ES2954580T3 - Medicamento conjugado que incluye derivados de quinolina - Google Patents

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Abdallah Hamze
Olivier Provot
Ilhem Khelifi
Vincent Blanchard
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Universite Paris Saclay
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Universite Paris Saclay
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Abstract

La presente invención se refiere a compuestos de fórmula (I): en la que R1 representa un -NH2, -NHCORa, -NHCOORb, -alquenilen(C2-C6)-CO-NH-OH, -alquinilen(C2-C6)-CO- grupo NH-OH o -OH; R2 representa un grupo -OCH3, -OCH2CH3, -SCH3, -SCH2CH3 o -OCHF2; R3 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl u -ORc; R4 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORd; Ra representa un grupo -alquilo (C1-C5) o -CF3; Rb representa un grupo -alquilo (C1-C5) o -CF3; Rc representa un grupo -alquilo (C1-C5) o -CF3; y Rd representa un grupo -alquilo (C1-C5) o -CF3; en estado de base o de ácido o de sales ácidas o de sales básicas o en forma de hidrato o de solvato. La invención también se refiere a conjugados de fármacos que comprenden dichos compuestos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Medicamento conjugado que incluye derivados de quinolina
[0001] La presente invención se refiere a nuevos compuestos a base de combretastatina derivados de productos naturales útiles como payloads (también denominados cargas o toxinas), en particular en medicamentos conjugados. La presente invención se refiere además a nuevas composiciones de combretaquinolinas, incluyendo útiles como payloads, enlaces payloads-linker, y medicamentos conjugados, y sobre los procedimientos que utilizan estos payloads, enlaces payloads-linker, y medicamentos conjugados, para tratar patologías tales como por ejemplo un cáncer, una enfermedad inflamatoria o infecciosa.
ESTADO DE LA TÉCNICA
[0002] Para muchos tipos de cáncer, la quimioterapia convencional sigue siendo la única forma efectiva de tratamiento. La quimioterapia funciona sobre la base de un efecto citotóxico: una toxina mata las células cancerosas, deteniendo así el crecimiento tumoral. Los agentes quimioterapéuticos dañan y destruyen principalmente las células con un alto nivel de actividad de división celular. Sin embargo, estos tratamientos deben mejorarse para atacar y destruir las células malignas al tiempo que se minimiza la toxicidad colateral no deseada para los tejidos normales. De hecho, incluso hoy en día, como estos medicamentos también dañan las células sanas, los pacientes sufren efectos secundarios graves. Muchos medicamentos altamente citotóxicos tienen una utilidad clínica limitada porque son igualmente agresivos contra las células tumorales normales y malignas. Los tejidos sanos pueden verse muy afectados por los citotóxicos. Dado que estos medicamentos no distinguen específicamente entre las células tumorales y las normales, lo que resulta en efectos secundarios, los medicamentos a menudo se dosifican a niveles mínimos, lo que disminuye la eficacia. Por esta razón, es importante encontrar una manera de atacar específicamente a los tumores celulares.
[0003] La mejora de la administración de medicamentos y otros agentes a las células, tejidos y tumores diana con el fin de obtener la máxima eficacia y la toxicidad mínima ha sido objeto de una investigación considerable durante muchos años. Las terapias modernas contra el cáncer ahora se dirigen al cáncer con mayor precisión utilizando moléculas grandes como los anticuerpos. Los anticuerpos son una parte importante y natural del sistema inmunológico, moléculas grandes que pueden unirse específicamente a la superficie celular de un "intruso" (por ejemplo, un virus) y así eliminarlo. Sin embargo, a menudo no curativos, los anticuerpos deben combinarse con agentes quimioterapéuticos.
[0004] Aunque se han hecho muchos intentos para desarrollar procedimientos eficaces de importación de moléculas biológicamente activas en las células, tanto in vivo como in vitro, ninguno ha demostrado ser completamente satisfactorio. A menudo es difícil o ineficaz optimizar la asociación del fármaco con su objetivo intracelular al tiempo que se minimiza la redistribución intercelular del medicamento, por ejemplo, a las células vecinas.
[0005] Los conceptos de conjugados de anticuerpos y drogas (“Antibody Drug Conjugates”, conocidos como ADC) buscan superar estas limitaciones. Se componen de 3 elementos clave: un anticuerpo (diseñado para dirigirse selectivamente al tumor de interés), una carga tóxica útil (un compuesto citotóxico que mata el tumor, llamado "payload" en el oficio) y el ligador (utilizado para conjugar la carga útil tóxica al anticuerpo). La principal ventaja de estas construcciones radica en la mejora significativa de la ventana terapéutica: aumento de la vida media y la especificidad de la carga tóxica útil, reduciendo los efectos y la toxicidad fuera del objetivo. El uso de ADC ha sido objeto de estudios exhaustivos en las últimas tres décadas (Moolten et al. (1972), J Natl Cancer Inst. 49(4):1057-62, Chari et al, (2014) Angew. Química. Int. Ed. 53:3796-3827; Jackson, (2016) Org. Res. proceso Dev. 20l6, 20:852-866). Varios ya están aprobados y comercializados (Kadcyla de Roche y Adcetris de Seattle Genetics).
[0006] Los payloads (o toxinas) utilizados en ADC incluyen toxinas bacterianas como la toxina diftérica (Levy et al. (1975) Cancer Res. 35(5):1182-6), toxinas vegetales como la ricina, toxinas de pequeñas moléculas como los maytansinoides (EP 1391213; Liu et al., Proc. 1996). Acad. nat. Estados Unidos de América 93:8618-8623), caliceamicina (Lode et al. 1998), Cancer Res. 58:2925-2928, Orenga y col. 1993 (Cancer Res. 53, 3336-3342), auristatins (Sanderson et al. (2005) Clin. Cáncer Res. 11:843-52), SN-38 o análogos de irinotecán (Govidan et al (2013) Mol. Cáncer. Ther. 12:968-78, US 2014/0227180A1, Goldenberg et al (2007), Clin. Cáncer Res. 13, 5556s-5563s), pirrolobenzodiazepinas (US 2011/0256157A1, Kung Sutherland et al Blood (2013) 122: 1455-1463, Chari et al., (2009) Mol. Cáncer Ther. 8, B126.) o de criptoficinas (WO 2011/001052A1, Verma et al (2015) Bioorg. Méd. Químico. Lett.
25:864-8, US 2012/0225089). Actualmente, más del 60 % de todos los ADC actualmente en evaluación clínica contienen toxinas relacionadas con la monometil Auristatina E y F (inhibidor de la tubulina MMAE, MMAF). El MMAE podría ser considerado por el experto en la materia como la carga útil estándar (payload standard) de referencia para una comparación.
[0007] La conjugación de medicamentos con anticuerpos, ya sea directamente o a través de agentes de unión ("linker"), implica la consideración de varios factores, incluida la identidad y la ubicación del grupo químico de conjugación del medicamento, el mecanismo de liberación del medicamento, los elementos estructurales que aseguran la liberación del medicamento y la modificación estructural del medicamento en forma libre. Además, si el medicamento debe liberarse después de la intemalización de los anticuerpos, el mecanismo de liberación del medicamento debe ser compatible con el tráfico intracelular del conjugado. Por lo tanto, aunque se han probado varias clases de medicamentos como cargas útiles, solo unas pocas clases de medicamentos han demostrado ser eficaces como conjugados de anticuerpos, debido a su limitada eficacia, selectividad y/o estabilidad (Tolcher et al. (2000) J. Clin. Oncol. 18:4000, Laguzza et al (1989) J. Med. Química. 32:548-555, Uadia P, (1984). Cáncer Res. 44:4263-4266). Se demuestra que los compuestos, para ser elegibles como conjugados, deben presentar un nivel de citotoxicidad inferior a la CI50 nanomolar. (Casi et Neri, (2012) J. Control Release. 20;161(2):422-8 ; Wu et Senter (2005) Nat. Biotecnología. 23(9):1137-46). Las cargas útiles ideales deben escapar del mecanismo de resistencia múltiple (MDR). En el caso del MMAE, que está sujeto al MDR, algunos tumores pueden desarrollar un mecanismo de resistencia (Chen et al., 2015). Las pocas cargas útiles accesibles no son eficaces contra el amplio espectro de indicaciones del cáncer. Debido a estas limitaciones, hay una solicitud clínica de nuevas cargas útiles con un modo de acción diferenciado, selectividad, un perfil de toxicidad mejorado y no sujeto a MDR. Por estas razones, las combretastatinas se han considerado una potencial carga tóxica útil.
[0008] De hecho, la Combretastatina fue aislada del árbol africano nativo Combretum caffrum y similares en la década de 1980, y su actividad inhibitoria de polimerización de la tubulina fue verificada (Pettit GR (1987) [0008].J Nat Prod 50:119-131). La combretastatina A-4 (o CA-4) y sus análogos son citotóxicos y alteran selectivamente el sistema vascular tumoral o previenen su neoformación (Dark et al. (1997) Cancer Res 57, 1829- 1834, Grosios K, et al (1999) Br J Cancer 81:1318-1327). Este estilbeno CA-4 estructuralmente muy simple tiene varios inconvenientes, como la baja solubilidad en agua y la inestabilidad química del doble enlace configurado en Z, que se isomeriza durante el almacenamiento, la administración y el metabolismo. Otro inconveniente del CA-4 es su citotoxicidad insuficiente. Estos problemas se superaron mediante el desarrollo de nuevos derivados que utilizan heterociclos que contienen nitrógeno como las quinazolinas (ver Figura 1 B) y las quinoleínas (ver Figura 1 C & D) (Soussi MA et al (2015) Chem. Med. Chem.10(8):1392-402; I. Khelifi, et al., (2017), European Journal of Medicinal Chemistry 127:1025-1034). Con estos derivados, se suprimió el grupo 3,4,5-trimetoxifenilo, considerado responsable de los efectos de neurotoxicidad o cardiotoxicidad. Pero ninguno de estos compuestos pudo ser utilizado como carga útil.
[0009] Las combretastatinas han sido citadas como potencialmente utilizadas como cargas útiles en algunas patentes, pero sin ejemplarización ni datos de apoyo: (EP 1912 677 B1 "PSMA antibody-drug conjugates"); WO 2014/164534 ("Site-specific antibody-drug conjugation through glycoengineering"); US 8,535,678 B2 ("Anti-CD70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders"). Por otra parte, las combretastastinas han sido evaluadas como cargas útiles potenciales en el marco de algunos estudios, pero sin ninguna aplicación clínica hasta ahora debido a su actividad limitada, problemas de estabilidad y perfiles de metabolización desfavorables reconocidos por los propios autores (Toki et al. (2002) J. Org. Química. 67, 1866-1872, Bolu et al (2016) Mol. Pharmaceutics, 13, 1482-1490, R. Nani et al (2015) Angew. Chim. Int. Ed. Engl. 9; 54(46): 13635­ 13638). El único ejemplo de uso de derivados de la combretastatina como cargas útiles proviene de la solicitud de patente que describe las nuevas isoNH2CombretaQuinolines (PCT/EP2018/058168). Sin embargo, el ADC Trastuzumab-VC-PAB-ICQO-1 resultante dio una CI50 de 27 mg/mL contra la línea celular SκΒR3. Tal nivel de citotoxicidad es 3 logs más bajo que el ng/mL que se espera de un ADC y no es suficiente para el uso terapéutico. Dicho de otro modo, aunque estos derivados han mostrado propiedades prometedoras como derivados autónomos, parecen perder su citotoxicidad cuando se conjugan. Además, el proceso de conjugación de estos derivados ha resultado difícil y podría ser objeto de mejoras innovadoras.
[0010] En conclusión, la mayoría de los intentos de conjugación han fracasado hasta ahora, incluso con los nuevos derivados de la isocombretaquinolina.
[0011] La invención tiene por objeto resolver uno o varios de los problemas técnicos mencionados anteriormente.
[0012] En particular, la presente invención tiene por objeto proporcionar un compuesto útil como payload (carga tóxica o toxina) que presenta una toxicidad, una estabilidad y un perfil de metabolización, elegible como payload, en particular utilizable en un medicamento conjugado.
[0013] La invención tiene por objeto proporcionar un nuevo payload que presente un modo de acción diferenciado, una selectividad y un perfil de toxicidad mejorado, y no sometido al fenómeno de multi-resistencia a los medicamentos.
[0014] Después de una larga investigación y de manera sorprendente, los actuales inventores han descubierto nuevos compuestos que poseen una estructura que permite su utilización en un conjugado anticuerpo-medicamento.
[0015] Así, según un primer aspecto, la presente invención se refiere a compuestos de fórmula (I):
Figure imgf000004_0001
en la que:
- Ri representa un grupo -NH2, -NHCORa, -NHCOORb, -(C2-C6)alquenileno-CO-NH-OH, -(C2-C6)alquenileno-CO-NH-OH o -OH;
- R2 representa un grupo -OCH3, -OCH2CH3, -SCH3, -SCH2CH3 o -OCHF2;
- R3 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORc;
- R4 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Clo -ORd;
- Ra représente un groupe -(C1-C5)alkyle ou -CF3 ;
- Rb représente un groupe -(C1-C5)alkyle ou -CF3 ;
- Rc représente un groupe -(C1-C5)alkyle ou -CF3 ; et
- Rd représente un groupe -(C1-C5)alkyle ou -CF3 ;
en estado de base o de ácido o de sales de ácidos o de bases o en forma de hidrato o de solvato.
[0016] Los inventores descubrieron que estos compuestos muestran una eficacia mejorada contra el cáncer, especialmente contra las células tumorales resistentes. Además, tienen una alta estabilidad química y no están sujetos a isomerización, por lo que no tienen tendencia a la inactivación.
[0017] Según un segundo aspecto, la presente invención se refiere a compuestos de fórmula (II):
Figure imgf000004_0002
en la que:
- Y1 representa -O-, -NH-, -NHCO-, -NHCORa-, -NHCOO-, -NHCOORb-, -(C2-Ca)alquenileno-CO-NH-O- o -(C2-C6)al- cinileno-CO-NH-O-;
- R2 representa un grupo -OCH3, -OCH2CH3, -SCH3, -SCH2CH3 o -OCHF2;
- R3 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORc; y preferentemente un átomo de hidrógeno;
- R4 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORd; y preferentemente un átomo de hidrógeno;
- Ra representa un grupo -(C1-C5)alquileno- o -CF2-;
- Rb representa un grupo -(C1-C5)alquileno- o -CF2-;
- Rc representa un grupo -(C1-C5)alquileno o -CF3;
- Rd representa un grupo -(C1-C5)alquileno o -CF3;
- L representa un agente de enlace;
- RM* se selecciona entre RM y RM', en el que RM es una función reactiva capaz de formar un enlace covalente con una fracción de un agente de objetivo, en particular con una fracción de un anticuerpo o uno de sus fragmentos funcionales, y en el que RM' es una fracción de RM que lleva al menos un grupo protector;
en estado de base o de sales de base o en forma de hidrato o de solvato.
[0018] Según un tercer aspecto, la presente invención se refiere a conjugados anticuerpo-medicamento de fórmula (III):
Figure imgf000005_0001
en la que:
- Yi representa -O-, -NH-, -NHCO-, -NHCORa-, -NHCOO-, -NHCOORb-, -(C2-Ca)alquenileno-CO-NH-O- ou -(C2-C6)al- cinileno-CO-NH-O-;
- R2 representa un grupo -OCH3, -OCH2CH3, -SCH3, -SCH2CH3 o -OCHF2;
- R3 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORc; y preferentemente un átomo de hidrógeno;
- R4 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORd; y preferentemente un átomo de hidrógeno;
- Ra representa un grupo -(C1-C5)alquileno- o -CF2-;
- Rb representa un grupo -(C1-C5)alquileno- o -CF2-;
- Rc representa un grupo -(C1-C5)alquileno o -CF3;
- Rd representa un grupo -(C1-C5)alquileno o -CF3;
- L' representa un agente de enlace;
- AC representa una fracción de un agente de objetivo, en particular una fracción de un anticuerpo o uno de sus fragmentos funcionales; y
en la que el DAR (ratio medicamento/agente de objetivo) varía entre 1 y 8, y preferentemente entre 2 y 4.
