsH15NO2[M+H]+158 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 158.
Paso 2: se disolvió clorhidrato de piperidil-3-carboxilato de etilo (40,00 g, 206,54 mmol) en un disolvente mixto de ácido acético glacial (400 ml) y agua (200 ml) y se añadió gota a gota una solución acuosa (200 ml) de nitrito de sodio (28,50 g), 413,08 mmol) (30 minutos) a 0 °C. Después de añadir gota a gota la solución acuosa, la mezcla se agitó y se hizo reaccionar durante 1 hora a 0 °C. Posteriormente, la solución de reacción se calentó a 25 °C y después se agitó nuevamente durante 1 h. La TLC (éter de petróleo: acetato de etilo = 5:1) mostró que las materias primas reaccionaron completamente. Los reactivos se inactivaron en agua y después se extrajeron mediante el uso de acetato de etilo (100 ml x 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución saturada de bicarbonato de sodio (100 ml x 3) y una solución salina saturada (100 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida, respectivamente. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en columna de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 5:1) para obtener éster etílico del ácido 1 -nitrosopiperidil-3-carboxílico que era una materia oleosa incolora (31,00 g, el rendimiento fue del 80,60 %). El valor de C8H-<m>N203[M+H]+187 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 187.
Paso 3: se disolvieron 1 -nitrosopiperidil-3-carboxilato de etilo (10,00 g, 53,70 mmol) y polvo de zinc (17,56 g, 268,50 mmol) en metanol (80 ml) y se enfrió a -5 °C, después se añadió gota a gota ácido acético glacial (80 ml). La mezcla resultante se agitó durante 30 min a 0 °C, después se calentó a 25 °C y se agitó para reaccionar durante 2 h. La TLC mostró que la reacción se había completado. Los sólidos se filtraron y el filtrado se concentró a presión reducida. Los residuos se ajustaron mediante una solución saturada de hidrogenocarbonato de sodio a pH = 7-8, y se extrajo una fase acuosa x ml con diclorometano/metanol (5:1) (100 ml x 3). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución saturada de cloruro de sodio (50 ml x 3), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener éster etílico del ácido 1-aminopiperidil-3-carboxílico que era una materia oleosa beige (6,50 g, producto bruto). El producto se usó directamente en el siguiente paso sin purificación adicional. El valor de CsH14N2O3[M+H]+173 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 173.
Paso 4: se disolvieron 1-aminopiperidil-3-carboxilato de etilo (6,50 g, 37,74 mmol) y 4-cloro-7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (12,78 g, 41,51 mmol) en DCM (60 ml). A la solución anterior se añadió trietilamina (11,46 g, 113,22 mmol) a 25 °C. La solución mixta se agitó para reaccionar durante 10 h a 25 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se concentró hasta sequedad a presión reducida. Los residuos se vertieron en agua (100 ml) y la fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (100 ml x 2). Las fases orgánicas consolidadas se lavaron con solución salina saturada (50 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron hasta sequedad a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en columna de sílice (diclorometano: acetato de etilo = 1:0 a 2:1) para obtener éster etílico del ácido 1-((7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidil-3-carboxílico que era un sólido espumoso blanco (5,60 g, el rendimiento fue del 33,47 %). Los residuos se purificaron mediante cromatografía en columna de sílice (diclorometanoclorometano: acetato de etilo = 1:0 a 2:1) para obtener el éster etílico del ácido 1-((7-p-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino) piperidil-3-carboxílico que era un sólido espumoso blanco (5,60 g, el rendimiento fue del 33,47 %). El valor de C2-iH25N5O4S[M+H]+444 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 444.
Paso 5: se disolvió 1-[[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]piperidil-3-carboxilato de etilo (2,00 g, 4,51 mmol) en tetrahidrofurano (30 ml) y se añadió NaH (60 %, 270,80 mg, 6,77 mmol) en lotes a 0 °C, y después la mezcla se calentó a 28 °C y se agitó durante 30 minutos. Posteriormente, el sistema de reacción se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota yoduro de metilo (960,22 mg, 6,77 mmol); después el sistema de reacción se calentó a 28 °C y se agitó para reaccionar durante 2 h a la misma temperatura. LCMS y TLC mostraron que la reacción se había completado. La solución de reacción se inactivó con agua (5 ml) y se extrajo una fase acuosa mediante el uso de acetato de etilo (20 ml x 3). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (15 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron hasta sequedad a presión reducida.
Los residuos se purificaron mediante cromatografía en columna de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 5:1, 3:1) para obtener 1 -[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]piperidil-3-carboxilato de etil que era un sólido espumoso blanco (900,00 mg, en donde el rendimiento fue del 41,43 %). El valor de C22H27N5O4S[M+H]+458 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 458.
Paso 6: se disolvió 1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]piperidil-3-carboxilato de etilo (900,00 mg, 1,97 mmol) en una mezcla de disolventes de metanol (8 ml), THF (8 ml) y agua (4 ml) e hidróxido de sodio (315,20 mg, 7,88 mmol), después la mezcla se calentó a 70 °C y se agitó durante 1 h. La TLC mostró que la reacción se había completado. El disolvente se concentró hasta secar a presión reducida y los residuos se ajustaron con ácido clorhídrico 2 M (4 ml) a pH = 3-4. Se sometió una fase acuosa a concentración al vacío para obtener ácido 1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]piperidil-3-carboxílico que era un sólido blanco (650,00 mg, crudo producto). El producto se usó directamente en el siguiente paso sin purificación adicional. El valor de C-i3H-i7N5O2[M+H]+276 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 276.
Modalidad 1
1-((7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)-N-(2,2,2-trifluoroetil)piperidil-3-formamida
Paso 1: se disolvió el Intermediario 1 (270,00 mg, 608,77 umol) en un disolvente mixto de tetrahidrofurano (5 ml) y agua (3 ml), se añadió hidróxido de litio monohidratado (51,09 mg, 1,22 mmol) en lotes a 25° C, y se agitó para reaccionar durante 5 h a 25 °C. LCMS y TLC mostraron que la reacción se había completado. La solución de reacción se concentró hasta sequedad a presión reducida y la fase acuosa se ajustó con HCl 2 M (3 ml) a pH=2-3 y se extrajo con acetato de etilo (10 ml x 2). Las fases orgánicas de Mergd se lavaron con una solución salina saturada (10 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío para obtener ácido 1 -((7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amino)piperidil-3-carboxílico que era una materia oleosa amarilla (200,00 mg, producto bruto). El valor de C-igH21N5O4S[M+H]+416 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 416.
Paso 2: se disolvió ácido 1-((7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidil-3-carboxílico (200,00 mg, 481,38 umol) en DMF (10 ml). y después se añadió HOBt (130,09 mg, 962,76 umol), EDCI (184,56 mg, 962,76 umol), trietilamina (292,27 mg, 2,89 mmol) y 2,2,2-trifluoroetilamina (95,36 mg, 962,76 umol) a 0 °C. La mezcla se calentó a 25 °C y se agitó durante 10 h. La LCMs mostró que la reacción se había completado. La solución de reacción se vertió en agua (30 ml) y la fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (15 ml x 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (10 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. Los residuos se purificaron mediante CCF preparativa (acetato de etilo:éter de petróleo = 1:10) para obtener 1-((7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)-N- (2,2,2-trifluoroetil)piperidil-3-formamida que era una materia oleosa amarilla (40,00 mg, el rendimiento fue del 16,74 %). El valor de C21H23F3N6OaS[M+H]+497 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 497.
Paso 3: se disolvió 1-((7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)-N-(2,2,2-trifluoroetil)piperidiil-3-formamida (40,00 mg, 80,56 umol) en MeOH (3 ml) y agua (3 ml), se añadió carbonato de potasio (22,27 mg, 161,12 umol) a 25 °C, después la solución de reacción se calentó a 70 °C y se agitó durante 2 h. La LCMS mostró que la reacción se había completado. Se enfrió una mezcla a 25 °C y se concentró hasta sequedad a presión reducida. La fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (10 ml x 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (10 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. Los residuos se purificaron mediante CCF preparativa (diclorometano: metanol = 10:1) para obtener WX01: 1-((7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)-N-(2,2),2-trifluoroetil)piperidil-3-formamida (7,00 mg, el rendimiento fue del 25,38 %). 1h Nm R (400 MHz, MeOD-d4) 8= 8,11 (br. s., 1H), 6,51-7,23 (m, 2H), 3,96 (br. s., 2H), 2,53-3,26 (m, 5H), 1,38-2,05 (m, 4 H), 6,74 (s, 1H), 4,64-4,72 (m, 1H), 4,44-4,59 (m, 2H), 3,77-3,84 (m, 1H), 3,66 (dd, J=5,02, 13,30 Hz, 1H), 3,18-3,28 (m, 3H), 1,25 (t, J=7,40 Hz, 3H). El valor de C-<m>H17F3N60[M+H]+343 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 343
Modalidad 2
Paso 1: se disolvió 1-((7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)-N-(2,2,2-trifluoroetil)piperidil-3-formamida (60,00 mg, 120,84 umol) en<t>H<f>(5 ml) y se añadió NaH (60 %, 5,30 mg, 132,50 umol) en lotes a 0 °C; después de agitar la mezcla durante 1 h a 0 °C, se añadió gota a gota yoduro de metilo (1,05 g, 7,40 mmol). La solución de reacción se calentó a 20 °C y se agitó durante 2 h. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 0 °C, se le añadió agua (10 ml) y se agitó durante 20 min, después la fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (10 ml x 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (10 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron hasta sequedad a presión reducida para obtener N-metil-1-[metil-[7-(tosilo)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]-N-(2,2,2-trifluoroetil)piperidil-3-formamida que era una materia oleosa amarilla (50,00 mg, producto bruto). El valor de C23H27F3N6O3S[M+H]+525 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 525.
Paso 2: se disolvió N-metil-1-[metil-[7-(tosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]-N-(2,2,2-trifluoroetil)piperidilo 3-formamida (50,00 mg, 95,32 umol) en un disolvente mixto de metanol (3 ml) y agua (3 ml), carbonato de potasio (39,52 mg, 285,96 umol) y después la mezcla se calentó a 80 °C y se agitó durante 5 h. La LCMS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 25 °C y se concentró hasta sequedad a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante HPLC preparativa para obtener WX02: N-metil-1-(metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)-(2,2,2-trifluoroetil)piperidil-3-formamida (11,00 mg, el rendimiento fue del 31,16 %). 1H NMR (400 MHz, MeoD-d4) 8= 8,11 (s.br., 1H), 7,04-7,11 (m, 2H), 3,94-4,39 (m, 2H), 3,22 (s, 6H), 2,84-3,13 (m, 5H), 1,93 (br. s., 3H), 1,38-1,58 (m, 1H). El valor de C-i6H2-iF3N6O[M+H]+371 se calculó mediante el uso de MS ESI y era 371.
Modalidad 3
1-((7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)-N-(cianometil)piperidil-3-formamida
Paso 1: se disolvió el Intermediario 1 (1,32 g, 2,98 mmol) en un disolvente mixto de tetrahidrofurano (10 ml) y agua (10 ml) e hidróxido de sodio (238,40 mg, 5,96 mmol). La solución de reacción se calentó a 70 °C y se agitó durante 10 h. La LCMS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 20 °C y el disolvente se concentró hasta sequedad a presión reducida. Los residuos se neutralizaron con HCl 2 M hasta que el valor de pH fue 2-3 y después se concentraron a presión reducida para obtener ácido 1 -(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il-amino)piperidil-3-carboxílico que era materia oleosa gris (2,00 g, producto bruto). El producto se utilizó directamente en el siguiente paso sin necesidad de purificación adicional. El valor de C-i2H-i5N5O2[M+H]+262 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 262.
Paso 2: se disolvió ácido 1-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il-amino)piperidil-3-carboxílico (520,00 mg, 1,99 mmol) en DMF (15 ml) y se añadieron HOBt (537,78 mg), 3,98 mmol), EDCI (762,97 mg, 3,98 mmol), clorhidrato de 2-glicinonitrilo (220,98 mg, 2,39 mmol) y trietilamina (1,01 g, 9,95 mmol) a 0 °C. La solución de reacción se agitó durante 10 h a 25 °C. La LCMS mostró que la reacción se había completado. Los residuos se vertieron en agua (20 ml) y se agitaron durante 20 min. La fase acuosa se extrajo mediante el uso de diclorometano y metanol (10:1, 15 ml x 3). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (20 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. Los residuos se purificaron mediante una HPLC preparativa (NH3.H2O) para obtener WX03: N-(cianometil)-1-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il-amino)piperidil-3-formamida (56,27 mg, el rendimiento fue del 9,45 %). 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) 8 = 8,21 (s. s., 1H), 7,16 (s. s., 1H), 6,72 (s. s., 1H), 4, 15-4,28 (m, 2H), 2,66-3,26 (m, 5H), 1,84 (d, J= 6,8 Hz, 4H). El valor de C14H1/NyO[M+H]+300 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 300.
Modalidad 4
Paso 1: se disolvió el Intermediario 3 (650,00 mg, 2,36 mmol) en DMF (15 ml) y se añadieron HOBt (637,77 mg, 4,72 mmol), EDCI (904,82 mg, 4,72 mmol), 2,2,2-trifluoroetilamina (467,52 mg, 4,72 mmol) y trietilamina (1,43 mg, 14,16 mmol), la solución de reacción se agitó durante 10 h a 25 °C. La LCMS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se vertió en agua (50 ml) y la fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (20 ml x 3). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (15 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron hasta sequedad a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante HPLC preparativa (NH3.H2O) para obtener WX04: 1-[metil(7H)pirrolo-[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]-N-(2,2,2-trifluoroetil)piperidil-3-formamida (270,00 mg, el rendimiento fue del 32,11 %). 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) 8 = 8,11 (s, 1H), 7,00-7,10 (m, 2H), 3,75-4,00 (m, 2H), 3,21 (s, 3H), 3,01 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 2,85-2,96 (m, 3H), 1,85-2,02 (m, 3H), 1,37-1,58 (m, 1H). El valor de C15H-igF3N6O[M+H]+357 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 357.
Modalidad 5
1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]-N-(2,2,2-trifluoroetil)piperidil-3-formamida (140,00 mg, 392,87 umol) se separó a través de una columna quiral para obtener WX05: (R o S)-1-[metil(7H pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]-N-(2,2,2-trifluoroetil)piperidil-3-formamida (68,00 mg, el rendimiento fue del 48,57 % y WX06: (S o R)-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]-N-(2,2,2-trifluoroetil)piperidil-3-formamida (53,00 mg, el rendimiento fue del 37,86 %).
Condiciones de separación por SFC:
columna: columna quiral AS-H
fase móvil: A: CO2 supercrítico, B: 20 % EtOH (0,1 % NH3.H2O), A:B = 50:50
caudal: 60 ml/min
temperatura de la columna: 38 °C
longitud de onda: 220 nm
presión del chorro: 100 Bar
temperatura de la boquilla: 60 °C
temperatura de evaporación: 20 °C
temperatura de acondicionamiento: 25 °C
WX05: (R o S)-1-[metil(7H pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]-N-(2,2,2-trifluoroetil)piperidil-3-formamida, tiempo de retención: 3,268 minutos. 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) 8,11 (s, 1H), 7,06 (s, 2H), 3,76-3,98 (m, 2H), 3,21 (s, 3H), 2,83-3,07 (m, 5H), 1,84-2,02 (m, H), 1,39-1,55 (m, 1H). El valor de C15H19FaN6O[M+H]+357 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 357.
WX06: (S o R)-1-[metil(7H pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]-N-(2,2,2-trifluoroetil)piperidil-3-formamida, tiempo de retención: 3,991 minutos 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) 8= 8,11 (s, 1H), 7,06 (br. s., 2H), 3,75-3,99 (m, 2H), 3,21 (s, 3H), 2,82 -3,07 (m, 5H), 1,82-2,04 (m, 3H), 1,47 (d, J= 12,0 Hz, 1H). El valor de C15H1gFaN6O[M+H]+357 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 357.
Modalidad 6
(N-(cianometil)-1-(metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidil-3-formamida
Paso 1: se disolvió el Intermediario 3 (550,00 mg, 2,00 mmol) en DMF (15 ml) y se añadieron HOBt (540,48 mg, 4,00 mmol), EDCI (766,80 mg, 4,0 mmol), clorhidrato de 2-glicinonitrilo (370,12 mg, 4,0 mmol) y trietilamina (1,21 mg, 12,0 mmol). La mezcla se agitó para reaccionar durante 10 h a 25 °C. La LCMS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se vertió en agua (50 ml), se extrajo una fase acuosa mediante el uso de acetato de etilo (15 ml x 4), las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (20 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro y se filtraron y se concentraron hasta sequedad a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante una HPLC de tipo preparativa(NH3.H2O) para obtener WX07: N-(cianometil)-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino] piperidil-3-formamida (170,00 mg, el rendimiento fue del 26,74 %). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 8= 8,43 (s. s., 1H), 8,31 (s. s., 1H), 7,18 (s. s., 1H), 6,87 -7,07 (m, 1H), 6,59 (br. s., 1H), 4,11-4,40 (m, 3H), 3,32-3,47 (m, 1H), 3,39 (br. s., 3H), 3,22 (br. s., 1H), 2,74- 3,14 (m, 7H), 1,95 (d, J= 15,9 Hz, 2H), 1,74 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 1,55 (d, J = 12,7 Hz, 1H). El valor de C15H-igN7O[M+H]+314 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 314.
Modalidad 7
(R&S) (N-(cianometil)-1-(metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidil-3-formamida
Se separó N-(cianometil-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]piperidil)-3-formamida (170,00 mg, 542,51 umol) a través de una columna de separación quiral para obtener WX08: (R o S)-N-(cianometil)-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]piperidil)-3-formamida (68,00 mg, el rendimiento fue 40,00 %) y WX09: (S o R)-N-(cianometil)-1-[metil(7H pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]piperidil)-3-formamida (64,00 mg, el rendimiento fue del 37,65 %).
Condiciones de separación por SFC:
columna de separación: AS-H
fase móvil: A: CO2 supercrítico, B:30 % MeOH (0,1 % NH3H2O), A:B = 50:50
caudal: 50 ml/min
temperatura de la columna: 38 °C
longitud de onda: 220 nm
presión del chorro: 100 Bar
temperatura de la boquilla: 60 °C
temperatura de evaporación: 20 °C
temperatura de acondicionamiento: 25 °C
WX08: (R o S)-N-(cianometil-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]piperidil)-3-formamida, tiempo de retención: 5,659 min. 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) 8 = 8,11 (s, 1H), 6,97-7,13 (m, 2H), 4,12 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 3,21 (s, 3H), 2,79-3,07 (m, 5H), 1,80-2,03 (m, 3H), 1,38-1,55 (m, 1H). El valor de C15H19N7O[M+H]+314 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 314.
WX09: (S o R)-N-(cianometil-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]piperidil)-3-formamida, tiempo de retención: 6,872 min. 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) 8 = 8,11 (s, 1H), 6,96-7,12 (m, 2H), 4,03-4,20 (m, 2H), 3, 21 (s, 3H), 2,76 3,09 (m, 5H), 1,84-2,01 (m, 3H), 1,39-1,56 (m, 1H). El valor de C15H19N7O[M+H]+314 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 314.
Modalidad 8
1 -(metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidil-3-carboxilato de etilo
Paso 1: se añadió carbonato de potasio (90,62 mg, 655,68 umol) a la solución etanólica (10,00 ml) del intermediario 2 (100,00 mg, 218,56 umol) a 25 °C bajo protección de nitrógeno. La mezcla se agitó durante 16 h a 25 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se concentró a presión reducida a 40 °C. Los residuos se diluyeron con agua (10 ml). La fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (50 ml x 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua salina saturada (20 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro y se filtraron, y el disolvente se concentró a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante el uso de una HPLC de tipo preparativa (método alcalino) para obtener WX10: 1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]piperidil-3-carboxilato de etilo (30,00 mg, 98,89 umol, el rendimiento fue del 45,25 % y la pureza fue del 100 %). 1H NMR (400 MHz, metanol-d4) 8 = 8,13 (s, 1H), 7,06 (d, J=16,8 Hz, 2H), 4,14 (q, J =6,9 Hz, 2H), 3,23 (s, 3H), 3,15 (d, J =6,8 Hz, 1H), 2,94 (br. s., 4H), 2,12 (d, J =13,3 Hz, 1H), 1,92 (br. s., 2H), 1,41 (br. s., 1H), 1,26 (t, J =6,9 Hz, 3H), 1,00 (br. s., 1<h ) . El valor de C-i5H2-iN5O2[M+H]+304 se calculó mediante el uso de M s ESI y fue 304.>
Modalidad 9
1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ilamino]piperidil)-3-formamida
Paso 1: se disolvieron 1 -[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]piperidil-3-carboxilato de etilo (470,00 mg, 1,09 mmol) y trietilamina (166,10 mg, 1,64 mmol) en tetrahidrofurano (20,00 ml). Se goteó cloroformiato de isopropilo (134,11 mg, 1,09 mmol, 1,00 eq) en el sistema de solución anterior a 0 °C. La mezcla se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. La TLC (éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) mostró que la reacción se había completado. La mezcla se usó directamente en la siguiente reacción. La mezcla anterior se enfrió de nuevo a 0 °C y se le añadió amoníaco acuoso (383,56 mg, 10,94 mmol). La mezcla obtenida finalmente se agitó durante 16 h a 25 °C. La mezcla se diluyó con agua (10 ml). La fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (50 ml x 3). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua salina saturada (20 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron hasta sequedad a presión reducida para obtener 1-[metN-[7-(tosN)pirrol[2]3-d]pirimidin-4-il]amino]piperidil)-3-formamida (470,00 mg, producto bruto) que era un sólido amarillo y se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional.