[0019] Como se ilustra en la parte experimental, y de forma inesperada, los inventores han demostrado que tales compuestos son muy eficaces, en comparación con los payloads conocidos, y poseen muy buenas actividades inhibitorias contra numerosas células cancerosas.
[0020] En particular, se liberan compuestos de fórmula (I) a partir de compuestos de fórmula (III) in vivo, preferentemente en el lugar de destino.
[0021] Otras características, aspectos y ventajas de la invención se harán evidentes tras la lectura de la siguiente descripción.
DEFINICIONES
[0022] En el marco de la presente invención, se utilizan las siguientes definiciones:
- «Ct-Cz» designa una cadena carbonada que puede tener de t a z átomos de carbono donde t y z pueden tomar por ejemplo los valores de 1 a 25; por ejemplo C1-C3 es una cadena carbonada que puede tener de 1 a 3 átomos de carbono.
- Un alquilo designa un grupo alifático saturado monovalente lineal o ramificado, que puede comprender por ejemplo de 1 a 25 átomos de carbono, y preferentemente de 1 a 5 átomos de carbono. Algunos ejemplos son los grupos metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo y tertbutilo.
- Un alquileno designa un grupo alquilo divalente saturado lineal o ramificado que puede comprender, por ejemplo, de 1 a 25 átomos de carbono.
- Un alquenileno designa un grupo hidrocarbonado alifático que comprende un doble enlace carbono-carbono, lineal o ramificado, pudiendo ser los demás enlaces simples u otros enlaces dobles, y pudiendo comprender por ejemplo de 1 a 25 átomos de carbono, y preferentemente de 2 a 6 átomos de carbono. A título de ejemplos, se puede citar los grupos etenileno (-CH=c H-), 1-propenileno, 2-propenileno, 1-butenileno, 2-butenileno, 3-butenileno, etc.
- Un alquinileno designa un grupo hidrocarbonado alifático que comprende un triple enlace carbono-carbono, lineal o ramificado, pudiendo ser los demás enlaces simples, enlaces dobles u otros enlaces triples, y pudiendo por ejemplo comprender de 1 a 25 átomos de carbono, y preferentemente de 2 a 6 átomos de carbono. A título de ejemplos, se puede citar los grupos etinileno, 1 -propinileno, 2-propinileno, etc.
- Un grupo -CF2- designa un grupo alquilo divalente cuyos átomos de hidrógeno han sido sustituidos por dos átomos de flúor.
- Un cicloalquileno designa un ciclo no aromático bivalente, monocíclico o policíclico, que puede comprender de 3 a 12 átomos de carbono. A título de ejemplo, se puede citar los grupos ciclopropileno, ciclobutileno, ciclo-pentileno, ciclohexileno, cicloheptileno, etc.
- Un cicloalcenileno designa un ciclo no aromático bivalente, monocíclico o policíclico, que puede comprender de 3 a 12 átomos de carbono, y que comprende una o varias insaturaciones. A título de ejemplo, se puede citar el ciclopentenileno y el ciclohexenileno.
- Un heterocicloalquileno designa un ciclo no aromático bivalente, monocíclico o policíclico, que puede comprender de 3 a 12 átomos de carbono y al menos un heteroátomo elegido entre O, N o S.
- Un heterocicloalcenileno designa un ciclo no aromático bivalente, monocíclico o policíclico, que puede comprender de 3 a 12 átomos de carbono y al menos un heteroátomo elegido entre O, N o S, y que comprende una o varias insaturaciones.
- Un arileno designa un ciclo bivalente, total o parcialmente aromático, que puede comprender de 3 a 20 átomos de carbono, por ejemplo el fenileno.
- Un heteroarileno designa un ciclo bivalente, total o parcialmente aromático, que puede comprender de 3 a 20 átomos de carbono, y al menos un heteroátomo elegido entre O, N o S.
- Según la invención, el término "sustituido" designa el hecho de que uno o varios hidrógeno sean sustituidos por uno o varios grupos, por ejemplo, entre los grupos alquilo, alquenilo, alcinilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo, heteroaralquilo, acilo, aroyle, heteroaroyle, carboxilo, alkoxy, ariloxi, acyloxy, aroyloxy, heteroroyloxi, alkoxycarbonyle, halógeno, (tio)éster, ciano, fosforilo, amino, imino, (tio)amido, sulfhidrilo, alkylthio, aciltio, sulfonil, sulfato, sulfonato, sulfonilurea, sulfonamido, nitro, azido, haloalquilo, en particular, perfluorroalquilo (como trifluorometilo), haloalkoxy, alquil sulfanilo, alquilosulfinilo, alquil sulfonil, alkylsulfonylamino, arylsulfonoamino, fosfato, fosfonato, fosfinato, alkylcarboxy, alquilcarboxiamida, oxo, hidroxi, mercapto, amino (eventualmente mono- o di-sustituido, por ejemplo, por un alquilo, arilo, o heteroarilo), imino, carboxamida, carbamoylo (eventualmente mono- o di-sustituido, por ejemplo, por un alquilo, arilo, o heteroarilo), amidino, aminosulfonil, acylamino, aroylamino, (tio)ureido, (ariltio)ureido, alquilo (tio)ureido, cicloalquilo(tio)ureido, ariloxi, aralkoxi, o -O(CH2)n-OH, -O(CH2)n-NH2, -O(CH2)nCOOH, -(CH2)nCOOH, -C(O)O(CH2)nR, -(CH2)nN(H)C(O)OR, o -N(R)S(O)2R,, en los que n es un número entre 1 y 4 y R es elegido independientemente por un hidrógeno o un grupo seleccionado entre -alquilo, -alquenilo, -alquinilo, -cicloalquilo, -cicloalquenilo, -heterocicloalquilo, -heterocicloalquenilo, -arilo y -heteroarilo, siendo posible que el grupo o grupos estén sustituidos.
- Se entiende por "función reactiva" una función capaz de formar un enlace covalente con otro compuesto.
- Una fracción es una parte de un compuesto.
- Se entiende por "fragmento funcional" una parte de un compuesto que comprende una función reactiva, eventualmente protegida.
- Se entiende por "grupo protector", un grupo funcional introducido en la molécula a partir de una función química para enmascarar la totalidad o parte de su reactividad. Por ejemplo, puede tratarse de un imida, amida, carbamato, imina, enamina, derivado sulfonilado, derivado N-sulfenilado, N-alquilado o N-silililado, diol, derivado carbonilado, acetal, éter, éter ben-zílico, éter sililado, éster, ect.
- La expresión "farmacéuticamente aceptable" designa lo que es útil en la preparación de una composición farmacéutica, que es generalmente segura, no tóxica y ni biológicamente ni de otro modo indeseable y que es aceptable para un uso veterinario y/o farmacéutico humano.
- Se entiende por "sales de ácidos o de bases", los ácidos o bases salificados, por ejemplo, una sal de adición de ácido puede formarse con ácidos inorgánicos tales como el ácido clorhídrico, sulfúrico o fosfórico, o con ácidos orgánicos tales como el ácido acético o el ácido benzoico. Las sales de base se pueden formar con una base inorgánica como hidróxido de aluminio, hidróxido de calcio, hidróxido de potasio, carbonato de sodio e hidróxido de sodio, o una base orgánica como dietanolamina, etanolamina, N-metilglucamina, trietanolamina o trometamina. - Se entiende por "hidrato o solvato" las formas de asociaciones o de combinaciones con una o varias moléculas de agua o con un disolvente.
COMPUESTOS DE FÓRMULA (I)
[0023] Como se ha indicado anteriormente, la presente invención tiene por objeto compuestos de fórmula (I):
Figure imgf000007_0001
en la que:
- Ri representa un grupo -NH2, -NHCORa, -NHCOORb, -(C2-C6)alquenileno-CO-NH-OH, -(C2-C6)alquinileno-CO-NH-OH o -OH;
- R2 representa un grupo -OCH3, -OCH2CH3, -SCH3, -SCH2CH3 o -OCHF2;
- R3 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORc;
- R4 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORd;
- Ra représente un groupe -(C1-C5)alkyle ou -CF3 ;
- Rb représente un groupe -(C1-C5)alkyle ou -CF3 ;
- Rc représente un groupe -(C1-C5)alkyle ou -CF3 ; et
- Rd représente un groupe -(C1-C5)alkyle ou -CF3 ;
en estado de base o de ácido o de sales de ácidos o de bases o en forma de hidrato o de solvato.
[0024] Preferentemente, R3 representa un átomo de hidrógeno.
[0025] Preferentemente, R4 representa un átomo de hidrógeno.
[0026] Según un modo preferido, el compuesto de fórmula (I) es de fórmula (Ia):
Figure imgf000007_0002
en la que:
- R1 representa un grupo -NH2, -NHCORa, -NHCOORb, -(C2-C6)alquenileno-CO-NH-OH, -(C2-C6)alquinileno-CO-NH-OH o -OH;
- R2 representa un grupo -OCH3, -OCH2CH3, -SCH3, -SCH2CH3 o -OCHF2;
- Ra representa un grupo -(C1-C5)alquilo o -CF3; y
- Rb representa un grupo -(Ci-C5)alquilo o -CF3;
en estado de base o de ácido o de sales de ácidos o de bases o en forma de hidrato o de solvato.
[0027] Preferentemente, R2 representa un grupo -OCH3, -OCH2CH3, o -OCHF2, y preferentemente un grupo -OCH3.
[0028] Preferentemente, Ri representa un grupo -NH2, -NHCORa, -NHCOORb, o -OH, en particular Ri representa un grupo -NH2 o -OH, y preferentemente un grupo -NH2.
[0029] Según un modo aún más preferido, el compuesto se elige entre:
Figure imgf000008_0001
[0030] Según un modo preferido, el compuesto de fórmula (I) es de fórmula (Ib):
Figure imgf000008_0002
en la que:
- R5 representa un átomo de hidrógeno, un grupo -CORa, o -COORb;
- R2 representa un grupo -OCH3, -OCH2CH3, -SCH3, -SCH2CH3 o -OCHF2;
- R3 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl ou -ORc, y preferentemente un átomo de hidrógeno.
- R4 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORd, y preferentemente un átomo de hidrógeno.
- Ra représente un groupe -(C1-C5)alkyle ou -CF3 ;
- Rb représente un groupe -(C1-C5)alkyle ou -CF3 ;
- Rc représente un groupe -(C1-C5)alkyle ou -CF3 ; et
- Rd représente un groupe -(C1-C5)alkyle ou -CF3 ;
en estado de base o de ácido o de sales de ácidos o de bases o en forma de hidrato o de solvato.
[0031] Preferentemente, R1 representa un grupo -(C2-C6)alquenileno-CO-NH-OH o -(C2-C6) alquinileno-CO-NH-OH, y preferentemente R1 representa un grupo -CH=CH-CO-NH-OH, -CH=CH-CH2-CH2-CO-NH-OH o -C=C-CH2-CH2-CO- NH-OH.
[0032] Según un modo preferido, el compuesto de fórmula (I) es de fórmula (Ic):
Figure imgf000008_0003
en la que:
- W representa -CH=CH- o -C=C-;
- n es 0, 1, 2, 3 o 4, y preferiblemente n es 0 o 2;
- R2 representa un grupo -OCH3, -OCH2CH3, -SCH3, -SCH2CH3 o -OCHF2;
- R3 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORc , y preferentemente un átomo de hidrógeno;
- R4 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl ou -ORd, y preferentemente un átomo de hidrógeno.
- Rc representa un grupo -(Ci-C5)alquilo; y
- Rd representa un grupo -(Ci-C5)alquileno o -CF3;
en estado de base o de ácido o de sales de base o en forma de hidrato o de solvato.
[0033] Según un modo aún más preferido, el compuesto se elige entre:
Figure imgf000009_0001
PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACIÓN DE COMPUESTOS DE FÓRMULA (I)
[0034] La presente invención se refiere a un procedimiento de preparación de un compuesto de fórmula (I) según la invención, en el que Ri representa un grupo -NH2 o -OH, caracterizado porque:
- se presenta un compuesto de fórmula (A):
Figure imgf000009_0002
en el que R2 es tal como se define en la fórmula (I) descrita anteriormente y Rg representa un grupo -NO2 o -O-Benzoyle, a una reacción de aminación para formar un compuesto de fórmula (B):
Figure imgf000009_0003
en el que R2 es tal como se define en la fórmula (I) descrita anteriormente y R9 representa un grupo -NO2 o -O-Benzoyle;
- se presenta un compuesto de fórmula (C):
Figure imgf000010_0001
en el que R3 y R4 son tales como se definen en la fórmula (I) descrita anteriormente, a una reacción de cianuración para formar un compuesto de fórmula (D):
Figure imgf000010_0002
en el que R3 y R4 son tales como se definen en la fórmula (I) descrita anteriormente;
- se pone en presencia el compuesto de fórmula (B) con el compuesto de fórmula (D), para formar por una reacción de sustitución nucleófila aromática el compuesto de fórmula (E):
Figure imgf000010_0003
en el que R3, R4 y R2 son tales como se definen en la fórmula (I) descrita anteriormente, y R10 representa un grupo -NO2 o -O-Bencilo;
- se somete el compuesto de fórmula (E) a una reacción de metilación y después a una reacción de reducción o de desprotección para formar el compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000010_0004
en el que R3, R4 y R2 son tales como se definen en la fórmula (I) descrita anteriormente, y R1 representa un grupo -NH2 o -OH, siendo Ra y Rb tales como se definen en la fórmula (I) descrita anteriormente.
[0035] La presente invención se refiere igualmente a un procedimiento de preparación de un compuesto de fórmula (I) según la invención, en el que R1 representa un grupo -NH2, caracterizado porque:
- se presenta un compuesto de fórmula (F):
Figure imgf000011_0001
en el que R2 es tal como se define en la fórmula (I) descrita anteriormente, a una reacción de nitración para formar un compuesto de fórmula (G):
Figure imgf000011_0002
en el que R2 es tal como se define en la fórmula (I) descrita anteriormente;
- se presenta un compuesto de fórmula (H):
Figure imgf000011_0003
en el que R3 y R4 son tales como se definen en la fórmula (I) descrita anteriormente, a una reacción de cianuración para formar un compuesto de fórmula (D):
Figure imgf000011_0004
en el que R3 y R4 son tales como se definen en la fórmula (I) descrita anteriormente;
- se pone en presencia el compuesto de fórmula (G) con el compuesto de fórmula (J), para formar, por una reacción de acoplamiento en presencia de paladio, el compuesto de fórmula (K):
Figure imgf000011_0005
en el que R3, R4 y R2 son tales como se definen en la fórmula (I) descrita anteriormente;
- se somete el compuesto de fórmula (K) a una reacción de metilación y luego a una reacción de reducción para formar el compuesto de fórmula (L):
Figure imgf000012_0001
en el que R3, R4 y R2 son tales como se definen en la fórmula (I) descrita anteriormente.
[0036] La presente invención se refiere también a un procedimiento de preparación de un compuesto según la invención, en el que R1 representa un grupo -C2-C6-alquenileno-CO-NH-OH o o -C2-C6-alquinileno-CO-NH-OH, caracterizado porque:
- se presenta un compuesto de fórmula (M):
Figure imgf000012_0002
en el que R3 y R4 son tales como se definen en la fórmula (I) descrita anteriormente, a una reacción de cianuración para formar un compuesto de fórmula (N):
Figure imgf000012_0003
en el que R3 y R4 son tales como se definen en la fórmula (I) descrita anteriormente;
- se pone en presencia el compuesto de fórmula (N) con un compuesto de fórmula (O):
Figure imgf000012_0004
en el que R2 es tal como se define en la fórmula (I) descrita anteriormente, para formar por una reacción de sustitución nucleófila aromática, seguida de una reacción de metilación, el compuesto de fórmula (P):
Figure imgf000013_0001
en el que R3, R4 y R2 son tales como se definen en la fórmula (I) descrita anteriormente;
- se somete el compuesto de fórmula (P) a una reacción de acoplamiento organometálico con un grupo -C2-C6-alquenileno-CO-NH-O-(2-tetrahidropiranilo) o -C2-C6 -alquinileno-CO-NH-O-(2-tetrahidropiranilo) luego a una reacción de desprotección para formar el compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000013_0002
en el que R3, R4 y R2 son tales como se definen en la fórmula (I) descrita anteriormente, y R1 representa un grupo -C2-C6-alquenileno-CO-NH-OH o -C2-C6-alquilinileno-CO-NH-OH.