Paso 2: se disolvió 1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]piperidil)-3-formamida (70,00 mg, 163,36 pmol) en un disolvente mixto de tetrahidrofurano (5,00 ml) y metanol (5,00 ml) y se añadió una solución acuosa (2,50 ml) de hidróxido de sodio (13,07 mg, 326,72 umol). La mezcla se agitó para reaccionar durante 2 h a 100 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 25 °C y el disolvente se concentró a presión reducida a 40 °C. Los residuos se ajustaron mediante ácido clorhídrico diluido a pH = 8-9. Los residuos se purificaron mediante el uso de una HPLC de tipo preparativa (método alcalino) para obtener WX11: 1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]piperidil)-3-formamida (30,00 mg, el rendimiento fue del 66,94 %). 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8= 8,12 (s, 1H), 7,07 (s, 2H), 3,23 (s, 3H), 3,10 - 2,81 (m, 5H), 2,03 - 1,87 (m, 3H), 1,54 - 1,41 (m, 1H). El valor de C13H1sN6O[M+H]+275 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 275.
Modalidad 10
2-c¡ano-N-(1-(met¡l(7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)am¡no)p¡perid¡l-3-acetam¡da
WX12 se preparó mediante el uso de un método de preparación similar al de la Modalidad 6, y un producto bruto se purificó mediante una HPLC de tipo preparativa para obtener WX12: 2-ciano-N-(1-(7H-pirrol[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidil-3-acetamida 1H NMR (400MHz, METANOL-d4) 8 = 8,13 (s, 1H), 7,09 (br. s., 1H), 7,05 (d, J=3,5 Hz, 1H), 4,24 -4,08 (m, 1H), 3,22 (s, 3H), 3,15 (d, J =5,5 Hz, 1H), 3,06 -2,83 (m, 2H), 2,68 (t, J =10,0 Hz, 1H), 2,05 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 1,99 - 1,85 (m, 2H), 1,32 -1,18 (m, 1H). El valor de C15H1gNyO[M+H]+314 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 314.
Modalidad 11
3,3,3-trifluoroetil-N-(1-(metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidil-3-)propilcarboxamida
WX13 se preparó mediante el uso de un método de preparación similar al de la Modalidad 6, y se purificó un producto bruto mediante una HPLC de tipo preparativa para obtener WX13: 3,3,3-trifluoroetil-N-(1 -(metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidil-3-)propilcarboxamida. 1H MR (400 MHz, METANOL-d4) 8 = 8,13 (s, 1H), 7,12 - 7,o4 (m, 2H), 4,21 (t, J =11,2 Hz, 1H), 3,22 (s, 3H), 3,15 (d, J =10,5 Hz, 1H), 2,97 - 2,83 (m, 2H), 2,67 (t, J =9,9 Hz, 1H), 2,04 (d, J =11,8 Hz, 1H), 1,98 - 1,84 (m, 2H)), 1,32-1,19 (m, 1H). El valor de C15H19FaN6O[M+H]+357 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 357.
Modalidad 12
WX14
N-(cianometil)-1-(metil(1H-pirrolo[2,3-b]piridil-4-)amino)piperidil-3-formamida
Paso 1: se disolvió 4-cloro-1H-pirrolo[2,3-b]piridina (20,00 g, 131,08 mmol) en diclorometano (400 ml) y se añadió Et3N (39,79 g, 393,24 mmol); a continuación, se añadió DMAP (1,60 g, 13,11 mmol) y se enfrió a 0 °C, se añadió cloruro de p-toluenosulfonilo (27,49 g, 144,19 nmol) en lotes y se agitó continuamente durante 4 h a esta temperatura, después se calentó a 25 °C y se agitó durante 12 h. La LC-MS mostró que las materias primas habían reaccionado completamente y se detectó un producto objetivo. Se añadió agua (100 ml) para inactivar, la fase acuosa se extrajo con diclorometano (100 ml x 3), las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con una solución salina saturada (100 ml), se secaron con Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener un sólido marrón y el producto bruto se recristalizó (acetato de etilo:éter de petróleo = 10 ml:200 ml) para obtener un producto bruto de 4-cloro-1-(tosil)pirrolo[2,3-b]piridina (18,90 g). El producto se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional. El valor de C-mH11CIN202S5[M+H]+307,0 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 306,9.
Paso 2: se disolvieron 4-Cloro-1-(tosil)pirrolo[2,3-b]piridilo (5,9 g, 19,2 mmol) y formiato de 1 -aminopiperidil-3-etilo (3,00 g, 17,42) (en referencia a la vía de intermediario clave) en tolueno anhidro (40 ml) y se añadió Cs2CO3 (11,35 g, 34,84 mmol), se reemplazó tres veces por N2, después se añadieron Pd2(dba)3 (1,60 g, 1,74 mmol) y Xantphos (2,02 g, 3,48 mmol), se reemplazó tres veces por N2. La mezcla se sometió a una reacción de reflujo durante 3 h a 120 °C y la LC-MS mostró que se había generado un producto. El tiempo de reacción se prolongó, las materias primas ya no se consumieron y al mismo tiempo se generaron subproductos de gran peso molecular. La mezcla se diluyó con acetato de etilo, se filtró y el filtrado se concentró, se separó mediante una columna (éter de petróleo: acetato de etilo = 5:1) para obtener formiato de 1 -[[1-(tolilsulfonil)pirrol[2,3-b]]piridin-4-]amino]piperidil-3-etilo rojo claro (800,00 mg, el rendimiento fue del 10,38 %). El valor de C22H26N4O4S[M+H]+443,1 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 443,1.
Paso 3: se disolvió formiato de 1-[[1-(tolilsulfonil)pirrolo[2,3-b]piridil-4-]amino]piperidil-3-etilo (543,00 mg, 1,23 mmol) en tetrahidrofurano (10 ml) y se añadió NaH (54,00 mg, 1,35 mmol) en lotes a 0 °C y se agitó durante 0,5 h a 25 °C. Después la mezcla se enfrió nuevamente a 0 °C, se añadió CH3I (174,17 mg, 1,23 mmol, 1,00 Eq) y después se agitó para reaccionar durante 1 h a 25 °C. La LC-MS mostró que las materias primas ya no reaccionaban, después se añadió agua (10 ml) para inactivar y se extrajo con acetato de etilo (10 ml x 3). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con solución salina saturada (10 ml x 2), se secaron con Na2SO4 anhidro, después se filtraron, se concentraron y se separaron mediante una columna de gel de sílice (gel de sílice de malla 100-200, éter de petróleo: acetato de etilo). = 5:1 a 3:1) para obtener formiato de 1-[metil-[1-(tosil)pirrol [2,3-b]piridin-4il-]amino]piperidil-3-etilo amarillo oleoso (204,00 mg, rendimiento fue del 35,60 %). El valor de C23H28N4O4S [M+H]+457,1 se calculó mediante el uso de MS e S i y fue 457,1.
Paso 4: se disolvió formiato de 1-[metil-[1-(tosil)pirrolo[2,3-b]piridil-4-]amino]piperidil-3-etilo (204,00 mg, 446,82 pmol) en un disolvente mixto de H2O (4 ml), CH3OH (4 ml) y se añadió NaOH (71,5 mg, 1797,28 umol) y se agitó para reaccionar durante 13 h a 80 °C. La LC-MS mostró que las materias primas habían reaccionado completamente, después el disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y se añadió HCl (2 M) para ajustar el pH para que fuera neutro, y después se obtuvo un producto crudo beige (122 mg) de 1 -[metil-[1-(tosil)pirrolo[2,3-b]piridil-4-]amino]piperidil-3-formiato después de concentración a presión reducida. El producto se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional. El valor de C14H18N4O2 [M+H] 274 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 274,9.
Paso 5: se disolvió 1-[metil-[1-(tosil)pirrolo[2,3-b]piridil-4-]amino]piperidil-3-formiato (61,00 mg, 222,37 pmol) en DMF (4 ml). y se añadieron HOBt (72,12 mg, 533,68 umol) y EDCI (102,2 mg, 533,68 umol) y se agitó para reaccionar durante 30 min a 25 °C, después se añadieron clorhidrato de 2-glicinonitrilo (24,69 mg, 266,84) y Et 3 N (90,01 mg), 889,47 umol) y se agitó continuamente para reaccionar durante 18 h a 25 °C. La LC-MS mostró que las materias primas habían reaccionado completamente y se detectó el peso molecular objetivo. Se realizó la separación por HPLC de tipo preparativa (método alcalino) para obtener WX14: N-(cianometil)-1-(metil(1H-pirrolo[2,3-b]piridil-4-)amino)piperidil-3-formamida (19,2 mg, el rendimiento fue del 27,6 %). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6 = 11,27 (s.br., 1H), 8,66 (t, J=5,3 Hz, 1H), 7,85 (d, J=5,8 Hz, 1H), 7,10 (br. s., 1H), 6,87 (br. s., 1H), 6,23 (d, J=5,3 Hz, 1H), 4,08 (d, J=5,5 Hz, 2H), 3,00 (s, 3H), 2,91 - 2,62 (m, 6H), 1,79 (s.br., 2H), 1,38 (m, 1H). El valor de C-i6H20N6O[M+H]+313 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 313.
Modalidad 13
N-(2,2,2-trifluoroetil)-1-(metil(1H-pirrolo[2,3-d]piridin-4-il)amino)piperidil-3-formamida
WX15 se preparó mediante el uso de un método de preparación similar al de la Modalidad 12, y un producto bruto se purificó mediante una HPLC de tipo preparativa para obtener WX15: N-(2,2,2-trifluoroetil)-1-(metil(1H-pirrolo[2,3-d]piridin-4-il)amino)piperidil-3-formamida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6 = 11,27 (s.br., 1H), 8,66 (t, J=5,3 Hz, 1H), 7,85 (d, J=5,8 Hz, 1H), 7,10 (br. s., 1H), 6,87 (br. s., 1H), 6,23 (d, J=5,3 Hz, 1H), 4,08 (d, J=5,5 Hz, 2H), 3,00 (s, 3H), 2,91 -2,62 (m, 6H), 1,79 (s.br., 2H), 1,38 (m, 1H). El valor de C-i6H20N6O[M+H]+313 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 313.
Modalidad 14
N-(cianoetil)-1-(metil(1H-pirrolo[2,3-d]piridil-4-)amino)piperidil-3-formamida
WX16 mediante el uso de un método de preparación similar al de la Modalidad 12, y se purificó un producto bruto mediante una HPLC de tipo preparativa para obtener WX16: N-(cianoetil)-1 -(metil(1H-pirrol[2,3-d]piridil-4-)amino)piperidil-3-formamida (32,30 mg, el rendimiento fue del 35,0 %). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d4) 8 = 8,12 (s, 1H), 7,12 -7,02 (m, 2H), 3,42 (t, J =6,4 Hz, 2H), 3,22 (s, 3H), 3,08-2,99 (m, 2H), 2,98-2,79(m, 3H), 2,70-2,62 (m, 2H), 2,30-2,22 (m, 1H), 2,03-1,86(m, 3H), 1,58-1,42(m), 1H), 1,28-1,05(m, 1H). El valor de C16H21NyO[M+H]+328,1 se calculó mediante el uso de m S ESI y fue 328,1.
Modalidad 15
N-(2,2,2-trifluoroetil)-2-(1-(metil(7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidil-3-acetamida
Paso 1: el intermediario 2 (1,65 g, 3,61 mmol) se disolvió en C2H5OH (40 ml) y se protegió con N2, después se añadió NaBH4 (546,27 mg, 14,44 mmol) a 0° C, y después se agitó para reaccionar durante 16 h a 25 °C. La LC-MS mostró que las materias primas habían reaccionado completamente y se detectó un peso molecular objetivo. Se añadió agua (5 ml) para inactivar y después la mezcla se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (10 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con solución salina saturada (10 ml), se secaron con Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida para obtener un líquido viscoso amarillo (1-(metil(7-tosil-7H-pirrol[2,3-b]pirimidin-4-)amino)piperidin-3- il)metanol (1,29 g, producto bruto) que no se separó y se usó directamente en el siguiente paso. El valor de C20H25N5OaS[M+H]+416 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 416.
Paso 2: se disolvieron (1-(metil(7-tosil-7H-pirrolo[2,3-b]pirimidin-4-)amino)piperidil-3-il)metanol (967,50 mg, 2,33 mmol) y Et3N (706,85 mg, 6,99 mmol) en CH2Ch (30,00 ml) y se añadió DMAP (28,45 mg, 232,87 umol, 0,1 eq) y cloruro de paratoluenosulfonilo (1,864 g, 9,76 mmol, 4,2 eq) bajo N2 a 0 ° C, después el sistema se agitó para reaccionar durante 6 h a 25 °C. La LC-MS mostró que la reacción se había completado y se añadió agua (20 ml) para inactivarla. Después, la fase acuosa se extrajo mediante el uso de AcOET (10 ml x 3) y las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con HCl (2 M, 10 ml) y solución salina saturada (10 ml) sucesivamente, se secaron con Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron. Se realizó una separación en columna de gel de sílice (gel de sílice de malla 100-200, éter de petróleo: acetato de etilo = 3/1, 1/1) para obtener p-(1-(metil(7-tosil-7H-pirrolo[2,3-b]pirimidin-4-)amino)piperidin-3-il)metil bencenosulfonato blanco (993,00 mg, en donde el rendimiento fue del 74,73 %). El valor de C33H46N6O5S2[M+H]+470 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 470.
Paso 3: se disolvió (1-(metil(7-tosil-7H-pirrolo[2,3-b]pirimidin-4-)amino)piperidin-3-il)metilbencenosulfonato (943,00 mg, 1,66 mmol) en un disolvente mixto de DMF (30,00 ml) y H2O (10,00 ml) y se añadió KCN (440,00 mg, 6,76 mmol) y se agitó para reaccionar durante 6 h a 80 °C. La LC-MS mostró que las materias primas habían reaccionado completamente y se detectó un peso molecular objetivo. Se añadió AcOEt (5 ml) para diluir y la mezcla se agitó y después se usó acetato de etilo (10 ml x 3) para la extracción. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con solución salina saturada (10 ml x 3), se secaron con Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron. Se realizó una separación en columna de gel de sílice (gel de sílice de malla 100-200, éter de petróleo: acetato de etilo = 3/1, 1/1) para obtener material viscoso beige 2-(1-(metil(7-tosil-7H-pirrol pirimidina-4-)amino)piperidin-3-il)acetonitrilo (665,00 mg, en donde el rendimiento fue del 94,37 %). El valor de C2-<i>H24N602S[M+H]+425 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 425.
Paso 4: se añadió HCl (12,0 ml, 72,18 mmol, 237,53 eq) a 2-(1-(metil(7-tosil-7H-pirrolo[2,3-b]pirimidin-4- )amino)piperidin-3-il)acetonitrilo (129,00 mg, 303,87 umol), y la mezcla se enfrió a temperatura ambiente después de agitarse a reflujo durante 15 h a 100 °C, y después se añadió NaOH (24 mg, 600 umol) y la mezcla se agitó continuamente durante 4 h a 100 °C. La LC-MS mostró que las materias primas habían reaccionado completamente y se detectó un peso molecular objetivo. La solución de reacción se concentró y se separó mediante una HPLC de tipo preparativa (método alcalino) para obtener ácido 2-(1-(metil(7-tosil-7H-pirrolo[2,3-b]pirimidin-4-)amino)piperidil-3-)acético (90,00 mg, el rendimiento fue del 97,04 %). El valor de C14H-igN5O2[M+H]+290 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 290.
Paso 5: se disolvió ácido 2-(1-(metil(7-tosil-7H-pirrolo[2,3-b]pirimidin-4-)amino)piperidin-3-il)acético (45,50 mg, 157,26 umol) en DMF (4,00 ml), se añadieron HOBt (85,00 mg, 629,04 umol, 4,00 eq) y EDCI (212,79 mg, 1,11 mmol, 4,00 eq) y se agitó para reaccionar durante 30 min a 25 °C, después se añadieron 2,2, 2-trifluoroetilamina (46,73 mg, 471,78 umol, 3,00 eq) y Et3N (63,65 mg, 629,04 umol, 4,00 eq) y se agitó continuamente para reaccionar durante 12 h a esta temperatura. La LC-MS mostró que las materias primas habían reaccionado completamente y se detectó un peso molecular objetivo. La mezcla se filtró y se separó mediante el uso de una HPLC de tipo preparativa (método alcalino) para obtener WX017: N-(2,2,2-trifluorometil)-2-(1-(metil(7-tosil-7H-pirrolo[2,3-b]pirimidin-4-)amino)piperidin-3-il)acetamida (7,40 mg, el rendimiento fue del 14,37 %). 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 6 = 8,11 (s, 1H), 7,11 -7,03 (m, 2H), 4,65 (br. s., 1H), 4,02 -3,76 (m, 2H), 3,20 (s, 3H), 3,01 -2,80 (m, 3H), 2,62 (t, J=10,5 Hz, 1H), 2, 41 (dd, J=3,5, 7,5 Hz, 1H), 2,26 -2,16 (m, 2H), 1,99 - 1,77 (m, 3H), 1,12 -0,93 (m, 1H). El valor de C-,6H21FaN6O[M+H]+371se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 371.
Modalidad 16
N-(cianometil)-2-(1-(metil(7-tosil-7H-pirrolo[2,3-b]pirimidin-4-)amino)piperidil-3-)acetamida
WX18 se preparó mediante el uso de un método de preparación similar al de la Modalidad 15, y se purificó un producto bruto mediante una HPLC de tipo preparativa para obtener WX18 (4,20 mg, el rendimiento fue del 7,82 %). 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 6 = 8,11 (s, 1H), 7,15-7,03 (m, 2H), 4,14 (d, J=4,0 Hz, 2H), 3,21(s, 3H), 3,01 -2,79 (m, 3H), 2,68 - 2,53 (m, 1H), 2,48 - 2,53 (m, 2H), 2,34 - 2,28 (m, 1H), 2,22 (d, J=6,0 Hz, 2H), 1,94 - 1,82 (m, 3H). El valor de Ci6H2iN7O[M+H]+328 se calculó mediante el uso de<M s>ESI y fue 328.
Modalidad 17
3,3,3-trifluoro-N-((1-(metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-)amino)piperidil-3-)metil)propionamida
Paso 1: se disolvieron el Intermediario 3 (1,15 g, 2,67 mmol) y doroformiato de isopropilo (327,57 mg, 2,67 mmol, 1,00 Eq) en THF (30 ml), se añadió gota a gota Et3N (811,42 mg, 8,02 mmol, 3,00 Eq) a una temperatura inferior a 10 °C, después la mezcla se agitó para reaccionar durante 1 h a 25 °C, después se enfrió a 10° C, se añadió NH3.H2O (3,75 g, 26,76 mmol, 10,01 Eq) y después t se agitó continuamente para reaccionar durante 7 h a 25 °C. La LC-MS mostró que las materias primas habían reaccionado completamente y se detectó un peso molecular objetivo. Se añadió agua con hielo (10 ml) y se agitó durante 30 min, y después se usó acetato de etilo (20 ml x 3) para la extracción; las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con solución salina saturada (10 ml), se secaron con Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron y se separaron mediante cromatografía en columna de gel de sílice (gel de sílice de malla 100-200, etilo) para obtener el sólido blanco 1 -[[1-(tolilsulfonil)pirrolo[2,3-b]piridin-4-]amino]piperidil)-3-formamida (568,00 mg, el rendimiento fue 49,65 %). El valor de C20H24N6O3S[M+H]+429 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 429.
Paso 2: se suspendió 1-[[1-(tolilsulfonil)pirrolo[2,3-b]piridin-4-]amino]piperidil)-3-formamida (569,9 mg, 1,33 mmol) en THF (20 ml), se añadió LiAlH4 (807,58 mg, 21,28 mmol) a 0 °C, después se calentó y se puso a reflujo durante 24 h a 70 °C. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. Se añadieron sucesivamente agua (0,8 ml), solución de NaOH (0,8 ml al 10 %) y agua (2,4 ml) a 0 °C y se agitó durante 15 min. La mezcla se filtró, se concentró y se separó mediante TLC preparativa (CH2Ch:CH3OH = 10:1) para obtener el sólido blanco N-(3-aminometil)piperidil-1-)-N-metil-7H-pirrolo[2,3-b]pirimidin-4-amina (147,00 mg, el rendimiento fue del 42,45 %). El valor de C13H20N6[M+H]+261,1 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 261,1.
Paso 3: se disolvió 3,3,3-trifluoropropionato (57,74 mg, 450,94 umol, 2,00 eq) en DMF (4 ml), después se añadieron HOBt (121,86 mg, 901,88 umol, 4,00 eq) y<e>D<c>I (172,89 mg, 901,88 umol, 4,00 eq) y se agitó para reaccionar durante 30 min a 25 °C; después se añadieron N-(3-aminometil)piperidil-1-)-N-metil-7H-pirrolo[2,3-b]pirimidin-4-amina (58,70 mg, 225,47 umol, 1,00 eq) y Et3N (182,52 mg, 1,80 mmol, 8,00 eq). La mezcla se agitó continuamente para reaccionar durante 12 h a 25 °C. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. Después la mezcla se filtró, se concentró a presión reducida y el filtrado se separó mediante una HPLC de tipo preparativa (método alcalino) para obtener WX19: 3,3,3-trifluoro-N((1-(metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-)amino)piperidil-3-)metil)propionamida (7,4 mg, el rendimiento fue del 8,8 %). 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 6 = 8,09 (s, 1H), 7,02 (s, 2H), 3,23 - 3,16 (m, 4H), 3,16 - 3,06 (m, 3H), 3,01 - 2,75 (m, 3H), 2,57 (t, J=10,5 Hz, 1H), 2,21 - 2,02 (m, 1H), 1,94 - 1,72 (m, 3H), 1,47 - 1,12 (m, 1H), 1,09 -0,84 (m, 1H). El valor de C16H21F3N6O[M+H]+371 se calculó mediante el uso de<m>S ESI y fue 371.
Modalidad 18
Paso 1: se disolvió éster etílico del ácido piperidil-4-carboxílico (9,00 g, 57,25 mmol) en una mezcla de ácido acético (30 ml) y agua (30 ml) y se enfrió hasta 0 °C, después se añadió gota a gota una solución acuosa (30 ml) de nitrito de sodio (7,90 g, 114,50 mmol) bajo protección con nitrógeno. Después de que la solución acuosa se añadió completamente gota a gota, la solución de reacción se agitó durante 30 min a 0 °C y después se agitó durante 2 h a 25 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (100 ml x 2), las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (20 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro y se filtraron y concentraron hasta sequedad a presión reducida y a 70 °C para eliminar parcialmente el ácido acético. Los residuos se disolvieron en acetato de etilo (100 ml) y agua (50 ml) y se ajustaron con NaOH (2 M) a pH=8-9. La mezcla se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (100 ml x 2), las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua salina saturada (20 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener éster etílico del ácido 1 -nitrosopiperidil-4-carboxílico (10,60 g, producto bruto) que era una materia oleosa amarilla y se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional. El valor de C8H-mN203[M+H]+187 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 187.
Paso 2: se disolvió éster etílico del ácido 1 -nitrosopiperidil-4-carboxílico (10,60 g, 58,04 mmol) en metanol (80 ml) y se enfrió a -10 °C, y después se añadió polvo de zinc (17,68 g, 270,39 mmol) bajo protección de nitrógeno. Se añadió gota a gota ácido acético (32,47 g, 540,79 mmol, 10,00 Eq) a la solución anterior durante 30 min a -10 °C. La mezcla se agitó durante 30 min a -10 °C y después se agitó durante 2 h a 0 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se filtró y se lavó con metanol (50 ml) y agua (50 ml), respectivamente. El filtrado se concentró a presión reducida a 70 °C. Los residuos se disolvieron en diclorometano: metanol (5:1, 100 ml) y se ajustaron con NaOH (2 M) a pH=8-9. La mezcla se filtró a través de diatomita y se lavó con una solución mixta de diclorometano y metanol (5:1). El filtrado se concentró a presión reducida para obtener éster etílico del ácido 1-aminopiperidil-4-carboxílico (9,80 g, producto bruto) que era una materia oleosa beige y se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional. El valor de CbH16N202[M+H]+173 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 173.
Paso 3: se disolvió una mezcla de éster etílico del ácido 1-aminopiperidil-4-carboxílico (9,80 g, 48,37 mmol, 1,00 eq) y 4-cloro-7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidina (16,37 g, 53,21 mmol, 1,10 eq) en dioxano (100 ml) y se añadió trietilamina (14,68 g, 145,11 mmol, 3,00 eq) bajo protección con nitrógeno, después la mezcla se agitó durante 12 h a 110 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 25 °C y se concentró a presión reducida a 60 °C, después los residuos se vertieron en agua (50 ml). La fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua salina saturada (20 ml x 3), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se secaron al vacío. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (gel de sílice de malla 100-200, éter de petróleo: acetato de etilo = 5:1 a 1:1) para obtener éster etílico del ácido 1-[[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]piperidil-4-carboxílico (9,50 g, rendimiento fue del 44,28 %) que era un sólido amarillo pálido. El valor de C2-<i>H25N504S[M+H]+444 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 444.
Paso 4: se disolvió éster etílico del ácido 1 -[[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]piperidil-4-carboxílico (8,80 g, 19,84 mmol) en tetrahidrofurano (150 ml), y después se añadió hidruro de sodio (1,19 g, 29,76 mmol) en lotes a 0 °C bajo protección con nitrógeno. La mezcla se agitó durante 30 min a 25 °C y se enfrió a 0 °C, se añadió gota a gota yoduro de metilo (4,22 g, 29,76 mmol, 1,50 eq) y se agitó para reaccionar durante 2 h a 25 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 0 °C y se añadió agua (20 ml) para inactivar. La fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (100 ml x 2), las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (20 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (gel de sílice de malla 100-200, éter de petróleo: acetato de etilo = 3:1-2:1) para obtener éster etílico del ácido 1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]piperidil-4-carboxílico (4,10 g, rendimiento fue del 45,17 %), que era un sólido amarillo pálido. El valor de C22H27NsO4S[M+H]+458 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 458.
Paso 5: el éster etílico del ácido 1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]piperidil-4-carboxílico (500,00 mg, 1,09 mmol) se disolvió en una solución mixta de tetrahidrofurano (10 ml) y metanol (10 ml) y se añadió una solución acuosa (5 ml) de hidróxido de sodio (87,20 mg, 2,18 mmol). La mezcla se agitó durante 30 min a 100 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 25 °C y después se concentró a presión reducida a 50 °C. Los residuos se neutralizaron mediante el uso de una solución acuosa de ácido clorhídrico diluido y se concentraron a presión reducida para obtener ácido 1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]piperidil-4-carboxílico (400,00 mg, producto crudo) que era un sólido beige y se usó directamente en la siguiente reacción. El valor de C13H-i7N5O2[M+H]+276 se calculó mediante el uso de<m>S ESI y fue 276.
Paso 6: se disolvió ácido 1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]piperidil-4-carboxílico (150,00 mg, 544,84 umol) en DMF (4 ml) a 25 °C y se añadieron HOBt (88,34 mg, 653,81 umol) y EDCI (125,34 mg, 653,81 umol). La mezcla se agitó durante 30 min a 25 °C, después se añadieron 2-aminoacetonitrilo (60,50 mg, 653,81 umol, 1,20 Eq) y trietilamina (220,53 mg, 2,18 mmol, 4,00 Eq) y se agitó continuamente para reaccionar durante 12 h a esta temperatura. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se concentró a presión reducida, después los residuos se purificaron mediante HPLC de tipo alcalina para obtener WX20 (35 mg, 25 %). 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8 = 8,12 (s, 1H), 7,14 (d, J=3,5 Hz, 1H), 7,09 (d, J=3,5 Hz, 1H), 4,19 (s, 2H), 3,22 (s, 3H), 3,05 - 2,96 (m, 4H), 2,30 (d, J=12,0 Hz, 1H), 2,16 - 2,04 (m, 2H), 2,01 -1,91 (m, 2H). El valor de C15H-i9N7O[M+H]+314 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 314.
Modalidad 19
WX21 se preparó mediante el uso de un método de preparación similar al de la Modalidad 18, y se purificó un producto bruto mediante una HPLC de tipo preparativa para obtener WX21. 1H NMR (400 MHz, METANoL-d4) 8 = 8,08 (s, 1H), 7,13 (d, J=33 Hz, 1H), 6,93 (br. s., 1H), 4, 62 (br. s., 1H), 4,18 (s, 2H), 3,23 (d, J=93 Hz, 2H), 2,68 (br. s., 2H), 2,34 (br. s., 1H), 2,10 -1,98 (m, 2H)), 1,97 - 1,89 (m, 2H). El valor de C14H17N7O[M+H]+300 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 300.
Modalidad 20
WX22 se preparó mediante el uso de un método de preparación similar al de la Modalidad 18, y se purificó un producto bruto mediante una HPLC de tipo preparativa para obtener WX22. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8 = 8,08 (s, 1H), 7,12 (d, J=33 Hz, 1H), 6,94 (br. s., 1H), 3, 94 (q, J= 93 Hz, 2H), 3,23 (d, J=10,0 Hz, 2H), 2,68 (t, J=102 Hz, 2H), 2,41 2,29 (m, 1H), 2,10 -1,98 (m, 2H), 1,96 - 1,87 (m, 2H). El valor de Ci4Hi7FaN6O[M+H]+343 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 343.
Modalidad 21
WX23 se preparó mediante el uso de un método de preparación similar al de la Modalidad 18, y se purificó un producto bruto mediante una HPLC de tipo preparativa para obtener WX23. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8 = 8,12 (s, 1H), 7,14 (d, J=3,5 Hz, 1H), 7,08 (d, J =3,3 Hz, 1H), 3,95 (q, J = 9,5 Hz, 2H), 3,21(s, 3H), 3,05 - 2,95 (m, 4H), 2,32 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 2,17 -2,05 (m, 2H), 1,94 (d, J =11,8 Hz, 2H). El valor de C15H1gF3N6O[M+H]+357 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 357.
Modalidad 22
WX24 se preparó mediante el uso de un método de preparación similar al de la Modalidad 18, y se purificó un producto bruto mediante una HPLC de tipo preparativa para obtener WX24. 1H(400 MHz, METANOL-d4) 8 = 8,12 (s, 1H), 7,12 - 7,09 (m, 1H), 7,09 - 7,06 (m, 1H), 3, 84 - 3,69 (m, 1H), 3,26 - 3,13 (m, 5H), 3,12 - 3,02 (m, 2H), 2,98 (br. s., 2H), 2,04 (d, J = 11,3 Hz, 2H), 1,95 - 1,80 (m, 2H). El valor de C15H-i9F3N6O[M+H]+357 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 357.
Modalidad 23
2-ciano-W-(1-(metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidin-4-il)acetamida
Paso 1: se disolvió éster etílico del ácido 1 -[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-tí]pirimidin-4-il]amino]piperidil-4-carboxíMco (3,50 g, 7,65 mmol) en tetrahidrofurano (20 ml) a 25 °C y se añadió una solución acuosa (20 ml) de hidróxido de litio monohidratado (481,47 mg, 11,47 mmol), la mezcla se agitó durante 3 h a 25 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se concentró a presión reducida a 40 °C. Los residuos se acidificaron mediante el uso de una solución acuosa de ácido clorhídrico diluido a pH=4-5. La fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (100 ml x 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (20 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener ácido 1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]piperidil-4-carboxílico (3,10 g, el rendimiento fue del 94,35 %) que era un sólido amarillo claro. El valor de C20H23N5O4S[M+H]+430 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 430.
Paso 2: se disolvieron ácido 1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]piperidil-4-carboxílico (2,00 g, 4,66 mmol) y trietilamina (706,82 mg, 6,99 mmol) en tolueno (100 ml) y se agitaron durante 0,5 h, y después se añadió ácido [azido(fenoxi)fosforil]oxibencenosulfónico (1,28 g, 4,66 mmol) a 25 °C bajo protección de nitrógeno y se agitó durante 30 min a 25 °C, y después se calentó a 110 °C y se agitó durante 2 h. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 25 °C y se añadió alcohol terc-butílico (7,70 g, 103,89 mmol). La mezcla se agitó durante 12 h a 110 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 25 °C y después se concentró a presión reducida y a 50 °C. Los residuos se diluyeron con agua (30 ml). La fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (100 ml x 2), las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua salina saturada (20 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (gel de sílice de malla 100-200, éter de petróleo: acetato de etilo = 4:1-2:1) para obtener carbamato de N-[1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]-4-piperidinil]-tercbutilo (950,00 mg, el rendimiento fue del 40,46 %), que era un sólido amarillo claro. El valor de C24H32N6O4S[M+H]+501 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 501.
Paso 3: se disolvió carbamato de A/-[1-metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]-4-piperidinil]terc-butilo (500,00 mg, 998,78 umol) en diclorometano (500,00 mg, 998,78 umol) y después se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (500,00 mg, 998,78 umol). La mezcla se agitó durante 30 min a 25 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se concentró hasta sequedad a presión reducida a 40 °C. Los residuos obtenidos se disolvieron en agua (10 ml) y se alcalinizaron con bicarbonato de sodio sólido a pH = 9, y la fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (50 ml x 3). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua salina saturada (20 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro y se filtraron y concentraron hasta sequedad a presión reducida para obtener 1-(metil[7-(tosil-7H-pirrolo[2,3]-d]pirimidin-4-il]piperidil-4-amina (400 mg, 56 %) que era un sólido beige y se usó directamente en la siguiente reacción. El valor de C-igH24N6O2S[M+H]+401 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 401.
Paso 4: se disolvió 1-(metil[7-(tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]piperidil-4-amina (400,00 mg, 998,75 umol) en un disolvente mixto de tetrahidrofurano (10,00 ml) y metanol (10,00 ml) y se añadió una solución acuosa (5 ml) de hidróxido de sodio (79,90 mg, 2,00 mmol). La mezcla se agitó durante 1 h a 100 °C. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se concentró a presión reducida a 40 °C, los residuos se disolvieron en agua (10 ml) y se ajustaron con solución acuosa de ácido clorhídrico diluido a pH=9, y se concentraron a presión reducida para obtener 1 -(metil (7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidil-4-amina (300 mg, producto bruto) que era un sólido beige y se usó directamente en la siguiente reacción. El valor de C12H1sN6[M+H]+247 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 247.
Paso 5: se disolvieron ácido 2-cianoacético (49,73 mg, 584,63 umol), HOBt (78,99 mg, 584,63 umol) y EDCI (112,07 mg, 584,63 umol) en DMF (4,00 ml). La mezcla se agitó durante 30 min a 25 °C y después se añadieron 1-(metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidil-4-amina (120,00 mg, 487,19 umol) y trietilamina (98,60 mg, 974,38 umol), y después la mezcla se agitó durante 24 h a 25 °C. La LC-MS mostró que la reacción se había completado, la mezcla se concentró hasta sequedad a presión reducida y a una temperatura inferior a 70 °C; y los residuos obtenidos se purificaron mediante HpLC de tipo alcalina para obtener WX25 (25 mg, 35 %). 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8 = 8,12 (s, 1H), 7,11 (d, J=3,5 Hz, 1H), 7,07 (d, J =3,3 Hz, 1H), 3,75 (br. s., 1H), 3,23 (s., 3H), 3,13 - 3,04 (m, 2H), 2,99 (br. s., 2H), 2,06 (d, J =10,0 Hz, 2H), 1,96 -1,81 (m, 2H). El valor de C15H1gNyO[M+H]+314 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 314.
Modalidad 24
N-(cianometil)-6-metil-1-(metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidil-3-formamida
Paso 1: se añadió PtO2 (3,00 g) a una solución de metanol (200 ml) de 6-metilpiridin-3-carboxilato de metilo (18,00 g, 119,08 mmol), y después se añadieron agua (10 ml) y ácido clorhídrico (20 ml); en H2 (50 psi), la solución de reacción se calentó a 50 °C y se agitó durante 15 h. La TLC mostró que los reactivos se consumieron por completo; después los sólidos se filtraron y el filtrado se concentró a presión reducida, los residuos se disolvieron en tolueno (100 ml), después el disolvente de tolueno se secó por centrifugación para obtener 6-metilpiperidil-3-carboxilato de metilo que era una materia oleosa amarilla (18,00 g, el rendimiento fue del 96,15 %). El valor de CsH15NO2[M+H]+157 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 157.
Paso 2: se disolvió 6-metilpiperidil-3-carboxilato de metilo (25,00 g, 159,02 mmol) en agua (50 ml) y ácido acético glacial (100 ml) y se añadió lentamente una solución acuosa (50 ml) de nitrito de sodio (21,95 g, 318,05 mmol) a 0 °C; la solución de reacción se agitó durante 1 h a temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo (100 ml) y agua (50 ml) y después se separó; la capa acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (100 ml x 2), las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada, se secaron con sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener un producto bruto que se purificó mediante una columna de gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 10:1) para obtener 6-metil-1-nitroso-piperidil-3-carboxilato de metilo que era una materia oleosa amarilla (20,00 g, rendimiento de 67, 54 %). El valor de CsH14N2O3[M+H]+187 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 187.
Paso 3: se disolvieron 6-metil-1-nitroso-piperidil-3-carboxilato de metilo (21,00 g, 112,78 mmol) y polvo de zinc (36,87 g, 563,90 mmol) en una solución de metanol anhidro (1100 ml) y se añadió lentamente gota a gota ácido acético glacial (100 ml) a 0 °C, en donde la temperatura interna se mantuvo por debajo de 5 °C, después la mezcla se agitó durante 1 h a 0 °C. Posteriormente, el disolvente se concentró a presión reducida, y después la solución de reacción se ajustó mediante el uso de una solución saturada de bicarbonato de sodio a pH=7 y después se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (200 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron y concentraron para obtener 1-amino-6metil-piperidil-3-carboxilato de metilo que era una materia oleosa amarilla (18,00 g, el rendimiento fue del 92,67 %). El valor de C8H16N2O2 [M+H] 173 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 173.
Paso 4: se disolvieron 1-amino-6-metil-piperidil-3-carboxilato de metilo (15,00 g, 46,16 mmol) y 4-cloro-7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidina (20,00 g, 64,99 mmol) en una solución de dioxano (200 ml) y se añadió carbonato de cesio sólido (15,04 g, 46,16 mmol) bajo protección de nitrógeno a 20 °C; la solución de reacción se calentó a 110 °C y se agitó durante 20 h. La mezcla se enfrió a 20 °C y el disolvente se concentró hasta sequedad a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) para obtener 6-metil-1-[[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]piperidil-3-carboxilato de metilo (3,50 g, rendimiento fue del 17,10 %), que era un sólido blanco. El valor de C2-<i>H25N504S[M+H]+444 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 444.
Paso 5: se añadió NaH (288,80 ± 7,22 mmol) a una solución en THF (50 ml) de 6-metil-1-[[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]piperidil-3-carboxilato de metilo (1,60 g, 3,61 mmol) bajo protección con nitrógeno a 0 °C; la mezcla se agitó durante 20 min a 0 °C y se añadió gota a gota MeI (1,02 g, 7,22 mmol) y después se agitó durante 1 h a 20 °C. La LCMS mostró que la reacción se había completado. La solución de reacción se vertió en una solución mixta de DCM (50 ml) y agua (50 ml) y después se dejó reposar para laminación. La fase acuosa se extrajo mediante el uso de DCM (50 ml x 3). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (100 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron hasta sequedad a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = = 10/1 a 1/1) para obtener 6-metil-1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-D]pirimidin-4-il)amino]piperidil-3-carboxilato de metilo (1,50 g, el rendimiento fue del 90,81 %), que era un sólido amarillo. El valor de C22H27Ns04S[M+H]+458 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 458.
Paso 6: se añadió NaOH (656,00 mg, 16,40 mmol) a una solución mixta de THF (20 ml) y agua (10 ml) de 6-metil-1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-D]pirimidin-4-il)amino]piperidil-3-carboxilato de metilo (1,50 g, 3,28 mmol) a 20 °C; y la solución de reacción se calentó a 60 °C y se agitó durante 15 h. Se añadió MeOH (10 ml), y después la mezcla se calentó a 80 °C y se agitó durante 3 h. La LCMS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 20 °C, se ajustó con HCl (6 M) a pH=7 y después se concentró a presión reducida para obtener ácido 6-metil-1-[metil-(7H-pirrol[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]piperidil-3-carboxílico (1,80 g, producto bruto) que era un sólido blanco. El valor de C14H-igN5O2[M+H]+290 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 290.