[0037] Según un modo preferido, la presente invención se refiere a un procedimiento de preparación de un compuesto según la invención, en el que R1 representa un grupo -NH2 o -OH, caracterizado porque:
- se pone en presencia un compuesto de fórmula (B):
Figure imgf000013_0003
en el que R2 es tal como se define en la fórmula (I) descrita anteriormente y Rg representa un grupo -NO2 o -O-Benzoyle; con un compuesto de fórmula (D):
Figure imgf000013_0004
en el que R3 y R4 son tales como se definen en la fórmula (I) descrita anteriormente;
para formar por una reacción de sustitución nucleófila aromática, o por una reacción de acoplamiento en presencia de un catalizador, en particular a base de paladio, el compuesto de fórmula (E)
Figure imgf000014_0001
en el que R3, R4 y R2 son tales como se definen en la fórmula (I) descrita anteriormente, y R10 representa un grupo -NO2 o -O-Bencilo;
- se somete el compuesto de fórmula (E) a una reacción de metilación y después a una reacción de reducción o de desprotección para formar el compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000014_0002
en el que R3, R4 y R2 son tales como se definen en la fórmula (I) descrita anteriormente, y R1 representa un grupo -NH2 o -OH, siendo Ra y Rb tales como se definen en la fórmula (I) descrita anteriormente.
[0038] Según un modo preferido, la presente invención se refiere a un procedimiento de preparación de un compuesto (Ic), caracterizado porque:
- se pone en presencia el compuesto de fórmula (N):
Figure imgf000014_0003
en el que R3 y R4 son tales como se definen en la fórmula (Ic) descrita anteriormente; con un compuesto de fórmula (O):
Figure imgf000014_0004
en el que R2 es tal como se define en la fórmula (Ic) descrita anteriormente, para formar por una reacción de sustitución nucleófila aromática, seguida de una reacción de metilación, el compuesto de fórmula (P):
Figure imgf000015_0001
en el que R3, R4 y R2 son tales como se definen en la fórmula (Ic) descrita anteriormente;
- se somete el compuesto de fórmula (P), a una reacción de acoplamiento organometálico con un grupo -(C 2-C6) alquenileno-CO-NH-O-(2-tetrahidropiranilo) o -(C 2-C6) alquinileno-CO-NH-O-(2-tetrahidropiranilo) luego a una reacción de desprotección para formar el compuesto de fórmula (Ic):
Figure imgf000015_0002
donde n, R3, R 4 y R2 son tales como se definen en la fórmula (Ic) descrita anteriormente.
[0039] Preferentemente, los acoplamientos realizados por sustitución nucleófila aromática, se efectúan en medio ácido, en particular en presencia de ácido clorhídrico.
[0040] En particular, se realizan en un disolvente polar aproximativo, más particularmente en dioxano.
[0041] Ventajosamente, los acoplamientos se realizan a una temperatura comprendida entre 120 °C y 160 °C, en particular entre 130 °C y 150 °C, en particular a reflujo del disolvente.
[0042] Ventajosamente, las etapas de acoplamiento se realizan durante una duración comprendida entre 10 horas y 14 horas, en particular entre 11 horas y 13 horas, preferentemente durante 12 horas.
[0043] En particular, las reacciones de acoplamiento se pueden llevar a cabo en presencia de un agente de acoplamiento, como diisopropilcarbodiimida (DIC), diciclohexilcarbodiimida (DCC), clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC), carbonildiimidazol (CDI) , 2-(1H-benzotriazol-1-il)-2,1,3,3-tetrametiluronio hexafluorofosfato (HBTU), 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio tetrafluoroborato (TBTU), hexafluorofosfato de O-(7-azov=benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio (TOP), (benzotriazol-1-iloxi) hexafluorofosfato de tripirrolodinofosfonio (PyBOP) o anhídrido propilfosfónico , opcionalmente asociado con un auxiliar de acoplamiento como N-hidroxisuccinimida (NHS), N-hidroxidbenzotriazol (HOBt), 3,4-dihidro-3-hidroxi-4-oxo-1,2,3-benzotriazol (HOBt), I -hidroxi-7-azabenzotriazol (HOAt), N-hidroxisilfosuccinimida (sulfo NHS), dimetilaminopiridina (DMAP), diisopropiletilamina (DIEA) o N -metilmorfolina (NMM).
[0044] Las etapas de alquilación, preferentemente de metilación, en particular de una amina, son reacciones bien conocidas por el experto en la materia que posee todos los conocimientos requeridos para su ejecución. Por ejemplo, se pueden realizar por reacción de la amina con un haluro de -(C1-C5)alquilo en presencia de una base, en particular un carbonato. El haluro de -(C1-C5)alquilo puede ser preferiblemente un yoduro de -(C1-C5)alquilo, un bromuro de -(C1-C5)alquilo o un cloruro de -(C1-C5)alquilo. Más particularmente, las etapas de alquilación se realizan en un disolvente polar aproximativo, más preferentemente en dimetilformamida. Preferentemente, las etapas de alquilación se realizan a temperatura ambiente.
[0045] Las reacciones de aminación, de cianuración, de reducción o de desprotección, o incluso de nitración son reacciones bien conocidas por el experto en la materia que posee todos los conocimientos requeridos para su ejecución.
[0046] En particular, la etapa de aminación puede realizarse a una temperatura comprendida entre 60 °C y 100 °C, en particular entre 70 °C y 90 °C, en particular en presencia de hierro sólido y de ácido clorhídrico.
[0047] Los procedimientos de preparación según la invención pueden además comprender eventualmente una etapa de salificación del compuesto formado, para dar una sal farmacéuticamente aceptable, en particular en presencia de un ácido o de una base farmacéuticamente aceptable.
[0048] La presente invención se refiere también a compuestos intermedios, seleccionados entre:
Figure imgf000016_0001
[0049] La presente invención se refiere también a la utilización de tales compuestos intermedios, para la preparación de compuestos de fórmula (I) anterior.
COMPUESTOS DE FÓRMULA (II)
[0050] Según otro de sus aspectos, la presente invención se refiere a compuestos de fórmula (II):
Figure imgf000016_0002
en la que:
- Yi representa -O-, -NH-, -NHCO-, -NHCORa-, -NHCOO-, -NHCOORb-, -(C2-Ca)alquenileno-CO-NH-O- o -(C2-C6)alquinileno-CO-NH-O-;
- R2 representa un grupo -OCH3, -OCH2CH3, -SCH3, -SCH2CH3 o -OCHF2;
- R3 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORc; y preferentemente un átomo de hidrógeno;
- R4 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORd; y preferentemente un átomo de hidrógeno;
- Ra representa un grupo -(C1-C5)alquileno- o -CF2-;
- Rb representa un grupo -(C1-C5)alquileno- o -CF2-;
- Rc representa un grupo -(C1-C5)alquilo;
- Rd representa un grupo -(C1-C5)alquileno o -CF3;
- L representa un agente de enlace;
- RM* se selecciona entre RM y RM', en el que RM es una función reactiva capaz de formar un enlace covalente con una fracción de un agente de objetivo, en particular con una fracción de un anticuerpo o uno de sus fragmentos funcionales, y en el que RM' es una fracción de RM que lleva al menos un grupo protector;
en estado de base o de sales de base o en forma de hidrato o de solvato.
[0051] Según un primer modo preferido, el grupo L-RM* se elige entre:
Figure imgf000017_0001
y
Figure imgf000018_0001
[0052] Según otro modo preferido, el compuesto se elige entre:
Figure imgf000018_0002
y
Figure imgf000019_0001
Agente de enlace (Linker)
[0053] Un agente de enlace o "linker" según la presente invención es un compuesto que une dos componentes, estando cada uno unido a un extremo del agente de enlace.
[0054] En el caso en que el agente de enlace es un enlace covalente, una unión directa del compuesto tóxico («payload») al agente de objetivo, tal como un anticuerpo, puede disminuir la capacidad del payload de interactuar con la molécula objetivo en el interior de la célula.
[0055] Según las realizaciones preferidas, el linker aumenta la distancia entre los dos componentes, en particular entre el payload y el agente de objetivo, y atenúa así las interferencias estéricas entre ellos.
[0056] En particular, el enlace posee una cadena continua que comprende de 1 a 30 átomos en su esqueleto, definiéndose la longitud del enlace como el número de átomos o de unión más débil entre el payload y el agente de objetivo.
[0057] Según una realización particular, el enlazador se elige entre los grupos C rC 20-alquileno, C1-C20-heteroalquileno, C2-C20-alquenileno, C2-C20-heteroalquenileno, C2-C20-alquinileno, C2-C20-heteroalquinileno, cicloalquileno, heterocicloalquileno, arileno, heteroarileno, aralquileno o heteroaralquileno, opcionalmente sustituido. El enlace puede contener uno o varios elementos tales como una carboxamida, un éster, un éter, un tioéter, un disulfuro, una urea, una tiourea, una fracción hidrocarbonada o uno de sus derivados. El enlace puede contener uno o varios de estos elementos estructurales. Cada uno de estos elementos puede estar presente en el enlace una o más veces, por ejemplo, dos, tres, cuatro, cinco o incluso seis veces.
[0058] Según una realización particular, el enlace puede comprender una unión disulfuro.
[0059] Se entiende que el linker debe estar unido en una sola etapa o en varias, por ejemplo dos, etapas sucesivas, al payload y al agente de objetivo. Para este fin, el linker tiene dos grupos, en particular en los extremos proximal y distal, que pueden (i) formar un enlace covalente con un grupo presente en uno de los componentes a unir, en particular un grupo activado en el payload o en el agente de objetivo, o (ii) que está o puede estar activado para formar un enlace covalente en un grupo del payload.
[0060] Así, según un modo preferido, los grupos químicos presentes en los extremos del linker, resultantes de la reacción de acoplamiento, se eligen entre los ésteres, los éteres, los uretanos, los enlaces peptídicos...
[0061] Según una realización particular, el linker L es una cadena lineal que comprende de 1 a 20 átomos, elegidos independientemente entre C, O, N y S, en particular que comprende de 2 a 18 átomos, más particularmente entre 5 y 16 átomos, y preferiblemente entre 6 y 15 átomos.
[0062] Según una realización particular, al menos el 60 % de los átomos de la cadena lineal son átomos de carbono. En particular, los átomos de la cadena lineal están unidos por enlaces simples.
[0063] Según una realización particular, el linker L es un grupo seleccionado entre alquileno, heteroalquileno, alquenileno, heteroalcenileno, alquinileno, heteroalcinileno, cicloalquileno, heterocicloalquileno, arileno, heteroarileno, aralquileno, o heteroaralquileno, que comprende de 1 a 4 heteroátomos elegidos entre N, O y S, siendo dicho linker eventualmente sustituido.
[0064] Según una realización particular, el enlace L comprende al menos uno de los grupos siguientes: un disulfuro (-S-S-), un éter (-O-), un tioéter (-S-), una amina (-NH-), un éster (-O-C(=O)- o -C(=O)-O-), una carboxamida (-NH-C (=O)- o C(=O)-NH-), un uretano (-NH-C (=O)-O- o -O-C(=O)-NH-), o una fracción urea (-NH-C (=O)-NH-).
[0065] Según una realización particular de la presente invención, el enlazador L comprende un número m de grupos elegidos entre alquileno, alquenileno, alquinileno, cicloalquileno, heteroalquileno, heteroalquenileno, heteroalquinileno, heterocicloalquileno, arileno, heteroarileno, aralquileno y heteroaralquileno, cada uno de estos grupos posiblemente sustituidos, y un número n de grupos elegidos independientemente entre sí de al menos uno de los siguientes grupos: un disulfuro (-S-S-), un éter (-O-), un tioéter (-S-), una amina (-NH-), un éster (-O-C(=O)- o -C(=O)-O-), una carboxamida (-NH-C(=O)- o C(=O)- NH-), un uretano (-NH-C(=O)-O- o -O-C(=O)-NH-), o un resto de urea (-NH-C(=O)-NH-), siendo m igual a n 1. En particular, m es 2 y n es 1, o m es 3 y n es 2. Más particularmente, el linker comprende 2 o 3 grupos alquileno no sustituido, y 1 o 2, respectivamente, disulfuro, éter, tioéter, amina, éster, carboxamida, uretano o fracción urea unidos a los grupos alquileno no sustituido.
[0066] Según una realización particular, los átomos de carbono en la cadena lineal forman independientemente parte de grupos metileno eventualmente sustituidos (-CH2-). En particular, los sustituyentes opcionales se seleccionan independientemente entre halógenos y grupos -(C1-C6)alquilo, especialmente metilo.
[0067] En particular, el enlace L es un agente de enlace estable, es decir, es estable (i) en presencia de enzimas, y (ii) en un entorno reductor intracelular.
[0068] Según una realización particular, el enlace estable no contiene (i) una subestructura enzimática escindible y/o (ii) un grupo disulfuro. En particular, el enlace posee una longitud que va hasta 12 átomos, en particular una longitud que va de 2 a 10 átomos, más en particular de 4 a 9, y aún más en particular de 6 a 8.
[0069] Según otra realización particular, el enlace es un agente de enlace escindible, es decir (i) que es escindible por escisión química, o (ii) que se trata de un agente de enlace reductible.
[0070] Según una realización, el agente de enlace es divisible por reducción, es decir, puede escindirse en un entorno reductor intracelular. En particular, puede tratarse de un enlace que contiene grupos disulfuro, resultando en la liberación intracelular del payload conjugado con el agente de objetivo después de la internalización por el entorno reductor intracelular (Shen et al., (1985), J. Biol. Chem. 260:10905-10908).
[0071] Según una realización particular, el agente de enlace comprende una unión disulfuro, en particular una fracción -CMe2-S-S-CMe2-. Según otras realizaciones, el enlace está unido a un grupo tiol de una fracción de un agente de objetivo por una unión de disulfuro.
[0072] Según otras realizaciones, el enlace es divisible por escisión química, en particular por hidrólisis o proteólisis. En particular, la escisión química está catalizada por una enzima, es decir, que el enlace puede ser escindido por una enzima, en particular una peptidasa lisosomal, como la catepsina B, lo que resulta en una liberación intracelular del payload conjugada con el agente de objetivo después de la internalización (Dubowchik et al., (2002) Bioconjug Chem. 13:855-69). Según una realización particular, el enlace divisible comprende un dipéptido elegido entre Phe-Lys, Val-Lys, Phe- Ala, Val-Ala, Phe-Cit y Val-Cit. En particular, el enlace divisible comprende además un espaciador p-aminobenzilo (PAB) entre los dipéptidos y el payload.
[0073] Según una realización, el enlace comprende un grupo hidrazona. En esta realización particular, la escisión interviene por hidrólisis en el lisosoma.
[0074] Según una realización, el enlace es un agente de enlace auto-sacrificial, es decir, comprende un enlace escindible. En particular, después de la escisión, se produce una fragmentación que elimina una parte del linker aún unido al payload después de dicha escisión. En particular, el enlace puede comprender un grupo -(enlace escindible)-X-fenil-CH2-O- C(=O)-, en el que el grupo carbonilo está unido al grupo amino unido al ciclo fenilado en los compuestos según la invención, comprendiendo el compuesto según la invención un grupo amino libre que se libera.
[0075] Según una realización preferida, el agente de enlace se elige entre los compuestos siguientes:
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[0076] Como agentes de enlace adecuados para la presente invención, también pueden citarse los descritos en Jun Lu et al. («Linker shaving a crucial role in antibody-drug conjugates», Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 561), Jessica R. McCombs y Shawn C. Owen («Antibody drug conjugates: Design and selection of linker, payload and conjugation chemistry ”, The AAPS Journal, vol. 17, No. 2, March 2015, 339), Laurent Ducry y Bernhard Strump («Antibody-drug conjugates: linking cytotoxic payloads to monoclonal antibodies», Bioconjugate Chem. 2010, 21,5-13/ et Nareshkumar Jain et al. («Current ADS linker chemistry, Pharm. Res. 2015, 32:3526-3540).
CONJUGADOS ANTICUERPO-MEDICAMENTO
[0077] La presente invención se refiere también a conjugados anticuerpos-medicamento que comprenden compuestos tales como los definidos anteriormente.
[0078] Según otro de sus aspectos, la presente invención se refiere a conjugados anticuerpo-medicamento de fórmula (III):
Figure imgf000022_0001
en la que:
- Yi representa -O-, -NH-, -NHCO-, -NHCORa-, -NHCOO-, -NHCOORb-, -(C2-Ca)alquenileno-CO-NH-O- o -(C2-C6)alquinileno-CO-NH-O-;
- R2 representa un grupo -OCH3, -OCH2CH3, -SCH3, -SCH2CH3 o -OCHF2;
- R3 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORc; y preferentemente un átomo de hidrógeno;
- R4 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORd; y preferentemente un átomo de hidrógeno;
- Ra representa un grupo -(Ci-C5)alquileno- o -CF2-;
- Rb representa un grupo -(Ci-C5)alquileno- o -CF2-;
- Rc representa un grupo -(Ci-C5)alquilo;
- Rd representa un grupo -(Ci-C5)alquileno o -CF3;
- L' representa un agente de enlace;
- AC representa una fracción de un agente de objetivo, en particular una fracción de un anticuerpo o uno de sus fragmentos funcionales; y
en la que el DAR (ratio medicamento/agente de objetivo) varía entre 1 y 8, preferentemente entre 2 y 4.
Agente de objetivo
[0079] Se entiende por agente de objetivo una molécula que presenta una afinidad por un objetivo biológico. El agente de objetivo tiene la función de dirigir el compuesto citotóxico hacia el objetivo biológico.
[0080] Se entiende por objetivo biológico un antígeno, o un grupo de antígenos, preferentemente localizado en la superficie de las células cancerosas. Estos antígenos pueden ser, por ejemplo, un receptor del factor de crecimiento, un gen o un producto oncogénico “supresor del tumor” mutado, una molécula relacionada con la angiogénesis o una molécula de adhesión.
[0081] En particular, el agente de objetivo se selecciona entre un ligando, una proteína, un anticuerpo, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal, un fragmento de proteína o de anticuerpo, un péptido, un oligonucleótido o un oligosacárido.
[0082] Preferiblemente, se trata de un anticuerpo (o inmunoglobulina) o de un fragmento de anticuerpo.
[0083] Como anticuerpos adecuados para la presente invención, se pueden citar en particular las inmunoglobulinas IgA, IgD, IgE, IgG e IgM.
[0084] Los anticuerpos pueden ser anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales, anticuerpos recombinantes, anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanizados o anticuerpos optimizados, por ejemplo, anticuerpos con glucosilación modificada o anticuerpos con una región Fc variante que presenta una afinidad de unión optimizada con uno o varios receptores Fc. En particular, se trata de un anticuerpo monoclonal.
[0085] Más concretamente, el anticuerpo puede seleccionarse entre:
- los anticuerpos antinucleares, incluidos los autoanticuerpos anti-SSA/Ro, los autoanticuerpos anti-La/SS-B, los anticuerpos anticentrómeros, el anticuerpo 2 nuclear anti-neuronal, el anti-ADNdb, el anti-RNP, el anti-Smith, el anticuerpo anti topoisomerasa, los anticuerpos antihistónicos, los anticuerpos anti-p62 y los anticuerpos anti-sp100; - los anticuerpos antiglicoproteína 210;
- los anticuerpos anti-transglutaminasa, incluyendo anticuerpos anti-tTG y anticuerpos anti-eTG;
- los anticuerpos anti-gangliósidos;
- los anticuerpos anti-actina;
- los anticuerpos anti-CCP, anticuerpos de tipo 1 microsomal del hígado y del riñón;
- los anticuerpos anti-trombina;
- los anticuerpos citoplásmicos antineutrófilos (ANCA) que comprenden la anti-mieloperoxidasa (MPO), la antiproteinasa 3 (PR3), la anti-lactoferrina, la antielastasa, la proteína inductora bacteriana (BPI), la anti-cathepsina G;
- la membrana basal anti-glomerular (cadena 3 alfa del colágeno 4), el receptor A2 anti-fosfolipasa (PLA2R); - los anticuerpos antifactor reumatoide;
- el anticuerpo anti-músculo liso, incluyendo los anticuerpos anti-actina, los anticuerpos anti-troponina y los anticuerpos anti-tropomiosina;
- los anticuerpos anti-mitocondriales, incluidos los anticuerpos anti-cardiolipina, los anticuerpos anti-sulfito oxidasa, los anticuerpos anti-sarcosina deshidrogenasa y los anticuerpos antiglicógenos fosforilasa;
- los anticuerpos anti-SRP;
- los anticuerpos anti-VGCC (canal de calcio voltaje-dependiente);
- los anticuerpos anti-VGKC (canal potasio voltaje-dependiente);
- los anticuerpos anti-sintetasa que comprenden los anticuerpos anti-PL7, -PL12, -JO1, -EJ y -OJ;
- y los anticuerpos anti-complemento terminal, incluidos los autoanticuerpos anti-factor H, el inhibidor anti-C1, los anti-C1q, los anti-C3, los anti-factores B, los anti-C3bBb (C3 convertasa de la vía alternativa del complemento), los anti C4b2a (C3 convertasa de la vía clásica del complemento).
[0086] Como aloanticuerpos, se pueden citar los anticuerpos antígenos plaquetarios humanos (HPA) y los anticuerpos anti-IgA.
[0087] Como anticuerpos terapéuticos humanos, se pueden citar los seleccionados en el grupo que comprende Panitumumab. Actoxumab, Adalimumab, Adecatumumab, Alirocumab, Anifrolumab, Atinumab, Atorolimumab, Belimumab, Bertilimu- mab, Bezlotoxumab, Bimagrumab, Briakinumab, Brodalumab, Canakinumab, Carlumab, Cixutumumab, Conatumumab, Daratumumab, Denosumab, Drozitumab, Duligotumab, Dupilumab, Dusigitumab, Efungumab, Eldelumab, Enoticumab, Evolocumab, Exbivirumab, Fasinumab, Fezakinumab, Figitumumab, Flanvotumab, Foralumab, Foravirumab, Fresoli-mumab, Fulranumab, Ganitumab, Gantenerumab, Glembatumumab vedotina, Golimumab, Guselkumab, Icrucumab, Inclacumab, Intetumumab, Ipilimumab, Iratumumab, Lerdelimumab, Lexatumumab, Libivirumab, Lirilumab, Lucatumu- mab, Mapatumumab, Mavrilimumab, Metelimumab, Morolimumab, Namilumab, Namatumab, Nebacumab, Necitumu- mab, Nesvacumab, Nivolumab, Ofatumumab, Olaratumab, Orticumab, Oxelumab, Panitumumab, Panobacumab, Par- satuzumab, Patritumab, Placulumab, Pritumumab, Radretumab, Rafivirumab, Ramucirumab, Raxibacumab, Regaviru- mab, Rilotumumab, Robatumumab, Roledumab, Sarilumab, Secukinumab, Seribantumab, Sevirumab, Sirukumab, Sta- mulumab, Tabalumab, Teprotumumab, Ticilimumab (= tremelimumab), Tovetumab, Tralokinumab, Tremelimumab, Tu- virumab, Urelumab, Ustekinumab, Vantictumab, Vesencumab, Votumumab, Zalutumumab, Zanolimumab, Ziralimumab.
[0088] Como anticuerpos terapéuticos murinos se pueden mencionar los elegidos del grupo que comprende Abagovomab, Afelimomab, Anatumomab mafenatox, Blinatumomab, Detumomab, Dorlimomab aritox, Edobacomab, Edrecolomab, Elsilimomab, Enlimomab pegol, Epitumomab cituxetan, Faralimomab, Gavilimomab, Ibritumomab tiuxetan, Imciromab , Inolimomab, Lemalesomab, Maslimomab, Minretumomab, Mitumomab, Moxetumomab pasudotox, Muromonab-CD3, Nacolomab tafenatox, Naptumomab estafenatox, Nerelimomab, Odulimomab, Oregovomab, Pemtumomab, Racotu-momab, Solitomab, Taplitumomab paptox, Telimomab arit buey, Tenatumomab, Tositumomab, Vepalimomab y zolimomab aritox.
[0089] Como anticuerpos terapéuticos quiméricos, se pueden citar los seleccionados en el grupo que comprende Abciximab, Amatuximab, Basiliximab, Bavituximab, Brentuximab vedotina, Cetuximab, Clenoliximab, Ecromeximab, Ensituximab, Futuximab, Galiximab, Girentuximab, Gomiliximab, Indatuximab ravtansina, Infliximab, Keliximab, Lumiliximab, Pagi-baximab, Priliximab, Pritoxaximab, Rituximab, Setoxaximab, Siltuximab, Teneliximab, Ublituximab, Vapalimab, Volo- ciximab y Zatuximab.
[0090] Como anticuerpos terapéuticos humanizados, Podemos citar los elegidos en el grupo que incluye Afutuzumab, Alacizumab pegol, Alemtuzumab, Anrukinzumab, Apolizumab, Aselizumab, Atlizumab (= tocilizumab), Bapineuzumab, Benralizumab, Bevacizumab, Bivatuzumab mertansina, Blosozumab, Cantuzumab mertansina, Cantuzumab ravtansina, Caplacizumab, Cedelizumab, Certolizumab pegol, Citatuzumab bogatox, Clazakizumab, Clivatuzumab tetraxetan, Con- cizumab, Crenzumab, Dacetuzumab, Daclizumab, Dalotuzumab, Demcizumab, Eculizumab, Efalizumab, Elotuzumab, Enavatuzumab, Enokizumab, Epratuzumab, Erlizumab, Etaracizumab, Etrolizumab, Farletuzumab, Felvizumab, Ficla- tuzumab, Fontolizumab, Gemtuzumab ozogamicina, Gevokizumab, Ibalizumab, Imgatuzumab, Inotuzumab ozogamicina, Itolizumab, Ixekizumab, Labetuzumab, Lambrolizumab, Lampalizumab, Lebrikizumab, Ligelizumab, Lintuzumab, Lodel- cizumab, Lorvotuzumab mertansina, Margetuximab, Matuzumab, Mepolizumab, Milatuzumab, Mogamulizumab, Mota- vizumab, Natalizumab, Nimotuzumab, Ocaratuzumab, Ocrelizumab, Olokizumab, Omalizumab, Onartuzumab, Opor- tuzumab monatox, Ozanezumab, Ozoralizumab, Palivizumab, Pascolizumab, Pateclizumab, Perakizumab, Pertuzumab, Pexelizumab, Pidilizumab, Pinatuzumab vedotina, Polatuzumab vedotina, Ponezumab, Quilizumab, Ranibizumab, Resli-zumab, Romosozumab, Rontalizumab, Rovelizumab, Ruplizumab, Samalizumab, Sibrotuzumab, Sifalimumab, Sim- tuzumab, Siplizumab, Solanezumab, Sonepcizumab, Sonuzumab, Suvizumab, Tacatuzumab tetraxetan, Tadocizumab, Talizumab, Tanezumab, Tefibazumab, Teplizumab, Tildrakizumab, Tigatuzumab, Tocilizumab (= atlizumab), Toralizu- mab, Trastuzumab, Tregalizumab, Tucotuzumab celmoleukin, Urtoxazumab, Vatelizumab, Vedolizumab, Veltuzumab, Visilizumab y Vorsetuzumab mafodotin.
[0091] Preferiblemente, se trata de un anticuerpo terapéutico humanizado, y más preferentemente de Trastuzumab.
DAR
[0092] Un conjugado comprende generalmente un número medio de compuestos citotóxicos (payload) comprendido entre 1 y 8, preferentemente entre 2 y 4, ligados al agente de objetivo (se trata del grado de injerto o "ratio medicamento/agente de objetivo" (o "DAR")).
[0093] Este número puede variar en particular en función de la naturaleza del agente de objetivo, del payload, o de las condiciones utilizadas durante la conjugación.
[0094] En el caso en que el agente de objetivo es un anticuerpo, el DAR puede determinarse por ejemplo por espectroscopia UV o por desconvolución del espectro HRMS del conjugado.
[0095] El DAR evaluado por espectroscopia UV se llama DAR(UV), como se muestra en el procedimiento presentado por Antony S. Dimitrov (ed), LLC, 2009, "Therapeutic Antibodies and Protocols", vol. 525, 445, Springer Science). Este procedimiento consiste en medir la absorbancia de una solución del conjugado después de la etapa de separación a dos longitudes de onda WL1 y WL2. Se utilizarán los coeficientes de extinción molar obtenidos del anticuerpo desnudo y del payload antes de la conjugación. Las absorbancias de la solución de conjugado a WL1 y WL2, (Awl1 ) y (Awl2) se miden ya sea en el pico UV correspondiente del espectro SECO o utilizando un espectrofotómetro UV estándar. Las absorbancias pueden expresarse en la forma:
Figure imgf000024_0001
en las que:
• cd y ca representan, respectivamente, las concentraciones en la solución de la parte del conjugado relativa al payload y de la parte del conjugado relativa al anticuerpo;
• eDWLi y eDWL2 representan, respectivamente, los coeficientes de extinción molar del payload antes de la conjugación a las longitudes de onda WL1 y WL2;
• eAWLi y eAWL2 representan, respectivamente, los coeficientes de extinción molar del anticuerpo desnudo en las longitudes de onda WL1 y WL2.
[0096] El término "anticuerpo desnudo" se refiere al anticuerpo sobre el que no se adjunta ningún payload, es decir, el anticuerpo antes de la conjugación.
[0097] La resolución de estas dos ecuaciones conduce a:
Figure imgf000024_0002
[0098] El DAR(UV) corresponde así a cd/ca.
[0099] Alternativamente, el DAR puede ser calculado por desconvolución del espectro HRMS del conjugado y entonces se llama DAR (HRMS).
PROCEDIMIENTO DE PREPARACIÓN Y CONJUGACIÓN
[0100] La presente invención se refiere igualmente a un procedimiento de preparación de un compuesto de fórmula (II) tal como se define anteriormente, caracterizado porque comprende una etapa de reacción de un compuesto de fórmula (I) tal como se define anteriormente, con un compuesto de fórmula X-L"-RM* en la que:
- X representa un grupo capaz de reaccionar con un grupo R1 como se definió anteriormente;
- L" representa un agente de enlace;
- RM* se selecciona entre RM y RM', en el que RM es una función reactiva capaz de formar un enlace covalente con una fracción de un agente de objetivo, en particular con una fracción de un anticuerpo o uno de sus fragmentos funcionales, y en el que RM' es una fracción de RM que lleva al menos un grupo protector;
en el que la reacción entre la fracción -R1 del compuesto de fórmula (I) y el compuesto de fórmula X-L"-RM* resulta en la formación de una fracción -Y1-L-RM*
[0101] Según un modo preferido, en el que RM* es RM, el procedimiento comprende además una etapa de desprotección de una fracción Rm ' que resulta en un grupo RM.
[0102] Preferentemente, el procedimiento comprende una etapa de reacción de un compuesto de fórmula (II) tal como se ha definido anteriormente con una fracción de un agente de objetivo.
[0103] La conjugación de la fracción de un agente de objetivo se puede lograr mediante el acoplamiento de una construcción compuesta de fórmula(I) -L-RM con grupos aminos libres presentes en la fracción del agente de objetivo. Según tal realización, el grupo RM puede elegirse entre un derivado de ácido carboxílico activado, tal como un éster N-hidroxi succimida, o un derivado de ácido carbónico activado, tal como un isotiocianato.