Paso 7: se añadieron EDCI (331,28 mg, 1,73 mmol) y HOBt (233,51 mg, 1,73 mmol) a una solución en DMF (5 ml) de ácido 6-metil-1-[metil-(7H-pirrolo[2,3-d]]pirimidin-4-il)amino]piperidil-3-carboxílico (250,00 mg, 864,07 umol). La mezcla se agitó durante 5 minutos a 20 °C, después se añadieron 2-aminoacetonitrilo (72,67 mg, 1,30 mmol) y TEA (437,18 mg, 4,32 mmol) y la mezcla se agitó durante 15 h a 20 °C. La LCMS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se filtró y se purificó mediante una HPLC de tipo preparativa (condición ácida: TFA al 0,1 %) para obtener WX26: N-(cianometil)-6-metil-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]piperidil-3-formamida (61,95 mg, el rendimiento fue del 21,90 %). 1H NMR (400 MHz, m etano l^) 8 = 8,48 (s, 1H), 7,47 (d, J=3,6 Hz, 1H), 7,01 (d, J=3,6 Hz, 1H), 4,25-4,35 (m, 2H), 3,59 (s, 3H), 3,17-3,24 (m, 1H), 3,09-3,16 (m, 1H), 2,99-3,08 (m, 1H), 2,95 (br. s., 1H), 2,04-2,14 (m, 1H), 1,78-1,96 (m, 2H), 1,45-1,59 (m, 1H), 0,99 (d, J=6,4 Hz, 3H). El valor de C16H21N7O[M+H]+328 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 328.
Modalidad 25
6-metil-1-(metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)-N-(2,2,2-trifluoroetil)piperidil-3-formamida
Paso 1: se añadieron EDCI (331,28 mg, 1,73 mmol) y HOBt (233,51 mg, 1,73 mmol) a una solución en DMF (5 ml) de ácido 6-metil-1-[metil-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]piperidil-3-carboxíMco (250,00 mg, 864,07 umol), la mezcla se agitó durante 5 min a 20 °C y después se añadieron 2,2,2-trifluoroacetonitrilo (128,38 mg, 1,30 mmol) y TEA (437,18 mg, 4,32 mmol); la mezcla se agitó durante 15 h a 20 °C. La LCMS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se filtró y se purificó mediante una HPLC de tipo preparativa (condición ácida: TFA al 0,1 %) para obtener WX27: 6-metil-1-(metil(7H-pirrolo[2.3-d]pirimidin-4-il)amino)-N-(2,2,2-trifluoroetil)piperidil-3-formamida (81,80 mg, el rendimiento fue del 25,56 %). 1H NMR (400 MHz, metanol-d4) 8 = 8,88 (s.br., 1H), 8,46 (s, 1H), 7,45 (d, J=3,6 Hz, 1H), 6,99 (d, J=3,6 Hz, 1H), 4,10-4,27 (m, 1H), 3,86-4,02 (m, 1H), 3,58 (s, 3H), 3,09-3,21 (m, 2H), 2,98-3,08 (m, 1H), 2,96 (br. s., 1H), 2,10 (d, J =13,6 Hz, 1H), 1,76-1,97 (m, 2H), 1,42-1,57 (m, 1H), 0,98 (d, J=6,0Hz,3H). El valor de C14H-igF3N6O[M+H]+345 se calculó mediante el uso de MS Esi y fue 345.
Modalidad 26
2-metil-7-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1,7-diazabiciclo[3.2.1]octan-6-ona
Paso 1: se añadió NaOH (270,00 mg, 6,75 mmol) a una solución mixta de THF (20 ml) y agua (10 ml) de 6-metil-1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]piperidil-3-carboxilato de metilo (600,00 mg, 1,35 mmol) a 20 °C; y la solución de reacción se calentó a 60 °C y se agitó durante 2 h. Después se añadió MeOH (10 ml), se calentó a 80 °C y se agitó durante 2 h. La LCMS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 20 °C, se ajustó con HCl (6 M) a pH=7, y después se concentró al vacío para obtener ácido 6-metil-1-[metil-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il-amino)piperidil-3-carboxílico (600,00 mg, producto bruto) que era un sólido blanco. El valor de C13H-i7N5O2[M+H]+276 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 276.
Paso 2: se añadió HATU (513,77 mg, 1,35 mmol) a una solución en DMF (5 ml) de ácido 6-metil-1-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)piperidil-3 -carboxílico a 20 °C; la solución de reacción se agitó durante 5 min, y después se añadieron 2-aminoacetonitrilo (56,82 mg, 1,01 mmol) y TEA (341,82 mg, 3,38 mmol) y se agitó durante 1 h a 20 °C. La LCMS mostró que las materias primas originales se habían consumido por completo. La mezcla se vertió en DCM (50 ml) y agua (10 ml), las fases orgánicas se lavaron con una solución salina saturada (50 ml x 3), después la capa orgánica se secó con sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. para obtener un producto crudo que se purificó mediante una HPLC de tipo preparativa (condición alcalina: NH3.H2O al 0,1 %) para obtener WX28: 2-metil-7-(7H-pirrol[2,3-d]pirimidin-4-il)-1,7-diazabicido[3.2.1]octan-6-ona (12,30 mg, el rendimiento fue del 7,08 %). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 = 8,50 (s, 1H), 7,39-7,46 (m, 1H), 6,67-6,74 (m, 1H), 5, 78 (d, J=5,6Hz, 1H), 3,81 (dd, J =4,0, 11,2 Hz, 1H), 2,20 (t, J=1,2 Hz, 1H), 1,96 (dd, J=3,2, 6,0 Hz, 2H), 1,59-1,82 (m, 2H), 1,47 (q, J=1,2 Hz, 1H), 0,96 (t, J=1,2 Hz, 1H), 0,64 (d, J=6,8 Hz, 3H). El valor de C13H-,5N5O[M+H]+257 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 257.
Modalidad 27
1-(1-(metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)-3-piperidinil)-pirrolidin-2-ona
Paso 1: se disolvieron N-(1 -nitroso-3-piperidinil) carbamato de terc-butilo (5,00 g, 21,81 mmol) y polvo de zinc (7,13 g, 109,05 mmol) en metanol anhidro (30 ml), se añadió gota a gota ácido acético glacial (30 ml) a -10 °C; después de añadir gota a gota ácido acético glacial en 1 h, la mezcla se agitó durante 30 min a -10 °C y después se calentó a 25 °C y se agitó durante 2 h. La TLC mostró que la reacción se había completado. Los sólidos se filtraron y los residuos se concentraron a presión reducida, después se añadió agua (5 ml) y la fase acuosa se ajustó mediante el uso de una solución saturada de dicarbonato de sodio (100 ml) a pH=8-9, después se extrajo con diclorometano: metanol (5/1; 50 ml x 3). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua salina saturada (50 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener N-(1-amino-3-piperidinil)carbamato de tercbutilo (1,80 g, producto bruto) que era una materia oleosa beige y se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional. El valor de C1üH21N3O2[M+H]+216 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 216.
Paso 2: se disolvieron N-(1 -amino-3-piperidinil) carbamato de terc-butilo (1,80 g, 8,36 mmol) y 4-cloro-7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidina (2,83 g, 9,20 mmol) en una solución de diclorometano (20 ml) y se añadió trietilamina (2,54 g, 25,08 mmol), después la solución de reacción se calentó a 60 °C y se agitó durante 10 h. La LCMS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 25 °C y el disolvente se concentró hasta sequedad a presión reducida. Los residuos se vertieron en agua (20 ml), la fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (30 ml x 3), las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (15 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro y se filtraron y se concentraron al vacío. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en columna de sílice (diclorometano/acetato de etilo = 5:1/3:1) para obtener N-[1-[[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]-3-piperidil] carbamato de terc-butilo que era un sólido espumoso amarillo (1,83 g, el rendimiento fue del 43,18 %). El valor de C23H30N6O4S[M+H]+487 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 487.
Paso 3: una solución de N-[1-[[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]-3-piperidil]tcarbamato de terc-butilo (1,80 g, 3,70 mmol) (25 ml) se añadió gota a gota a una suspensión de tetrahidrofurano (25 ml) disuelto con hidruro de sodio (60 %, 162,80 mg, 4,07 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 30 min bajo protección de nitrógeno a 0 °C, después se añadió gota a gota yoduro de metilo (577,70 mg, 4,07 mmol). Después de añadir gota a gota completamente yoduro de metilo, la solución de reacción se calentó hasta una temperatura normal y se agitó durante 1 h. La LCMS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se inactivó mediante el uso de una solución saturada de cloruro de amonio (10 ml) y se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (30 ml x 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (15 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 3:1) para obtener N-[1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]-3-piperidinil]carbamato de terc-butilo (900,00 mg, rendimiento fue del 48,59 %), que era un sólido espumoso débil. El valor de C24H32N6O4S[M+H]+501se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 501.
Paso 4: se añadió ácido clorhídrico/dioxano (20 ml) a una solución en DCM (5 ml) de N-[1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]-3-piperidinil]carbamato de terc-butilo (900,00 mg, 1,80 mmol) a 0 °C, después la mezcla se calentó a 30 °C y se agitó durante 1 h. Se formó un sólido y la TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se concentró a presión reducida para obtener clorhidrato de N-metil-N-[7-(tosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]piperidil-3-amina (900, 00 mg, producto crudo) que era un sólido beige. El producto se usó directamente en el siguiente paso sin purificación. El valor de C-igH24N6O2S[M+H]+401se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 401.
Paso 5: se disolvieron clorhidrato de N-metil-N-[7-(tosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]piperidil-3-amina (400 mg, 0,9 mmol) y ácido metil-4-oxobutírico (159,43 mg, 1,37 mmol) en metanol anhidro (10 ml) y se añadió acetoxiborohidruro de sodio (388,03 mg, 1,83 mmol) en lotes a temperatura normal. La solución de reacción se agitó para reaccionar durante 10 h a 28 °C. La LC-MS mostró que se generó un nuevo producto. El disolvente sobrante se secó mediante centrifugación, los residuos se vertieron en agua (10 ml) y una solución saturada de bicarbonato de sodio (10 ml) y la fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (30 ml x 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua salina saturada (10 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro y se filtraron y concentraron al vacío para obtener 4-[[1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]-3-piperidinil]amino]butirato de metilo (600,00 mg, producto bruto), que era una materia oleosa amarilla, y se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional. El valor de C24H32N6O4S[M+H]+501 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 501.
Paso 6: se calentó solución de N-metilpirrolidona (20 ml) de 4-[[1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]-3-piperidinil]amino]butirato de metilo (1,00 g, 2,00 mmol) a 140 °C y se agitó durante 5 h. La LCMS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 30 °C y se vertió en agua (50 ml) y la fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (20 ml x 3). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (10 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 3:1 a 1:1) para obtener 1-[1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]-3-piperidinil]pirrolid-2-ona (385,00 mg, el rendimiento fue del 36,97 %), que era un sólido amarillo. El valor de C23H2sN6O3S[M+H]+469 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 469.
Paso 7: se disolvió 1-[1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]-3-piperidinil]pirrolid-2-ona (100,00 mg, 213,42 umol) en una solución mixta de MeOH (3 ml) y agua (3 ml) y se añadió carbonato de potasio (88,49 mg, 640,26 umol), después la mezcla se calentó a 80 °C y se agitó durante 2 h. La LCMS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 30 °C y se concentró hasta sequedad a presión reducida. Los residuos se vertieron en agua (5 ml) y la fase acuosa se extrajo mediante el uso de diclorometano: metanol (5:1, 10 ml x 3). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (10 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. Los residuos se purificaron mediante una HPLC de tipo preparativa (NH3.H2O) para obtener WX29: 1 -[1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]-3-piperidinil]pirrolid-2-ona (28,00 mg, el rendimiento fue del 41,73 %). 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) 8 = 8,07-8,13 (m, 1H), 7,03-7,10 (m, 2H), 4,28-4,46 (m, 1H), 3,44-3,56 (m, 2H), 3,22 (s, 3H), 2,81-3,07 (m, 4H), 2,30-2,42 (m, 2H), 1,77-2,09 (m, 5H), 1,45-1,62 (m, 1H). El valor de C-i6H22N6O[M+H]+315 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 315.
Modalidad 28
N-(cianometil)-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]pirrolidil-3-formamida
Paso 1: se disolvieron ácido 1 -t-butiloxicarbonil-pirrol-3-carboxílico (5,00 g, 23,23 mmol) y trietilamina (2,82 27,88 mmol) en tetrahidrofurano (100 ml), después se añadió gota a gota cloroformiato de etilo (2,77 g, 25,55 mmol) bajo protección de nitrógeno a 0 °C; después agitar la solución de reacción durante 1 h a 0 °C, se añadió una solución etanólica (25 ml) de DMAP (56,76 mg, 464,60 mol) y después la mezcla de reacción se calentó a 30 °C y se agitó durante 10 h. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se vertió en agua (50 ml) y la fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (50 ml x 3). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (50 ml x 3), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener éster etílico del ácido 1 -t-butiloxicarbonil-pirrol-3-carboxílico que era una materia oleosa incolora (5,50 g, producto bruto). El producto se usó directamente en el siguiente paso sin purificación adicional. El valor de C12H21NÜ4[M+H]+244 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 244.
Paso 2: se añadió lentamente ácido clorhídrico/dioxano (30 ml) a una solución en diclorometano (10 ml) de éster etílico del ácido 1 -t-butiloxicarbonil-pirrol-3-carboxílico (5,50 g, 22,61 mmol) y la solución de reacción se agitó durante 3 h a temperatura normal. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se concentró a presión reducida para obtener clorhidrato de pirrolidil-3-carboxilato de etilo (4,00 g, producto bruto) que era una sustancia oleosa beige. El producto se usó directamente en el siguiente paso sin purificación adicional. El valor de CyH-i3NO2[M+H]+144 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 144.
Paso 3: se disolvió clorhidrato de piperidil-3-carboxilato de etilo (4,00 g, 22,27 mmol) en ácido acético glacial (30 ml) y agua (10 ml) y se añadió gota a gota una solución acuosa (20 ml) de nitrito de sodio (3,07 g, 44,54 mmol) durante 30 min a 0 °C. Durante este período la temperatura se mantuvo por debajo de 0 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 1 h a 0 °C, después se calentó a 30 °C y se agitó continuamente durante 1 h. La TLC (PE: acetato de etilo = 5:1) mostró que las materias primas se habían consumido por completo. La solución de reacción se vertió en agua (30 ml) y después se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (50 ml x 3). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución saturada de dicarbonato de sodio (20 ml x 3) y una solución salina saturada (20 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante el uso de cromatografía en columna de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 3:1) para obtener éster etílico del ácido 1 -nitroso-pirrolidil-3-carboxílico que era una materia oleosa beige (2,40 g, el rendimiento fue del 59,45 %). El valor de CyH-i2N2O3[M+H]+173 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 173.
Paso 4: se disolvieron éster etílico del ácido 1 -nitroso-pirrolidil-3-carboxílico (2,40 g, 13,94 mmol) y polvo de zinc (4,56 g, 69,70 mmol) en una solución de metanol anhidro (15 ml), después se enfrió la solución de reacción hasta -10 °C y se dejó caer lentamente ácido acético glacial (15 ml) durante 30 min. La solución de reacción se agitó durante 30 min a -10 °C, se calentó a 30 °C y se agitó durante 1 h. La TLC mostró que la reacción se había completado. El sólido se separó por filtración y el filtrado se concentró a presión reducida para obtener un producto bruto. El producto bruto se disolvió en agua (10 ml), la fase acuosa se neutralizó con dicarbonato de sodio sólido saturado a pH=7-8 y se extrajo con diclorometano: metanol (5:1, 200 ml x 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (50 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío para obtener éster etílico del ácido 1-aminopirrolidil-3-carboxílico (1,60 g, producto bruto) que era una materia oleosa amarilla clara. El producto se usó directamente en el siguiente paso sin purificación. El valor de C7H-mN202[M+H]+159 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 159.
Paso 5: se disolvieron éster etílico del ácido 1-aminopirrolidil-3-carboxílico (1,60 g, 10,11 mmol) y 4-cloro-7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidina (3,42 g, 11,12 mmol) en una solución de diclorometano (20 ml) y se añadió trietilamina (3,07 g, 30,33 mmol), después la solución de reacción se calentó a 60 °C y se agitó durante 10 h. La LCMS mostró que la reacción se había completado. El disolvente se secó mediante centrifugación, los residuos se vertieron en agua (20 ml) y se extrajo una fase acuosa mediante el uso de acetato de etilo (20 ml x 3). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (15 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron hasta sequedad a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en columna de sílice (diclorometano: acetato de etilo = 5:1 a 3:1) para obtener éster etílico del ácido 1-((7-tosil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidin-4-il)amino)piperidil-3-carboxílico que era un sólido amarillo (1,00 g, el rendimiento fue del 22,11 %). El valor de C20H23N5O4S[M+H]M30 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 430.
Paso 6: se añadió gota a gota éster etílico del ácido 1 -((7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidil-3-carboxílico (1,00 g, 2,33 mmol) a una suspensión de tetrahidrofurano (15 ml) de NaH (60 %, 112,00 mg, 2,80 mmol) bajo protección con nitrógeno a 0 °C en 30 min, después la solución de reacción se agitó durante 1 h a 0 °C y se añadió yoduro de metilo (396,86 mg, 2,80 mmol). La solución de reacción se calentó a 25 °C y se agitó durante 1 h. La TLC mostró que la reacción se había completado. La solución de reacción se inactivó mediante el uso de una solución saturada de cloruro de amonio (10 ml) y la fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (30 ml x 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (10 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en columna de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 5/1 a 3/1) para obtener éster etílico del ácido 1-(metil-1-(7-tosil-7H-pirrol[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidil-3-carboxílico que era un sólido espumoso amarillo claro (220,00 mg, el rendimiento fue del 17,67 %). El valor de C2-<i>H25N5O4S[M+H]+444 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 444.
Paso 7: se disolvió éster etílico del ácido 1-(metil-1-(7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidil-3-carboxílico (220,00 mg, 496,03 umol) en una solución mixta de tetrahidrofurano (5 ml) y agua (2 ml), se añadió hidróxido de sodio (79,36 mg, 1,98 mmol) y después la solución de reacción se calentó a 60 °C y se agitó durante 10 h. La LCMS mostró que la reacción se había completado. La solución de reacción se enfrió a 25 °C y se concentró a presión reducida. La fase acuosa se ajustó con HCl 2 M (3 ml) a pH = 5-6 y la fase acuosa se concentró al vacío para obtener ácido 1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-)amino]pirrolidil-3-carboxílico (65,00 mg, producto bruto) que era un sólido amarillo. El valor de C-i2H-i5N5O2[M+H]+262 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 262.
Paso 8: se añadieron HOBt (84,04 mg, 621,95 umol), EDCI (119,23 mg, 621,95 umol), clorhidrato de 2-glicinonitrilo (38,51 mg, 298,54 umol) y trietilamina (151,04 mg, 1,49 mmol) a una solución en DMF (10 ml) de ácido 1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]pirrolidil-3-carboxílico (65,00 mg, 248,78 mol), y la solución de reacción se agitó durante 10 h a temperatura normal. La LCMS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se vertió en agua (10 ml) y se extrajo una fase acuosa mediante el uso de diclorometano: metanol (5/1, 30 ml x 4). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (15 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro y después se concentraron las fases orgánicas. Los residuos se purificaron mediante una HPLC de tipo preparativa (NH3.H2O) para obtener WX30: N-(cianometil)-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]pirrolidil-3-formamida (34,00 mg, el rendimiento fue del 44,93 %). 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) 8,09 (s, 1H), 7,04 (d, J= 3,5 Hz, 1H), 6,90 (br. s., 1H), 4,11-4,27 (m, 2H), 3,00-3,27 (m, 8H), 2,18 (s.br., 2H). El valor de C14H1/NyO[M+H]+300 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 300.
Modalidad 29
1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]-N-(2,2,2-trifluoroetil)pirrolidil-3-formamida
WX31 se preparó mediante el uso de un método de preparación similar al de la Modalidad 28, y se purificó un producto bruto mediante una HPLC de tipo preparativa para obtener WX31 (56,00 mg, el rendimiento fue del 62,47 %). 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) 8,09 (s, 1H), 7,03 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 6,91 (br. s., 1H), 3, 81-4,04 (m, 2H), 3,03-3,27 (m, 8H), 2,01-2,32 (m, 2H). El valor de C-mH17F3N6O[M+H]+343 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 343.
Modalidad 30
(R&S) 1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]-N-(2,2,2-trifluoroetil)pirrolidil-3-formamida
WX31 WX32 WX33
1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pinmidin-4-il)amino]-N-(2,2,2-trifluoroetN)pirrolidil-
Se separó 3-formamida (2,00 g, 5,84 mmol) a través de una columna quiral para obtener WX32: (R o S)-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]-N-(2,2,2-trifluoroetM)pirroMdil-3-formamida (890,00 mg, rendimiento 44,52 %) y<w>X33: (S o R)-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]-N-(2,2,2-trifluoroetil)pirrolidil-3-formamida (835,00 mg, el rendimiento fue 41,78 %).