[0104] La conjugación de la fracción de un agente de objetivo también se puede lograr mediante el acoplamiento de una construcción compuesta de fórmula(I) -L-RM con grupos libres de tioles presentes en la fracción del agente de objetivo. Según dicha realización, el grupo RM puede seleccionarse entre un grupo haloacetilo, un grupo RM que comprende un aceptor de alqueno sustituido (sistema Mickael), en particular un grupo maleimida o un grupo propenoilo (Badescu et al., 2014, Bioconjugate Chem., 25:460-469), un grupo maleimida sustituido en la posición 3 o disustituido en las posiciones 3 y 4 por grupos salientes X, en particular seleccionados entre Cl, Br, y aril-S-, en particular fenil-S-.
[0105] Según una realización particular, el grupo tiol forma parte de un residuo cisteína simple no acoplado presente en la fracción del agente de objetivo salvaje. Según otra realización particular, el grupo tiol forma parte de un residuo cisteína simple no acoplado generado a partir de una fracción del agente de objetivo salvaje, en particular por ingeniería genética recombinante, por ejemplo por inserción en la secuencia salvaje, por eliminación de una segunda cisteína que forma un puente disulfuro con el primer residuo de cisteína en la fracción del agente de objetivo salvaje, o por sustitución de un residuo no cisteína. Según otra realización, el grupo tiol se genera por reducción de una unión disulfuro entre dos cisteínas presentes en la fracción del agente de objetivo salvaje.
[0106] La conjugación de la fracción de un agente de objetivo también se puede lograr mediante el acoplamiento de una construcción compuesta de fórmula(I)-L-RM con dos grupos libres de tioles presentes en la fracción del agente de objetivo. Según tal realización, el grupo RM puede elegirse entre un grupo maleimida disustituido en posiciones 3 y 4 con grupos salientes X, en particular elegidos entre Cl, Br, y aril-S-, en particular fenilo-S-.
[0107] Según una realización, los dos grupos tiol forman cada uno parte de un residuo de cisteína simple no acoplado presente en la fracción del agente de objetivo salvaje. Según otra realización particular, los grupos tioles forman parte de dos residuos cisteína simples no acoplados generados a partir de una fracción del agente de objetivo salvaje, en particular por ingeniería genética recombinante, por ejemplo, por inserción en la secuencia salvaje, por eliminación de una segunda cisteína que forma un puente disulfuro con el primer residuo de cisteína en la fracción del agente de objetivo salvaje, o por sustitución de un residuo no cisteína. Según otra realización, los dos grupos tiol se generan por reducción de una unión disulfuro entre dos cisteínas presentes en la fracción del agente de objetivo salvaje. Por reacción de tales dos grupos tioles con una maleimida disustituida, los grupos tioles son puenteados, imitando así un puente disulfuro presente originalmente.
[0108] Según una realización particular, se puede generar un grupo tiol libre mediante la tiulización de grupos amino libres presentes en la fracción del agente de objetivo, en particular mediante la reacción de tales grupos amino libres con un agente de tiolación elegido entre 2-iminotiolano (Still et al., 1984, Can. J. Org. Chem. 62:586) y un derivado del ácido aciltioacético (X-C(=O)-CH2-SAcyl), tal como un éster N-hidroxi succinimida del ácido acetiltioacético.
[0109] La conjugación de la fracción de un agente de objetivo se puede lograr mediante el acoplamiento de aminoácidos no naturales introducidos por ingeniería genética, por ejemplo, mediante la introducción de pacetilfenilalanina y posterior ligadura de oxima (Kazane et al., (2012) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A, 109:3731-3736;.
[0110] La conjugación de la fracción de un agente de objetivo se puede lograr mediante el acoplamiento cíclico de diazodicarboxamidas al ciclo fenilado de residuos de tirosina en la fracción del agente de objetivo (Ban et al., (2010) J Am. Chem. Soc. 13:1523-5).
[0111] La conjugación de la fracción de un agente de objetivo puede realizarse mediante cicloadición 1,3-dipolar ("click chemistry").
[0112] Según una realización, la fracción del agente de objetivo comprende una doble o una triple unión y la construcción compuesta de fórmula(I)-L-RM comprende un 1,3-dipolo, en particular un grupo azida. En particular, la fracción del agente de objetivo se pone a reaccionar primero con un éster de dibenzocicloocina-N-hidroxisuccinimida o un éster de azadibenzocicloocina-Nhidroxisuccinimida (Zhou et al., (2013) J Am Chem Soc. 135:12994-7).
[0113] Según otra realización, la fracción del agente de objetivo comprende un 1,3-dipolo, en particular un grupo azida, y la construcción compuesta de fórmula(I) -L-RM comprende una doble o una triple unión. En particular, la fracción del agente de objetivo es un anticuerpo glucosilado que se pone a reaccionar primero con una molécula que comprende un azido por reacción enzimática catalizada (SiteClick; Zeglis et al., (2013) Bioconjug Chem. 24:1057-67). Según otra realización, el grupo azido se incorpora a través del aminoácido p-azidofenilalamina no natural (Kazane et al., (2012) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A, 109:3731-3736).
USO FARMACÉUTICO
[0114] La presente invención se refiere también a una composición farmacéutica que comprende un conjugado anticuerpo-medicamento tal como se ha definido anteriormente, en asociación con un soporte farmacéuticamente aceptable.
[0115] En particular, una composición farmacéutica según la invención puede comprender al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.
[0116] La composición farmacéutica puede comprender uno o varios diluyentes farmacéuticamente aceptables, soportes, excipientes, cargas, aglutinantes, lubricantes, agentes de deslizamiento, desintegrantes, absorbentes y/o conservantes.
[0117] La invención se refiere también a las composiciones farmacéuticas según la invención para su uso como medicamento, especialmente para tratar el cáncer.
[0118] La presente invención se refiere también a un conjugado anticuerpo-medicamento tal como se define anteriormente o a una composición farmacéutica tal como se define anteriormente, para su utilización como medicamento.
[0119] La presente invención se refiere también a un conjugado anticuerpo-medicamento tal como se define anteriormente o a una composición farmacéutica tal como se define anteriormente, para su utilización para matar o inhibir el crecimiento de las células.
[0120] La presente invención se refiere también a un conjugado anticuerpo-medicamento tal como se define anteriormente o a una composición farmacéutica tal como se define más arriba, para su utilización en el tratamiento del cáncer.
[0121] Entre los tipos de cáncer figuran, entre otros, las leucemias, por ejemplo la leucemia mieloide crónica, los linfomas, los sarcomas, el melanoma, el cáncer de hígado, el cáncer de páncreas, el cáncer de pulmón, el cáncer de estómago, el cáncer de esófago, el cáncer de riñón, el cáncer de pleura, el cáncer de tiroides, el cáncer de piel, el cáncer de cuello uterino, el cáncer de mama, el cáncer de ovario, el cáncer colorrectal, el cáncer de testículo, el cáncer de próstata, el cáncer de vejiga, el cáncer de cerebro, el cáncer de recto y el cáncer de huesos.
[0122] En particular, se pueden citar el cáncer colorrectal, el cáncer de pulmón, en particular el cáncer de células no pequeñas, el cáncer de estómago, el cáncer de páncreas, la leucemia mieloide crónica, el cáncer de mama y el cáncer de ovario, y más en particular el cáncer de mama.
[0123] En particular, el paciente que necesita tratamiento es un mamífero, especialmente un humano.
[0124] La presente invención describe igualmente un procedimiento de tratamiento del cáncer, que comprende la administración de una cantidad eficaz de al menos un conjugado anticuerpo-medicamento según la invención, en particular para un paciente que lo necesita.
[0125] Según una realización particular, las composiciones farmacéuticas según la invención se utilizan en forma de medicamento administrado por vía sistémica.
[0126] Así, las composiciones farmacéuticas según la invención pueden estar destinadas a una administración por vía parenteral. Por parenterales, se incluyen los inyectables y las perfusiones.
[0127] Los inyectables pueden formularse en forma de ampollas o en forma de inyectables listos para su uso, por ejemplo, jeringas listas para su uso o jeringas de un solo uso, o en frascos perforables para una operación múltiple. La administración de inyectables puede hacerse en forma de una aplicación subcutánea (s.c.), intramuscular (i.m.), intravenosa (i.v.) o intracutánea (i.c.). En particular, es posible producir formulaciones inyectables apropiadas en forma de una suspensión de cristales, de soluciones, de nanopartículas o de sistemas coloidales dispersos, tales como por ejemplo los hidrosoles.
[0128] Además, se pueden producir composiciones inyectables en forma de concentrados, que pueden disolverse o dispersarse con diluyentes acuosos isotónicos. Las infusiones también se pueden preparar en forma de soluciones isotónicas, emulsiones grasas, formulaciones liposomales y microemulsiones. Al igual que con los inyectables, los preparados para perfusión también pueden prepararse en forma de concentrados para dilución. Las formulaciones inyectables también se pueden aplicar en forma de infusiones permanentes tanto en la terapia hospitalaria como en la ambulatoria, por ejemplo, por medio de mini bombas.
[0129] Es posible añadir a las composiciones medicamentosas parenterales, por ejemplo, albúmina, plasma, diluyentes, sustancias tensoactivas, diluyentes orgánicos, sustancias que influyen en el pH, sustancias complejantes o sustancias poliméricas, en particular como sustancias que influyen en la adsorción de los conjugados según la invención a proteínas o polímeros, o también se pueden añadir con el fin de reducir la adsorción de los conjugados de la invención a materiales tales como instrumentos de inyección o materiales de embalaje, por ejemplo, de plástico o vidrio.
[0130] Los compuestos según la invención que comprenden una fracción de un agente de objetivo pueden estar unidos a microportadores o a nanopartículas parenterales, por ejemplo a partículas finamente dispersas a base de poli (met)acrilatos, polilactatos, poliglicolatos, poliaminoácidos o polieter uretanos. Las composiciones parenterales también pueden modificarse como preparaciones de retardo, por ejemplo sobre la base del «principio de unidad múltiple», si los conjugados de la presente invención se introducen en forma finamente dispersa, o en suspensión, respectivamente, o en forma de suspensión de cristales en el medicamento o sobre la base del "principio unitario" si el conjugado de la invención está encerrado en una formulación, por ejemplo en un comprimido o una varilla que se implanta a continuación. Estos implantes o depósitos de medicamentos en formulaciones de una sola unidad y múltiples unidades a menudo consisten en los llamados polímeros biodegradables, por ejemplo, poliésteres de ácido láctico y ácido glicólico, poliéteruretanos, poliaminoácidos, poli(met)acrilatos o polisacáridos.
[0131] Los adyuvantes y los vehículos añadidos durante la preparación de las composiciones farmacéuticas según la presente invención formulados como productos parenterales se seleccionan en particular entre el agua esterilizada (aqua sterilisata), sustancias que influyen en el valor del pH tales como los ácidos o bases orgánicas o inorgánicas así como sus sales, las sustancias tampón para ajustar los valores de pH, las sustancias para la isotonización tales como el cloruro de sodio, el hidrogenocarbonato de sodio, la glucosa y la fructosa, los tensioactivos y los emulsionantes, tales como ésteres parciales de ácidos grasos de sorbitán de polioxietileno (por ejemplo, Tween®) o ésteres de ácidos grasos de polioxietileno (por ejemplo, Cremophor®), aceites grasos tales como aceite de cacahuete, aceite de soja o aceite de ricino, ésteres sintéticos de ácidos grasos tales como oleato de etilo, miristato de isopropilo y aceite neutro (por ejemplo, Miglyol®), así como aditivos poliméricos tales como gelatina, dextrano, polivinilpirrolidona, aditivos que aumentan la solubilidad de disolventes orgánicos, como el propilenglicol, etanol, N, N-dimetilacetamida, propilenglicol o sustancias complejantes como el citrato y la urea, conservantes como el éster hidroxipropílico del ácido benzoico y el éster metílico, alcohol bencílico, antioxidantes como el sulfito de sodio y estabilizadores como EDTA.
[0132] Según una realización preferida, durante la formulación de las composiciones farmacéuticas según la presente invención, se añaden agentes espesantes que impiden el endurecimiento de los conjugados de la invención, o tensioactivos y polielectrolitos para asegurar la resuspensión de los sedimentos y/o agentes complejantes tales como EDTA. También es posible realizar complejos del ingrediente activo con diversos polímeros. Ejemplos de tales polímeros son polietilenglicol, poliestireno, carboximetilcelulosa, Pluronics® o un éster de ácido graso y sorbitol de polietilenglicol. Los conjugados de la invención también se pueden incorporar en formulaciones líquidas en forma de compuestos de inclusión, por ejemplo, con ciclodextrinas. Según una realización particular, pueden añadirse agentes dispersantes como adyuvantes adicionales. Para la producción de liofilizados, se pueden utilizar agentes como manita, dextrano, sacarosa, albúmina humana, lactosa, PVP o variedades de gelatina.
[0133] Para la administración parenteral, la composición puede presentarse en forma de una suspensión acuosa o de una solución que puede contener agentes de suspensión y/o agentes humectantes. La composición es ventajosamente estéril. Puede presentarse en forma de una solución isotónica (en particular en relación con la sangre).
[0134] Los compuestos según la invención pueden utilizarse en una composición farmacéutica a una dosis que va de 0,01 mg a 1000 mg al día, administrados en una sola dosis una vez al día o en varias dosis durante el día.
[0135] La dosis administrada diariamente está comprendida ventajosamente entre 5 mg y 500 mg, y más ventajosamente entre 10 mg y 200 mg.
[0136] Sin embargo, puede ser necesario utilizar dosis fuera de estas playas, de lo que podrá darse cuenta el experto en la materia.
[0137] Según un modo particular de la invención, los compuestos para su utilización según la invención se administran en asociación con otro principio activo, en particular un compuesto anticanceroso, citotóxico o no. Así, la composición farmacéutica según la presente invención puede comprender además otro principio activo.
[0138] Así, la composición farmacéutica según la invención comprende al menos un conjugado anticuerpomedicamento tal como se ha definido anteriormente y al menos otro principio activo como producto de combinación para una utilización simultánea, separada o extendida en el tiempo, que puede utilizarse en particular para el tratamiento del cáncer.
[0139] En toda la descripción, incluidas las reivindicaciones, la expresión "con uno" debe entenderse como sinónimo de "con al menos uno", salvo que se especifique lo contrario. Las expresiones "comprendido entre ... y... " y "que va de ... a ... " deben entenderse incluidos los límites, a menos que se especifique lo contrario.
[0140] En la descripción y los ejemplos, la temperatura se expresa en grados Celsius a menos que se indique lo contrario, y la presión es la presión atmosférica, a menos que se indique lo contrario.
[0141] La invención se ilustra más en detalle con los ejemplos no limitativos que se presentan a continuación. EJEMPLOS
Ejemplo 1: Preparación de 4-((3-am¡no-4-metox¡oenilHmet¡l)am¡no) oinolina-2-carbonitrilo
[0142]
1.1 Esquema general
Figure imgf000028_0001
1.2 Preparación del 4-((4-metox¡-3-n¡trofen¡l)(met¡l)am¡no)quinol¡na-2-carbon¡tr¡lo
[0143] En un tubo sellado se añaden sucesivamente el compuesto heterocíclico clorado y el derivado aromático amino en 2 mL de dioxano.
[0144] A continuación, se añade una gota de HCl a la mezcla y el medio de reacción se calienta a 140 °C, agitado, durante 12 horas.
[0145] La mezcla se enfría y luego se neutraliza con NaOHaq. (5N) y la mezcla se extrae con acetato de etilo (3 x 10 mL).
[0146] Las fases orgánicas reunidas se secan en Na2SO4 y se concentran al vacío. El crudo de reacción se disuelve en una solución de DMF (5 mL) que contiene NaH a 0 °C. A esta mezcla se añade al goteo CH3I y el medio de reacción se coloca a temperatura ambiente, bajo agitación, durante 2 horas.
[0147] El crudo de reacción se concentra y purifica mediante cromatografía en columna de sílice.
[0148] Se obtiene el 4-((4-metoxi-3-nitrofenil)(metil)amino) quinolina-2-carbonitrilo en forma sólida con un rendimiento del 56 %.
[0149] La temperatura de fusión medida es de 219,9 - 220,5 °C.
[0150] Caracterización RMN 1H (300 MHz, CDCl3) S: 8,11 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 7,71 (t, J = 8,5 Hz, 1H); 7,61 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 7,58 (d, J = 2,7 Hz, 1H); 7,42 (t, J = 8,5 Hz, 1H); 7,34 (s, 1H); 7,05 (dd, J = 9,1 Hz, J = 2,8 Hz, 1H); 6,98 (d, J = 9,1 Hz, 1H); 3,94 (s, 3H); 3,52 (s, 3H).
[0151] Caracterización 13C NMR (75 MHz, CDCh) S: 153,9 ; 150,0 ; 149,3 ; 142,1 ; 139,9 ; 134,3 ; 130,9 ; 130,8 ; 128.2 ; 127,4 ; 124,5 ; 123,6 ; 118,4 ; 117,6 ; 114,9 ; 114,5 ; 56,9 ; 42,9.
[0152] Caracterización HRMS C18H15N4O3: 335,1144 (calculado); 335,1150 (observado).
[0153] Caracterización IR neat vmax/cm-1: 2363, 2340, 1679, 1625, 1603, 1460, 1275.
1.3 Preparación del 4-((3-amino-4-metox¡fen¡l)(met¡l)am¡no) quinolina-2-carbonitrilo
[0154] En un bicol de 25 ml se añade el compuesto nitro a una mezcla etanol/agua [8/2]. El medio de reacción se calienta a 80 °C y se añade hierro sólido (10 equivalentes) y 3 gotas de HCl al medio de reacción. El conjunto se calienta a 80 °C, agitado hasta la reducción completa del compuesto nitro.
[0155] El crudo de reacción se enfría a temperatura ambiente y se filtra sobre papel de filtro. El filtrado se concentra y purifica mediante cromatografía en columna de sílice y se obtiene el producto reducido.
[0156] Se obtiene el 4-((3-amino-4-metoxifenil)(metil)amino) quinolina-2-carbonitrilo en forma sólida con un rendimiento del 62 %.
[0157] La temperatura de fusión medida es de 84,9 - 92,6 °C.
[0158] Caracterización RMN 1H (300 MHz, CDCl3) S: 7,98 (d, J = 8,4 Hz, 1H); 7,59 (t, J = 9,2 Hz, 2H); 7,26 (d, J = 8,3 Hz, 1H); 6,68 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 6,46 (d, J = 2,5 Hz, 1H); 6,36 (dd, J = 8,5 Hz, J = 2,5 Hz, 1H); 3,88 (s, 2H); 3,84 (s, 3H); 3,42 (s, 3H).
[0159] Caracterización 13C NMR (75 MHz, CDCla) S: 154,5 ; 149,7 ; 144,9 ; 143,5 ; 137,5 ; 134,0 ; 130,1 ; 129,9 ; 126.7 ; 125,6 ; 123,0 ; 118,2 ; 113,6 ; 111,0 ; 110,9 ; 110,7 ; 55,7 ; 43,8.
[0160] Caracterización HRMS C18H17N4O: 305,1402 (calculado); 305,1399 (observado).
[0161] Caracterización IR neat Vmax/cm'1: 3475, 3377, 2960, 2837, 2236, 1570, 1502, 1264.
[0162] Caracterización LC-MS: t.r. 15,36.
[0163] Pureza: 95,47 %.
Ejemplo 2: Preparación de 4-((3-¡odo-4-metox¡oenil)(met¡l)am¡no) quinolina-2-carbonitrilo
2.1 Preparación del 4-(3-¡odo-4-metox¡fen¡l)am¡no)gu¡nol¡na-2-carbon¡tr¡lo
[0164]
Figure imgf000029_0001
[0165] En un tubo sellado se mezclan 4-cloroquinolina-2-carbonitrilo (376 mg, 2,00 mmoles, 1 equivalente), y 3-iodo-4-metoxianilina (500 mg, 2,00 mmoles), dioxano (10 mL) y HCl concentrado (5 gotas).
[0166] La mezcla se calienta una noche a 140 °C.
[0167] Después de enfriar el medio de reacción, la mezcla se neutraliza hasta pH neutro y se extrae con acetato de etilo. Las fases orgánicas se secan en MgSO4.
[0168] El residuo bruto se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano: acetato de etilo 030 %).
[0169] El 4-(3-iodo-4-metoxifenil)amino)quinolina-2-carbonitrilo se aísla en forma de un sólido amarillo con un rendimiento del 51 %.
[0170] Caracterización 1H RMN (300 MHz, CDCh) S: 8,11 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 7,92 (d, J = 7,7 Hz, 1H); 7,86 -7,74 (m, 2H); 7,71 - 7,60 (m, 1H); 7,33 (dd, J = 8,3; 2,7 Hz, 1H); 7,00 - 6,88 (m, 2H); 6,73 (s, 1H); 3,98 (s, 3H).
[0171] Caracterización HRMS (ESI+): m/z para C17H13N3OI [M+H]+ 402,0103 (calculado); 402,0113 (encontrado).
2.2 Preparación de 4-((3-¡odo-4-metox¡fen¡l)(met¡l)am¡no)quinol¡na-2-carbon¡tr¡lo
[0172]
Figure imgf000030_0001
[0173] NaH (70,0 mg, 2,17 mmoles) se añade a una solución de 4-((3-iodo-4-metoxifenil)amino) quinolina-2-carbonitrilo (219 mg, 0,54 mmoles) en DMF (5 mL) a 0 °C. CH3I (305 mg, 2,17 mmoles) se añade entonces gota a gota. La mezcla se agita durante 30 minutos a 0 °C.
[0174] La mezcla se lleva a temperatura ambiente, se diluye con agua y luego se extrae con acetato de etilo y se seca en MgSO4.
[0175] El residuo bruto se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano: acetato de etilo 040 %).
[0176] El compuesto 4-((3-iodo-4-metoxifenil)(metil)amino)quinolina-2-carbonitrilo se aísla bajo fricción de un sólido amarillo con un rendimiento del 71 %.
[0177] Caracterización 1H RMN (300 MHz, CDCla) S: 8,08 (d, J = 8.4 Hz, 1H); 7,79 - 7,51 (m, 3H); 7,48 - 7,21 (m, 2H); 6,92 (dd, J = 8,7; 2,7 Hz, 1H); 6,73 (d, J = 8,8 Hz, 1H); 3,88 (s, 3H); 3,48 (s, 3H).
[0178] Caracterización 13C RMN (75 MHz, CDCh) S: 155,49 ; 154,17 ; 149,84 ; 144,02 ; 134,25 ; 134,19 ; 130,56 ; 130,29 ; 127.41 ; 125,07 ; 124,27 ; 123,06 ; 117,91 ; 112,35 ; 111,28 ; 86,64 ; 56,66 ; 43,64.
[0179] Caracterización HRMS (ESI+): m/z C18H15N3OI [M+H]+ 416,0260 (calculada); 416,0267 (encontrada).
[0180] Caracterización IR (neat): 1571, 1562, 1482, 1430, 1279, 1109, 808, 766, 713, 603 cm'1.
[0181] Punto de fusión = 175 - 180 °C.
Ejemplo 3: Preparación de (E)-5-(5-(((2-cianoquinol-4-il)(metil) amino)-2-methoxyphenyt)-N-hidroxipent- 4-enamida
3.1 Preparación de N-((tetrahidro-2H-p¡ran-2-¡l)oxi)pent-4-enam¡da
[0182]
Figure imgf000031_0001
[0183] Un equivalente de ácido carboxílico se mezcla con un equivalente de NHTHP en DCM. A continuación se añade un equivalente de DCC. La mezcla se agita una noche a temperatura ambiente y luego se lava con una solución saturada de bicarbonato y agua. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano:acetato de etilo 1 :1 ).
[0184] El N-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)pent-4-enamida en forma de sólido blanco se obtiene con un rendimiento del 86 %.
[0185] Caracterización 1H RMN (300 MHz, DMSO) S: 10,93 (s, 1H); 5,78 (dq, J = 10,6; 6,6 Hz, 1H); 5,00 (dd, J = 21,1; 13,7 Hz, 2H); 4,80 (s, 1H); 3,92 (m, 1H); 3,50 (m, 1H); 2,24 (m, 2H); 2,08 (m, 2H); 1,69 -1,51 (m, 6H).
3.2 Preparación de (E)-5-(5-(((2-c¡anoqu¡nol-4-¡l)(met¡l)amino)-2-metox¡fen¡l)-N-h¡drox¡pent-4-enam¡da
[0186]
Figure imgf000031_0002
[0187] En un tubo sellado y purgado con argón, se añaden 4-(3-iodo-4-metoxifenil)(metil) amino) quinolina- 2­ carbonitrilo tal como se prepara en el ejemplo 2 anterior (30,0 mg, 0,072 mmoles), N-((tetrahidro-2H-piran-2- yl)ox¡) pent-4-enamida (42,0 mg, 0,20 mmoles), tri(o-tolil)fosfina (7,20 mg, 0,023 mmoles), Pd(oAc)2 (6,0 mg, 0,026 mmoles), EtN3 (49,0 mg, 0,48 mmoles) y DMF (1 mL), la mezcla se desgasifica y se calienta una noche a 100 °C.
[0188] El medio de reacción se devuelve a temperatura ambiente diluido con DCM y a continuación se filtra sobre celite, el filtrado se evapora. La formación del compuesto intermedio (véase el diagrama anterior) es confirmada por LC/MS, el compuesto se utiliza en la siguiente etapa sin purificación.
[0189] En una solución del compuesto intermedio (ver diagrama anterior) en dioxano anhidro (1 mL), se añade una solución de HCl en dioxano 4N (0,5 mL). La mezcla se agita durante 30 minutos a temperatura ambiente y luego se evapora a temperatura ambiente y se purifica mediante HPLC utilizando un gradiente de acetonitrilo en agua. Después de la liofilización, el compuesto (E)-5-(5-((2-cianoquinol-4-il)(metil) amino)-2-metoxifenil) -N-hidroxipent-4-enamida se obtiene como un sólido amarillo con un rendimiento del 30 % .
[0190] Caracterización HRMS (ESI+): m/z C23H23N4O3 [M+H]+: 403,1770 (calculado) 403,1768 (encontrado).
[0191] Caracterización IR (neat): 2947, 1641, 1569, 1491,1235, 1031, 970, 758 cm1.
[0192] Pureza (HPLC): 100 %.
[0193] Caracterización 1H RMN (400 MHz, MeOD) S: 7,89 (d, J = 8,3 Hz, 1H); 7,61 (t, J = 7,4 Hz, 1H); 7,53 -4,45 (m, 1H); 7,34 (m, 1H); 7,24 - 7,23 (m, 3H); 6,87 (m, 3H); 6,67 (d, J = 15,9 Hz, 1H); 6,17 -6,04 (m, 1H); 3,81 (s, 3H); 3,48 (s, 4H); 2,46 (dd, J = 13,5; 6,7 Hz, 2H); 2,28 - 2,16 (m, 2H).
[0194] Caracterización 13C RMN (101 MHz, MeOD) S: 172,04 ; 156,07 ; 155,65 ; 150,60 ; 144,35 ; 134,94 ; 131,31 ; 131,22 ; 130,31 ; 129,22 ; 127,66 ; 126,91 ; 126,25 ; 125,32 ; 123,70 ; 123,63 ; 118,85 ; 113,20 ; 111,66 ; 56,24 ; 44,45 ; 33,52 ; 30,33.
[0195] Punto de fusión = 177 - 182 °C.
Ejemplo 4: Preparación de 5-(5-((2-c¡anoqu¡nol-4-¡l)(met¡l)am¡no)-2-metoxvfen¡l)-N-h¡drox¡pent-4- ynamida 4.1 Preparación de N-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)pent-4-dinamida
[0196]
Figure imgf000032_0001
[0197] Un equivalente de ácido carboxílico se mezcla con un equivalente de NHTHP en DCM. A continuación se añade un equivalente de DCC. La mezcla se agita una noche a temperatura ambiente y luego se lava con una solución saturada de bicarbonato y agua. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano:acetato de etilo 1:1).
[0198] Se obtiene N-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)pent-4-inamida en forma de un sólido blanco con un rendimiento del 76 %.
[0199] Caracterización 1H RMN (300 MHz, DMSO) S: 11,04 (s, 1H); 4,80 (s, 1H); 3,91 (s, 1H); 3,50 (d, J = 11,6 Hz, 1H); 2,80 (s, 1H); 2,35 (d, J = 6,2 Hz, 2H); 2,18 (t, J = 7,0 Hz, 2H); 1,58 (m, 6H).
4.2 Preparación de 5-(5-((2-c¡anogu¡nol¡n-4-¡l)(met¡l)am¡no)-2-metox¡fen¡l)-N-h¡drox¡pent-4-d¡nam¡da
[0200]
Figure imgf000032_0002
[0201] En un tubo sellado y purgado con argón, se añaden 4-((3-iodo-4-methoxyphenyl)(methyl)amino) quinolina- 2-carbonitrilo tal como se prepara en el ejemplo 2 anterior (30,0 mg, 0,072 mmoles), N-((tetrahydro-2H-pyran-2- yl)oxy) pent-4-inamida (28,0 mg, 0,144 mmoles), PdCl2P(Ph3)2 (12 mg, 0,017 mmoles), Cul (7 mg, 0,036 mmoles), Y3N (21,0 mg, 0,22 mmoles) y DMF (1mL).
[0202] La mezcla se desgasifica y se agita una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluye con DCM y luego se filtra en celite, el filtrado se evapora. La formación del compuesto intermedio (véase el diagrama anterior) es confirmada por LC/MS, el compuesto se utiliza en la siguiente etapa sin purificación.
[0203] En una solución del compuesto intermedio (ver esquema anterior) (29,0 mg, 0,06 mmoles) en dioxano anhidro (1 mL), se añade una solución de HCl en dioxano 4N (0,5 mL). La mezcla se agita durante 30 minutos a temperatura ambiente, luego se evapora a temperatura ambiente y se purifica mediante HPLC utilizando un gradiente de acetonitrilo en agua.
[0204] Después de la liofilización, el compuesto 5-(5-(((2-cianoquinol-4-il)(metil)amino) -2-metoxifenil) -N-hidroxi-pent-4-dinamida se obtiene como un sólido amarillo con un rendimiento del 15%.
[0205] Caracterización 1H RMN (400 MHz, MeOD) S: 8,54 (s, 1H); 7,93 (d, J = 8,3 Hz, 1H); 7,72 -7,49 (m, 2H); 7,30 - 7,27 (m, 2H); 7,18 - 6,85 (m, 3H); 3,83 (s, 3H); 3,47 (s, 3H); 2,70 (s, 2H); 2,34 (s, 2H).
[0206] Caracterización 13C RMN (101 MHz, DMSO) S: 167,20 ; 156,84 ; 153,86 ; 149,09 ; 142,69 ; 133,65 ; 130,27 ; 129,92 ; 128,30 ; 127,21 ; 125,14 ; 125,05 ; 122,31 ; 118,06 ; 113,16 ; 112,43 ; 112,11 ; 94,05 ; 76,58 ; 55,84 ; 43,65 ; 40,15 ; 39,94 ; 39,73 ; 39,52 ; 39,31 ; 39,10 ; 38,89 ; 31,49 ; 15,41.
[0207] Caracterización HRMS (ESI+): m/z C23H21N4O3 [M+H]+ 403,1614 (calculada); 403,1621 (encontrada).
[0208] Caracterización IR (neat): 2987, 1644, 1496, 1066, 766 cm1.
[0209] Pureza (HPLC): 100 %.
[0210] Punto de fusión = 170 - 175 °C.
Ejemplo 5: Preparación de (E)-3-(5-((2-c¡anoau¡nolin-4-¡l)(methyl) amino)-2-methoxvphenvl)-N-hydroxvacrvlamide
5.1 Preparación de N-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)acrilamida
[0211]
Figure imgf000033_0001
[0212] Un equivalente de ácido carboxílico se mezcla con un equivalente de NHTHP en DCM. A continuación se añade un equivalente de DCC. La mezcla se agita una noche a temperatura ambiente y luego se lava con una solución saturada de bicarbonato y agua. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano:acetato de etilo 1 :1 ).