Condiciones de separación por SFC:
Columna: columna quiral AD (250 mm * 30 mm, 5 um).
fase móvil: A: CO2 supercrítico, B: 20 % MeOH (0,1 % NH3H2O), A:B = 80:20
caudal: 60 ml/min
temperatura de la columna: 38 °C
longitud de onda: 220 nm
presión del chorro: 100 Bar
temperatura de la boquilla: 60 °C
temperatura de evaporación: 20 °C
temperatura de acondicionamiento: 25 °C
WX32: (R o S)-N-(cianometil)-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]piperidil-3-formamida, tiempo de retención: 5,136 min. 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) = 8,09 (s, 1H), 7,03 (d, J= 3,3 Hz, 1H), 6,76-6,99 (m, 1H), 3,83-4,03 (m, 2H), 3,00 -3,27 (m, 8H), 2,19 (s.br., 2H). El valor de C14H17F3N6O [M+H]+343 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 343.
WX33: (S o R)-N-(cianometil)-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]piperidil-3-formamida, tiempo de retención: 5,634 min. 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) 8 = 8,09 (s, 1H), 7,03 (d, J= 3,3 Hz, 1H), 6,89 (br. s., 1H), 3,85-4,02 (m, 2H), 3,02-3,26 (m, 8H), 2,18 (s.br., 2H). El valor de C-<m>H-<i>7F3N60[M+H]+343 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 343.
Modalidad 31
3-(4-(metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)-1,4-diazepan-1-il)-3-carbonil-propionitrilo
Paso 1: se disolvió éster terc-butílico del ácido 1,4-diazepan-1-carboxílico (10,00 g, 49,93 mmol) en ácido acético (25 ml) y agua (15 ml) y se enfrió a 0 °C, después se añadió gota a gota una solución acuosa (10 ml) de nitrito de sodio (6,89 g, 99,86 mmol) durante 30 min y al mismo tiempo se mantuvo la temperatura por debajo de 0 °C. La mezcla se calentó a temperatura ambiente de forma natural y se agitó durante 1,5 h hasta que la TLC mostró que las materias primas se habían consumido por completo (éter de petróleo: acetato de etilo = 3:1, Rf = 0,45). Se añadió acetato de etilo (2*100 ml) para la extracción. Las fases orgánicas se neutralizaron con dicarbonato de sodio sólido, se lavaron con agua y solución salina, se secaron con sulfato de sodio anhidro y se concentraron a presión reducida para obtener éster terc-butílico del ácido 4-nitroso-1,4-diazepan-1-carboxílico (7,00 g, producto crudo) que era una materia oleosa beige y se usa directamente en el siguiente paso. El valor de C10H1gN3Ü3[M+H]+230, se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 230.
Paso 2: se disolvió formiato de 4-nitroso-1,4-diazepan-1-terc-butilo (5,68 g, 24,77 mmol) en tetrahidrofurano (100 ml) y se añadió hidruro de litio y aluminio (1,88 g, 49,55 mmol) en lotes bajo protección de nitrógeno a 0 °C y se agitó durante 30 min a 0 °C. Después la mezcla se calentó a 70 °C y se agitó durante 2 h. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 0 °C y se añadieron secuencialmente agua (0,88 ml), solución de hidróxido de sodio al 15 % (1,88 ml) y agua (1,88 x 3 ml). La mezcla se agitó durante 20 min, se filtró y se concentró al vacío para obtener éster terc-butílico del ácido 4-amino-1,4-diazepan-1-carboxílico (4,00 g, bruto) que era una materia oleosa amarilla y se usó directamente en el siguiente paso. El valor de C1üH21N3O2[M+H]+216 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 216.
Paso 3: se añadió trietilamina (3,76 g, 37,16 mmol) a una solución en dioxano (100 ml) de éster terc-butílico del ácido 4-amino-1,4-diazepan-1-carboxílico (4,00 g, 18,58 mmol) y 4-cloro-7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidina a 25 °C. La mezcla se agitó durante 5 h a 110 °C. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 25 °C y se concentró hasta sequedad a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 3:1 a 1:1) para obtener éster terc-butílico del ácido 4-[[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]-1,4-diazepan-1-carboxílico (1,70 g, el rendimiento fue del 18,80 %) que era un sólido amarillo. El valor de C23H30N6O4S[M+H]+487 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 487.
Paso 4: se disolvió éster terc-butílico del ácido 4-[[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]-1,4-diazepan-1-carboxílico (800,00 mg, 1,64 mmol, 1,00 Eq) en tetrahidrofurano (50 ml) y se enfrió a 0 °C, y se añadió hidruro de sodio (118,37 mg, 4,93 mmol, 3,00 Eq) en lotes bajo protección con nitrógeno. La mezcla se agitó durante 30 min a 25 °C. Después se añadió gota a gota yoduro de metilo (8,40 g, 59,18 mmol, 36,09 eq.) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 2 h a 25 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 0 °C y se añadió agua para inactivar la mezcla. La fase acuosa se extrajo mediante el uso de diclorometano: metanol (10:1, 100 ml x 3), M = fases orgánicas combinadas, se lavaron con agua salina saturada (200 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío para obtener éster terc-butílico del ácido 4-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]-1,4-diazepan-1-carboxílico (800,00 mg, 1,60 mmol, el rendimiento fue del 97,44 %), que era un sólido amarillo y se usa directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional. El valor de C24H32N6O4S[M+H]+501 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 501.
Paso 5: se disolvió éster terc-butílico del ácido 4-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]-1,4-diazepan-1-carboxílico (400, 00 mg, 799,03 umol) en tetrahidrofurano (10 ml) y metanol (10 ml) y se añadió una solución acuosa (5 ml) de hidróxido de sodio (191,77 mg, 4,79 mmol) a 25 °C. La mezcla se agitó durante 2 h a 70 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 25 °C y se concentró hasta sequedad a presión reducida. Los residuos se extrajeron mediante el uso de diclorometano: metanol (10:1, 100 ml x 3), las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua salina saturada (20 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener éster terc-butílico del ácido 4-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]-1,4-diazepan-1-carboxílico (270,00 mg, producto bruto) que era un sólido amarillo y se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional. El valor de Ci7H26N6O2[M+H]+347 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 347.
Paso 6: se añadió ácido trifluoroacético (10 ml) en lotes a una solución en diclorometano (10 ml) de éster terc-butílico del ácido 4-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]-1,4- diazepan-1-carboxílico (270,00 mg, 779,38 umol) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 30 min a 25 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se concentró a presión reducida para obtener A/-(1,4-azacicloheptan-1-il)-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (180,00 mg, producto bruto) que era un sólido amarillo y se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional. El valor de C12H1sN6[M+H]+247 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 247.
Paso 7: una solución en DMF (3 ml) de ácido 2-cianoacético (43,94 mg, 516,62 umol), HOBt (93,07 mg, 688,82 umol) y EDCI (132,05 mg, 688,82 umol) se agitó durante 30 minutos a 25 °C, después se añadieron una solución en DMF (3 ml) de W-(1,4-azacicloheptan-1-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (80,00 mg, 344,41 umol) y trietilamina (174,25 mg, 1,72 mmol). La mezcla se agitó durante 12 h a 25 °C. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se concentró a presión reducida y los residuos se purificaron mediante HPLC de tipo preparativa alcalina para obtener WX34 (10,00 mg, el rendimiento fue del 9,70 %). 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8= 8,14 (s. s., 1H), 7,18 (s. s., 1H), 6,83 (s. s., 1H), 3,78 - 3,70 (m, 2H), 3,69 - 3,61 (m, 2H), 3,28 - 3,04 (m, 4H), 2,18 (s, 1H), 2,07 (br. s., 1H), 1,34 - 1,29 (m, 2H). El valor de C15H1gNyO[M+H]+314 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 314.
Modalidad 32
L-(4-((7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)-diazepan-1-il)-3,3,3-trifluorotrifluoropropan-1-ona
WX35 se preparó mediante el uso de un método de preparación similar al de la Modalidad 31, y se purificó un producto bruto mediante una HPLC de tipo preparativa para obtener WX35. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8 = 8,39 - 8,35 (m, 1H), 7,29 - 7,25 (m, 1H), 6,70 - 6,65 (m, 1H), 5,13 (dd, J=6,7, 13,4 Hz, 1H), 4,78 - 4,71 (m, 1H), 4,34 (dd, J=4,8, 15,3 Hz, 1H), 4,06 -4,01 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,88 (s, 1H), 3,84 (d, J=3,8 Hz, 1H), 3,81 -3,75 (m, 1H), 3,72 -3,66 (m, 1H), 3,60 - 3,49 (m, 2H), 2,60 - 2,44 (m, 1H), 2,26 - 2,15 (m, 1H). El valor de C14H1yFaN6O[M+H]+343 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 343.
Modalidad 33
3,3,3-tr¡fluoro-1-(4-met¡l(7/-/-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-4-il)am¡no)-d¡azepan-1-¡l)propan-1-ona
WX36 se preparó mediante el uso de un método de preparación similar al de la Modalidad 31, y se purificó un producto bruto mediante una HPLC de tipo preparativa para obtener WX36. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8 = 8,33 - 8,29 (m, 1H), 7,44 -7,40 (m, 1H), 6,85 -6,82 (m, 1H), 4,32 -4,14 (m, 1H), 3,85 -3,70 (m, 3H), 3,58 (d, J=7,0 Hz, 3H), 3,31 -3 , 25 (m, 1H), 3,16 -2,97 (m, 2H), 2,34 -2,08 (m, 2H). El valor de C15H19FaN6O[M+H]+357 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 357.
Modalidad
W-(c¡anom
Paso 1: se añad¡ó tetrah¡drofurano (150 ml) a un matraz redondo de secado a la llama en una atmósfera de argón, después se enfrió a -78 °C y se añadió diisopropilamina (6,13 g, 60,62 mmol, 1, 20 eq) y después se añadió gota a gota n-butil litio. (2,5 M, 24,25 ml, 1,20 Eq) durante 30 min. La mezcla se agitó durante 0,5 h a 0 °C. Se añadió gota a gota una solución en tetrahidrofurano (150 ml) de éster etílico del ácido t-butiloxicarbonil-3-piperidilcarboxílico (13,00 g, 50,52 mmol, 1,00 eq) a la solución anterior a -78 °C en 30 min; el reactivo se agitó durante 1,5 h a -78 °C, después se añadió gota a gota yoduro de metilo (31,94 g, 224,81 mmol, 4,45 eq). La mezcla de reacción se agitó durante 1 h a la misma temperatura, y después se calentó lentamente hasta temperatura ambiente y se agitó durante 12 h. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla de reacción se ¡nactivó con cloruro de amonio saturado (50 ml) y se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (200 ml x 2). El líquido de extracción orgánica combinado se lavó con una solución saturada de cloruro de amonio (50 ml) y agua salina (50 ml), se secó y se concentró con sulfato de sodio para obtener un compuesto crudo éster etílico del ácido 1-t-butiloxicarbon¡l-3-met¡l-3- piperidilcarboxílico (15 g, producto bruto) que se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional. El valor de C-<m>H25N04[M+H]+272 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 272.
Paso 2: se añadió ácido trifluoroacético (25 ml) en lotes a una solución en diclorometano de éster etílico del ácido 1-tbut¡lox¡carbon¡l-3-met¡l-3-p¡peridilcarboxílico ((13,70 g, 50,49 mmol, 1,00 eq) a 0 ° C. La mezcla se agitó durante 30 min a 25 ° C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se concentró a presión reducida para obtener 3-metilpiper¡d¡l-3-carbox¡lato de etilo (9 g, producto bruto) que era una materia amarilla oleosa y se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional. El valor de CgH-i7NO2[M+H]+172 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 172.
Paso 3: se disolvió 3-metilpiper¡d¡l-3-carbox¡lato de etilo (8,60 g, 50,22 mmol, 1,00 Eq) en ácido acético (30 ml) y agua (30 ml) y se añadió gota a gota una solución acuosa (30 ml) de nitrito de sodio (6,93 g, 100,44 mmol, 2,00 Eq) a 0 °C. La solución acuosa se añadió gota a gota durante 10 min. Durante este período la temperatura se mantuvo por debajo de 0 °C. La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente (25 °C) y se agitó durante 3 h a 25 °C. La TLC (éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) mostró que las materias primas se habían consumido por completo. Se añadió lentamente hielo a la solución de reacción para ¡nactivar y después se usó acetato de etilo (100 ml x 3) para la extracción. Las fases orgánicas combinadas se diluyeron con agua (100 ml), se neutralizaron con carbonato de sodio, se lavaron con agua (100 ml x 2) y una solución salina saturada (20 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en columna de gel de sílice (gel de sílice de malla 100-200, éter de petróleo: acetato de etilo = 5:1 -3:1) para obtener 3-metil-1-nitroso-p¡per¡d¡l-3-carboxilato de etilo (3,10 g), 15,48 mmol, el rendimiento fue del 30,83 %), que era una materia oleosa amarilla. El valor de C9H16N2O3[M+H]+201 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 201.
Paso 4: se añadió zinc (5,06 g, 77,41 mmol, 5,00 Eq) a una solución en metanol (50 ml) de 3-metil-1-nitroso-p¡per¡d¡l-3-carboxilato de etilo (3, 10 g, 15,48 mmol, 1,00 Eq) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 5 min a 0 °C. Después se añadió gota a gota ácido acético (15 ml) y al mismo tiempo se mantuvo la temperatura por debajo de 0 °C. Después de la adición de ácido acético, la mezcla se agitó durante 3 h a 25 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se filtró y el filtrado se diluyó con agua (100 ml) y diclorometano (100 ml), se enfrió a 0 °C y se alcalinizó con carbonato de sodio sólido a pH=8-9; después se separaron las fases orgánicas y la fase acuosa se extrajo mediante el uso de diclorometano: metanol (10:1, 100 ml x 3); las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (100 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío para obtener 1-amino-3-metil-piperidil-3-carboxilato de etilo (2,80 g, el rendimiento fue 97,12 %) que era materia oleosa beige. El valor de CgH-i8N2O2[M+H]+187 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 187.
Paso 5: se disolvieron 1-amino-3-metilpiperidil-3-carboxilato de etilo (2,80 g, 15,03 mmol, 1,00 eq) y 4-cloro-7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidina (4,86 g, 15,79 mmol, 1,05 Eq) en dioxano (30 ml) y se añadió trietilamina (2,28 g, 22,55 mmol, 1,50 Eq). La mezcla se agitó durante 5 h a 110 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 25 °C. La mezcla se diluyó con agua (20 ml), la fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (100 ml x 2), las fases orgánicas se combinaron y posteriormente se lavaron con agua (30 ml x 2) y agua salina saturada (20 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró al vacío. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = = 5:1 a 1:1) para obtener 3-metil-1-[[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin4-il)amino]piperidil-3-carboxilato de etilo (1,10 g, 2,40 mmol, el rendimiento fue del 15,96 %), que era un sólido amarillo. El valor de C22H27NsO4S[M+H]+458 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 458..
Paso 6: se añadió hidruro de sodio (124,80 mg, 3,12 mmol, 1,30 Eq) en lotes a la solución en tetrahidrofurano (30 ml) de 3-metil-1-[[7-(tosil)pirrolo[2,3-d] pirimidin- 4-il)amino]piperidil-3-carboxilato (1,10 g, 2,40 mmol, 1,00 eq) bajo protección de nitrógeno a 0 °C. La mezcla se agitó durante 30 min a 25 °C, después se enfrió nuevamente a 0 °C y se añadió yoduro de metilo (511,87 mg, 3,61 mmol, 1,50 eq). La mezcla se agitó durante 2,5 h a 25 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. Se añadió agua (10 ml) para inactivar la solución de reacción. La fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (50 ml x 2), las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (20 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (gel de sílice de malla 100-200, éter de petróleo: acetato de etilo = 3:1 a 1:1) para obtener éster metílico del ácido 3-metil-1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pmmidin-4-il)amino]piperidil-3-carboxílico (1,00 g, 2,12 mmol, en donde el rendimiento fue del 88,36 %) que era un sólido amarillo. El valor de C23H2gN5O4S[M+H]+472 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 472.
Paso 7: se disolvió éster etílico del ácido 3-metil-1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pmmidin-4-il]amino]pipendil-3-carboxílico (1,00 g, 2,12 mmol, 1,00 Eq) en tetrahidrofurano (10 ml) y metanol (10 ml) a 25 °C, y se añadió una solución acuosa (5 ml) de hidróxido de sodio (848,00 mg, 21,20 mmol, 10,00 eq). Después la mezcla se calentó a 100 °C y se agitó durante 5 h. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 25 °C y se concentró a presión reducida. Los residuos se acidificaron con HCl diluido (solución acuosa) hasta pH = 5-6 y después se concentraron a presión reducida para obtener ácido 3-metil-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pmmidin-4-il)il-amino]pipendil-3-carboxílico (600,00 mg, producto bruto) que era un sólido amarillo y se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional. El valor de C-MH1gN5O2[M+H]+290 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 290.
Paso 8: se disolvieron ácido 3-metil-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)il-amino]piperidil-3-carboxílico (300,00 mg, 1,04 mmol, 1,00 eq), HOBt (281,05 mg, 2,08 mmol, 2,00 Eq) y EDCI (398,74 mg, 2,08 mmol, 2,00 Eq) en DMF (4 ml) y se agitó durante 30 min a 25 °C, después se añadieron secuencialmente 2-aminoacetonitrilo (192,46 mg, 2,08 mmol, 2,00 Eq) y trietilamina (420,95 mg, 4,16 mmol, 4,00 Eq). La mezcla se agitó durante 12 h a 25 °C. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se diluyó con agua (5 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua salina saturada (20 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro y se filtraron, y el disolvente se concentró a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante el uso de una preparación alcalina de tipo HPLC para obtener WX37: W-(cianometil)-3-metil-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pmmidieil)amino]piperidil-3-formamida (130,00 mg, 397,09 umol, el rendimiento fue del 38,18 %). El valor de C16H21NyO[M+H]+328 se calculó mediante el uso de MS ESI y se midió como 328. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 6= 8,18 (s.br., 1H), 7,11 (d, J=3,3 Hz, 1H), 6,71 (d, J=2,8 Hz, 1H), 4,25 (d, J =17,3 Hz, 1H), 3,93 (br. s., 1H), 3,29 (br. s., 3H), 2,99 - 2,80 (m, 4H), 2,24 (d, J=11,5 Hz, 1H), 2,03 (s, 1H), 1,75 (d, J=12,3 Hz, 1H), 1,19 (s, 4H). El valor de C-i6H21N7O[M+H]+328 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 328.
Modalidad 35
3-metil-1-(metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)-N-(2,2,2-trifluoroetil)piperidil-3-formamida
WX38 se preparó mediante el uso de un método de preparación similar al de la Modalidad 34, y se purificó un producto bruto mediante una HPLC de tipo preparativa para obtener WX38. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 6 = 8,15 (s, 1H), 7,08 (d, J=3,3 Hz, 1H), 6,73 (br. s., 1H), 4,25 -4,12 (m, 1H),3,50 (br. s., 1H), 3,30 (s, 3H), 2,97 -2,80 (m, 4H), 2,23 (d, J=12,5 Hz, 1H), 2,12 -1,98 (m, 1H), 1,74 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 1,19 (s.br., 4H). El valor de C16H21FaN6O[M+H]+371 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 371.
Modalidad 36
W-(c¡anoet¡l)-4-(met¡l(7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)am¡no)morfolin-2-formam¡da
Paso 1: se d¡solv¡ó ác¡do 4-(t-but¡lox¡carbor¡l)morfol¡no-2-carboxíl¡co (7,30 g, 31,57 mmol) en un d¡solvente m¡xto de d¡clorometano (150,00 ml) y metanol (10,00 ml), y después se añad¡ó gota a gota una soluc¡ón en hexano de TMSCHN2 (2 M, 23,68 ml) bajo protecc¡ón con n¡trógeno a 0 °C. La mezcla de reacc¡ón se agitó durante 0,5 h a 25 °C. La TLC (éter de petróleo: acetato de et¡lo = 1:1) mostró que las mater¡as pr¡mas habían reacc¡onado completamente. Se añad¡ó una soluc¡ón saturada de cloruro de amon¡o (20 ml) para ¡nact¡var, después se usó d¡clorometano para la extracc¡ón (100 ml x 2), las fases orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con agua sal¡na saturada (20 ml), se secaron con sulfato de sod¡o anh¡dro y se f¡ltraron y se concentró a pres¡ón reduc¡da para obtener éster metíl¡co del ác¡do 4-(tbut¡lox¡carbor¡l)morfol¡no-2-carboxíl¡co (8,00 g, producto bruto) que era un sól¡do be¡ge y se usó d¡rectamente en la s¡gu¡ente reacc¡ón s¡n pur¡f¡cac¡ón ad¡c¡onal. El valor de CnH1gNO5[M+H]+246 se calculó med¡ante el uso de MS ESI y fue 246.