[0213] N-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)acrilamida se obtiene como un sólido blanco con un rendimiento del 61 %.
[0214] Caracterización 1H RMN (200 MHz, CDCh) S: 9,41 (s, 1H); 6,40 (d, J = 16,7 Hz, 1H); 6,15 (s, 1H); 5,69 (d, J = 10,4 Hz, 1H); 4,97 (s, 1H); 3,96 (t, J = 8,1 Hz, 1H); 3,59 (dd, J = 11,3; 4,0 Hz, 1H); 1,77 (d, J = 10,9 Hz, 3H); 1,58 (s, 3H).
5.2 Preparación de (E)-3-(5-((2-cianoquinol-4-il)(metil)amino)-2-metoxifenil)-N-hidroxiacrilamida
[0215]
Figure imgf000033_0002
[0216] En un tubo sellado y purgado con argón, se añaden 4-((3-iodo-4-metoxifenil)(metil)amino)quinolina- 2-carbonitrilo tal como se prepara en el ejemplo 2 anterior (30,0 mg, 0,072 mmoles), N-((tetrahidro-2H-piran-2-yl)oxi)acrilamida (34,0 mg, 0,20 mmoles), tri(o-tolil)fosfina (7,20 mg, 0,023 mmoles), Pd(OAC)2 (6,0 mg, 0,026 mmoles), EtN3 (49,0 mg, 0,48 mmoles) y DMF (1 mL). La mezcla se desgasifica y se calienta una noche a 100 °C.
[0217] El medio de reacción se devuelve a temperatura ambiente diluido con DCM y a continuación se filtra sobre celite, el filtrado se evapora. La formación del compuesto intermedio (véase el diagrama anterior) es confirmada por LC/MS, el compuesto se utiliza en la siguiente etapa sin purificación.
[0218] En una solución del compuesto intermedio (ver diagrama anterior) en dioxano anhidro (1 mL), se añade una solución de HCl en dioxano 4N (0,5 mL). La mezcla se agita durante 30 minutos a temperatura ambiente, luego se evapora a temperatura ambiente y se purifica mediante HPLC utilizando un gradiente de acetonitrilo en agua.
[0219] Después de la liofilización, el compuesto (E)-3-(5-((2-cianoquinol-4-il)(metil)amino)-2-metoxifenil)-N-hydroxiacrilamida se obtiene como un sólido amarillo con un rendimiento del 55 %.
[0220] Caracterización 1H RMN (300 MHz, MeOD) S: 7,94 (d, J = 8,2 Hz, 1H); 7,82 -7,48 (m, 3H); 7,44 (s, 1H); 7,29 (s, 2H); 7,07 (dd, J = 29,0; 8,9 Hz, 2H); 6,42 (d, J = 17,0 Hz, 1H); 4,85 (pico correspondiente a la sal de hidrocloruro recubierta con agua), 3,90 (s, 3H); 3,53 (s, 3H).
[0221] Caracterización 13C RMN (75 MHz, MeOD) S: 165,03 ; 155,74 ; 154,66 ; 149,31 ; 143,14 ; 134,58 ; 133,72 ; 130,06 ; 129,10 ; 126,58 ; 125,39 ; 124,73 ; 123,80 ; 122,40 ; 118,50 ; 117,41 ; 112,46 ; 110,98 ; 55,02 ; 42,86.
[0222] Caracterización HRMS (ESI+): m/z C21H19N4O3 [M+H]+ 375,1457 (calculada); 375,1455 (encontrada).
[0223] Caracterización IR (neat): 3213, 1567, 1492, 1427, 1241, 1105, 977, 762 cm-1.
[0224] Pureza (HPLC): 100 %.
[0225] Punto de fusión = 215 -210 °C.
Ejemplo 6: Comparación de las actividades antiproliferativas de los compuestos de la invención (referenciados como "ICON") en formato libre no conjugados en líneas celulares cancerosas
[0226] Las actividades CI50 (o "IC50" en inglés) de los compuestos según la invención 4-(3-amino-4-metoxifenonil)(metil)amino) quinolina-2-carbonitrilo (ICQN-1), 5-(5-((2-cianoquinol-4-il)(metil)amino) -2-metoxifenil)-N-hidroxipent-4-dinamida (ICQN-2) y (E)-3-(5-((2-cianoquinol-4-il)(metil)amino) -2-metoxifenil) -N-hidroxia-crilamida (ICQN-3) se han comparado con compuestos de la técnica anterior y con un compuesto de referencia comercial y clínica en particular MMAE (monometiluristatina E).
[0227] Las actividades CI50 se midieron en diferentes líneas celulares cancerosas HCT116 (tumor colorrectal), A549 (cáncer de pulmón no microcítico), NCI-N87 (tumor gástrico), Mia-Paca-2 (tumor de páncreas), K562R (leucemia mieloide crónica), SKOV3 (tumor de ovario), SκΒr3 (tumor de mama, sobreexpresión Her2), MCF7 (tumor de mama) y MDA-MB231 (tumor de mama).
[0228] Las líneas de células cancerosas se obtuvieron de la American Culture Collection (ATCC, Rockville, MD) o de la colección alemana de microorganismos y cultivos celulares del Instituto Leibniz (DSMZ, Braunschweig-Alemania) o de la colección europea de cultivos celulares (ECACC, Inglaterra). Las líneas celulares cancerosas se cultivaron de acuerdo con las instrucciones del proveedor.
[0229] El carcinoma colorrectal humano HCT-116, el carcinoma de mama SK-BR3 y el carcinoma ovárico SK-OV-3 se cultivaron en 5A Gibco McCoy suplementado con 10 % de suero de ternera fetal (FCS) y 1 % de glutamina.
[0230] Las células de carcinoma pulmonar A549, de leucemia mieloide K562R, y las células de carcinoma gástrico NCI-N87 fueron cultivadas en medio RPMI 1640 de Gibco suplementado con 10 % de suero de becerro fetal (FCS) y 1 % de glutamina. Se cultivaron células de carcinoma de Mia-Paca2 en medio DMEM de Gibco con 10 % de suero de becerro fetal (FCS) y 1 % de glutamina.
[0231] Las células de adenocarcinoma mamario MDA-MB231 y MCF7 se cultivaron en medio de cultivo Gibco RPMI1640 suplementado con 10 % de suero de ternera fetal (FCS) y 1 % de glutamina.
[0232] Las células se contaron utilizando una Vi-cell XR (Beckman Coulter) y su viabilidad se evaluó mediante la exclusión de colorante azul tripano al 0,25 %. Se probaron para la presencia de micoplasmas antes de experimentos con el kit de detección de PCR Mycoplasma (Applied Biological Materials Inc., Canadá) de acuerdo con las instrucciones del fabricante y solo se utilizaron células libres de micoplasma para el estudio. Las líneas celulares se mantuvieron a 37 °C en una atmósfera humedecida con un 5% de CO2.
[0233] Para la determinación de CI50, las células se sembraron en placas de 96 pocillos (3 x 103 células / pocillo) que contenían 100 μL de medio de crecimiento. Después de 24 horas de cultivo, las células fueron tratadas con los compuestos probados en 10 concentraciones finales diferentes. Cada concentración se obtuvo a partir de diluciones en serie en medio de cultivo a partir de la solución madre. Las células de control fueron tratadas con el vehículo. Los experimentos se realizaron en tres ejemplares.
[0234] Las mediciones se realizaron después de 72 horas de tratamiento con la prueba CellTiter Glo (Promega) que permite medir por luminiscencia (cuantificación del ATP) el número de células vivas utilizando un lector de microplacas PolarStar Omega (BMG- Labtech).
[0235] Las curvas dosis-respuesta se trazaron con el software Graph Prism y los valores CI50 se calcularon utilizando el software Graph Prism a partir de curvas polinómicas (ecuaciones logísticas de cuatro o cinco parámetros).
[0236] Los resultados se describen en la tabla 1 mostrada a continuación.
[0237] Como muestran estos resultados, los compuestos según la invención poseen muy buenas actividades inhibitorias contra numerosas líneas celulares cancerosas.
Tabla 1
Figure imgf000035_0001
[0238] Los resultados de CI50 en las líneas celulares HCT116, A549, NCI-N87, Mia-Paca-2, K562R, MCF7 y MDA-MB231 son globalmente mucho mejores que los obtenidos con el compuesto de referencia comercial y clínica MMAE. Debe recordarse que la elección de las líneas celulares se basa en un amplio espectro de indicaciones de cáncer sólido y líquido que representan una necesidad médica no satisfecha en la que los anticuerpos conjugados serían relevantes. Esta citotoxicidad observada en un amplio panel es también un criterio de éxito comercial para los payloads.
Ejemplo 7: Análisis comparativo de las actividades antiproliferativas de compuestos de la invención con el compuesto de referencia comercial y clínico MMAE (en formato no conjugado)
[0239] El ratio de IC50 se ha establecido entre un compuesto de la invención (ICQN-1) y el MMAE. Cuanto más elevado es el ratio de IC50, más importante es el potencial de mejora terapéutica y el potencial de éxito comercial.
Tabla 2
Figure imgf000035_0002
[0240] Así, los compuestos según la invención demuestran una ventaja muy significativa frente al MMAE. A modo de ejemplo, en el marco de la línea NCI-N87 (cáncer gástrico) ICQN1 es 22 veces más eficaz que el MMAE. Ejemplo 8: Actividades antiproliferativas con respecto a los compuestos de la técnica anterior que tienen un núcleo de quinoleína y un ciclo aromático unidos entre sí por un grupo N-Me (L. Chen. et al. Eur. J. Med. Chem.
2017.738,1114).
[0241] Como parte del trabajo de Chen et al. anterior, entre las moléculas citadas, el compuesto 13b presenta la siguiente estructura:
Figure imgf000036_0001
[0242] Este compuesto 13b muestra una IC50 de 3,2 nM en la línea MDA-MB-231.
[0243] La tabla 3 siguiente reúne datos comparativos sobre 7 líneas celulares de un compuesto según la invención (ICQN-1 (4-((3-amino-4-metoxifenil) (metil)amino) quinolina-2-carbonitrilo) y del compuesto 13b descrito por L. Chen. et al. Eur. J. Med. Chem. 2017, 138, 1114
Tabla 3
Figure imgf000036_0003
[0244] Los compuestos de la invención, de manera sorprendente, tienen una actividad citotóxica globalmente muy superior a la del compuesto 13b. La actividad obtenida tras la sustitución del grupo Me por CN en la posición 2 de la quinolina es inesperada y no podía ser predicha por los expertos en la materia. De hecho, según L. Chen. et al, así como los expertos en la materia, el metil en la posición 2 de la quinolina se consideró necesario para mantener la actividad inhibitoria. Por otra parte, según L. Chen. et al, no se menciona ninguna conjugación o aplicación en el marco de una estrategia ADC.
Ejemplo 9: Actividades antiproliferativas con respecto a los compuestos de la técnica anterior antes de una estructura de tipo diheteroarilmetilamina (Alami et al.)
[0245] Según Alami et al. Eur. J. Med. Chem. 2019, 168, 176-188, en comparación con las moléculas 1a y 1b (estructuras a continuación), el experto en la materia constató que reemplazar Me por CN en la posición 2 de la quinolina conducía a una disminución drástica de la actividad citotóxica (por un factor 170 en la línea celular HCT116).
Figure imgf000036_0002
[0246] Ahora bien, como se sostiene en el ejemplo 8 anterior, la sustitución de un Me por CN en la posición 2 de la quinolina induce una mejora sorprendente de la citotoxicidad (de un factor 10). El experto en la materia no esperaba ni habría podido prever tal actividad de los compuestos según la presente invención.
[0247] Además, debe tenerse en cuenta que el compuesto 1a según Alami et al. no puede considerarse un payload como parte de una estrategia ADC, ya que no tiene un punto de anclaje para unirse a un linker.
Ejemplo 10: Actividades antiproliferativas con respecto a los compuestos de la técnica anterior que tienen una estructura de tipo D¡(heteroar¡l)ar¡let¡leno
[0248] Según Alami et al. J. Med. Chem. 2019, 62, 1902-1916, comparando dos a dos las moléculas 4f/4j y 4g/4k que llevan un doble enlace en lugar del grupo N-Me, el experto en la materia habría encontrado que reemplazar Me por CN en la posición 2 de la quinolina no permitía predecir una mejora de la actividad citotóxica IC50 por debajo de 1 nM para la línea HCT116. El experto en la materia constataba una pérdida de actividad al pasar del compuesto 4f (Me en la posición 2) al compuesto 4j (CN en la posición 2).
Tabla 4
Figure imgf000037_0002
Ejemplo 11: Análisis comparativo de las actividades antiproliferativas de un compuesto de invención con respecto al payload anterior ICOO-1
[0249] Del conjunto de los compuestos identificados en el seno de la técnica anterior, ICQO-1 es el único que presenta la característica de un payload según los expertos en la materia. ICQO es un compuesto de la solicitud PCT/EP2018/058168 con la siguiente estructura:
Figure imgf000037_0001
[0250] El ratio de IC50 se ha establecido entre un compuesto de la invención (ICQN-1) y el compuesto anterior ICQO-1. Cuanto más elevado es el ratio, más importante es la potencial actividad terapéutica in vivo.
Tabla 5
Figure imgf000038_0003
[0251] Los ratios indican que los compuestos de la invención (ICQN) demuestran una ventaja muy significativa frente a los compuestos de tipo ICQO-1. A modo de ejemplo, en el marco de la línea HCT-116 (cáncer colorrectal) ICQN-1 es 44 veces más eficaz que el compuesto payload ICQO-1. Esta diferencia significativa era particularmente imprevisible e inesperada para los expertos en la materia.
Ejemplo 12 - Análisis comparativo de las actividades antiproliferativas de ICON con respecto a anteriores compuestos de quinoleína (solicitud US 2006/074187, ejemplo 21)
[0252] VB118 es un compuesto de quinoleína (solicitud US 2006/074187, ejemplo 21) descrito que ha sido sintetizado para ser comparado con compuestos según la invención.
Tabla 6
Figure imgf000038_0002
[0253] La adición de la función nitrilo y de la función amina -NH2 en posición 2 de la quinolina sobre los compuestos según la invención (ICQN), con respecto a los compuestos anteriores del tipo VB118, induce un aumento sorprendente, superior de al menos 2 Log de actividad, sobre un amplio panel de líneas celulares y de indicaciones cancerosas.
Ejemplo 13: Análisis comparativo de las actividades antiproliferativas de compuestos de la invención (ICQN) con respecto al compuesto de referencia comercial MMAE y al payload ICQO-1 sobre células cancerosas resistentes (perfil MDR:Multi Drug Resitance)
[0254] Las células K562R (leucemia mieloide crónica) tienen un perfil MDR que les permite resistir varios compuestos quimioterapéuticos, incluido el compuesto de referencia MMAE.
Tabla 7
Figure imgf000038_0001
[0255] Los expertos en la materia en el campo de los payloads y los medicamentos conjugados observan que un payload como MMAE con una IC50 de 35 nM tiene menos interés terapéutico que un compuesto según la invención. Un payload, para ser eficaz una vez conjugado tiene preferentemente una actividad sub-nanomolar sobre la línea cancerosa apuntada. Se constata que el compuesto según la invención ICQN-1 presenta no solamente una superioridad 74 veces más importante que el MMAE sino también 4.2 veces más que el compuesto ICQO-1. Los compuestos según la invención presentan una actividad particularmente sorprendente pero también presentan una diferenciación terapéutica para los cánceres que poseen un perfil de multi-resistencia (MDR).
Ejemplo 14 - Preparación de anticuerpos conjugados
[0256] Se obtuvieron diferentes compuestos "Toxic-Linker" (a base de valina-citrulina, escindibles por vía enzimática Cathepsina B) y no escindibles como se ilustra en la tabla 8 siguiente:
Tabla 8
Figure imgf000039_0001
(continuación)
Figure imgf000040_0001
[0257] Los compuestos VB179, VB185, VB199 y VB279 se obtuvieron por activación de la función NH2 de compuestos de fórmula (I) según la invención (ICQN-1) por el cloroformiato de paranitrofenilo. El intermediario formado reacciona a continuación con la función alcohol bencílico del enlace MC-Val-Cit-PABA.