Paso 2: se añad¡ó gota a gota una soluc¡ón en d¡oxano (4 M, 32,62 ml) de ác¡do clorhídr¡co a una soluc¡ón en d¡clorometano (100,00 ml) de éster metíl¡co del ác¡do 4-(t-but¡lox¡carbor¡l)morfol¡no-2-carboxíl¡co (8,00 g, 32,62 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacc¡ón se agitó durante 0,5 h a 25 °C. La TLC (éter de petróleo: acetato de etilo = 3:1) mostró que las mater¡as pr¡mas se habían consum¡do por completo. La soluc¡ón de reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da para obtener éster metíl¡co del ác¡do morfol¡no-2-carboxíl¡co (6,00, producto bruto) que era un sólido blanco y se usó d¡rectamente en la s¡gu¡ente reacc¡ón s¡n pur¡f¡cac¡ón ad¡c¡onal. El valor de C6H<h>NO<s>[M+H]+146 se calculó med¡ante el uso de MS ESI y fue 146.
Paso 3: se d¡solv¡ó éster metíl¡co del ác¡do morfol¡no-2-carboxíl¡co (5,70 g, 31,38 mmol) en ác¡do acét¡co (50,00 ml) y agua (50,00 ml) y se añad¡ó gota a gota una soluc¡ón acuosa (50,00 ml) de n¡tr¡to de sod¡o (4,33 - 62,77 mmol) a la soluc¡ón anter¡or a 0 °C. La mezcla se ag¡tó durante 30 m¡n a 0 °C y después se ag¡tó durante 2 h a 25 °C. La TLC mostró que la reacc¡ón se había completado. Se añad¡ó agua (30 ml) para ¡nact¡var la reacc¡ón. La fase acuosa se extrajo med¡ante el uso de acetato de etilo (100 ml x 2). Las fases orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con agua sal¡na saturada (20 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío a 70 °C para eliminar el ácido acético parcial. Los residuos se disolvieron en una solución mixta de acetato de etilo (100 ml) y agua (50 ml) y se alcalinizaron mediante el uso de hidrogenocarbonato de sodio sólido a pH=8-9. La mezcla se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (100 ml x 2), las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua salina saturada (20 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener éster metílico del ácido 4-nitroso-morfolino-2-carboxílico (5,40 g, rendimiento fue del 97,83 %) que era un sólido beige. El valor de C6H1üN2O4[M+H]+175 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 175.
Paso 4: se disolvió éster metílico del ácido 4-nitroso-morfolino-2-carboxílico (4,40 g, 25,27 mmol) en metanol (50,00 ml) y se enfrió a -10 °C, después se añadió zinc (8,26 g, 126,33 mmol) a la solución bajo protección con nitrógeno y se añadió gota a gota ácido acético (15,17 g, 252,66 mmol) a -10 °C y 0 °C. La mezcla se agitó durante 60 min a 0 °C y después se agitó durante 4 h a 25 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se filtró y se lavó con metanol (1000 ml). El filtrado se concentró a presión reducida a 70 °C. Los residuos se resolvieron en diclorometano: metanol (10:1, 400 ml) y se alcalinizaron a pH=8-9. La mezcla se filtró con diatomita y se lavó con diclorometano: metanol (10:1). El filtrado se concentró a presión reducida para obtener éster metílico del ácido 4-aminomorfolino-2-carboxílico (5,30 g, producto bruto) que era una materia oleosa amarilla y se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional. El valor de C6H-<i>2N203[M+H]+161 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 161.
Paso 5: se disolvieron éster metílico del ácido 4-aminomorfolino-2-carboxílico (4,30 g, 26,85 mmol) y 4-cloro-7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidina (8,26 g, 26,85 mmol) en dioxano (100,00 ml) y se añadió trietilamina (8,15 g, 80,55 mmol) bajo protección con nitrógeno. La mezcla anterior se agitó durante 24 h a 110 °C. TLC muestra que no hubo más avances en la reacción. La mezcla se enfrió a 25 °C y después se concentró a presión reducida a 50 °C. Los residuos se diluyeron con agua (50 ml), la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3), las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua salina saturada (20 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en columna de gel de sílice (gel de sílice de malla 100-200, éter de petróleo: acetato de etilo: diclorometano = 5:1:0,5 a 1:1:1) para obtener éster metílico del ácido 4-[[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]morfolino-2-carboxílico (3,80 g, 7,93 mmol, el rendimiento fue del 29,52 %), que era un sólido amarillo. El valor de C19H2-<i>N505S[M+H]+432 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 432.
Paso 6: se disolvió éster metílico del ácido 4-[[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]morfolino-2-carboxílico (3,80 g, 8,81 mmol) en tetrahidrofurano (100,00 ml), y se añadió hidruro de sodio (422,80 mg, 10,57 mmol, 1,20 eq) en lotes bajo protección con nitrógeno a 0 °C. La solución de reacción se agitó durante 60 min a 0 °C, después se añadió gota a gota yoduro de metilo (7,17 g, 50,48 mmol) a 0 °C y se agitó continuamente durante 4 h a 25 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 0 °C y se añadió agua (20 ml) para inactivar. La fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (100 ml x 2), las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (20 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en columna de gel de sílice (gel de sílice de malla 100-200, éter de petróleo: acetato de etilo = 3:1 a 1:1) para obtener éster metílico del ácido 4-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]morfolino-2-carboxílico (140,00 mg, rendimiento fue del 3,39 %), que era un sólido amarillo. El valor de C20H23N5O5S[M+H]+446 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 446.
Paso 7: se añadió una solución acuosa (2,50 ml) de hidróxido de sodio (50,28 mg, 1,26 mmol) a una solución mixta de tetrahidrofurano (5,00 ml) y metanol (5,00 ml) de éster metílico del ácido 4-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]morfolina-2-carboxílico (140,00 mg, 314,26 umol). La mezcla se agitó durante 2 h a 100 °C. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 25 °C y después se concentró a presión reducida a 50 °C. Los residuos se neutralizaron mediante el uso de una solución acuosa de ácido clorhídrico diluido y se concentraron a presión reducida para obtener ácido 4-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]morfolino-2-fórmico (120 mg, producto bruto) que era un sólido amarillo y se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional. El valor de C-i2H-i5N503[M+H]+278 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 278.
Paso 8: se disolvieron ácido 4-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]morfolino-2-fórmico (45,00 mg, 162,29 umol), HOBt (43,86 mg, 324,58 umol) y EDCI (62,22 mg, 324,58 umol) en DMF (4,00 ml). La mezcla se agitó durante 30 min a 25 °C, después se añadieron 2-aminoacetonitrilo (30,03 mg, 324,58 umol) y trietilamina (65,69 mg, 649,16 umol) y después la mezcla se agitó durante 12 h a 25 °C. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se diluyó con agua (5 ml). La fase acuosa se extrajo mediante el uso de diclorometano: metanol (5:1, 20 ml x 3), las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (20 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante HPLC de tipo alcalina para obtener WX39 (20,00 mg, el rendimiento fue del 39,08 %). 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8 = 8,16 (s, 1H), 7,15 -7,06 (m, 2H), 4,63 (br. s., 1H), 4,47 (dd, J=2,8, 10,0 Hz, 1H), 4,24 -4,13 (m, 3H), 4,05 (t, J=10,5 Hz, 1H), 3,29 -3,18 (m, 5H), 3,00 - 2,84 (m, 2H). El valor de C-<m>H-<i>7N702[M+H]+316 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 316.
Modalidad 37
4-(( 7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)-N-(2,2,2-trifluoroetil)morfolino-2-formamida
WX40 se preparó mediante el uso de un método de preparación similar al de la Modalidad 36, y se purificó un producto bruto mediante una HPLC de tipo preparativa para obtener WX40. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8 = 8,13 (s, 1H), 7,14 (d, J=3,3 Hz, 1H), 6,86 (br. s., 1H), 4,63 (s, 1H), 4,39 (dd, J=2,4, 10,4 Hz, 1H), 4,12 (d, J=11,5 Hz, 1H), 4,02 -3,88 (m, 3H), 3,41 (d, J=7,8 Hz, 1H), 3,07 (d, J= 10,8 Hz, 1H), 2,92 -2,82 (m, 1H), 2,66 (d, J=16,1 Hz, 1H). El valor de C13H15FaN6O2[M+H]+345 se calculó mediante el uso de MS Esi y fue 345.
Modalidad 38
4-(metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)-N-(2,2,2-trifluoroetil)morfolino-2-formamida
WX41 se preparó mediante el uso de un método de preparación similar al de la Modalidad 36, y se purificó un producto bruto mediante una HPLC de tipo preparativa para obtener WX41. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8 = 8,16 (s, 1H), 7,11 (s. s., 2H), 4,63 (s. s., 1H), 4,47 (dd, J=2,8, 10,0 Hz, 1 H), 4,21 - 4,14 (m, 1H), 4,05 (t, J=10,4 Hz, 1H), 3,94 (d, J=9,3 Hz, 2H), 3,26 -3,15 (m, 5H), 2,99 -2,84 (m, 2H). El valor de C-mH17F3N602[M+H]+359 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 359.
Modalidad 39
N-(metoximetil)-1-[metil-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-]amino]piperidil-3-formamida
Paso 1: se disolvió ácido 1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-]amino]piperidil-3-fórmico (672,75 mg, 1,57 mmol) en tetrahidrofurano (30,00 ml), y se añadieron trietilamina (474,98 mg, 4,69 mmol) y cloroformiato de isopropilo (191,75 mg, 1,56 mmol) bajo protección con nitrógeno, después la mezcla se agitó para reaccionar durante 2 h. La TLC mostró que las materias primas habían reaccionado completamente y se obtuvo un intermediario. Se añadió NH3.H2O (548,41 mg, 15,65 mmol) y se agitó continuamente para reaccionar durante 12 h. La TLC mostró que las materias primas habían reaccionado completamente. Para la extracción, se añadieron agua (10 ml) y acetato de etilo (10 ml x 3). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con una solución salina saturada (10 ml x l), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se destilaron a presión reducida para eliminar el disolvente, se obtuvo un sólido gris, que se purificó adicionalmente mediante TLC preparativa (DCM: MeOH = 20:1) para obtener 1 -[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-]amino]piperidil)-3-formamida (590,00 mg, 76,92 %). El valor de C20H24N6O3S[M+H]+429,16 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 429.
Paso 2: se disolvió 1-[metil-[7-(tosil)pirrol[2,3-d]pirimidin-4-]amino]piperidil)-3-formamida (195,00 mg, 456,12 umol) en DMF (2 ml), se añadieron K2CO3 (157,60 mg, 1,14 mmol), K<i>(37,86 mg, 228,06 umol) y sulfuro de clorometilmetilo (65 mg, 684 umol) en secuencia, se calentó a 80 °C y se agitó durante 12 h. La TLC mostró que las materias primas habían reaccionado completamente. Para la extracción, se añadieron agua (15 ml) y acetato de etilo (10 ml x 3). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con una solución salina saturada (10 ml x l), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se destilaron a presión reducida para eliminar el disolvente, para obtener un sólido gris y se separó el sólido mediante TLC preparativa (éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) para obtener 1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-]amino]-N-[(metilmercapto)metil]piperidil-3-formamida (75,00 mg, 33,72 %). El valor de C22H28N6O3S2[M+H]+489,17 se calculó mediante el uso de<m>S ESI y fue 489.
Paso 3: 1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-]amino]-N-[(metilmercapto)metil]piperidil-3-formamida (121,00 mg, 248,13 umol) se resolvió en diclorometano DCM (10,00 ml) y se añadió m-CPBA (100,75 mg, 496,27 umol, 2,00 eq) en lotes, y después se agitó para reaccionar durante 12 h a 25 °C. La TLC mostró que las materias primas habían reaccionado completamente y la LC-MS mostró que se había generado el producto. Se añadió tiosulfato de sodio saturado (5 ml x 3) para eliminar el m-CPBA residual y se usó diclorometano (10 ml x 3) para la extracción, después se las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con una solución salina saturada (10 ml x 1), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se destilaron a presión reducida para eliminar el disolvente, se obtuvo un sólido gris y se separó mediante una TLC preparativa (DCM:MeOH = 10:1) para obtener un material viscoso amarillo claro 1 -[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-]amino]-N-[(metilsulfonil)metil]piperidil-3-formamida (88,00 mg, 68,25 %). El material viscoso se disolvió en metanol y se calentó para obtener N-(metoximetil)1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-]amino]piperidil)-3-formamida. Se eliminó el disolvente y el producto se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional. El valor de C22H28N6O4S [M+H]+473,19 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 473.
Paso 4: se disolvió N-(metoximetil) 1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-]amino]piperidil)-3-formamida (80,00 mg, 169,29 umol) en metanol (2,00 ml), se añadió NaOH (1 M, 508 ul) y se agitó para reaccionar durante 24 h a 25 °C. La TLC mostró que las materias primas reaccionaron completamente y la LC-MS mostró que se generó un producto. Se añadió agua (10 ml), la mezcla se filtró y el producto se lavó con un disolvente mixto (DCM:MeOH = 5:1) y se concentró para obtener un sólido blanco, y se usó una HPLC preparativa (método alcalino) para obtener WX42: N-(metoximetil) 1-[metil-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-]amino]piperidil)-3-formamida (13,40 mg, 24,86 %). El valor de Ci5H22N6O2[M+H]+319,18 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 319. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 5=8,13 (s, 1H), 7,08 (s, 2H), 4,53-4,61 (m, 2H), 3,28 (s, 3H), 3,23 (s, 3H), 2,99 -3,09 (m, 2H), 2,74-2,98 (m,3H), 1,83-2,06 (m, 3H), 1,40-1,61 (m, 1H).
Modalidad 40
Paso 1: se disolvió 1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-]amino]-N-[(metilmercapto)metil]piperidil-3-formamida en un disolvente mixto de (MeOH (5,00 ml) y H2O (2,00 ml), se añadió NaOH (16,95 mg, 423,63 umol) y se agitaron para reaccionar durante 12 h a 25 °C. La TLC mostró que las materias primas habían reaccionado completamente. La LC-MS mostró que se generó un producto. Se añadió HCl (1 M x 10 ml) para ajustar el pH = 7-8, después la mezcla se concentró a 5 ml y se separó mediante una HPLC preparativa (método alcalino) para obtener WX43: 1-[metil-[7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amino]-N-(metiltiometil)piperidil-3-formamida (9, 30 mg, 9,85 %). El valor de C15H22N6OS[M+H]+334,16 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 335. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 5 = 8,12 (s, 1H), 7,08 (s, 2H), 4,33 - 4,17 (m, 2H), 3,23 (s, 3H), 3,08 -2,79 (m, 5H), 2,12 (s, 3H), 2,01 - 1,86 (m, 3H), 1,50 (d, J=10,0 Hz, 1H).
Modalidad 41
Paso 1: se disolvió 2-[1-[metil[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-]amino]-3-piperidil]acetonitrilo en un disolvente mixto de THF (90,00 ul)/H2O (180,00 ul)/MeOH (180,00 ul), se añadió NaOH (26,91 mg, 672,75 umol) y se agitó para reaccionar durante 12 h a 25 °C. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. Se detuvo la agitación y la mezcla se concentró a presión reducida para eliminar el disolvente orgánico, se ajustó con HCl (1 Mx5 ml) a pH=7-8 y se separó mediante una HPLC preparativa (método alcalino) para obtener WX44: 2-[1-[metil[7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-]amino]-3-piperidil]acetonitrilo (30,00 mg, 48,55 %). El valor de Ci4HisN6[M+ H]+ 271,16 se calculó mediante el uso de MS e S i y fue 271. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8 = 8,16-8,10 (m, 1H), 7,08 (d, J=3,3 Hz, 1H), 7,03 (d, J= 3,3 Hz, 1H), 3,21 (s, 3H), 3,03 (d, J= 7,3 Hz, 1H), 2,97-2,79 (m, 2H), 2,67 (t, J=10,5 Hz, 1H), 2,53 -2,41 (m, 2H), 2,33-2,19 (m, 1H), 2,04-1,81 (m, 3H), 1,21 -1,00 (m, 1H).
Paso 1: se disolvió ácido 2-cianoacético (158,14 mg, 1,86 mmol) en DMF (4 ml), se añadieron HOBt (502,41 mg, 3,72 mmol) y EDCI (712,78 mg, 3,72 mmol) y se agitó para reaccionar durante 30 min a 25 °C. Se añadió N-[3-(aminometil)piperidin-1-il]-N-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (134,68 mg, 903,53 pmol), después se añadió Et3N (752,49 mg, 7,44 mmol) y la mezcla se agitó para reaccionar durante 12 h a 25 °C. La TLC mostró que las materias primas habían reaccionado completamente y la LC-MS mostró que se había generado un producto. Se detuvo la agitación y la mezcla se concentró a presión reducida para eliminar la DMF y se separó mediante una HPLC preparativa (método alcalino) para obtener WX45: 2-ciano-N-((metil(7H-pirrol[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidin-3-il)metil)acetamida (7,70 mg, 6,27 %). El valor de Ci6H2iN7O[M+H]+328,18 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 328. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8 = 8,11 (s, 1H), 7, 05 (s, 2H), 3,21 (s, 3H), 3,20 - 3,09 (m, 2H), 3,03 -2,82 (m,3H), 2,65 -2,48 (m, 2H), 2,22 -2,04 (m, 1H), 1,97 - 1,79 (m, 3H), 1,31 -1,18 (m, 1H), 1,08-0,88 (m, 1H).
Modalidad 43
Paso i: se disolvió el Intermediario 3 (99,50 mg, 361,41 mmol) en DMF (5,00 ml), se añadieron HOBt (146,50 mg, 1,08 mmol) y EDCI (207,85 mg, 1,08 mmol) y se agitó durante 30 min a 25 °C. Se añadieron 2,2,3,3,3pentafluoropropilamina (134,68 mg, 903,53 umol) y trietilamina (219,43 mg, 2,17 mmol) y la mezcla se agitó para reaccionar durante 18 h a 25 °C. La LC-MS mostró que las materias primas reaccionaron completamente y se generó un producto. Se detuvo la agitación, se filtró la mezcla y el filtrado se concentró hasta 5 ml y se separó mediante una HPLC preparativa (método alcalino) para obtener WX46: 1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-)amino]-N-(2,2,3,3,3-pentafluoropropil)piperidil-3-formamida (49,70 mg, 33,84 %). El valor de C-i6H1gF5N6O[M+H]+407,15 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 407. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8 = 8,13 (s, 1H), 7,08 (t, J=3,4 Hz, 2H), 4,09 3,80 (m,2H), 3,22 (s,3H), 3,08 -2,83 (m, 5H), 2,01 -1,85 (m,3H), 1,58 - 1,40 (m, 1H).
Modalidad 44
1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-)amino]-N-(2,2-difluoroetil)piperidil-3-formamida
Paso 1: se disolvió el Intermediario 3 (76,00 mg, 276,05 umol) en DMF (4,00 ml), se añadieron HOBt (111,90 mg, 828,15 umol) y EDCI (158,76 mg, 828,15 umol) y se agitó durante 30 min a 25 °C. Se añadieron 2,2-difluoroetilamina (55,94 mg, 690,13 umol) y trietilamina (223,47 mg, 2,21 mmol) y la mezcla se agitó para reaccionar durante 18 h a 25 °C. La LC-MS mostró que las materias primas reaccionaron completamente y se generó un producto. Se detuvo la agitación, se filtró la mezcla y el filtrado se concentró y se separó mediante una HPLC preparativa (método alcalino) para obtener WX47: 1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-)amino]-N-(2,2-difluoroetil)piperidil-3-formamida (42,82 mg, 45,85 %). El valor de C15H20F2N6O[M+H]+339,17 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 339. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8= 8,12 (s, 1H), 7,11 -7,02 (m,2H), 6,06-5,67 (m, 1H), 3,66-3,45 (m,2H), 3,22 (s,3H), 3,09-2,98 (m, 2H), 2,96 -2,84 (m, 3H), 2,05 - 1,83 (m, 3H), 1,58 - 1,39 (m, 1H).
Modalidad 45
Formiato de 5-[[7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-]amino]-hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-2(1H)-terc-butilo
Paso 1: se disolvió formiato de hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-2(1H)-terc-butilo (1,50 g, 7,07 mmol) en ácido acético (10,00 ml) y agua (10,00 ml), se enfrió a 0 °C, se añadió gota a gota una solución en H2O (10,00 ml) de NaNO2 (1,22 g, 17,68 mmol) durante 30 min a 0 °C y la mezcla se agitó continuamente durante 2 h a 0 °C. La TLC (DCM: MeOH = 10:1) mostró que las materias primas habían reaccionado completamente. Se detuvo la agitación y la mezcla se ajustó con carbonato de sodio sólido a pH=8-9, y después se extrajo con una mezcla de disolventes (DCM: MeOH = 10:1, 15 ml x 3); las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con solución salina saturada (25 ml x l), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron para obtener un sólido blanco grisáceo formiato de 5-nitrosohexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-2(1H)-terc -butilo (1,27 g, producto bruto). 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8 = 4,57 -4,43 (m, 1H), 4,25 (dd, J=4,9, 12,7 Hz, 1H), 3,85 (dd, J=7,8, 15,3 Hz, 1H), 3,65 (dd, J=5,3, 11,8 Hz, 2H), 3,49 (dd, J=4,9, 15,4 Hz, 1H), 3,31 -3,21 (m, 2H), 3,18-2,99 (m, 2H), 1,48 (s, 9H).
Paso 2: se disolvió formiato de 5-nitroso-hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-2(1H)-terc-butilo (150,00 mg, 621,66 umol) en metanol (5,00 ml) y se añadió polvo de zinc (609,76 mg), 9,32 mmol). La temperatura se controló entre -10 °C y 5 °C bajo protección con nitrógeno y se añadió gota a gota AcOH (3,99 g, 66,44 mmol), después la mezcla se agitó continuamente para reaccionar durante 1 h. La TLC (DCM: MeOH = 10:l) mostró que las materias primas habían reaccionado completamente. Se detuvo la agitación, se filtró la mezcla y se concentró el filtrado, se disolvió el sólido obtenido en disolvente mixto (DCM: MeOH = 10:1, 10 ml) para eliminar la materia sólida y después se concentró el filtrado para obtener formiato de 5- amino-hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-2(1H)-terc-butilo (150,00 mg, producto bruto) que se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional. El valor de C1bH27N3O4S[M+23]+404,17 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 404.
Paso 3: se disolvió 4-cloro-7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidina (169,00 mg, 549,13 umol) y formiato de 5-aminohexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-2(1H)-terc-butilo (149,78 mg, 658,96 umol) en DCM (6,40 ml), se añadió trietilamina (278,13 mg, 2,75 mmol) y se agitó para reaccionar durante 16 h a 25 °C. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. Se detuvo la agitación y se añadió agua (10 ml), después la mezcla se extrajo con DCM (5 ml x 3) y las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con solución salina saturada (25 ml x 1), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida y se separó mediante una TLC de tipo preparativa (SiO2, PE: EA = 1:1) para obtener un sólido amarillo claro formiato de 5-[[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-]amino]-hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-2(1H)-terc-butilo (161,80 mg, 59,10 %). El valor de C24H3üN6O4S[M+H]+499,20 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 499.
Paso 4: se disolvió formiato de 5-[[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-]amino]-hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-2(1H)-tercbutilo (161,80 mg, 324,51 umol) en H2O: MeOH (10 ml, 1:1), se añadió NaOH (38,94 mg, 973,53 umol) y se agitó para reaccionar durante 12 h a 15 °C. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. Se detuvo la agitación y la mezcla se concentró a presión reducida, después se eliminó el metanol y se ajustó el pH a 8-9 mediante el uso de ácido clorhídrico (1 M). Después, la mezcla se separó mediante una HPLC preparativa (HCOOH) para obtener WX48: formiato de 5-[[7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-]amino]-hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-2(1H)-terc-butilo (2,20 mg, 1,97 %). El valor de C17H24N6O2M H] 345,20 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 345. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8 = 8,16 (br. s., 1H), 7,26 (br. s., 1H), 6,80 (br. s., 1H), 3,62 (br. s., 2 H), 3,46 (d, J=11,3 Hz, 2H), 3,02 (br. s., 4H), 2,17 (s, 2H), 1,52 (s, 9H).
Modalidad 46
(3S o 3R)-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-)amino]-N-(2,2-difluoroetil)piperidil-3-formamida
Paso 1: el intermediario 3 (600,00 mg, 2,18 mmol) se disolvió en DMF (30,00 ml), se añadieron HOBt (441,71 3,27 mmol) y EDCI (626,68 mg, 3,27 mmol) y se agitó durante 30 min a 25 °C. Se añadieron 2,2-difluoroetilamina (176,66 mg, 2,18 umol) y trietilamina (661,59 mg, 6,54 mmol) y la mezcla se agitó para reaccionar durante 12 h a 25 °C. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. Se detuvo la agitación, después la mezcla se concentró a presión reducida para eliminar la DMF y se separó por una HPLC (método alcalino) para obtener 1-[metil(7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-)amino]-N-(2,2-difluoroetil)piperidil-3-formamida (210,00 mg, 28,13 %). El valor de C-i5H20F2N6o [m H]+339,17 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 339.
Paso 2: se separó 1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-)amino]-N-(2,2-difluoroetil)piperidil-3-formamida (compuesto 2) (210,00 mg). mediante el uso de cromatografía supercrítica.
Condiciones de separación por SFC:
columna: columna quiral AD (250 mm * 30 mm, 5 um).
fase móvil: A: CO2 supercrítico, B:30 % MeOH (0,1 % NH3H2O), A:B = 70:30
caudal: 80 ml/min
temperatura de la columna: 38 °C
longitud de onda: 220 nm
presión del chorro: 100 Bar
temperatura de la boquilla: 60 °C
temperatura de evaporación: 20 °C
temperatura de acondicionamiento: 25 °C
WX49 (3R o 3S)-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-)amino]-N-(2,2-difluoroetil)piperidil-3-formamida (156,80 mg, 69,64 %), tiempo de retención: 5,77 min. El valor de C15H 20F2N6O[M+H]+339,17 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 339. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8 = 8,17 - 8,06 (m, 1H), 7,14 - 7,01 (m, 2H), 6,06 - 5,67 (m, 1H), 3,60 -3,47 (m, 2H), 3,22 (s, 3H), 3,10-2,98 (m, 2H), 2,97 -2,85 (m, 3H), 2,02-1,84 (m, 3H), 1,57-1,40 (m, 1H).
WX50 (3S o 3R)-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-)amino]-N-(2,2-difluoroetil)piperidil-3-formamida (71,30 mg, 31,75 %), tiempo de retención: 6,55 min. El valor de C-i5H20F2N6O[M+H]+339,17 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 339. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8 = 8,13 (s, 1H), 7,15 -6,97 (m, 2H), 6,12 -5,64 (m, 1H), 3, 61 -3,47 (m, 2H), 3,22 (s, 3H), 3, 07-2,97 (m, 2H), 2,97-2,81 (m, 3H), 2,02- 1,84 (m, 3H), 1,57-1,39 (m, 1H).
Modalidad 47
(3S o 3R)-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-)amino]-N-(2,2,3,3,3-pentafluoropropil)piperidil-3-formamida
Paso 1: el intermediario 3 (1,20 g, 4,36 mmol) se disolvió en DMF (20,00 ml), se añadieron HOBt (1,77 g, 13,08 mmol) y EDCI (2,51 g, 13,08 mmol) y se agitó durante 30 min a 25 °C. Se añadieron 2,2,3,3,3-pentafluoropropilamida (1,62 g, 10,90 mmol) y Et3N (2,65 g, 26,15 mmol) y la mezcla se agitó para reaccionar durante 12 h a 25 °C. La l C-MS mostró que las materias primas reaccionaron completamente y se generó un producto. Se detuvo la agitación, después la mezcla se filtró y el filtrado se concentró a 5 ml y se separó mediante una HPLC preparativa (alcalina) para obtener 1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-)amino]-N-(2,2,3,3,3-pentafluoropropil)piperidil-3-formamida (800,00 mg, 43,77 %). El valor de C16H-igF5N6O[M+H]+407,15 se calculó mediante el uso de Ms ESI y fue 407.
Paso 2: se separó (1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-)amino]-N-(2,2,3,3,3-pentafluoropropil)piperidil-3-formamida (800, 00 mg) mediante cromatografía supercrítica.
Condiciones de separación por SFC:
columna: columna quiral AD (250 mm * 30 mm, 10 um).
Fase móvil: A: CO2 supercrítico, B:40 % MeOH (0,1 % NH3H2O), A:B = 60:40
caudal: 70 ml/min
temperatura de la columna: 38 °C
longitud de onda: 220 nm
presión del chorro: 100 Bar
temperatura de la boquilla: 60 °C
temperatura de evaporación: 20 °C
temperatura de acondicionamiento: 25 °C
WX51 (3R o 3S)-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-)amino]-N-(2,2,3,3,3-pentafluoropropil)piperidil-3-formamida (401,50 mg, 46,90 %), tiempo de retención: 5,77 min. El valor de C-i6H-igF5N6O[M+H]+407,15 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 407. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8 =8,13 (s, 1H), 7,13- 7,02 (m, 2H), 4,11 -3,80 (m, 2H), 3,23 (s, 3H), 3,08-2,84 (m, 5 H), 2,06- 1,83 (m, 3H), 1,49 (d,J = 11,5Hz, 1H).
WX52 (3S o 3 R)-1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-)amino]-N-(2,2,3,3,3-pentafluoropropil)piperidil-3-formamida (395,60 mg, 46,06 %), tiempo de retención: 6,89 min. El valor de C-i6H-igF5N6O[M+H]+407,15 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 407. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8 = 8,13 (s, 1H), 7,08 (s, 2H), 4,14-3,81 (m, 2H), 3,23 (s, 3H), 3,11-2,76 (m, 5H), 2,07-1,84 (m, 3H), 1,63 -1,41 (m, 1H).
Paso 1: se añadió EDCI (174,08 mg, 908,08 umol) a una solución de piridina (5,00 ml) del intermediario 3 (100,00 mg, 363,23 umol), después se añadió 3-(trifluorometil)fenilamina (64,38 mg, 399,55 umol) a 0 °C. La mezcla se calentó a 25 °C y se agitó durante 10 h a 25 °C. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. El disolvente se eliminó a presión reducida. Los residuos se diluyeron con agua (10 ml) y se extrajeron con diclorometano: metanol (15 ml x 2,5/1). Las capas orgánicas combinadas se concentraron a presión reducida para obtener los residuos. Los residuos se purificaron mediante el uso de una HPLC de tipo preparativa (condición alcalina) para obtener WX53: 1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]-N-[3-(trifluorometil)fenil]piperidil-3-formamida (50,00 mg, el rendimiento fue del 32,90 %). 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) 8 = 8,11 (s, 1H), 8,02 (br. s., 1H), 7,73 (d,J = 8,0 Hz, 1H), 7,46 (t,J = 7,9 Hz, 1H), 7,35 (d, J= 7,5 Hz, 1H), 7,09 (d, J= 5,3 Hz, 2H), 3, 22 (s, 3H), 2,88-3,16 (m, 5H), 1,88-2,09 (m, 3H), 1,40-1,66 (m, 1H). El valor de C20H21F3N6O[M+H]+419 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 419.
Modalidad 49
(3-hidroxiazetidin-1-il)-[1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)-3-piperidinil)cetona
Paso 1: se añadió gota a gota óxido de 2-(clorometil)etileno (5,05 g, 54,58 mmol) a una solución en metanol (55 ml) de benzhidrilamina (10,00 g, 54,58 mmol) bajo protección de nitrógeno a 0 °C, después la solución de reacción se calentó a 28 °C y se agitó durante 10 h. La LCM<s>mostró que la reacción se había completado. La mezcla se concentró a presión reducida para obtener 1-(bencilaminopiridina)-3-cloropropil-2-ol (15,00 g, producto bruto) que era un líquido amarillo y se usó directamente en el siguiente paso. Después, se añadió DIEA (7,03 g, 54,39 mmol) a una solución etanólica (100 ml) de 1-(bencilaminopiridina)-3-cloropropil-2-ol (15,00 g, 54,39 mmol); la solución de reacción se calentó a 90 °C y se agitó durante 10 h. La LCMS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 25 °C y se concentró a presión reducida. El concentrado se recristalizó mediante el uso de acetona y éter de petróleo para obtener 1-benzhidrilazetan-3-ol (7,10 g, el rendimiento fue del 51,82 %) que era un sólido blanco. El valor de C16H-i7NO[M+H]+240 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 240.
Paso 2: se añadió Pd-C (10 %, 500 mg) a una solución en metanol (15 ml) de 1-benzhidrilazetan-3-ol (1,00 g, 4,18 mmol) bajo protección con nitrógeno. La solución de reacción se reemplazó con hidrógeno varias veces y después se agitó durante 10 h bajo protección de hidrógeno (15 psi) a 30 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla de reacción se filtró y se concentró para obtener azetidin-3-ol que era una materia oleosa incolora (600,00 mg, producto bruto). El valor de C3H7NO[M+H]+74 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 74.
Paso 3: se añadieron HOBt (122,70 mg, 908,08 umol), EDCI (174,08 mg, 908,08 umol) y TEA (220,53 mg, 2,18 umol) al intermediario 3 (100,00 mg, 363,23 umol) y una solución en DMF (10 ml) de azetidin-3-ol (26,5 mg, 365 umol). La mezcla se agitó durante 10 h a temperatura normal. La LCMS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se vertió en agua (20 ml). La fase acuosa se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (15 ml x 3). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (10 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron, y los residuos se purificaron mediante una HPLC de tipo preparativa (condición alcalina) para obtener WX54: (3-hidroxiazetidin-1-il)-[1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)-3-piperidinil)cetona (5,00 mg, el rendimiento fue del 3,75 %). 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4)6 = 8,14 (s, 1H), 7,00-7,22 (m, 2H), 4,35-4,61 (m, 2H), 3, 91-4,21 (m, 2H), 3,51 -3,78 (m, 2H), 3,21-3,27 (m, 2H), 2,84-3,01(m, 5H), 1,84-2,03 (m, 3H), 1,36-1,51 (m, 1H). El valor de C-i6H22N6O2[M+H]+331 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 331.
Modalidad 50
3-[5-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)-hexahidro-1H-pirrolo[3,4-c]piridin-2-il]3-oxopropanonitrilo
Paso 1: se añadió gota a gota una solución acuosa (10,00 ml) de nitrito de sodio (420,00 mg, 6,09 umol) a una solución mixta de ácido acético (10,00 ml) y agua (10,00 ml) de éster terc-butilhexahidro-1H-pirrolo[3,4-c]piridin-2(3H)-carboxílico (800,00 mg, 3,04 umol) a 0 °C. Después de añadir la solución de nitrito de sodio, la mezcla se calentó a 25 °C y se agitó durante 2 h. La TLC mostró que las materias primas se habían consumido. La solución de reacción se diluyó con agua (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (30 ml x 2). Las capas orgánicas combinadas se ajustaron con dicarbonato de sodio saturado a pH = 8-9, se lavaron con solución salina (10 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener éster terc-butil-5-nitrosohexahidro-1H-pirrolo[3,4-c]piridin-2(3H)-carboxílico (650,00 mg, producto bruto) que era una materia oleosa amarilla. El producto se usó directamente en el siguiente paso sin necesidad de purificación adicional. El valor de C-i2H2-iN3O3[M+H]+256 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 256.
Paso 2: se añadió gota a gota ácido acético (5,00 ml) a una solución en metanol (10,00 ml) de éster terc-butil-5-nitrosohexahidro-1H-pirrolo[3,4-c]piridin-2(3H)-carboxílico (650,00 mg, 2,55 umol) y polvo de zinc (833,72 mg, 12,75 umol) de -5 °C a -10°. Después de la adición de ácido acético, la mezcla se calentó lentamente a 25 °C y se agitó durante 2 h. La TLC mostró que los materiales iniciales se habían consumido por completo. El sólido se filtró, después la mezcla se filtró y se concentró a presión reducida para obtener éster terc-butil-5-aminohexahidro-1H-pirrolo[3,4-c]piridina-2(3H)-carboxílico (620,00 mg, producto bruto) que era un sólido blanco. El producto se usó directamente en el siguiente paso sin purificación. El valor de C-i2H23N3O2[M+H]+242 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 242.
Paso 3: una solución en diclorometano (15,00 ml) de éster terc-butil-5-aminohexahidro-1H-pirrolo[3,4-c]piridina-2(3H)-carboxílico (620,00 mg, 2,06 umol), 4-cloro-7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidina (633,12 mg, 2,06 umol) y trietilamina (1,25 g, 12,36 mmol) se calentó a 50 °C y se agitó durante 10 h a 50 °C. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida para obtener los residuos. Los residuos se purificaron mediante cromatografía en columna (éter de petróleo: acetato de etilo = 5/1 a 2/1) para obtener éster tercbutil 5-(7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]aminohexahidro-1H-pirrolo[3,4-c]piridina-2(3H)-carboxílico (270,00 mg, el rendimiento fue del 20,97 %) que era un sólido blanco. El valor de C25H32N6O4S[M+H]+513 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 513.
Paso 4: se añadió clorhidrato de dioxano (4 M, 5,00 ml) a una solución en DCM (3,00 ml) de éster terc-butil 5-(7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]aminohexahidro-1H-pirrolo[3,4-c]piridina-2(3H)-carboxílico (270,00 mg, 526,71 umol), y la mezcla se agitó durante 2 h a temperatura normal. La LC-MS mostró que las materias primas originales se habían consumido por completo. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida para obtener N-hexahidro-1H-pirrolo[3,4-c]piridin-5(6H)-il-7-(tosil)7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (340,00 mg, producto bruto) que era un sólido beige y se usó directamente en el siguiente paso sin purificación. El valor de C20H24N6O2S[M+H]+413 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 413.
Paso 5: se añadió carbonato de potasio (284,79 mg, 2,06 umol) a una solución de metanol (5,00 ml) y agua (1,00 ml) de N-hexahidro-1H-pirrolo[3,4-c]piridin-5(6H)-il-7-(tosil)7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (170,00 mg, 412,11 umol). La mezcla se calentó a 70 °C y se agitó durante 2 h. La TLC mostró que las materias primas se habían consumido. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida para obtener N-hexahidro-1H-pirrolo[3,4-c]piridin-5(6H)-il-7-(tosil)7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (50,00 mg, producto bruto) que era un sólido beige y se usó directamente en el siguiente paso sin purificación. El valor de C13H1sN6[M+H]+259 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 259.
Paso 6: se añadieron HOBt (65,38 mg, 483,90 umol) y EDCI (92,76 mg, 483,90 umol) a una solución en DMF (5,00 ml) de N-hexahidro-1H-pirrolo[3,4-c]piridin-5(6H)-il-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina a 0 °C. Posteriormente, la mezcla se agitó durante 10 min a 0 °C y después se añadieron ácido 2-cianoacético (18,11 mg, 212,92 mmol) y trietilamina (117,52 mg, 1,16 mmol). La mezcla se agitó durante 10 h a 25 °C. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. La mezcla de reacción se vertió en agua con hielo (5 ml) y después se extrajo mediante el uso de diclorometano: metanol (20 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se concentraron a presión reducida para obtener los residuos. Los residuos se purificaron mediante una HPLC de tipo preparativa (método alcalino) para obtener WX55: 3-[5-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)-hexahidro-1H-pirrolo[3,4-c]piridin-2-il]3-oxopropanonitrilo (5,00 mg, el rendimiento fue del 7,52 %). 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) 8 =8,07 (d, J= 6,0 Hz, 1H), 7,10 (t,J = 3,0 Hz, 1H), 6,82 (br. s., 1H), 3,40-4,13 (m, 5H), 1,67-3,24 (m, 9H). El valor de Ci6HigNyO[M+H]+326 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 326.
Modalidad 51
Paso 1: se disolvió éster etil 1 -[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]piperidil-3-carboxílico (130,00 mg, 284,13 |jmol) en tetrahidrofurano (5 ml) y metanol (5 ml), y se añadió una solución (2,5 ml) de hidróxido de sodio (22,73 mg, 568,26 umol). Después la mezcla se calentó a 100 °C y se agitó durante 2 h. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a 25 °C y después se concentró a presión reducida a 50 °C. Los residuos se neutralizaron con HCl diluido (solución acuosa) y se concentraron a presión reducida para obtener ácido 1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)ilamino]piperidil-3-carboxílico (producto bruto) que era un sólido amarillo y se usó directamente en el siguiente paso. El valor de C13H-i7N5O2[M+H]+276, se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 276.
Paso 2: se disolvieron ácido 1-[metil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]piperidil-3-carboxílico (78,00 mg, 283,32 umol), HOBt (76,56 mg, 566,64 umol) y EDCI (108,62 mg, 566,64 umol) en D<m>F (3,5 ml), se agitó durante 35 min a 25 °C y después se añadieron 3,3-difluorociclobutanamina (81,35 mg, 566,63 umol) y trietilamina (114,68 mg, 1,13 mmol). La mezcla se agitó durante 12 h a 25 °C. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se diluyó con agua (5 ml) y se extrajo con diclorometano: metanol (5:1, 50 ml x 3). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua salina saturada (20 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron hasta sequedad a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante el uso de una HPLC preparativa (método alcalino) para obtener WX56: N-(3,3-difluoro-ciclobutil)-1-[(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]piperidil)-3-formamida (50,00 mg, el rendimiento fue del 48,43 %). El valor de C-i/H22F2N6O[M+H]+365 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 365. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8 = 8,12 (s, 1H), 7,07 (s, 2H), 4,16 - 4,06 (m, 1H), 3,22 (s, 3H), 3,05 -2,82 (m, 6H), 2,61 -2 , 44 (m, 2H), 1,92 (br. s., 2H), 1,56 -1,41 (m, 1H). El valor de C-,7H22F2N6O[M+H]+365 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 365.