[0258] El compuesto VB277 ha sido preparado por activación de la función alcohol bencílico del linker MC-Val-Cit-PABA en forma triflato y luego reacción en medio básico con el compuesto NI313.
[0259] Los compuestos VB284 y VB289 se prepararon mediante acoplamiento peptídico entre ICQN-1 y una función ácida.
VB179:
[0260] 1H NMR (400 MHz, DMSO-cfe) S; 8.58 (s, 1H), 8.06 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.79 (d,
J = 8.4 Hz, 1H), 7.67 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.58 (s, 2H), 7.56 (s, 1H), 7.49 (dd, J = 8.6, 1.1 Hz, 1H), 7.34 (m,
1H), 7.31 (s, 1H), 6.98 (s, 2H), 6.94 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.74 (dd, J = 8.7, 2,7 Hz, 1H), 5.97 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.40 (s, 2H), 5.00 (s, 2H), 4.38 (td, J = 8.2, 5,5 Hz, 1H), 4.18 (dd, J = 8.3, 7.1 Hz, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.43 (s, 3H), 2.97 (m, 2H), 2.15 (m, 2H), 1.97 (dq, J = 13.5, 6,7 Hz, 1H), 1.70 (m, 1H), 1.57 (m, 1H), 1.52 - 1.47 (m, 2H), 1.45 (d, J = 7.3 Hz, 2H),
1.42 - 1.30 (m, 2H), 1.23 - 1.14 (m, 2H), 0,85 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.82 (d, J = 6.7 Hz, 3H). HRMS (ESI): m/z [M H] calcd. for C47H55N1OO9: 903,4153 Found: 903,4156. Purity: 98.2 %
VB 199:
[0261] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) S 8.58 (s, 1H), 8.06 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.79 (d,
J = 8.4 Hz, 1H), 7.67 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.58 (s, 2H), 7.56 (s, 1H), 7.49 (dd, J = 8.6, 1.1 Hz, 1H), 7.34 (m,
1H), 7.31 (s, 1H), 6.98 (s, 2H), 6.94 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.74 (dd, J = 8.7, 2.7 Hz, 1H), 5.97 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.40 (s, 2H), 5.00 (s, 2H), 4.38 (td, J = 8.2, 5.5 Hz, 1H), 4.18 (dd, J = 8.3, 7.1 Hz, 1H), 3.77 (s, 3H), 3,62 -3,47 (m, 102H), 3.43
(s, 3H), 2.97 (m, 2H), 1.97 (dq, J = 13.5, 6.7 Hz, 1H), 1.70 (m, 1H), 1.57 (m, 1H), 1.42 - 1.30 (m, 2H), 0.85 (d, J = 6.7
Hz, 3H), 0.82 (d, J = 6.7 Hz, 3H). HRMS (ESI): m/z [M H] calcd. for C52H65N1OO13: 1037.4733 Found: 1037.4727.
Purity: 96.0 %
VB277
[0262] HRMS (ESI): m/z [M H] calcd. for C49H57N1OO9: 929.4310 Found: 929.4312.
VB284
[0263] 1H NMR (300 MHz, CDCla) S; 8.48 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.73 -7.55 (m, 2H), 7.21 (s, 1H), 6.74 (d, J = 8.7 Hz, 1 H), 6.71 (s, 2H), 6.53 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 3.90 (s, 2H), 3.57 (m, 2H), 3.53 (s, 3H), 2.43 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.76 (m, 4H), 1.42 (m, 2H). HRMS (ESI): m/z [M H] calcd. for C28H28N5O4: 498.2141 Found:498.2140. Purity: 100 %
VB289
[0264] 1H NMR (300 MHz, CDCla) S 8.46 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.70 -7.54 (m, 2H), 7.34 - 7.23 (m, 1H), 7.18 (s, 1H), 6.71 (s, 2H), 6.45 (dd, J = 8.6, 2.5 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.46 (s, 3H), 3.40 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 2.30 -2.16 (m, 1H), 2.10 -1.97 (m, 2H), 1.87 - 1.76 (m, 2H), 1.54 (ddd, J = 25.0, 13.1, 3.0 Hz, 2H), 1.16 - 0.98 (m, 2H), 0.88 (m, 1H). HRMS (ESI): m/z [M H] calcd. for 524.2298 C30H30N5O4: Found: 524.2300. Purity: 93 % Los anticuerpos conjugados se obtienen según el protocolo descrito ejemplo 9 de la solicitud PCT/EP2018/058168, (párrafo 158 en particular).
Ejemplo 15: Evaluación de las actividades de los anticuerpos conjugados obtenidos
[0265] Un compuesto según la invención (ICQN-1) se ha acoplado a diferentes linker y luego los toxic linker se han conjugado con el anticuerpo Trastuzumab con el fin de obtener la preparación de diferentes ADC. Entre los ADC preparados, el siguiente ADC Trastuzu-mab-Mal-PEG4-Val-Cit-PABC-ICQN-1 en DAR4 mostró actividad nanomolar in vitro en la línea de carcinoma gástrico NCI-N87 (IC50 = 9 nM). A modo de comparación, el ADC de referencia con el payload de referencia MMAE: Trastuzumab-Mal-Val-Cit-PABC-MMAE mostró una actividad citotóxica casi equivalente (IC50 de 6 nM).

Claims (20)

REIVINDICACIONES
1. Compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000042_0001
en la que:
- R1 representa un grupo -NH2, -NHCORa, -NHCOORb, -(C2-C6)alquenileno-CO-NH-OH, -(C 2-C6)alquinileno- CO-NH-OH o -OH;
- R2 representa un grupo -OCH3, -OCH2CH3, -SCH3, -SCH2CH3 o -OCHF2;
- R3 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORc;
- R4 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl ou -ORd;
- Ra representa un grupo -(C1-C5)alquilo o -CF3;
- Rb representa un grupo -(C1-C5)alquilo o -CF3;
- Rc representa un grupo -(C1-Cs)alquilo o -CF3; y
- Rd representa un grupo -(Ci-C5)alquilo o -CF3;
en estado de base o de ácido o de sales de ácidos o de bases o en forma de hidrato o de solvato.
2. Compuesto según la reivindicación 1, caracterizado porque Ri representa un grupo -NH2, -NHCORa, -NHCOORb, o -OH, y/o R2 representa un grupo -OCH3, -OCH2CH3, o -OCHF2, y/o R3 representa un átomo de hidrógeno y/o R4 representa un átomo de hidrógeno.
3. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, caracterizado porque es de fórmula (Ia):
Figure imgf000042_0002
en la que:
- R1 representa un grupo -NH2, -NHCORa, -NHCOORb, -(C2-C6)alquenileno-CO-NH-OH, -(C 2-C6)alquinileno- CO-NH-OH o -OH;
- R2 representa un grupo -OCH3, -OCH2CH3, -SCH3, -SCH2CH3 o -OCHF2;
- Ra representa un grupo -(C1-C5)alquilo o -CF3; y
- Rb representa un grupo -(C1-C5)alquilo o -CF3;
en estado de base o de ácido o de sales de ácidos o de bases o en forma de hidrato o de solvato.
4. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque se elige entre :
Figure imgf000043_0001
5. Compuesto según la reivindicación 1, caracterizado porque es de fórmula (Ib):
Figure imgf000043_0002
en la que:
- R5 representa un átomo de hidrógeno, un grupo -CORa, o -COORb;
- R2 representa un grupo -OCH3, -OCH2CH3, -SCH3, -SCH2CH3 o -OCHF2;
- R3 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORc, y preferentemente un átomo de hidrógeno.
- R4 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORd, y preferentemente un átomo de hidrógeno.
- Ra representa un grupo -(C1-C5)alquilo o -CF3;
- Rb representa un grupo -(C1-C5)alquilo o -CF3;
- Rc representa un grupo -(C1-C5)alquilo o -CF3; y
- Rd representa un grupo -(C1-C5)alquilo o -CF3;
en estado de base o de ácido o de sales de ácidos o de bases o en forma de hidrato o de solvato.
6. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque R1 representa un grupo -(C2-C6) alquenileno-CO-NH-OH o -(C2-C6)alquino-CO-NH-OH, y preferentemente R1 representa un grupo -CH= CH-CO-NH-OH, -CH=CH-CH2-CH2 -CO-NH-OH o -C=C-CH2-CH2-CO-NH-OH.
7. Compuesto según la reivindicación 1, caracterizado porque es de fórmula (Ic):
Figure imgf000043_0003
en la que:
- W representa -CH=CH- o -C=C-;
- n es 0, 1, 2, 3 o 4, y preferiblemente n es 0 o 2;
- R2 representa un grupo -OCH3, -OCH2CH3, -SCH3, -SCH2CH3 o -OCHF2;
- R3 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORc, y preferentemente un átomo de hidrógeno.
- R4 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORd, y preferentemente un átomo de hidrógeno.
- Rc representa un grupo -(C1-C5)alquilo o -CF3; y
- Rd representa un grupo -(Ci-C5)alquilo o -CF3;
en estado de base o de ácido o de sales de base o en forma de hidrato o de solvato.
8. Compuesto según la reivindicación 7, caracterizado porque se elige entre :
Figure imgf000044_0001
9. Procedimiento de preparación de un compuesto según la reivindicación 1, en el que R1 representa un grupo -NH2 o -OH, caracterizado porque:
- se pone en presencia un compuesto de fórmula (B):
Figure imgf000044_0002
en el que R2 es tal como se define según la reivindicación 1 y Rg representa un grupo -NO2 o -O-Benzoyle; con un compuesto de fórmula (D):
Figure imgf000044_0003
en el que R3 y R4 son tales que se definen según la reivindicación 1 ;
para formar, por una reacción de sustitución nucleófila aromática, o por una reacción de acoplamiento en presencia de un catalizador, en particular a base de paladio, el compuesto de fórmula (E):
Figure imgf000045_0001
en el que R3, R4 y R2 son tales como se definen según la reivindicación 1, y R10 representa un grupo -NO2 o -O-Bencilo;
- se somete el compuesto de fórmula (E) a una reacción de metilación y después a una reacción de reducción o de desprotección para formar el compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000045_0002
en el que R3, R4 y R2 son tales que se definen según la reivindicación 1, y Ri representa un grupo -NH2 o -OH, siendo Ray Rb tales que se definen en la reivindicación 1.
10. Procedimiento de preparación de un compuesto (lc) según la reivindicación 7, caracterizado porque: - se pone en presencia el compuesto de fórmula (N):
Figure imgf000045_0003
en el que R3 y R4 son tales que se definen según la reivindicación 7; con un compuesto de fórmula (O):
Figure imgf000045_0004
en el que R2 es tal como se define según la reivindicación 7, para formar por una reacción de sustitución nucleófila aromática, seguida de una reacción de metilación, el compuesto de fórmula (P):
Figure imgf000046_0001
en el que R3, R4 y R2 son tales como se definen según la reivindicación 7;
- se somete el compuesto de fórmula (P), a una reacción de acoplamiento organometálico con un grupo -(C 2-C6)alquenileno-CO-NH-O-(2-tetrahidropiranilo) o -(C 2-C6)alquinileno-CO-NH-O-(2-tetrahidropiranilo) luego a una reacción de desprotección para formar el compuesto de fórmula (Ic):
Figure imgf000046_0002
en la que
n, R3, R4 y R2 son los definidos según la reivindicación 7.
11. Compuesto intermedio, caracterizado porque se elige entre:
Figure imgf000046_0003
12. Utilización de los compuestos según la reivindicación 11, para la preparación de compuestos de fórmula (I) según la reivindicación 1.
13. Compuesto de fórmula (II):
Figure imgf000047_0001
en la que:
- Yi representa -O-, -NH-, -NHCO-, -NHCORa-, -NHCOO-, -NHCOORb-, -(C2-Ca)alquenileno-CO-NH-O- o -(C2-C6)alquenileno-CO-NH-O-;
- R2 representa un grupo -OCH3, -OCH2CH3, -SCH3, -SCH2CH3 o -OCHF2;
- R3 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORc; y preferentemente un átomo de hidrógeno;
- R4 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORd; y preferentemente un átomo de hidrógeno;
- Ra representa un grupo -(C1-C5)alquileno- o -CF2-;
- Rb representa un grupo -(C1-C5)alquileno- o -CF2-;
- Rc representa un grupo -(C1-C5)alquilo o -CF3;
- Rd representa un grupo -(C1-C5)alquilo o -CF3;
- L representa un agente de enlace;
- RM* se selecciona entre RM y RM', en el que RM es una función reactiva capaz de formar un enlace covalente con una fracción de un agente de objetivo, en particular con una fracción de un anticuerpo o uno de sus fragmentos funcionales, y en el que RM' es una fracción de RM que lleva al menos un grupo protector;
en el estado de base o de sales de base o en forma de hidrato o de solvato, y preferentemente el grupo L-RM* se elige entre:
Figure imgf000047_0002
Figure imgf000048_0001
14. Compuesto según la reivindicación 13, caracterizado porque se elige entre:
Figure imgf000048_0002
Figure imgf000049_0001
15. Conjugado anticuerpo-medicamento de fórmula (III):
Figure imgf000050_0001
en la que:
- Yi representa -O-, -NH-, -NHCO-, -NHCORa-, -NHCOO-, -NHCOORb-, -(C2-C6)alquenileno-CO-NH-O- o -(C2-C6)alquenileno-CO-NH-O-;
- R2 representa un grupo -OCH3, -OCH2CH3, -SCH3, -SCH2CH3 o -OCHF2;
- R3 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORc; y preferentemente un átomo de hidrógeno;
- R4 representa un átomo de hidrógeno o un grupo -CH3, -CN, -F, -Cl o -ORd; y preferentemente un átomo de hidrógeno;
- Ra representa un grupo -(C1-C5)alquileno- o -CF2-;
- Rb representa un grupo -(C1-C5)alquileno- o -CF2-;
- Rc representa un grupo -(C1-C5)alquilo o -CF3;
- Rd representa un grupo -(C1-C5)alquilo o -CF3;
- L' representa un agente de enlace;
- AC representa una fracción de un agente de objetivo, en particular una fracción de un anticuerpo o uno de sus fragmentos funcionales; y
en la que el DAR (ratio medicamento/agente de objetivo) varía entre 1 y 8, preferentemente entre 2 y 4.
16. Procedimiento de preparación de un compuesto de fórmula (II) según la reivindicación 13, caracterizado porque comprende una etapa de reacción de un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, con un compuesto de fórmula X-L"-RM* en la que:
- X representa un grupo capaz de reaccionar con un grupo R1 tal como se define en la reivindicación 1;
- L'' representa un agente de enlace;
- RM* se selecciona entre RM y RM', en el que RM es una función reactiva capaz de formar un enlace covalente con una fracción de un agente de objetivo, en particular con una fracción de un anticuerpo o uno de sus fragmentos funcionales, y en el que RM' es una fracción de RM que lleva al menos un grupo protector;
donde la reacción entre la fracción -Ri del compuesto de fórmula (I) y el compuesto de fórmula X-L"-RM* resulta en la formación de una fracción -Y1-L-RM*
17. Procedimiento según la reivindicación 16, en el que RM* es RM, caracterizado porque comprende además una etapa de desprotección de una fracción RM' que resulta en un grupo RM.
18. Procedimiento de preparación de un compuesto de fórmula (III) según la reivindicación 15, caracterizado porque comprende una etapa de reacción de un compuesto de fórmula (II) según la reivindicación 13 con una fracción de un agente de objetivo.
19. Composición farmacéutica que comprende un conjugado anticuerpo-medicamento según la reivindicación 15, en asociación con un soporte farmacéuticamente aceptable.
20. Conjugado anticuerpo-medicamento según la reivindicación 15 o una composición farmacéutica según la reivindicación 19, para su uso como medicamento, y preferentemente para su uso para matar o inhibir el crecimiento de las células, o para su uso en el tratamiento del cáncer.
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