Modalidad 52
Paso 1: se disolvió 1 -[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amina]piperidil-3-carboxilato (800,00 mg, 1,75 mmol) en diclorometano seco (20,00 ml), y se añadió gota a gota una solución en tolueno de DIBAL-H (1 M, 1,93 ml) a -78 °C, y la mezcla se agitó durante 30 min a -78 °C. Cuando la TLC mostró que las materias primas se habían consumido, se añadió una solución saturada de cloruro de amonio (2,0 ml) para inactivar, después las sustancias gelatinosas se filtraron y se eliminaron con diatomita y la mezcla se lavó con diclorometano. Después de separar las fases orgánicas, la fase acuosa se extrajo mediante el uso de diclorometano (50 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua salina saturada, se secaron con sulfato de sodio y se concentraron para obtener un sólido, los residuos se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (gel de sílice de malla 100-200, éter de petróleo: acetato de etilo = de 4:1 a 2:1), para obtener 1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]piperidil-3-formaldehído (530,00 mg, el rendimiento fue del 69,58 %) que era un sólido amarillo claro. El valor de C2üH23N5O3S[M+H]+414 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 414.
Paso 2: se añadió 3,3-dibromo-1,1,1-trifluoro-propan-2-ona (215,36 mg, 798,08 umol) a una solución metanólica de 1-[metil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]piperidil-3-formaldehído (300,00 mg, 725,53 umol); la mezcla se agitó durante 24 h a 25 °C, se añadió agua (20 ml) para dilución y se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua salina saturada (20 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron hasta sequedad a presión reducida. Los residuos se purificaron por una TLC (éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) para obtener N-metil-7-p(tosil)-N-[3-[5-tnfluorometil-1H-imidazol-2-il]-1-piperidinil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (230,00 mg, el rendimiento fue del 58,58 %). El valor de C23H24F3NyO2S[M+H]+520 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 520.
Paso 3: se disolvió W-metil-7-p(tosil)-W-[3-[5-trifluorometil-1H-imidazol-2-il]-1-piperidinil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (115,00 mg, 221,35 umol) en tetrahidrofurano (5 ml) y metanol (5 ml) y se añadió una solución acuosa (2,5 ml) de hidróxido de sodio (88,54 mg, 2,21 mmol). Después la mezcla se calentó a 40 °C y se agitó durante 2 h. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se enfría por debajo de 30 °C y se concentra a presión reducida para eliminar el tetrahidrofurano. Los residuos se diluyeron con agua (10 ml) y se extrajeron con diclorometano/metanol (10:1, 50 ml x 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua salina saturada (20 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron hasta sequedad a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante HPLC preparativa alcalina para obtener WX57: A/-met¡l-W-[3-[5-tr¡fluoromet¡l-1H-imidazol-2-il]-1-piperidinil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (40,00 mg, el rendimiento fue del 49,46 %). El valor de C16H1<s>F3N7[M+H]+366 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 366. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 8 = 8,13 (s, 1H), 7,48 (br s., 1H), 7,12 (d, J=15,6 Hz, 2H), 3,40 (d, J=11,5 Hz, 2 H), 3,26 (br s., 3H), 3,19 (br s., 1H), 3,14 -3,07 (m, 1H), 3,02 (br. s., 2H), 2,13 (d,J =12,5 Hz, 1H), 2,07 - 1,94 (m, 2H), 1,68 - 1,56 (m, 1H)). El valor de C16H1<s>F3N7[M+H]+366 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 366.
Modalidad 53
Paso 1: se disolvieron 1-[[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]piperidil-3-carboxilato de etilo (501,18 mg, 1,13 mmol) y bromociclopropano (1,00 g, 8,26 mmol) en DMF (10,00 ml) y se añadieron carbonato de potasio (780,89 mg, 5,65 mmol) y yoduro de potasio (18,76 mg, 113,00 umol). La mezcla se agitó durante 48 h a 50 °C. La LC-MS mostró que quedaba el 9 % de las materias primas y se detectó un 6 % de productos objetivo. Se añadió otra porción de bromociclopropano (5,00 g, 41,33 mmol), y la mezcla se calentó a 100 °C y se agitó durante 2 h. La LC-Ms mostró que quedaba el 12 % de las materias primas y se detectó un 40 % de productos objetivo. Se añadió agua (10 ml) a la solución de reacción para inactivar a 25 °C y se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (100 ml x 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (20 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante el uso de una TLC preparativa (dióxido de silicio, éter de petróleo: acetato de etilo = 3:1) para obtener 1-[ciclohexil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]piperidil-3-carboxilato de etilo (50,00 mg, rendimiento fue 6,86 %), que era un aceite amarillo claro. El valor de C24H2gN5O4S[M+H]+484 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 384.
Paso 2: se disolvió 1 -[ciclopropil-[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]piperidil-3-carboxilato de etilo (50,00 mg, 103,40 |jmol) en tetrahidrofurano (5 ml) y metanol (5 ml), y se añadió una solución (2,5 ml) de hidróxido de sodio (8,27 mg, 206,80 umol). Después la mezcla se calentó a 100 °C y se agitó durante 1 h. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se concentró a presión reducida. Los residuos se neutralizaron con HCl diluido (2 M, 20 gotas) para obtener ácido 1-[ciclopropil-[7H-pirrolo[2,3-d]pinmidin-4-il]amino]pipendil-3-carboxílico (80,00 mg, producto bruto) que se usó directamente en el siguiente paso sin purificación adicional. El valor de C15H1gN5O2[M+H]+302 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 302.
Paso 3: se disolvieron ácido 1-[ciclopropil-[7H-pirrolo[2,3-d]pmmidin-4-il]amino]pipendil-3-carboxílico (50,00 mg, 165,93 umol), HOBt (44, 84 mg, 331,86 umol) y EDCI (63,62 mg, 331,86 umol) en DM<f>(4 ml), se agitaron durante 30 min a 25 °C y después se añadieron 2,2,2-trifluoroetilamina (24,65 mg, 248,89 umol) y trietilamina (50,37 mg, 331,86 umol). 497,79 umol) secuencialmente. La mezcla se agitó durante 16 ha 25 °C. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. Se añadió agua (10 ml) a la mezcla para inactivar y se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua salina saturada (20 ml x 2), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron, se concentraron y se secaron a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante una HPLC preparativa alcalina para obtener WX58: 1-[ciclopropil(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino]-N-(2,2,2-trifluoroetil)piperidil-3-formamida (20,00 mg, el rendimiento fue del 31,52 %). El valor de C-i7H2-iF3N6O[M+H]+383 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 383.
Paso 1: se añadió una solución de ácido clorhídrico/dioxano (4 M, 2,30 ml) a una solución en diclorometano (10 ml) de éster etílico del ácido 3-t-butiloxicarboril-3-azaespiro[5,5]undecano-9-carboxílico (300,00 mg, 921,83 umol). La mezcla se agitó durante 0,5 h a 25 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La solución de reacción se concentró a presión reducida para obtener éster etílico del ácido 3-azaespiro[5,5]undecano-9-carboxílico (300,00 mg, producto bruto) que era un sólido amarillo claro y se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional. El valor de C-i3H23NO2[M+H]+226 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 226.
Paso 2: se disolvió éster etílico del ácido 3-azaespiro[5,5]undecano-9-carboxílico (300,00 mg, 1,15 mmol) en ácido acético (10,00 ml) y agua (5,00 ml) y se añadió gota a gota una solución acuosa (5,00 ml) de nitrito de sodio (158,14 mg, 2,29 mmol) a la solución anterior a 0 °C. La mezcla se agitó durante 2 h a 25 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. Se añadió agua (5 ml) a la mezcla para inactivar. Se extrajo una fase acuosa mediante el uso de acetato de etilo (50 ml x 2) y las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua salina saturada (20 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Los residuos se disolvieron en agua (10 ml) y se alcalinizaron mediante el uso de hidrogenocarbonato de sodio sólido a pH = 9, y después se extrajeron mediante el uso de acetato de etilo (50 ml x 2); las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua salina saturada (20 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener formiato de 3-nitroso-3-azaespiro[5,5]undecano-9-etilo (200,00 mg), producto crudo) que era un aceite amarillo pálido. El valor de C-i3H22N2O3[M+H]+225 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 225.
Paso 3: se disolvió formiato de 3-nitroso-3- azaespiro[5,5]undecano-9-etilo (200,00 mg, 786,41 en metanol (5,00 ml) y se enfrió a -10 °C, se añadió zinc (257,12 mg, 3,93 mmol) a la solución bajo protección con nitrógeno, y se añadió gota a gota ácido acético (472,24 mg, 7,86 mmol) a -10-0 ° C. La mezcla se agitó durante 30 min a 0 °C, y después se agitó durante 1,5 h a 25 °C. La TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla se filtró y se lavó con metanol (30 ml). El filtrado se concentró a presión reducida y a una temperatura inferior a 70 °C. Los residuos se disolvieron en diclorometano: metanol. (10:1, 20 ml) y se alcalinizó con hidrogenocarbonato de sodio sólido a pH = 8 - 9. La mezcla se filtró con diatomita y se lavó con diclorometano: metanol (10:1, 50 ml). El filtrado se concentró a presión reducida para obtener formiato de 3-amino-3-azaespiro[5,5]undecano-9-etilo (200,00 mg, producto bruto) que era una materia oleosa amarilla y se usó directamente en el siguiente paso. El valor de C-i3H24N2O2[M+H]+241 se calculó mediante el uso de MS<e>S<i>y fue 241.
Paso 4: se disolvió formiato de 3-amino-3-azaespiro[5,5]undecano-9-etilo (200,00 mg, 832,15 umol) en dioxano (10,00 ml) y se añadieron trietilamina (421,03 mg, 4,16 mmol) y 4-cloro-7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidina (256,10 mg, 832,15 |jmol); después la mezcla anterior se agitó durante 16 h bajo protección con nitrógeno a 110 °C. La LC-MS mostró que quedaba el 60 % de la 4-cloro-7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidina y ya no se convirtió. Se añadió agua (10,00 ml) a la mezcla para inactivar a 25 °C y se extrajo mediante el uso de acetato de etilo (50 ml x 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua salina saturada (20 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Los residuos se purificaron mediante el uso de una TLC preparativa (gel de sílice, éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) para obtener formiato de 3-[[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]-3-azaespiro[5,5]undecano-9-etilo (35,00 mg, rendimiento fue del 6,58 %) que era un sólido amarillo claro. El valor de C26HaaN5O4S[M+H]+512 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 512.
Paso 5: se añadió una solución acuosa (1 ml) de hidróxido de sodio (5,47 mg, 136,82 umol) en una solución mixta de tetrahidrofurano (2,00 ml) y metanol (2,00 ml) de formiato de 3-[[7-(tosil)pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]-3-azaespiro[5,5]undecano-9-etilo (35,00 mg, 68,41 umol). La mezcla se agitó durante 1 h a 100 °C. La LC-M<s>mostró que la reacción se había completado. La mezcla se concentró a presión reducida. Los residuos se neutralizaron con ácido clorhídrico diluido (2 M, 20 gotas) y se concentraron a presión reducida para obtener ácido 3-((7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]-3-azaespiro[5,5] undecano-9-fórmico (30,00 mg, producto bruto) que era un sólido amarillo claro y se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional. Se calculó C-i7H23N5O2[M+H]+330 mediante el uso de MS ESI y fue 330.
Paso 6: se disolvieron ácido 3-((7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]amino]-3-azaespiro[5,5]undecano-9-fórmico (30,00 mg, 91,07 umol), HOBt (36,92 mg, 273,22 umol) y e Dc I (52,38 mg, 273,22 umol) en DMF (2,00 ml); después de agitar la mezcla durante 30 min a 20 °C, se añadieron 2,2,2-trifluoroetilamina (18,04 mg, 182,15 umol) y trietilamina (36,86 mg, 364,30 umol); y la mezcla resultante se agitó continuamente durante 16 h a 20 °C. La LC-MS mostró que la reacción se había completado. La mezcla se diluyó con agua (5 ml) y se extrajo con una solución mixta de diclorometano y metanol (10:1, 30 ml x 2), y las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución salina saturada (10 ml), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. se purificaron mediante una HPLC de tipo alcalina para obtener WX59: 3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)-N-(2,2,2-trifluoroetil)-3-azaespiro[5.5]undecano-9-formamida (10,00 mg, el rendimiento fue del 26,75 %). El valor de C-igH25F3N6O[M+H]+411 se calculó mediante el uso de MS ESI y fue 411. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 6 = 8,06 (s, 1 H), 7,09 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 6,90(br. s., 1H), 3,90(q, J=9,5Hz, 2H), 2,90(br. s., 4H), 2,33-2,18(m, 2H), 1,85-1,04(m, 12H).
Ensayo de actividad in vitro de las quinasas Jak1, Jak 2 y Jak 3.
Material de prueba
Todas las proteasas JAK1, JAK2 y JAK3 humanizadas recombinantes se adquirieron de Life Technology. El péptido LANCE Ultra ULightTM-JAK-1(Tyr1023) y antifosfotirosina LANCE Eu-W1024 (PT66) se adquirieron ambos de PerkinElmer. Se usó Envision (PerkinElmer) para leer una placa.
Método de prueba
Se prepararon tres diluciones de un compuesto de prueba y se obtuvieron 11 concentraciones finales: de 10 uM a 0,17 nM. Cada concentración tenía dos pocillos repetidos. El contenido de DMSO en una reacción de detección fue del 1 %.
Reacción de la enzima JAK1:
Proteína quinasa JAK1 2 nM, péptido LANCE Ultra ULightTM-JAK-1 (Tyr1023) 50 nM, ATP 38 uM, HEPES 50 mM (pH 7,5), MgC12 10 mM, EGTA 1 mM, DTT 2 mM y BRIJ-35 al 0,01 % La placa de detección fue una placa White Proxiplate 384-Plus (PerkinElmer), la reacción se llevó a cabo durante 90 min a temperatura ambiente y el sistema de reacción fue de 10 ul.
Reacción de la enzima JAK2:
Proteína quinasa JAK2 0,02 nM, péptido LANCE Ultra ULightTM-JAK-1 (Tyr1023) 50 nM, ATP 12 uM, HEPES 50 mM (pH7,5), MgC12 10 mM, EGTA 1 mM, DTT 2 mM y BRIJ-35 al 0,01 %. La placa de detección fue una placa White Proxiplate 384-Plus (PerkinElmer), la reacción se realizó durante 60 min a temperatura ambiente y el sistema de reacción fue de 10 ul.
Reacción de la enzima JAK3:
Proteína quinasa 0,05 nM, péptido LANCE Ultra ULightTM-JAK-1 (Tyr1023) 50 nM, ATP 4 uM, HEPES 50 mM (pH 7,5), MgC12 10 mM, EGTA 1 mM, DTT 2 mM y BRIJ-35 al 0,01 %. La placa de detección fue una placa White Proxiplate 384-Plus (PerkinElmer), la reacción se realizó durante 90 min a temperatura ambiente y el sistema de reacción fue de 10 ul.
Detección de la reacción:
Se añadieron 10 ul de reactivo de detección a la placa de reacción, en donde la concentración final de antifosfotirosina LANCE Eu-W1024 (PT66) fue de 2 nM, la concentración final de EDTA fue de 10 mM, la incubación se realizó durante 60 min a temperatura ambiente y la placa se leyó en el Envision.
Análisis de los datos
La lectura se convirtió a una relación de supresión según la ecuación: (%) = (Relación mínima)/(Máx-Mín)*100 %. Los datos de IC50 se detectaron mediante el ajuste de 4 curvas paramétricas (modelo 205 en XLFIT5, iDBS), consulte la Tabla 1.
Prueba farmacocinética (PK).
Se disolvió un compuesto de prueba y se obtuvo una solución transparente que se administró a ratones machos DBA/1 mediante inyección en la vena de la cola y alimentación forzada (en ayunas durante la noche, de 7~8 semanas de edad), respectivamente. Después de la administración del compuesto probado, se recogió sangre de la vena mandibular del grupo de inyección intravenosa a las 0,083, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8 y 24 h, respectivamente, y del grupo de alimentación forzada a las 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8 y 24 h y la sangre se centrifugó para obtener plasma. Se adoptó el método LC-MS/MS para determinar la concentración plasmática del fármaco y se usó el software farmacocinético WinNonlinTM versión 6.3 para calcular los parámetros farmacocinéticos correlacionados mediante el uso de un método trapezoidal logarítmico lineal sin compartimentos.
Tabla 2-1 Resultado de la prueba PK de WX07 en ratones
Tabla 2-2 Resultado de la prueba PK de WX07 en ratas
Tabla 3-1 Resultado de la prueba PK de WX05 en ratones
Tabla 3-2 Resultado de la prueba PK de WX05 en ratas
Tabla 4-1 Resultado de la prueba PK de WX08 en ratones
Tabla 4-2 Resultado de la prueba PK de WX08 en ratas
Los compuestos WX07, WX05 y WX08 de la presente invención tienen una excelente biodisponibilidad oral y una mayor cantidad expuesta tanto en ratones como en ratas, que son útiles para generar eficacia in vivo.
Prueba farmacodinámica de un modelo de artritis inducida por adyuvante en ratas
El efecto terapéutico del compuesto de la presente invención para el tratamiento de la artritis se verifica mediante el modelo de artritis inducida por adyuvante en ratas.
Después de narcotizar con isoflurano una rata Lewis hembra, de 160 a 180 g, se realizó una inyección subcutánea de 0,1 ml de líquido de suspensión de Mycobacterium tuberculosis en la pata trasera izquierda. Las ratas se clasificaron 13 días después del moldeo y se administró el compuesto probado correspondiente, por ejemplo, se administraron a las ratas 1 mpk, 3 mpk y 10 mpk del compuesto probado WX07 y el compuesto de referencia Tofacitinib, respectivamente. Tofacitinib y el compuesto de la presente invención WX07 se disolvieron en un disolvente mixto de DMSO/PEG400/H2O, que se administró por vía oral a ratas Lewis hembras (se probaron 10 animales en cada grupo de dosificación). Además, se administraron a ratas 1 mpk, 3 mpk y 10 mpk de los compuestos probados WX08 y el compuesto de referencia Filgotinib, respectivamente, Filgotinib y el compuesto WX08 de la presente invención se disolvieron en el disolvente mixto de DMSO/PEG400/H2O, que se administró por vía oral a la rata Lewis hembra (se probaron 10 animales en cada grupo de dosificación) y el peso de las ratas estuvo entre 160 y 170 g. Las ratas se medicaron durante dos semanas consecutivas, se observó el estado de las ratas, se registró el estado de hinchazón del volumen de las patas y se realizó la clasificación. La prueba demostró que el compuesto WX07 de la presente invención mostró una buena relación dosis-efecto y una actividad inhibidora sobre la artritis equivalente a Tofacitinib, mientras que WX08 mostró una buena relación dosis-efecto y generó una actividad inhibidora sobre la artritis que fue más efectiva que Filgotinib.
Tabla 5-1
Prueba farmacodinámica de un modelo de artritis inducida por colágeno en ratones:
El efecto del compuesto de la presente invención en el tratamiento de la artritis se verificó mediante el modelo de artritis inducida por colágeno en ratones.
Se seleccionaron ratones machos DBA/1, se realizó la inyección subcutánea de la emulsión de colágeno y adyuvante completo de Freund en la base de la cola el día 0 y el día 21, los ratones se clasificaron el día 29 aproximadamente, tofacitinib (15 mpk), filgotinib (15 mpk) y los compuestos de la presente invención WX04 (15 mpk, 30 mpk), WX05 (15 mpk), W<x>07 (15 mpk) y WX (15 mpk) se disolvieron en DMSO/PEG400/H2O[5/20/75 (v/v/v)], que se administraron por vía oral a ratones CIA (para Shanghai Slac Laboratory Animal Co., Ltd., se probaron 10 animales en cada grupo de dosificación), los ratones se medicaron durante dos semanas consecutivas, se registraron los pesos de los ratones durante este período, se realizó la puntuación clínica de la inflamación de las articulaciones de los ratones y el resultado mostró que los compuestos de la presente invención WX04, WX05, WX07 y WX08 tenían un efecto terapéutico obvio sobre la artritis reumatoide de ratones.
Tabla 5-2

Claims (3)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
    ( I ) en donde, el anillo A se selecciona de
    Ri-L- se selecciona de:
    R2 se selecciona de H, metilo, etilo o ciclopropilo; opcionalmente, la unidad estructural
    se puede reemplazar por
  2. 2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde, el compuesto se selecciona de:
  3. 3. El compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, para uso en el tratamiento de la artritis.
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